專(zhuān)利名稱：一種甘草酸環(huán)狀樣二聚體介導(dǎo)靶向給藥體及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥品技術(shù)領(lǐng)域，具體是ー種甘草酸環(huán)狀樣ニ聚體介導(dǎo)靶向給藥體(GN-Dimer)，同時(shí)，本發(fā)明還涉及制備該化合物的方法及其在藥品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
甘草酸是甘草中最主要的活性成分，自然界的甘草酸有兩種立體異構(gòu)體(18 α -H,18 β -H)。18 β -甘草皂苷通常稱為甘草酸，18 α -H通常稱為異甘草酸或甘草酸優(yōu)對(duì)映體(GFA)。構(gòu)象分析表明，18 β-H與C = O上的羧基在同一平面，而18 α-H不在同一平面；由于位阻效應(yīng)，18 α-H親脂性大于前者，在體內(nèi)易與受體蛋白結(jié)合，故具有很強(qiáng)的肝親和性。GFA與天然甘草酸比較具有極性較低、吸收更好、體內(nèi)分布較合理、肝臟靶向性和抗炎作用更強(qiáng)，對(duì)腎臟11 β -HSD的抑制能力更弱而顯示低副作用等特點(diǎn)；因此，GFA用作肝靶向載體 既為活性成分又充當(dāng)藥物載體，具有獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)，為此選擇GFA作為藥物載體具有臨床意義。大量研究顯示抗氧化劑可以改善肝纖維化，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化引發(fā)的膠原基因表達(dá)上調(diào)。N-こ酰半胱氨酸(NAC)是細(xì)胞內(nèi)還原型谷胱甘肽(GSH)的前體，能提高細(xì)胞內(nèi)GSH的生物合成，并具有多途徑抗生物氧化作用，能清除體內(nèi)活性氧簇(reactive oxygenSpeCieS，R0S)。こ酰半胱氨酸鎂(NAOMg)是NAC的結(jié)構(gòu)改良，通過(guò)引入缺電子原子鎂，與NAC形成穩(wěn)定的鹽。鎂是生物膜組成部分，參與控制細(xì)胞的完整性和細(xì)胞的免疫功能穩(wěn)定，又是ー些激酶活性需要的原子；因此鎂原子有益作用不僅能改善NAC用藥時(shí)的屛障(化學(xué)不穩(wěn)定性、首過(guò)效應(yīng)強(qiáng)、體內(nèi)消除過(guò)快及NAC的不良反應(yīng)等)；同時(shí)Mg2+具有防止肝纖維化患者出現(xiàn)缺鎂的各種不良癥狀，提高NAC的抗肝纖維化作用。長(zhǎng)其應(yīng)用NAC或こ酰半胱氨酸鎂均可能出現(xiàn)IgE超敏反應(yīng)，使臨床應(yīng)用受到限制；而甘草酸優(yōu)對(duì)映體雖具有抑制IgE超敏反應(yīng)作用，但長(zhǎng)其用藥也有可能出現(xiàn)甲醛固酮增高癥的副作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供ー種甘草酸環(huán)狀樣ニ聚體介導(dǎo)靶向給藥體，該化合物具有對(duì)肝部疾病治療效果好、服用安全可靠特點(diǎn)。本發(fā)明的另一目的是提供該甘草酸環(huán)狀樣ニ聚體介導(dǎo)靶向給藥體的制備方法，該方法具有エ藝過(guò)程簡(jiǎn)單、穩(wěn)定，產(chǎn)品得率高的特點(diǎn)。本發(fā)明的目的還在于提供甘草酸環(huán)狀樣ニ聚體介導(dǎo)靶向給藥體在治療肝損傷、肝纖維化、肝硬化、肝癌、非酒精性脂肪肝、酒精性脂肪肝以及艾滋病疾病中的應(yīng)用。本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案ー種甘草酸環(huán)狀樣ニ聚體介導(dǎo)靶向給藥體，其特征在于該給藥體包括摩爾比為1:1-5的被載藥和載藥體，所述的被載藥選用こ酰半胱氨酸、こ酰半胱氨酸鎂、半胱氨酸或5-氟尿嘧啶中的任意ー種；所述載藥體為甘草酸優(yōu)對(duì)映體。甘草酸環(huán)狀樣ニ聚體介導(dǎo)靶向給藥體的制備方法，包括以下步驟按照1:1-5的摩爾比折算后的重量比稱取被載藥和甘草酸優(yōu)對(duì)映體，將被載藥和甘草酸優(yōu)對(duì)映體分別溶于一定量的溶媒中，然后混合前述溶液并攪拌，用冰醋酸調(diào)節(jié)PH，繼續(xù)攪拌后過(guò)濾、減壓蒸干溶媒和冰醋酸，即得目標(biāo)產(chǎn)物。所述 溶媒為四氫呋喃，用量分別為被載藥重量的15-35倍以及18 α甘草酸重量的3-6 倍。所述的甘草酸環(huán)狀樣ニ聚體介導(dǎo)靶向給藥體應(yīng)用于抗炎、抗氧化應(yīng)激、治療肝損傷、肝纖維化、肝硬化、肝癌、非酒精性脂肪肝、酒精性脂肪肝以及艾滋病的治療。本發(fā)明的有益效果是經(jīng)大量的藥理、生化研究證明，本發(fā)明制備得到的甘草酸環(huán)狀樣ニ聚體介導(dǎo)靶向給藥體在不同動(dòng)物的肝毒劑引起的肝纖維化和肝硬化模型中，能明顯阻止動(dòng)物血清轉(zhuǎn)氨酶的升高，抗脂質(zhì)過(guò)氧化，減輕肝細(xì)胞脂肪變、炎癥和壞死，其抗肝纖維化和肝硬化作用明顯優(yōu)于18 α甘草酸、こ酰半胱氨酸、水飛薊賓葡甲胺(SM)和こ酰半胱氨酸鎂，且化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不良反應(yīng)降低。甘草酸環(huán)狀樣ニ聚體介導(dǎo)靶向給藥體能發(fā)揮抗炎、抗氧化應(yīng)激等作用，其應(yīng)用領(lǐng)域不斷拓寬，它對(duì)于人類(lèi)肝損傷、肝纖維化和肝硬化治療具有十分積極的現(xiàn)實(shí)意義。本發(fā)明所提供的制備方法還具有エ藝過(guò)程簡(jiǎn)單、穩(wěn)定，產(chǎn)品收得率高、質(zhì)量穩(wěn)定的特點(diǎn)。本發(fā)明中所提到的こ酰半胱氨酸、半胱氨酸、四氫呋喃、冰醋酸均為藥用原輔料，且均為外購(gòu)得到，こ酰半胱氨酸鎂和18 α甘草酸也外購(gòu)獲得。本發(fā)明中涉及的配比及其百分含量均以重量比計(jì)。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供的甘草酸環(huán)狀樣ニ聚體介導(dǎo)靶向給藥體，其中的載藥體甘草酸優(yōu)對(duì)映體具有很強(qiáng)的肝親和性，并在極性溶劑中能形成環(huán)狀樣ニ聚體，有環(huán)狀空洞結(jié)構(gòu)，可將藥物包在其中，形成肝靶向載體的特性。利用其特異性、可溶性優(yōu)勢(shì)，包裹或攜帯藥物進(jìn)入肝組織，綜合載藥體和被載體的治療優(yōu)勢(shì)，提高治療藥物的療效，降低不良反應(yīng)，同時(shí)發(fā)揮甘草酸良好的抗炎和抗氧應(yīng)激的效果。被載藥可以是こ酰半胱氨酸鎂或こ酰半胱氨酸；由于甘草酸優(yōu)對(duì)映體具有抑制こ酰半胱氨酸鎂引起的IgE超敏反應(yīng)作用，甘草酸環(huán)狀樣ニ聚體介導(dǎo)靶向給藥體綜合了こ酰半胱氨酸鎂鹽和甘草酸的治療優(yōu)勢(shì)，具有靶向性，能更好地發(fā)揮甘草酸和こ酰半胱氨酸以及鎂離子的治療作用。以下通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)ー步說(shuō)明。在這些實(shí)施例中，除另有說(shuō)明タト，所有百分含量均以重量比計(jì)。實(shí)施例I :按照こ酰半胱氨酸鎂18α甘草酸=1:2的摩爾比折算后的重量比稱取こ酰半胱氨酸鎂鹽35g和18 α甘草酸166g，將こ酰半胱氨酸鎂鹽溶于500g(即500ml)四氫呋喃中，18 α甘草酸溶于1000g(即1000ml)四氫呋喃中，混合溶液攪拌；接著用冰醋酸調(diào)節(jié)pH至
4.5^2. 5，繼續(xù)攪拌30min，過(guò)濾后減壓蒸干溶媒和冰醋酸，即得甘草酸環(huán)狀樣ニ聚體介導(dǎo)靶向給藥載體。實(shí)施例2:按照こ酰半胱氨酸18 α甘草酸=1:5的摩爾比折算后的重量比稱取こ酰半胱氨酸16. 3g和18 α甘草酸207. 5g，將こ酰半胱氨酸溶于700g(即7000ml)四氫呋喃中，18 α甘草酸溶于500g(即500ml)四氫呋喃中，混合溶液攪拌；接著用冰醋酸調(diào)節(jié)pH至4. 0^2.0,繼續(xù)攪拌30min，過(guò)濾后減壓蒸干溶媒和冰醋酸，即得甘草酸環(huán)狀樣ニ聚體介導(dǎo)靶向給藥載體。實(shí)施例3:按照5-氟尿嘧啶甘草酸優(yōu)對(duì)映體=1 2的摩爾比折算后的質(zhì)量比稱取5-氟尿嘧啶25. 8g和18 α甘草酸166g，將NAC溶于250g(即250ml)四氫呋喃中，18 α甘草酸溶于500g(即500ml)四氫呋喃中，混合溶液攪拌；接著用冰醋酸調(diào)節(jié)pH至5. (Γ2. O,繼續(xù)攪拌30min，過(guò)濾后減壓蒸干溶媒和冰醋酸，即得甘草酸環(huán)狀樣ニ聚體介導(dǎo)靶向給藥載體。實(shí)施例4 按照半胱氨酸18α甘草酸=1:2的摩爾比折算后的質(zhì)量比稱取半胱氨酸13. 9g和18 α甘草酸166g，將半胱氨酸溶于500g(即500ml)四氫呋喃中，18 α甘草酸溶于IOOOg (即1000ml)四氫呋喃中，混合溶液攪拌；接著用冰醋酸調(diào)節(jié)pH至2. 8^3. 2，繼續(xù)攪拌30min，過(guò)濾后減壓蒸干溶媒和冰醋酸，即得甘草酸環(huán)狀樣ニ聚體介導(dǎo)靶向給藥載體。以下通過(guò)具體藥理實(shí)驗(yàn)對(duì)本發(fā)明提供的甘草酸環(huán)狀樣ニ聚體介導(dǎo)靶向給藥體的療效作進(jìn)ー步說(shuō)明。一、藥理作用I.本制劑對(duì)四氯化碳致大鼠肝纖維化的治療作用I. I實(shí)驗(yàn)試劑和器材I. I. I實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)雄性SD大鼠150± 10g，由浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。I. I. 2試劑四氯化碳(分析純)、橄欖油、甲醛、Hyp、MDA、T-SOD指標(biāo)試劑盒、TGF-β I、ALT、AST、TP、GLB、ALB、TbiI 試劑盒。I. I. 3實(shí)驗(yàn)設(shè)備Biofuge 28RS低溫高速離心機(jī)、Leica2235輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)、日立7060全自動(dòng)生化分析儀、Biofuge28RS低溫高速離心機(jī)、01ympasB41顯微鏡、Zenyth340_st酶標(biāo)儀(ANTHOS LAB tec，奧地利)。I. 2受試藥物的配制取四氯化碳25mL，加橄欖油使溶液至IOOmL,混勻，作為實(shí)驗(yàn)用造模劑。I. 3本制劑對(duì)四氯化碳致大鼠肝纖維化的治療作用I. 3. I動(dòng)物分組大鼠145只隨機(jī)分為兩大組正常組15只、造模組130只。造模期間標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由飲水進(jìn)食。造模組以25%CC141ml · kg-1皮下注射SC，3t/Week，連續(xù)8周，正常對(duì)照組Iml · kg-Ι橄欖油皮下注射SC。第八周結(jié)束后隨機(jī)在造模組中處死7只，取肝臟進(jìn)行病理切片檢查網(wǎng)格染色法，評(píng)定肝纖維化程度，造模結(jié)束后，對(duì)已成模的大鼠分成8組，GN-Dimer高、中、低組每組15只、SM組15只、NAC · Mg組15只、NAC組15只、模型組15只。GN-Dimer低、中、高組分別腹腔注射ipGN-Dimer 25mg · kg-1 · D-I、50mg · kg-1 · D_l、100mg · kg-1 · D-I, NAC · Mg 組腹腔注射 ip50mg · kg-1 · D-I, SM 組腹腔注射ip50mg *kg-l *D-1，模型組和正常對(duì)照組腹腔注射ip等體積的O. 9%生理鹽水。給藥治療8周后，處死各組大鼠，取血和肝組織，測(cè)定相關(guān)指標(biāo)。I. 3. 2肝組織指標(biāo)測(cè)定MDA、S0D、Hyp指標(biāo)測(cè)試按照試劑盒說(shuō)明的方法進(jìn)行處理，后酶標(biāo)儀測(cè)定相應(yīng)波長(zhǎng)下的SOD值。I. 3. 3血清學(xué)指標(biāo)測(cè)定取大鼠血液10ml，置于生化采血管中，靜止30分鐘，2000 X g離心10分鐘，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作檢測(cè)ALT、AST、TP、GLB、ALB、Tbil。I. 3. 4TGF-0 I指標(biāo)測(cè)定根據(jù)試劑盒說(shuō)明，取大鼠肝臟組織，4°C下高速分散，制成10%肝組織勻漿，2000Xg · min-ι離心10分鐘，精密取上清液100 μ 1，Elisa法測(cè)定TGF-β I表達(dá)量。I. 3. 5肝纖維化病理檢測(cè)取由4%多聚甲醛固定的大鼠肝組織，在進(jìn)行常規(guī)脫水、石蠟包埋后，進(jìn)行切片，VG染色，鏡檢，光鏡下觀察不同視野確定肝組織肝纖維化程度。I. 4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 根據(jù)上述研究所得的甘草酸環(huán)狀樣ニ聚體介導(dǎo)靶向給藥體(以下簡(jiǎn)稱ニ聚體)抗肝纖維化作用指標(biāo)數(shù)據(jù)，以SPSS 10. O進(jìn)行整理分析，得出研究結(jié)果。I. 5 結(jié)果I. 5. I血清學(xué)指標(biāo)的影響模型組大鼠血清學(xué)指標(biāo)明顯高于正常組大鼠和各治療組大鼠，ニ聚體、NAC和水飛薊賓葡甲胺對(duì)于大鼠肝纖維化治療中，各項(xiàng)血清生化指標(biāo)尤其是對(duì)于Tbil、ALT、AST有顯著的復(fù)常作用提示其對(duì)于大鼠肝纖維化均有一定的治療作用，其中二聚體中劑量給藥組的指標(biāo)顯示其效果明顯優(yōu)于甘草酸優(yōu)對(duì)映體、NAC · Mg和水飛薊賓葡甲胺(P < O. 05)。具體指標(biāo)數(shù)據(jù)結(jié)果見(jiàn)表I。表I各組肝纖維化ALT、AST和Tbil指標(biāo)的影響(x土S)
組別[n l' ALT(U/L)Γ AST (U/L)Tbil (μ mo I/L) :
正常組15 40. 73±5.8683.07±7.410. 35±0. 14 ^
模型組15 131.83±11· 531 125.80± 17. 371 UeiCUe1 :
GN-Dimer 低 15 103. 21 ±9. 762131·09±10·47 0· 93±0· 2 3234 :
GN-Dimer 中 15 93·71±11·322111. 89± 10 . 532 0 ·91±0· 2 9234 :
GN-Dimer 高 15 83·07±7·562105.04±9· 8120.88±0· 25234 ^
NAC 組15 91·23±9·1423119.87± 11. 342 1.07±0· 222 '
NAC · Mg 組15 79. 54 ± 6. 32299. 08 ± 9 . 7 323O. 89 ± O. 182 '
GFA 組15 68.90±7. 512395.42±7.41230.98±0. 172 ^
SM 組[15 Ι:86·76±6·182 Γ 105. 38±9· 972I. 10±0· 362 :注I.與正常組比較，P < O. 01，2.與模型組比較，P < 0.01 ;3.與NAC組比較，P
<O. 05 ；4.與 NAC · Mg 組比較，P < O. 05 ;5·與 SM 組比較，P < O. 01。I. 5. 2肝纖維化蛋白類(lèi)指標(biāo)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示模型組TP值明顯高于正常組大鼠和各治療組大鼠，ALB和A/G值則低于正常組大鼠和各治療組大鼠。由各項(xiàng)蛋白類(lèi)指標(biāo)可見(jiàn)，ニ聚體、NAC、NAC · Mg和水飛薊賓葡甲胺均可降低TP和升高ALB和A/G值，其中與模型組和其它治療組比較，ニ聚體高劑量能顯著提高血清蛋白比A/G比例和降低TP值，提示ニ聚體高劑量在本研究中對(duì)肝纖維化治療效果優(yōu)于NAC、NAC · Mg和水飛薊賓葡甲胺。具體指標(biāo)數(shù)據(jù)結(jié)果見(jiàn)表2。表2各組肝纖維化TP、ALB和A/G的影響(x±s)
組別nTP(g/L)ALB (g/L)A/G
正常組I: 15 54. 19±2· 13 [ 34·81±1·95 Γ 1.80±0· 2權(quán)利要求
1.ー種甘草酸環(huán)狀樣ニ聚體介導(dǎo)靶向給藥體，其特征在于該給藥體包括摩爾比為1:1-5的被載藥和載藥體，所述的被載藥選用こ酰半胱氨酸、こ酰半胱氨酸鎂、半胱氨酸或5-氟尿嘧啶等中的任意ー種；所述載藥體為甘草酸優(yōu)對(duì)映體。
2.甘草酸環(huán)狀樣ニ聚體介導(dǎo)靶向給藥體的制備方法，包括以下步驟按照1:1-5的摩爾比折算后的重量比稱取被載藥和甘草酸優(yōu)對(duì)映體，將被載藥和甘草酸優(yōu)對(duì)映體分別溶于一定量的溶媒中，然后混合前述溶液并攪拌，用冰醋酸調(diào)節(jié)PH，繼續(xù)攪拌后過(guò)濾、減壓蒸干溶媒和冰醋酸，即得目標(biāo)產(chǎn)物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的甘草酸環(huán)狀樣ニ聚體介導(dǎo)靶向給藥體的制備方法，其特征在于所述溶媒為四氫呋喃，用量分別為被載藥重量的15-35倍以及甘草酸優(yōu)對(duì)映體重量的3-6 倍。
4.權(quán)利要求I所述的甘草酸環(huán)狀樣ニ聚體介導(dǎo)靶向給藥體應(yīng)用于抗炎、抗氧化應(yīng)激、治療肝損傷、肝纖維化、肝硬化、肝癌、非酒精性脂肪肝、酒精性脂肪肝以及艾滋病的治療。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種甘草酸環(huán)狀樣二聚體介導(dǎo)靶向給藥體及其制備方法和應(yīng)用。目的是提供的該給藥體對(duì)肝部疾病治療效果好，提供的制備方法具有工藝過(guò)程簡(jiǎn)單、產(chǎn)品得率高的特點(diǎn)，以及該給藥體應(yīng)用于疾病治療。技術(shù)方案是一種甘草酸環(huán)狀樣二聚體介導(dǎo)靶向給藥體，該給藥體包括摩爾比為1:1-5的被載藥和載藥體，所述的被載藥選用乙酰半胱氨酸、乙酰半胱氨酸鎂、半胱氨酸或5-氟尿嘧啶中的任意一種；所述載藥體為甘草酸優(yōu)對(duì)映體。制備方法是，包括以下步驟按照1:1-5的摩爾比折算后的重量比稱取被載藥和甘草酸優(yōu)對(duì)映體，然后分別溶于溶媒中，然后混合前述溶液并攪拌，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH，繼續(xù)攪拌后過(guò)濾、減壓蒸干溶媒和冰醋酸，即得目標(biāo)產(chǎn)物。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102716488SQ20121021160
公開(kāi)日2012年10月10日 申請(qǐng)日期2012年6月21日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月21日
發(fā)明者席建軍, 莊讓笑, 方紅英, 梁偉峰, 潘紅英, 王福根, 邵益丹, 韋翊 申請(qǐng)人:杭州市第六人民醫(yī)院