專利名稱：金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF在制造抗腫瘤藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物化學(xué)中的多肽藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
Cathelicidin是一類N-端有一段Cathelin結(jié)構(gòu)域而C-端含有高度特異的成熟肽段的抗菌肽家族，主要發(fā)現(xiàn)于哺乳動(dòng)物。目 前，由于對(duì)Cathelicidin家族肽的研究領(lǐng)域不斷擴(kuò)大，人們已不斷從雞、虹鱒魚(yú)、丑魚(yú)和大西洋鮭魚(yú)等非哺乳動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)新型的Cathelicidin0金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF是從金環(huán)蛇蛇毒中分離出來(lái)的活性多肽，是金環(huán)蛇Cathelicidin基因編碼的一種N-端有a -螺旋的直鏈多肽，含有三十個(gè)氨基酸殘基，分子量3637. 54Da，等電點(diǎn)11.79。全序列為賴氨酸_苯丙氨酸-苯丙氨酸-精氨酸-賴氨酸-亮氨酸-賴氨酸-賴氨酸-絲氨酸-纈氨酸-賴氨酸-賴氨酸-精氨酸-丙氨酸-賴氨酸-谷氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-賴氨酸-賴氨酸-脯氨酸-精氨酸-纈氨酸-異亮氨酸-甘氨酸-纈氨酸-絲氨酸-異亮氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸。對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌具有非常強(qiáng)的殺菌活性，作用時(shí)間迅速，幾乎沒(méi)有溶血活性和細(xì)胞毒性，還具有非鹽依賴性和重要的生物學(xué)功能，包括促進(jìn)創(chuàng)傷修復(fù)，作為化學(xué)引誘劑召集炎癥細(xì)胞到達(dá)炎癥部位,誘導(dǎo)血管生成,結(jié)合內(nèi)毒素，以及誘導(dǎo)細(xì)胞溶解等。Cathelicidin的這些生物學(xué)效應(yīng)增強(qiáng)了宿主的防御機(jī)制，促使機(jī)體能夠從病原體感染中恢復(fù)過(guò)來(lái)。目前，申請(qǐng)?zhí)枮?00810058976. 9的發(fā)明專利公開(kāi)了金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF及其基因和應(yīng)用，公開(kāi)了金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF分子量小、殺菌作用強(qiáng)、作用時(shí)間迅速、對(duì)多種臨床耐藥菌有非常強(qiáng)的殺滅作用，此外還具有廣譜抗菌性和非鹽依賴等有效特點(diǎn)；申請(qǐng)?zhí)枮?01110265011.9的發(fā)明專利公開(kāi)了金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF在制備治療細(xì)菌性陰道炎藥物中的作用。

發(fā)明內(nèi)容
金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF或含有金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF的藥物組合物在制造藥物中的用途，該藥物用于治療或預(yù)防人體的腫瘤，所述的金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF是從金環(huán)蛇蛇毒中分離出來(lái)的活性多肽，是金環(huán)蛇基因編碼的一種N-端有a-螺旋的直鏈多肽，含有三十個(gè)氨基酸殘基，分子量3637. 54Da，等電點(diǎn)11. 79，全序列為賴氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-精氨酸-賴氨酸-亮氨酸-賴氨酸-賴氨酸-絲氨酸-纈氨酸-賴氨酸-賴氨酸-精氨酸-丙氨酸-賴氨酸-谷氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-賴氨酸-賴氨酸-脯氨酸-精氨酸-纈氨酸-異亮氨酸-甘氨酸-纈氨酸-絲氨酸-異亮氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸。金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF或含有金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF的藥物組合物在制造藥物中的用途，該藥物用于治療或預(yù)防人體的惡性腫瘤，所述的金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF是從金環(huán)蛇蛇毒中分離出來(lái)的活性多肽，是金環(huán)蛇基因編碼的一種N-端有a -螺旋的直鏈多肽，含有三十個(gè)氨基酸殘基，分子量3637. 54Da，等電點(diǎn)11. 79，全序列為賴氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-精氨酸-賴氨酸-亮氨酸-賴氨酸-賴氨酸-絲氨酸-纈氨酸-賴氨酸-賴氨酸-精氨酸-丙氨酸-賴氨酸-谷氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-賴氨酸-賴氨酸-脯氨酸-精氨酸-纈氨酸-異亮氨酸-甘氨酸-纈氨酸-絲氨酸-異亮氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸。金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF或含有金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF的藥物組合物在制造藥物中的用途，該藥物用于治療或預(yù)防人體的宮頸癌，所述的金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF是從金環(huán)蛇蛇毒中分離出來(lái)的活性多肽，是金環(huán)蛇基因編碼的一種N-端有a -螺旋的直鏈多肽，含有三十個(gè)氨基酸殘基，分子量3637. 54Da，等電點(diǎn)11. 79，全序列為賴氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-精氨酸-賴氨酸-亮氨酸-賴氨酸-賴氨酸-絲氨酸-纈氨酸-賴氨酸-賴氨酸-精氨酸-丙氨酸-賴氨酸-谷氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨 酸-賴氨酸-賴氨酸-脯氨酸-精氨酸-纈氨酸-異亮氨酸-甘氨酸-纈氨酸-絲氨酸-異亮氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸。金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF或含有金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF的藥物組合物在制造藥物中的用途，該藥物用于治療或預(yù)防人體的淋巴瘤，所述的金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF是從金環(huán)蛇蛇毒中分離出來(lái)的活性多肽，是金環(huán)蛇基因編碼的一種N-端有a -螺旋的直鏈多肽，含有三十個(gè)氨基酸殘基，分子量3637. 54Da，等電點(diǎn)11. 79，全序列為賴氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-精氨酸-賴氨酸-亮氨酸-賴氨酸-賴氨酸-絲氨酸-纈氨酸-賴氨酸-賴氨酸-精氨酸-丙氨酸-賴氨酸-谷氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-賴氨酸-賴氨酸-脯氨酸-精氨酸-纈氨酸-異亮氨酸-甘氨酸-纈氨酸-絲氨酸-異亮氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸。金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF或含有金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF的藥物組合物在制造藥物中的用途，該藥物用于治療或預(yù)防人體的肺癌，所述的金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF是從金環(huán)蛇蛇毒中分離出來(lái)的活性多肽，是金環(huán)蛇基因編碼的一種N-端有a-螺旋的直鏈多肽，含有三十個(gè)氨基酸殘基，分子量3637. 54Da，等電點(diǎn)11. 79，全序列為賴氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-精氨酸-賴氨酸-亮氨酸-賴氨酸-賴氨酸-絲氨酸-纈氨酸-賴氨酸-賴氨酸-精氨酸-丙氨酸-賴氨酸-谷氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-賴氨酸-賴氨酸-脯氨酸-精氨酸-纈氨酸-異亮氨酸-甘氨酸-纈氨酸-絲氨酸-異亮氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸。金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF或含有金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF的藥物組合物在制造藥物中的用途，該藥物用于治療或預(yù)防人體的黑色素瘤，所述的金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF是從金環(huán)蛇蛇毒中分離出來(lái)的活性多肽，是金環(huán)蛇基因編碼的一種N-端有a-螺旋的直鏈多肽，含有三十個(gè)氨基酸殘基，分子量3637. 54Da，等電點(diǎn)11. 79，全序列為賴氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-精氨酸-賴氨酸-亮氨酸-賴氨酸-賴氨酸-絲氨酸-纈氨酸-賴氨酸-賴氨酸-精氨酸-丙氨酸-賴氨酸-谷氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-賴氨酸-賴氨酸-脯氨酸-精氨酸-纈氨酸-異亮氨酸-甘氨酸-纈氨酸-絲氨酸-異亮氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸。體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)均表明，金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF具有明顯的抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，可用來(lái)制備抗腫瘤藥物，用于治療腫瘤。


圖ICathelicidin-BF對(duì)不同細(xì)胞的體外生長(zhǎng)抑制作用，其中cell viability為細(xì)胞活力、U M為ii mol/L即微摩爾每升圖2Cathelicidin_BF對(duì)鼠淋巴瘤YAC-I細(xì)胞體外生長(zhǎng)抑制的時(shí)間和劑量依賴關(guān)系，其中hr為小時(shí)圖3Cathelicidin_BF對(duì)鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞體外生長(zhǎng)抑制的時(shí)間和劑量依賴關(guān)系圖4Cathelicidin-BF對(duì)鼠黑色素瘤B16F10體內(nèi)生長(zhǎng)抑制作用的各組小鼠照片圖5Cathelicidin_BF對(duì)鼠黑色素瘤B16F10體內(nèi)生長(zhǎng)抑制作用各組腫瘤組織照片圖6Cathelicidin_BF體內(nèi)對(duì)鼠黑色素瘤B16F10瘤重的影響,其中tumor weight為腫瘤重量圖7Cathelicidin_BF體內(nèi)對(duì)鼠黑色素瘤B16F10抑瘤率的影響,其中inhibitoryrate為抑制率
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的目的在于研究金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF或含有金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF的藥物組合物在制造抗腫瘤藥物中的用途，其抗腫瘤活性尚未報(bào)道，下面將金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF的抗腫瘤活性作詳盡闡述實(shí)施例ICathelicidin-BF對(duì)不同細(xì)胞的體外生長(zhǎng)抑制作用取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的狗腎MDCK細(xì)胞、人宮頸癌Hela細(xì)胞、鼠肺癌Lewis細(xì)胞、鼠黑色素瘤BI6F10細(xì)胞、鼠淋巴瘤YAC-I細(xì)胞，(MDCK細(xì)胞用含有10%FBS的DMEM培養(yǎng)基，Lewis細(xì)胞用含有10%FBS的RPMI-1640培養(yǎng)基，Hela細(xì)胞、B16F10細(xì)胞、YAC-I細(xì)胞用含有10%NBS的RPMI-1640培養(yǎng)基)，細(xì)胞用培養(yǎng)基用各自培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞濃度為5X104/ml，于96孔培養(yǎng)板中加入細(xì)胞懸液100 iil，并加入用培養(yǎng)液稀釋的不同濃度BF-3020iil/孔(終濃度分別為:0、10、20、40、80、PM)，培養(yǎng)液調(diào)零，37°C、5%C02培養(yǎng)48小時(shí)后，離心吸上清，加入80 u I新鮮培養(yǎng)液，然后每孔加入5mg/ml的MTT 20 U 1，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，離心，仔細(xì)吸去上清，每孔加入150 Ul DMS0，輕輕振蕩以使甲臜完全溶解，在490nm波長(zhǎng)處用酶標(biāo)儀測(cè)吸光
值，按公式計(jì)算細(xì)胞活率
權(quán)利要求
1.金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF或含有金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF的藥物組合物在制造藥物中的用途，該藥物用于治療或預(yù)防人體的腫瘤，所述的金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF是從金環(huán)蛇蛇毒中分離出來(lái)的活性多肽，是金環(huán)蛇基因編碼的一種N-端有a -螺旋的直鏈多肽，含有三十個(gè)氨基酸殘基，分子量3637. 54 Da，等電點(diǎn)11. 79，全序列為賴氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-精氨酸-賴氨酸-亮氨酸-賴氨酸-賴氨酸-絲氨酸-纈氨酸-賴氨酸-賴氨酸-精氨酸-丙氨酸-賴氨酸-谷氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-賴氨酸-賴氨酸-脯氨酸-精氨酸-纈氨酸-異亮氨酸-甘氨酸-纈氨酸-絲氨酸-異亮氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸。
2.金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF或含有金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF的藥物組合物在制造藥物中的用途，該藥物用于治療或預(yù)防人體的惡性腫瘤，所述的金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF是從金環(huán)蛇蛇毒中分離出來(lái)的活性多肽，是金環(huán)蛇基因編碼的一種N-端有a -螺旋的直鏈多肽，含有三十個(gè)氨基酸殘基，分子量3637. 54 Da，等電點(diǎn)11. 79，全序列為賴氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-精氨酸-賴氨酸-亮氨酸-賴氨酸-賴氨酸-絲氨酸-纈氨酸-賴氨酸-賴氨酸-精氨酸-丙氨酸-賴氨酸-谷氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-賴氨酸-賴氨酸-脯氨酸-精氨酸-纈氨酸-異亮氨酸-甘氨酸-纈氨酸-絲氨酸-異亮氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸。
3.金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF或含有金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF的藥物組合物在制造藥物中的用途，該藥物用于治療或預(yù)防人體的宮頸癌，所述的金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF是從金環(huán)蛇蛇毒中分離出來(lái)的活性多肽，是金環(huán)蛇基因編碼的一種N-端有a -螺旋的直鏈多肽，含有三十個(gè)氨基酸殘基，分子量3637. 54 Da，等電點(diǎn)11. 79，全序列為賴氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-精氨酸-賴氨酸-亮氨酸-賴氨酸-賴氨酸-絲氨酸-纈氨酸-賴氨酸-賴氨酸-精氨酸-丙氨酸-賴氨酸-谷氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-賴氨酸-賴氨酸-脯氨酸-精氨酸-纈氨酸-異亮氨酸-甘氨酸-纈氨酸-絲氨酸-異亮氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸。
4.金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF或含有金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF的藥物組合物在制造藥物中的用途，該藥物用于治療或預(yù)防人體的淋巴瘤，所述的金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF是從金環(huán)蛇蛇毒中分離出來(lái)的活性多肽，是金環(huán)蛇基因編碼的一種N-端有a -螺旋的直鏈多肽，含有三十個(gè)氨基酸殘基，分子量3637. 54 Da，等電點(diǎn)11. 79，全序列為賴氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-精氨酸-賴氨酸-亮氨酸-賴氨酸-賴氨酸-絲氨酸-纈氨酸-賴氨酸-賴氨酸-精氨酸-丙氨酸-賴氨酸-谷氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-賴氨酸-賴氨酸-脯氨酸-精氨酸-纈氨酸-異亮氨酸-甘氨酸-纈氨酸-絲氨酸-異亮氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸。
5.金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF或含有金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF的藥物組合物在制造藥物中的用途，該藥物用于治療或預(yù)防人體的肺癌，所述的金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF是從金環(huán)蛇蛇毒中分離出來(lái)的活性多肽，是金環(huán)蛇基因編碼的一種N-端有a -螺旋的直鏈多肽，含有三十個(gè)氨基酸殘基，分子量3637. 54 Da，等電點(diǎn)11. 79，全序列為賴氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-精氨酸-賴氨酸-亮氨酸-賴氨酸-賴氨酸-絲氨酸-纈氨酸-賴氨酸-賴氨酸-精氨酸-丙氨酸-賴氨酸-谷氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-賴氨酸-賴氨酸-脯氨酸-精氨酸-纈氨酸-異亮氨酸-甘氨酸-纈氨酸-絲氨酸-異亮氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸。
6.金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF或含有金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF的藥物組合物在制造藥物中的用途，該藥物用于治療或預(yù)防人體的黑色素瘤，所述的金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF是從金環(huán)蛇蛇毒中分離出來(lái)的活性多肽，是金環(huán)蛇基因編碼的一種N-端有a -螺旋的直鏈多肽，含有三十個(gè)氨基酸殘基，分子量3637. 54 Da，等電點(diǎn)11. 79，全序列為賴氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-精氨酸-賴氨酸-亮氨酸-賴氨酸-賴氨酸-絲氨酸-纈氨酸-賴氨酸-賴氨酸-精氨酸-丙氨酸-賴氨酸-谷氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-賴氨酸-賴氨酸-脯氨酸-精氨酸-纈氨酸-異亮氨酸-甘氨酸-纈氨酸-絲氨酸-異亮氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸。
全文摘要
金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF或含有金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF的藥物組合物在制造藥物中的用途，該藥物用于治療或預(yù)防人體的腫瘤，所述的金環(huán)蛇抗菌肽Cathelicidin-BF是從金環(huán)蛇蛇毒中分離出來(lái)的活性多肽,是金環(huán)蛇基因編碼的一種N-端有α-螺旋的直鏈多肽，含有三十個(gè)氨基酸殘基，分子量3637.54Da，等電點(diǎn)11.79，全序列為賴氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-精氨酸-賴氨酸-亮氨酸-賴氨酸-賴氨酸-絲氨酸-纈氨酸-賴氨酸-賴氨酸-精氨酸-丙氨酸-賴氨酸-谷氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-賴氨酸-賴氨酸-脯氨酸-精氨酸-纈氨酸-異亮氨酸-甘氨酸-纈氨酸-絲氨酸-異亮氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102652830SQ201210135679
公開(kāi)日2012年9月5日 申請(qǐng)日期2012年5月4日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月4日
發(fā)明者周長(zhǎng)林, 王慧, 賴仞 申請(qǐng)人:蘇州康爾生物醫(yī)藥有限公司