專(zhuān)利名稱(chēng)：用于提高免疫、補(bǔ)血及抗氧化的預(yù)防腫瘤復(fù)合制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及腫瘤預(yù)防，具體涉及一種用于提高免疫、補(bǔ)血及抗氧化的復(fù)合制劑。
背景技術(shù)：
鑒于中年女性處于特定的年齡階段，和我國(guó)膳食結(jié)構(gòu)的變化，乳腺癌已呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)，成為婦科腫瘤的 第一位，同時(shí)由于不正確的飲食結(jié)構(gòu)和營(yíng)養(yǎng)知識(shí)的缺乏，缺鐵性貧血在我國(guó)中年婦女中也普遍存在，女人愛(ài)美的天性也對(duì)抗氧化、抗衰老的產(chǎn)品提出了很高的要求，目前市場(chǎng)上迫切需要一種針對(duì)該人群的復(fù)合型營(yíng)養(yǎng)制品，起到預(yù)防乳腺癌、補(bǔ)鐵及抗氧化的復(fù)合功效。目前常見(jiàn)的女性營(yíng)養(yǎng)品，功效較為單一，如單純補(bǔ)鐵、降脂、調(diào)經(jīng)，缺乏預(yù)防癌癥和抗氧化的產(chǎn)品，而且所依據(jù)的理論較為單一，缺乏中西醫(yī)的相互驗(yàn)證要么依據(jù)中醫(yī)理論發(fā)掘傳統(tǒng)藥方，缺乏現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的理論和實(shí)驗(yàn)證據(jù)支持；要么依據(jù)現(xiàn)代營(yíng)養(yǎng)學(xué)的觀點(diǎn)，缺什么補(bǔ)什么，著眼于所缺乏營(yíng)養(yǎng)素的單一補(bǔ)充，均不能針對(duì)中年女性的生理特點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)同時(shí)預(yù)防乳腺癌、補(bǔ)鐵及抗氧化、防衰老的需求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種用于提高免疫、補(bǔ)血及抗氧化的復(fù)合制劑，此復(fù)合制劑解決了現(xiàn)有技術(shù)難同時(shí)能夠提高免疫力、補(bǔ)血和抗氧化的技術(shù)難題，且可有效降低荷瘤小鼠免疫負(fù)調(diào)控細(xì)胞(髓樣抑制性細(xì)胞細(xì)胞，MDSCs)的比例，對(duì)腫瘤的預(yù)防和輔助治療具有積極的效果。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種用于提高免疫、補(bǔ)血及抗氧化的復(fù)合制劑，其特征在于所述復(fù)合制劑由以下組分配方組成
冬蟲(chóng)夏草菌絲體多糖，10% ；
卟啉鐵，1%;
白藜蘆醇的含量， 1%;
維生素 BI，0.025%;
維生素 B2，0.025%;
維生素C，1% ；
膳食纖維，10% ；
蜂蜜，10%;
余量，水；
所述冬蟲(chóng)夏草菌絲體多糖通過(guò)以下工藝獲得
步驟一、取蟲(chóng)草發(fā)酵提取液濃縮而成的菌粉100g，加入4L H2O,煮沸4h后趁熱紗布過(guò)濾除去殘?jiān)?br> 步驟二、將經(jīng)步驟一獲得的濾液加熱濃縮至IL獲得濃縮液；
步驟三、將步驟二的濃縮液收集于IL燒杯中，70°C水浴濃縮至400ml ；步驟四、將步驟三中濃縮液分裝至8個(gè)50ml的離心管中，在4500 rpm離心速率下處理lOmin，獲得水溶性蟲(chóng)草多糖溶液；
步驟五、收集經(jīng)步驟四溶液中的上清液約400ml，去除不溶性雜質(zhì)，至2L燒杯中，緩慢加入4倍體積無(wú)水乙醇后靜置獲得醇沉液；
步驟六、將步驟五的醇沉液分裝至40個(gè)50ml離心管中，在4500 rpm離心速率下處理IOmin后將所述各個(gè)離心管內(nèi)醇沉多糖收集至4個(gè)50ml離心管中；
步驟七、通過(guò)100%乙醇洗經(jīng)步驟六的所述醇沉多糖2次，真空低溫冷凍干燥獲得所述冬蟲(chóng)夏草菌絲體多糖。上述技術(shù)方案中的進(jìn)一步改進(jìn)方案如下
I、上述方案中，所述步驟二中濾液加熱時(shí)同時(shí)進(jìn)行攪拌操作。
2、上述方案中，所述步驟二中在70°C水浴中保持時(shí)間為24h。3、上述方案中，所述步驟五中靜置溫度為4°C，時(shí)間為12h。由于上述技術(shù)方案運(yùn)用，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有下列優(yōu)點(diǎn)和效果
本發(fā)明復(fù)合制劑具有更好的清除免疫負(fù)調(diào)控細(xì)胞的功效，其中冬蟲(chóng)夏草菌絲體多糖和白藜蘆醇均具有清除免疫負(fù)調(diào)控細(xì)胞的功效，但是各自作用的靶點(diǎn)不同，組合之后能產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)，比單一效果更好；產(chǎn)品能更好保持卟啉鐵的生理活性，因?yàn)檫策F是二價(jià)鐵，易于吸收，但是暴露在空氣中之后容易氧化，而白藜蘆醇和維生素C具有抗氧化作用，能維持卟啉鐵的亞鐵狀態(tài)，從而保持卟啉鐵的良好生物活性。


附圖I為本發(fā)明復(fù)合制劑配方 附圖2為本發(fā)明對(duì)免疫細(xì)胞的促增殖作用示意 附圖3為本發(fā)明腫瘤輔助性細(xì)胞(免疫抑制性細(xì)胞MDSC)生長(zhǎng)受抑制圖。產(chǎn)品
具體實(shí)施例方式 下面結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述
實(shí)施例一種用于提高免疫、補(bǔ)血及抗氧化的復(fù)合制劑，所述復(fù)合制劑由以下組分配方組成
冬蟲(chóng)夏草菌絲體多糖，10% ；
卟啉鐵，1%;
白藜蘆醇的含量， 1%;
維生素 BI，0.025%;
維生素 B2，0.025%;
維生素C，1% ；
膳食纖維，10% ；
蜂蜜，10%;
余量，水；
所述冬蟲(chóng)夏草菌絲體多糖通過(guò)以下工藝獲得
步驟一、取蟲(chóng)草發(fā)酵提取液濃縮而成的菌粉100g，加入4L H2O,煮沸4h后趁熱紗布過(guò)濾除去殘?jiān)徊襟E二、將經(jīng)步驟一獲得的濾液加熱濃縮至IL獲得濃縮液；
步驟三、將步驟二的濃縮液收集于IL燒杯中，70°C水浴濃縮至400ml ；
步驟四、將步驟三中濃縮液分裝至8個(gè)50ml的離心管中，在4500 rpm離心速率下處理lOmin，獲得水溶性蟲(chóng)草多糖溶液；
步驟五、收集經(jīng)步驟四溶液中的上清液約400ml，去除不溶性雜質(zhì)，至2L燒杯中，緩慢加入4倍體積無(wú)水乙醇后靜置獲得醇沉液；
步驟六、將步驟五的醇沉液分裝至40個(gè)50ml離心管中，在4500 rpm離心速率下處理IOmin后將所述各個(gè)離心管內(nèi)醇沉多糖收集至4個(gè)50ml離心管中；
步驟七、通過(guò)100%乙醇洗經(jīng)步驟六的所述醇沉多糖2次，真空低溫冷凍干燥獲得所述冬蟲(chóng)夏草菌絲體多糖。上述步驟二中濾液加熱時(shí)同時(shí)進(jìn)行攪拌操作。上述步驟二中在70°C水浴中保持時(shí)間為24h。上述步驟五中靜置溫度為4°C，時(shí)間為12h。具體闡述如下。 (I)、取蟲(chóng)草發(fā)酵提取液濃縮而成的菌粉菌粉100g，加入4L H20，煮沸4h，趁熱紗布過(guò)濾除去殘?jiān)Ｖ貜?fù)3次；
(2)、收集所有濾液(約5L)加熱濃縮至1L。注意邊加熱邊攪拌，防止粘底；
(3)、濃縮液收集于IL燒杯中，70°C水浴濃縮至400ml，在該溫度下，溶劑揮發(fā)速度較快，溫度過(guò)高，則會(huì)影響多糖活性，防止加熱過(guò)程中多糖碳化。需要24h ；
(4)、濃縮液分裝至8個(gè)50ml的離心管中，4500rpm離心lOmin，獲得水溶性蟲(chóng)草多糖溶液；
(5)、收集上清液約400ml，除去不溶性雜質(zhì)；至21燒杯中，緩慢加(120ml/分鐘)入4倍體積(4倍體積乙醇處理后獲得的蟲(chóng)草多糖生物活性好)無(wú)水乙醇，至乙醇終濃度(400ml上清液加入1600ml乙醇后，體系的總體積為2L，1600ml除以2L就是終濃度)75%，4°C靜置12h。注意邊加乙醇邊攪拌；
(6)、2000ml醇沉液分裝至40個(gè)50ml離心管中，4500rpm離心IOmin,傾去上清液,所有醇沉多糖收集至4個(gè)50ml離心管中；
(7)、100%乙醇洗沉淀物2次，真空低溫冷凍干燥，達(dá)到完全脫水的目的；
(8)、蟲(chóng)草多糖放置在干燥環(huán)境中保存。如附圖2所示，2產(chǎn)品對(duì)免疫細(xì)胞的促增殖作用(左圖是對(duì)照組，右圖是產(chǎn)品組。放大倍數(shù)為200倍)；??？861腫瘤細(xì)胞皮下接種的荷瘤小鼠(C57，雌性，3個(gè)月大)，制備脾臟單細(xì)胞懸液；實(shí)驗(yàn)分為2組對(duì)照組、產(chǎn)品組(lmg/ml)。每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，接種細(xì)胞于6孔板，接種濃度為4X IO6/孔。37 °C, 5% CO2培養(yǎng)3天；顯微鏡下觀察、拍照。由圖2可見(jiàn)，使用本產(chǎn)品后，免疫細(xì)胞明顯增殖，細(xì)胞數(shù)量較多，鋪滿整個(gè)培養(yǎng)皿，而且細(xì)胞狀態(tài)良好，而對(duì)照組免疫細(xì)胞數(shù)少，狀態(tài)一般。說(shuō)明本產(chǎn)品對(duì)免疫細(xì)胞具有較好的促增殖作用。如附圖3所示，取FB61腫瘤細(xì)胞皮下接種的荷瘤小鼠(C57，雌性，3個(gè)月大)，制備脾臟單細(xì)胞懸液；實(shí)驗(yàn)分為4組對(duì)照組、產(chǎn)品低濃度組(3mg/ml)、中濃度組(5mg/ml)、高濃度組(8mg/ml)。每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，接種細(xì)胞于6孔板，接種濃度為4X106/孔。37 V ’5% C02培養(yǎng)3天；收集細(xì)胞，流式染色FITC-Grl，Percp-⑶11b，流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)。由圖3可見(jiàn)，使用本產(chǎn)品后，免疫負(fù)調(diào)控細(xì)胞比例明顯減少，呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)關(guān)系，其中對(duì)照組為25. 8%，低濃度組為4. 5%，中濃度組為3. 8%，高濃度組為2. 4%，說(shuō)明本產(chǎn)品具有降低免疫負(fù)調(diào)控細(xì)胞在免疫細(xì)胞中比例的作用。上述實(shí)施例只為說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思及特點(diǎn)，其目的在于讓熟悉此項(xiàng)技術(shù)的人士能夠了解本發(fā)明的內(nèi)容并據(jù)以實(shí)施，并不能以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。凡根據(jù)本發(fā)明精神實(shí)質(zhì)所作的等效變化或修飾，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范 圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種用于提高免疫、補(bǔ)血及抗氧化的預(yù)防腫瘤復(fù)合制劑，其特征在于所述復(fù)合制劑由以下組分配方組成 冬蟲(chóng)夏草菌絲體多糖，10% ； 卟啉鐵，1%; 白藜蘆醇的含量， 1%; 維生素 BI，0.025%; 維生素 B2，0.025%; 維生素C，1% ； 膳食纖維，10% ； 蜂蜜，10%; 余量，水； 所述冬蟲(chóng)夏草菌絲體多糖通過(guò)以下工藝獲得 步驟一、取蟲(chóng)草發(fā)酵提取液濃縮而成的菌粉100g，加入4L H2O,煮沸4h后趁熱紗布過(guò)濾除去殘?jiān)? 步驟二、將經(jīng)步驟一獲得的濾液加熱濃縮至IL獲得濃縮液； 步驟三、將步驟二的濃縮液收集于IL燒杯中，70°C水浴濃縮至400ml ； 步驟四、將步驟三中濃縮液分裝至8個(gè)50ml的離心管中，在4500 rpm離心速率下處理lOmin，獲得水溶性蟲(chóng)草多糖溶液； 步驟五、收集經(jīng)步驟四溶液中的上清液約400ml，去除不溶性雜質(zhì)，至2L燒杯中，緩慢加入4倍體積無(wú)水乙醇后靜置獲得醇沉液； 步驟六、將步驟五的醇沉液分裝至40個(gè)50ml離心管中，在4500 rpm離心速率下處理IOmin后將所述各個(gè)離心管內(nèi)醇沉多糖收集至4個(gè)50ml離心管中； 步驟七、通過(guò)100%乙醇洗經(jīng)步驟六的所述醇沉多糖2次，真空低溫冷凍干燥獲得所述冬蟲(chóng)夏草菌絲體多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的預(yù)防腫瘤復(fù)合制劑，其特征在于所述步驟二中濾液加熱時(shí)同時(shí)進(jìn)行攪拌操作。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的預(yù)防腫瘤復(fù)合制劑，其特征在于所述步驟二中在70°C水浴中保持時(shí)間為24h。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的預(yù)防腫瘤復(fù)合制劑，其特征在于所述步驟五中靜置溫度為4°C，時(shí)間為12h。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)一種用于提高免疫、補(bǔ)血及抗氧化的預(yù)防腫瘤復(fù)合制劑，由以下組分配方組成冬蟲(chóng)夏草菌絲體多糖，10%；卟啉鐵，1%；白藜蘆醇的含量，1%；維生素B1，0.025%；維生素B2，0.025%；維生素C，1%；膳食纖維，10%；蜂蜜，10%；余量，水；冬蟲(chóng)夏草菌絲體多糖通過(guò)以下工藝獲得取蟲(chóng)草發(fā)酵而成的菌粉，加入水；將獲得的濾液濃縮獲得濃縮液；將濃縮液分裝離心管中，離心獲得水溶性蟲(chóng)草多糖溶液；收集溶液中的上清液并加入無(wú)水乙醇后靜置獲得醇沉液；將醇沉液分裝至離心管中離心獲得醇沉多糖；通過(guò)乙醇洗醇沉多糖獲得所述冬蟲(chóng)夏草菌絲體多糖。本發(fā)明解決了現(xiàn)有技術(shù)難以同時(shí)提高免疫、補(bǔ)血和抗氧化的難題，且可有效降低荷瘤小鼠MDSCs細(xì)胞的比例，對(duì)腫瘤的預(yù)防和輔助治療具有積極的效果。
文檔編號(hào)A61K31/715GK102652760SQ20121011429
公開(kāi)日2012年9月5日 申請(qǐng)日期2012年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月18日
發(fā)明者劉小龍, 吳培華, 陶寧 申請(qǐng)人:劉小龍, 陶寧