專利名稱：綠原酸在制備防治排卵障礙的藥物或食品中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及綠原酸在制備保護(hù)卵巢，促進(jìn)排卵，治療排卵障礙的藥物或食品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
排卵障礙又稱為不排卵，是造成不孕不育的一個(gè)主要因素，占女性不孕因素的 25 30%。隨著工作強(qiáng)度增強(qiáng)，精神壓力的加大，環(huán)境的惡化及不健康的生活方式，排卵障礙的發(fā)病率在不斷上升。排卵障礙除了引起不孕外，還可導(dǎo)致月經(jīng)失調(diào)，閉經(jīng)，多毛，肥胖等癥狀。此外，由于長期不排卵，性激素代謝紊亂，子宮內(nèi)膜過度增生而無周期性的孕激素對(duì)抗作用，易誘發(fā)子宮內(nèi)膜癌，乳腺癌等。因此，應(yīng)對(duì)排卵障礙患者給與足夠的重視，進(jìn)行積極的治療。卵泡發(fā)育及排卵是由下丘腦-垂體-卵巢性腺軸調(diào)控的，性腺軸的任何一個(gè)部位異常都可引起排卵障礙。在排卵障礙中下丘腦功能障礙占38%，垂體疾病占17%，卵巢功能障礙占大約45%。目前，對(duì)排卵障礙的治療主要為藥物促排卵。一線的治療藥物包括雌激素，克羅米芬，他莫茜芬，注射用尿促性素，促卵泡生成素及促性腺激素釋放激素。這些藥物的基本作用都是通過參與下丘腦-垂體-性腺激素的調(diào)控過程來促進(jìn)排卵，都具有副作用，不能長期使用，因此這些藥物均不能在根本上治療排卵障礙，尋找能防治排卵障礙的新藥勢(shì)在必行。中藥是我國傳統(tǒng)文化的瑰寶，是全人類的財(cái)富。隨著現(xiàn)代醫(yī)藥技術(shù)的不斷發(fā)展，中藥的應(yīng)用和研究又爆發(fā)出新的生命力。對(duì)中藥尤其是植物藥的現(xiàn)代化開發(fā)主要是利用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)從植物藥中提取有效部位和單體化學(xué)成分。從植物藥中開發(fā)具有保護(hù)卵巢功能， 促進(jìn)排卵，治療排卵障礙的藥物具有廣闊的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益前景。綠原酸在植物中分布廣泛，從高等雙子葉植物到蕨類植物均有，含量較高的植物有傳統(tǒng)中藥金銀花、杜仲的葉中。其產(chǎn)品分別為金銀花提取物、杜仲提取物。綠原酸具有廣泛的生物活性，而且目前未見綠原算對(duì)人體有任何不良副作用的報(bào)道，因此是一種非常具有開發(fā)潛力的中藥成分。迄今為止，現(xiàn)有技術(shù)中未見綠原酸具備保護(hù)卵巢，促進(jìn)排卵，治療排卵障礙的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明基于綠原酸能提高模式生物線蟲的產(chǎn)卵量，縮短排卵周期以及增加小鼠產(chǎn)仔數(shù)的機(jī)制，將其進(jìn)一步應(yīng)用于的促排卵藥物或食物中，目的旨在提供綠原酸的醫(yī)藥食品新用途，提供其在制備治療排卵障礙及保護(hù)卵巢功能的藥物或食品中的應(yīng)用。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案綠原酸在制備治療排卵障礙的藥物中的應(yīng)用。上述應(yīng)用中，排卵障礙為黃體化不破裂卵泡綜合征。上述應(yīng)用中，排卵障礙為多囊卵巢綜合癥。
上述應(yīng)用中，排卵障礙為卵巢早衰。本發(fā)明同時(shí)提供綠原酸在制備保護(hù)卵巢功能食品中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供綠原酸在制備保護(hù)卵巢的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供綠原酸在制備防治排卵障礙的功能食品中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供綠原酸在制備保護(hù)卵巢功能藥品中的應(yīng)用。本發(fā)明所述的綠原酸(3-(3，4-Dihydroxycinnamoyl)quinicAcid)，其分子結(jié)構(gòu)
特征為本發(fā)明綠原酸用做藥物時(shí)，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。該藥物組合物含有0. 1-99 %，優(yōu)選為0. 5-90 %的綠原酸，其余為藥物上可接受的，對(duì)人體和動(dòng)物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。所述的藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、超填料以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。綠原酸的組合物采用制藥和食品領(lǐng)域公認(rèn)的方法制備成各種劑型，如液體制劑(注射劑、混懸劑、乳劑、 溶液劑、糖漿劑等)、固體制劑(片劑、膠囊劑、顆粒劑、沖劑等)、噴劑、氣霧劑等。本發(fā)明的藥物可經(jīng)注射(靜脈注射、靜脈滴注、肌肉注射、腹腔注射、皮下注射)和口服、舌下給藥、粘膜透析等給藥途徑進(jìn)行卵巢障礙的防治。


圖1綠原酸對(duì)線蟲在產(chǎn)卵期內(nèi)每天的平均幼蟲數(shù)；圖2每條線蟲幼蟲數(shù)；圖3線蟲排卵周期；圖4ICR小鼠二細(xì)胞胚胎數(shù)量；圖5ICR小鼠囊胚孵出率；圖6新生小鼠數(shù)量；圖7新生小鼠體重。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖，用本發(fā)明的實(shí)施例進(jìn)一步對(duì)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容進(jìn)行描述，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。實(shí)施例1 綠原酸按常規(guī)加注射液用水，精濾，灌封滅菌制成注射液。實(shí)施例2
將綠原酸溶于無菌注射用水中，攪拌使溶，用無菌抽濾漏斗過濾，再無菌精濾，分裝于2安瓿中，低溫冷凍干燥后滅菌熔封得粉針劑。實(shí)施例3 按綠原酸與賦形劑重量比為9 1的比例加入賦形劑，制成粉劑。實(shí)施例4 按綠原酸與賦形劑重量比為1 5-1 10的比例加入賦形劑，制粒壓片。實(shí)施例5 綠原酸按常規(guī)口服液制法制成口服液。實(shí)施例6 按綠原酸與賦形劑重量比為5 1的比例加入賦形劑，制成膠囊或顆粒劑或沖劑。實(shí)施例7 按綠原酸與賦形劑重量比為3 1的比例加入賦形劑，制成膠囊或顆粒劑或沖劑。實(shí)施例8 按綠原酸46. 6克，加入淀粉600克，乳糖200克，薄荷醇3克，羧甲基淀粉鈉152 克，制成含片，作為功能食品。為了更好的理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面以本發(fā)明的試驗(yàn)例即綠原酸與藥用載體和/ 或賦形劑組成的藥物組合物的藥理作用結(jié)果來說明本發(fā)明的優(yōu)異性，但不以此來限制本發(fā)明。試驗(yàn)例1 綠原酸在線蟲中促進(jìn)排卵的活性試驗(yàn)以秀麗線蟲(Caenorhabditis elegans，C. elegans)作為模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，該化合物在20°C，0. 05mM(毫摩爾)和0. 5mM的給藥濃度能夠增加線蟲的產(chǎn)卵量，縮短線蟲的產(chǎn)卵周期。結(jié)果表明，綠原酸具有促進(jìn)線蟲排卵的功能。實(shí)驗(yàn)材料野生型秀麗線蟲N2 購自美國線蟲遺傳中心(CGC)；MWM (3-(3,4-Dihydroxycinnamoyl)quinic Acid) :! Adamas Reagent 公司。實(shí)驗(yàn)方案1、線蟲復(fù)蘇、同步化(1)從-80°C冰箱中取出凍存的N2線蟲(CGC，美國)1_2管，放置在超凈臺(tái)中，自然解凍約5分鐘。(2)吸取離心管中上清凍存液，剩余約0. 5ml，注意更換槍頭，不能造成交叉污染。(3)用移液器輕輕吸打沉淀的線蟲，使懸浮，全部吸取后，轉(zhuǎn)移到NGM+0P50 (大腸桿菌突變株)平板上培養(yǎng)。(4)在無菌風(fēng)條件下吹干平板上殘余液體，約10-15分鐘。(5)蓋上培養(yǎng)皿蓋子后，放置在溫度20°C，濕度60%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。(6)吸出的廢液及槍頭全部放入燒杯，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，加入部分次氯酸水處理2小時(shí)后倒掉。(7)復(fù)蘇培養(yǎng)約50小時(shí)后，取出，顯微鏡下，35倍單視野中有80-100個(gè)卵時(shí)，可以進(jìn)行同步化。(8) ddH20 8ml沖洗每個(gè)平板。(9)每個(gè)平板收集約7. 5ml洗脫液，將洗脫液轉(zhuǎn)移到15ml離心管中。(10)稱取IOgNaOH,溶解在50ml無菌水中，配成5N NaOH, 5N NaOH/次氯酸鈉按照 1. 5/3配成4. 5ml混合液，混勻備用。(11)向15ml離心管中加入3. 5ml上述混合液，每2分鐘搖勻1次，管中無線蟲殘?bào)w為止。(12) 1300g 離心 1 分鐘。(13)去上清，加入無菌去離子水:3ml，混勻。(14) 1300g 離心 1 分鐘。(15)去上清，用Iml M9重懸，將混勻后的收集液轉(zhuǎn)移到約含有25_35ml M9的50ml 離心管中，20°C，濕度60%條件下培養(yǎng)過夜。(16) 1300g離心收集Ll期同步化線蟲，將收集的同步化線蟲轉(zhuǎn)移到90mm NGM平板上培養(yǎng)，20°C，濕度60%條件下培養(yǎng)。2、含化合物平板制備和線蟲培養(yǎng)(1) 200ml固體NGM，微波爐融化，65°C以下時(shí)，加入以下成分IM MgS04200 μ 1，5mg/ml Chol est erol 200 μ 1，IM CaCl2200 μ 1, 5ml KPO4 (108. 3g KH2PO4, 35. 6g K2HPO4, H2O 至 1 升)pH6，4mM fudr 200 μ 1，將綠原酸母液按各終濃度的比例加入65°C以下時(shí)的NGM培養(yǎng)基，混合均勻，倒制約10個(gè)直徑9cm細(xì)胞培養(yǎng)板。 多余的平板封口后，放4°C保存?zhèn)溆谩?2)在NGM平板上鋪制滅活的0P50菌液，無菌風(fēng)吹干。(3)每個(gè)工作平板挑取60-80條L4后期的線蟲，每個(gè)待測化合物做兩個(gè)重復(fù)平板， 20°C培養(yǎng)。3、排卵實(shí)驗(yàn)(1)材料準(zhǔn)備和線蟲成蟲處理同上。(2)將培養(yǎng)的同步化線蟲成蟲轉(zhuǎn)移到對(duì)照、0. 05mM綠原酸、0. 5mM綠原酸平板上， 20°C培養(yǎng)。(3)每天轉(zhuǎn)移成蟲到新的培養(yǎng)皿中，舊培養(yǎng)皿于20°C繼續(xù)培養(yǎng)，至幼蟲孵出，技術(shù)每個(gè)培養(yǎng)皿中的幼蟲數(shù)。(4)重復(fù)步驟(3)，直至成蟲不再產(chǎn)卵。實(shí)驗(yàn)結(jié)果綠原酸(0. 05mM,0. 5mM) 20°C處理后每條線蟲的排卵情況。結(jié)果表明， 綠原酸在線蟲排卵初期顯著性增加排卵量，并縮短排卵周期(見表1)表1綠原酸對(duì)線蟲排卵情況的影響
權(quán)利要求
1.綠原酸在制備防治排卵障礙的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，所述的排卵障礙為黃體化不破裂卵泡綜合征。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，所述的排卵障礙為多囊卵巢綜合癥。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，所述的排卵障礙為卵巢早衰。
5.綠原酸在制備保護(hù)卵巢的藥物中的應(yīng)用。
6.綠原酸在制備防治排卵障礙的功能食品中的應(yīng)用。
7.綠原酸在制備保護(hù)卵巢功能食品中的應(yīng)用。
全文摘要
綠原酸在制備保護(hù)卵巢功能，促進(jìn)排卵，治療排卵障礙的藥物及功能食品中的應(yīng)用。本發(fā)明中的綠原酸可制備成各種形式的藥物制劑，包括口服、注射、肺吸入制劑、透皮制劑，具體包括注射劑、口服液、片劑、膠囊劑、顆粒劑、氣霧劑、粉霧劑、噴霧劑、貼劑等。
文檔編號(hào)A61K31/216GK102526015SQ20121003157
公開日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2012年2月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月13日
發(fā)明者吳桂生, 楊潔, 羅懷容, 鄭善清 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院昆明植物研究所