骨再生用組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種含有微粒狀脫鈣骨基質(zhì)、纖維狀脫鈣骨基質(zhì)及水合物的骨再生用組合物。此外，本發(fā)明優(yōu)選還含有對(duì)脫鈣步驟分離的脫鈣溶液進(jìn)行中和，分離所生成的沉淀物而得到的源自脫鈣溶液的分離物。
【專利說明】骨再生用組合物
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及骨再生用組合物，具體地，涉及含有微粒狀的顆粒狀脫鈣骨基質(zhì)與纖維狀脫鈣骨基質(zhì)；或含有微粒狀的顆粒狀脫鈣骨基質(zhì)、纖維狀脫鈣骨基質(zhì)及源自脫鈣溶液的分離物進(jìn)行組合的骨再生用組合物。
【背景技術(shù)】
[0002]將骨浸潰在酸中去除骨中的礦物質(zhì)成分的部分稱為脫鈣骨基質(zhì)(demineralizedbone matrix, DBM)。脫鈣骨基質(zhì)大部分由高度交聯(lián)的骨膠原構(gòu)成,殘存的非骨膠原性蛋白質(zhì)包括轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β)、血小板源性生長(zhǎng)因子(PDGF)、骨橋蛋白、骨粘連蛋白、骨形態(tài)生成蛋白(bone morphogenetic protein, BMP)等。脫鈣骨基質(zhì)以用于修復(fù)骨缺損等為目的的骨移植用組合物的形態(tài)使用。
[0003]通常，脫鈣骨基質(zhì)對(duì)分離到體外的骨進(jìn)行脫鈣步驟之后，將此粉碎為適當(dāng)?shù)拇笮?，制備成顆粒形態(tài)。另外，皮質(zhì)骨(cortical bone)平行于骨的長(zhǎng)軸并由骨膠原纖維束(fiberbundles)構(gòu)成，已知由此得到的纖維狀脫鈣骨基質(zhì)在骨修復(fù)及其它整形外科的移植方面具有有用的性質(zhì)。纖維狀脫鈣骨基質(zhì)通過將分離到體外的皮質(zhì)骨利用特殊粉碎機(jī)(例如，美國(guó)專利第5，607, 269號(hào))粉碎至得到纖維狀顆粒，然后進(jìn)行脫鈣而制備。但是這種制備方法由于受到粉碎儀器的機(jī)械方面的限制，只能使用天然的皮質(zhì)軸(intact cortical shafts)作為骨原料，且得到的纖維狀脫鈣骨收率低。為了改善上述問題，美國(guó)專利第7，323，193號(hào)及第7，939，108號(hào)中公開了將分離到體外的骨切斷成適當(dāng)大小，并在酸性溶液中進(jìn)行6小時(shí)的脫鈣后，再在酸性溶液中進(jìn)行2天的脫鈣，然后將此進(jìn)行粉碎，從而制備纖維狀脫鈣骨基質(zhì)的方法。但是上述美國(guó)專利第7，323，193號(hào)及第7，939，108號(hào)中公開的制備方法，需要進(jìn)行長(zhǎng)達(dá)2日，即48小時(shí)的長(zhǎng)時(shí)間的脫鈣步驟。
[0004]本發(fā)明發(fā)明人公開過具有0.05-250 μ m顆粒大小的脫鈣骨基質(zhì)；具有250-2000 μ m的顆粒大小的脫鈣骨基質(zhì)；及以特定比例混合水合物的骨再生用組合物，所述組合物具有優(yōu)異的注入性及形態(tài)維持性(處理性)(韓國(guó)授權(quán)專利第10-1041784號(hào))。但是韓國(guó)授權(quán)專利第10-1041784號(hào)雖然在注入性及形態(tài)維持性方面顯示出優(yōu)異的特性，但是凝集力弱，凝集強(qiáng)度沒有達(dá)到滿意的水平，且用于臨床醫(yī)療時(shí)出現(xiàn)微細(xì)物質(zhì)附著到施術(shù)者的手上的現(xiàn)象(所謂附著現(xiàn)象)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]發(fā)明目的
[0006]本發(fā)明發(fā)明人為了開發(fā)出不僅具有注入性及形態(tài)維持性的特性，且具有優(yōu)異的凝集強(qiáng)度的同時(shí)能夠?qū)⒏街F(xiàn)象最小化的骨再生用組合物而進(jìn)行了多種研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)使用纖維狀脫鈣骨基質(zhì)代替本發(fā)明人在先申請(qǐng)專利中的骨再生用組合物中使用的非-微粉碎脫鈣骨基質(zhì)(即具有250-2000 μ m的顆粒尺寸的脫鈣骨基質(zhì))；或使用纖維狀脫鈣骨基質(zhì)及源自脫?丐溶液的分離物(isolated product)制備骨再生用組合物時(shí),能夠在相同水平上維持注入性及形態(tài)維持性的特性，且增加凝集強(qiáng)度的同時(shí)減少了附著現(xiàn)象，從而能夠制備具有優(yōu)異物理性質(zhì)的骨再生用組合物。
[0007]從而，本發(fā)明的目的在于，提供含有微粒狀脫鈣骨基質(zhì)、纖維狀脫鈣骨基質(zhì)的骨再生用組合物，所述骨再生用組合物還可以選擇性地含有源自脫鈣溶液的分離物及水合物。
[0008]技術(shù)方案
[0009]根據(jù)本發(fā)明一實(shí) 施例，提供含有微粒狀脫鈣骨基質(zhì)、纖維狀脫鈣骨基質(zhì)及水合物的骨再生用組合物。
[0010]所述微粒狀脫鈣骨基質(zhì)的顆粒尺寸優(yōu)選為0.05-250 μ m的范圍。且，所述纖維狀脫鈣骨基質(zhì)的長(zhǎng)度優(yōu)選為1000-5000 μ m的范圍。
[0011]所述纖維狀脫鈣骨基質(zhì)通過包括下述步驟的制備方法制備:Ca)將分離到體外的骨在酸性溶液中進(jìn)行1-5小時(shí)的第1次脫鈣；(b)將從步驟(a)得到的骨切割(slicing)成
0.1-3mm厚的片狀骨；(c)將從步驟(b)得到的片狀骨在酸性溶液中進(jìn)行2_6小時(shí)的第2次脫鈣；及((1)將從步驟(C)得到的經(jīng)過脫鈣的骨進(jìn)行粉碎。所述步驟(a)和步驟(C)的所述酸性溶液可以相互獨(dú)立地為0.1-3N的HCl水溶液，更優(yōu)選地，可以為0.6N的HCl水溶液。
[0012]所述水合物選自蒸餾水、生理鹽水、濃縮鹽水及離子水中的一種以上。
[0013]所述微粒狀脫鈣骨基質(zhì):纖維狀脫鈣骨基質(zhì):水合物的重量比為1:0.3~
1.2:3 ~10。
[0014]此外，本發(fā)明的骨再生用組合物還可以含有對(duì)脫鈣步驟分離的脫鈣溶液進(jìn)行中和，分離所生成的沉淀物而得到的源自脫鈣溶液的分離物，相對(duì)于微粒狀脫鈣骨基質(zhì)I重量份，其含量為1-5重量份。
[0015]發(fā)明效果
[0016]本發(fā)明的骨再生用組合物為含有微粒狀脫鈣骨基質(zhì)和纖維狀脫鈣骨基質(zhì)；或微粒狀脫鈣骨基質(zhì)、纖維狀脫鈣骨基質(zhì)及源自脫鈣溶液的分離物進(jìn)行組合獲得的組合物，其注入性及形態(tài)維持性的特性能夠維持與本發(fā)明發(fā)明人已經(jīng)開發(fā)出的骨再生用組合物同等的水平，不僅能夠顯著提高凝集強(qiáng)度，還能夠顯著減少附著現(xiàn)象。因此，本發(fā)明的骨再生用組合物具有優(yōu)異的物理性質(zhì)，從而能夠有效地用于以骨缺損的修復(fù)等為目的的移植等。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0017]圖1表示將部分脫鈣的骨進(jìn)行切割后得到的骨(A)及將脫鈣的骨進(jìn)行粉碎得到的骨(B)。
[0018]圖2是表示纖維狀脫鈣骨基質(zhì)(A)及顆粒狀脫鈣骨基質(zhì)(B)的形態(tài)的光學(xué)顯微鏡測(cè)定照片。
[0019]圖3及圖4分別為使用光學(xué)顯微鏡觀察的源自脫鈣溶液的分離物性狀的照片及粒度分布測(cè)定結(jié)果。
[0020]圖5及圖6是對(duì)源自脫鈣溶液的分離物的熱重量(TGA)及X射線衍射(XRD)分析結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0021]本發(fā)明提供含有顆粒狀脫鈣骨基質(zhì)、纖維狀脫鈣骨基質(zhì)及水合物的骨再生用組合物。
[0022]本發(fā)明的骨再生用組合物其注入性及形態(tài)維持性的特性能夠維持與現(xiàn)有的骨再生用組合物(具體為韓國(guó)授權(quán)專利第10-1041784號(hào)的骨再生用組合物)同等的水平，不僅能夠顯著提高凝集強(qiáng)度的，還能夠顯著減少附著現(xiàn)象。因此，本發(fā)明的骨再生用組合物具有優(yōu)異的物理性質(zhì)，從而能夠有效地用于以骨缺損的修復(fù)等為目的的移植等。
[0023]所述微粒狀脫鈣骨基質(zhì)將分離到體外的骨進(jìn)行微粉碎，可通過通常的脫鈣骨基質(zhì)的制備方法制備。所述分離到體外的骨可以是包括人類的哺乳動(dòng)物的骨。所述分離到體外的骨優(yōu)選按照通常的方法將附著于骨的軟組織、脂肪、骨髓等去除之后使用。所述去除通?？梢允褂?0-90重量％的乙醇水溶液進(jìn)行，根據(jù)需要可以額外使用表面活性劑。所述脫鈣可以通過通常的脫鈣方法進(jìn)行，例如將微粉碎的骨在0.6N的HCl水溶液中浸潰約1-6小時(shí)進(jìn)行脫鈣。得到的微粒狀脫鈣骨最終可以通過中和、洗滌及冷凍干燥而獲得。所述微粒狀脫鈣骨基質(zhì)的顆粒大小只要是250 μ m以下均可使用，優(yōu)選為0.05-250 μ m范圍。
[0024]所述纖維狀脫鈣骨基質(zhì)為具有纖維形態(tài)的脫鈣骨基質(zhì)，所述纖維的長(zhǎng)度可以為1000-5000 μ m,更優(yōu)選2000-4000 μ m的范圍。所述纖維狀脫鈣骨基質(zhì)可以使用通常的制備方法制備，例如美國(guó)專利第7，323，193號(hào)及7，939，108號(hào)的制備方法制得的纖維質(zhì)脫鈣骨基質(zhì)。另外，本發(fā)明發(fā)明人發(fā)現(xiàn)依次進(jìn)行部分脫鈣、切割、完全脫鈣及粉碎步驟的情況下，不僅能夠?qū)⒚撯}步驟顯著縮短至約6小時(shí)左右，還能夠高收率制備具有纖維形態(tài)的脫鈣骨基質(zhì)。因此所述纖維狀脫鈣骨基質(zhì)優(yōu)選通過包括下述步驟的方法制備:(a)將分離到體外的骨在酸性溶液中進(jìn)行1-5小時(shí)的第1次脫鈣；(b)將從步驟(a)得到的骨切割成0.l-3mm的片狀骨；(c)將從步驟(b)得到的片狀骨在酸性溶液中進(jìn)行2-6小時(shí)的第2次脫鈣；及((1)將從步驟(c)得到的經(jīng)過脫鈣的骨進(jìn)行粉碎。
[0025]步驟(a)中使用的所述分離到體外的骨可以是包括人類的哺乳動(dòng)物的骨。所述分離到體外的骨優(yōu)選按照通常的方法將附著于骨的軟組織、脂肪、骨髓等去除之后使用。所述去除通?？梢允褂?0-90重量％的乙醇水溶液進(jìn)行，根據(jù)需要可以額外使用表面活性劑。所述酸性溶液通?？梢允褂肏Cl水溶液，可以使用0.1-3N的HCl水溶液，優(yōu)選使用約0.6N的HCl水溶液。所述第1次脫鈣時(shí)間可以是1-5小時(shí)，優(yōu)選約3小時(shí)。
[0026]步驟(b)的所述切割只要是能夠?qū)⒐乔谐杀∑臋C(jī)器均可使用，例如可以使用骨切割機(jī)(Bone SlicerXYOU IL MC/C0.KR)等的骨切片器(bone slicer)。通過所述切割步驟得到的片狀骨的厚度可以為0.優(yōu)選0.2-1.0mm,更優(yōu)選0.3-0.6mm,最優(yōu)選0.5mm。所述厚度超過3.0mm時(shí),骨形態(tài)為粉碎的顆粒形態(tài)而不是片狀；厚度小于0.1mm時(shí),雖然能夠得到片狀，但即使脫鈣也無法得到纖維狀而只能夠得到顆粒狀。
[0027]步驟(C)的所述酸性溶液通?？梢允褂肏Cl,可以使用0.1-3N的HCl,優(yōu)選使用約
0.6N的HC1。所述第2次脫鈣，即完全脫鈣可以以相比以往的脫鈣時(shí)間顯著縮短的時(shí)間，即2-6小時(shí)，優(yōu)選約3小時(shí)以內(nèi)的時(shí)間進(jìn)行。
[0028]步驟(d)的所述粉碎步驟可以使用通常的粉碎機(jī)進(jìn)行。優(yōu)選地以獲得1000-5000 μ m,更優(yōu)選地以獲得2000-4000 μ m范圍長(zhǎng)度的纖維狀脫鈣骨基質(zhì)來實(shí)施所述粉碎，所述粉碎可以根據(jù)粉碎機(jī)的種類來設(shè)定適合的粉碎條件，從而獲得上述纖維狀脫鈣
骨基質(zhì)。
[0029]所述水合物選自蒸餾水、生理鹽水、濃縮鹽水及離子水中的一種以上。[0030]所述微粒狀脫鈣骨基質(zhì):纖維狀脫鈣骨基質(zhì):水合物的重量比為1:0.3~
1.2:3~10的范圍；優(yōu)選1:0.6~0.8:3~10的范圍。
[0031]此外，本發(fā)明的骨再生用組合物還可以含有對(duì)脫鈣步驟分離的脫鈣溶液進(jìn)行中和，分離所生成的沉淀物而得到的源自脫鈣溶液的分離物，相對(duì)于微粒狀脫鈣骨基質(zhì)I重量份，其含量為1-5重量份，更優(yōu)選2-4重量份。所述“脫鈣溶液”是在脫鈣步驟中結(jié)束脫鈣過程的溶液，通常分離后作為廢液廢棄。所述中和可以使用NaOH水溶液等進(jìn)行，優(yōu)選分兩個(gè)步驟進(jìn)行。例如，使用NaOH水溶液將pH調(diào)節(jié)為4后放置約10分鐘，再將pH調(diào)節(jié)為7，由此完成。中和后生成的沉淀物可以通過通常的方法，例如過濾或離心分離等方法進(jìn)行分離。所述源自脫鈣溶液的分離物主要由6-70 μ m的顆粒構(gòu)成，礦物質(zhì)成分及有機(jī)質(zhì)成分分別占約87重量％和約5重量％，所述礦物質(zhì)成分主要為非結(jié)晶羥基磷灰石。
[0032]本發(fā)明的骨再生用組合物可以含有液狀多羥基化合物，所述液狀多羥基化合物的具體實(shí)例有甘油或甘油酯。
[0033]本發(fā)明的骨再生用組合物還可以含有生物相容性粘合劑，所述生物相容性粘合劑的具體實(shí)例有可以選自纖維蛋白粘合劑、纖維蛋白原、凝血酶、貽貝黏著蛋白、蠶絲、彈性蛋白、骨膠原、干酪素、明膠、白蛋白、角蛋白、殼多糖、殼聚糖中的一種以上。生物相容性粘合劑的另一具體實(shí)例有可以選自淀粉、聚乳酸、聚乙醇酸、乳酸羥基乙酸共聚物、聚二氧六環(huán)酮、聚己酸內(nèi)酯、聚碳酸酯、聚氧酯、聚氨基酸、聚酐、聚羥基丁酸酯、聚羥基戊酸酯、聚(丙二醇-共-富馬酸)(poly(propylene glycol-co-puma acid))、酪氨酸聚碳酸酯、聚乙烯批咯烷酮、纖維素、乙基纖維素及羧甲基纖維素中的一種以上。
[0034]本發(fā)明的骨再生用組合物還可以包含選自抗生素、維生素、葡萄糖胺、細(xì)胞因子及生長(zhǎng)因子中的一種以上 。
[0035]本發(fā)明的骨再生用組合物還可以包含幫助骨再生的輔助成分。所述幫助骨再生的輔助成分只要是市售的均可使用。特別是可以使用選自松質(zhì)骨、密質(zhì)骨塊、羥基磷灰石(HA，Caltl(PO4)6(OH)2)、碳酸磷灰石(CA，Ca10(PO4)6C03)、磷酸三鈣(TCP, Ca3(PO4)2)、焦磷酸鈣(Ca2P2O7)、無機(jī)骨(anorganic bone)、牙科用齒狀法浪(dental tooth enamel)、文石(aragonite)、方解石(calcite)、珍珠層(nacre)、石墨(graphite)、熱解碳(pyrolyticcarbon)、硅酸鈣類生物玻璃、氧化鋁(Al2O3)及氧化鋯(ZrO2)中的一種以上。
[0036]以下，通過實(shí)施例詳細(xì)說明本發(fā)明，但這些實(shí)施例僅用作例示本發(fā)明，本發(fā)明的范圍并不限于此。
[0037]實(shí)施例1
[0038]將來自人供體的骨(重量:約172g)利用手術(shù)器械去除附著在骨上的軟組織，使用含有表面活性劑的組織洗滌劑去除軟組織、脂肪及骨髓等雜質(zhì)，然后切斷成兩半。將切斷的骨在相對(duì)于每克骨重量為20ml的0.6N的HCl水溶液中浸潰3小時(shí)，從而進(jìn)行部分脫鈣。將部分脫鈣的骨進(jìn)行分離，在相對(duì)于每克骨重量為20ml的蒸餾水中浸潰去除骨中的脫鈣溶液。將得到的骨利用骨切片器(bone slicer, YOU ILMC/C0.KR)切割成0.5mm厚度的片狀。得到的片狀骨如圖1A所示。將得到的片狀骨在相對(duì)于每克骨重量為30ml的0.6N的HCl水溶液中浸潰3小時(shí)，進(jìn)行完全脫鈣。將脫鈣骨基質(zhì)進(jìn)行沉淀而分離后，放入粉碎機(jī)(IKA，M20Univeral mill, GR)中粉碎約10分鐘，然后使用磷酸緩沖液(PBS)進(jìn)行中和，用蒸餾水洗滌，然后進(jìn)行冷凍干燥得到約31g的脫鈣骨基質(zhì)。進(jìn)行上述脫鈣步驟后，脫鈣溶液進(jìn)行單獨(dú)保存不廢棄。利用光學(xué)顯微鏡觀察上述得到的脫鈣骨基質(zhì)的照片如圖2A所示。從圖2A中可以確認(rèn)得到的脫鈣骨基質(zhì)為纖維狀脫鈣骨基質(zhì)。
[0039]比較例I
[0040] 將來自人供體的骨(重量:約165g)利用手術(shù)器械去除附著在骨上的軟組織，使用含有表面活性劑的組織洗滌劑去除軟組織、脂肪及骨髓等雜質(zhì)，然后切斷成兩半。將切斷的骨在相對(duì)于每克骨重量為20ml的0.6N的HCl水溶液中浸潰3小時(shí)，從而進(jìn)行部分脫鈣。將部分脫鈣的骨進(jìn)行回收，在相對(duì)于每克骨重量為20ml的蒸餾水中浸潰去除骨中的脫鈣溶液。將得到的骨在相對(duì)于每克骨重量為30ml的0.6N的HCl水溶液中浸潰3小時(shí)，再次進(jìn)行脫鈣步驟，但是脫鈣幾乎沒有進(jìn)行，無法得到脫鈣骨基質(zhì)。
[0041]比較例2
[0042]將來自人供體的骨(重量:約192g)利用手術(shù)器械去除附著在骨上的軟組織，使用含有表面活性劑的組織洗滌劑去除軟組織、脂肪及骨髓等雜質(zhì)，然后切斷成兩半。將切斷的骨在相對(duì)于每克骨重量為20ml的0.6N的HCl水溶液中浸潰3小時(shí)，從而進(jìn)行部分脫鈣。將部分脫鈣的骨進(jìn)行分離，在相對(duì)于每克骨重量為20ml的蒸餾水中浸潰去除骨中的脫鈣溶液。將得到的骨放入粉碎機(jī)(IKA，M20Univeralmill, GR)中粉碎約60分鐘得到粉碎的骨，其形態(tài)如圖1B所示。將得到的粉碎的骨在相對(duì)于每克骨重量為30ml的0.6N的HCl水溶液中浸潰3小時(shí)，進(jìn)行完全脫鈣。將脫鈣骨基質(zhì)進(jìn)行沉淀分離后，使用磷酸緩沖液(PBS)進(jìn)行中和，用蒸餾水洗滌，然后進(jìn)行冷凍干燥得到約36.4g的脫鈣骨基質(zhì)。利用光學(xué)顯微鏡觀察得到的脫鈣骨基質(zhì)的照片如圖2B所示。從圖2B中可以確認(rèn)得到的脫鈣骨基質(zhì)為顆粒狀脫鈣骨基質(zhì)。
[0043]實(shí)施例2
[0044]( I)微粒狀脫鈣骨基質(zhì)的制備
[0045]將來自人供體的骨(重量:約245g)利用手術(shù)器械去除附著在骨上的軟組織，使用含有表面活性劑的組織洗滌劑去除軟組織、脂肪及骨髓等雜質(zhì)，然后切斷成能夠放入粉碎機(jī)的大小。將切斷的骨放入粉碎機(jī)(IKA，M20Univeral mill，GR)中粉碎成250 μ m以下。將得到的粉碎的骨顆粒在0.6N的HCl水溶液中浸潰3小時(shí)，進(jìn)行完全脫鈣。將脫鈣骨基質(zhì)通過離心分離進(jìn)行分離，脫鈣溶液?jiǎn)为?dú)進(jìn)行保存。將分離的脫鈣骨基質(zhì)使用磷酸緩沖液(PBS)進(jìn)行中和，用蒸餾水洗滌，然后進(jìn)行冷凍干燥得到約53.1g的顆粒狀脫鈣骨基質(zhì)。
[0046](2)源自脫鈣溶液的分離物的制備及評(píng)價(jià)
[0047](2-1)源自脫鈣溶液的分離物的制備
[0048]將實(shí)施例1及上述步驟(1)中的結(jié)束脫鈣步驟的脫鈣溶液合并到一個(gè)容器中。在所述溶液中加入2N的NaOH水溶液將pH調(diào)節(jié)為約4，放置10分鐘。然后進(jìn)一步添加2N的NaOH水溶液將pH調(diào)節(jié)為約7.2，以4000rpm進(jìn)行離心分離將沉淀物分離后，進(jìn)行冷凍干燥制得源自脫鈣溶液的分離物。
[0049](2-2)源自脫鈣溶液的分離物的物理性質(zhì)評(píng)價(jià)
[0050]步驟(2-1)中制備的所述源自脫鈣溶液的分離物的形狀用光學(xué)顯微鏡觀察的結(jié)果如圖3所示，其粒度分布測(cè)定結(jié)果如圖4所示?？梢源_認(rèn)所述源自脫鈣溶液的分離物主要由6-70 μ m的顆粒組成。此外，對(duì)所述源自脫鈣溶液的分離物進(jìn)行TGA和XRD分析的結(jié)果如圖5和圖6所示。從圖5的結(jié)果可以確認(rèn)，所述源自脫鈣溶液的分離物分別含有礦物質(zhì)成分約87重量％和有機(jī)質(zhì)成分約5重量％ ;從圖6的結(jié)果可以確認(rèn)所述礦物質(zhì)成分主要是非結(jié)晶的羥基磷灰石。XRD結(jié)果(即圖6)中20-25及25-302-Θ區(qū)間主要是表示非結(jié)晶羥基磷灰石。
[0051]實(shí)施例3骨再生用組合物的制備及物性評(píng)價(jià)
[0052]將實(shí)施例1制備的纖維狀脫鈣骨基質(zhì)、實(shí)施例2制備的微粒狀脫鈣骨基質(zhì)和源自脫鈣溶液的分離物及蒸餾水，按照下表2中所示的重量比進(jìn)行混合，對(duì)物理性質(zhì)進(jìn)行評(píng)價(jià)。此外，為了進(jìn)行比較，同時(shí)對(duì)使用顆粒尺寸為250-750 μ m的顆粒狀脫鈣骨基質(zhì)制備的骨再生用組合物的物理性質(zhì)進(jìn)行評(píng)價(jià)。
[0053]分別準(zhǔn)備10份骨再生用組合物后，各個(gè)組合物以相同的量加入到注射器中后，用手指推壓注射器的推桿，將組合物吐出。通過吐出時(shí)的難易程度和組合物的形狀來評(píng)價(jià)注入性。此外，將吐出的組合物用手團(tuán)成團(tuán)兒，測(cè)定此時(shí)的形態(tài)維持性及組合物的凝結(jié)引起的凝結(jié)強(qiáng)度，還測(cè)定了粘附在手上的程度。各個(gè)物理性質(zhì)，即注入性(A)、
[0054]形態(tài)維持性(B)、凝結(jié)強(qiáng)度(C)及粘附于手上的現(xiàn)象(D)分別以下表1的5個(gè)階段進(jìn)行評(píng)價(jià)，并將其結(jié)果示于下表2中。
[0055]表1
【權(quán)利要求】
1.骨再生用組合物，其特征在于，該組合物含有微粒狀脫鈣骨、纖維狀脫鈣骨基質(zhì)及水合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的骨再生用組合物，其特征在于，所述微粒狀脫鈣骨基質(zhì)的顆粒尺寸為0.05-250 μ m的范圍。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的骨再生用組合物，其特征在于，所述纖維狀脫鈣骨基質(zhì)的長(zhǎng)度為1000-5000 μ m的范圍。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的骨再生用組合物，其特征在于，所述纖維狀脫鈣骨基質(zhì)通過包括下述步驟的制備方法制備:Ca)將分離到體外的骨在酸性溶液中進(jìn)行1-5小時(shí)第1次脫鈣；(b)將從步驟(a)得到的骨切割成0.l_3mm厚的片狀骨；(c)將從步驟(b)得到的片狀骨在酸性溶液中進(jìn)行2-6小時(shí)的第2次脫鈣；及((1)將從步驟(c)得到的經(jīng)過脫鈣的骨進(jìn)行粉碎。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的骨再生用組合物，其特征在于，所述步驟(a)和步驟(C)的所述酸性溶液相互獨(dú)立地為0.1-3N的HCl水溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的骨再生用組合物，其特征在于，所述步驟(a)和步驟(C)的所述酸性溶液為0.6N的HCl水溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的骨再生用組合物，其特征在于，所述水合物選自蒸餾水、生理鹽水、濃縮鹽水及離子水中的一種以上。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的骨再生用組合物，其特征在于，所述微粒狀脫鈣骨基質(zhì):纖維狀脫鈣骨基質(zhì):水合物的重 量比為1:0.3~1.2:3~10。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任意一項(xiàng)所述的骨再生用組合物，其特征在于，骨再生用組合物還可以含有對(duì)脫鈣步驟分離的脫鈣溶液進(jìn)行中和、分離所生成的沉淀物而得到的源自脫鈣溶液的分離物。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的骨再生用組合物，其特征在于，相對(duì)于微粒狀脫鈣骨基質(zhì)I重量份，源自脫鈣溶液的分離物的含量為1-5重量份。
【文檔編號(hào)】A61F2/28GK103957952SQ201180073849
【公開日】2014年7月30日 申請(qǐng)日期:2011年10月11日 優(yōu)先權(quán)日:2011年9月29日
【發(fā)明者】宋錫范, 金守庸, 蘇怔援, 徐漢率, 柳眩承, 金貴南, 金炳奭 申請(qǐng)人:Cg生物技術(shù)有限公司