專(zhuān)利名稱：：含牛蒡子苷元的牛蒡子提取物及其制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及含有牛蒡子苷元(arctigenin)及牛蒡子苷(arctiin)的牛蒡子提取物的制造方法。更詳細(xì)而言，本發(fā)明涉及以牛蒡子苷元/牛蒡子苷=0.71.3的重量比含有牛蒡子苷元及牛蒡子苷的牛蒡子提取物的制造方法。
背景技術(shù)：
：牛蒡子在15版日本藥典中規(guī)定為牛蒡(ArctiumlappaLinne菊科)的果實(shí)。此夕卜，牛蒡子是銀翹散、驅(qū)風(fēng)解毒湯、消風(fēng)散等處方藥中的生藥，其實(shí)質(zhì)上被分類(lèi)為專(zhuān)門(mén)用作醫(yī)藥品的成分。牛蒡子含有約7%的屬于木質(zhì)素苷的牛蒡子苷以及約0.6%的作為其苷元的牛蒡子苷元。近年來(lái)，來(lái)自PANC-1、AsPC-1、BxPC-1及KP-3等胰腺癌的細(xì)胞即使在極度營(yíng)養(yǎng)饑餓的狀態(tài)下也顯示出較強(qiáng)的耐性，并報(bào)道了解除其耐性可能將成為癌癥治療中新生化學(xué)途徑(專(zhuān)利文獻(xiàn)I)。據(jù)報(bào)道，使用胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1，進(jìn)行了對(duì)能夠解除低營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)下的腫瘤細(xì)胞的生存能力的物質(zhì)的篩選，結(jié)果牛蒡子苷元是有效的(非專(zhuān)利文獻(xiàn)I)。根據(jù)上述見(jiàn)解，含有牛蒡子苷元的牛蒡子提取物可以作為用于治療胰腺癌的抗癌劑來(lái)使用。就目前已知的牛蒡子而言，牛蒡子中的牛蒡子苷元含量低至約0.6%。此外，難溶于水。因此，用以往所利用的熱水提取法來(lái)制造以高含量含有牛蒡子苷元的牛蒡子提取物是極其困難的。此外，在使用于胰腺癌等的治療時(shí)，期望提供作為有效成分的牛蒡子苷元達(dá)到一定含量的牛蒡子提取物，如上所述，在以高含量含有牛蒡子苷元的牛蒡子提取物的制造中，使牛蒡子苷轉(zhuǎn)變?yōu)榕］蜃榆赵y以將難溶于水的牛蒡子苷元控制在恒定含量。進(jìn)而，在使用于胰腺癌等治療時(shí)，已知以恒定含量含有牛蒡子苷元及牛蒡子苷的牛蒡子提取物的抗癌效果特別優(yōu)異。因此，在以高含量含有牛蒡子苷元的牛蒡子提取物的制造中，期望能夠?qū)⑴］蜃榆赵芭］蜃榆湛刂圃诤愣ê康闹圃旆椒?。尤其期望能夠制造以約1:1的重量比含有牛蒡子苷元及牛蒡子苷的牛蒡子提取物的方法?，F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專(zhuān)利文獻(xiàn)專(zhuān)利文獻(xiàn)1:日本特開(kāi)2002-065298號(hào)公報(bào)非專(zhuān)利文獻(xiàn)非專(zhuān)利文獻(xiàn)I:S.AwaLe,J.Lu,S.K.KaLauni,Y.Kurashima,Y.Tezuka,S.Kadota,H.Esumi,CancerRes.，2006,66(3)，1751-1757。
發(fā)明內(nèi)容發(fā)明要解決的課題本發(fā)明的目的在于，提供以一定比例含有牛蒡子苷元及牛蒡子苷的牛蒡子提取物及其制造方法。更詳細(xì)而言，本發(fā)明的目的在于，提供以約1:1的重量比含有牛蒡子苷元及牛蒡子苷的牛蒡子提取物的制造方法。用于解決課題的手段本發(fā)明人等為了解決上述課題進(jìn)行了深入地研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)以下技術(shù):通過(guò)對(duì)作為原料的牛蒡子的酶活性、切裁牛蒡子的粒徑、使牛蒡子苷酶致轉(zhuǎn)變?yōu)榕］蜃榆赵獣r(shí)的溫度以及從牛蒡子提取牛蒡子苷元及牛蒡子苷時(shí)的溫度進(jìn)行調(diào)整，從而調(diào)節(jié)牛蒡子苷元及牛蒡子苷的含有·比。本發(fā)明提供一種以牛蒡子苷元/牛蒡子苷=0.71.3的重量比(1.01.9的摩爾比)含有牛蒡子苷元及牛蒡子苷的牛蒡子提取物的制造方法，其包括以下工序:對(duì)牛蒡子進(jìn)行切裁的工序；以及利用牛蒡子中固有的β_葡糖苷酶使牛蒡子中固有的牛蒡子苷酶致轉(zhuǎn)變?yōu)榕］蜃榆赵墓ば颍渲?，上述酶致轉(zhuǎn)變是使其在20°C50°C的溫度下發(fā)生反應(yīng)。此外，本發(fā)明提供上述的牛蒡子提取物的制造方法，其中，在進(jìn)行切裁的工序中，將牛蒡子切裁成0.85mm9.5mm的粒徑。進(jìn)而，本發(fā)明提供上述的牛蒡子提取物的制造方法，其中，牛蒡子中固有的葡糖苷酶的酶活性在Ig牛蒡子中為0.4U以上。此外，本發(fā)明提供上述的牛蒡子提取物的制造方法，其包括以下工序:在進(jìn)行酶致轉(zhuǎn)變的工序之后，通過(guò)加入有機(jī)溶劑來(lái)提取含有牛蒡子苷元及牛蒡子苷的提取物。此外，本發(fā)明提供上述的牛蒡子提取物的制造方法，其中，有機(jī)溶劑為乙醇。此外，本發(fā)明提供上述的牛蒡子提取物的制造方法，其中，進(jìn)行提取的工序在約80°C的溫度下進(jìn)行提取。進(jìn)而，本發(fā)明提供一種牛蒡子提取物，其是利用上述方法得到的、以牛蒡子苷元/牛蒡子苷為0.71.3的重量比含有牛蒡子苷元及牛蒡子苷的牛蒡子提取物。進(jìn)而，本發(fā)明提供一種抗癌劑，其含有利用上述方法得到的、以牛蒡子苷元/牛蒡子苷為0.71.3的重量比含有牛蒡子苷元及牛蒡子苷的牛蒡子提取物。發(fā)明效果根據(jù)本發(fā)明，能夠提供牛蒡子苷元/牛蒡子苷(重量比)=0.71.3且以恒定含有比含有具有抗腫瘤效果的牛蒡子苷元的牛蒡子提取物。尤其通過(guò)對(duì)胰腺癌患者進(jìn)行給藥，從而可以期待穩(wěn)定的腫瘤增殖抑制、抗腫瘤效果。此外，還可以提高制造時(shí)的生產(chǎn)率。具體實(shí)施例方式以下，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)地說(shuō)明。公開(kāi)的條件為一個(gè)例子，但并不限定于此。本申請(qǐng)發(fā)明的牛蒡子提取物經(jīng)過(guò)生藥切裁工序、提取工序(酶致轉(zhuǎn)變工序及利用有機(jī)溶劑的提取工序)、固液分離工序、濃縮工序及干燥工序來(lái)制造。(生藥切裁工序)在本發(fā)明的牛蒡子提取物的制造方法中，將作為原料的牛蒡子切裁成適于提取的大小。作為原料生藥有植物的各個(gè)部位、礦物、動(dòng)物等各種大小、形狀、硬度，需要根據(jù)其特質(zhì)進(jìn)行切裁。牛蒡子可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的任意手段進(jìn)行切裁。例如，可以使用市售的切裁機(jī)。在本發(fā)明的牛蒡子提取物的制造方法中，可以預(yù)先測(cè)定牛蒡子中固有的酶β_葡糖苷酶的活性，從而選擇出適于本發(fā)明的牛蒡子。作為測(cè)定β-葡糖苷酶的活性的方法，例如，以對(duì)硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(C12H15NO8:分子量301.25)(SIGMA-ALDRICH公司制)為基質(zhì)，使牛蒡子粉碎品與其發(fā)生作用，測(cè)定400nm的吸光度的變化來(lái)測(cè)定由此生成的對(duì)硝基苯酚，由此可以測(cè)定酶活性。作為表示酶活性的單位，可以將I分鐘內(nèi)生成I微摩爾對(duì)硝基苯酚的酶量表示為I單位(U)。為了得到以牛蒡子苷元/牛蒡子苷=0.71.3的重量比含有牛蒡子苷元及牛蒡子苷的牛蒡子提取物，可以使用牛蒡子中固有的β_葡糖苷酶的活性為例如0.4U/g以上、優(yōu)選lU/g以上的牛蒡子。在低于0.4U/g的情況下，水解變得不充分，牛蒡子苷元的重量比下降，無(wú)法有效地得到所需的牛蒡子提取物。此外，在本發(fā)明的牛蒡子提取物的制造方法中，可以使用切裁成任意粒徑的牛蒡子。切裁出的牛蒡子的粒徑越小，酶致轉(zhuǎn)變?cè)降靡源龠M(jìn)，提取物收率也越提高。相反，若粒徑過(guò)小，則酶致轉(zhuǎn)變過(guò)快，有時(shí)會(huì)使工藝管理變得困難或者在后續(xù)工序中對(duì)準(zhǔn)確的固液分離產(chǎn)生障礙。為了得到以牛蒡子苷元/牛蒡子苷=0.71.3的重量比含有牛蒡子苷元及牛蒡子苷的牛蒡子提取物，如以下實(shí)施例所示那樣將牛蒡子以例如全部通過(guò)9.5mm篩的方式切裁成9.5mm以下的粒徑。此外，為了得到以牛蒡子苷元/牛蒡子苷=0.71.3的重量比含有牛蒡子苷元及牛蒡子苷的牛蒡子提取物，理想的是將牛蒡子按照以下方式進(jìn)行粒徑切裁:全部通過(guò)9.5mm篩，并在例如0.85mm的篩上分布60100%、進(jìn)一步優(yōu)選以在0.85mm的篩上分布6580%。(提取工序)在生藥提取物粉末制造工序中，提取工序是品質(zhì)上最重要的工序。該提取工序決定生藥提取物粉末的品質(zhì)。在本發(fā)明的牛蒡子提取物的制造方法中，為了提取牛蒡子提取物，而分成酶致轉(zhuǎn)變工序和利用有機(jī)溶劑的提取工序的2階段進(jìn)行提取。(酶致轉(zhuǎn)變工序)酶致轉(zhuǎn)變工序是本發(fā)明的牛蒡子提取物的制造方法中的重要工序。酶致轉(zhuǎn)變工序是利用牛蒡子中固有的酶即葡糖苷酶使牛蒡子中含有的牛蒡子苷，酶致轉(zhuǎn)變?yōu)榕］蜃榆赵墓ば?。具體而言，通過(guò)將上述工序中準(zhǔn)備的牛蒡子切裁物保持在適當(dāng)?shù)臏囟?，從而使?葡糖苷酶起作用，進(jìn)行從牛蒡子苷生成牛蒡子苷元的反應(yīng)。例如，通過(guò)在切裁出的牛蒡子中添加水等的任意溶液并在30°C附近的溫度下進(jìn)行攪拌等方式，可以將牛蒡子保持在任意溫度。為了得到以牛蒡子苷元/牛蒡子苷=0.71.3的重量比含有牛蒡子苷元及牛蒡子苷的牛蒡子提取物，而將切裁出的牛蒡子保持在30°C附近的溫度、例如2050°C之間的溫度。在低于20°C的情況下，水解變得不充分，牛蒡子苷元的重量比下降，無(wú)法有效地得到所需的牛蒡子提取物。另一方面，在高于50°C的溫度的情況下，酶失活，牛蒡子苷元的重量比下降，無(wú)法有效地得到所需的牛蒡子提取物。此外，保持時(shí)間只要在上述溫度下進(jìn)行保持，則沒(méi)有特別的限定，例如可以使其保持約30分鐘。通過(guò)使其保持在2050°C之間，從而無(wú)論保持時(shí)間如何，均會(huì)使適量的牛蒡子苷酶致轉(zhuǎn)變?yōu)榕］蜃榆赵梢缘玫揭耘］蜃榆赵?牛蒡子苷(重量比)為約1:1的比例含有牛蒡子苷元及牛蒡子苷的牛蒡子提取物。(利用有機(jī)溶劑的提取工序)利用有機(jī)溶劑的提取工序是使用任意的適當(dāng)有機(jī)溶劑從牛蒡子中提取牛蒡子苷元及牛蒡子苷的工序。即，該工序如下:利用上述的酶致轉(zhuǎn)變工序使牛蒡子苷元處于高含量的狀態(tài)，并通過(guò)添加適當(dāng)?shù)娜軇﹣?lái)提取牛蒡子提取物。例如，在牛蒡子提取物中添加適當(dāng)?shù)娜軇?，并加熱攪拌適當(dāng)?shù)臅r(shí)間，從而提取牛蒡子提取物。此外，還可以使用除加熱攪拌以外的加熱回流、滴注式提取、浸潰式提取或加壓式提取法等本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的任意提取法來(lái)提取牛蒡子提取物。由于牛蒡子苷元具有水難溶性，因此可以通過(guò)添加有機(jī)溶劑來(lái)提高牛蒡子苷元的收率。有機(jī)溶劑可以使用任意的有機(jī)溶劑。例如可以使用甲醇、乙醇及丙醇等醇、以及丙酮。若考慮安全性方面，則在本發(fā)明的牛蒡子提取物的制造方法中優(yōu)選使用乙醇作為有機(jī)溶劑。在利用加熱攪拌來(lái)提取牛蒡子提取物的情況下，加熱攪拌可以在任意溫度下進(jìn)行，但是，為了得到以牛蒡子苷元/牛蒡子苷為0.71.3的重量比含有牛蒡子苷元及牛蒡子苷的牛蒡子提取物，而使其保持在80°C以上的溫度、例如8090°C之間的溫度。此外，加熱攪拌的時(shí)間，只要在上述溫度進(jìn)行加熱攪拌，則沒(méi)有特別的限定，通過(guò)加熱攪拌約30分鐘、例如3060分鐘，從而可以在溶劑中從牛蒡子提取牛蒡子苷元及牛蒡子苷。加熱攪拌的時(shí)間越長(zhǎng)，牛蒡子苷元及牛蒡子苷的收率越高。但是，在加熱攪拌的時(shí)間長(zhǎng)時(shí)，則不需要的油脂類(lèi)大量溶出，導(dǎo)致濃縮工序的負(fù)荷變大。因此，加熱攪拌的時(shí)間只要根據(jù)情況適當(dāng)決定即可。此外，有關(guān)牛蒡子苷元及牛蒡子苷的收率，由于乙醇量越多則牛蒡子苷元及牛蒡子苷的溶解度越高，因此收率也提高。但是，在乙醇量多時(shí)，不需要的油脂類(lèi)大量溶出，導(dǎo)致濃縮工序的負(fù)荷變大。因此，投入量只要根據(jù)情況適當(dāng)決定即可。另外，通過(guò)該工序中的加熱攪拌，從而可以同時(shí)對(duì)牛蒡子提取物進(jìn)行滅菌及殺菌。(固液分離工序)固液分離工序是將提取完的牛蒡子從提取液進(jìn)行分離的工序。固液分離可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的任意方法來(lái)進(jìn)行。固液分離法有例如過(guò)濾法、沉降法及離心分離法等。在工業(yè)上，理想的是離心分離法。(濃縮工序)濃縮工序是在干燥之前從牛蒡子提取液除去溶劑的工序。溶劑從牛蒡子提取液的除去可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的任意方法來(lái)進(jìn)行。但是，由上述工序得到的來(lái)自牛蒡子的提取液優(yōu)選以不會(huì)再長(zhǎng)時(shí)間曝露在高溫的方式進(jìn)行濃縮。例如，通過(guò)使用減壓濃縮法，從而無(wú)需長(zhǎng)時(shí)間曝露于高溫即可濃縮牛蒡子提取液。牛蒡子提取液的濃縮可以濃縮至能得到所需濃度的牛蒡子提取物的濃度。例如，理想的是在以下的干燥工序中濃縮至能夠適當(dāng)進(jìn)行干燥的程度。此外，理想的是在以下的工序中使牛蒡子提取物干燥制成粉末制劑的情況下，濃縮至能得到適當(dāng)?shù)闹苿┨匦缘臐舛?。由于牛蒡子苷元及牛蒡子苷具有水難溶性，因此牛蒡子苷元及牛蒡子苷大量附著在以下的干燥工序的制造裝置內(nèi)，最終的收率大幅降低。因此，為了防止牛蒡子苷元及牛蒡子苷附著于制造裝置，可以在由該濃縮工序得到的牛蒡子提取液中添加糊精。糊精的添加量理想的是例如相對(duì)于濃縮液的固體成分為1530%左右。(干燥工序)干燥工序是將由上述工序得到的牛蒡子提取物加工成粉末狀的工序。干燥可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的任意方法來(lái)進(jìn)行。例如，作為干燥法，已知冷凍干燥及噴霧干燥等，若在實(shí)驗(yàn)室水平上，通常使用前者，若在批量生產(chǎn)水平上，通常使用后者。通過(guò)以上的制造工序，可以得到以牛蒡子苷元/牛蒡子苷=0.71.3的重量比含有牛蒡子苷元及牛蒡子苷的牛蒡子提取物。本發(fā)明的牛蒡子提取物的制造方法必須包括在20°C50°C的溫度下進(jìn)行酶致轉(zhuǎn)變的工序，但是無(wú)需包括所有其他工序。(含有牛蒡子提取物的抗癌劑)作為牛蒡子提取物的主要成分的牛蒡子苷元已知作為用于治療胰腺癌的抗癌劑的有效成分起作用。此外，已知在以牛蒡子提取物為有效成分的抗癌劑以約1:1的重量比含有牛蒡子提取物中的牛蒡子苷元及牛蒡子苷的情況下，其抗癌效果最優(yōu)異。另一方面，如上所述，利用本發(fā)明的牛蒡子提取物的制造方法得到的提取物粉末以牛蒡子苷元/牛蒡子苷=0.71.3的重量比含有牛蒡子苷元及牛蒡子苷。因此，利用本發(fā)明的牛蒡子提取物的制造方法得到的提取物粉末比以往的牛蒡子提取物更能作為具有優(yōu)異抗癌效果的抗癌劑來(lái)使用。含有利用本發(fā)明的牛蒡子提取物的制造方法得到的提取物的抗癌劑可以還含有任意成分的組合物。例如，在含有本發(fā)明的提取物的抗癌劑作為藥品使用的情況下，可以與藥學(xué)上可接受的基質(zhì)、載體、賦形劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑及著色劑等一起制成藥品組合物來(lái)提供。作為藥品組合物中使用的載體及賦形劑的例子，包括乳糖、葡萄糖、白糖、甘露醇、糊精、馬鈴薯淀粉、玉米淀粉、碳酸鈣、磷酸鈣、硫酸鈣及結(jié)晶纖維素等。此外,作為粘結(jié)劑的例子,包括淀粉、明膠、糖楽；、黃苗膠(gumtragacanth)、聚乙烯醇、聚乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素及羧甲基纖維素坐寸ο此外，作為崩解劑的例子，包括淀粉、瓊脂、明膠粉、結(jié)晶纖維素、碳酸鈣、碳酸氫鈉、海藻酸鈉、羧甲基纖維素鈉及羧甲基纖維素鈣等。此外，作為潤(rùn)滑劑的例子，包括硬脂酸鎂、氫化植物油、滑石及聚乙二醇等。此外，著色劑可以使用允許添加到醫(yī)藥品中的任意著色劑。此外，藥品組合物可以根據(jù)需要包覆一層以上的層的由白糖、明膠、純化蟲(chóng)膠(purifiedshellac)、明膠、甘油、山梨糖醇、乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、鄰苯二甲酸纖維素醋酸酯、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、甲基丙烯酸甲酯及甲基丙烯酸聚合物等制的膜。此外，可以根據(jù)需要添加pH調(diào)節(jié)劑、緩沖劑、穩(wěn)定化劑及增溶劑等。此外，藥品組合物可以以任意形態(tài)的制劑來(lái)提供。例如，作為藥品組合物的口服制齊U，可以是糖衣片、頰含片(buccaltablet)、包衣片及咀嚼片等片劑；糖錠劑、丸劑、散劑及包括軟膠囊的膠囊劑、顆粒劑、懸浮劑、乳劑、包括干糖漿的糖漿劑、酏劑等液體制劑。此外，作為藥品組合物的非口服制劑，可以是用于靜脈注射、皮下注射、腹腔內(nèi)注射、肌肉內(nèi)注射、經(jīng)皮給藥、經(jīng)鼻給藥、經(jīng)肺給藥、經(jīng)腸給藥、口腔內(nèi)給藥及經(jīng)粘膜給藥等給藥方式的制劑。例如可以是注射劑、經(jīng)皮吸收帶、氣溶膠劑及栓劑等。此外，由于提取物粉末具有其特有的辛辣味，因此，可以制成遮蓋提取物粉末的制劑或者制成以包裹劑包裹的薄膜包衣劑。另一方面，利用本發(fā)明的牛蒡子提取物的制造方法得到的提取物粉末也可以直接以其形態(tài)使用。此外，也可以添加到食品等中。此外，利用本發(fā)明的牛蒡子提取物的制造方法得到的提取物粉末可以通過(guò)添加、混合或涂布于其他食品而以食品原材料的形式來(lái)提供。除食品外，還可以作為化妝品及餌料等來(lái)提供。(試驗(yàn)例)對(duì)牛蒡子的酶活性及酶致轉(zhuǎn)變條件(溫度和時(shí)間)對(duì)于牛蒡子苷元/牛蒡子苷(重量比)帶來(lái)的影響、即兩者的因果關(guān)系進(jìn)行了驗(yàn)證。(酶活性的測(cè)定)利用維利氏粉碎機(jī)將產(chǎn)地、批次不同的牛蒡子進(jìn)行粉碎，將該牛蒡子粉碎品0.1g用IOmL的水進(jìn)行稀釋?zhuān)瞥稍嚇尤芤?。在?duì)硝基苯基-β-D-卩比喃葡萄糖苷0.15g中加入水定容至25mL,制備成20mmol/L對(duì)硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷水溶液，作為基質(zhì)溶液。在0.lmol/L醋酸緩沖液ImL中加入20mmol/L對(duì)硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷水溶液0.5mL，制備反應(yīng)混液，在37°C進(jìn)行約5分鐘預(yù)加熱。在反應(yīng)混液中加入0.5mL試樣溶液，使其在37V反應(yīng)15分鐘后，加入作為反應(yīng)終止液的0.2mol/L碳酸鈉水溶液2mL，使反應(yīng)終止。對(duì)該溶液在400nm下的吸光度進(jìn)行測(cè)定，由與不進(jìn)行酶反應(yīng)的空白溶液相比的變化量，利用下式求出酶活性。酶活性(U/g)=(試樣溶液的吸光度-空白溶液的吸光度)X4mLX1/18.1(對(duì)硝基苯酚在上述測(cè)定條件下的毫摩爾分子吸光系數(shù):cm2/μmol)XI/光路長(zhǎng)(cm)XI/反應(yīng)時(shí)間(分鐘)X1/0.5mLXI/試樣溶液濃度(g/mL)如表I所示，確認(rèn)到各牛蒡子的酶活性為0.128.23U/g。(試驗(yàn)例I)在酶活性為0.12、0.27、0.40U/g(試樣I3)的、切裁出的牛蒡子Ig中加入水7mL，在酶反應(yīng)溫度15°C、20°C的溫度條件下，將各個(gè)反應(yīng)溫度下的反應(yīng)時(shí)間設(shè)定為30分鐘，反應(yīng)后，加入乙醇，在80°C進(jìn)行提取，對(duì)所得的提取物的牛蒡子苷元及牛蒡子苷進(jìn)行定量，求出牛蒡子苷元/牛蒡子苷的重量比。結(jié)果如表I的比較例I2、實(shí)施例1所示。酶活性為0.40U/g的試樣3在酶反應(yīng)溫度20°C、反應(yīng)時(shí)間30分鐘的條件下得到牛蒡子苷元/牛蒡子苷(重量比)=0.82的牛蒡子提取物。另一方面，在酶反應(yīng)溫度15°C、反應(yīng)時(shí)間30分鐘的條件下，牛蒡子苷元/牛蒡子苷(重量比)=0.69，酶反應(yīng)溫度優(yōu)選為201:以上。此外，酶活性低于0.40U/g的試樣I及2即使在酶反應(yīng)溫度20°C下也無(wú)法滿足牛蒡子苷元/牛蒡子苷(重量比)=0.70以上，因此牛蒡子的酶活性優(yōu)選為0.40U/g以上。(試驗(yàn)例2)在酶活性為4.03U/g(試樣5)的、切裁出的牛蒡子Ig中加入水7mL，在酶反應(yīng)溫度30°c、40°c、5(rc、6(rc的溫度條件下，將各個(gè)反應(yīng)溫度下的反應(yīng)時(shí)間設(shè)定為15分鐘、30分鐘(僅30°c和60°C)，反應(yīng)后用乙醇進(jìn)行提取，對(duì)所得的提取物的牛蒡子苷元及牛蒡子苷進(jìn)行定量，求出牛蒡子苷元/牛蒡子苷的重量比。結(jié)果如表I的實(shí)施例3所示。在酶反應(yīng)溫度30°C、反應(yīng)時(shí)間15分鐘的條件下，得到牛蒡子苷元/牛蒡子苷(重量比)=0.7的牛蒡子提取物；在酶反應(yīng)溫度30°C、反應(yīng)時(shí)間30分鐘的條件下，得到牛蒡子苷元/牛蒡子苷(重量比)=1.0的牛蒡子提取物；在酶反應(yīng)溫度40°C、反應(yīng)時(shí)間15分鐘的條件下，得到牛蒡子苷元/牛蒡子苷(重量比)=1.2的牛蒡子提取物；在酶反應(yīng)溫度50°C、反應(yīng)時(shí)間15分鐘的條件下，得到牛蒡子苷元/牛蒡子苷(重量比)=1.2的牛蒡子提取物。另一方面，在酶反應(yīng)溫度60°C、反應(yīng)時(shí)間15分鐘的條件下，牛蒡子苷元/牛蒡子苷(重量比)=0.4;在酶反應(yīng)溫度60°C、反應(yīng)時(shí)間30分鐘的條件下，牛蒡子苷元/牛蒡子苷(重量比)=0.5。綜上，酶反應(yīng)溫度優(yōu)選低于60°C。(試驗(yàn)例3)在酶活性為1.42U/g(試樣4)的、切裁出的牛蒡子Ig中加入7mL水，在酶反應(yīng)溫度25°C的溫度條件下，將反應(yīng)時(shí)間設(shè)定為10分鐘、30分鐘，反應(yīng)后用乙醇進(jìn)行提取，對(duì)所得的提取物的牛蒡子苷元及牛蒡子苷進(jìn)行定量，求出牛蒡子苷元/牛蒡子苷的重量比。結(jié)果如表I的實(shí)施例2所示。在酶反應(yīng)溫度25°C、反應(yīng)時(shí)間10分鐘的條件下，得到牛蒡子苷元/牛蒡子苷(重量比)=0.74的牛蒡子提取物；在酶反應(yīng)溫度25°C、反應(yīng)時(shí)間30分鐘的條件下，得到牛蒡子苷元/牛蒡子苷(重量比)=0.85的牛蒡子提取物。綜上，即使酶活性為1.42U/g也能夠得到所需的結(jié)果。表I[表I]權(quán)利要求1.一種牛蒡子提取物的制造方法，所述牛蒡子提取物以牛蒡子苷元/牛蒡子苷=0.71.3的重量比含有牛蒡子苷元及牛蒡子苷，其包括以下工序:切裁工序，切裁牛蒡子；以及酶致轉(zhuǎn)變工序，利用牛蒡子中固有的葡糖苷酶，使牛蒡子中固有的牛蒡子苷，酶致轉(zhuǎn)變?yōu)榕］蜃榆赵?，且所述酶致轉(zhuǎn)變是在20°C50°C的溫度下發(fā)生反應(yīng)的。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，在所述切裁工序中，將牛蒡子切裁成0.85mm9.5mm的粒徑。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，權(quán)利要求1所述的牛蒡子中固有的β-葡糖苷酶的酶活性在Ig牛蒡子中為0.4U以上。4.根據(jù)權(quán)利要求13中任一項(xiàng)所述的方法，其包括:提取工序，在進(jìn)行權(quán)利要求1所述的酶致轉(zhuǎn)變的工序之后，通過(guò)加入有機(jī)溶劑來(lái)提取含有牛蒡子苷元及牛蒡子苷的提取物。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，權(quán)利要求4所述的有機(jī)溶劑為乙醇。6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的方法，其中，權(quán)利要求4所述的提取工序在80°C以上的溫度下進(jìn)行提取。7.一種牛蒡子提取物，其是利用權(quán)利要求16中任一項(xiàng)所述的方法得到的、以牛蒡子苷元/牛蒡子苷為0.71.3的重量比含有牛蒡子苷元及牛蒡子苷的牛蒡子提取物。8.一種抗癌劑，其含有利用權(quán)利要求16中任一項(xiàng)所述的方法得到的、以牛蒡子苷元/牛蒡子苷為0.71.3的重量比含有牛蒡子苷元及牛蒡子苷的牛蒡子提取物。全文摘要本發(fā)明的目的在于，提供以一定比例含有牛蒡子苷元及牛蒡子苷的牛蒡子提取物及其制造方法。更詳細(xì)而言，本發(fā)明的目的在于，提供以約1∶1的重量比含有牛蒡子苷元及牛蒡子苷的牛蒡子提取物的制造方法。本發(fā)明提供以牛蒡子苷元/牛蒡子苷(重量比)＝0.7～1.3的重量比含有牛蒡子苷元及牛蒡子苷的牛蒡子提取物的制造方法，其包括以下工序?qū)ε］蜃舆M(jìn)行切裁的工序；以及利用牛蒡子中固有的β-葡糖苷酶使牛蒡子中固有的牛蒡子苷酶致轉(zhuǎn)變?yōu)榕］蜃榆赵墓ば颍渲?，所述酶致轉(zhuǎn)變是使其在20～50℃的溫度下發(fā)生反應(yīng)。本發(fā)明還提供進(jìn)一步包括通過(guò)加入有機(jī)溶劑進(jìn)行加熱回流來(lái)提取含有牛蒡子苷元及牛蒡子苷的提取物的工序的方法。文檔編號(hào)A61K31/365GK103118689SQ20118004629公開(kāi)日2013年5月22日申請(qǐng)日期2011年9月27日優(yōu)先權(quán)日2010年9月27日發(fā)明者大洼敏樹(shù),與茂田敏,布施貴史,川島孝則,江角浩安,三好千香,門(mén)田重利申請(qǐng)人:客樂(lè)諧制藥株式會(huì)社,日本國(guó)立癌癥研究中心,國(guó)立大學(xué)法人富山大學(xué)