專利名稱：用于刺激公牛生殖能力的方法和用于刺激公牛生殖能力的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于刺激公牛生殖能力的方法。更特別地，本發(fā)明的方法使得能夠刺激公牛的性功能(尤其是性欲)，還能夠改善精液的質(zhì)量。本發(fā)明還涉及為了在刺激生殖能力方面用于公牛的組合物。
本發(fā)明可用于牛飼養(yǎng)領(lǐng)域，特別是用于從公牛中采集精液以及直接或人工使母牛受精。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有研究表明，母牛的發(fā)情期(對應(yīng)于雌性接受雄性并可受精的時(shí)期)特別短，只有約6至12小時(shí)。在發(fā)情期，母牛分泌揮發(fā)性的性信息素告知能夠與其交配的雄性。因此， 已對牛進(jìn)行了數(shù)個(gè)研究以確認(rèn)這個(gè)假說。這些研究已使得能夠確認(rèn)在數(shù)種分泌物中(尤其在陰道分泌物和尿液中)存在此類分子并且它們作用于雄性的裂唇嗅表現(xiàn)(Flehmen)。這些分子被雄性察覺到并使它們能在發(fā)情期中辨認(rèn)雌性。
目前，最經(jīng)常根據(jù)與繁育目的相關(guān)的特定特征對牛進(jìn)行選擇。因此，根據(jù)其哺乳能力選擇乳用品種的母牛，以確保在質(zhì)量和數(shù)量方面恒定的牛奶生產(chǎn)。類似地，根據(jù)其肉的數(shù)量、營養(yǎng)、味道等性質(zhì)選擇肉用品種；根據(jù)與后代最終使用目的有關(guān)的特定標(biāo)準(zhǔn)來選擇公牛和母牛二者。
在精液生產(chǎn)中心采集公牛精液是一項(xiàng)精細(xì)的操作，其必須嚴(yán)格進(jìn)行，這不僅對于采集本身(尤其是防止污染)而言，而且在采集前后處理公牛時(shí)亦如此。
目前，不可能開發(fā)出一種對所有畜牧場的公牛來說通用的方案，從而確保在所有畜牧場的個(gè)體中幾乎一致的采集。實(shí)際上，對于不同個(gè)體之間，以及對于單個(gè)個(gè)體不同時(shí)刻之間，同一畜牧場的個(gè)體可具有不同的性欲。
迄今為止，還沒有有效的方法來刺激在受精中心或畜牧場中所用公牛的性功能以及更特別地促進(jìn)其性欲。然而，性欲問題在公牛中極其常見并且對于精液選擇中心而言是不利的。它們可導(dǎo)致一定程度的經(jīng)濟(jì)損失(藥劑損失、顯著的時(shí)間損失、牲畜商人的風(fēng)險(xiǎn))。 因此，對于牲畜商人而言預(yù)測采集的時(shí)間和條件是很困難的。
類似地，對于不同個(gè)體之間，以及對于單個(gè)個(gè)體不同時(shí)刻之間，精液的質(zhì)量和數(shù)量都有波動(dòng)。迄今為止，考慮到每個(gè)個(gè)體的行為，除了個(gè)體化的采集管理，還沒有有效的方法來改善公牛的精液產(chǎn)生。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述全部或部分問題。特別地，本發(fā)明的一個(gè)目的是改善公牛的生殖能力以采集其精液用于隨后的受精和/或在發(fā)情期與雌性交配?！吧衬芰Α币庵感袨槟芰?，尤其是性欲；和/或生理能力，尤其是精液的質(zhì)量和/或數(shù)量。
為了實(shí)現(xiàn)該目的，本發(fā)明提出在采集公牛的精液前或?qū)⒐Ｌ峁┙o母牛進(jìn)行繁殖前使用某些分子(最初分離自發(fā)情期母牛的某些分泌物，尤其是尿液)給予公牛。特別地， 本發(fā)明人鑒定了對公牛生殖能力具有影響的6種發(fā)情期特異性分子，即香豆素、角鯊烯、 6_氨基十一烷、2-丁酮、9-十八烯酸和1，2_ 二氯乙烯。這些分子可分離自發(fā)情期母牛的分泌物或通過任何其他方法獲得(尤其是化學(xué)合成)。另外，這些分子中的一些已經(jīng)在市場上銷售。
本發(fā)明的分子既是觸發(fā)信息素(releaser pheiOmone，即作用于行為的信息素) 也是啟動(dòng)信息素(primer pheromone,即作用于生理的信息素)。更特別地,吸入這些分子能夠使得減少爬跨前和射精前的時(shí)間和/或增加精液中精子的濃度。
由這些構(gòu)成的用途使得在等同的采集環(huán)境管理中增加所有個(gè)體的精液產(chǎn)生并且對處理/個(gè)體相互作用的影響可忽略。尤其對于具有高遺傳價(jià)值的個(gè)體而言，這一精液產(chǎn)生的改善在經(jīng)濟(jì)方面非常誘人。另外，在幼畜中獲得類似效果非常吸引人，特別是在基因組選擇的背景中(其中尋找具有最佳繁殖表現(xiàn)的此類個(gè)體以加快遺傳進(jìn)程)。
更特別地，本發(fā)明提出使用在溶液中的這些分子，其能夠向待處理的公牛的鼻孔中進(jìn)行噴霧。實(shí)際上，用這種方法使該分子直接與靶標(biāo)接觸并且降低了這些非常具有揮發(fā)性的分子消散在空氣中的風(fēng)險(xiǎn)。另外，通過這種施用方法模式使得每個(gè)個(gè)體吸入的信息素的數(shù)量可以是精確的劑量。


圖I顯示了發(fā)情周期中母牛尿液的化學(xué)組成的比較色譜圖譜；
圖2A至2F顯示了與NIST數(shù)據(jù)庫的光譜(b)相比的在母牛尿液和陰道粘液中根據(jù)本發(fā)明鑒定之6種發(fā)情前和發(fā)情期特異性化合物的實(shí)驗(yàn)離子光譜(a)；
圖3A至3C顯示了根據(jù)本發(fā)明處理之第一實(shí)施例對性欲(圖3A)、精液的精子濃度 (十億個(gè)精子/mL)(圖3B)和每次射精的精子總數(shù)(十億個(gè))(圖3C)的影響；
圖4A和4B顯示了根據(jù)本發(fā)明處理之第一實(shí)施例對具有標(biāo)準(zhǔn)性欲的公牛組精液的影響(精子濃度圖4A ;精子總數(shù)圖4B);
圖5顯示了根據(jù)本發(fā)明處理之第一實(shí)施例對具有低初始性欲的公牛組性欲的影響；
圖6A和6B顯示了，根據(jù)公牛的初始性欲，根據(jù)本發(fā)明處理之第二實(shí)施例對其性欲 (圖6A)和精液(圖6B)影響。
發(fā)明詳述
本發(fā)明人鑒定出對公牛的生殖功能具有有益作用的揮發(fā)性分子，特別是在發(fā)情期母牛的一些分泌物中所存在的揮發(fā)性分子，這是因?yàn)樗鼈兡軌蚋纳坪?或引起公牛的性欲，和/或改善所產(chǎn)生精液的質(zhì)量和/或數(shù)量。
根據(jù)本發(fā)明，公牛的性行為或性欲涉及反應(yīng)時(shí)間、性準(zhǔn)備時(shí)間和射精時(shí)間。根據(jù)本發(fā)明，反應(yīng)時(shí)間被定義為將公牛帶至離試情畜(teaser)約I. 5m處的時(shí)間與第一次假爬跨之間的間隔。性準(zhǔn)備時(shí)間對應(yīng)于由Amann(1976)提出的準(zhǔn)備，即假爬跨，然后積極等待2分鐘，之后以公牛的節(jié)律假爬跨兩次，最后在沒有進(jìn)一步等待的情況下爬跨從而導(dǎo)致射精。積極等待被定義為公牛保持與試情畜接觸，兩只動(dòng)物并排。射精時(shí)間等于反應(yīng)時(shí)間和性準(zhǔn)備時(shí)間之和。
因此，本發(fā)明的目的是包含至少一種母牛發(fā)情特異性揮發(fā)性分子的組合物用于改善公牛生殖功能的用途。
“母?！币庵干衬挲g的雌性牛物種，即通常來說超過18月齡。類似地，“公?！币庵干衬挲g的非閹割雄性牛物種。
發(fā)情期對應(yīng)于發(fā)情周期的時(shí)間段，也稱作“動(dòng)情”，在其過程中雌性發(fā)生排卵并接受交配。發(fā)情期之前是發(fā)情前期，之后是發(fā)情后期。
“生殖功能”意指導(dǎo)致產(chǎn)生精液的行為和生理過程。根據(jù)本發(fā)明，改善生殖功能可由改善性欲(即改善導(dǎo)致精液產(chǎn)生的行為)、改善精液本身或其兩者組成。
“改善”意指無論通過減少公牛產(chǎn)生精液所需的時(shí)間和/或通過提高精液本身內(nèi)在質(zhì)量，所述公牛的生殖能力提高。特別地，可通過增加所產(chǎn)生的體積、增加在所述體積中的精子濃度、增加有活力精子的數(shù)目等來改善精液的質(zhì)量。
根據(jù)本發(fā)明，這個(gè)組合物的用途使得能夠改善經(jīng)處理公牛的精液采集的表現(xiàn)或者在經(jīng)處理公牛與發(fā)情母牛交配后增加獲得受精的機(jī)會(huì)。
優(yōu)選地，在所使用的組合物中，至少一種母牛發(fā)情期特異性揮發(fā)性分子選自香豆素、角鯊烯、6-氨基十一烷、2-丁酮、9-十八烯酸和1，2_ 二氯乙烯。有利地，所述組合物包含至少香豆素和角鯊烯的混合物。
在施用本發(fā)明的另一些優(yōu)選模式中，所述組合物包含至少角鯊烯和I，2-二氯乙烯的混合物。兩種或更多種上述母牛發(fā)情期特異性揮發(fā)性分子的任何組合也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
有利地，本發(fā)明的組合物以包含甘油作為揮發(fā)性分子溶劑的溶液形式存在。
優(yōu)選地，發(fā)情期特異性的揮發(fā)性分子的總濃度為2. 5pg/mL至500pg/mL。特別地， 5pg/mL 至 100pg/mL 或 2. 5pg/mL 至 5pg/mL 或 100pg/mL 至 500pg/mL?！翱倽舛取币庵赣靡援a(chǎn)生該組合物的每種發(fā)情期特異性揮發(fā)性分子的濃度之和。甚至更優(yōu)選地，組合物中發(fā)情特異性揮發(fā)性分子的濃度至少等于25pg/mL, +/-5%。
在本發(fā)明的另一些優(yōu)選實(shí)施方案中，組合物中所包含的每種母牛發(fā)情期特異性揮發(fā)性分子的濃度大于或等于2. 5pg/mL。
根據(jù)本發(fā)明組合物用途的實(shí)施例，可將所述組合物保持在公牛鼻孔周圍，從而使所述公?？晌胨鼋M合物。
優(yōu)選地，所述組合物以噴霧形式存在，因此其可被直接噴在公牛的鼻孔中。
根據(jù)本發(fā)明，有利地，可使用的組合物立即生效。換言之，組合物作用沒有延遲期， 以及與雌性交配或采集精液可在將所述組合物給予公牛后直接進(jìn)行。
有利地，在每次精液采集之前或每次與母牛交配之前將所述組合物給予公牛。
本發(fā)明還涉及設(shè)計(jì)用于公牛以改善其生殖功能的組合物，其特征在于該組合物包含至少一種母牛發(fā)情特異性的揮發(fā)性分子。
有利地，在組合物中至少一種母牛發(fā)情特異性揮發(fā)性分子選自香豆素、角鯊烯、 6-氨基十一烷、2- 丁酮、9-十八烯酸和1，2- 二氯乙烯。
在本發(fā)明的另一些優(yōu)選實(shí)施方案中，所述組合物包含至少角鯊烯和1，2_ 二氯乙烯的混合物。兩種或更多種上述母牛發(fā)情期特異性揮發(fā)性分子的任何組合也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
所述組合物可以以優(yōu)選地包含甘油作為揮發(fā)性分子溶劑的溶液形式存在。實(shí)際上，甘油對動(dòng)物無害并且不會(huì)對公牛的生殖功能產(chǎn)生作用。當(dāng)然，可使用能夠稀釋本發(fā)明分子并且在對公牛沒有風(fēng)險(xiǎn)的情況下能夠使用的任何其他溶劑或賦形劑。
優(yōu)選地，所述溶液包含使其能夠噴霧所必需的賦形劑。
根據(jù)本發(fā)明，有利地，所述溶液具有發(fā)情期特異性揮發(fā)性分子的總濃度為2. 5pg/ mL 至 500pg/mL。特別地，5pg/mL 至 100pg/mL 或 2. 5pg/mL 至 5pg/mL 或 100pg/mL 至 500pg/ mL。甚至更優(yōu)選地，所述組合物中發(fā)情特異性揮發(fā)性分子的濃度至少等于25pg/mL，+/-5%。
在本發(fā)明的另一些優(yōu)選實(shí)施方案中，組合物中所包含的每種母牛發(fā)情期特異性揮發(fā)性分子的濃度大于或等于2. 5pg/mL。
實(shí)驗(yàn)
I-材料與方法
I-生物樣品的采集(尿液和陰道粘液)
為了鑒定公牛察覺發(fā)情中所涉及的化合物，對改良的母?；蛐∧概＿M(jìn)行數(shù)次尿液和陰道粘液采集。
在第一步驟中，對Prim'荷斯坦(Holstein)品種的改良母牛進(jìn)行兩個(gè)系列的采集。
在周期中的三個(gè)階段，即發(fā)情前期(PGF2 α后，D+1)、發(fā)情(PGF2 α后，D+2)和黃體期(PGF2a后，D+7)，在自然排尿的時(shí)候，從通過用前列腺素(PGF2 a )處理而同步的動(dòng)物采集尿液。通過每日觀察動(dòng)物和測量血漿黃體酮水平，從而在這些采集期間監(jiān)測該周期，以便較好地確定發(fā)情的時(shí)間。
當(dāng)出現(xiàn)陰道粘液時(shí)，在陰道周圍區(qū)域通過用紗布擦拭來采集陰道粘液。
另外對處于第一發(fā)情周期中的18個(gè)月小母牛進(jìn)行采集。在自然周期期間，在發(fā)情前期(發(fā)情前D-3至D-1)、發(fā)情和黃體(D+10)期中采集尿液樣品。通過在超過36個(gè)月的時(shí)間里每天5次15分鐘目視觀察來仔細(xì)監(jiān)測行為，從而確定階段。這些與超聲掃描相結(jié)合 (一周3次)以監(jiān)測卵泡成熟。
如下所述進(jìn)行3種其他的采集過程
在它們的周期中通過間隔10天兩次注射前列腺素(PGF2a)并且第二次注射是在第一次采集當(dāng)天(DO)來使6至8頭母牛(荷斯坦牛和蒙貝利亞牛(Montbeliard))同步。 除了目視和行為觀察之外，測量血漿激素水平以確定排卵時(shí)間。因此，在第二次注射前列腺素之后的一周里，每6小時(shí)取血液樣品以測量促黃體生成激素(LH)和雌二醇(E2)的水平。 每24小時(shí)測量黃體酮(P4)水平。將來自每個(gè)血液樣品的血清貯存在_80°C直到測量黃體酮 (ovucheck plasma 試劑盒,Biovet)、促黃體生成激素(LH DETECT 試劑盒，INRA,Nouzilly) 和雌二醇的水平。此外，在所述一次采集期間，通過每天2次超聲掃描監(jiān)測卵泡發(fā)育。
一天2至3次(取決于動(dòng)物)在自發(fā)排尿期間采集尿液。在采集時(shí)，將尿液分裝在4個(gè)用特氟龍塞子(Supelco)密封的4ml玻璃管中。
宮頸粘液(發(fā)情狀態(tài)特異性的生物流體)也被采集在由特氟龍塞子(Supelco)密封的20ml玻璃瓶中。
在所有情形中，在米集后將所米集的樣品存在4 C，在4小時(shí)內(nèi)將該樣品存在-80°C直到進(jìn)行分析。
2-取樣的生物流體的化學(xué)組成分析
2-1-用有機(jī)溶劑提取
用有機(jī)溶劑對在冰上解凍的4mL尿液或陰道粘液進(jìn)行化學(xué)提取(體積_體積)。
測試了數(shù)種溶劑(二氯甲烷(DCM)、戊烷、己烷)。選擇DCM，其顯示出對所分析的第一樣品具有提取大量化合物的能力。提取在用特氟龍螺帽(Supelco)密封的玻璃管中進(jìn)行，以盡可能減少塑料殘余物(鄰苯二甲酸鹽/酯)的污染。
快速渦旋混勻后，樣品在環(huán)境溫度下沉降10分鐘，然后以2500rpm離心20分鐘。 離心后，有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉柱(FLUKA)進(jìn)行干燥，然后在氮?dú)饬飨聺饪s100倍，之后在-20°C下貯存直到分析(提取后2周內(nèi))。
2-2-通過GC/MS鑒定化合物
利用由與四極桿質(zhì)譜儀(DSQII, Thermo Scientific)偶聯(lián)之Focus GC組成的 FOCUS/DSQII (Thermo Scientific)設(shè)備，通過氣相色譜法和質(zhì)譜法聯(lián)用(GC-MS)，對化學(xué)提取物進(jìn)行分析。
在分析期間(在3年內(nèi)進(jìn)行)，使用5種不同的柱以分離所提取的化合物 CP-si 15 CB low Bleed/MS 60mX0. 25 μ m ID X O. 25 μ m (SUPELCO) ；a TR-IMS 30mX0. 25mm ID X0. 25 μ m (Thermo)；
IMS-So IGe I 30mX0.25ym IDX0.25ym(SGE) ； TR- IMS 30mX0. 25IDX0. 25m(Thermo) ;TR_1MS 30mX0. 25IDX0. 25m(Thermo)；和 Equity5 30mX0. 25 μ m IDX0. 25 μ m(SUPELCO)。
以不分流模式(30秒)將2μ1等份提取物在260°C下注入注射器中。
所使用的分析程序如下30°C進(jìn)行4分鐘，然后以5°C /分鐘升至280°C并且在 280 °C恒溫進(jìn)行10分鐘。
在70eV和源溫度為180°C下通過電子轟擊獲得進(jìn)入質(zhì)譜儀的分子的離子化。
通過將所獲得的實(shí)驗(yàn)離子光譜與NIST光譜數(shù)據(jù)庫比較來鑒定目的化合物。
所述分析關(guān)注動(dòng)物發(fā)情周期期間以及更特別地發(fā)情前期階段和發(fā)情階段期間發(fā)生變化的分子。
圖I示出如何鑒定目的分子。通過時(shí)間標(biāo)度在色譜圖的右側(cè)顯示了周期的不同階段。五角星表明排卵時(shí)間。其上有星號(hào)的峰對應(yīng)于對該階段非特異性的化合物，這是因?yàn)樗鼈冊谄渌麆?dòng)物發(fā)情后期階段也有發(fā)現(xiàn)；因此不選擇這些。其上有箭頭的峰對應(yīng)于大多數(shù)動(dòng)物的發(fā)情前期/發(fā)情期階段特異性化合物，無淪化合物被鑒定出(例如，圖I中的香豆素) 還是未被鑒定出(例如，圖I中其上標(biāo)有“NI”的峰)。
II-結(jié)果
I-分子的鑒定
約10種分子被鑒定為潛在的發(fā)情標(biāo)志物，這是由于它們存在于大多數(shù)母牛的發(fā)情前期和/或發(fā)情期階段。
通過將這些分子的離子光譜(實(shí)驗(yàn)的)與NIST光譜數(shù)據(jù)庫中的那些進(jìn)行比較，鑒定出其中的6種香豆素、6-氨基i^一烷、1，2- 二氯乙烯、角鯊烯、2- 丁酮和9-十八烯酸。 圖2A、2B、2C、2D、2E和2F將這些分子的實(shí)驗(yàn)離子光譜(a)與NIST數(shù)據(jù)庫的光譜(b)進(jìn)行了比較。
因此，在6頭母牛中的5頭中，在發(fā)情前期和/或發(fā)情期階段中，香豆素存在于第二次采集的母牛尿液中。在該采集物中，它與其他分子被一起鑒定，但是目前未鑒定出所有的分子。然而，可在所分析的6頭母牛中5頭的發(fā)情前期中以及它們中2頭的發(fā)情期中鑒定出6-氨基十一烷。香豆素還在第一次采集中一頭母牛的發(fā)情期被發(fā)現(xiàn)。
在所研究的母牛中一半的發(fā)情前期和8頭母牛中3頭的發(fā)情期中進(jìn)行的第三次采集的分析中鑒定出了 1，2-二氯乙烯。還在第一發(fā)情期間的小母牛尿液中檢測到了該化合物的存在。
不論是哪一次采集，角鯊烯是經(jīng)鑒定的在發(fā)情前期/發(fā)情期階段中最常發(fā)現(xiàn)的分子。令人感興趣的是，在如上定義的階段中的尿液中以及在陰道粘液(母牛發(fā)情特異性生物流體)中都觀測到該分子。
9-十八烯酸是脂肪酸，其在期望階段的一些尿液(盡管頻率少于角鯊烯)中和陰道粘液中也都有所發(fā)現(xiàn)。
在所采集的母牛陰道粘液中也幾乎都鑒定出了 2-丁酮。
2-組合物的制備及提供
使用在市場上可購得的3種分子(香豆素、角鯊烯和1，2-二氯乙烯)制備在下述實(shí)施例中所使用的組合物。
為了生產(chǎn)組合物，所使用的賦形劑為甘油/水溶液(50/50，體積/體積)。同樣的賦形劑被用作對照溶液(溶液T)。
2-1-溶液 A
溶液A包含終濃度為25pg/ml的香豆素。一開始，將市售香豆素在乙醇中稀釋至終濃度為12. 5mg/ml，之后在乙醇溶液中連續(xù)進(jìn)行2次100倍稀釋以使獲得12. 5ng/ml濃度的母溶液A。將I毫升該最后稀釋物在499ml的賦形劑中稀釋以獲得最終溶液A。
2-2-溶液 B
溶液B包含總濃度為25pg/ml的角鯊烯和1，2_ 二氯乙烯的混合物。以如上相同的方法，在Iml乙醇中溶解12. 5mg市售化合物以得到12. 5mg/ml的母溶液B。將這些母溶液在乙醇中連續(xù)23次稀釋1000倍以達(dá)到濃度為12. 5ng/ml，最后在賦形劑中稀釋以得到最終溶液B。
2-3-溶液 A+B
通過在498ml賦形劑中稀釋Iml母溶液A和B (12. 5ng/ml)得到溶液A+B。
2-4-提供
所述溶液以噴霧的形式(用于美容的噴霧器中)提供，該噴霧器由鋁制得，鋁的兩側(cè)是中性涂層，該涂層用于農(nóng)業(yè)食品行業(yè)以避免干擾物質(zhì)的釋放。這樣的提供使得能夠?qū)Ｌ峁┙M合物同時(shí)限制性質(zhì)上非常易揮發(fā)的活性分子(即目的信息素)的損失。實(shí)際上， 其可直接沉積進(jìn)入動(dòng)物的鼻孔，從而接近靶標(biāo)(即神經(jīng)系統(tǒng))。因此，通過非侵入性方法，使用噴霧器使得能夠限制活性分子的損失，以控制遞送至動(dòng)物的劑量并且盡可能接近靶標(biāo)。
或者，還可以將溶液以在動(dòng)物會(huì)嗅和/或舔的杯子中的形式提供。在采集公牛精液的情形下，還可使用溶液涂抹至須與其交配的母?；蛩迷嚽樾蟮纳称?。
實(shí)施例I
I-材料與方法
I-動(dòng)物
第一研究涉及一組10頭Prim荷斯坦或諾曼底(Normande)公牛,4至5. 5歲。這些動(dòng)物從2至3月齡的“動(dòng)物受精”部門募集，并且之后從未與母牛接觸。它們一直被關(guān)在單獨(dú)的欄中(測試前期或生產(chǎn)期)或者為同一年齡和性別的4至6只動(dòng)物的組(結(jié)束期)。 在測試之前和期間，測試動(dòng)物的食物和圈養(yǎng)條件總是相同的。
測試之前，根據(jù)其性欲(基于測試前在配種室中所觀察的其行為定義)，將公牛分為2組。組I對應(yīng)于具有“標(biāo)準(zhǔn)”性欲的動(dòng)物，即其反應(yīng)和射精時(shí)間與所有種公牛的那些一致。具有“低性欲”的組2由以下種畜組成在對試情畜顯示出興趣并射精之前被視為“很慢”或“非常慢”。2-所使用的溶液在本實(shí)施例I中，測試溶液B。包含所選分子的溶液(表I中的溶液B)以噴霧器中的實(shí)驗(yàn)噴霧的形式提供。 僅使用用于配制溶液B中活性分子溶液的賦形劑得到對照版本(表I中的溶液 T)。
除了在采集開始時(shí)對實(shí)施處理負(fù)責(zé)的人之外，噴霧器孔代號(hào)(1，2)的含義對養(yǎng)牛人來說是未知的。
3-測試的一般安排溶液的分配
下表I列出了每組公牛所進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)。
測試共持續(xù)6周。僅同一人被授權(quán)在公牛的鼻孔中噴灑溶液。
在采集時(shí)間表中，第一個(gè)2周被用于訓(xùn)練公牛，穩(wěn)定精子儲(chǔ)量和評估個(gè)體的生產(chǎn)潛力。它們使得能夠確保2組之間分配的針對性在由反應(yīng)和射精時(shí)間評估的性欲方面有顯著差異以及生產(chǎn)參數(shù)之間沒有差異。
接下來的4周構(gòu)成實(shí)際實(shí)驗(yàn)階段，使用拉丁方編制程序每組以對照和處理交替提供，并且每頭公牛也是自己的對照。
在2周的適應(yīng)期間，公牛僅接受包含賦形劑的對照噴霧以每個(gè)鼻孔一次噴霧的比率進(jìn)行。之后，根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案中它們的任務(wù)，使動(dòng)物接受對照噴霧或?qū)嶒?yàn)噴霧。
由于所使用的分子非常具有揮發(fā)性，為了使采集室的氣氛不會(huì)充滿活性分子，采集總是從“對照”組開始。當(dāng)所有動(dòng)物到達(dá)配種室時(shí)，它們接受處理，其在每個(gè)組內(nèi)隨機(jī)進(jìn)行。
表I :成年公牛測試的一般安排
權(quán)利要求
1.包含至少一種母牛發(fā)情特異性揮發(fā)性分子的組合物用以改善公牛生殖功能的用途， 其特征在于所述分子選自香豆素、角鯊烯、6-氨基十一烷、2-丁酮、9-十八烯酸和1，2_ 二氯乙烯。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物用途，其用以改善公牛的性欲。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物用途，其用以改善公牛的精液產(chǎn)生。
4.根據(jù)權(quán)利要求I至3中任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于所述組合物以至少包含作為揮發(fā)性分子溶劑之甘油的溶液形式提供。
5.根據(jù)權(quán)利要求I至4中任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于所述組合物中發(fā)情特異性揮發(fā)性分子的總濃度為5pg/mL至100pg/mL。
6.根據(jù)權(quán)利要求I至4中任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于所述組合物中發(fā)情特異性揮發(fā)性分子的總濃度為2. 5pg/mL至5pg/mL。
7.根據(jù)權(quán)利要求I至4中任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于所述組合物中發(fā)情特異性揮發(fā)性分子的總濃度為100pg/mL至500pg/mL。
8.根據(jù)權(quán)利要求I至5中任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于所述組合物中發(fā)情特異性揮發(fā)性分子的濃度至少等于25pg/mL, +/-5%。
9.根據(jù)權(quán)利要求I至8中任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于使所述組合物保持在公牛鼻孔的周圍從而使所述公牛能吸入所述組合物。
10.根據(jù)權(quán)利要求I至9中任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于所述組合物以噴霧的形式提供從而能被噴至公牛的鼻孔中。
11.根據(jù)權(quán)利要求I至10中任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于將所述組合物提供給公牛后直接進(jìn)行與雌性交配或采集精液。
12.根據(jù)權(quán)利要求I至11中任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于每次精液采集之前或每次交配之前將所述組合物提供給公牛。
13.設(shè)計(jì)用于公牛以改善其生殖功能的組合物，其特征在于所述組合物包含至少一種選自以下的母牛發(fā)情特異性揮發(fā)性分子香豆素、角鯊烯、6-氨基十一烷、2- 丁酮、9-十八烯酸和I，2-二氯乙烯。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的組合物，其特征在于所述組合物包含甘油作為所述揮發(fā)性分子的溶劑。
15.根據(jù)權(quán)利要求13或14中任一項(xiàng)所述的組合物，其特征在于所述組合物包含使所述組合物能夠噴霧所需的賦形劑。
16.根據(jù)權(quán)利要求13至15中任一項(xiàng)所述的組合物，其特征在于所述母牛發(fā)情特異性揮發(fā)性分子的總濃度為5pg/mL至100pg/mL。
17.根據(jù)權(quán)利要求13至15中任一項(xiàng)所述的組合物，其特征在于所述母牛發(fā)情特異性揮發(fā)性分子的總濃度為2. 5pg/mL至5pg/mL。
18.根據(jù)權(quán)利要求13至15中任一項(xiàng)所述的組合物，其特征在于所述母牛發(fā)情特異性揮發(fā)性分子的總濃度為100pg/mL至500pg/mL。
19.根據(jù)權(quán)利要求13至16中任一項(xiàng)所述的組合物，其特征在于所述母牛發(fā)情特異性揮發(fā)性分子的濃度至少等于25pg/mL, +/-5%。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含至少一種母牛發(fā)情特異性揮發(fā)性分子的組合物用以改善公牛生殖功能的用途。特別地，根據(jù)本發(fā)明的組合物使得不僅能夠作用于公牛的性欲，還能夠作用于公牛的精液產(chǎn)生。優(yōu)選地，所使用的組合物包含至少一種選自以下的分子香豆素、角鯊烯、6-氨基十一烷、2-丁酮、9-十八烯酸和1，2-二氯乙烯。
文檔編號(hào)A61K45/06GK102939057SQ201180017464
公開日2013年2月20日 申請日期2011年3月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月30日
發(fā)明者帕特里夏·勒梅盧爾, 克里斯特勒·勒當(dāng)維克, 帕特里斯·安布洛, 菲利普·舍米諾, 克里斯蒂娜·布里昂, 奧利維爾·熱拉爾 申請人:國家農(nóng)藝研究院, 動(dòng)物繁殖和人工授精農(nóng)業(yè)合作社全國聯(lián)盟