專利名稱：銅綠假單胞菌g血清型脂多糖抗體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及銅綠假單胞菌G血清型脂多糖抗體及其應(yīng)用。更具體而言，本發(fā)明涉及可特異性結(jié)合銅綠假單胞菌菌株G血清型脂多糖的抗體、以及各自包含任何所述抗體的藥物組合物、用于銅綠假單胞菌感染的診斷劑和銅綠假單胞菌檢測試劑盒。
背景技術(shù)：
銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一種廣泛并主要分布在自然環(huán)境(如土壤和水)中的革蘭氏陰性需氧桿菌。銅綠假單胞菌是一種通常不引起健康受試者致病的非病原細菌，所述健康受試者對銅綠假單胞菌具有適度的抗體效價和足夠的免疫功能。然 而，一旦體弱患者感染了銅綠假單胞菌，銅綠假單胞菌可引起嚴重的癥狀，其可導(dǎo)致所述患者死亡。為此，銅綠假單胞菌作為醫(yī)院感染和機會感染的主要病原菌已經(jīng)引起了關(guān)注，因此，預(yù)防和治療銅綠假單胞菌感染已經(jīng)是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的重要問題。為預(yù)防或治療銅綠假單胞菌感染，已經(jīng)主要使用了抗生素或合成抗細菌劑。然而，銅綠假單胞菌對這些藥物產(chǎn)成了抗藥性，因此，這些藥物在很多情況下不會提供足夠的治療作用。具體來說，對使用抗生素等治療耐多藥銅綠假單胞菌(MDRP)的感染是很難的，并且有局限性。為此，作為其替代方法，已經(jīng)開始進行使用免疫球蛋白制劑的治療。同時，已經(jīng)檢驗了使用銅綠假單胞菌的抗體來預(yù)防或治療銅綠假單胞菌感染。例如，已經(jīng)開發(fā)了各自特異性結(jié)合具體血清型銅綠假單胞菌菌株的抗體(專利文獻1-5，非專利文獻I和2)。然而，到目前為止開發(fā)的銅綠假單胞菌抗體在銅綠假單胞菌感染的預(yù)防或治療中尚不能提供足夠的作用。引文列表專利文獻專利文獻I日本未經(jīng)審查的專利申請公開文本平成6-178688專利文獻2日本未經(jīng)審查的專利申請公開文本平成6-178689專利文獻3日本未經(jīng)審查的專利申請公開文本平成7-327677專利文獻4國際公開文本W(wǎng)02004/101622專利文獻5國際公開文本W(wǎng)02006/084758非專利文獻非專利文獻IThe Journal of Infectious Diseases, 152，6，1985，1290-1299。非專利文獻2Journal of General Microbiology, 133，1987，3581-3590。

發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問題鑒于上述情況做出本發(fā)明，并且本發(fā)明的一個目標(biāo)是提供一種具有對銅綠假單胞菌的優(yōu)良抗細菌活性的新型抗體。本發(fā)明的一個主要目標(biāo)是提供一種可特異性結(jié)合銅綠假單胞菌菌株G血清型脂多糖的抗體。技術(shù)方案為實現(xiàn)上述目標(biāo)，本發(fā)明使用了下述方法。首先，從慢性銅綠假單胞菌肺部感染的囊性纖維化患者和健康志愿者采集血液樣本。借助如下手段確定具有高比例的對脂多糖(下文中有時簡稱為“LPS”)特異的成漿細胞的供體樣本(I)FACS分析，其測定血液循環(huán)中成漿細胞和漿細胞的量；(2) ELISP0T分析，其測定血液循環(huán)中的細胞量，所述細胞產(chǎn)生對具體LPS抗原特異的抗體；以及(3) ELISA分析，其測定存在或不存在對具體LPS抗原特異的免疫球蛋白。接下來，由這樣確定的供體樣本制備識別LPS的抗體。具體而言，通過染色⑶19、⑶38、A輕鏈和死細胞 來選擇活成漿細胞。在所選出的成漿細胞上，通過包含多重重疊延伸PT-PCR和后續(xù)巢式PCR的兩步PCR，將從相同B細胞獲得編碼重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL)的DNA序列配對(圖I )。接下來，將擴增的DNA插入篩選載體中，并隨后轉(zhuǎn)化到大腸桿菌(Escherichia coli)中。從所述大腸桿菌純化出擴增載體集合。將所獲得的抗體庫在動物培養(yǎng)細胞中表達。通過ELISA篩選編碼可結(jié)合純化的LPS分子的抗體的克隆，并選擇LPS特異的克隆。隨后，測定所選克隆的堿基序列。之后，對由此獲得的克隆所編碼的抗體檢測其多種活性、其血清型特異性以及抗原表位。作為結(jié)果，發(fā)現(xiàn)了所確定的抗體可結(jié)合銅綠假單胞菌G血清型LPS，并且在體外和體內(nèi)具有優(yōu)良的抗細菌活性。具體而言，本發(fā)明涉及結(jié)合銅綠假單胞菌G血清型LPS的抗體，其顯示出優(yōu)良的抗細菌活性。本發(fā)明也涉及該抗體的應(yīng)用。更具體而言，本發(fā)明提供了[I] 一種抗體，其可識別銅綠假單胞菌的脂多糖的B帶LPS，并且其實質(zhì)上可與G血清型銅綠假單胞菌菌株表面結(jié)合，但實質(zhì)上不與A、B、C、D、E、F、H、I和M血清型銅綠假單胞菌菌株的任一表面分結(jié)合。[2]條款I(lǐng)所述的抗體，其具有對G血清型銅綠假單胞菌菌株的調(diào)理素活性。[3]條款2所述的抗體，其中對ATCC 33354標(biāo)識的銅綠假單胞菌菌株的調(diào)理素活性的EC50是0. 5 ii g/ml或更小。[4]條款2所述的抗體，其中對ATCC 27584標(biāo)識的銅綠假單胞菌菌株的調(diào)理素活性的EC50是g/ml或更小。[5]條款1-4中任一項所述的抗體，其具有對G血清型銅綠假單胞菌菌株的凝集活性。[6]條款5所述的抗體，其中對ATCC 27584標(biāo)識的銅綠假單胞菌菌株的單位量(u g) IgG的凝集效價是100或更大。[7]條款1-6中任一項所述的抗體，其對G血清型銅綠假單胞菌菌株的全身性感染具有抗細菌作用。[8]條款7所述的抗體，其中對全身性感染ATCC 27584標(biāo)識的銅綠假單胞菌菌株的中性粒細胞減少癥小鼠模型的抗細菌作用的ED50不超過青霉酮(Venilon)的ED50的1/100。[9]具有下述(a)- (d)特征中任一項的抗體(a)包含輕鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO: 1-3中描述的氨基酸序列或在SEQ ID N0:l_3中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入，以及重鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO:4-6中描述的氨基酸序列或在SEQ ID N0:4_6中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入；(b)包含輕鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO:9-11中描述的氨基酸序列或在SEQ ID N0:9_ll中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入，以及
重鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO: 12-14中描述的氨基酸序列或在SEQ IDNO: 12-14中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入；(C)包含輕鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO: 17-19中描述的氨基酸序列或在SEQ IDNO: 17-19中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入，以及重鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID N0:20_22中描述的氨基酸序列或在SEQ IDNO: 20-22中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入；以及(d)包含輕鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID N0:25_27中描述的氨基酸序列或在SEQ IDNO: 25-27中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入，以及重鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID N0:28_30中描述的氨基酸序列或在SEQ IDNO: 28-30中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入。[10]具有下述(a) - (d)特征中任一項的抗體(a)包含輕鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO:7中描述的氨基酸序列或在SEQID N0:7中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入，以及重鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO:8中描述的氨基酸序列或在SEQID N0:8中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入；(b)包含輕鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO: 15中描述的氨基酸序列或在SEQID NO: 15中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入，以及重鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO: 16中描述的氨基酸序列或在SEQID NO: 16中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入；(C)包含輕鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO:23中描述的氨基酸序列或在SEQID N0:23中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入，以及重鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO: 24中描述的氨基酸序列或在SEQID NO: 24中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入；以及(d)包含輕鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO:31中描述的氨基酸序列或在SEQID N0:31中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入，以及重鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO: 32中描述的氨基酸序列或在SEQID NO: 32中描 述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入。[11]包含抗體的輕鏈或輕鏈可變區(qū)的肽，該肽具有下述(a)_ (d)特征中任一項(a)包含在SEQ ID NO: 1-3中描述的氨基酸序列或在SEQ IDNO: 1-3中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入；(b)包含在SEQ ID N0:9_ll中描述的氨基酸序列或在SEQ IDN0:9_11中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入；(c)包含在SEQ ID NO: 17-19中描述的氨基酸序列或在SEQ IDN0:17-19中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入；以及(d)包含在SEQ ID NO: 25-27中描述的氨基酸序列或在SEQ IDN0:25-27中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入。[12]包含抗體的輕鏈或輕鏈可變區(qū)的肽，該肽具有下述(a)_ (d)特征中任一項(a)包含在SEQ ID NO:7中描述的氨基酸序列或在SEQ ID NO:7中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入；(b)包含在SEQ ID NO: 15中描述的氨基酸序列或在SEQ IDN0:15中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入；(c)包含在SEQ ID NO: 23中描述的氨基酸序列或在SEQ IDN0:23中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入；以及缺失、添加和/或插入。[13]包含抗體的重鏈或重鏈可變區(qū)的肽，該肽具有下述(a)_ (d)特征中任一項(a)包含在SEQ ID NO:4_6中描述的氨基酸序列或在SEQ IDN0:4_6中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入；(b)包含在SEQ ID NO: 12-14中描述的氨基酸序列或在SEQ IDN0:12-14中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入；(c)包含在SEQ ID NO: 20-22中描述的氨基酸序列或在SEQ IDN0:20-22中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入；以及(d)包含在SEQ ID NO: 28-30中描述的氨基酸序列或在SEQ IDN0:28-30中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入。[14]包含抗體的重鏈或重鏈可變區(qū)的肽，該肽具有下述(a)_ (d)特征中任一項(a)包含在SEQ ID NO:8中描述的氨基酸序列或在SEQ ID NO:8中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入；
(b)包含在SEQ ID NO: 16中描述的氨基酸序列或在SEQ IDN0:16中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入；(c)包含在SEQ ID NO: 24中描述的氨基酸序列或在SEQ IDN0:24中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入；以及缺失、添加和/或插入；[15]在下述(a)_ (d)中任一項所述的抗體中，可與G血清型銅綠假單胞菌菌株的脂多糖B帶LPS中的表位結(jié)合的抗體(a)含有包括在SEQ ID N0:7中描述的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包括在SEQN0:8中描述的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)的抗體；(b)含有包括在SEQ ID NO: 15中描述的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包括在SEQ NO: 16中描述的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)的抗體；(C)含有包括在SEQ ID N0:23中描述的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包括在SEQNO:24中描述的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)的抗體；以及含有包括在SEQ ID NO:31中描述的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包括在SEQ NO:32中描述的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)的抗體。[16]編碼根據(jù)條款1-15中任一項的抗體或肽的DNA。[17]產(chǎn)生根據(jù)條款1-10和15中任一項的抗體的雜交瘤細胞。[18]用于與銅綠假單胞菌相關(guān)疾病的藥物組合物，所述藥物組合物包含根據(jù)條款1-10和15中任一項的抗體；以及任選至少一種可藥用載體和/或稀釋劑。[19]根據(jù)條款18所述的藥物組合物，其中與銅綠假單胞菌相關(guān)的疾病是由銅綠假單胞菌感染引起的全身性感染疾病。[20]根據(jù)條款18所述的藥物組合物，其中與銅綠假單胞菌相關(guān)的疾病是由銅綠假單胞菌感染引起的肺部感染疾病。[21]用于檢測銅綠假單胞菌的診斷劑，所述診斷劑包含根據(jù)條款1、9、10和15中任一項所述的抗體。[22]用于檢測銅綠假單胞菌的試劑盒，所述試劑盒包含根據(jù)條款1、9、10和15中任一項所述的抗體。有益效果本發(fā)明提供了可結(jié)合銅綠假單胞菌G血清型LPS并顯示出優(yōu)良的抗細菌活性的抗體。本發(fā)明的抗體可對銅綠假單胞菌的全身性感染或肺部感染顯示出優(yōu)良的調(diào)理素作用和優(yōu)良的抗細菌作用。本發(fā)明的抗體可制備為人抗體，因此是高度安全的。同時，通過結(jié)合本發(fā)明的抗體可制備出對70%或更多臨床分離的菌株有效并且顯示出強抗細菌活性的革命性多克隆抗體。本發(fā)明抗體的應(yīng)用使得可有效治療或預(yù)防由銅綠假單胞菌(包括耐多藥銅綠假單胞菌)引起的感染，例如HAP/VAP、菌血癥、敗血癥以及燒傷傷口感染。


圖I圖I是顯示了實施兩步PCR以獲得編碼本發(fā)明抗體的DNA的圖。圖2圖2是顯示了用于將編碼重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL)的序列進行配對的00-VP-002載體的圖，所述重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)來自于相同B細胞。
具體實施例方式本發(fā)明提供了一種可結(jié)合銅綠假單胞菌G血清型LPS的新型抗體。本發(fā)明的“抗體”包括免疫球蛋白的所有類別和所有子類。所述“抗體”包括多克隆抗體和單克隆抗體，也包括抗體功能片段的形式。“多克隆抗體”指包含對不同表位的不同種類抗體的抗體制齊U。同時，“單克隆抗體”指的是由基本上同質(zhì)的抗體群體獲得的抗體(包含抗體片段)。與多克隆抗體相比，單克隆抗體可識別抗原上的單個決定簇。本發(fā)明的多細胞抗體還包括能夠識別抗原上多個抗表位的多個單克隆抗體的結(jié)合物。本發(fā)明的抗體是分離的抗體，也就是說，從天然環(huán)境中的組分分離和/或回收的抗體。本發(fā)明抗體結(jié)合的“脂多糖(LPS)”是革蘭氏陰性菌的細胞壁外膜的組分，是由脂 質(zhì)和多糖形成的物質(zhì)(糖酯)。其糖鏈?zhǔn)怯杀环Q為核心多糖(或核心寡糖)的部分和被稱為0抗原(0側(cè)鏈多聚糖)的部分形成。“A帶LPS”是形成0抗原的其多糖具有下述結(jié)構(gòu)的LPS。具體而言，在結(jié)構(gòu)中，各自由“3)-a-D-鼠李糖-(I — 2)-a-D-鼠李糖-(I — 3) - a-D-鼠李糖_(1”組成的單元重復(fù)出現(xiàn)。在這些單元中，D-鼠李糖由a-1,2鍵和a-1,3鍵連接。其結(jié)構(gòu)式在下文示出；然而，通過a-1，2鍵連接的D-鼠李糖和通過a-1,3鍵連接的D-鼠李糖的支鏈模式不限于下文所示的那些。[化學(xué)式I]
權(quán)利要求
1.一種抗體，所述抗體可識別銅綠假單胞菌脂多糖的B帶LPS，并且實質(zhì)上可與G血清型銅綠假單胞菌菌株表面結(jié)合，但實質(zhì)上不與A、B、C、D、E、F、H、I和M血清型銅綠假單胞菌菌株任一表面結(jié)合。
2.權(quán)利要求I的抗體，其具有對G血清型銅綠假單胞菌菌株的調(diào)理素活性。
3.權(quán)利要求2的抗體，其中對ATCC33354標(biāo)識的銅綠假單胞菌菌株的調(diào)理素活性的EC50 是 O. 5 μ g/ml 或更小。
4.權(quán)利要求2的抗體，其中對ATCC27584標(biāo)識的銅綠假單胞菌菌株的調(diào)理素活性的EC50是3μ g/ml或更小。
5.權(quán)利要求1-4中任一項的抗體，其具有對G血清型銅綠假單胞菌菌株的凝集活性。
6.權(quán)利要求5的抗體，其中對ATCC27584標(biāo)識的銅綠假單胞菌菌株的單位量(μ g)IgG的凝集效價是100或更大。
7.權(quán)利要求1-6中任一項的抗體，其具有對G血清型銅綠假單胞菌菌株全身性感染的抗細囷效果。
8.權(quán)利要求7的抗體，其中對全身性感染由ATCC27584標(biāo)識的銅綠假單胞菌菌株的中性粒細胞減少癥小鼠模型的抗細菌作用的ED50不大于青霉酮的EC50的1/100。
9.具有下述(a)- (d)特征中的任一項的抗體 (a)包含 輕鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO: 1-3中描述的氨基酸序列或在SEQ ID ΝΟ:1_3中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入，以及 重鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO:4-6中描述的氨基酸序列或在SEQ ID N0:4_6中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入； (b)包含 輕鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID ΝΟ:9-11中描述的氨基酸序列或在SEQ ID ΝΟ:9_11中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入，以及 重鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO: 12-14中描述的氨基酸序列或在SEQ ID NO: 12-14中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入； (C)包含 輕鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO: 17-19中描述的氨基酸序列或在SEQ ID NO: 17-19中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入，以及 重鏈可變區(qū)間，其包含在SEQ ID NO:20-22中描述的氨基酸序列或在SEQ ID NO:20-22中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入；以及 Cd)包含 輕鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO:25-27中描述的氨基酸序列或在SEQ ID NO: 25-27中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入，以及 重鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO: 28-30中描述的氨基酸序列或在SEQ ID NO: 28-30中描述的氨基酸序列并且其中至少ー個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入。
10.具有下述(a)- (d)特征中任ー項的抗體 Ca)包含 輕鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO: 7中描述的氨基酸序列或在SEQID NO: 7中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入，以及 重鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO:8中描述的氨基酸序列或在SEQID NO:8中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入； (b)包含 輕鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO: 15中描述的氨基酸序列或在SEQID NO: 15中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入，以及 重鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO: 16中描述的氨基酸序列或在SEQID NO: 16中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入； (C)包含 輕鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO: 23中描述的氨基酸序列或在SEQID NO: 23中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入，以及 重鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO: 24中描述的氨基酸序列或在SEQID NO: 24中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入；以及Cd)包含 輕鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO:31中描述的氨基酸序列或在SEQID NO:31中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入，以及 重鏈可變區(qū)，其包含在SEQ ID NO: 32中描述的氨基酸序列或在SEQID NO: 32中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入。
11.包含抗體的輕鏈或輕鏈可變區(qū)的肽，其具有下述(a)-(d)特征中任一項 (a)包含在SEQID NO: 1-3中描述的氨基酸序列或在SEQ IDNO: 1_3中描述的氨基酸序列并且其中至少ー序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入； (b)包含在SEQID NO:9-ll中描述的氨基酸序列或在SEQ IDNO:9_ll中描述的氨基酸序列并且其中至少ー個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入； (c)包含在SEQID NO: 17-19中描述的氨基酸序列或在SEQ IDNO: 17-19中描述的氨基酸序列并且其中至少ー個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入；以及 (d)包含在SEQID NO: 25-27中描述的氨基酸序列或在SEQ IDNO: 25-27中描述的氨基酸序列并且其中至少ー個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入。
12.包含抗體的輕鏈或輕鏈可變區(qū)的肽，其具有下述(a)-(d)特征中任一項 (a)包含在SEQID NO:7中描述的氨基酸序列或在SEQ ID NO:7中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入； (b)包含在SEQID NO: 15中描述的氨基酸序列或在SEQ IDNO: 15中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入；(C)包含在SEQ ID NO:23中描述的氨基酸序列或在SEQ ID NO:23中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入；以及 (d)包含在SEQ ID NO:31中描述的氨基酸序列或在SEQ ID NO:31中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入。
13.包含抗體的重鏈或重鏈可變區(qū)的肽，其具有下述(a)_(d)特征中任一項 (a)包含在SEQID NO:4-6中描述的氨基酸序列或在SEQ IDNO:4_6中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入； (b)包含在SEQID NO: 12-14中描述的氨基酸序列或在SEQ IDNO: 12-14中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入；(c)包含在SEQID NO: 20-22中描述的氨基酸序列或在SEQ IDNO: 20-22中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入；以及 (d)包含在SEQID NO: 28-30中描述的氨基酸序列或在SEQ IDNO: 28-30中描述的氨基酸序列并且其中至少一個序列的一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入。
14.包含抗體的重鏈或重鏈可變區(qū)的肽，其具有下述(a)-(d)特征中任一項 (a)包含在SEQID NO:8中描述的氨基酸序列或在SEQ ID NO:8中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入； (b)包含在SEQID NO: 16中描述的氨基酸序列或在SEQ IDNO: 16中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入； (c)包含在SEQID NO: 24中描述的氨基酸序列或在SEQ IDNO: 24中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入；以及 (d)包含在SEQID NO: 32中描述的氨基酸序列或在SEQ IDN0:32中描述的氨基酸序列并且其中一個或多個氨基酸被置換、缺失、添加和/或插入。
15.在以下(a)至(d)中的任一項所述的抗體中，可結(jié)合G血清型銅綠假單胞菌菌株的脂多糖B帶LPS中的表位的抗體 (a)含有包括在SEQID NO:7中描述的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包括在SEQ N0:8中描述的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)的抗體； (b)含有包括在SEQID NO: 15中描述的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包括在SEQ NO: 16中描述的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)的抗體； (c)含有包括在SEQID NO:23中描述的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包括在SEQ NO:24中描述的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)的抗體；以及 (d)含有包括在SEQID N0:31中描述的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包括在SEQ NO:32中描述的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)的抗體。
16.編碼權(quán)利要求1-15中任一項的抗體或肽的DNA。
17.—種產(chǎn)生權(quán)利要求1-10和15中任一項的抗體的雜交瘤。
18.用于與銅綠假單胞菌相關(guān)的疾病的藥物組合物，所述藥物組合物包含 權(quán)利要求1-10和15中任一項的抗體；以及任選 至少一種可藥用載體和/或稀釋劑。
19.權(quán)利要求18的藥物組合物，其中與銅綠假單胞菌相關(guān)的疾病是由銅綠假單胞菌感染引起的全身性感染疾病。
20.權(quán)利要求18的藥物組合物，其中與銅綠假單胞菌相關(guān)的疾病是由銅綠假單胞菌感染引起的肺部感染疾病。
21.用于檢測銅綠假單胞菌的診斷劑，所述診斷劑包含權(quán)利要求1、9、10和15中任一項的抗體。
22.用于檢測銅綠假單胞菌的試劑盒，所述試劑盒包含權(quán)利要求1、9、10和15中任一項的抗體。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種具有對銅綠假單胞菌的優(yōu)良抗細菌活性的新型抗體。通過使用從患有慢性銅綠假單胞菌肺部感染的囊性纖維化患者獲得的成漿細胞作為起始原料，成功地獲得了可與G血清型銅綠假單胞菌菌株LPS結(jié)合且在體外和體內(nèi)具有優(yōu)良的抗細菌活性的抗體。
文檔編號A61K39/395GK102858977SQ20118001026
公開日2013年1月2日 申請日期2011年2月18日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月18日
發(fā)明者田中二朗, P·S·安德森, 奧富隆文, 稻葉常良, 大冢圭子, 赤羽宏友, 星名由佳利, 長曽宏, 熊谷正志 申請人:明治制果藥業(yè)株式會社, 西福根有限公司