專利名稱：一種禽用油乳劑疫苗及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種疫苗及其制備方法，尤其是一種禽用油乳劑疫苗及其通過罐體恒流乳化的制備方法。
背景技術(shù)：
油乳劑滅活疫苗是獸用生物制品中的一種常用劑型，以其免疫刺激持續(xù)、免疫保護(hù)期長的特點(diǎn)在疫苗的應(yīng)用方面有著不可替代的作用，但油乳劑滅活疫苗在制作過程中由于工藝配方、溫度差異等因素的影響，往往造成油乳劑滅活疫苗的不穩(wěn)定，影響了滅活疫苗的實(shí)際應(yīng)用。由于油乳劑疫苗具有較大的油水界面，屬于熱力學(xué)不穩(wěn)定體系。其不穩(wěn)定性主要表現(xiàn)有分層、破裂、轉(zhuǎn)型和敗壞，以分層、破裂最為常見，是疫苗生產(chǎn)者長期存在的一個(gè)難題。佐劑制作和乳化過程的不合理，或破乳后再乳化，均難以保證乳化效果。生產(chǎn)免疫性好、安全性高、易于使用、保存期長的油乳劑疫苗，需要控制合理的工藝流程和技術(shù)參數(shù)。油包水型油乳劑疫苗通常是將油相和水相(毒液)在乳化劑的作用下， 均質(zhì)乳化，形成穩(wěn)定的油包水型乳化體系。通常油乳劑疫苗的制備方法如下將生產(chǎn)用毒種用磷酸鹽緩沖溶液或生理鹽水稀釋一定倍數(shù)，接種于易感雞胚中，收獲胚液，濃縮滅活作為水相，水相油相按比例進(jìn)行乳化， 制成一種安全、穩(wěn)定、高效的滅活疫苗。影響油乳劑疫苗性狀的因素主要有，油相水相比例、乳化劑種類和比例以及乳化條件，而這三者之間是相互影響的?！?、油相水相比例。油包水劑型的油乳劑疫苗水相為分散性，水相比例大會(huì)使分散相液滴的界面膜不穩(wěn)定，容易出現(xiàn)破乳或轉(zhuǎn)型，影響疫苗的保存時(shí)間，而水相比例過小，會(huì)增加疫苗粘度，造成注射困難，不利于臨床應(yīng)用。二、乳化劑和助乳化劑的種類和比例。乳化劑均為表面活性劑，可降低乳化后形成內(nèi)向液滴而產(chǎn)生的自由能；助乳化劑可使油水兩相之間形成穩(wěn)定的界面膜，并有增粘、懸浮的作用。所以乳化劑選用比例不但影響疫苗性狀，而且影響疫苗的效價(jià)。三、乳化工藝條件。分為乳化時(shí)間、溫度和乳化剪切速度。在開始階段，攪拌促使小液滴的形成，繼續(xù)攪拌增加小液滴碰撞機(jī)會(huì)，持續(xù)過久攪拌，分散的小液滴會(huì)合并增大，甚至完全破乳；適宜的乳化溫度，乳液粘度適中，界面膜不易發(fā)生破裂，又有利于乳化劑水化作用；適中的剪切速度可以使油水相充分混合，剪切速度過高會(huì)將氣泡帶入體系，形成三相體系，使乳劑不穩(wěn)定。選擇適當(dāng)?shù)募羟兴俣龋狗稚⑾嘁旱蔚拇笮『途鶆蚨扰c乳化劑的比例相適應(yīng)，使疫苗性狀穩(wěn)定，粘度適宜，保存時(shí)間長，易于注射。此外，粘度對乳劑穩(wěn)定性的影響也不容忽略，通常粘度大的體系不容易分層，破裂，但是對于疫苗注射劑而言，粘度不宜太大，否則會(huì)給注射帶來不便，同時(shí)會(huì)引起動(dòng)物的過激反應(yīng)。因此要設(shè)法使較低粘度的乳液保持很好的粘度。
油乳劑滅活疫苗的穩(wěn)定性通過離心法(3000r/min離心15min)、定時(shí)保存法 (2-8°C放置1年不分層)、抗老化試驗(yàn)(37°C放置21天不分層)來檢測。事實(shí)上離心法檢測不分層的乳液，2-8°C定時(shí)保存檢測常有分層的現(xiàn)象。
油乳劑疫苗的穩(wěn)定性一直以來就是疫苗生產(chǎn)的難題，由于乳化不均勻，致使乳液的穩(wěn)定性不好，2-8°C極易分層，直接影響產(chǎn)品的質(zhì)量和效價(jià)。常用的乳化技術(shù)一是使用膠體磨，主要是通過轉(zhuǎn)速和齒間距來控制分散相液滴的半徑，膠體磨使用時(shí)調(diào)節(jié)麻煩，規(guī)模小，不易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)控制，而且多為敞開式非管線式操作， 不適于工業(yè)化的無菌生產(chǎn)。二是采取罐內(nèi)的均質(zhì)機(jī)進(jìn)行乳化，這種均質(zhì)機(jī)適用于實(shí)驗(yàn)室研究和小規(guī)模的生產(chǎn)，對于產(chǎn)業(yè)化時(shí)需要乳化量較大的情況，會(huì)出現(xiàn)局部剪切過度，導(dǎo)致體系破壞，很難達(dá)到均勻的乳化效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，提供一種能應(yīng)用于罐體批量生產(chǎn)的禽用油乳劑疫苗及其制備方法。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種禽用油乳劑疫苗，包括油相、水相，水相組成為濃縮的疫苗抗原、親水性表面活性劑，油相組成為白油、親油性表面活性劑、助乳化劑。所述濃縮的疫苗抗原為滅活的禽類病毒微生物，包括新城疫病毒、禽流感病毒、支氣管炎病毒、減蛋綜合征病毒、法氏囊病毒中的一種或任意幾種病毒的混合物。所述油乳劑疫苗的水油體積比為1 1.5-1 4(V/V)0所述親水性表面活性劑選自吐溫80，用量為依水相比例而定，占水相體積總量的 4% -6%。所述油乳劑疫苗水油比例為1 2 (V/V)，吐溫80用量為5% (V/V)。 所述親油性表面活性劑選自司盤80、司盤85中的一種，助乳化劑選自硬脂酸鋁。所述油相的白油、親油性表面活性劑、助乳化劑重量配比為94 6 2。上述的禽用油乳劑疫苗的制備方法，包括以下步驟(1)稱取處方量白油，加入親油性表面活性劑，攪拌均勻后加入助乳化劑，加熱使其充分混合均勻后，加入到第一乳化反應(yīng)釜中，降溫至35-40°C ；(2)打開第一乳化反應(yīng)釜的出料口閥門，開啟乳化機(jī)，乳化機(jī)的剪切轉(zhuǎn)速恒為 2500-3000r/min，同時(shí)開始從第一乳化反應(yīng)釜的進(jìn)料口加入按配比配好的水相，控制加水相的流速為0. 02-0. 15L/s，至水相加完；(3)乳化過程分為4個(gè)階段，每個(gè)階段保持恒定流速0. 4-0. 5L/s,管線式乳化機(jī)的剪切轉(zhuǎn)速為2500-3000r/min 第一階段，從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至上端進(jìn)料口，乳化時(shí)間為第一乳化反應(yīng)釜中所有物料按流速乳化1遍的時(shí)間；第二階段，從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至第二乳化反應(yīng)釜的上端進(jìn)料口，至第一乳化反應(yīng)釜中疫苗全部移入第二乳化反應(yīng)釜，停止乳化；第三階段，從第二乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至第一乳化反應(yīng)釜的上端進(jìn)料口，至第二乳化反應(yīng)釜中的疫苗全部移入第一乳化反應(yīng)釜后，停止乳化；第四階段，從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至上端進(jìn)料口，乳化時(shí)間為第一乳化反應(yīng)釜中所有物料按流速乳化2遍的時(shí)間。
步驟(2)中水相流速為0. 10L/s,乳化裝置的轉(zhuǎn)速恒定為2900r/min。步驟(3)中乳化過程中流速恒定為0. 5L/s，剪切轉(zhuǎn)速恒定為2900r/min。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明提供的油乳劑疫苗成熟的乳化生產(chǎn)工藝，用于油乳劑疫苗批量生產(chǎn)，通過外置乳化裝置的勻速剪切，持續(xù)控制乳液流過乳化裝置時(shí)的流速、溫度、剪切速度，進(jìn)行連續(xù)剪切，不流死角，同時(shí)菌液通過乳化反應(yīng)釜的置換過程避免流體的短路，使乳化更徹底。從而達(dá)到改善乳液粒徑的均一性和均勻度的目的，解決乳液保存中存在的穩(wěn)定性問題。通過合理的乳化生產(chǎn)過程和外置乳化裝置，解決了規(guī)模性無菌生產(chǎn)的批量生產(chǎn)問題，使乳化條件穩(wěn)定，不受產(chǎn)量的限制，使規(guī)模性乳化生產(chǎn)也能獲得穩(wěn)定的乳化體系?？赏瓿?00萬ml疫苗產(chǎn)量的批量生產(chǎn)，生產(chǎn)的疫苗2-8°C保存1年不分層。將乳液放于5°C、35°C溫度下，每12小時(shí)改變一次溫度，經(jīng)過12天進(jìn)行比較觀察，無分層現(xiàn)象。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明公開一種能應(yīng)用于罐體批量生產(chǎn)的禽用油乳劑疫苗及其制備方法，采用外置乳化裝置，連續(xù)進(jìn)行剪切，不留死角，同時(shí)毒液通過乳化反應(yīng)釜的置換過程避免流體的短路，使乳化更徹底。本發(fā)明所說的外置乳化裝置是由管線式乳化機(jī)和冷卻裝置組成，通過乳化機(jī)的高速剪切，完成乳化過程，獲得理想的乳化效果。油乳劑疫苗包括油相、水相，水相組成為濃縮的疫苗抗原、親水性表面活性劑，比例為 1 1.5-1 4% (V/V)，優(yōu)選 1 1.6(V/V),1 2 (V/V), 1 3(V/V)，親水性表面活性劑選自吐溫80，用量為依水相比例而定，占水相體積總量的4% -6% (V/V)，水相比例 1 1.6,1 2,1 3時(shí)，親水性表面活性劑用量分別為4%，5%，6%。油相組成為白油、 親油性表面活性劑、助乳化劑，重量配比為94 6 2，加熱充分混合攪勻，其混合過程中先加入親油性表面活性劑，再加助乳化劑。乳化工序具體步驟如下1、加水相。將油相加入到第一乳化反應(yīng)釜中，降溫至35_40°C后，打開第一乳化反應(yīng)釜出料口閥門，打開管線式乳化機(jī)開關(guān)，同時(shí)從第一乳化反應(yīng)釜進(jìn)料口加入水相，控制水相的加入速度為0. 08-0. 15L/s，優(yōu)選0. 10L/s,0. 12L/s，乳化裝置的溫度控制在30_35°C， 乳化裝置的轉(zhuǎn)速恒為2500-3000r/min，優(yōu)選2900r/min。2、乳化過程分為4個(gè)階段，每個(gè)階段保持流速0. 4-0. 5L/s,管線式乳化機(jī)的剪切轉(zhuǎn)速為2500-3000r/min，優(yōu)選2900r/min。第一階段，從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至上端進(jìn)料口，乳化時(shí)間為第一乳化反應(yīng)釜中所有物料按流速乳化1遍的時(shí)間； 第二階段，從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至第二乳化反應(yīng)釜的上端進(jìn)料口，至第一乳化反應(yīng)釜中疫苗全部移入第二乳化反應(yīng)釜，停止乳化；第三階段，從第二乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至第一乳化反應(yīng)釜的上端進(jìn)料口，至第二乳化反應(yīng)釜中的疫苗全部移入第一乳化反應(yīng)釜后，停止乳化；第四階段，從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至上端進(jìn)料口，乳化時(shí)間為第一乳化反應(yīng)釜中所有物料按流速乳化2遍的時(shí)間。乳化結(jié)束后，取IOml乳液，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，下層分離的水不超過0. 5ml為乳化合格。 優(yōu)化為步驟(2)中水相流速為0. lOL/s，乳化裝置的轉(zhuǎn)速恒定為2900r/min。步驟(3)中乳化過程中流速恒定為0. 5L/s，剪切轉(zhuǎn)速恒定為2900r/min。其中溫度和粘度直接影響乳液是否能勻速的流經(jīng)乳化裝置。保持流經(jīng)乳化裝置流體的粘度控制在2s以下(中華人民共和國獸用生物制品規(guī)程2000年版的測試方法)。實(shí)施例1制備200萬ml新城疫油乳劑滅活疫苗。將濃縮后的新城疫抗原63. 27萬ml，滅活后加吐溫-80 3. 33萬ml，備用。取 125. 51 萬ml (密度 0. 818g/ml，1026. 7kg)白油，先加司盤-80 6. 592 萬ml (密度為 0. 994g/ ml, 65. 5kg)，再加硬脂酸鋁21. 8kg，加熱120°C充分?jǐn)嚢柚寥芤和该?。加到第一乳化反?yīng)釜中，降溫至35°C時(shí)，打開乳化裝置，同時(shí)打開乳化裝置冷卻水使乳化裝置溫度35°C加入水相，水相流速為0. lOL/s，乳化裝置的剪切速度為2900r/min。水相加入后，開始乳化過程， 控制流速為0. 5L/s，乳化裝置轉(zhuǎn)速為2900r/min，第一階段，從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至上端進(jìn)料口，乳化60min，第二階段，從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至第二乳化反應(yīng)釜的上端進(jìn)料口，至第一乳化反應(yīng)釜中疫苗全部移入第二乳化反應(yīng)釜，停止乳化。第三階段，從第二乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至第一乳化反應(yīng)釜的上端進(jìn)料口，乳化至第二乳化反應(yīng)釜中的疫苗全部移入第一乳化反應(yīng)釜后，停止乳化。第四階段。從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至上端進(jìn)料口，乳化120分鐘，乳化結(jié)束。實(shí)施例2制備500萬ml減蛋綜合征油乳劑滅活疫苗。將濃縮后的減蛋綜合征抗原117. 5萬ml，滅活后加吐溫-80 7. 5萬ml，備用。取 353. 36 萬ml (密度 0. 818g/ml, 2890. 5kg)白油，先加司盤80 18. 56 萬ml (密度0. 994g/ml， 184. 5kg)，再加硬脂酸鋁61. 5kg，加熱120°C充分?jǐn)嚢柚寥芤和该?。加到第一乳化反?yīng)釜中，降溫至35°C時(shí)，打開乳化裝置，同時(shí)打開乳化裝置冷卻水使乳化裝置溫度35°C加入水相，水相流速為0. 15L/s，乳化裝置的剪切速度為2900r/min。水相加入后，開始乳化過程， 控制流速為0. 4L/s，乳化裝置轉(zhuǎn)速為2900r/min。第一階段，從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至上端進(jìn)料口，乳化160分鐘，第二階段，從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至第二乳化反應(yīng)釜的上端進(jìn)料口，至第一乳化反應(yīng)釜中疫苗全部移入乳化反應(yīng)釜二，停止乳化。第三階段，從第二乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至第一乳化反應(yīng)釜的上端進(jìn)料口，乳化至第二乳化反應(yīng)釜中的疫苗全部移入第一乳化反應(yīng)釜后，停止乳化。第四階段。從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至上端進(jìn)料口，乳化320分鐘。實(shí)施例3制備500萬ml禽流感油乳劑滅活疫苗。將濃縮后的禽流感抗原125萬ml，滅活后加吐溫80 5萬ml，備用。取353. 36萬 ml (密度 0. 818g/ml，2890. 5kg)白油，先加司盤 80 18. 56 萬 ml (密度 0. 994g/ml，184. 5kg)， 再加硬脂酸鋁61. 5kg，加熱120°C充分?jǐn)嚢柚寥芤和该?。加到第一乳化反?yīng)釜中，降溫至 40°C時(shí)，打開乳化裝置，同時(shí)打開乳化裝置冷卻水使乳化裝置溫度40°C加入水相，水相流速為0. 08L/S,乳化裝置的剪切速度為2900r/min。水相加入后，開始乳化過程，控制流速為 0. 5L/s，乳化裝置轉(zhuǎn)速為2900r/min。第一階段，從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至上端進(jìn)料口，乳化160min，第二階段，從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至第二乳化反應(yīng)釜的上端進(jìn)料口，至第一乳化反應(yīng)釜中疫苗全部移入乳化反應(yīng)釜二，停止乳化。第三階段，從第二乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至第一乳化反應(yīng)釜的上端進(jìn)料口，乳化至第二乳化反應(yīng)釜中的疫苗全部移入第一乳化反應(yīng)釜后，停止乳化。第四階段。從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至上端進(jìn)料口，乳化320分鐘。實(shí)施例4制備200萬法氏囊油乳劑滅活疫苗將濃縮的法氏囊抗原70. 5萬ml，滅活后加吐溫80 4. 5萬ml，備用。取106. 01萬 ml 白油(密度 0. 818g/ml，867. 15kg)，先加司盤80 5. 568萬ml (密度 0. 994g/ml，55. 35kg)， 再加硬脂酸鋁18. 45kg，加熱120°C充分?jǐn)嚢柚寥芤和该?。加到第一乳化反?yīng)釜中，降溫至 40°C時(shí)，打開乳化裝置，同時(shí)打開乳化裝置冷卻水使乳化裝置溫度40°C加入水相，水相流速為0. 08L/s,乳化裝置的剪切速度為2500r/min。水相加入后，開始乳化過程，控制流速為 0. 5L/s，乳化裝置轉(zhuǎn)速為2500r/min。第一階段，從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至上端進(jìn)料口，乳化160min，第二階段，從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至第二乳化反應(yīng)釜的上端進(jìn)料口，至第一乳化反應(yīng)釜中疫苗全部移入乳化反應(yīng)釜二，停止乳化。第三階段，從第二乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至第一乳化反應(yīng)釜的上端進(jìn)料口，乳化至第二乳化反應(yīng)釜中的疫苗全部移入第一乳化反應(yīng)釜后，停止乳化。第四階段。從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至上端進(jìn)料口，乳化320分鐘

實(shí)施例5制備200萬ml雞新城疫、減蛋綜合征二聯(lián)油乳劑滅活疫苗。將收獲的減蛋綜合征抗原25萬ml，濃縮至16. 7萬ml，雞新城疫抗原50萬ml，滅活后加吐溫-80 3. 3萬ml，備用。125. 51萬ml (密度0. 818g/ml, 1026. 7kg)白油，先加司盤-80 6. 592萬ml (密度為0. 994g/ml，65. 5kg)，再加硬脂酸鋁21. 8kg，加熱120°C充分?jǐn)嚢柚寥芤和该?。加到第一乳化反?yīng)釜中，降溫至35°C時(shí)，打開乳化裝置，同時(shí)打開乳化裝置冷卻水使乳化裝置溫度35°C加入水相，水相流速為0. 08L/s，乳化裝置的剪切速度為3000r/min。 水相加入后，開始乳化過程，控制流速為0. 5L/s,乳化裝置轉(zhuǎn)速為3000r/min。第一階段，從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至上端進(jìn)料口，乳化60min，第二階段，從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至第二乳化反應(yīng)釜的上端進(jìn)料口，至第一乳化反應(yīng)釜中疫苗全部移入乳化反應(yīng)釜二，停止乳化。第三階段，從第二乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至第一乳化反應(yīng)釜的上端進(jìn)料口，乳化至第二乳化反應(yīng)釜中的疫苗全部移入第一乳化反應(yīng)釜后，停止乳化。第四階段。從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至上端進(jìn)料口，乳化120分鐘。實(shí)施例6制備500萬ml雞新城疫、禽流感二聯(lián)油乳劑滅活疫苗。將收獲的新城疫抗原150萬ml，濃縮至62. 5萬ml，禽流感抗原150萬ml，濃縮至 62. 5 萬ml，滅活后加吐溫-80 7. 5 萬ml，備用。取 353. 36 萬ml (密度 0. 818g/ml，2890. 5kg) 白油，先加司盤80 18. 56萬ml (密度0. 994g/ml, 184. 5kg)，再加硬脂酸鋁61. 5kg，加熱120°C充分?jǐn)嚢柚寥芤和该?。加到第一乳化反?yīng)釜中，降溫至35°C時(shí)，打開乳化裝置，同時(shí)打開乳化裝置冷卻水使乳化裝置溫度35°C加入水相，水相流速為0. 12L/s，乳化裝置的剪切速度為2900r/min。水相加入后，開始乳化過程，控制流速為0. 45L/s,乳化裝置轉(zhuǎn)速為 2900r/min。第一階段，從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至上端進(jìn)料口，乳化 150min，第二階段，從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至第二乳化反應(yīng)釜的上端進(jìn)料口，至第一乳化反應(yīng)釜中疫苗全部移入乳化反應(yīng)釜二，停止乳化。第三階段，從第二乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至第一乳化反應(yīng)釜的上端進(jìn)料口，乳化至第二乳化反應(yīng)釜中的疫苗全部移入第一乳化反應(yīng)釜后，停止乳化。第四階段。從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至上端進(jìn)料口，乳化300分鐘。實(shí)施例7 制備200萬ml雞新城疫、支氣管炎、減蛋綜合征、禽流感四聯(lián)油乳劑滅活疫苗取水相濃縮6倍NDV La Sota株、IBV M41株、AIV HL株病毒液和濃縮4倍的EDSV AV127株病毒液按1 1 1 1的比例混合，取混合后的病毒液50萬ml，滅活后加入吐溫2萬ml作為水相。取142. 5萬ml (密度0. 818g/ml，1165. 6kg)白油，先加司盤80 7.5 萬ml (密度0. 994g/ml，74. 55kg)，再加硬脂酸鋁24. 8kg，加熱120°C充分?jǐn)嚢柚寥芤和该鳌?加到第一乳化反應(yīng)釜中，降溫至35°C時(shí)，打開乳化裝置，同時(shí)打開乳化裝置冷卻水使乳化裝置溫度35°C加入水相，水相流速為0. lOL/s，乳化裝置的剪切速度為2800r/min。水相加入后，開始乳化過程，控制流速為0. 5L/s,乳化裝置轉(zhuǎn)速為2800r/min。第一階段，從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至上端進(jìn)料口，乳化60min，第二階段，從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至第二乳化反應(yīng)釜的上端進(jìn)料口，至第一乳化反應(yīng)釜中疫苗全部移入乳化反應(yīng)釜二，停止乳化。第三階段，從第二乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至第一乳化反應(yīng)釜的上端進(jìn)料口，乳化至第二乳化反應(yīng)釜中的疫苗全部移入第一乳化反應(yīng)釜后，停止乳化。第四階段。從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至上端進(jìn)料口，乳化120分鐘。實(shí)施例8用罐內(nèi)均質(zhì)乳化工藝生產(chǎn)雞新城疫疫苗200萬ml將收獲的新城疫抗原200萬ml，濃縮至63. 27萬ml，滅活后加吐溫-80 3. 33萬ml， 備用。125. 51萬ml (密度0. 818g/ml，1026. 7kg)白油，先加司盤-80 6. 592萬ml (密度為 0. 994g/ml，65. 5kg)，再加硬脂酸鋁21. 8kg，，加熱120°C充分?jǐn)嚢柚寥芤和该鳌＜拥降谝蝗榛磻?yīng)釜中，降溫至35°C時(shí)，開啟攪拌，攪拌速度為50轉(zhuǎn)/min，加入水相速度為0. 5L/s，乳化機(jī)轉(zhuǎn)速為12000轉(zhuǎn)/分鐘，乳化6分鐘，制備疫苗。實(shí)施例9將收獲的新城疫抗原200萬ml，濃縮至63. 27萬ml，滅活后加吐溫-80 3. 33萬ml， 備用。125. 51萬ml (密度0. 818g/ml，1026. 7kg)白油，先加司盤-80 6. 592萬ml (密度為 0. 994g/ml，65. 5kg)，再加硬脂酸鋁21. 8kg，，加熱120°C充分?jǐn)嚢柚寥芤和该?。加到第一乳化反?yīng)釜中，降溫至35°C時(shí)，加水相，加水相速度為3000ml/min，調(diào)整尺距為7. 7mm，轉(zhuǎn)速為 2800轉(zhuǎn)/min，乳化5分鐘。實(shí)施例10根據(jù)優(yōu)選的實(shí)施例制備的新城疫病毒、禽流感病毒、減蛋綜合征病毒、法氏囊病毒、支氣管炎病毒或其二聯(lián)四聯(lián)苗的穩(wěn)定性、安全性、無菌進(jìn)行檢測，相應(yīng)的對優(yōu)選的膠體磨、罐內(nèi)均質(zhì)機(jī)乳化技術(shù)制備的產(chǎn)品進(jìn)行對比檢測。1檢測方法1. 1穩(wěn)定性檢測1. 1. 1離心法取IOml油乳劑疫苗加入離心管中，以3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，
管底部無水分析出。1. 1. 2抗老化實(shí)驗(yàn)取IOml乳液至于30ml試管中，將其放入37°C溫箱存放21天， 無水相析出。1. 1.3定時(shí)保存法2_8°C保存1. 1. 3穩(wěn)定性加速試驗(yàn)法將乳液放于5°C、35°C溫度下，每12小時(shí)改變一次溫度， 共12天進(jìn)行比較觀察。1. 2 粘度用IOml吸管(上口內(nèi)徑2. 7mm，下口內(nèi)徑1.2ml)，吸取25°C左右的疫苗lml，令其垂直自然流出，記錄流出0. 4ml所需要的時(shí)間，以秒記。1. 3安全檢測取30日齡的SPF雞10只，每只胸肌注射疫苗1ml，觀察14天，注射部位或全身無不良反應(yīng)。2檢測結(jié)果優(yōu)選的恒流乳化技術(shù)制備的新城疫病毒、禽流感病毒、減蛋綜合征病毒、法氏囊病毒、支氣管炎病毒及其二聯(lián)四聯(lián)苗的穩(wěn)定性、安全性和無菌進(jìn)行檢測，相應(yīng)的結(jié)果如下。以及本專利方法與優(yōu)選的膠體磨、罐內(nèi)均質(zhì)機(jī)乳化技術(shù)制備的產(chǎn)品的對比結(jié)果如下。2. 1實(shí)驗(yàn)分組情況
權(quán)利要求
1.一種禽用油乳劑疫苗，包括油相、水相，其特征在于，水相組成為濃縮的疫苗抗原、親水性表面活性劑，油相組成為白油、親油性表面活性劑、助乳化劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的禽用油乳劑疫苗，其特征在于，所述濃縮的疫苗抗原為滅活的禽類病毒微生物，包括新城疫病毒、禽流感病毒、支氣管炎病毒、減蛋綜合征病毒、法氏囊病毒中的一種或任意幾種病毒的混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的禽用油乳劑疫苗，其特征在于，所述油乳劑疫苗的水油體積比為 1 1. 5-1 4。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的禽用油乳劑疫苗，其特征在于，所述親水性表面活性劑選自吐溫80，用量為依水相比例而定，占水相體積總量的4% -6%。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的禽用油乳劑疫苗，其特征在于，所述油乳劑疫苗水油體積比例為1 2，吐溫80用量為5%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的禽用油乳劑疫苗，其特征在于，所述親油性表面活性劑選自司盤80、司盤85中的一種，助乳化劑選自硬脂酸鋁。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的禽用油乳劑疫苗，其特征在于，所述油相的白油、親油性表面活性劑、助乳化劑重量配比為94 6 2。
8.如權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的禽用油乳劑疫苗的制備方法，其特征在于，包括以下步驟(1)稱取處方量白油，加入親油性表面活性劑，攪拌均勻后加入助乳化劑，加熱使其充分混合均勻后，加入到第一乳化反應(yīng)釜中，降溫至35-40°C ；(2)打開第一乳化反應(yīng)釜的出料口閥門，開啟乳化機(jī)，乳化機(jī)的剪切轉(zhuǎn)速恒為 2500-3000r/min，同時(shí)開始從第一乳化反應(yīng)釜的進(jìn)料口加入按配比配好的水相，控制加水相的流速為0. 02-0. 15L/s，至水相加完；(3)乳化過程分為4個(gè)階段，每個(gè)階段保持恒定流速0.4-0. 5L/s,管線式乳化機(jī)的剪切轉(zhuǎn)速為2500-3000r/min 第一階段，從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至上端進(jìn)料口，乳化時(shí)間為第一乳化反應(yīng)釜中所有物料按流速乳化1遍的時(shí)間；第二階段，從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至第二乳化反應(yīng)釜的上端進(jìn)料口，至第一乳化反應(yīng)釜中疫苗全部移入第二乳化反應(yīng)釜，停止乳化；第三階段，從第二乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至第一乳化反應(yīng)釜的上端進(jìn)料口，至第二乳化反應(yīng)釜中的疫苗全部移入第一乳化反應(yīng)釜后，停止乳化；第四階段，從第一乳化反應(yīng)釜的下端出料口經(jīng)乳化裝置流至上端進(jìn)料口，乳化時(shí)間為第一乳化反應(yīng)釜中所有物料按流速乳化2遍的時(shí)間。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的禽用油乳劑疫苗的制備方法方法，其特征在于，步驟(2)中水相流速為0. lOL/s，乳化裝置的轉(zhuǎn)速恒定為2900r/min。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的禽用油乳劑疫苗的制備方法方法，其特征在于，步驟(3)中乳化過程中流速恒定為0. 5L/s，剪切轉(zhuǎn)速恒定為2900r/min。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種禽用油乳劑疫苗及其制備方法，采用恒流乳化的技術(shù)，利用外置乳化裝置，連續(xù)進(jìn)行反應(yīng)釜置換式乳化，通過控制各種工藝條件，使乳液流經(jīng)乳化裝置后的液珠粒徑小，粒徑的差異小，分散均勻，從而確保乳液均一，提高疫苗的穩(wěn)定性。恒流乳化技術(shù)不受批量的限制，處理量大，可在線連續(xù)無菌生產(chǎn)，節(jié)能高效，運(yùn)轉(zhuǎn)平穩(wěn)，可用于規(guī)模性生產(chǎn)的罐體乳化工序。本發(fā)明所說的高穩(wěn)定性油乳劑疫苗的水油體積比為1∶1.6-1∶4，水相中含禽用疫苗抗原和4％-6％親水性表面活性劑，油相組成為94份白油、4份親油表面活性劑和2份助乳化劑。
文檔編號A61J3/00GK102389394SQ201110359618
公開日2012年3月28日 申請日期2011年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月15日
發(fā)明者劉建, 楊旭, 賈紹輝, 陳利紅, 韓春賀 申請人:天津瑞普高科生物藥業(yè)有限公司