專利名稱：用于治療癌癥的藥物組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種用于治療癌癥的藥物組合物，包含有效劑量的樟芝萃取物。
背景技術：
傳統(tǒng)的癌癥治療，主要是抑制快速增殖癌細胞的生長與引發(fā)其凋亡。然而癌細胞的異源性，造成在化療藥物及放射線治療后，惡性度較高的往往仍能存活，或是躲過免疫系統(tǒng)的偵測，導致癌癥在治療后經常出現(xiàn)復發(fā)的情形。近年來，一種新理論的興起，對于癌癥難以治愈的原因提供一種新的解釋方式。許多研究指出，多數(shù)的癌細胞并不具有引起腫瘤發(fā)生的能力，只有極少部分癌細胞才具有致瘤性(tumorigenic)，并且可分化為腫瘤組織中的各種細胞?？茖W家在包括血癌、乳癌、腦癌、卵巢癌、前列腺癌、大腸直腸癌、口腔癌等不同的癌組織中，發(fā)現(xiàn)這些少數(shù)細胞相較于其它癌細胞而言，對于一般放射線或藥物更具有抵抗性。因此，將這些具有類似干細胞特性的癌細胞命名為癌癥干細胞(Cancer Stem Cell)。目前研究指出，癌癥干細胞可以從病患腫瘤中分離取出。而極少數(shù)的癌癥干細胞便可在病患體內形成腫瘤，此種腫瘤干細胞的活化增生的調控與腫瘤復發(fā)、遠程侵犯甚至病患存活率有極密切的關聯(lián)。與正常干細胞相似的是，癌癥干細胞亦具有自我更新與分化的能力，會不斷的生長和分化為不同種類形態(tài)的腫瘤細胞，然而癌癥干細胞并不像正常的干細胞，其自我更新機制不受正常的調控。就以正常干細胞的表面抗原CD133為例，CD133是一個具有五個穿膜區(qū)域(transmembrane domains)的糖蛋白(glycoprotein),首度在成體血液、骨髓與胚胎干細胞中分離出的CD34+前驅細胞中被辨識，而被視為造血干細胞的標志。然而在最近五年的研究中發(fā)現(xiàn)，CD133更被認為是血癌、腦癌、視網膜目細胞瘤(retinoblastoma)、腎臟癌、胰臟癌、前列腺癌與肝癌的癌癥干細胞的細胞表面標志。最近研究報告也指出，髓母細胞瘤(medul1blastoma)以及神經膠質瘤(glioma)可能具有⑶133+癌癥干細胞的存在，且這些⑶133+細胞的增殖與自我更新能力更勝于一般的腫瘤細胞，因此⑶133可視為癌癥干細胞的重要標志之一。
目前，根據(jù)癌癥干細胞的特性，已能利用三種方式成功地自實體腫瘤(solidtumor)中分離出癌癥干細胞。第一，根據(jù)特異性表現(xiàn)在癌癥干細胞的表面抗原，例如CD44或⑶133,利用流式細胞儀(flow cytometry)分離出癌癥干細胞。其中，⑶133在多種腦部腫瘤的癌癥干細胞中分離出來，包括多形神經膠母細胞瘤(glioblastoma multiforme)、兒童髓母細胞瘤、室管膜瘤(印endymomas)。此外，它也在大腸癌的癌癥干細胞中被發(fā)現(xiàn)，大腸癌中約1.8-24.5%的細胞表現(xiàn)⑶133，而這些細胞大多具有形成腫瘤的能力。第二，以熒光染劑Hoechst 33342對腫瘤組織或癌細胞群加以染色，分離出不具熒光訊號的側族群(side population),此為癌癥干細胞,據(jù)推測，這些細胞也許會導致腫瘤化學抗性(chemoresistance)。ABCG2-—種三憐酸腺苷水解酶運轉子(ATPase transporter)的表現(xiàn)與側族群現(xiàn)象有密切相關；簡單說明其原理，因為干細胞的細胞膜表面會高度表現(xiàn)ABCG2，這個運轉子會主動的將Hoechst33342燃料從核內排出到核外，因此流式細胞儀分析出來的這群側族群細胞就定義為具有干細胞的性質。然而最新研究顯示，不論有沒有表現(xiàn)ABCG2的癌細胞都具有相似的致癌能力。第三，將腫瘤組織或癌細胞培養(yǎng)于不含血清但含有特定生長因子-如堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factor ;bFGF)、表皮生長因子(epidermal growth factor ；EGF)等人工合成生長因子的培養(yǎng)基,發(fā)現(xiàn)形成球體(sphere body formation)的細胞中富含癌癥干細胞，目前推論這種不含血清的培養(yǎng)環(huán)境，可以幫助癌癥干細胞維持在未分化的狀態(tài)。分子標記物主要是確認細胞的表面抗原或是特定的轉錄因子，各類干細胞及癌癥干細胞都需使用不同的標志物來進行確認，而后再檢測干細胞自我更新及分化的能力。因此，如何能尋找出癌癥干細胞特有并專一表現(xiàn)的表面分子標志或特定基因群，繼而辨識出具致瘤能力的癌癥干細胞，整飾目前各國頂尖研究團隊的首要目標。此外，如果能夠正確并且成功地分離出癌癥干細胞，將可藉由體外培養(yǎng)進行后續(xù)的基因調控的基礎研究、人體修復或是藥物篩選平臺的開發(fā)，或直接應用在癌癥病人的個體化抗癌治療的應用。目前，這類癌癥干細胞被認為有發(fā)展成癌癥的潛力，在實驗動物的模式中，也證實極少量的癌癥干細胞即可形成腫瘤，而非干細胞的其它癌細胞，則需要遠大于此數(shù)量的細胞數(shù)，才可以達到類似的腫瘤生成能力。另一方面，因癌癥干細胞的增殖速率極為緩慢，甚至處于停止分裂的狀態(tài)，也因其ABC運輸?shù)鞍椎谋憩F(xiàn)量遠超過一般的癌癥細胞，因此不易被化療藥物或放射線殺死。所以癌癥干細胞不但是癌癥在治療后復發(fā)并喪失對原本有效藥物反應的主因，也很可能是癌癥惡性轉移的主要原因。這說明了只有消滅癌癥干細胞，癌癥才有治愈的機會。因此，找出這類細胞與一般癌細胞及正常干細胞間的差別，并針對這些特性發(fā)展有效治療殺死癌癥干細胞的策略，是目前癌癥研究的重要課題之一。近年來，醫(yī)學界對于這種難以治愈及容易復發(fā)、轉移的情形提出新的看法，亦即不同的癌癥組織中可能存在特定的癌癥干細胞一Cancer Stem Cell，是造成癌癥病患腫瘤復發(fā)的主要關鍵。傳統(tǒng)的癌癥治療技術，是在手術切除之后進行放射及化學治療，以抑制癌細胞的生長，進而引發(fā)其凋亡。然而，惡性度較高的癌細胞，卻可以通過化療藥物及放射線治療而存活下來，并且躲過免疫系統(tǒng)的偵測，導致癌癥在治療后容易出現(xiàn)復發(fā)情形。樟芝(Antrodia camphorata),又稱牛樟芝、牛樟燕或紅樟芝等，屬于無裙菌目(Aphyllophorales)、 多孔菌科(Polyporaceae)、薄孔菌屬(Antrodia)的裙多年生蕈菌類， 為臺灣特有種真菌，僅生長于臺灣保育類樹種-牛樟樹(Cinnamoum kanehirai Hay)的
中空腐朽心材內壁上。由于牛樟樹分布數(shù)量極為稀少，加上人為的盜伐，使得寄生于其中方能生長的野生牛樟芝數(shù)量更加稀少，另外其子實體生長相當緩慢，生長期亦僅在六月至十月之間，因此價格非常昂貴。在臺灣民俗醫(yī)學上，樟芝具有解毒、減輕腹瀉癥狀、消炎、治療肝臟相關疾病及抗癌等功能。樟芝乳痛一般食藥用的蕈菇類，具有許多復雜的成分，已知的生理活性成分中，包括:三職類化合物(triterpenoids)、多糖體(polysaccharides,如β-D-葡聚醣)、腺苷(ademosine)、維生素(如維生素B、煙堿酸)、蛋白質(含免疫球蛋白)、超氧歧化酵母(superoxide dismutase, SOD)、微量元素(如丐、磷、鍺)、核酸、固醇類以及血壓穩(wěn)定物質(如antrodia acid)等,這些生理活性成分被認為具有抗腫瘤、增加免疫能力、抗過敏、抗病菌、抗高血壓、降血糖及降膽固醇等多種功效。目前，僅有樟芝萃取物對一般癌細胞具有抑制效果的研究，尚未有針對癌癥干細胞的研究。

發(fā)明內容
為評估樟芝對抗肺癌、腦癌、頭頸癌、大腸直腸癌以及乳癌具有抑制癌癥干細胞生長潛力的藥物，共計5種樟芝萃取物于下:樟芝濃縮液(Dl)，樟芝濃縮液EA (乙酸乙酯)萃取物(D2)、樟芝濃縮液凍干粉(D3)、樟芝濃縮液凍干粉EA(乙酸乙酯)萃取物(D4)、樟芝菌絲體EA(乙酸乙酯萃取物(D5)。本發(fā)明的目的在于篩選具有抗癌作用的樟芝萃取物，以MTT(3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl) ~2, 5-diphenyltetrazoIium bromide)測驗來完成細胞毒性測試，本發(fā)明以人類肺癌干細胞Lung CSC、人類纖維母細胞AF-1 (Adultfibroblast-1)、腦癌干細胞GBM CSC、人類纖維母細胞AF-2 (Adult fibroblast-2)、頭頸癌干細胞HNSCC CSC、大腸直腸癌干細胞CRC CSC以及乳癌干細胞Breast CSC、肝癌干細胞Hepatoma CSC、血癌干細胞Leukemia CSC、胃癌干細胞Gastric CSC作為細胞實驗模型。本發(fā)明提供一種用于治療由癌癥干細胞引起的癌癥的藥物組合物，包含有效劑量的樟芝萃取物。樟芝萃取物選自由樟芝濃縮液凍干粉乙酸乙酯萃取物及樟芝菌絲體乙酸乙酯萃取物做組成的群組；癌癥干細胞為肝癌干細胞、肺癌干細胞、腦癌干細胞、頭頸癌干細胞、大腸直腸癌干細胞、乳癌干細胞、血癌干細胞或胃癌干細胞；樟芝萃取物的有效劑量較佳為 10 μ g/ml 至 500 μ g/ml。本發(fā)明的藥物組合物與化療藥物并用可增加對癌癥干細胞的抑制效果；化療藥物為順鉬或紫杉醇；癌癥干細胞為肺癌干細胞、腦癌干細胞、頭頸癌干細胞、大腸直腸癌干細胞、乳癌干細胞或肝癌干細胞。本發(fā)明的藥物組合物與放射線治療并用亦可增加對癌癥干細胞的抑制效果；癌癥干細胞為肺癌干細胞、腦癌干細胞、頭頸癌干細胞、大腸直腸癌干細胞、乳癌干細胞或肝癌干細胞。本發(fā)明所述樟芝萃取物包含有效成份4-乙?；?安卓奎諾爾B (4-acetyl-antroquinonol B)。本發(fā)明亦提供一種用于治療由癌癥干細胞引起的癌癥的藥物組合物，包含有效劑量的4-乙?；?安卓奎諾爾B (4-acetyl-antroquinonol B);癌癥干細胞為肺腺癌CD133陽性腫瘤干細胞、肺癌干細胞、腦癌干細胞、乳癌干細胞、口腔癌干細胞或大腸直腸癌干細胞；4-乙?；?安卓奎諾爾B的有效劑量較佳為0.1 μ g/ml至100 μ g/mlο


圖1為本發(fā)明所用樟芝萃取物的制作過程。圖2為4-乙酰基-安卓奎諾爾B的ESI (+) -MS的質譜圖。圖3為4-乙?；?安卓奎諾爾B的紫外光吸收光譜圖。圖4為4-乙?；?安卓奎諾爾B的1H-NMR (500MHz，CDCl3)光譜圖。圖5為4-乙?；?安卓奎諾爾B的13C-NMR(125MHZ，CDCl3)光譜圖。圖6是樟芝濃縮液的pH值特性與抑制人類干細胞生長圖。圖7為樟芝濃縮液(Dl)抑制人類肺癌干細胞Lung CSC的細胞毒性曲線。圖8為樟芝濃縮液EA (乙酸乙酯)萃取物(D2)抑制人類肺癌干細胞Lung CSC的細胞毒性曲線。
圖9為樟芝濃縮液凍干粉(D3)抑制人類肺癌干細胞Lung CSC的細胞毒性曲線。圖10為樟芝濃縮液凍干粉EA (乙酸乙酯)萃取物(D4)抑制人類肺癌干細胞LungCSC的細胞毒性曲線。圖11為樟芝菌絲體EA (乙酸乙酯)萃取物(D5)抑制人類肺癌干細胞Lung CSC的細胞毒性曲線。圖12為樟芝濃縮液(Dl)抑制人類纖維母細胞AF-1 (Adult fibroblast-1)的細胞毒性曲線。圖13為樟芝濃縮液EA (乙酸乙酯)萃取物(D2)抑制人類纖維母細胞AF_1 (Adultfibroblast-1)的細胞毒性曲線。圖14為樟芝濃縮液凍干粉(D3)抑制人類纖維母細胞AF-1 (Adultfibroblast-1)的細胞毒性曲線。圖15為樟芝濃縮液凍干粉EA(乙酸乙酯)萃取物(D4)抑制人類纖維母細胞AF-1 (Adult fibroblast-1)的細胞毒性曲線。圖16為樟芝菌絲體EA (乙酸乙酯)萃取物(D5)抑制人類纖維母細胞AF_1 (Adultfibroblast-1)的細胞毒性曲線。圖17為樟芝濃縮液(Dl)抑制腦癌干細胞GBM CSC的細胞毒性曲線。圖18為樟芝濃縮液EA (乙酸乙酯)萃取物(D2)抑制腦癌干細胞GBM CSC的細胞
毒性曲線。圖19為樟芝濃縮液凍干粉(D3)抑制腦癌干細胞GBM CSC的細胞毒性曲線。圖20為樟芝濃縮液凍干粉EA (乙酸乙酯)萃取物(D4)抑制腦癌干細胞GBM CSC的細胞毒性曲線。圖21為樟芝菌絲體EA (乙酸乙酯)萃取物(D5)抑制腦癌干細胞GBM CSC的細胞
毒性曲線。圖22為樟芝濃縮液(Dl)抑制人類纖維母細胞AF-2 (Adult fibroblast-2)的細胞毒性曲線。圖23為樟芝濃縮液EA (乙酸乙酯)萃取物(D2)抑制人類纖維母細胞AF_2 (Adultfibroblast-2)的細胞毒性曲線。圖24為樟芝濃縮液凍干粉(D3)抑制人類纖維母細胞AF_2 (Adultf ibroblast-2)的細胞毒性曲線。圖25為樟芝濃縮液凍干粉EA(乙酸乙酯)萃取物(D4)抑制人類纖維母細胞AF-2 (Adult fibroblast-2)的細胞毒性曲線。圖26為樟芝菌絲體EA (乙酸乙酯)萃取物(D5)抑制人類纖維母細胞AF_2 (Adultfibroblast-2)的細胞毒性曲線。圖27為樟芝濃縮液(Dl)抑制頭頸癌干細胞HNSCC CSC的細胞毒性曲線。圖28為樟芝濃縮液EA (乙酸乙酯)萃取物(D2)抑制頭頸癌干細胞HNSCCCSC的細胞毒性曲線。圖29為樟芝濃縮液凍干粉(D3)抑制頭頸癌干細胞HNSCC CSC的細胞毒性曲線。圖30為樟芝濃縮液凍干粉EA (乙酸乙酯)萃取物(D4)抑制頭頸癌干細胞HNSCCCSC的細胞毒性曲線。
圖31為樟芝菌絲體EA(乙酸乙酯)萃取物(D5)抑制頭頸癌干細胞HNSCCCSC的細胞毒性曲線.
圖32為樟芝濃縮液(Dl)抑制大腸直腸癌干細胞CRC CSC的細胞毒性曲線。圖33為樟芝濃縮液EA (乙酸乙酯)萃取物(D2)抑制大腸直腸癌干細胞CRC CSC的細胞毒性曲線。圖34為樟芝濃縮液凍干粉(D3)抑制大腸直腸癌干細胞CRC CSC的細胞毒性曲線。圖35為樟芝濃縮液凍干粉EA(乙酸乙酯)萃取物(D4)抑制大腸直腸癌干細胞CRC CSC的細胞毒性曲線。圖36為樟芝菌絲體EA (乙酸乙酯)萃取物(D5)抑制大腸直腸癌干細胞CRC CSC的細胞毒性曲線。圖37為樟芝濃縮液(Dl)抑制乳癌干細胞Breast CSC的細胞毒性曲線。圖38為樟芝濃縮液EA (乙酸乙酯)萃取物(D2)抑制乳癌干細胞Breast CSC的細胞毒性曲線。圖39為樟芝濃縮液凍干粉(D3)抑制乳癌干細胞Breast CSC的細胞毒性曲線。圖40為樟芝濃縮液凍干粉EA(乙酸乙酯)萃取物(D4)抑制乳癌干細胞BreastCSC的細胞毒性曲線。圖41為樟芝菌絲體EA (乙酸乙酯)萃取物(D5)抑制乳癌干細胞Breast CSC的細胞毒性曲線。圖42為樟芝濃縮液凍干粉EA (乙酸乙酯)萃取物(D4)抑制肝癌干細胞IfepatomaCSC的細胞毒性曲線。圖43為樟芝菌絲體EA (乙酸乙酯)萃取物抑制肝癌干細胞Ifepatoma CSC的細胞毒性曲線。圖44為樟芝濃縮液凍干粉EA (乙酸乙酯)萃取物(D4)抑制血癌干細胞LeukemiaCSC的細胞毒性曲線。圖45為樟芝菌絲體EA (乙酸乙酯)萃取物(D5)抑制血癌干細胞LeukemiaCSC的細胞毒性曲線。圖46為樟芝濃縮液凍干粉EA (乙酸乙酯)萃取物(D4)抑制胃癌干細胞GastricCSC的細胞毒性曲線。圖47為樟芝菌絲體EA (乙酸乙酯)萃取物(D5)抑制胃癌干細胞Gastric CSC的細胞毒性曲線。圖48為合并放射線治療(2Gy)對腦癌干細胞GBM CSC的效果圖。圖49為合并放射線治療(2Gy)對肺癌干細胞Lung CSC的效果圖。圖50為合并放射線治療(2Gy)對頭頸癌干細胞HNSCC CSC的效果圖。圖51為合并放射線治療(2Gy)對乳癌干細胞Breast CSC的效果圖。圖52為合并放射線治療(2Gy)對肝癌干細胞!fepatoma CSC的效果圖。圖53為合并放射線治療(2Gy)對大腸直腸癌干細胞CRC-CSC的效果圖。圖54為合并放射線治療(4Gy) 對腦癌干細胞GBM CSC的效果圖。圖55為合并放射線治療(4Gy)對肺癌干細胞Lung CSC的效果圖。圖56為合并放射線治療(4Gy)對頭頸癌干細胞HNSCC CSC的效果圖。
圖57為合并放射線治療(4Gy)對乳癌干細胞Breast CSC的效果圖。圖58為合并放射線治療(4Gy)對肝癌干細胞!fepatoma CSC的效果圖。圖59為合并放射線治療(4Gy)對肝癌干細胞!fepatoma CSC的效果圖。圖60為合并化療藥物治療(Cisplatin，10 μ g/ml)對腦癌干細胞GBM CSC的效果圖。圖61為合并化療藥物治療(Cisplatin，10 μ g/ml)對肺癌干細胞Lung CSC的效果圖。圖62為合并化療藥物治療(Cisplatin，10 μ g/ml)對頭頸癌干細胞HNSCCCSC的效果圖。圖63為合并化療藥物治療(Cisplatin，10 μ g/ml)對乳癌干細胞Breast CSC的效果圖。圖64為合并化療藥物治療(Cisplatin, 10 μ g/ml)對肝癌干細胞Hepatoma CSC的效果圖。圖65為合并化療藥物治療(Cisplatin，10 μ g/ml)對大腸直腸癌干細胞CRC-CSC的效果圖。圖66為合并化療藥物治療(Taxol，5ng/ml)對腦癌干細胞GBM CSC的效果圖。圖67為合并化療藥物治療(Taxol，5ng/ml)對肺癌干細胞Lung CSC的效果圖。圖68為合并化療藥物 治療(Taxol，5ng/ml)對頭頸癌干細胞HNSCC CSC的效果圖。圖69為合并化療藥物治療(Taxol，5ng/ml)對乳癌干細胞Breast CSC的效果圖。圖70為合并化療藥物治療(Taxol，5ng/ml)對肝癌干細胞H印atoma CSC的效果圖。圖71為合并化療藥物治療(Taxol，5ng/ml)對大腸直腸癌干細胞CRC-CSC的效果圖。圖72為4-乙酰基-安卓奎諾爾B抑制肺腺癌⑶133陽性腫瘤干細胞的細胞毒性曲線。圖73為4-乙?；?安卓奎諾爾B抑制口腔癌干細胞Oral CSC的細胞毒性曲線。圖74為4-乙?；?安卓奎諾爾B抑制腦癌干細胞GBM-CSC的細胞毒性曲線。圖75為4-乙?；?安卓奎諾爾B抑制乳癌干細胞Breast CSC的細胞毒性曲線。圖76為4-乙?；?安卓奎諾爾B抑制肺癌干細胞Lung CSC的細胞毒性曲線。圖77為4-乙?；?安卓奎諾爾B抑制大腸直腸癌干細胞CRC-CSC的細胞毒性曲線。
具體實施例方式為更好的說明本發(fā)明的目的、技術方案和優(yōu)點，下面結合附圖和具體實施例對本發(fā)明作進一步描述。實施例1樟芝萃取物的制備樟芝經培養(yǎng)產生樟芝發(fā)酵濃縮液，樟芝生產過程如附圖1所不，共制備五種樟芝萃取物，如下:
1、樟芝濃縮液(Dl)；2、樟芝濃縮液EA (乙酸乙酯)萃取物(D2)；3、樟芝濃縮液凍干粉(D3)；4、樟芝濃縮液凍干粉EA(乙酸乙酯)萃取物(D4)；5、樟芝菌絲體EA (乙酸乙酯)萃取物(D5)。樟芝經培養(yǎng)產生樟芝發(fā)酵液，經低溫膜過濾濃縮產生樟芝濃縮液(Dl)，進一步將樟芝濃縮液冷凍干燥可得樟芝濃縮液凍干粉(D3)。制備樟芝濃縮液乙酸乙酯萃取物(D2):取IOOml樟芝濃縮液加入IOOml乙酸乙酯分離(三次)，收集乙酸乙酯層，濃縮干燥后即為乙酸乙酯萃取物。制備樟芝濃縮液凍干粉乙酸乙酯萃取物(D4):取IOg樟芝濃縮液凍干粉加入IOOml 95%乙醇回流萃取3小時，樣品濃縮干燥后，加入IOOml水及IOOml乙酸乙酯分離(三次)，收集乙酸乙酯層，濃縮干燥后即為乙酸乙酯萃取物。制備樟芝菌絲體乙酸乙酯萃取物(D5):取IOg樟芝菌絲體加入IOOml 95%乙醇回流萃取3小時，樣品濃縮干燥后，加入IOOml水及IOOml乙酸乙酯分離(三次)，收集乙酸乙酯層，濃縮干燥后即為乙酸乙酯萃取物。實施例2分離樟芝菌絲體乙酸乙酯萃取物 (D5)的4-乙酰基-安卓奎諾爾B成分取樟芝菌絲體3千克，以95%的乙醇IOL加熱回流萃取四次，萃取液經過濾后濃縮，減壓干燥得乙醇萃取物384g，將乙醇萃取物懸浮于水以等量乙酸乙酯進行分配(partition)分離，乙酸乙酯層經減壓濃縮可得乙酸乙酯層分離物157.57g及水層分離物159.51g0上述乙酸乙酯層分離物157.57g以硅膠管柱(IOcmX30cm)進行層析，依次以正己烷一正己烷-乙酸乙酯(10: I — 10: 2—10: 3—10: 4—10: 5—1: 1 — 1:2，v/v)—乙酸乙酯一甲醇，每種比例各IOL進行沖提，每IL收集成一分離物。其中正己烷和乙酸乙酯混合物(正己烷:乙酸乙酯=10: 4)沖提的分離物56-63 (3.015g)，以逆相制備級管柱 Tosoh 0DS-80Ts (21.5mmX 300mm, 10 μ m)進行層析，以 H2O-CH3CN(20: 80)為移動相，流速10ml/min進行層析，以265nm為檢測波長，管柱控溫40°C，可獲得4-乙?；?安卓奎諾爾 B (4-acetyl-antroquinonol B) 131mg04-乙酰基-安卓奎諾爾B的結構鑒定4-乙?；?安卓奎諾爾 B ESI(+)MS (m/z):485 [M+Na]+, 502 [M+K]+.UV λ max (nm):206,265.1H-NMR(500MHz，CDCl3) δ (ppm):5.70 (1H, d, J = 3.2Hz, H_4)，5.20 (1H, t, J =6.4Hz，H-12)，5.09 (1H, t, J = 6.8Hz，H_8)，4.60 (1H, m, H-15)，3.98 (3H, s，H-24)，3.65 (3H,s’ H-23)，2.67 (1H, m, H-17)，2.50 (1H, dq, J = 6.9，10.8Hz, H_6)，2.39 (1H, dd, J = 6.5，
13.9Hz, H-14)，2.23 (1H, m, H-1 I)，2.19 (1H, m, H-14)，2.14 (1H, m, H-16)，2.09 (2H, m, H_7)，
2.08 (3H, OAc)，2.00 (2H, m, H-10)，1.94 (1H, m, H-1 I)，1.90 (1H, m, H-16)，1.86 (1H, m, H_5)，
1.63 (3H, s’ H-21)，1.54 (3H, s’ H_20)，1.25 (3H, d, J = 7.3Hz, H-19)，1.18 (3H, d, J =
6.9Hz, H-22).13C-NMR (125MHz，CDCl3) δ (ppm): 197.1 (C_l)，180.3 (C-18)，170.0 (CH3C0)，158.4(C-3)，137.7 (C_9)，137.6 (C_2)，130.4 (C-13)，128.5 (C-12)，121.0 (C_8)，77.1 (C-15)，69.4 (C_4) ,61.0 (C—23)，60.0 (C—24)，45.2 (C—14)，43.3 (C_5) ,41.6 (C_6)，39.6 (C-1O)，34.9 (C-16)，33.9 (C-17)，27.1 (C-1l)，26.5 (C_7)，21.2 (CH3CO)，16.7 (C-21)，16.3 (C-20)，16.1 (C-19)，13.1 (C-22)。實施例3藥物毒性試驗本實施例以特定的細胞數(shù)種植在25T細胞培養(yǎng)基，等待六小時后，細胞貼附至培養(yǎng)基底部，但細胞仍未分裂的狀態(tài)下，加入濃度為0、50、100、200以及400nM的藥物，分別于時間0、6、12以及24小時后移除含有藥物的培養(yǎng)液，以PBS沖洗一次，再加入未含有藥物的新鮮培養(yǎng)液，培養(yǎng)10至14天，以甲醇固定后，再以吉姆沙(Giemsa)染色，計算細胞菌落數(shù)(每個菌落須大于50個細胞)，則其存活分率(SF surviving fractions)的計算公式為:
權利要求
1.一種用于治療癌癥的藥物組合物，主要用于治療由癌癥干細胞引起的癌癥，其特征在于，包含有效劑量的樟芝萃取物。
2.按權利要求1所述的用于治療癌癥的藥物組合物，其特征在于，所述樟芝萃取物選自由樟芝濃縮液凍干粉乙酸乙酯萃取物及樟芝菌絲體乙酸乙酯萃取物所組成的群組。
3.按權利要求1所述的用于治療癌癥的藥物組合物，其特征在于，所述癌癥干細胞是肝癌干細胞、肺癌干細胞、腦癌干細胞、頭頸癌干細胞、大腸直腸癌干細胞、乳癌干細胞、血癌干細胞或胃癌干細胞。
4.按權利要求1所述的用于治療癌癥的藥物組合物，其特征在于，所述有效劑量為.10 μ g/ml 至 50 0 μ g/ml。
5.按權利要求1所述的用于治療癌癥的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物與化療藥物并用可增加對癌癥干細胞的抑制效果。
6.按權利要求5所述的用于治療癌癥的藥物組合物，其特征在于，所述化療藥物為順鉬或紫杉醇。
7.按權利要求5所述的用于治療癌癥的藥物組合物，其特征在于，所述癌癥干細胞為肺癌干細胞、腦癌干細胞、頭頸癌干細胞、大腸直腸癌干細胞、乳癌干細胞或肝癌干細胞。
8.按權利要求1所述的用于治療癌癥的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物與放射線治療并用可增加對癌癥干細胞的抑制效果。
9.按權利要求8所述的藥物組合物，其特征在于，所述癌癥干細胞為肺癌干細胞、腦癌干細胞、頭頸癌干細胞、大腸直腸癌干細胞、乳癌干細胞或肝癌干細胞。
10.一種用于治療癌癥的藥物組合物，主要用于治療由癌癥干細胞引起的癌癥，其特征在于，包含有效劑量的4-乙?；?安卓奎諾爾B (4-acetyl-antroquinonol B)。
11.按權利要求10所述的藥物組合物，其特征在于，所述癌癥干細胞是肺腺癌CD133陽性腫瘤干細胞、肺癌干細胞、腦癌干細胞、乳癌干細胞、口腔癌干細胞或大腸直腸癌干細胞。
12.按權利要求10所述的藥物組合物，其特征在于，所述有效劑量為0.1 μ g/ml至.100 μ g/mlο
全文摘要
本發(fā)明提供一種用于治療由癌癥干細胞引起的癌癥的藥物組合物，包含有效劑量的樟芝萃取物。本發(fā)明亦提供一種用于治療由癌癥干細胞引起的癌癥的藥物組合物，包含有效劑量的4-乙?；?安卓奎諾爾B(4-acetyl-antroquinonol B)。
文檔編號A61P35/00GK103083364SQ20111034497
公開日2013年5月8日 申請日期2011年11月4日 優(yōu)先權日2011年11月4日
發(fā)明者黃俊智, 陳志杰, 陳立耿 申請人:麗豐實業(yè)股份有限公司