專利名稱：一種穿越人體粘液屏障的靶向給藥脂質(zhì)體的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于藥物制劑領域，具體涉及一種包載有化學藥物、基因及蛋白類藥物、能夠穿越人體粘液屏障(尤其適用于肺、眼部)的靶向給藥脂質(zhì)體制劑。
背景技 術眾所周知，人體中存在多個暴露在外環(huán)境或經(jīng)常與外環(huán)境接觸的器官，比如肺、 目艮、呼吸道、腸道、女性陰道等，這些器官的表皮組織上層均包覆著具有保護作用的粘液層。 這些粘液層從微觀角度上觀察具有致密的微孔結構，從宏觀角度上觀察呈現(xiàn)高度的黏性。 此外，這些粘液層的代謝更新速率較快，根據(jù)各器官部位的不同，粘液層的代謝清除時間為數(shù)十秒至數(shù)十分鐘不等。因此這些粘液層可以首先通過粘著或立體位阻作用有效地阻止外來異物、尤其是外來微小粒子(包括細菌、病毒等病原體)的侵入，其次通過代謝清除機制將粘著了外來異物的粘液排除出體外，從而保持這些器官內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定及健康狀態(tài)。當這些器官產(chǎn)生疾病并需要給藥治療時，臨床上通常將外用局部用藥作為首選治療方式。這是由于在理想狀態(tài)下該給藥方式(1)靶點更為明確，病灶部位的藥物濃度更高，具備更高的療效，同時不會引發(fā)全身性的毒副作用；(2)給藥方式更為直接、方便，患者的耐受性顯著提高。但令人感到遺憾的是，現(xiàn)有傳統(tǒng)的局部給藥方式的治療效果并未達到預期。這是由于當治療性藥物給藥后，藥物會被這些器官表面包覆的保護性粘液層識別并將其視為外來異物而被阻止并快速地清除出體外，從而極大地降低了藥物的治療效果，廣大的藥學研究人員也將這些粘液層視為外用局部給藥的粘液屏障。因此，一種可以穿越人體粘液屏障的新型外用局部給藥制劑是目前臨床上迫切需要的。隨著藥劑學、藥理學、生物學及材料科學的高速發(fā)展，科研人員開發(fā)出了一系列具有特殊理化及生理學性質(zhì)的新型藥物載體，例如納米粒、微球、脂質(zhì)體、膠束等。其中，脂質(zhì)體除了具備這些新型載體共有的特點，還由于其獨特的優(yōu)勢而受到越來越多的關注(1) 特殊的結構，含有親水內(nèi)核及磷脂雙層膜，可以實現(xiàn)對于不同溶解性質(zhì)(水溶性及脂溶性) 藥物的包載；(2)制備工藝更為簡單，原輔料的來源廣泛，成本更為低廉，更適于開發(fā)成商業(yè)化產(chǎn)品。目前，世界范圍內(nèi)已上市近20個基于脂質(zhì)體的新型藥物制劑，其中多為注射劑型，少部分為口服劑型。這些產(chǎn)品一經(jīng)上市便取得了令人矚目的療效及銷售業(yè)績。可以說， 脂質(zhì)體劑型正日益成為一種新興的藥物載體，且發(fā)展前景一片光明。但是，目前還沒有關于局部給藥脂質(zhì)體制劑特別是對粘液組織給與脂質(zhì)體制劑的任何文獻報道。為了克服人體粘液屏障對微小粒子的排斥、位阻作用，對具有病變的粘液組織器官提高藥物的治療療效，本發(fā)明人經(jīng)過潛心研究發(fā)現(xiàn)，將親水性的聚乙二醇嵌段共聚物包覆于載藥脂質(zhì)體粒子后，該脂質(zhì)體粒子的穿越人體粘液屏障(主要為肺及眼部粘液)的比例及速率顯著提高提高數(shù)百倍，通過本發(fā)明的藥代動力學及藥效學試驗中得到了驗證。同時研究發(fā)現(xiàn)由于聚乙二醇_維生素E琥珀酸酯結構中的維生素E琥珀酸酯鏈段可以通過氧化應激機制誘導腫瘤細胞的凋亡，這樣其可以與脂質(zhì)體內(nèi)包載的藥物一同對于腫瘤細胞起到聯(lián)合殺傷的作用，因此該類脂質(zhì)體有潛力成為一種尤其適用于癌癥的新型多功能藥物載體。此外，通過聚乙二醇-維生素E琥珀酸酯包覆，在載藥脂質(zhì)體制備過程中能夠提高藥物的包載效率。本發(fā)明提供了一種新型的可以穿越人體粘液屏障的靶向給藥脂質(zhì)體制劑。在脂質(zhì)體制劑的脂膜表面包覆親水性的聚乙二醇嵌段共聚物，我們可將藥物包載于該粒子中，使得載藥粒子快速穿透粘液層，直達病灶部位的上皮組織，在局部保持更高的藥物濃度，實現(xiàn)靶向給藥目的，提高藥效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于解決人體粘液屏障對藥物的排斥、難于到達病灶部位的缺陷， 克服了現(xiàn)有技術中存在的問題。具體而言，本發(fā)明旨在提供一種新型的包載有化學藥物、基因及蛋白類藥物的，能夠穿越人體粘液屏障(尤其適用于眼、肺部)的靶向給藥脂質(zhì)體制劑。 本發(fā)明通過將聚乙二醇_維生素E琥珀酸酯包覆于脂質(zhì)體表面，可以顯著提高載藥脂質(zhì)體穿透人體粘液屏障的能力，增強載藥脂質(zhì)體在人眼、肺等表層覆蓋有粘液的靶向部位的滯留性，進而通過載藥脂質(zhì)體將治療性藥物高效地遞送到靶器官上皮組織，實現(xiàn)理想的治療效果。本發(fā)明通過以下技術方案實現(xiàn)一種穿越人體粘液屏障的靶向給藥脂質(zhì)體制劑， 其處方中含有治療性物質(zhì)、磷脂酰膽堿、磷脂酰甘油、留醇類、油酸或油酸鈉、親水性的聚乙二醇嵌段共聚物。其中，親水性的聚乙二醇嵌段共聚物為聚乙二醇1000-維生素E琥珀酸酯或聚乙二醇2000-維生素E琥珀酸酯或聚乙二醇3000-維生素E琥珀酸酯，包覆在脂質(zhì)體制劑的表面。該脂質(zhì)體制劑的處方中含有按重量份計359Γ60%的磷脂酰膽堿、219Γ40%磷脂酰甘油、1. 69Γ3. 5%甾醇類、0. 49Π). 85%油酸或油酸鈉、8. 5°/Γ22%親水性的聚乙二醇嵌段共聚物。其中，磷脂酰膽堿選自大豆磷脂酰膽堿、蛋黃磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、 二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、蛋黃卵磷脂中的一種或多種。其中，磷脂酰甘油選自大豆磷脂酰甘油、蛋黃磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、 二肉豆蔻酰磷脂酰甘油中的一種或多種。其中，甾醇類選自膽固醇、豆甾醇、谷甾醇中的一種或多種。其中，脂質(zhì)體粒徑的范圍為2(T200nm。一種制備穿越人體粘液屏障的靶向給藥脂質(zhì)體制劑的制備方法，如下所示
(1)將處方量的治療性物質(zhì)在一定量有機溶劑中攪拌溶解；
(2)將處方量的磷脂酰甘油在在少量的有機溶劑中溶解后與(1)混合攪拌溶解；
(3)將處方量的磷脂酰膽堿、留醇、油酸或油酸鈉在一定量的有機溶劑中溶解后與(2) 混合攪拌溶解；
(4)將(3)的混合均勻的溶液干燥、除盡有機溶劑后得到含藥粉末；
(5)取干燥粉末，加入一定量親水性的聚乙二醇嵌段共聚物的水溶液(0.5 2%g/ml， 重量/體積比)，溫度控制在40 70°C，并以200 600轉(zhuǎn)的速度攪拌1 2小時，得到水化溶液；(6)對所得水化溶液進行高壓均質(zhì)，壓力600 1200bar，均質(zhì)3 10次，用氫氧化鈉或醋酸調(diào)節(jié)PH值為6 8，得到脂質(zhì)體溶液；
(7)將所得的脂質(zhì)體液態(tài)溶液通過0.22 μ m微孔濾膜過濾，密封后保存。其中步驟(1)、(2)、(3)中的有機溶劑為甲醇、丙酮、乙腈、氯仿中的一種或多種； 其中步驟(4 )中干燥方法選自噴霧干燥、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)中的任意一種。


圖1為姜黃色素脂質(zhì)體在大鼠肺部靶向行為評價圖。
具體實施例方式以下通過實施例形式的具體實施方式
，對本發(fā)明的內(nèi)容作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發(fā)明的范圍僅限于以下實施例。凡基于本發(fā)明的內(nèi)容所實現(xiàn)的技術方案均屬于本發(fā)明的范圍。顯然，根據(jù)本發(fā)明的內(nèi)容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段， 在不脫離本發(fā)明的基本技術思想的前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。實施例1 處方
姜黃色素Ig
大豆磷脂酰膽堿25g
大豆磷脂酰甘油25g
膽固醇2g
油酸0. 5g
聚乙二醇3000-維生素E琥珀酸酯 IOg
制成IOOOml
制備工藝
(1)將處方量姜黃色素溶于50ml丙酮中攪拌溶解，75°C加熱攪拌至完全溶解。( 2 )將處方量大豆磷脂酰甘油于適量甲醇溶液中溶解完全，之后與(1)溶液混合。(3)將處方量大豆磷脂酰膽堿、膽固醇于IOOml丙酮，攪拌使其完全溶解。(4)將(2)所得溶液與(3)所得溶液混合均勻之后，采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將有機溶劑除盡，得到干燥載藥粉末。(5)取干燥粉末，加入IOOOmL聚乙二醇-維生素E琥珀酸酯水溶液(1%，重量-體積比)，溫度控制60°C，并以300rpm的轉(zhuǎn)速攪拌1小時，得到水化溶液。(6)對所得水化溶液進行高壓均質(zhì)，壓力SOiTlOOObar，均質(zhì)5次，用超純水定容至IOOOmL,用氫氧化鈉或醋酸調(diào)節(jié)PH值6 8，得到姜黃色素脂質(zhì)體溶液。(7)將所得脂質(zhì)體液態(tài)溶液通過0. 22 μ m微孔濾膜過濾，封裝后保存。實施例2 處方
地塞米松磷酸鈉Ig
大豆磷脂酰膽堿35g
大豆磷脂酰甘油15g膽固醇2g
油酸0. 5g
聚乙二醇2000-維牛素E琥珀酸酷_5g_
制成IOOOml
制備工藝
(1)將處方量地塞米松磷酸鈉于IOOml超純水混合溶液中攪拌溶解。(2 )將處方量大豆磷脂酰甘油于適量甲醇中溶解完全，之后與(1)溶液混合。(3)將處方量大豆磷脂酰膽堿、膽固醇于IOOml甲醇中溶解。(4 )將(2 )所得溶液與(3 )所得溶液混合均勻之后，采用噴霧干燥器將有機溶劑除盡，得到噴干粉末。(5)取一定量噴干粉末，加入IOOOmL聚乙二醇-維生素E琥珀酸酯水溶液(0. 5%， 重量_體積比)，溫度控制60°C，并以300rpm的轉(zhuǎn)速攪拌1小時，得到水化溶液。(6)對所得水化溶液進行高壓均質(zhì)，壓力SOiTlOOObar，均質(zhì)8次，用超純水定容至 IOOOmL,用氫氧化鈉或醋酸調(diào)節(jié)PH值6 8，得到姜黃色素脂質(zhì)體溶液，得到地塞米松磷酸鈉脂質(zhì)體溶液。(7)將所得脂質(zhì)體液態(tài)溶液通過0. 22 μ m微孔濾膜過濾，封裝后保存。實施例3 處方
克拉霉素Ig
蛋黃磷脂酰膽堿35g
蛋黃磷脂酰甘油15g
豆甾醇2g
油酸鈉0. 5g
聚乙二醇1000-維生素E琥珀酸酯 15g
制成IOOOml
制備工藝
(1)將處方量克拉霉素于IOOml無水乙醇中攪拌溶解。(2)將處方量大豆磷脂酰甘油于適量氯仿甲醇(1:1，體積比)混合溶液中溶解完全，之后與(1)溶液混合。(3)將大豆磷脂酰膽堿、膽固醇于IOOml氯仿甲醇(1 1，體積比)混合溶液中溶解。(4 )將(2 )所得溶液與(3 )所得溶液混合均勻之后，采用噴霧干燥器將有機溶劑除盡，得到噴干粉末。 (5)取一定量噴干粉末，加入IOOOmL聚乙二醇-維生素E琥珀酸酯溶液(1.5%，重量_體積比)，溫度控制60°C，并以300rpm的轉(zhuǎn)速攪拌1小時，得到水化溶液。(6)對所得水化溶液進行高壓均質(zhì)，壓力SOiTlOOObar，均質(zhì)3次，用超純水定容至 lOOOmL，用氫氧化鈉或醋酸調(diào)節(jié)PH值6 8，得到克拉霉素脂質(zhì)體溶液。(7)將所得脂質(zhì)體液態(tài)溶液通過0. 22 μ m微孔濾膜過濾，封裝后保存。實施例4天然生物胰島素干粉5g
大豆磷脂酰甘油35g
大豆磷脂酰膽堿35g
豆甾醇2g
油酸鈉0. 5g
聚乙二醇2000-維牛素E琥珀酸酷__20g_
制成IOOOml
制備工藝
(1)將處方量天然生物胰島素干粉溶于200ml酸性水溶液中攪拌溶解。(2)將處方量大豆磷脂酰甘油于適量甲醇中溶解完全，之后與(1)溶液混合。(3)將處方量大豆磷脂酰膽堿、膽固醇于適量氯仿甲醇溶液中溶解。( 4 )將(2 )所得溶液與(3 )所得溶液混合均勻之后，采用噴霧干燥器將有機溶劑除盡，得到噴干粉末。(5)取一定量噴干粉末，加入IOOOmL聚乙二醇-維生素E琥珀酸酯溶液(2%，重量_體積比)，溫度控制60°C，并以300rpm的轉(zhuǎn)速攪拌2小時，得到水化溶液。(6)對所得水化溶液進行高壓均質(zhì)，壓力SOiTlOOObar，均質(zhì)10次，用超純水定容至IOOOmL,用氫氧化鈉或醋酸調(diào)節(jié)PH值6 8，得到胰島素脂質(zhì)體溶液。(7)將所得脂質(zhì)體液態(tài)溶液通過0. 22 μ m微孔濾膜過濾，封裝后保存。實施例5
多西他賽2g
蛋黃磷脂酰甘油70g
蛋黃磷脂酰膽堿30g
谷甾醇2g
油酸鈉0. 5g
聚乙二醇3000-維生素E琥珀酸酯 20g_
制成1000ml
制備工藝
(1)將處方量多西他賽溶于50ml甲醇中攪拌溶解。(2)將處方量蛋黃磷脂酰甘油于適量氯仿甲醇溶液(1:1，V/V)中溶解完全，之后與(1)溶液混合。(3)將處方量蛋黃磷脂酰膽堿、膽固醇于適量氯仿甲醇溶液中(1:1，V/V)溶解。(4)將(2)所得溶液與(3)所得溶液混合均勻之后，采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將有機溶劑除盡，得到干燥粉末。(5)取一定量干燥粉末，加入IOOOmL聚乙二醇-維生素E琥珀酸酯溶液(2%，重量_體積比)，溫度控制60°C，并以300rpm的轉(zhuǎn)速攪拌1小時，得到水化溶液。(6)對所得水化溶液進行高壓均質(zhì)，壓力SOiTlOOObar，均質(zhì)5次，用超純水定容至 IOOOmL,用氫氧化鈉或醋酸調(diào)節(jié)PH值6 8，得到胰島素脂質(zhì)體溶液。(7)將所得脂質(zhì)體液態(tài)溶液通過0. 22 μ m微孔濾膜過濾，封裝后保存。 比較實施例1經(jīng)TPGS表面包覆后脂質(zhì)體粒子理化性質(zhì)的改變本比較實施例分別從脂質(zhì)體的粒徑(Size)、表面電勢(Zeta Potential)等方面考察不同處方組成的脂質(zhì)的理化性質(zhì)的差別，證明經(jīng)聚乙二醇-維生素E琥珀酸酯(TPGS)可以穩(wěn)定地包覆于脂質(zhì)體粒子表面，進而為本發(fā)明的具體應用提供可靠的物質(zhì)基礎。不同處方組成姜黃色素脂質(zhì)體的制備按照實施例1中的制備方法，僅在處方中用相同體積的PBS緩沖液(IOmM, pH6. 0 8. 0)替代聚乙二醇-維生素E琥珀酸酯水溶液 (1%，W/V)作為水化液，制得常規(guī)姜黃色素脂質(zhì)體；按照實施例1中的處方組成及制備方法制得TPGS-姜黃色素脂質(zhì)體-1 ；按照實施例1中相同的制備方法，僅在處方中用相同體積的聚乙二醇-維生素E琥珀酸酯水溶液(2%，W/V)替代乙二醇-維生素E琥珀酸酯水溶液 (1%，ff/V)作為水化液，制得TPGS-姜黃色素脂質(zhì)體_2。 粒徑及表面電勢的測定利用Malvern sizer粒度儀依次測定上述三種脂質(zhì)體的粒徑、粒徑分布及表面電勢，所得結果見表1。姜黃色素包封率的測定取適量不同處方組成的樣品，上樣到預先制備好的葡聚糖凝膠柱，分離除去游離藥物結晶，收集得到載藥脂質(zhì)體。利用高效液相色譜儀測定姜黃色素含量，并計算得到各不同組成脂質(zhì)體的姜黃色素包封率，結果見表1
表1不同處方組成的姜黃色素脂質(zhì)體的理化性質(zhì)數(shù)據(jù)
權利要求
1.一種穿越人體粘液屏障的靶向給藥脂質(zhì)體制劑，其特征在于脂質(zhì)體制劑的處方中含有治療性物質(zhì)、磷脂酰膽堿、磷脂酰甘油、留醇類、油酸或油酸鈉、親水性的聚乙二醇嵌段共聚物。
2.根據(jù)權利要求1所述的穿越人體粘液屏障的靶向給藥脂質(zhì)體制劑，其特征在于親水性的聚乙二醇嵌段共聚物包覆在脂質(zhì)體制劑的表面。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的脂質(zhì)體制劑，其特征在于親水性的聚乙二醇嵌段共聚物為聚乙二醇1000-維生素E琥珀酸酯或聚乙二醇2000-維生素E琥珀酸酯或聚乙二醇 3000-維生素E琥珀酸酯。
4.根據(jù)權利要求1或2或3所述的脂質(zhì)體制劑，其特征在于該脂質(zhì)體制劑的處方中含有按重量份計35% 60%的磷脂酰膽堿、21% 40%磷脂酰甘油、1. 6% 3. 5%留醇類、0. 4% 0. 85% 油酸或油酸鈉、8. 59Γ22%親水性的聚乙二醇嵌段共聚物。
5.根據(jù)權利要求1至4所述的脂質(zhì)體制劑，其中磷脂酰膽堿選自大豆磷脂酰膽堿、蛋黃磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、蛋黃卵磷脂中的一種或多種。
6.根據(jù)權利要求1至4所述的脂質(zhì)體制劑，其中磷脂酰甘油選自大豆磷脂酰甘油、蛋黃磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油中的一種或多種。
7.根據(jù)權利要求1至4所述的脂質(zhì)體制劑，其中甾醇類選自膽固醇、豆甾醇、谷甾醇中的一種或多種。
8.根據(jù)權利要求1-6中任意一項所述的脂質(zhì)體制劑，其中脂質(zhì)體粒徑的范圍為 20 200nm。
9.一種制備穿越人體粘液屏障的靶向給藥脂質(zhì)體制劑的制備方法，如下所示(1)將處方量的治療性物質(zhì)在一定量有機溶劑中攪拌溶解；(2)將處方量的磷脂酰甘油在在少量的有機溶劑中溶解后與(1)混合攪拌溶解；(3)將處方量的磷脂酰膽堿、留醇、油酸或油酸鈉在一定量的有機溶劑中溶解后與(2) 混合攪拌溶解；(4)將(3)的混合均勻的溶液干燥、除盡有機溶劑后得到含藥粉末；(5)取干燥粉末，加入一定量親水性的聚乙二醇嵌段共聚物的水溶液(0.5 2%g/ml， 重量/體積比)，溫度控制在40 70°C，并以200 600轉(zhuǎn)的速度攪拌1 2小時，得到水化溶液；(6)對所得水化溶液進行高壓均質(zhì)，壓力600 1200bar，均質(zhì)3 10次，用氫氧化鈉或醋酸調(diào)節(jié)PH值為6 8，得到脂質(zhì)體溶液；(7)將所得的脂質(zhì)體液態(tài)溶液通過0.22 μ m微孔濾膜過濾，密封后保存。
10.根據(jù)權利要求9所述的穿越人體粘液屏障的靶向給藥脂質(zhì)體制劑的制備方法，其中步驟(1)、(2)、(3)中的有機溶劑為甲醇、丙酮、乙腈、氯仿中的一種或多種；其中步驟(4) 中干燥方法選自噴霧干燥、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)中的任意一種。
全文摘要
一種可以穿越人體粘液屏障的靶向給藥脂質(zhì)體，將重量百分比為8.5%~22%的親水性的聚乙二醇嵌段共聚物、特別是將聚乙二醇-維生素E琥珀酸酯包覆在載藥脂質(zhì)體粒子后，該脂質(zhì)體粒子穿越人體粘液屏障(主要為肺及眼部粘液)的比例及速率顯著提高提高數(shù)百倍，克服人體粘液屏障對微小粒子的排斥、位阻作用，對具有病變的粘液組織器官提高藥物的治療療效。同時，通過聚乙二醇-維生素E琥珀酸酯的包覆可提高載藥脂質(zhì)體制備過程中的藥物包載效率。因此，該類脂質(zhì)體有潛力成為一種尤其適用于癌癥的新型多功能藥物載體。
文檔編號A61K31/355GK102379850SQ201110344228
公開日2012年3月21日 申請日期2011年11月4日 優(yōu)先權日2011年11月4日
發(fā)明者劉玉靜, 劉紅星, 周麗瑩, 張揚, 肖萱, 苗博龍, 趙焰平 申請人:北京泰德制藥股份有限公司