專(zhuān)利名稱(chēng)：一種薄荷酚酸提取物及其在制備抗呼吸道合胞病毒藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種薄荷酚酸提取物及其在制備抗呼吸道合胞病毒藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus，RSV)是嬰幼兒和低齡兒童急性下呼吸道感染的重要病原體，超過(guò)90%的兒童在2歲以前感染過(guò)RSV。RSV感染也是成人特別是老年人下呼吸道感染的重要病因，65歲以上老年人的下呼吸道和循環(huán)系統(tǒng)死亡中多與RSV相關(guān)者高達(dá)78%。而目前對(duì)RSV感染缺乏特異有效的治療方法?？共《舅幬锊《具?(利巴韋林，Ribavirin)是目前FDA批準(zhǔn)的唯一用于防治RSV感染的化學(xué)治療藥物，但該藥由于存在骨髓細(xì)胞毒性，可引起頭痛、白細(xì)胞減少、不可逆貧血、血清膽紅素升高等副作用， 其臨床應(yīng)用受到限制，只嚴(yán)格用于高危和病情嚴(yán)重的患兒，且近年來(lái)其療效倍受爭(zhēng)議。人類(lèi)單克隆抗體palivizumab (Synagis)和靜脈用免疫球蛋白(RSV-IGIV)雖已經(jīng)注冊(cè)使用，療效較好，但由于存在治療費(fèi)用和血清制品的安全問(wèn)題，在預(yù)防和治療RSV感染時(shí)，仍需謹(jǐn)慎考慮，而不能普遍應(yīng)用于臨床。迄今臨床還沒(méi)有疫苗用于預(yù)防RSV感染。因此開(kāi)發(fā)研制藥效可靠、毒副作用小的防治RSV感染的藥物，仍是目前國(guó)際上有待解決的重要課題之一。中醫(yī)藥在預(yù)防和治療RSV感染方面具有一定優(yōu)勢(shì)。臨床多根據(jù)辨證論治原則， 選擇解表藥、清熱解毒藥等治療RSV感染疾病，具有良好療效。薄荷為唇形科植物Mentha haplocalyx Briq的干燥地上部分，為傳統(tǒng)的辛涼解表藥，味辛，性涼，具有疏風(fēng)、散熱、疏肝、辟穢、解毒的功效。薄荷中含有大量的酚酸類(lèi)成分，如咖啡酸、迷迭香酸、順式丹酚酸、反式丹酚酸J、紫草酸、丹酚酸B、丹參素、丁香酸、香草酸、原兒茶酸等成分。申請(qǐng)人:研究發(fā)現(xiàn)，薄荷提取物具有良好的抗RSV作用，其抗RSV作用的主要藥效成分為酚酸類(lèi)物質(zhì)。目前，未見(jiàn)薄荷酚酸類(lèi)成分及其制備工藝，以及抗RSV作用的相關(guān)研究報(bào)道和專(zhuān)利文獻(xiàn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種薄荷酚酸提取物，本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供其制備方法，本發(fā)明的第三個(gè)目的在于提供其質(zhì)量檢測(cè)方法，本發(fā)明的第四個(gè)目的在于提供其在制備抗呼吸道合胞病毒藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明薄荷酚酸提取物的制備方法包括如下步驟步驟1 取薄荷藥材，水或乙醇回流提??；步驟2 弱極性或中等極性大孔吸附樹(shù)脂純化；該薄荷酚酸提取物中總酚酸含量為30 90% ；該薄荷酚酸提取物中總酚酸含量?jī)?yōu)選為50 80%。將以上所得提取物，加入常規(guī)輔料，按常規(guī)的制劑工藝制成藥劑學(xué)可接受的任意常規(guī)劑型，包括膠囊劑、片劑、顆粒劑、凝膠劑、緩釋劑、口服液、注射劑。上述步驟1中，薄荷藥材用0 70%乙醇回流提取2 4次，每次提取0. 5 2小時(shí)，合并提取液，減壓回收溶劑至干，得薄荷水或乙醇提取物，其中，優(yōu)選的方法為薄荷藥材用16倍量30%乙醇提取3次，每次1. 5h ；上述步驟2中，將步驟1所得薄荷水或乙醇提取物加水分散溶解，以薄荷藥材計(jì)， 上樣液濃度為0. 05 0. 2g/mL,以2000 4000r/min的轉(zhuǎn)速離心20 40min，離心后取上清液，使用冰醋酸調(diào)節(jié)上樣液PH值為2 4，通過(guò)弱極性或中等極性大孔吸附樹(shù)脂，生藥量與樹(shù)脂體積比為1 4 8，吸附流速為1 3BV/h，樹(shù)脂柱徑高比為1 6 10，用 0 30%乙醇洗脫1 3BV進(jìn)行除雜，除雜流速為1 3BV/h，棄去，用50 90%乙醇洗脫 3 7BV，洗脫流速為3 5BV/h，收集乙醇洗脫液，回收溶劑，干燥，即得薄荷酚酸提取物； 優(yōu)選的方法為薄荷水或乙醇提取物加水分散溶解，以薄荷藥材計(jì)，上樣液濃度為為0. Ig/ mL,以3000r/min的速度離心30min，取上清液，使用冰醋酸調(diào)節(jié)上樣液pH值為3，上樣于 HPD-400型大孔吸附樹(shù)脂柱，生藥量與樹(shù)脂體積比為1 6，吸附流速為2BV/h，樹(shù)脂柱徑高比為1 9，待吸附結(jié)束后，用20%乙醇洗脫2BV進(jìn)行除雜，除雜流速為2BV/h，棄去，再用 70 %乙醇洗脫3BV，洗脫流速為4BV/h，收集70 %乙醇洗脫液，回收溶劑，減壓干燥，即得薄荷酚酸提取物；上述步驟2中大孔吸附樹(shù)脂為D101、AB-8、HPD-400型大孔吸附樹(shù)脂，優(yōu)選為 HPD-400型大孔吸附樹(shù)脂；上述制備方法中，優(yōu)選的方法為薄荷藥材用16倍量30%乙醇提取3次，每次 1.5h，合并乙醇提取液，減壓回收溶劑，得到薄荷乙醇提取物，加水分散溶解，以薄荷藥材計(jì)，上樣液濃度為0. lg/mL,以3000r/min的速度離心30min，取上清液，使用冰醋酸調(diào)節(jié)上樣液PH值為3，上樣于HPD-400型大孔吸附樹(shù)脂柱，生藥量與樹(shù)脂體積比為1 6，吸附流速為2BV/h，樹(shù)脂柱徑高比為1 9，待吸附結(jié)束后，用20%乙醇洗脫2BV進(jìn)行除雜，除雜流速為2BV/h，棄去，再用70%乙醇洗脫3BV，洗脫流速為4BV/h，收集70%乙醇洗脫液，回收溶齊U，減壓干燥，即得薄荷酚酸提取物；本發(fā)明薄荷薄荷酚酸提取物為薄荷經(jīng)水或乙醇提取再通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂純化得至IJ，經(jīng)抗呼吸道合胞病毒活性實(shí)驗(yàn)表明，具有良好的抑制呼吸道合胞病毒活性的作用。實(shí)驗(yàn)例1實(shí)施例1薄荷酚酸提取物抑制呼吸道合胞病毒活性實(shí)驗(yàn)1.細(xì)胞毒性試驗(yàn)HEp 2細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，置37°C CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天，待細(xì)胞長(zhǎng)成單層后，去掉培養(yǎng)液，加入0. ImL維持液對(duì)半稀釋的供試品溶液，同時(shí)設(shè)0. ImL維持液作為空白對(duì)照。繼續(xù)置37°C CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)2 5天，每天在光鏡下觀(guān)察細(xì)胞病變情況，包括細(xì)胞單層的脫落、變圓、皺縮、胞漿中顆粒和空泡的形成。計(jì)算半毒性濃度(TC50)。2.抗病毒試驗(yàn) HEp 2細(xì)胞培養(yǎng)方法同上，去掉培養(yǎng)液，加入0. ImL(100TCID50/0. ImL病毒)病毒懸液和0. ImL的最大細(xì)胞無(wú)毒濃度(指在光鏡下觀(guān)察檢測(cè)到的對(duì)細(xì)胞不產(chǎn)生毒性的供試品最大濃度)為最高濃度對(duì)半稀釋后的供試品溶液，同時(shí)以不含供試品的維持液作為空白對(duì)照。96孔細(xì)胞培養(yǎng)板置37°C CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 5天。光鏡下檢測(cè)病毒引起的細(xì)胞病變情況。以病毒唑?yàn)殛?yáng)性對(duì)照藥物，病毒繁殖的減少以病毒對(duì)照的百分?jǐn)?shù)計(jì)算。計(jì)算半數(shù)抑制濃度(EC5tl)和治療指數(shù)TI = TC50/EC50O3.薄荷酚酸提取物抗呼吸道合胞病毒活性(1)薄荷酚酸提取物 TC5tl 為 0. 31mg/mL,病毒唑 TC5tl 為 0. 18mg/mL。(2)薄荷酚酸提取物對(duì)呼吸道合胞病毒的抑制作用見(jiàn)表1，計(jì)算其EC5tl為4. 23 μ g/ mL, TI 為 73. 29 ；病毒唑 EC50 為 5. 26 μ g/mL, TI 為 34. 22。表1薄荷酚酸提取物對(duì)呼吸道合胞病毒的抑制作用
權(quán)利要求
1.一種具有抗呼吸道合胞病毒作用的薄荷酚酸提取物，其特征在于該提取物的制備方法包括如下步驟步驟1 取薄荷藥材，用水或乙醇回流提取；步驟2 弱極性或中等極性大孔吸附樹(shù)脂純化；該薄荷酚酸提取物中總酚酸含量為30 90%。
2.如權(quán)利要求1所述的薄荷酚酸提取物，其特征在于步驟1中，薄荷藥材用0 70% 乙醇回流提取2 4次，每次提取0. 5 2小時(shí)，合并提取液，減壓回收溶劑至于，得薄荷水或乙醇提取物。
3.如權(quán)利要求1所述的薄荷酚酸提取物，其特征在于步驟2中，將步驟1所得水或乙醇提取物加水分散溶解，以薄荷藥材計(jì)，上樣液濃度為0. 05 0. 2g/mL,以2000 4000r/min 的轉(zhuǎn)速離心20 40min，離心后取上清液，使用冰醋酸調(diào)節(jié)上樣液pH值為2 4，通過(guò)弱極性或中等極性大孔吸附樹(shù)脂，生藥量與樹(shù)脂體積比為1 4 8，樹(shù)脂柱徑高比為1 6 10，吸附流速為1 3BV/h，用0 30%乙醇洗脫1 3BV進(jìn)行除雜，除雜流速為1 3BV/ h，棄去，用50 90%乙醇洗脫3 7BV，洗脫流速為3 5BV/h，收集乙醇洗脫液，回收溶齊U，干燥，即得薄荷酚酸提取物。
4.如權(quán)利要求1 3任一所述的薄荷酚酸提取物，其特征在于加入常規(guī)輔料，按常規(guī)的制劑工藝制成藥劑學(xué)可接受的任意常規(guī)劑型，包括膠囊劑、片劑、丸劑、口服液體制劑、注射齊U、顆粒劑、凝膠劑、緩釋劑。
5.如權(quán)利要求1 3任一所述的薄荷酚酸提取物的制備方法，其特征在于步驟1中，薄荷藥材用0 70%乙醇回流提取2 4次，每次提取0. 5 2小時(shí)，合并提取液，減壓回收溶劑至干，得薄荷水或乙醇提取物。
6.如權(quán)利要求1 3任一所述的薄荷酚酸提取物的制備方法，其特征在于步驟2中，將步驟1所得水或乙醇提取物加水分散溶解，以薄荷藥材計(jì)，上樣液濃度為0. 05 0. 2g/mL, 以2000 4000r/min的轉(zhuǎn)速離心20 40min，離心后取上清液，使用冰醋酸調(diào)節(jié)上樣液pH 值為2 4，通過(guò)弱極性或中等極性大孔吸附樹(shù)脂，生藥量與樹(shù)脂體積比為1 4 8，樹(shù)脂柱徑高比為1 6 10，吸附流速為1 3BV/h，用0 30%乙醇洗脫1 3BV進(jìn)行除雜， 除雜流速為1 3BV/h，棄去，用50 90%乙醇洗脫3 7BV，洗脫流速為3 5BV/h，收集乙醇洗脫液，回收溶劑，干燥，即得薄荷酚酸提取物。
7.如權(quán)利要求1 3任一所述的薄荷酚酸提取物的制備方法，其特征在于步驟2中所用大孔吸附樹(shù)脂為D101、AB-8、HPD-400型大孔吸附樹(shù)脂。
8.如權(quán)利要求1 3任一所述的薄荷酚酸提取物在制備抗呼吸道合胞病毒藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種薄荷酚酸提取物及其制備方法以及其在制備抗呼吸道合胞病毒藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明薄荷酚酸提取物通過(guò)水或乙醇加熱回流提取，再通過(guò)弱極性或中等極性大孔吸附樹(shù)脂分離純化得到薄荷酚酸提取物；該薄荷酚酸提取物具有良好的抗呼吸道合胞病毒作用，可以制備成任何常用劑型。
文檔編號(hào)A61P31/14GK102319287SQ20111022916
公開(kāi)日2012年1月18日 申請(qǐng)日期2011年8月11日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月11日
發(fā)明者劉斌, 姜艷艷, 張凡, 石任兵 申請(qǐng)人:劉斌