專利名稱：一種pH敏感多柔比星納米脂質(zhì)體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及一種PH敏感多柔比星納米脂質(zhì)體及其制備方法。
背景技術(shù)：
多柔比星(Doxorubicin)，又俗稱阿霉素，羥柔紅霉素，是臨床上常用的抗生素類抗腫瘤藥，抗癌譜廣，療效廣，可治療多種腫瘤，但該藥對心臟具有嚴(yán)重的毒副作用，尤其是嚴(yán)重的心臟損害，骨髓抑制等副反應(yīng)限制了它在臨床上的應(yīng)用。多年來，各國科學(xué)家一直在尋找著降低其毒副反應(yīng)的有效方法，如調(diào)整給藥方案，研制心臟毒性低的阿霉素類似物，聯(lián)合用藥以及改變藥物劑型的方式來減輕其嚴(yán)重的心臟毒性。脂質(zhì)體包裹阿霉素比 Sf I^MlJ^ 50-70% (Budai M, et al. Liposomes as drug carrier systems preparation, classification and therapeutic advantages of liposomes. Acta Pharm Hung. ,2001,71(1) : 114-8.)，但是脂質(zhì)體由于其易被巨噬細(xì)胞吞噬，在正常組織中的含量依然很高，為了進(jìn)一步降低阿霉素脂質(zhì)體的藥物毒性，利用靶向物質(zhì)或粒子對脂質(zhì)體表面或內(nèi)部進(jìn)行修飾，使得脂質(zhì)體克服藥物在體內(nèi)輸送過程中所遇到的各種生理屏障，將藥物送到特定的靶位，提高藥物的靶向性。PH敏感性脂質(zhì)體就是其中的一種，利用腫瘤組織在局部缺血時，腫瘤間質(zhì)液會出現(xiàn)異常酸化現(xiàn)象，PH值比正常組織低，利用這一特性科學(xué)家采用了不同方法進(jìn)行了表面修飾，如在脂質(zhì)體表面嫁接具有PH敏感的生物高分子材料或使用具有PH敏感性的磷脂材料來制備脂質(zhì)體。羧甲基殼聚糖(CMCT)是殼聚糖經(jīng)羧甲基化反應(yīng)后生成的一種水溶性衍生物，其性質(zhì)穩(wěn)定，生物相容性和可降解性好，毒性較小。它既含有弱堿陽離子(-NH3+)基團(tuán)，又含有弱酸陰離子(-COO—)基團(tuán)，是一種兩親性聚電解質(zhì)。由于其具有PH敏感，在不同的pH值條件下，其鏈段的構(gòu)象不同，利用這一特性，將羧甲基殼聚糖修飾到脂質(zhì)體表面，使得在不同PH值下由于構(gòu)象不同其作用力將脂質(zhì)體內(nèi)包裹的藥物釋放，達(dá)到pH敏感。除此之外，羧甲基殼聚糖具有良好的親水性，將其作為立體穩(wěn)定劑對脂質(zhì)體進(jìn)行修飾(仝新勇等.不同量羧甲基殼聚糖修飾紫杉醇脂質(zhì)體對大鼠體內(nèi)藥動學(xué)的影響.中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)， 2006,11 (3) :328-331.),可以有效改善脂質(zhì)體顆粒表面的親水性，CMCT的親水鏈包裹在脂質(zhì)體周圍并對血液中的蛋白有排斥作用，可以延緩調(diào)理作用，達(dá)到體內(nèi)長循環(huán)隱形的目的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對鹽酸多柔比星脂質(zhì)體的應(yīng)用中的不足和羧甲基殼聚糖獨(dú)特的PH敏感特性，提供一種pH敏感納米多柔比星脂質(zhì)體藥劑，由鹽酸多柔比星、卵磷脂、膽固醇、維生素E、羧甲基殼聚糖等制備而成。本發(fā)明的pH敏感納米紫杉醇脂質(zhì)體，由下列質(zhì)量分?jǐn)?shù)比的組分組成
3鹽酸多柔比星3.2-16 份卵磷脂16-80 份膽固醇4-20 份維生素E0.16-0.8 份羧甲基殼聚糖1-5份凍干賦形劑16-100 份緩沖液800-1000 份其中，優(yōu)選的是由下列質(zhì)量份數(shù)比的成分組成
鹽酸多柔比星4-12 份卵磷脂20-60 份膽固醇4-15 份維生素E0.2-0.6 份羧甲基殼聚糖1.25-3.75 份凍干賦形劑20-80 份緩沖液800-1000 份所述的凍干賦形劑為乳糖、蔗糖、氨基乙酸、山梨糖、葡萄糖、甘露醇或他們的混合物。本發(fā)明PH敏感納米多柔比星脂質(zhì)體的制備包括以下步驟(1)將鹽酸多柔比星溶解于0.9%的氯化鈉溶液中，得到與血漿等滲的鹽酸多柔比星溶液；(2)按配方稱取相應(yīng)的磷脂、膽固醇和維生素E放入適當(dāng)容器中，然后加入無水乙醇超聲震蕩溶解成溶液，將此溶液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中；在40°C水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除有機(jī)溶劑，成膜；加入溶有凍干賦形劑的緩沖溶液(PH = 4. 0)進(jìn)行洗膜、水化，間隔0. 5h超聲一次，洗脫池，制得空白脂質(zhì)體；(3)將制備的空白脂質(zhì)體反復(fù)凍融3-4次后，用超聲細(xì)胞粉碎機(jī)間隙超聲或高壓均質(zhì)制得納米級的空白脂質(zhì)體，過0. 22 μ m濾膜得到粒徑均一的空白納米脂質(zhì)體；(4)用緩沖溶液(pH = 8.0)調(diào)節(jié)空白納米脂質(zhì)體的外水相pH值至6. 8-7. 4后，再加入溶有鹽酸多柔比星的等滲氯化鈉溶液，通過PH梯度法將鹽酸多柔比星載入空白納米脂質(zhì)體中，在37°C水浴下水合lh，制得鹽酸多柔比星脂質(zhì)體；(5)將羧甲基殼聚糖溶液加入到鹽酸多柔比星脂質(zhì)體中，在37°C水浴下水合2h， 制的PH敏感納米多柔比星脂質(zhì)體。所述的卵磷脂選自蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂或氫化蛋黃卵磷脂。所述的羧甲基殼聚糖的羧甲基取代度為0. 6-1. 2，分子量為3000-100000。所述的緩沖液選自磷酸鹽緩沖溶液或0. 9%氯化鈉的生理鹽水。
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所述的細(xì)胞粉碎機(jī)間歇超聲空白脂質(zhì)體的優(yōu)化功率為200-300W，間隙時間5s，超聲時間3s，工作時間為30min ；或采用高壓均質(zhì)的優(yōu)化壓力參數(shù)為40_90MPa，循環(huán)次數(shù)為 6-15 次。采用本發(fā)明的方法，可以制備小粒徑、性能穩(wěn)定的pH敏感納米多柔比星脂質(zhì)體， 通過反復(fù)凍融的方法可以提高其藥脂比，羧甲基殼聚糖的修飾可以使其具備PH敏感性能和延長其體內(nèi)循環(huán)性能。本發(fā)明采用無水乙醇作為有機(jī)溶劑，排除了文獻(xiàn)中使用的毒性較大的有機(jī)溶劑氯仿或甲醇的殘留，減少了環(huán)境污染，降低了生產(chǎn)成本，更適合工業(yè)化生產(chǎn)。


圖1為羧甲基殼聚糖修飾后的脂質(zhì)體透射電鏡圖。圖2為羧甲基殼聚糖修飾后的脂質(zhì)體粒徑分布圖。
具體實(shí)施例方式下面通過實(shí)驗(yàn)實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行具體描述，有必要指出的是本實(shí)施例只用于對本發(fā)明做進(jìn)一步說明，不能理解為對本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，該領(lǐng)域的技術(shù)熟練人員可以根據(jù)上述本發(fā)明的內(nèi)容做出一些非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整。實(shí)施例1在無菌條件下稱取卵磷脂2g，膽固醇0. 5g，維生素E 0. 025g。將上述物料置于適當(dāng)容器中，加入無水乙醇IOOml超聲震蕩至完全溶解成溶液，將上述溶液轉(zhuǎn)移至梨形瓶中， 在恒溫水浴中減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至形成透明淡黃色薄膜。往梨形瓶中注入溶有凍干賦形劑2g 的PBS(pH = 4. 0)緩沖溶液IOOml洗脫，緩緩洗膜。洗膜后經(jīng)反復(fù)凍融3_4次用超聲細(xì)胞粉碎機(jī)在功率為200-300W，間隙時間k，超聲時間3s，工作時間為30min超聲粉碎，用0. 22 微米濾膜過濾除菌，用PBS (pH = 8. 0)緩沖溶液調(diào)節(jié)其外水相至pH = 6. 8，加入用0. 9%的氯化鈉溶液溶解的鹽酸多柔比星0. 2g水合池，加入含有0. 13g羧甲基殼聚糖的水溶液，水合Ih后得到pH敏感多柔比星納米脂質(zhì)體溶液。實(shí)施例2在無菌條件下稱取卵磷脂1. 6g，膽固醇0. 4g，維生素E 0. 020g。將上述物料置于適當(dāng)容器中，加入無水乙醇IOOml超聲震蕩至完全溶解成溶液，將上述溶液轉(zhuǎn)移至梨形瓶中，在恒溫水浴中減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至形成透明淡黃色薄膜。取加入凍干賦形劑1. 6g的PBS(pH =4. 0)緩沖溶液IOOml洗脫，緩緩洗膜。洗膜后經(jīng)反復(fù)凍融3-4次，采用高壓均質(zhì)，SOMPa 下均質(zhì)10次，用0. 22微米濾膜過濾除菌，用PBS (pH = 8. 0)緩沖溶液調(diào)節(jié)其外水相至pH =7. 2，加入用0. 9 %的氯化鈉溶液溶解的鹽酸多柔比星0. 2g水合2h，加入含有0. 16g羧甲基殼聚糖的水溶液，水合Ih得到pH敏感多柔比星納米脂質(zhì)體溶液。
權(quán)利要求
1.一種pH敏感多柔比星納米脂質(zhì)體，其特征在于，是由以下重量百分比的組分組成 鹽酸多柔比星3. 2-16份，卵磷脂16-80份，膽固醇4-20份，維生素E 0. 16-0. 8份，羧甲基殼聚糖1-5份，凍干賦形劑16-100份，緩沖液800-1000份；將卵磷脂、膽固醇和維生素E， 分別按比例稱取相應(yīng)的重量放入適當(dāng)容器中，然后加入無水乙醇超聲震蕩溶解成溶液，將此溶液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，在40°C水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)減壓除去無水乙醇后成膜，加入比例量的溶有凍干賦形劑的緩沖溶液(pH = 4. 0)洗膜，水化、間隔0.證超聲一次，水化池，制得空白脂質(zhì)體，將空白脂質(zhì)體反復(fù)凍融3-4次后，用超聲細(xì)胞粉碎機(jī)間隙超聲或高壓均質(zhì)制得納米脂質(zhì)體，過0. 22 μ m濾膜后，用緩沖溶液(pH = 8. 0)調(diào)節(jié)外水相pH值至6. 8-7. 4后加入溶有鹽酸多柔比星的等滲氯化鈉溶液通過PH梯度法將鹽酸多柔比星載入空白納米脂質(zhì)體中，在37°C水浴下水合lh，將羧甲基殼聚糖溶液加入到鹽酸多柔比星納米脂質(zhì)體中，在 37°C水浴下水合池，制的pH敏感多柔比星納米脂質(zhì)體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種PH敏感多柔比星納米脂質(zhì)體，其特征在于，是由以下重量百分比的組分組成鹽酸多柔比星4-12份，卵磷脂20-60份，膽固醇4-15份，維生素E 0. 2-0. 6份，羧甲基殼聚糖1. 25-3. 75份，凍干賦形劑20-80份，緩沖液800-1000份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的pH敏感納米多柔比星脂質(zhì)體，其特征在于所述凍干賦形劑為乳糖、蔗糖、氨基乙酸、山梨糖、葡萄糖、海藻糖或他們的混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-2所述的一種pH敏感多柔比星納米脂質(zhì)體，其特征在于，所述的卵磷脂選自蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂或氫化蛋黃卵磷脂。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-2所述的pH敏感多柔比星納米脂質(zhì)體，其特征在于所述的羧甲基殼聚糖的羧甲基取代度為0. 6-1. 2，分子量為3000-100000。
6.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的制備pH敏感納米多柔比星脂質(zhì)體的方法，其特征在于所述的緩沖液選自磷酸鹽緩沖溶液或0. 9 %的氯化鈉生理鹽水。
7.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的制備PH敏感納米多柔比星脂質(zhì)體的方法，其特征在于將所得空白脂質(zhì)體使用細(xì)胞粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎的時候，其功率為200-300W，間隙時間5s，超聲時間3s，工作時間為30min ；或?qū)⑺每瞻字|(zhì)體進(jìn)行高壓均質(zhì)，壓力為40_90MPa，循環(huán)次數(shù)為6-15次。
全文摘要
本發(fā)明涉及到一種提高脂質(zhì)體包覆鹽酸多柔比星含量的方法。本發(fā)明中的脂質(zhì)體是由鹽酸多柔比星、磷脂、膽固醇、維生素E、凍干賦形劑、羧甲基殼聚糖等組成。所制備的脂質(zhì)體所包覆的鹽酸多柔比星的含量較高，且具有pH敏感性和長循環(huán)主動靶向給藥功能。
文檔編號A61K31/704GK102225052SQ201110154329
公開日2011年10月26日 申請日期2011年6月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月9日
發(fā)明者徐云龍, 楊善祥, 趙崇軍, 錢秀珍 申請人:上海微納科技有限公司