專利名稱：人參皂苷Rd在制備抗抑郁癥藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)療衛(wèi)生領(lǐng)域，涉及天然化合物在醫(yī)藥領(lǐng)域中的用途，更具體的是人 參皂苷Rd在制備抗抑郁癥藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
人參皂苷Rd (Ginsenoside Rd)，分子式為C48H82O18 ；分子量為947. 12 ；屬于原 人參二醇型皂苷。它的中文化學(xué)名為20 —(s) —原人參二醇一 3
—20—0—i3—D —吡喃葡萄糖苷。CAS 52705-93-8。其結(jié)構(gòu)式如圖5。已有研究表明，人參皂苷Rd能減少乙酰膽堿引起的豚鼠離體子宮的收縮，對(duì)大鼠 有減慢心率和雙相性血壓(先升后降)作用，對(duì)貓的行為和腦電圖顯示中等的抑制，此外， 人參皂苷Rd還有抗疲勞作用。我們可以發(fā)現(xiàn)至今未有關(guān)于人參皂苷單體Rd的抗抑郁研究。抑郁癥(expression)屬于情感性精神障礙，是一種以顯著而持久的心境低落為主 要特征的綜合癥。隨著現(xiàn)代社會(huì)經(jīng)濟(jì)的高速發(fā)展以及人們精神壓力的增強(qiáng)，抑郁癥的發(fā)病 率逐年提高，已成為“21世紀(jì)的流行病”，并且還在以每年113%的增長率逐年遞增。世界衛(wèi) 生組織(WHO)在《2001年世界衛(wèi)生報(bào)告》中指出，抑郁癥已成為世界第四大疾患，而到2020 年時(shí)可能成為僅次于缺血性心臟病的第二代疾病。我國的抑郁癥患病情況也不容樂觀約 有20%的人有抑郁癥狀，有7%的人患有重度抑郁癥，抑郁癥已成為中國疾病負(fù)擔(dān)的第二位。 從這些數(shù)字中可以看出，抑郁癥已經(jīng)給患者和社會(huì)造成了巨大危害。因此抗抑郁藥物的研 發(fā)具有十分重要的意義。目前，臨床上所應(yīng)用的抗抑郁藥物依據(jù)不同的作用機(jī)理，大致分為以下四類(1) 三環(huán)類和四環(huán)類抗抑郁藥。三環(huán)類主要有米帕明(imipramine)、地昔帕明(desipramine) 等，四環(huán)類有馬普替林(maprotiline)。這類藥物主要是通過阻斷5-HT和去甲腎上腺素 再攝取起作用的。(2)單胺氧化酶(MAO)抑制劑，臨床用藥主要有苯乙胼(phenelzine)。 MAO抑制劑是通過抑制ΜΑ0，提高神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)單胺含量，從而發(fā)揮其抗抑郁作用。(3)選 擇性5-羥色胺重吸收抑制劑(SSRI)，是臨床上抗抑郁的普遍用藥。主要藥物有氟西汀 (fluoxetine)、帕羅西汀(paroxetine)，這類藥物主要通過選擇性阻斷5-HT的再攝取而發(fā) 揮作用。(4)非典型抗抑郁藥，這類抗抑郁藥無論從化學(xué)結(jié)構(gòu)還是從作用機(jī)制以及作用特 點(diǎn)，都不能歸于上述3類之中。主要包括去甲腎上腺素及多巴胺重吸收抑制劑、5-HT受體拮 抗劑及5-HT重吸收抑制劑。臨床上抗抑郁用藥種類繁多且作用機(jī)理復(fù)雜，但是仍有1/3的抑郁癥患者對(duì)臨床 使用的抗抑郁藥效果欠佳，比如見效慢，復(fù)發(fā)率高等。更重要的是，一些抗抑郁藥長期使用 后毒副作用明顯。因此，研發(fā)新型、有效、低毒的抗抑郁藥物十分必要。中藥是純天然藥物， 有著幾千年的臨床應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)，相對(duì)毒副作用少并且價(jià)格便宜，種種優(yōu)點(diǎn)使其成為研發(fā)抗抑 郁藥物的首選。近年來用三七、人參、西洋參預(yù)防和治療抑郁的研究越來越多，如CN200710123530. 5《一組用于治療抑郁癥的藥物組合物及制法》中以人參、白芍為原料制成 藥物組合物來用于抗抑郁，如CN200810120395. 3《淫羊藿總黃酮與三七總皂苷組合物的用 途》中以三七總皂苷和淫羊藿總黃酮組合來用于抗抑郁，但目前中藥治療抑郁，絕大部分都 只是在組合藥物中加入人參屬植物，或者加入其總皂苷來抗抑郁。人參屬植物確實(shí)具有較 好的抗抑郁效果，而其主要抗抑郁成分是其皂苷組分，如CN200310107285. 0《一種治療失眠 的中藥組合物》所述，三七葉總皂苷具有鎮(zhèn)靜作用，三七葉總皂苷能明顯抑制小鼠的自發(fā)活 動(dòng)，對(duì)中樞抑制藥物氯丙嗪、戊巴比妥鈉、硫噴妥鈉有協(xié)同作用，對(duì)中樞興奮藥苯丙胺、咖啡 因所致的小鼠的興奮有拮抗作用，三七葉總皂苷可用于治療失眠及抑郁癥等，且有較好的 療效。但總皂苷中，發(fā)揮中樞神經(jīng)興奮和抑制作用的組分同時(shí)存在，無法說明發(fā)揮抗抑郁作 用的具體組分。所以進(jìn)步明確總皂苷中具體是哪些組分起著抗抑郁作用，對(duì)于開發(fā)抗抑郁 癥藥物和了解總皀苷的作用機(jī)理有很重要的意義。然而，目前從單體水平進(jìn)行抗抑郁研究還比較少，目前已研究了的一些單體有 CN200410086457. 5 所述的人參皂苷 Rg2、CN200610027507. 1 中所述的 20 (s) 一原人參二 醇，CN200610116353. 3中所述的20 (s) —原人參二醇衍生物，CN200810043537. 0中所述的 20 (S) 一人參皂苷Rh2及CN201010193222. 1所述的人參皂苷Rb3。盡管CN200610116353. 3所述的那些原人參二醇衍生物，含有特定的衍生基團(tuán)， 有利于提升抗抑郁效果，但是那些原人參二醇衍生物療效的有效程度及是否同時(shí)帶來 他其負(fù)面效果，仍是一個(gè)未知。而人參皂苷Rd雖然也屬于原人參二醇型皂苷，但其與 CN200610116353. 3所限定的20 (s) —原人參二醇衍生物屬于兩種完全不同的化合物。 CN200610116353.3 ((20 (s) 一原人參二醇衍生物類在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用》中所限定 的20(s) —原人參二醇衍生物類結(jié)構(gòu)式如圖6。由式(I)和式(II)的比較，可知雖然人參皂苷Rd在??？和隊(duì)位上均為氫，這與 CN200610116353. 3所限定的20 (s) —原人參二醇衍生物類一致，但是人參皂苷Rd在Y位 上是個(gè)糖基，而不是羥基和氫，這與CN200610116353.3所限定的20(s) —原人參二醇衍 生物類不一致，更不一致的是在與五碳環(huán)相連的鏈烴上基團(tuán)，CN200610116353. 3所限定的 20 (s) —原人參二醇衍生物類是個(gè)羥基，而人參皂苷Rd的氧原子上連的一個(gè)大基團(tuán)，不是 氫。綜合所述，人參皂苷Rd是一種天然化合物，其與CN200610116353.3所限定的20(s) — 原人參二醇衍生物不同，其在抗抑郁上的作用仍是一個(gè)未知數(shù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有的抗抑郁癥藥物的缺點(diǎn)，從人參皂苷單體水平提供了 一種能顯著預(yù)防和治療抑郁癥的天然化合物。發(fā)明提供以下方案將人參皂苷Rd應(yīng)用于制備抗抑郁癥藥物中。該抗抑郁癥藥物，可以為單一成分的人參皂苷Rd，也可以為人參皂苷Rd和其它化 合物或者中藥組成的復(fù)方藥物。其中人參皂苷Rd作為主要成分或非主要成分。藥物中還可以含有崩解劑、濕潤劑、粘合劑、填充劑、吸收促進(jìn)劑、溶劑、潤滑劑、表 面活性劑、香味劑、甜味劑、抗氧化劑、防腐劑和色素中的一種或多種。藥物可制備成為不同的劑型，如口服制劑、舌下含化片劑丸劑或針劑；口服制劑可 以是片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、滴劑、果汁劑或糖漿劑；針劑可以是注射液、粉針劑、凍干粉針劑。將人參皂苷Rd應(yīng)用于制備抗抑郁癥藥物時(shí)，藥物的應(yīng)用劑量以人參皂苷Rd重量 計(jì)算可為每次5 11 mg/kg體重；也可為每日5 11 mg/kg體重。人參皂苷Rd可以是由人參、三七或者西洋參提取分離而得，或者化學(xué)合成而得。 從植物中提取分離時(shí)，可以是由人參、三七或西洋參的葉、莖、根提取分離而得。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果。(1)如CN201010193222. 1中所述的人參皂苷詘3在中劑量(75mg/kg(小 鼠體重))單次連續(xù)給藥3天和4天后可分別顯著減少小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間和小鼠懸尾 不動(dòng)時(shí)間，在CN200610027507. 1中所述的20(s) —原人參二醇在高劑量(15mg/kg (小鼠體 重))單次連續(xù)給藥10天后可顯著減少小鼠不動(dòng)時(shí)間。而本發(fā)明提供的人參皂苷Rd無論低 劑量(50mg/kg (小鼠體重))還是高劑量(100mg/kg (小鼠體重))在單次給藥2天后就可顯 著減少小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間和強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間及逃避失敗次數(shù)。與這些單體相比，可知人 參皂苷Rd抗抑郁效果也很好很穩(wěn)定。而且，在強(qiáng)迫游泳和獲得性無助實(shí)驗(yàn)中，測試劑量下 的Rd可達(dá)到接近帕羅西汀、馬普替林這兩種陽性藥物的抗抑郁效果。這更加表明人參皂苷 Rd作為一種抗抑郁藥，其前景很大。(2)如CN200810096148. 4中所說，人參皂苷Rd在三七中的含量為IOmg/ g，在西洋參中為5. 88mg/g，在人參中為1. 35mg/g，相對(duì)來講人參皂苷Rd在人參植物或人參 科其它種中含量是較高的，尤其是其在三七中的含量，這樣就保證了人參皂苷Rd可從三七 中提取，而不用從昂貴的人參中提取，另外，人參皂苷Rd提取工藝也發(fā)展得很成熟，如CN 200810200086. 7已經(jīng)提供了一種利用微生物轉(zhuǎn)化高效高產(chǎn)量制備人參皂苷Rd的方法。因 此，人參皂苷Rd有充足的來源，保證了抗抑郁藥物原料的供應(yīng)。(3)如CN 200410086457. 5所述的人參皂苷Rg2，屬于人參三醇型皂苷， 其雖也具有一定的抗抑郁作用，但是其有顯著興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用，而抑郁癥是一種 長期慢性的疾病，其治療也將是個(gè)長期過程，若長期服用，長期使中樞神經(jīng)系統(tǒng)處于興奮狀 態(tài)，這種后果將會(huì)非常嚴(yán)重。而本發(fā)明提供的人參皂苷Rd (人參二醇型皂苷)在高劑量下 沒顯著影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的興奮性，所以其不僅療效好，而且安全性也高。(4)如CN200610027507. 1中所述的20 (S) 一原人參二醇衍生物，雖然其 也有較好的療效，但是，如CN(^820659. 2所說，原人參二醇衍生物是皂苷的苷元，它不像人 參皂苷Rd —樣天然存在于人參植物或人參科其它種，它只能通過由達(dá)瑪烷皂苷類的裂解 和/或半合成的化學(xué)結(jié)構(gòu)修飾來獲得。另外在皂苷類酸性條件下裂解時(shí)，原人參二醇性質(zhì) 不太穩(wěn)定，易由S型變?yōu)镽型，而半合成的其與天然化合物相比，其安全性有待進(jìn)步研究。而 本發(fā)明提供的人參皂苷Rd，是一種皂苷單體，可天然存在于人參植物或人參科其它種中，且 含量也相對(duì)較高，目前的制備工藝也很成熟，故來源充足，不存在穩(wěn)定性差的問題，適宜于 制備成為藥物。(5)如CN200610116353. 3所限定的20(s) —原人參二醇衍生物，盡管這
些原人參二醇衍生物與原人參二醇相比，含有特定的衍生基團(tuán)，有利于提升抗抑郁效果，但 是那些原人參二醇衍生物的療效的有效程度及是否同時(shí)帶來他其負(fù)面效果，仍是一個(gè)未 知。但本發(fā)明提供人參皂苷Rd，是一種天然化合物，其安全性高，副作用少。(6)在總皂苷水平上，胡靖，付寶忠在《三環(huán)類藥物及人參皂甙抗抑郁作用的研究》有說明人參莖葉皂苷和人參根皂苷均在低劑量(50mg/kg (小鼠體重))，高劑量 (200mg/kg (小鼠體重))多次給藥后可顯著減少小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間。而本發(fā)明中，人參 皂苷Rd無論低劑量(50mg/kg (小鼠體重))還是高劑量(100mg/kg (小鼠體重))在單次給藥 2天后就可顯著減少小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間、強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間和逃避失敗次數(shù)，且對(duì)強(qiáng)迫游泳 不動(dòng)時(shí)間和逃避失敗次數(shù)的效果接近兩種陽性藥物。可見總皂苷和本發(fā)明提供的人參皂苷 Rd都有較好的抗抑郁效果，但是總皂苷中發(fā)揮中樞神經(jīng)興奮和抑制作用組分同時(shí)存在，具 體的抗抑郁組分不明確，而本發(fā)明提供的人參皂苷Rd作為一種單體，其療效不僅好，而且 更確切。(7)如0擬00810043537.0所述的20(5)—人參皂苷詘2，也屬于人參二醇
類，是鮮人參在加工成紅參時(shí)，由某些二醇組皂苷受熱降解后生成的一種次生苷，其天然含 量低，提取工藝復(fù)雜。而本發(fā)明提供人參皂苷Rd的天然含量相對(duì)較高，提取制備工藝也已 成熟?？偟膩碚f，人參皂苷可通過多系統(tǒng)、多層次、多靶點(diǎn)發(fā)揮抗抑郁作用，療效好，副作 用少，而本發(fā)明提供的人參皂苷單體Rd其抗抑郁療效更確切、更高，毒副作用小，且制備工 藝也成熟，適合工業(yè)化生產(chǎn)。另外本發(fā)明也為進(jìn)一步明確總皂苷中具體抗抑郁成分提供了 依據(jù)。


圖1為人參皂苷Rd對(duì)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間的影響，*表示P<0. 05，即與空白對(duì)照組 相比有顯著性差異；
圖2為人參皂苷Rd對(duì)小鼠開場實(shí)驗(yàn)活動(dòng)路程的影響，*表示P<0. 05，即與空白對(duì)照組 相比有顯著性差異；
圖3為人參皂苷Rd對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間的影響，*表示P<0. 05，即與空白對(duì) 照組相比有顯著性差異；
圖4為人參皂苷Rd對(duì)小鼠獲得性無助實(shí)驗(yàn)中逃避失敗次數(shù)的影響，*表示P<0. 05，即 與空白對(duì)照組相比有顯著性差異； 圖5為人參皂苷Rd的結(jié)構(gòu)式； 圖6為20 (s) —原人參二醇衍生物類結(jié)構(gòu)式； 圖7為人參皂苷Rd對(duì)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間的影響結(jié)果； 圖8為人參皂苷Rd對(duì)小鼠開場實(shí)驗(yàn)活動(dòng)路程的影響結(jié)果； 圖9為人參皂苷Rd對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間的影響結(jié)果； 圖10人參皂苷Rd對(duì)小鼠逃避失敗次數(shù)的影響結(jié)果。
具體實(shí)施例方式為更好的理解本發(fā)明，下面將從藥效學(xué)研究來說明人參皂苷Rd的抗抑郁作用。目 前，對(duì)抗抑郁藥的藥效評(píng)價(jià)，最直觀的手段就是建立整體動(dòng)物行為藥理模型，并遵循多模 型、多指標(biāo)的原則。本發(fā)明就選取了 3種行為模型，包括小鼠懸尾模型、小鼠強(qiáng)迫游泳模型 和小鼠獲得性無助模型，綜合評(píng)價(jià)人參皂苷Rd的抗抑郁效應(yīng)。實(shí)施例1小鼠懸尾實(shí)驗(yàn) 1 材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
SPF級(jí)昆明小鼠，雄性，體重18-22g，購自中山大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào) SCXK (粵)2009-0011。標(biāo)準(zhǔn)飼料及墊料均購自中山大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。1.2藥品與儀器
藥品人參皂苷Rd，購自云南植物藥業(yè)有限公司；陽性藥帕羅西汀購自廣州市健民藥房。小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)自動(dòng)攝影分析系統(tǒng)，實(shí)驗(yàn)用小鼠灌胃針頭等，購自淮北正華生物儀 器設(shè)備有限公司。1. 3藥液制備
取人參皂苷Rd溶于蒸餾水，分別配置成低、高兩種濃度(5mg/ml、10mg/ml)的溶液。帕 羅西汀(Paroxetine)藥物片劑研磨成粉，按有效成分的比例取所需用量。加入蒸餾水配制 成0. 6mg/ml的懸濁液，灌胃前搖勻。1.4實(shí)驗(yàn)方法
小鼠40只，分成4組，每組10只，分別為空白對(duì)照組(生理鹽水)，Rd-低劑量組(Rd 50mg/kg (小鼠體重))、Rd-高劑量組(Rd 100mg/kg (小鼠體重))、帕羅西汀組(6mg/kg (小 鼠體重))。按小鼠體重0.1 ml/10 g灌胃給藥，每日一次，灌胃給藥1天，第二天給藥Ih后 進(jìn)行懸尾測試。將小鼠倒掛，距尾端約1 cm處用絕緣膠固定于懸尾架的尾端，前肢距離底面約10 cm。懸尾測試過程為6 min，開始階段小鼠均會(huì)掙扎，一段時(shí)間后會(huì)放棄掙扎，保持不動(dòng)，分 析記錄后4 min小鼠的不動(dòng)時(shí)間，作為判斷小鼠抑郁樣行為的指標(biāo)。1. 5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
實(shí)驗(yàn)結(jié)果使用軟件0rigin7.5進(jìn)行統(tǒng)計(jì)作圖，數(shù)據(jù)表示為“平均值士標(biāo)準(zhǔn)偏差”， P<0. 05表示具有顯著性差異。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
在小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)中，人參皂苷Rd可以顯著地降低小鼠的懸尾不動(dòng)時(shí)間與空白對(duì)照組 相比，Rd在低劑量時(shí)可將不動(dòng)時(shí)間降低17%，在高劑量時(shí)可將不動(dòng)時(shí)間降低18%。陽性藥帕 羅西汀具有更加顯著的抗抑郁作用，其將小鼠懸尾的不動(dòng)時(shí)間降低至25.1。總體結(jié)果說 明人參皂苷Rd在試驗(yàn)劑量下對(duì)小鼠懸尾抑郁樣行為有顯著改善效果，結(jié)果如圖7和圖1所
7J\ ο
見圖1所示，為人參皂苷Rd對(duì)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間的影響示意圖，其中，X軸表示各 給藥組，Y軸表示小鼠的懸尾不動(dòng)時(shí)間(單位“秒”)；*表示P<0.05，即與空白對(duì)照組相比
有顯著性差異。實(shí)施例2小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn) 1材料與方法
1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
SPF級(jí)昆明小鼠，雄性，體重18-22g，購自中山大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào) SCXK (粵)2009-0011。標(biāo)準(zhǔn)飼料及墊料均購自中山大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
1. 2儀器與藥品
藥品人參皂苷Rd，購自云南植物藥業(yè)有限公司；陽性藥帕羅西汀，馬普替林均購自廣 州市健民藥房。儀器ZH-QPT強(qiáng)迫游泳裝置及分析系統(tǒng)，ZH-QPT開場實(shí)驗(yàn)裝置及分析系統(tǒng)，實(shí)驗(yàn) 用小鼠灌胃針頭，均購自淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司；溫度計(jì)。1.3藥液制備
取人參皂苷Rd溶于蒸餾水，分別配置成低、高兩種濃度(5mg/ml、10mg/ ml)的單體溶 液。帕羅西汀(Paroxetine)、馬普替林(Maprotiline)藥物片劑研磨成粉，按有效成分的比 例取所需用量。加入蒸餾水分別配制成0. 6mg/ml和1. 8mg/ml的懸濁液，灌胃前搖勻。1.4實(shí)驗(yàn)方法
在進(jìn)行抑郁動(dòng)物強(qiáng)迫游泳行為模型的實(shí)驗(yàn)時(shí)，必須同時(shí)檢驗(yàn)藥物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自主活動(dòng) 水平的影響。只有當(dāng)藥物不增強(qiáng)小鼠自主活動(dòng)強(qiáng)度時(shí)，才能認(rèn)為絕望行為實(shí)驗(yàn)中不動(dòng)時(shí)間 的減少是由抑郁癥狀的改變所導(dǎo)致的。小鼠60只，分成5組，分別為空白對(duì)照組(生理鹽水)，Rd-低劑量組(Rd 50mg/kg (小鼠體重))、Rd-高劑量組(Rd 100mg/kg (小鼠體重))、帕羅西汀組(6mg/kg (小鼠體重))， 馬普替林組(18mg/kg (小鼠體重))。按小鼠體重0. lml/10g灌胃給藥，每日一次，灌胃給藥 1天，第二天給藥Ih后進(jìn)行開場實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳測試。開場實(shí)驗(yàn)是用于檢測動(dòng)物自主活動(dòng)強(qiáng)度的常用方法。開場試驗(yàn)箱長30cm、寬 30cm、高20cm。灌胃Ih后，將動(dòng)物放置于開場試驗(yàn)箱中，記錄其在5min內(nèi)的活動(dòng)路程。強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)是將小鼠置于圓柱形的水箱內(nèi)，最初小鼠會(huì)迅速游動(dòng)，掙扎，企圖逃 離這個(gè)環(huán)境。當(dāng)發(fā)現(xiàn)此環(huán)境不可避免時(shí)，就會(huì)放棄掙扎，以一種不動(dòng)狀態(tài)漂浮在水面上。一 般以小鼠的不動(dòng)狀態(tài)模擬人類的抑郁行為。當(dāng)開場實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將小鼠放置在直徑為19cm 高為25cm的圓柱形透明水箱中，水深18cm，水溫保持在23_25°C。記錄小鼠6min的游泳狀 態(tài)，分析后4min小鼠的不動(dòng)時(shí)間。1. 5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
實(shí)驗(yàn)結(jié)果使用軟件0rigin7.5進(jìn)行統(tǒng)計(jì)作圖，數(shù)據(jù)表示為“平均值士標(biāo)準(zhǔn)偏差”。 P<0. 05表示具有顯著性差異。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2. 1開場實(shí)驗(yàn)
在開場實(shí)驗(yàn)中，人參皂苷Rd在低劑量時(shí)可增加小鼠的自發(fā)活動(dòng)，與已有文獻(xiàn)結(jié)果一 致，即有文獻(xiàn)報(bào)道Rd可顯著增加小鼠被迫行走的自主活動(dòng)，其機(jī)制有待進(jìn)一步分析。但人 參皂苷Rd在高劑量時(shí)對(duì)小鼠的自主活動(dòng)影響與空白組無差異，仍可說明在以下的強(qiáng)迫游 泳實(shí)驗(yàn)中，Rd使小鼠游泳的不動(dòng)時(shí)間減少并非由于神經(jīng)中樞亢奮導(dǎo)致。滿足絕望實(shí)驗(yàn)行為 的要求。結(jié)果如圖8和圖2所示。見圖2所示，為人參皂苷Rd對(duì)小鼠開場實(shí)驗(yàn)活動(dòng)路程的影響示意圖，其中
X軸表示各給藥組，Y軸表示小鼠的開場活動(dòng)路程(單位“厘米”)；*表示p<0. 05，即與 空白對(duì)照組相比有顯著性差異。2. 2強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果
在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中，人參皂苷Rd在低劑量和高劑量時(shí)均可顯著性的將小鼠游泳的不動(dòng)時(shí)間減少。低劑量和高劑量的不動(dòng)時(shí)間都降低到與帕羅西汀、馬普替林組的值接近。結(jié) 果說明，人參皂苷Rd在試驗(yàn)劑量下可顯著改善小鼠強(qiáng)迫游泳抑郁樣行為。且效果可接近帕 羅西汀、馬普替林。結(jié)果如圖9和圖3所示。見圖3所示，為人參皂苷Rd對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間的影響示意圖。其中X軸表 示各給藥組，Y軸表示小鼠的強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間(單位“秒”);*表示p<0. 05，即與空白對(duì)照 組相比有顯著性差異。實(shí)施例3獲得性無助實(shí)驗(yàn) 1材料與方法
1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
SPF級(jí)昆明小鼠，雄性，體重18-22g，購自中山大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào) SCXK (粵)2009-0011。標(biāo)準(zhǔn)飼料及墊料均購自中山大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。1. 2儀器與藥品
藥品人參皂苷Rd，購自云南植物藥業(yè)有限公司；陽性藥帕羅西汀購自廣州市健民藥房。儀器BA-200小鼠避暗儀，購自成都泰盟科技有限公司；實(shí)驗(yàn)用小鼠灌胃針頭，購 自淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司。1.3藥液制備
取人參皂苷Rd溶于蒸餾水，分別配置成低、高兩種濃度(5mg/ml、10mg/ml)的溶液。帕 羅西汀(Paroxetine)藥物片劑研磨成粉，按有效成分的比例取所需用量。加入蒸餾水分別 配制成0. 6mg/ml的懸濁液，灌胃前搖勻。1.4實(shí)驗(yàn)方法
小鼠40只，分成4組，每組10只，分別為空白對(duì)照組(生理鹽水)，Rd-低劑量組(Rd 50mg/kg (小鼠體重))、Rd-高劑量組(Rd 100mg/kg (小鼠體重))、帕羅西汀組(6mg/kg (小 鼠體重))。按小鼠體重0. lml/10g灌胃給藥，每日一次。實(shí)驗(yàn)分兩天進(jìn)行。第一天為建模期將小鼠放在避暗箱中進(jìn)行電擊，電壓調(diào)至 36V，每次電擊15s，中間間隔20-60s不等。如此反復(fù)電擊小鼠60次。第二天為測試期。小 鼠給藥Ih后放進(jìn)暗室中，先給予3s的光刺激，再給予3s的電刺激，如果小鼠不能從暗箱中 逃離出來，則記為一次逃避失敗。給予30次刺激，統(tǒng)計(jì)分析空白組小鼠與給藥組小鼠逃避 失敗的次數(shù)。1. 5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
實(shí)驗(yàn)結(jié)果使用軟件0rigin7.5進(jìn)行統(tǒng)計(jì)作圖，數(shù)據(jù)表示為“平均值士標(biāo)準(zhǔn)偏差”。 P<0. 05表示具有顯著性差異。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
在獲得性無助實(shí)驗(yàn)中，與空白對(duì)照組相比，人參皂苷Rd在低劑量和高劑量時(shí)均可把小 鼠的逃避失敗次數(shù)顯著降低。其中，Rd低劑量可達(dá)到與陽性藥帕羅西汀相同的抗抑郁效果。 結(jié)果如圖10和圖4所示。見圖4所示，為人參皂苷Rd對(duì)小鼠獲得性無助實(shí)驗(yàn)中逃避失敗次數(shù)的影響示意 圖。其中，X軸表示各給藥組，Y軸表示小鼠的逃避失敗次數(shù)(單位“次”)；*表示P<0.05，即與空白對(duì)照組相比有顯著性差異。本實(shí)驗(yàn)得出了以下幾個(gè)結(jié)論
1、在小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)中，與空白對(duì)照組相比，人參皂苷Rd可明顯地減少小鼠的不動(dòng)時(shí)間。2、在小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中，人參皂苷Rd可顯著性減少小鼠的不動(dòng)時(shí)間，且在開場 實(shí)驗(yàn)中，高劑量的人參皂苷Rd對(duì)小鼠自主活動(dòng)沒有顯著影響，說明Rd使小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn) 中不動(dòng)時(shí)間減少并不是由于活動(dòng)水平的提高所致。游泳實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可信。3、通過獲得性無助的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，人參皂苷Rd可以顯著減少小鼠的逃避失敗次數(shù)。通過上述3種動(dòng)物行為學(xué)實(shí)驗(yàn)的綜合分析可知，人參皂苷Rd具有較好的抗抑郁效 果。本實(shí)驗(yàn)中采用的陽性藥物帕羅西汀、馬普替林主要是通過阻斷5-HT和去甲腎上腺素再 攝取起作用的。這兩種藥是目前臨床上應(yīng)用較廣泛的，但是仍有抑郁癥患者對(duì)其臨床使用 的抗抑郁藥效果欠佳，如見效慢，復(fù)發(fā)率高等，更重要的是長期使用后毒副作用明顯。而本 發(fā)明提供的人參皂苷Rd，作為一種中藥，其安全性高，毒副作用少，且在強(qiáng)迫游泳和獲得性 無助實(shí)驗(yàn)中試驗(yàn)濃度下的Rd可達(dá)到接近這兩種陽性藥物的抗抑郁效果。所以將人參皂苷 Rd做成制劑，用于工業(yè)化生產(chǎn)，具有很好的抗抑郁作用及臨床前景。
權(quán)利要求
1.人參皂苷Rd在制備抗抑郁癥藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述的抗抑郁癥藥物為單一成分的人參皂 苷Rd，或者為人參皂苷Rd和其它化合物或者中藥組成的復(fù)方藥物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的復(fù)方藥物中人參皂苷Rd作為主要成 分或非主要成分。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物還可含有崩解劑、濕潤劑、粘合 齊U、填充劑、吸收促進(jìn)劑、溶劑、潤滑劑、表面活性劑、香味劑、甜味劑、抗氧化劑、防腐劑和色 素等任一種或幾種。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物為口服制劑、舌下含化片劑丸 劑或針劑；所述的口服制劑為片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、滴劑、果汁劑或糖漿劑；所述的 針劑為注射液、粉針劑或凍干粉針劑。
6.根據(jù)上述任一權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物的應(yīng)用劑量以人參皂苷 Rd重量計(jì)算為每次5 11 mg/kg體重。
7.根據(jù)上述任一權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物的應(yīng)用劑量以人參皂苷 Rd重量計(jì)算為每日5 11 mg/kg體重。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于所述的人參皂苷Rd是由人參、三七或者西 洋參提取分離而得，或者化學(xué)合成而得。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于所述的人參皂苷Rd是由人參、三七或西洋 參的葉、莖、根提取分離而得。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)療衛(wèi)生領(lǐng)域，具體涉及一種天然化合物，即人參皂苷Rd在制備抗抑郁癥藥物中的應(yīng)用。人參皂苷Rd在試驗(yàn)劑量下能顯著減少小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)中的不動(dòng)時(shí)間，顯著減少小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中的不動(dòng)時(shí)間及顯著減少小鼠在獲得性無助實(shí)驗(yàn)中逃避失敗的次數(shù)。這些都表明人參皂苷Rd具有較好的抗抑郁效果，可用于預(yù)防和治療抑郁。
文檔編號(hào)A61K31/704GK102138926SQ201110022940
公開日2011年8月3日 申請(qǐng)日期2011年1月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月21日
發(fā)明者劉映雪, 張晗, 楊斌, 郭靜, 項(xiàng)輝, 黃掌欣 申請(qǐng)人:中山大學(xué)