專利名稱：冬蟲夏草的一種新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中草藥的應(yīng)用領(lǐng)域，尤其是涉及冬蟲夏草的新用途。
背景技術(shù)：
腦血管疾病包括出血性腦中風(fēng)和缺血性腦中風(fēng)，缺血性腦中風(fēng)、腦血栓、腦栓塞、 腔隙性缺血性腦中風(fēng)和多發(fā)性缺血性腦中風(fēng)及小中風(fēng)都屬于缺血性腦中風(fēng)，是由于腦血管狹窄或閉塞，導(dǎo)致腦血流阻斷而使腦組織發(fā)生缺血缺氧、軟化甚至壞死，致使腦血管功能障礙，引起相關(guān)癥狀。缺血性腦中風(fēng)是腦血管疾病的主要類型，約85%的腦中風(fēng)是缺血性的， 動脈粥樣硬化是基礎(chǔ)，缺血性腦中風(fēng)存活的患者面臨的最大的問題是再發(fā)作(五年內(nèi)的平均復(fù)發(fā)率高達(dá)40%以上)和其他缺血性事件的發(fā)生。缺血性腦中風(fēng)是多病因引起易反復(fù)發(fā)作的慢性病，飲食等家庭護(hù)理康復(fù)措施會起到輔助藥物治療的作用，但沒針對病因治療的作用，所以對缺血性腦中風(fēng)這種慢性病來說， 最關(guān)鍵的康復(fù)方法就是科學(xué)的針對病因的用藥防治，在改善缺血性腦中風(fēng)癥狀的同時(shí)，降低缺血性腦中風(fēng)的高復(fù)發(fā)率。盡管目前對于中風(fēng)的病理機(jī)制已經(jīng)有諸多說法，但越來越多的證據(jù)顯示炎癥過程不僅是腦缺血病理變化的基礎(chǔ)，也被認(rèn)為是引起中風(fēng)的觸發(fā)因素。與缺血性腦損傷相關(guān)的炎性反應(yīng)既包括炎性細(xì)胞(包括早期聚集和的嗜中性粒細(xì)胞和后期出現(xiàn)的巨噬細(xì)胞)和炎性介質(zhì)(包括白細(xì)胞介素、炎癥趨化因子、粘附分子以及其他炎性分子)。因此，對炎癥有效的藥物可能會對腦缺血產(chǎn)生治療作用。新的抗炎靶點(diǎn)不斷被發(fā)現(xiàn)，這些成為治療腦缺血藥物的可能應(yīng)用領(lǐng)域。冬蟲夏草性甘、溫平、無毒，是著名的滋補(bǔ)強(qiáng)壯藥，常用肉類燉食，有補(bǔ)虛健體之效。適用于治療肺氣虛和肺腎兩虛、肺結(jié)核等所致的咯血或痰中帶血、咳嗽。氣短、盜汗等， 對腎虛陽痿、腰膝酸疼等亦有良好的療效，也是老年體弱者的滋補(bǔ)佳品。藥理學(xué)現(xiàn)代研究結(jié)果中，冬蟲夏草含有蟲草酸約7 %，碳水化合物28. 9%，脂肪約8. 4%，蛋白質(zhì)約25%，脂肪中82. 2%為不飽和脂肪酸，此外，尚含有維生素B12、麥角脂醇、六碳糖醇、生物堿等。冬蟲夏草具有免疫調(diào)節(jié)作用，既能增加免疫系統(tǒng)細(xì)胞、組織數(shù)量，促進(jìn)抗體產(chǎn)生，增加吞噬、殺傷細(xì)胞數(shù)量、增強(qiáng)其功能，又可以調(diào)低某些免疫細(xì)胞的功能；是抗癌的活性物質(zhì)，在體外具有明確的抑制、殺傷腫瘤細(xì)胞的作用；能提高細(xì)胞能量，減輕疲勞；還能調(diào)節(jié)心臟功能，降低心臟對氧的消耗，抗心律失常；調(diào)節(jié)肝臟功能，減輕肝損傷、抗肝纖維化；調(diào)節(jié)呼吸系統(tǒng)功能，具有擴(kuò)張支氣管、平喘、祛痰、防止肺氣腫的作用；調(diào)節(jié)腎臟功能，減輕毒性物質(zhì)對腎臟的損害；調(diào)節(jié)造血功能，增強(qiáng)骨髓生成血細(xì)胞的能力；降低血液中的膽固醇和甘油三酯，提高對人體有利的高密度脂蛋白，減輕動脈粥樣硬化；此外，還具有直接抗病毒、調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能、調(diào)節(jié)性功能等作用。雖然冬蟲夏草具有如此全面的保健功能，甚至被人們成為“仙草”，但至今為止，關(guān)于冬蟲夏草抗炎和治療腦缺血方面的作用尚無報(bào)道。因此，需要對冬蟲夏草的作用進(jìn)行進(jìn)一步拓展，以期獲得更廣泛的應(yīng)用領(lǐng)域。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供冬蟲夏草的一種新用途以及實(shí)現(xiàn)這種用途的藥物制劑。為了實(shí)現(xiàn)上述至少一個(gè)發(fā)明目的，本發(fā)明提供了冬蟲夏草在制備具有抗炎作用的藥物中的用途。進(jìn)一步地，這種用途可以用于制備對缺血性腦病具有神經(jīng)保護(hù)作用的藥物。申請人:經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，冬蟲夏草可以降低髓過氧化物酶(MPO)活性，從而抑制白細(xì)胞的浸潤；抑制轉(zhuǎn)錄因子蛋白家族NF-kB的活性；降低白細(xì)胞介素(IL)的水平，降低腫瘤壞死因子(TNF)的水平；降低細(xì)胞間粘附分子(ICAM)的水平；以及劑量依賴性地降低前氧化酶，特別是免疫誘導(dǎo)性一氧化氮合成酶(iNOQ和環(huán)氧化酶(COX)的表達(dá)。已經(jīng)證實(shí)缺血性腦病所造成的腦損傷與炎癥反應(yīng)有關(guān)，局部炎癥因子、趨化因子及粘附分子的表達(dá)上調(diào)構(gòu)成了缺血損傷向炎癥性損傷轉(zhuǎn)變的基礎(chǔ)，隨后白細(xì)胞向缺血區(qū)的聚集和浸潤導(dǎo)致了繼發(fā)性神經(jīng)元損傷和梗死面積的擴(kuò)大。腦缺血區(qū)的炎癥反應(yīng)主要表現(xiàn)在白細(xì)胞的聚集、氧自由基的產(chǎn)生、溶酶體的破壞、水解酶的生成以及炎癥介質(zhì)的形成等方中性粒細(xì)胞(PMN)為缺血部位最初反應(yīng)的白細(xì)胞。炎癥介質(zhì)產(chǎn)生后啟動PMN浸潤。 PMN通過導(dǎo)致微血管阻塞和釋放氧自由基而有助于腦缺血/再灌注后的二次損傷。MPO活性被認(rèn)為是反應(yīng)PMN遷移的可靠指標(biāo)。發(fā)明人經(jīng)過反復(fù)實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)冬蟲夏草可以降低腦缺血發(fā)生時(shí)MPO的活性，因而實(shí)際上抑制了 PMN的浸潤。腦缺血時(shí)很多腦細(xì)胞均可以產(chǎn)生細(xì)胞因子。細(xì)胞因子是一種小型糖蛋白，在對一種抗原發(fā)生相應(yīng)的時(shí)候而產(chǎn)生，最初被認(rèn)為是一種調(diào)整先天免疫和后天免疫的調(diào)節(jié)因子。 細(xì)胞因子會在很多疾病的時(shí)候在大腦中的表達(dá)上調(diào)，包括缺血性腦損傷。在所有炎癥介質(zhì)中，IL，特別是IL-I β和TNF，特別是TNF-α尤為重要，因?yàn)樗鼈冊谝鹎把装Y反應(yīng)的協(xié)調(diào)機(jī)制中扮演重要角色。IL-I β不僅能協(xié)調(diào)其他細(xì)胞因子促進(jìn)Β、Τ細(xì)胞活化，而且能夠誘導(dǎo)其他炎性介質(zhì)的產(chǎn)生，加強(qiáng)白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的粘附，調(diào)節(jié)TNF-α的產(chǎn)生。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)冬蟲夏草能夠降低腦缺血時(shí)IL-I β的含量，因而具有保護(hù)急性腦缺血再灌注損傷的作用。TNF-α主要與炎癥及免疫反應(yīng)有關(guān)，在腦缺血早期TNF-α分泌或合成的增加是腦梗死形成的主要原因，它具有增加血管內(nèi)皮細(xì)胞的通透性，誘導(dǎo)細(xì)胞粘附因子表達(dá)等作用。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)冬蟲夏草能夠明顯降低急性缺血腦組織中TNF-α的含量，通過阻斷TNF-a 的表達(dá)而減少缺血引起的神經(jīng)元損傷。細(xì)胞因子能快速誘導(dǎo)粘附分子，例如ICAM-1、VCAM_1、E-選擇素等的表達(dá)。粘附分子是一類能介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)相互粘附的糖蛋白，血液中的白細(xì)胞通過與血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附而外滲是啟動炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵步驟，而白細(xì)胞在血管內(nèi)皮細(xì)胞上的滾動、結(jié)合及轉(zhuǎn)運(yùn)等都需要粘附分子的參與。在免疫球蛋白家族中，細(xì)胞間粘附分子-I(ICAM-I)在皮層缺血組織中得到了廣泛地表達(dá)。在中風(fēng)發(fā)生后幾小時(shí)之內(nèi)，ICAM-I表達(dá)由于細(xì)胞因子的刺激而增加。而發(fā)明人發(fā)現(xiàn)冬蟲夏草能顯著降低ICAM-I的表達(dá)，從而減輕白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的粘附作用，從而抑制炎癥的發(fā)生與發(fā)展，減輕腦缺血再灌注損傷。
花生四烯酸(AA)代謝系統(tǒng)與腦缺血及再灌注損傷有密切關(guān)系。環(huán)氧酶(COX)是催化AA生成前列腺素和血栓素的限速酶。其中C0X-2為誘導(dǎo)型，正常情況下不表達(dá)，僅在某些細(xì)胞如神經(jīng)元中低水平表達(dá)，與炎癥的關(guān)系密切。近年來的研究表明，COX參與了缺血性腦損傷，是核因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的靶目標(biāo)之一。腦缺血再灌注后C0X-2在神經(jīng)元、腦血管內(nèi)皮細(xì)胞和腦組織其它細(xì)胞中的表達(dá)均增強(qiáng)，C0X-2抑制劑可有效保護(hù)腦組織。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)冬蟲夏草能顯著降低C0X-2的表達(dá)，可有效減輕腦缺血再灌注損傷。一氧化氮(NO)是體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)氣體信息分子，在腦缺血中有非常重要的作用。催化NO生物合成的酶稱為一氧化氮合酶(N0Q。腦缺血后神經(jīng)末梢釋放大量的谷氨酸，使NMDA受體依賴的Ca2+通道過度激活，大量Ca2+內(nèi)流并與CaM結(jié)合，因此受到Ca2+-CaM 直接調(diào)節(jié)的NOS被大量激活，導(dǎo)致合成過量的NO。過多的NO使細(xì)胞生理過程遭到破壞，參與了興奮性毒性作用。誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOQ在正常生理情況下不表達(dá)，但在腦缺血損傷的炎癥反應(yīng)誘導(dǎo)下產(chǎn)生，并維持在高水平，從而加重了炎癥反應(yīng)和細(xì)胞毒性作用。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)冬蟲夏草能顯著降低iNOS的表達(dá)，降低了腦缺血損傷后興奮性氨基酸的興奮性毒性作用，抑制炎癥反應(yīng)，減輕腦缺血再灌注損傷。NF-κ B包括一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子家族，參與免疫反應(yīng)的早期和炎癥反應(yīng)各階段的許多分子都受 NF-κ B 的調(diào)控，包括TNF-α ,IL-I β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-12、iN0S、C0X_2、趨化因子、粘附分子、集落刺激因子等。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在皮層缺血/再灌注后，NF- κ B的活化與IL-I β 和TNF-α的mRNA水平的顯著增加相關(guān)。發(fā)明人證實(shí)冬蟲夏草具有降低NF-κ B表達(dá)的效果，通過此效果而產(chǎn)生上述有益效果。綜上，使用冬蟲夏草后對腦缺血性損傷顯示出神經(jīng)保護(hù)作用，這種作用是通過抑制炎癥相關(guān)的反應(yīng)而起作用的。本發(fā)明所述冬蟲夏草的應(yīng)用，最好是采用天然采摘的冬蟲夏草，藥效最佳；但也可以采用人工培育的蟲草菌粉。實(shí)際應(yīng)用時(shí)可以根據(jù)臨床需要，將上述原料藥單獨(dú)使用，或按照一定比例混合應(yīng)用。在實(shí)際應(yīng)用時(shí)，冬蟲夏草可以單獨(dú)直接使用，還可以包括與藥學(xué)上可以接受的載體和輔料一起制成各種制劑。具體地，可以被制成，但不限于，滴丸劑、片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、溶液劑、軟膏劑、硬膏劑、噴霧劑等。實(shí)驗(yàn)例藥材制備冬蟲夏草為市場采購。粗冬蟲夏草菌絲(IOOg)采用800ml蒸餾水提取并在37°C 時(shí)振搖72小時(shí)。溶液在40°C時(shí)12000g離心30分鐘。收集上清液并凍干形成粉末。實(shí)驗(yàn)前，冬蟲夏草凍干粉末溶解于PBS緩沖液并用0. 2 μ m濾器過濾，制成所需給藥濃度。實(shí)驗(yàn)動物采用成年健康雄性Wistar大鼠O個(gè)月大，體重225 士 25克)。隨機(jī)挑選15只大鼠為假手術(shù)組(Siam組，η = 15)，剩余75只大鼠按照文獻(xiàn)方法進(jìn)行大腦中動脈閉塞缺血 2 小時(shí)后再灌注 22 小時(shí)，進(jìn)行造模。(Longa EZ, Weinstein PR, Carlson S, CumminsR Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy inrats. Stroke
51989,20 84-91)經(jīng)激光多普勒血流儀證實(shí)，篩選出腦血流量減少87-90 %的動物作為手術(shù)成功阻塞大腦中動脈的個(gè)體。整個(gè)造模手術(shù)過程中，動物體溫始終保持在37°C左右。造模后剔除不合格模型動物，得到45只合格模型，隨機(jī)分為腦缺血模型組(MCA0 組，η = 15)，冬蟲夏草低劑量(1. Og/kg)組(CSM-1組，n = 15)，冬蟲夏草高劑量(2. Og/kg) 組WSM-2組，η = 15)。兩個(gè)冬蟲夏草給藥組分別在缺血2小時(shí)后再灌注之前灌胃給予冬蟲夏草1. Og或2. Og/kg體重。假手術(shù)組和模型組同時(shí)給予同等體積的PBS緩沖液。統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)表示為平均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差，結(jié)果用ANOVA中的Durmett ’ s檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)。P < 0. 05 為顯著性差異。神經(jīng)功能行為評分在模型大鼠大腦中動脈阻塞后M小時(shí)進(jìn)行神經(jīng)功能行為評分以評價(jià)感覺運(yùn)動的完整性。評分標(biāo)準(zhǔn)如下0，沒有神經(jīng)缺陷；1，前肢屈曲；2，前肢屈曲且側(cè)向推力的抵抗力下降；3，前肢屈曲且側(cè)向推力的抵抗力下降且單向繞圈；4，前肢屈曲且不能或者難以走動。 表現(xiàn)出較高分值的動物同時(shí)也會具有較低分值所述的所有癥狀。行為學(xué)評分是用以評估損傷是否符合已知的大鼠腦部功能結(jié)構(gòu)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見

圖1。大鼠接受MCAO手術(shù)后M小時(shí)，MCAO組神經(jīng)功能行為評分顯著高于Siam組。在 CSM治療組大鼠則比MCAO組評分顯著降低了。Siam組神經(jīng)功能評分平均為0. 9 (0. 6-1. 1)， MCAO 組為 3. 7 (2. 6-5. 3)，CSM-2 組為 1. 2 (0. 8-4. 1)，CSM-I 組為 2. 1 (1. 0-4. 9)。顯然 MCAO 組與假手術(shù)組相比較出現(xiàn)了明顯的行為學(xué)異常。與此相比，CSM組則顯著抑制了行為學(xué)異常的發(fā)生。炎性物質(zhì)測定神經(jīng)評分結(jié)束后，立即處死動物，取腦，通過生化測定、ELISA、免疫組化等方法測定相關(guān)炎癥介質(zhì)。中性粒細(xì)胞浸潤測定測量腦組織中有髓過氧化物酶(MPO)活性，以評估在缺血腦皮質(zhì)中中性粒細(xì)胞浸潤的程度。取出右側(cè)大腦中動脈(MCA)皮層，存儲于_70°C。MPO活性的測量方法根據(jù)測量試劑盒進(jìn)行(南京建成生物工程有限公司，中國)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示。表1冬蟲夏草對MPO活性的影響
權(quán)利要求
1.冬蟲夏草在制備具有抗炎作用的藥物中的用途。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，用于制備對缺血性腦病具有神經(jīng)保護(hù)作用的藥物。
3.如權(quán)利要求1所述的用途，其中所述藥物可以抑制轉(zhuǎn)錄因子蛋白家族NF-κB的表達(dá)。
4.如權(quán)利要求1所述的用途，其中所述藥物可以降低細(xì)胞白介素和腫瘤壞死因子的水平。
5.如權(quán)利要求1所述的用途，其中所述藥物可以抑制細(xì)胞間粘附分子的表達(dá)。
6.如權(quán)利要求1所述的用途，其中所述藥物可以劑量依賴性地降低前氧化酶的表達(dá)。
7.如權(quán)利要求1所述的用途，其中所述藥物可以抑制白細(xì)胞的浸潤。
8.如權(quán)利要求1所述的用途，其中所述藥物包括冬蟲夏草和藥學(xué)上可以接受的載體和輔料。
9.如權(quán)利要求1所述應(yīng)用，其中所述藥物可以是滴丸劑、片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、 腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、 丹劑、混懸劑、溶液劑、軟膏劑、硬膏劑、噴霧劑。
10.一種對缺血性腦病具有治療作用的藥物組合物，其特征在于以冬蟲夏草作為主藥或主藥之一。
全文摘要
本提供了冬蟲夏草的一種新用途。冬蟲夏草在制備具有抗炎作用的藥物中具有新的用途，這種用途可以用于制備對缺血性腦病具有神經(jīng)保護(hù)作用的藥物。冬蟲夏草的這種新用途是通過抑制轉(zhuǎn)錄因子蛋白家族NF-κB的活性進(jìn)而降低白細(xì)胞介素、腫瘤壞死因子、細(xì)胞間粘附分子的水平，降低一氧化氮合成酶和環(huán)氧化酶的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明還提供了以冬蟲夏草為主藥或主藥之一的對缺血性腦病具有治療作用的藥物組合物。
文檔編號A61K36/068GK102579510SQ20111002068
公開日2012年7月18日 申請日期2011年1月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月10日
發(fā)明者劉振權(quán) 申請人:劉振權(quán)