專利名稱：新的美登素生物堿類以及該美登素生物堿類與抗體制備綴合物的用途的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及新的美登素生物堿類(maytansinoids)以及所述美登素生物堿類與抗體制備綴合物的用途。本發(fā)明也涉及包含所述美登素生物堿類和所述綴合物的組合物。
背景技術(shù)：
關(guān)于用單克隆抗體-藥物綴合物特異靶向腫瘤細胞的嘗試已經(jīng)發(fā)表了很多文章(Sela 等人，in Immunoconjugates 189-216 (C. Vogel, ed. 1987) ;Ghose 等人，在 TargetedDrugs 1-22(E. Goldberg, ed. 1983)中；Diener 等人，在 Antibody mediated deliverysystems 1-23 (J. RodwelI, ed. 1988)中;Pietersz 等人,在 Antibody mediated deliverysystems 25-53 (J. RodwelI, ed. 1988)中；BumoI 等人，在 Antibody mediated deliverysystems 55-79 (J. RodwelI, ed. 1988)中。也參見Monneret C. , et al. , Bulletin duCancer 2000,87 (11),829-38 ；RicartA. D.等人，Nature Clinical Practice Oncology2007,4,245-255 ;Singh R. et Rickson H. K. , Therapeutic Antibodies Methods andProtocols, 2009，525，445-467。不同類族的細胞毒素劑如紫杉烷衍生物(W0 06061258)，細霉素(Ieptomycine)衍生物(W0 07144709)，CC-1065 和類似物(W0 2007102069)或如甲氨蝶呤，道諾霉素，阿霉素，長春新堿，長春堿，美法侖，絲裂霉素C，苯丁酸氮芥已經(jīng)用于與抗體接合。使用對腫瘤細胞具有親和性的尋祀抗體(targeting antibody)使得能夠?qū)⒓毎舅貏┲苯舆f送至腫瘤細胞附近或直接投送到腫瘤細胞中，由此增加細胞毒素劑的功效而同時最小化通常與細胞毒素劑有關(guān)的副作用。美登素生物堿類是源自美坦生的細胞毒素劑，其中美坦生是從脫落非洲灌木(cast African shrub)Maytenus serrata 分離出的天然產(chǎn)物(US 3896111)。已經(jīng)制備出很多美登素生物堿類:參見 US 4151042 J. Med. Chem. 1978，21，31-37 ；Nature 1977，270，721-722，Chem. Pharm. Bull. 1984,3441-3451 ；US 4248870 ；US 4137230 ；Chem. Bull. 1984，3441。
現(xiàn)有技術(shù)US 5，208，020、US 5,416,064、和 R. V. J. Chari，31 Advanced Drug DeliveryReviews 89-104(1998)描述了美登素生物堿類的綴合物如L-DMl (A)或L_DM4(A’ )權(quán)利要求
1.具有式⑴的化合物
2.根據(jù)權(quán)利要求I的化合物，其中X2是-CH=CH-或-C0NR-，該CO基團鍵接于-X1-ALK-基團，R是H或(C1-C6)烷基。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2的化合物，其中-X1-ALK-是-S-CH2-。
4.根據(jù)權(quán)利要求I至3的化合物，其中i是3、4、5、6、7、8、9或10。
5.根據(jù)權(quán)利要求I至4的化合物，其具有式(II)
6.化合物，其選自以下化合物
7.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的化合物，其中-COZbRb是-C00H、-COO (C1-C6)烷 基、-COOMe , -CooCH2CH=CH2,
8.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的化合物，其形式為堿或鹽或所述堿或所述鹽的溶劑化物或水合物。
9.制備綴合物的方法，包括以下步驟 (i)使抗體的任選地添加緩沖液的水溶液與根據(jù)權(quán)利要求I至8的化合物的溶液接觸； ( )然后任選地將步驟(i)中形成的綴合物與可能存在于溶液中的未起反應的試劑和任何聚集體分離。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中所述反應的溫度通常為20至40°C和/或所述反應時間為I至24小時。
11.根據(jù)權(quán)利要求9至10的方法，其中在步驟⑴或(ii)之后，所述含綴合物的溶液經(jīng)受超濾和/或滲濾的另外步驟(iii)。
12.根據(jù)權(quán)利要求9至11的方法，其中所述抗體是特異結(jié)合EphA2受體的抗體或其表位結(jié)合片段，并且包括至少一個重鏈和至少一個輕鏈，其中所述重鏈包括具有由SEQ IDNOS :1、2、和3表示的氨基酸序列的三個序貫互補決定區(qū)，并且其中所述輕鏈包括具有由SEQ ID NOS :4、5、和6表示的氨基酸序列的三個序貫互補決定區(qū)。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述抗體或所述表位-結(jié)合片段是人源化或表面修整的抗體或其表位-結(jié)合片段。
14.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述重鏈包括由SEQID NO 12組成的氨基酸序列，和其中所述輕鏈包括由SEQ ID NO 14組成的氨基酸序列。
15.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述重鏈的組成是氨基酸序列SEQID N0:18，和其中所述輕鏈的組成是氨基酸序列SEQ ID NO 160
16.可使用根據(jù)權(quán)利要求9至15的方法獲得的綴合物。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的綴合物，其使用UV分光光度計測得的平均DAR高于4，更特別為4至10，甚至更特別為4至7，該DAR通過以下方程DAR=cd/ca確定，其中 cD- [ ( ε Α280ΧΑ·252) _ ￡ Α252Χ-^28θ) ] / [ ( ε D252X ￡ Α28θ) _ ( ￡ A252X ￡ D28o)] CA_ [八280_ (CDX ￡ D280) ] / ε Α280 ε D252=26, 159M_lcm_1 ε D280=5, 180M_1cm_1 ε A280=224, 000M_1cm_1 ε A252=82, 880M_1cm_1 A252和A28tl是在UV分光光度計上分別在252和280nm測得的綴合物的吸光率。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的綴合物，其中DAR為5至8，更特別為5.5至8，甚至更特別為5. 9 至 7. 5。
19.包含根據(jù)權(quán)利要求16至18的綴合物的水溶液。
20.根據(jù)權(quán)利要求I至8的產(chǎn)物，其用作抗癌劑。
21.根據(jù)權(quán)利要求16或18的綴合物，其用作抗癌劑。
22.根據(jù)權(quán)利要求I至8的化合物用于制備綴合物的用途，其中具有下式的美登素生物堿類片段共價連接于抗體
全文摘要
本發(fā)明涉及具有式(I)的化合物其中ALK是(C1-C6)亞烷基；X1和X2各自獨立地為以下基團之一-CH=CH-、-CO-、-CONR-、-NRCO-、-COO-、-OCO-、-OCONR-、-NRCOO-、-NRCONR’-、-NR-、-S(O)n(n=0、1或2)或–O-；R和R’獨立地為H或(C1-C6)烷基；i為整數(shù)1至40，優(yōu)選為1至20，更優(yōu)選為1至10；當X2是-CH=CH-時，j是對應1的整數(shù)，當X2不是-CH=CH-時，j是對應2的整數(shù)；Zb是單鍵、-O-或-NH-，Rb是H或(C1-C6)烷基、(C3-C7)環(huán)烷基、芳基、雜芳基或(C3-C7)雜環(huán)烷基；或Zb是單鍵且Rb是Hal。本發(fā)明涉及該美登素生物堿類與具有腫瘤細胞親和性的抗體制備綴合物的用途。
文檔編號A61K31/537GK102741260SQ201080054885
公開日2012年10月17日 申請日期2010年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月2日
發(fā)明者A.康默肯, C.弗羅蒙德, D.塔瓦雷斯, F.帕克, H.博查德, I.沙遜, V.米科爾 申請人:賽諾菲