專利名稱：滅活的家禽疫苗的制作方法
滅活的家禽疫苗
本發(fā)明涉及用于保護家禽對抗新城疫的藥物組合物，其包含免疫量的滅活新城疫病毒和佐劑，涉及免疫原性量的滅活新城疫病毒和佐劑的用途，用于制造用于雞或火雞的接種的強化疫苗，以及涉及包含下述容器的成套試劑盒包含用于雞或火雞的首次接種的滅活新城疫病毒和佐劑的容器，以及包含用于雞或火雞的強化接種的滅活新城疫病毒和佐劑的容器。商業(yè)的家禽養(yǎng)殖可以大略分為三個部分產(chǎn)蛋雞、種雞和肉仔雞的生產(chǎn)。肉仔雞、產(chǎn)蛋雞和種雞對于許多病毒、細菌和寄生蟲感染都是脆弱的。作為預(yù)防措施，它們在生命的早期已經(jīng)針對許多病毒疾病進行免疫接種。作為絕大多數(shù)雞或火雞飼養(yǎng)者的標準接種方案的一部分的病毒疫苗之一是新城疫病毒疫苗。新城疫是引起養(yǎng)禽業(yè)的很大經(jīng)濟損失、具有廣泛地理分布的家禽病毒感染。新城疫病毒(NDV)是這種疾病的病原，是副粘病毒(Paramyxovirus)屬的原型病毒。新城疫是復(fù)雜的，因為病毒的不同分離物和毒株在疾病的嚴重性上可能產(chǎn)生巨大的變異。一般地，雞或火雞越年輕，疾病越為急性和嚴重。感染可能通過吸入或者攝食發(fā)生，病毒的傳染形式從一只禽鳥傳播到另一只。如上文提及的，已經(jīng)鑒定了 NDV的幾種致病型，即，強毒型、中毒型和弱毒型。疾病的親神經(jīng)的強毒型是由NDV的高度病原性的毒株引起，特征在于嚴重的呼吸病征和隨后的神經(jīng)病學(xué)病征的突然發(fā)作。大多數(shù)情況下，感染的動物不能存活。親內(nèi)臟的強毒NDV毒株是高度病原性的，引起高死亡率和胃腸道中的嚴重病變。NDV的中毒型毒株通常導(dǎo)致完全敏感的禽鳥中的嚴重呼吸道疾病，中毒型和強毒型毒株都引起成年禽鳥中產(chǎn)蛋量的顯著降低。ND病毒的弱毒型毒株一般引起輕微的疾病，其特征在于呼吸病征，特別是在幼小的完全敏感的禽鳥中。為了降低商業(yè)家禽業(yè)中由于ND的經(jīng)濟損失，雞針對ND免疫接種。來自弱毒型和中毒型毒株的活疫苗已經(jīng)常規(guī)地應(yīng)用，中毒型疫苗僅適合于二次疫苗接種。然而，在弱毒型組中，毒力也有相當(dāng)大的范圍。用作活疫苗的NDV毒株包括V4、Hitchner BI、F、La Sota(弱毒型)和毒株H、Mukteswar、Komarov和Roakin (中毒型)。根據(jù)經(jīng)驗，肉仔雞具有僅1-12周的壽命期。因而，它們主要用活的減毒NDV疫苗來接種。種雞和肉仔雞具有顯著地更長的壽命期，重要的是在它們的整個壽命期內(nèi)保護它們對抗傳染性疾病。這意味著它們將更多受益于提供早期和持久保護的疫苗。在家禽疫苗接種的早期，活的減毒疫苗是不安全的或是不存在的。因而，在1950年和約1960年間，雞不得不用滅活的病毒疫苗接種。然而，這樣的疫苗在沒有任何佐劑，或僅有在當(dāng)時可用的佐劑的情況下施用，佐劑具有嚴重的、現(xiàn)今不可接受的副作用。那時沒有真正可接受的佐劑。同樣地，當(dāng)前使用的水包油乳劑和油包水乳劑在那時是未知的。然而多年以來，開發(fā)了用于家禽保護的安全的活疫苗?；畹腘D疫苗的主要優(yōu)點是可以通過便宜的大量施加技術(shù),例如噴霧和飲用水施加來施用?；钜呙邕M一步具有優(yōu)點是它們每一劑更便宜，并提供了相對即刻的保護。此外，它們緊密地模擬了自然感染。最后，活的減毒ND疫苗，當(dāng)通過施加技術(shù)例如噴霧和飲用水施加來施用時，提供了除全身性保護之外的良好的局部保護。因而，在現(xiàn)代的家禽業(yè)中，活的減毒新城疫疫苗是用于雞或火雞的首次接種的疫苗。用活體接種疫苗首次免疫的缺點是，它們的保護不是真正持久的，因而在必要時必需給予活減毒疫苗的第二次、可能第三次接種。
然而，多年來還發(fā)現(xiàn)的是，滅活疫苗當(dāng)在活減毒疫苗的首次接種后作為強化疫苗給予時，具有的優(yōu)點是它們在用活減毒疫苗首次免疫的雞或火雞中提供了更久的持續(xù)免疫性。因而，現(xiàn)今第二次接種、所謂的強化接種優(yōu)選地用滅活疫苗給予。許多年以前，組合活減毒疫苗和滅活疫苗的這種接種方案已經(jīng)被證明是高效率的(Glisson，J. R.and Kleven, S. Η. 1993 Poultry vaccines. In: Peters, A. R. (Ed. ) , Vaccinesfor Veterinary Applications. Butterworth Heinemann, Oxford, UK, pp. 170-173(1993))。結(jié)果，家禽接種中當(dāng)前的實踐是如下的對于新城疫，以及實際上對于許多其他病毒性家禽疾病例如傳染性支氣管炎，活的減毒病毒疫苗被用作首次接種，而滅活疫苗的強化被用于誘導(dǎo)在用活減毒病毒疫苗首次免疫的禽鳥中的延長的抗體反應(yīng)。參見，例如，“Vaccination Strategies，，，Glisson, J. R. , in Poultry Digest 第 12-16 頁，1999 年12月/2000年I月。Hilgers, L. A. Th.,等人再次強調(diào)了當(dāng)前的標準接種療法的重要性對于雞中的例如新城疫和傳染性支氣管炎，用活疫苗首次接種以及用滅活疫苗強化。在這篇論文中，它們檢查了與滅活的強化疫苗一起給予的各種佐劑的效果(Vet. Immunol, andImmunopath. 66:159-171 (1998)。使用活的減毒疫苗的少數(shù)缺點之一是，雖然誘導(dǎo)了局部免疫，它們可能引起顯著的接種反應(yīng)，特別是在噴霧接種之后在呼吸道中。這種不可避免的缺點到目前為止一定程度上通過使用非常輕微的/減毒的病毒用于接種，特別是用于在年幼動物中的首次接種來處理。本發(fā)明的目的是提供一些方法以可選擇的途徑解決這個問題?，F(xiàn)在令人驚訝地發(fā)現(xiàn)的是，通過用滅活疫苗的首次免疫和強化的有效接種是可行的，條件是首次免疫和強化疫苗包含合適的佐劑。再更令人驚訝地發(fā)現(xiàn)的是，滅活的NDV疫苗首次免疫/強化方式不僅提供了極好的全身性保護，還提供了氣管的保護。這是高度出乎意料，因為滅活疫苗必需通過胃腸外的途徑施用，因而完全無法預(yù)期氣管中局部免疫的誘導(dǎo)。這種令人驚訝的作用的明確優(yōu)點是，根據(jù)這種方式接種的動物幾乎不受田間感染，如果有的話，的影響。這對于動物和農(nóng)戶都是有益的。當(dāng)然最重要的優(yōu)點是可以完全避免在非常年幼的動物中使用活的減毒病毒涉及的風(fēng)險。滅活的NDV首次免疫/強化接種方式可以用于肉仔雞、種雞和產(chǎn)蛋雞。對于肉仔雞，首次免疫接種優(yōu)選地盡可能早地進行。優(yōu)選地，首次免疫在I到7天齡之間進行。強化接種在首次免疫之后2到12周之間給予。在高NDV感染壓力的地區(qū)，第二次接種可以在首次免疫之后2周進行。更標準的接種方案將是在首次免疫和強化之間有4-10周。如上所述，取決于不同國家中使用的生產(chǎn)方法，在許多情況下，肉仔雞達不到10周齡。因而，優(yōu)選的接種方式將是以下的強化將在首次免疫之后約4-8周給予，在肉仔雞在5-6周之后宰殺的情況下，強化將在約4周時給予。在這種情況下首次免疫接種因而將在1-14天之間給予。對于種雞和蛋雞，首次免疫接種優(yōu)選地也在I到7日齡之間給予，強化接種可以在首次免疫之后2到12周給予。在這種情況下，盡管取決于感染壓力，強化接種可以推遲直到12周，以將免疫性的持續(xù)時間延長數(shù)周。然而一般而言，首次免疫和強化之間優(yōu)選的時間間隔也是4到8周之間。本發(fā)明的第一個實施方式因而涉及免疫原性量的滅活新城疫病毒和佐劑用于制 造強化疫苗的用途，所述強化疫苗用于在用所述強化疫苗接種之前2到12周之間已經(jīng)用首次免疫疫苗接種的雞或火雞的接種，所述首次免疫疫苗包含免疫原性量的滅活新城疫病毒和佐劑。新城疫病毒的滅活方法是本領(lǐng)域公知的。例如，用公知的滅活化合物，例如甲醛、β-丙內(nèi)酯和雙乙烯亞胺，可以進行化學(xué)滅活。例如，通過加熱滅活或通過用X-或Y-輻射、或用UV-光來照射，可以進行物理滅活。疫苗中滅活的NDV抗原的量原則上可以是IO2到IOiq當(dāng)量的蛋傳染劑量(EID50)之間。(當(dāng)量，由于在疫苗中病毒將被滅活，因而不是蛋傳染性的)。然而實際上，IO2 EID50被認為是低劑量，其僅在存在非常強的佐劑的情況下是有效的。IO4到IO8之間的量是優(yōu)選的劑量。雖然是適合的，IOki EID5tl的劑量從經(jīng)濟角度是不吸引人的。存在著本領(lǐng)域已知的許多佐劑適合于與滅活的NDV組合，例如，氫氧化鋁、磷酸鋁、皂角苷、植物油例如生育酚和礦物油。非常高效的佐劑是水包油乳劑，特別是油包水乳齊U，進一步也稱為水包油佐劑和油包水佐劑。這樣的乳劑是本領(lǐng)域公知的。因而，優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明使用的強化疫苗或藥物化合物包含油包水佐劑。滅活疫苗的施用途徑原則上是胃腸外的途徑。施用可以例如肌肉內(nèi)或皮下進行。這些施用途徑以及它們的細節(jié)是家禽接種領(lǐng)域公知的。滅活的NDV首免-強化接種方式同樣適合于雛雞和火雞。本發(fā)明的另一個實施方式涉及包含免疫原性量的滅活新城疫病毒和佐劑的藥物組合物，用于雞或火雞中新城疫的治療，其中所述治療包括用包含免疫原性量的滅活新城疫病毒和佐劑的疫苗向所述雞或火雞進行首次免疫接種，以及在所述首次免疫接種的2-12周內(nèi)用包含免疫原性量的滅活新城疫病毒和佐劑的疫苗向所述雞或火雞進行強化接種的步驟。優(yōu)選地，所述首次免疫和/或強化疫苗或藥物組合物除了上文定義的NDV成分之外包含來自對家禽為病原性的病毒或微生物的一種或更多種其他抗原，或編碼所述抗原的遺傳信息。更優(yōu)選的，所述病毒或微生物選自由傳染性支氣管炎病毒、傳染性囊病(Gumboro)、雞貧血癥病原體、禽類呼腸孤病毒、雞敗血支原W OiycopIasmagalli sep ti cum ) > 火雞鼻氣管炎病毒、副雞嗜血桿菌(Maemophi Ius paragal I inarum )(Coryza)、雞痘病毒、禽腦髓炎病毒、產(chǎn)蛋下降綜合征病毒、傳染性喉氣管炎病毒、火雞的皰疫病毒、艾美蟲屬物種、鼻腔鳥桿菌(Ornithobacterium rhinotracheale)、多殺巴斯德菌(.Pasteurella mu 11 o c i da)、失節(jié)澈支眉、體■ {Myc op I asma)、沙門氏菌屬物種和大
腸桿菌構(gòu)成的組?？梢灾苽涫状蚊庖吆蛷娀呙缫约八幬锝M合物，并以懸浮液的形式或以凍干形式來市場化。它們將另外含有通常用于這種活性成分的藥學(xué)上可接受的載體。載體可以是，或可以包括穩(wěn)定劑、稀釋劑、防腐劑和緩沖劑。適合的穩(wěn)定劑例如SPGA、碳水化物(例如，奶粉、血清白蛋白或酪蛋白)或其降解產(chǎn)物。適合的緩沖劑例如堿金屬磷酸鹽。適合的防腐劑為硫柳萊(thimerosal)、乙萊硫代水楊酸鈉(merthiolate)和慶大霉素。稀釋劑包括水、水性緩沖液((例如緩沖鹽水)、醇和多元醇(例如甘油)。優(yōu)選地，疫苗和藥物組合物被凍干，以使得它們更少依賴于冷藏。免疫原性量的NDV是在雞或火雞中誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的NDV的量，當(dāng)與在未免疫禽鳥中用野生型NDV感染之后的病理作用相比時，所述免疫反應(yīng)降低疾病的病理作用。適合于制備滅活NDV疫苗，更具體地，油-乳劑疫苗的ND病毒毒株包括這樣的毒株，如 Clone 30、Ulster 2C、Hitchner BI、La Sota、Roakin 和各種強毒病毒(D. J.Alexander, In Diseases of Poultry, 9th edition 1991，eds. Calnek et al.，IowaState University Press, Ames, Iowa, 496-519)。本發(fā)明的另一個實施方式涉及包含下述容器的成套試劑盒包含用于雞或火雞的首次免疫接種的滅活新城疫病毒和佐劑的容器，以及包含用于雞或火雞的強化接種的滅活新城疫病毒和佐劑的容器。在這點上容器可以是，例如，任何材料的標準的疫苗燒瓶或試管或任何其他物體，在其中可以保存疫苗。
實施例實施例I :
這個實驗的目的是評估使用在GNE中配制的滅活弱毒型NDV毒株的首次免疫-強化接種策略是否誘導(dǎo)對抗局部給予的活的中毒型NDV毒株Beaudette攻擊的局部保護。(GNE是在礦物油基礎(chǔ)上的標準油包水乳劑)。I材料和方法 1.1實驗的建立
一組3-4周齡SPF白色來亨雞(組I)置入隔離器中，如表I標明的，用每劑含有大約10~7.7 EID50甲醛滅活的弱毒型NDV毒株的油包水乳劑疫苗在胸部肌肉中兩次肌內(nèi)注射(i.m.)來接種。組2不接種。在實驗開始時，首次接種后6周和8周從兩個組的所有動物采集血液。首次接種后八周，兩個組的雞用NDV Beaudette通過眼途徑攻擊。攻擊后3、4和7天從口咽和泄殖腔采集兩個棉拭，用于病毒重新分 離。攻擊后十五天，從兩個組的所有動物采集血液。表I :分組和給藥
權(quán)利要求
1.免疫原性量的滅活新城疫病毒和佐劑用于制造強化疫苗的用途，所述強化疫苗用于在用所述強化疫苗接種之前2到12周之間已經(jīng)用首次免疫疫苗接種的雞或火雞的接種，所述首次免疫疫苗包含免疫原性量的滅活新城疫病毒和佐劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求I的用途，其中所述佐劑是油包水佐劑。
3.包含免疫原性量的滅活新城疫病毒和佐劑的藥物組合物，用于雞或火雞中新城疫的治療，其中所述治療包括用包含免疫原性量的滅活新城疫病毒和佐劑的疫苗向所述雞或火雞進行首次免疫接種，以及在所述首次免疫接種的2-12周內(nèi)用包含免疫原性量的滅活新城疫病毒和佐劑的疫苗向所述雞或火雞進行強化接種的步驟。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的藥物組合物，其中所述佐劑是油包水佐劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4的藥物組合物，其特征在于所述組合物包含來自對家禽為病原性的病毒或微生物的一種或更多種其他抗原，或編碼所述抗原的遺傳信息。
6.根據(jù)權(quán)利要求3-5的任一項的藥物組合物，其特征在于所述病毒或微生物選自由傳染性支氣管炎病毒、傳染性囊病(Gumboro)、雞貧血癥病原體、禽類呼腸孤病毒、雞敗血支原體(Mycoplasma galIisep ticum )、火雞鼻氣管炎病毒、副雞嗜血桿菌(MaemophiIusparagal I inarum ) (Coryza)、雞痘病毒、禽腦髓炎病毒、產(chǎn)蛋下降綜合征病毒、傳染性喉氣管炎病毒、火雞的皰疫病毒、艾美蟲屬物種、鼻腔鳥桿菌(OraiiAoAacieriw rhino tracheale )、多殺巴斯德菌 iPas teurella mu I i ocit/a )、關(guān)節(jié)液支原體(Mycoplasmasyn ο ria e )、沙門氏菌屬物種和大腸桿菌構(gòu)成的組。
7.成套試劑盒，其特征在于所述試劑盒包含下述容器包含用于雞或火雞的首次免疫接種的滅活新城疫病毒和佐劑的容器，以及包含用于雞或火雞的強化接種的滅活新城疫病毒和佐劑的容器。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含免疫量的滅活新城疫病毒和佐劑的藥物組合物，用于家禽針對新城疫的保護，涉及免疫原性量的滅活新城疫病毒和佐劑用于制造雞或火雞接種的強化疫苗的用途，以及涉及包含下述容器的成套試劑盒，包含用于雞或火雞的首次免疫接種的滅活新城疫病毒和佐劑的容器，以及包含用于雞或火雞的強化接種的滅活新城疫病毒和佐劑的容器。
文檔編號A61K39/275GK102639148SQ201080054590
公開日2012年8月15日 申請日期2010年11月30日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月1日
發(fā)明者C.C.施里爾 申請人:英特維特國際股份有限公司