專利名稱：用于免疫調(diào)節(jié)的多聯(lián)體的制作方法
用于免疫調(diào)節(jié)的多聯(lián)體本發(fā)明涉及一種調(diào)節(jié)人類和動(dòng)物免疫系統(tǒng)活性的聚合的、非編碼核酸分子和其制備方法以及包括所述聚合的、非編碼核酸分子的疫苗，其中聚合的、非編碼核酸分子可理解為非編碼核酸分子，包括所述非編碼核酸分子的至少四個(gè)共價(jià)結(jié)合分子(四聚體)。在對(duì)各自病原體選擇特異淋巴細(xì)胞、其克隆擴(kuò)增和分化為效應(yīng)細(xì)胞后，適應(yīng)性免疫反應(yīng)延遲(3-5天)開(kāi)始，然后通過(guò)形成免疫學(xué)記憶對(duì)各自病原體提供長(zhǎng)期持久的保護(hù)， 先天性免疫系統(tǒng)細(xì)胞通過(guò)保守的病原體相關(guān)性分子圖式(PAMP)由生殖細(xì)胞編碼受體識(shí)別病原體并立即作出反應(yīng)。不同的反應(yīng)屬于不同種類的細(xì)胞類型，如細(xì)胞因子(如IL-1、 IL-6、TNF- α )和趨化因子(如IL-8/CXCL8、MIP-I α / β、MCP-1)的分泌，效應(yīng)物機(jī)制的激活(吞噬作用、呼吸放電、殺菌劑或細(xì)胞毒性物質(zhì)或溶解顆粒的釋放)，共刺激分子(CD80， CD86)的表達(dá)和MHC-分子的增強(qiáng)表達(dá)。因此，一方面效應(yīng)細(xì)胞被募集和激活，這能消除已進(jìn)入的病原體，另一方面，適應(yīng)性免疫系統(tǒng)細(xì)胞接收為其激活所必要的信號(hào)。為了提高免疫反應(yīng)，CpG-寡核苷酸(CpG-ODN)已被用作一類新的免疫調(diào)節(jié)分子。 這種非甲基化CG-基序能在細(xì)菌DNA中發(fā)現(xiàn)并代表了對(duì)于免疫系統(tǒng)的“危險(xiǎn)信號(hào)”。病原體相關(guān)性分子圖式(PAMP)引起先天性免疫系統(tǒng)的非特異性激活(Krieg，Nat.Med 2003,9 831-835)。CpG-ODN通過(guò)細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-12、干擾素-γ和腫瘤壞死因子-α誘導(dǎo)基于ThI的免疫反應(yīng)。包含所述CpG-ODN的免疫刺激核酸(ISQ具有若干個(gè)堿基長(zhǎng)度以及不包括用于蛋白質(zhì)表達(dá)的開(kāi)放讀框。ISS表示線性核酸分子，其末端是開(kāi)放的(游離羥基和磷酸基團(tuán))或由合成基團(tuán)保護(hù)。細(xì)胞免疫反應(yīng)的刺激允許影響反饋環(huán)，其將不能對(duì)病人無(wú)干擾地產(chǎn)生令人滿意的免疫活性。可用于穩(wěn)定CpG-DNA的CpC-ODN以硫代磷酸酯主鏈的修飾有一些嚴(yán)重缺陷。顯著的毒性(Heikenwalder 2004,Levin 1999)和非特異性結(jié)合蛋白質(zhì)(Brown 1994)特別屬于該類。由此，開(kāi)發(fā)了新類型共價(jià)閉合免疫調(diào)節(jié)DNA(WO 01/07055/EP1196178)。這些 DNA-分子由兩個(gè)化學(xué)合成的DNA-ODN組成，在5’ -端有自互補(bǔ)部分及在3’ -末端有回文、 重疊末端，使兩個(gè)DNA分子的連接產(chǎn)生共價(jià)閉合分子。在非互補(bǔ)部分具有CG-基序的這些 DNA-分子顯示出與CpG-ODN相似的活性(增強(qiáng)的B-細(xì)胞上表面分子⑶80、⑶40、MHC的表達(dá)以及通過(guò)PBMC的IL-6、IFN- y、IFN- α、IL-12、TNF α的分泌)，但與有硫代磷酸酯主鏈的CpG-ODN相比，對(duì)于誘導(dǎo)的細(xì)胞因子的表達(dá)模式其顯示差異以及在小鼠中明顯地更小毒性?，F(xiàn)有技術(shù)中該免疫調(diào)節(jié)DNA對(duì)于人類和動(dòng)物免疫系統(tǒng)的活性調(diào)節(jié)有若干缺陷。不可能以所希望的程度調(diào)節(jié)人類和動(dòng)物免疫系統(tǒng)的活性，尤其是激活它。W001/07055的分子，例如

圖1所示或權(quán)利要求11所示，由若干個(gè)脫氧核糖核苷酸支架組成，該脫氧核糖核苷酸支架形成部分單鏈 鈴型和共價(jià)閉合DNA分子，這在本發(fā)明的范圍內(nèi)指定為二聚體。根據(jù)WO 01/07055，用作初始材料的單體核酸在連接前被加熱，接受相同的核酸分子，每一個(gè)由一 鈴型二聚體組成(對(duì)比WO 01/07055的圖1)。所得的核酸是WO 01/07055圖1所示的啞鈴型。從本發(fā)明的意義上說(shuō)，單體沒(méi)有指定由例如單一堿基組成的結(jié)構(gòu)，但是指定如下核酸， 其本身由數(shù)個(gè)脫氧核糖核苷酸一磷酸組成(對(duì)比WO 01/07055的圖1或權(quán)利要求11)，該脫氧核糖核苷酸一磷酸由于其給定的堿基序列或給定的三維構(gòu)象而一起形成單體典型性能。來(lái)自現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的目的是提供合適的免疫調(diào)節(jié)DNA分子，其起始改良的免疫反應(yīng)及提供其制備方法和包括所述免疫調(diào)節(jié)DNA-分子的疫苗。免疫調(diào)節(jié)在本發(fā)明文中意指免疫系統(tǒng)的介質(zhì)和效應(yīng)細(xì)胞，因此目前主要已知的有輔助功能的胸腺細(xì)胞和細(xì)胞毒性胸腺細(xì)胞、B-細(xì)胞和所謂的NK (自然殺傷)_細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞和樹(shù)突細(xì)胞及其前體以及目前沒(méi)有明確鑒別功能的在免疫系統(tǒng)內(nèi)具有作用的細(xì)胞群通過(guò)使用核酸分子而被刺激以增殖、遷移、分化或其活性。免疫調(diào)節(jié)意指除了上述定義的含義中免疫反應(yīng)的一般改良，免疫反應(yīng)的類型或特征也將被影響，無(wú)論通過(guò)影響開(kāi)始或成熟的免疫反應(yīng)或?qū)τ谝汛_立的反應(yīng)改變其特性。本發(fā)明請(qǐng)求保護(hù)的具有改良的免疫調(diào)節(jié)性質(zhì)的分子與WO 01/07055聚合的、 非編碼核酸分子二聚體物質(zhì)對(duì)比。聚合的核酸分子應(yīng)被理解為所謂的高分子多聯(lián)體 (concatemer)。本發(fā)明的聚合分子可由包括以下步驟的方法制備-提供5，磷酸化脫氧核糖核苷酸(5，-phosphorylated deoxyribonucleotide acid)；-乙醇沉淀，隨后在50°C干燥沉淀物或在50°C凍干所述DNA分子，尤其在存在 MgCl2的情況下，直到得到干殘留物，然后在緩沖液中重懸；-添加T4-DNA-連接酶，從而產(chǎn)生反應(yīng)混合物；以及-在37°C溫育所述反應(yīng)混合物至少30分鐘。多聯(lián)體包括共價(jià)結(jié)合的單體單元，其完全環(huán)狀閉合，在組成性單體距離內(nèi)具有雙鏈部分及免疫調(diào)節(jié)CG-基序，優(yōu)選在單鏈部分內(nèi)。完全驚人的是，包括四聚體、六聚體或共價(jià)閉合免疫調(diào)節(jié)DNA的高分子組裝物的這些聚合物與現(xiàn)有技術(shù)中二聚體分子相比有驚人的改良效果。本發(fā)明請(qǐng)求保護(hù)的聚合分子的分子特性在圖1和圖2示出，圖3和圖4示出功能特性，其得自本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)用的制備方法。在描述的方法中使用具有回文5'-或者包括3'-末端的核酸分子作為離析物導(dǎo)致聚合物具有不同的大小，其中只有請(qǐng)求保護(hù)的四聚體或高分子組裝物實(shí)現(xiàn)了高效力功能。由于擴(kuò)展的和多樣的分子大小，不可能通過(guò)結(jié)構(gòu)特征來(lái)鑒別，而經(jīng)由其制備方法鑒別所述聚合物是非常準(zhǔn)確的。新方法提供了不同于現(xiàn)有技術(shù)中描述的產(chǎn)物。此可根據(jù)本發(fā)明圖3所示的二聚體和聚合物性質(zhì)上的明顯差異來(lái)證明。本發(fā)明的高分子聚合物比現(xiàn)有技術(shù)中已知的非聚合結(jié)構(gòu)出人意料的更適合免疫調(diào)節(jié)。如果利用聚丙烯酰胺凝膠電泳的等同方法純化，尤其采用HPLC接著FPLC的聯(lián)合純化，本發(fā)明的分子也能通過(guò)在水里提供5’ -磷酸化脫氧核糖核苷酸而制備。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知通過(guò)幾種高性能方法如HPLC或FPLC的聯(lián)合可得到PAGE-純化的類似純化級(jí)別。出人意料地，所述方法的單一步驟的順序產(chǎn)生多聚體分子，包括環(huán)狀穩(wěn)定和與彼此共價(jià)結(jié)合的單體，單體具有至少M(fèi)個(gè)核苷酸。同時(shí)形成的高分子聚合物通常包括偶數(shù)的單體組分。分子的生成鏈不包括游離5’ -或3’ -端。經(jīng)分子間酯化形成本發(fā)明分子的單體特征如下
-包括至少2個(gè)連續(xù)核苷酸的一部分，其在適宜的條件下與單體的另一部分形成雙鏈莖；-在這些反向互補(bǔ)部分間是至少4個(gè)核苷酸；-被細(xì)胞結(jié)構(gòu)識(shí)別的CG-基序優(yōu)選存在于單鏈部分；-修飾的核苷酸也可以是部分單鏈區(qū)域，其和脂肪酸、糖或氨基酸共價(jià)連接。本發(fā)明的分子包括至少4個(gè)單體，在上述合成中關(guān)于其構(gòu)象而形成。單體經(jīng)分子間鍵通過(guò)形成共價(jià)鍵形成二、四、六或更多的鏈。這導(dǎo)致形成所謂的二聚體、四聚體或六聚體，除二聚體之外所有被指定為聚合物。本發(fā)明的分子亦可被定義為多聯(lián)體。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的分子是多聯(lián)體分子，其中至少四個(gè)單獨(dú)單體的環(huán)彼此連接，優(yōu)選呈線性以便優(yōu)選兩個(gè)尤其優(yōu)選若干雙鏈部分彼此通過(guò)單鏈環(huán)元件分開(kāi)。本發(fā)明的分子與現(xiàn)有技術(shù)分子相比能更好的調(diào)節(jié)人類或動(dòng)物免疫系統(tǒng)的活性?，F(xiàn)有技術(shù)分子是已知的免疫調(diào)節(jié)核酸序列，其作為低分子 鈴型結(jié)構(gòu)是有效的。最知名的免疫修飾短寡脫氧核糖核苷酸包括未甲基化胞嘧啶-鳥(niǎo)苷-基序。在本發(fā)明意義中，這種核酸的生理學(xué)作用也被理解為免疫調(diào)節(jié)或者包括免疫系統(tǒng)活性的調(diào)節(jié)。EPl 196 178公開(kāi)了另外若干分子，由具有至少一個(gè)環(huán)的莖組成，其例如在EPl 196 178的圖1和2中公開(kāi)。在本發(fā)明的意義內(nèi)，這種分子是二聚體結(jié)構(gòu)。本發(fā)明不包括這種二聚體。應(yīng)注意到術(shù)語(yǔ)聚合物在科學(xué)中有若干不同含義。聚合物可能例如是較長(zhǎng)的核酸和包括若干形成較大組裝物的相同或相似分子的結(jié)構(gòu)。本發(fā)明的意義內(nèi)，聚合物指定為分子的鏈，包括至少四個(gè)單體。如果使用優(yōu)選的單體，產(chǎn)生的四聚體的分子量相當(dāng)于大約170kDa(對(duì)比圖2~)。在本發(fā)明意義內(nèi)，聚合物是例如若干莖-環(huán)結(jié)構(gòu)，如圖1所述，由若干相同或相似莖-環(huán)結(jié)構(gòu)組裝成更高級(jí)的結(jié)構(gòu)(聚合物)。指定本發(fā)明的大于23kDa的所有分子是聚合物。對(duì)于描述的反應(yīng)條件在連接過(guò)程中引起單體瞬時(shí)附著，其可通過(guò)連接酶酯化。在特定反應(yīng)條件下，只為了進(jìn)行確認(rèn)，在合成中形成所得的聚合物。從已形成的二聚體中制備高分子聚合物是不可能的。形成聚合物的單體結(jié)構(gòu)彼此共價(jià)連接。已形成的聚合物對(duì)于加熱或變性劑是穩(wěn)定的，這意味著反過(guò)來(lái)，所述二聚體不能從本發(fā)明的高分子分子用簡(jiǎn)單物理手段得到。出乎意外的，相對(duì)簡(jiǎn)單的方法步驟能得到和二聚體結(jié)構(gòu)相比有改良的、不明顯性質(zhì)的這種聚合結(jié)構(gòu)。產(chǎn)生高分子組裝物例如能經(jīng)由離心、凝膠電泳或柱層析來(lái)檢測(cè)并獲得和二聚體相比對(duì)于免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)具有改良性質(zhì)的高復(fù)雜結(jié)構(gòu)如四聚體、六聚體或其它 (對(duì)比圖3和4)來(lái)完成。在實(shí)驗(yàn)室生物體或人類中免疫調(diào)節(jié)的不同形式證明了這一點(diǎn)。所有根據(jù)以下描述的脫氧核糖核酸能用于所述聚合方法。5，-P-W-3，，其中-P、W、S是核酸，以列出的閱讀順序中經(jīng)磷酸二酯連接“_”彼此連接；-核酸P、W或S的序列包括至少一個(gè)脫氧核糖核苷酸序列CG基序；-W是至少4個(gè)核苷酸長(zhǎng)；以及-核酸部分S和P的序列是彼此反向互補(bǔ)的。所得的聚合物符合下式W-S- {P-W-S} n-p-w-s- (P-W-S) n_p V η ε IN0 ,其中-在式右邊核酸P和左邊核酸W共價(jià)連接；
- “η”通過(guò)標(biāo)示內(nèi)部單體單元的數(shù)量描述了串聯(lián)化程度。因?yàn)楸景l(fā)明請(qǐng)求保護(hù)的聚合物通過(guò)它們的確認(rèn)獲得其性質(zhì)，在本發(fā)明意義內(nèi)，聚合結(jié)構(gòu)可從不連續(xù)的相同單體組裝。核酸組W在這個(gè)連接中可包含具有B、U、K、Y序列的分子，核酸組P可包含具有J、E、R、G序列的分子，以及核酸組S可包含M，A，T，I序列。依據(jù)在所得聚合物的核心部分中單體的數(shù)n，存在若干不同的序列部分J-U-A或者包括R-Y-I， 其不需要彼此序列相同，其通過(guò)指數(shù)“i”或者包括“n-i+1”表示。本發(fā)明請(qǐng)求保護(hù)的具有序列相同或序列不同的單體組分的聚合物符合下式B-M- {[Ji-Ui-Ai] ο.. J η-Ε-κ-τ- {[Rn_i+1-Y -i+1l -i+1] ο..nl n"G V η εΙΝ0,其中-A、B、Ε、G、I、J、K、Μ、R、Τ、U、Y是脫氧核糖核苷酸分子；且-與相同分子的(i+Ι)比較，核酸分子組分i的序列可以不同，但不必須如此；且-至少一個(gè)核酸包括具有脫氧核糖核苷酸序列CG的基序；且-B、U” K和Yn_i+1主要是單鏈；且-B、U” K和Yn_i+1每個(gè)由至少4個(gè)脫氧核糖核苷酸組裝；且-Ji至ln_i+1、Ai至Rn_i+1、M至G或者包括E至T的序列是彼此反向互補(bǔ)的；以及-G通過(guò)磷酸二酯鍵共價(jià)連接于B。優(yōu)選本發(fā)明的聚合物特征在于用于所述方法中的脫氧核糖核酸包括以下序列5’ -GGGTTACCACCTTCTATAGAAAACGTTCTTCGGGGCGTTCTTC-ATCGGTAACCC-3， (SEQ ID No. 1)-其中所述脫氧核糖核酸長(zhǎng)度為20到400個(gè)核苷酸。具有優(yōu)選序列的離析物的合成產(chǎn)生了出人意料的適合免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)的分子。尤其優(yōu)選如果在單鏈分子部分內(nèi)的堿基序列是部分地或完全符合以下序列5，-TCATTGGAAACGTTCTTCGGGGCGTTCTT-3，(SEQ ID No. 2)令人驚奇的是，這些序列的存在產(chǎn)生了多聯(lián)體聚合物的非常良好的活性。在分子的多聯(lián)體結(jié)構(gòu)內(nèi)，脫氧核糖核苷酸的部分單鏈共價(jià)閉合鏈負(fù)責(zé)所述分子在其被導(dǎo)入的靶生物體中的長(zhǎng)期作用。在本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)先實(shí)施方案中，所述單體包括堿基序列N1N2CGN3N4,其中N1N2是 GT、GG、GA、AT或AA組的元件，N3N4是CT或TT組的元件，以及C脫氧胞嘧啶、G脫氧鳥(niǎo)嘌呤、 A脫氧腺嘌呤和T脫氧胸腺嘧啶。在特別優(yōu)選實(shí)施方案中，堿基序列N1N2CGN3N4位于脫氧核糖核苷酸的閉合鏈的單鏈部分內(nèi)。尤其地，這些優(yōu)選的分子在免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)中顯示非常強(qiáng)的作用。當(dāng)然，本發(fā)明的分子可能有一或多個(gè)通過(guò)共價(jià)鍵結(jié)合的取代物。該取代物可以為如肽、蛋白質(zhì)、糖、脂質(zhì)、抗原結(jié)構(gòu)、DNA和/或RNA。除了上述產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)和功能特征，本發(fā)明還涉及制備所述分子的方法，包括以下步驟-在水中提供通過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳純化的5’-磷酸化DNA分子；-50°C凍干直到得到干燥殘留物，隨后在緩沖液中重懸；-添加T4-DNA連接酶，形成反應(yīng)混合物；以及-在37°C溫育反應(yīng)混合物至少30分鐘；或-在沉淀后提供脫氧核糖核苷酸單體，隨后50°C干燥沉淀物或在50°C氯化鎂存在
9下凍干DNA分子；-添加T4-DNA-連接酶；以及-37°C溫育至少10分鐘，優(yōu)選至少30分鐘。對(duì)于聚合物的制備，在氯化鎂存在下采用沉淀或凍干，尤其如果脫氧核糖核苷酸用聚丙烯酰胺凝膠電泳或用HPLC和FPLC的聯(lián)合純化，可得到相同結(jié)果。完全出人意料的是，所述方法的應(yīng)用產(chǎn)生不同于現(xiàn)有技術(shù)描述(W0 2007/131495 或TO 01/07055)的二聚體的分子結(jié)構(gòu)。所述方法顯示只在幾個(gè)步驟中存在不同，更令人驚奇的是相對(duì)細(xì)微的改變導(dǎo)致不同分子的生成。從現(xiàn)有技術(shù)(W0 01/07055或WO 2007/131495)中已知方法得到的結(jié)構(gòu)顯示在其性質(zhì)上的明顯差異。對(duì)于免疫調(diào)節(jié)作用，分子差異明顯，其它性質(zhì)也如此，如副作用。除了方法步驟的不同外，使用具有優(yōu)選序列的離析物導(dǎo)致具有特異性和突出性質(zhì)的非常特異的反應(yīng)產(chǎn)物的形成。使用本發(fā)明的序列和上述方法步驟形成了具優(yōu)勢(shì)的聚合物，相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)中的顯示出優(yōu)選性質(zhì)。本發(fā)明的聚合物優(yōu)選包括2+2單體(對(duì)比圖1)、優(yōu)選脫氧核糖核苷酸組分的部分單鏈的、共價(jià)閉合鏈，其中單體有莖和環(huán)，其中莖有至少2個(gè)脫氧核糖核苷酸，環(huán)有至少4個(gè)脫氧核糖核苷酸，且環(huán)有1至6個(gè)CG-基序，變數(shù)η是來(lái)自全體自然數(shù)的集合的元件。本發(fā)明進(jìn)一步涉及組合物，其包括至少本發(fā)明的分子和化療劑。令人驚奇的是，由本發(fā)明分子產(chǎn)生的免疫反應(yīng)的出乎意料的顯著改良能夠通過(guò)結(jié)合本發(fā)明的治療和已知的化療劑及使用優(yōu)選例如用于治療腫瘤的組合物而進(jìn)一步顯著改良。盡管本領(lǐng)域技術(shù)人員已知WO 01/07055的二聚體有免疫調(diào)節(jié)作用，且還已知化療劑對(duì)腫瘤有作用，令人驚奇的，由單體組成的免疫調(diào)節(jié)二聚體組合化療劑引起過(guò)加性效應(yīng)。更出乎意外的是，由單體組成的聚合物或多聯(lián)體結(jié)合化療劑比二聚體顯示更積極的作用。所述元件聯(lián)合本發(fā)明的組合物對(duì)治療病原體尤其是腫瘤的相同目的具有作用。在本發(fā)明的組合物里每一個(gè)元件沒(méi)有限定孤立的結(jié)果，但是在單個(gè)元件間的相互作用引起令人驚訝的作用，在聚合物中比二聚體更顯著。本發(fā)明的組合物可提供為試劑盒，其中本發(fā)明的分子和現(xiàn)有技術(shù)的化療劑被分別提供。 因此，在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述試劑盒的至少兩個(gè)組分被同時(shí)或延遲應(yīng)用。本發(fā)明的組合物的應(yīng)用可例如激活免疫系統(tǒng)，使隨后化療劑的應(yīng)用可具有非常好的作用。當(dāng)然可能首先應(yīng)用化療劑，隨后延遲應(yīng)用本發(fā)明的分子給人類或動(dòng)物生物體。對(duì)于確定的腫瘤，本發(fā)明分子和化療劑的同時(shí)應(yīng)用是優(yōu)選的。在本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案中，化療劑選自包括抗體、烷化劑、鉬類似物、嵌入劑、抗生素、有絲分裂抑制劑、紫杉烷類、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、抗代謝物和/或L-天冬酰胺酶、羥基脲、米托坦和/或鵝膏蕈堿的組中。在本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案中，烷化劑選自下組氮芥衍生物；特別是環(huán)磷酰胺；異環(huán)磷酰胺；曲磷胺；美法侖；和/或苯丁酸氮芥；烷基磺酸鹽/酯；特別是
白消安；和/或曲奧舒凡；亞硝基脲；特別是卡莫司??；洛莫司?。荒崮就?；雌莫司??；和/或鏈脲霉素；丙卡巴胼和達(dá)卡巴嗪；替莫唑胺；和/或塞替派。烷化劑對(duì)腫瘤有非常好的作用，抑制其生長(zhǎng)。在本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案中，鉬類似物選自下組順鉬；卡鉬；和/或奧沙利鉬。在本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選實(shí)施方案中，嵌入劑選自下組蒽環(huán)類抗生素；特別是亞德里亞霉素(阿霉素)；柔紅霉素；表柔比星；和/或伊達(dá)比星，米托蒽醌；安吖啶；和/或脫氧氟脲苷。在本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選實(shí)施方案中，抗生素選自下組博來(lái)霉素；放線菌素D (更生霉素)；和/或絲裂霉素。在本發(fā)明更進(jìn)一步另一優(yōu)選實(shí)施方案中作為有利條件，有絲分裂抑制劑選自下組長(zhǎng)春光的生物堿，特別是長(zhǎng)春瑞濱；長(zhǎng)春新堿(長(zhǎng)春新堿)；長(zhǎng)春堿；和/或長(zhǎng)春地辛。在本發(fā)明進(jìn)一步特別優(yōu)選實(shí)施方案中，紫杉烷類選自下組紫杉醇；和/或多西紫杉醇。
進(jìn)一步，優(yōu)選拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑選自下組拓?fù)洚悩?gòu)酶-I -抑制劑，特別是喜樹(shù)堿；托泊替康；和/或伊立替康；和/或拓?fù)洚悩?gòu)酶-II-抑制劑；特別是依托泊苷；替尼泊苷。在本發(fā)明的特殊優(yōu)選實(shí)施方案中，抗代謝物選自下組葉酸拮抗劑；特別是甲氨蝶呤；嘧啶類似物；特別是5-氟尿嘧啶；卡培他濱；胞嘧啶阿糖核苷(阿糖胞苷)；和/或吉西他濱；嘌呤類似物；特別是6-硫代鳥(niǎo)嘌呤；噴司他??；硫唑嘌呤；6-巰嘌呤；氟達(dá)拉濱；和/或克拉屈濱。本發(fā)明進(jìn)一步涉及試劑盒，包括本發(fā)明的分子和化療劑，如果適當(dāng)?shù)脑?，還包括關(guān)于該試劑盒所含內(nèi)容組合的信息。本發(fā)明也涉及，已描述過(guò)，包括本發(fā)明分子的藥物或組合物，如果適當(dāng)?shù)牡脑挘€包括藥物相容載體。本發(fā)明進(jìn)一步涉及所述分子、組合物或藥物在制備用于調(diào)節(jié)人類或動(dòng)物免疫系統(tǒng)或調(diào)節(jié)所述免疫系統(tǒng)活性的治療物中的應(yīng)用。調(diào)節(jié)人類或動(dòng)物免疫系統(tǒng)應(yīng)理解為對(duì)免疫系統(tǒng)的每一種影響，有免疫系統(tǒng)抑制腫瘤或癌癥的作用。免疫系統(tǒng)活性的調(diào)節(jié)能等同的理解為此或描述為本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的免疫系統(tǒng)活性，其可直接抗腫瘤以及通過(guò)本發(fā)明治療物其作用被驚人的提高。調(diào)節(jié)特別是刺激免疫系統(tǒng)或提高免疫系統(tǒng)作用或者包括免疫系統(tǒng)本身，意指腫瘤抑制或減輕預(yù)防作用。因此，在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明治療物可用來(lái)刺激 T-細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，而且改變T-細(xì)胞非依賴型免疫反應(yīng)。在本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案中， 該過(guò)程可包括B-細(xì)胞的增殖或B-細(xì)胞激活。在特別優(yōu)選實(shí)施方案中，免疫系統(tǒng)活性的調(diào)節(jié)導(dǎo)致不同的有關(guān)細(xì)胞群的細(xì)胞因子的分泌被改變或者包括返祖遺傳的改良作用。特別優(yōu)選本發(fā)明的分子或本發(fā)明的組合物在治療或預(yù)防接種中用作佐劑。本發(fā)明的治療物可非常有效的用于治療細(xì)胞生長(zhǎng)失調(diào)，其中在優(yōu)選實(shí)施方案中，細(xì)胞生長(zhǎng)失調(diào)是腫瘤疾病。優(yōu)選地，腫瘤疾病是選自下組的疾病 耳-鼻-喉區(qū)域的腫瘤，內(nèi)鼻、鼻竇、鼻咽、唇、口腔、口咽、喉、下咽、耳、唾液腺、和副神經(jīng)節(jié)瘤的腫瘤；肺腫瘤，包含非小細(xì)胞支氣管癌、小細(xì)胞支氣管癌；縱隔膜的腫瘤；胃腸道腫瘤， 包含食道、胃、胰腺、肝、膽囊和膽道、小腸、結(jié)腸和直腸癌以及肛門癌的腫瘤；泌尿生殖器的腫瘤，包含腎臟、輸尿管、膀胱、前列腺、尿道、陰莖以及睪丸的腫瘤；婦科腫瘤，包含宮頸、陰道、外陰、子宮癌、惡性滋養(yǎng)細(xì)胞病、卵巢癌的腫瘤、輸卵管的腫瘤(Tuba Faloppii)；腹腔腫瘤；乳腺癌；內(nèi)分泌器官的腫瘤，包含甲狀腺、甲狀旁腺、腎上腺皮質(zhì)的腫瘤、胰腺內(nèi)分泌腫瘤；類癌腫瘤和類癌綜合癥；多發(fā)性內(nèi)分泌瘤；骨和軟組織肉瘤；間皮瘤；皮膚腫瘤；黑色素瘤，包含皮膚和眼內(nèi)黑色素瘤；中樞神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤；嬰兒期的腫瘤，包含視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、維爾姆斯瘤、神經(jīng)纖維瘤病，神經(jīng)母細(xì)胞瘤、尤因肉瘤家族腫瘤、橫紋肌肉瘤；淋巴瘤，包含非何杰金氏淋巴癌、皮膚T細(xì)胞淋巴瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的原發(fā)性淋巴瘤、霍奇金?。话籽?，包含急性白血病、慢性髓樣和淋巴性白血病、漿細(xì)胞腫瘤、骨髓增生異常綜合癥；副腫瘤綜合癥；不明原發(fā)腫瘤轉(zhuǎn)移(CUP綜合癥)；轉(zhuǎn)移性腫瘤，包含腦轉(zhuǎn)移、肺轉(zhuǎn)移、肝轉(zhuǎn)移、骨轉(zhuǎn)移、胸膜和心包轉(zhuǎn)移以及惡性腹水；腹膜癌病；免疫抑制相關(guān)的惡性腫瘤，包含AIDS-相關(guān)惡性腫瘤如卡波西氏肉瘤、AIDS-相關(guān)淋巴瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的AIDS-相關(guān)淋巴瘤、AIDS-相關(guān)霍奇金病和AIDS-相關(guān)肛門生殖器腫瘤；移植相關(guān)惡性腫瘤。下文中，本發(fā)明通過(guò)實(shí)施例說(shuō)明，但本發(fā)明不限于這些實(shí)施例。免疫調(diào)節(jié)核酸分子的制備實(shí)施例a)制備不是請(qǐng)求保護(hù)的二聚體單體具有序列CCTAGGGGTT ACCACCTTCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGTTCTTAGGTGGTAACC (S EQ ID No. 3)的5’-磷酸化寡脫氧核糖核苷酸(OND)加熱5分鐘至90°C且隨后在冰中冷卻， 使產(chǎn)生發(fā)夾結(jié)構(gòu)成為可能。自互補(bǔ)突出端用終濃度lmg/ml DNA在T4-DNA連接酶(0. IU/ μ g 0DN)存在下于37°C連接M小時(shí)。在3%瓊脂糖凝膠中分離純化的連接產(chǎn)物，對(duì)照?qǐng)D2泳道2。b)制備作為請(qǐng)求保護(hù)的聚合物的例子的四聚體聚合程度只能通過(guò)使用的核酸的濃度被一定程度的影響。對(duì)于如圖2所示的二聚體多聯(lián)體的特殊制備，制備方法如下修改-等摩爾濃度(50μ M)的 5，-CCCTAGGGGTTACCACCTTCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGT TCTTTCCCCAATGGTGGA-3’ (SEQ ID No. 4)和 5，-CCCTTCCACCATTGGGGATCATTGGAAAACGTTCTTC GGGGCGTTCTTAGGTGGTAACCCCT-3，(SEQ ID No. 5)于 95°C 變性 5 分鐘，隨后于 25 °C 緩慢冷卻 50分鐘；-以單一摩爾過(guò)量添加具有序列5，-AGGGGTTACCACCTTCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGC GTTCTTAGGTGGTAAC-3，(SEQ ID No. 6)的 5，_ 磷酸化核酸;-根據(jù)上述方法進(jìn)行所有進(jìn)一步步驟。在3%瓊脂糖凝膠上分離純化的連接產(chǎn)物，對(duì)照?qǐng)D2泳道2。c)制備高分子聚合物具有序列5，-pCTAGGGGTTACCACCTACAAAAAAAAACGAAATTCGGGGCGAAGGGAGGTGGTAACC C-3，(SEQ ID No. 7)、濃度為 lmg/ml 的核酸用 0. 3M 醋酸鈉(ρΗ5· 25) UOmM MgCl2 和三倍體積乙醇abs沉淀。離心后G°C，13000rpm)，ODN于50°C干燥10分鐘。沉淀直接用于連接 (0. 5U/yg 0DN)，并于37°C溫育60分鐘。在3%瓊脂糖凝膠分離連接產(chǎn)物，對(duì)照?qǐng)D2泳道 4。
13
圖2的描述為了測(cè)定分子量，制備的分子在3%瓊脂糖凝膠分離。左側(cè)泳道1顯示表明每一條帶質(zhì)量的雙鏈DNA分子量，對(duì)應(yīng)不同遷移距離。泳道2至4負(fù)載不同聚合反應(yīng)的產(chǎn)物?？捎^察到單一條帶對(duì)應(yīng)二聚體(泳道幻，或者四聚體(泳道幻，或者包括所有形式聚合物的梯形(泳道4)。本發(fā)明分子的功能證實(shí)為了證明本發(fā)明分子的免疫調(diào)節(jié)特性，進(jìn)行不同細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。通過(guò)使用細(xì)胞系 RAff 264的鼠巨噬細(xì)胞研究了刺激TLR9的能力，在該細(xì)胞系中綠色熒光蛋白EGFP的表達(dá)在 TLR9調(diào)節(jié)的NF-K B啟動(dòng)子的正控制下。細(xì)胞以125000細(xì)胞/cm2種植，16小時(shí)后應(yīng)用本發(fā)明的二聚體(根據(jù)方法a制備的)和聚合物(根據(jù)方法c制備的)分子。在溫育(37°C， 5% CO2) 7小時(shí)后，收獲細(xì)胞及通過(guò)EGFP表達(dá)利用熒光活化細(xì)胞分揀(FACS)測(cè)量。結(jié)果用來(lái)生成濃度-作用曲線，如圖3所示；作為兩組分子的分子量，二聚體重量用作為基準(zhǔn)從而允許直接對(duì)比。本發(fā)明聚合分子的效力和低分子量分子相比(低虛曲線開(kāi)放符號(hào))提高了 10倍 (上曲線封閉符號(hào))。與用作二聚體或單體分子的可比較量等量的本發(fā)明高分子聚合物有明顯更好效果。TLR9刺激的更高效力歸因于局部高濃度，通過(guò)尤其在體內(nèi)不能通過(guò)較高劑量實(shí)現(xiàn)的多聚體分子來(lái)實(shí)現(xiàn)，如由于適用量的原因。同時(shí)，高分子多聯(lián)體效率提高，其完全出人意料，根據(jù)現(xiàn)有科學(xué)知識(shí)不能解釋。細(xì)胞因子生產(chǎn)的PBMC刺激為了進(jìn)行刺激分析，外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)從人全血或所謂的“血沉棕黃色層”分離。分離的細(xì)胞(PBMC)在多孔板中種植。第一混合物包含不受刺激的細(xì)胞做負(fù)對(duì)照，與現(xiàn)有技術(shù)對(duì)比，第二混合物以二聚體刺激，第三混合物以四聚體聚合物刺激；使用相同體積內(nèi)相同質(zhì)量的二聚體和聚合物。兩天后，ELISA測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清中的細(xì)胞因子干擾素-Y、干擾素-α、和白細(xì)胞介素-6的分泌，對(duì)照?qǐng)D4。根據(jù)圖4，與由二聚體分子刺激相比，本發(fā)明聚合分子刺激PBMC導(dǎo)致雙倍的干擾素分泌。附圖進(jìn)一步顯示由聚合分子刺激所造成IL-6分泌比用二聚體刺激顯著更高?？赡苁褂镁哂幸韵滦蛄械膯误w制備本發(fā)明的分子a) 5，-CTAGGGGTTACCACCTTCTATAGAAAACGTTCTTCGGGGCGTTCTTCATCGGTAACCC-3，(SE Q ID No.8)或b) 5，-AGCTGGGTTACCACCTTCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGTTCTTAGGTGGTAACCC-3，(SE Q ID No.9)或c)每一個(gè)5’ -末端磷酸化核酸或具有能夠采用圖1所示構(gòu)象的序列的核酸的混合物，符合描述的構(gòu)象標(biāo)準(zhǔn)及通過(guò)至少4個(gè)合適的核苷酸的單鏈突出端(粘性末端)彼此雜交。用作離析物的脫氧核糖核酸序列在連接前不加熱，具有與聚丙烯酰胺凝膠電泳相當(dāng)?shù)募兓燃?jí)。離析物可用HPLC隨后FPLC純化。HPLC和FPLC的組合導(dǎo)致和聚丙烯酰胺凝膠電泳相當(dāng)?shù)募兓燃?jí)。隨后，DNA-離析物于50°C凍干，直到得到干燥殘留物。在緩沖液中重懸，添加T4-DNA連接酶，隨后于37°C溫育40分鐘。出乎意料的，得到的多聯(lián)體引起小鼠免疫調(diào)節(jié)改良。出乎意料的，本發(fā)明多聯(lián)體的單一組分與化療劑的結(jié)合產(chǎn)生改良的作用。改良的作用出人意料的比單一組份任一高，且超出加性效應(yīng)?？墒褂每贵w、烷化劑、鉬類似物、嵌入劑、抗生素、有絲分裂抑制劑、紫杉烷類、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、抗代謝物和/或 L-天冬酰胺酶、羥基脲、米托坦和/或鵝膏蕈堿作為化療劑。
權(quán)利要求
1.一種用于調(diào)節(jié)人類或動(dòng)物免疫系統(tǒng)活性的多聯(lián)體分子，其中所述多聯(lián)體分子包括至少4個(gè)脫氧核糖核酸序列作為單體單元，所述脫氧核糖核酸序列共價(jià)鍵合并且符合下式B-M- {[JrUi-Ai] 0.. J n-E-K-T- {[Rn_i+1-Yn_i+1 ln_i+1] .. J n_G V η εΙΝ0 ,其中A、B、Ε、G、I、J、K、Μ、R、Τ、U、Y是脫氧核糖核苷酸分子；且 “_”代表磷酸二酯鍵，核酸通過(guò)該磷酸二酯鍵彼此共價(jià)結(jié)合；且相同分子的(i+Ι)的核酸分子的組分i的序列可不同或相同；且至少一個(gè)核酸包括具有脫氧核糖核苷酸序列CG的基序；且B、Ui、I^nYn_i+1主要是單鏈；且B、U” K和Yn_i+1每個(gè)由至少4個(gè)脫氧核糖核苷酸組裝；且序列Ji至ln_i+1、Ai至Rn_i+1、M至G或者包括E至T是彼此反向互補(bǔ)的；以及G通過(guò)磷酸二酯鍵共價(jià)連接于B。
2.前述權(quán)利要求的分子，其特征在于所述方法中使用的脫氧核糖核酸包括以下序列 5， -GGGTTACCACCTTCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGTTCTTAGGTGGTAACCC-3， (SEQ IDNo. 1)；或5’ -CCCTAGGGGTTACCACCTTCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGTTCTTTCCCCAATGGTGGA-3’ (SEQ ID No. 4)；或5 ’ -CCCTTCCACCATTGGGGATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGTTCTTAGGTGGTAACCCCT-3’ (SEQ ID No. 5)；或5， -AGGGGTTACCACCTTCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGTTCTTAGGTGGTAAC-3， (SEQ ID No. 6)；其中所述脫氧核糖核酸長(zhǎng)度為20到400個(gè)核苷酸。
3.一種包含權(quán)利要求1或2的分子和化療劑的組合物，所述化療劑選自包括抗體、烷化劑、鉬類似物、嵌入劑、抗生素、有絲分裂抑制劑、紫杉烷類、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、抗代謝物和 /或L-天冬酰胺酶、羥基脲、米托坦和/或鵝膏蕈堿的組中。
4.前述權(quán)利要求的組合物，其特征在于所述烷化劑選自下組 氮芥衍生物，特別是環(huán)磷酰胺； 異環(huán)磷酰胺； 曲磷胺； 美法侖；和/或苯丁酸氮芥； 烷基磺酸酯，特別是 白消安；和/或曲奧舒凡； 亞硝基脲，特別是 卡莫司??； 洛莫司汀； 尼莫司汀； 雌莫司汀；和/或鏈脲霉素；丙卡巴胼和達(dá)卡巴嗪； 替莫唑胺；和/或塞替派。
5.前述權(quán)利要求之一的組合物，其特征在于所述鉬類似物選自下組 順鉬，卡鉬；和/或奧沙利鉬。
6.前述權(quán)利要求之一的組合物，其特征在于所述嵌入劑選自下組 蒽環(huán)類抗生素，特別是亞德里亞霉素(阿霉素)； 柔紅霉素； 表柔比星；和/或伊達(dá)比星； 米托蒽醌； 安吖啶；和/或脫氧氟脲苷。
7.前述權(quán)利要求之一的組合物，其特征在于所述抗生素選自下組博來(lái)霉素；放線菌素D (更生霉素)；和/或絲裂霉素。
8.前述權(quán)利要求之一的組合物，其特征在于所述有絲分裂抑制劑選自下組 長(zhǎng)春光的生物堿，特別是長(zhǎng)春瑞濱；長(zhǎng)春新堿(長(zhǎng)春新堿)； 長(zhǎng)春花堿；和/或長(zhǎng)春地辛。
9.前述權(quán)利要求之一的組合物，其特征在于所述紫杉烷類選自下組 紫杉醇；和/或多西紫杉醇。
10.前述權(quán)利要求之一的組合物，其特征在于所述拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑選自下組 拓?fù)洚悩?gòu)酶-I-抑制劑，特別是喜樹(shù)堿；托泊替康；和/或伊立替康；和/或拓?fù)洚悩?gòu)酶-II-抑制劑，特別是 依托泊苷， 替尼泊苷。
11.前述權(quán)利要求之一的組合物，其特征在于所述抗代謝物選自下組葉酸拮抗劑，特別是 甲氨蝶呤；嘧啶類似物，特別是5-氟尿嘧啶； 卡培他濱；胞嘧啶阿糖核苷；和/或吉西他濱；嘌呤類似物，特別是6-硫代鳥(niǎo)嘌呤； 噴司他丁 ；硫唑嘌呤； 6-巰嘌呤； 氟達(dá)拉濱；和/或克拉屈濱。
12.包含權(quán)利要求1或2之一的分子和/或權(quán)利要求3-11之一的組合物的試劑盒，和如果合適的話，所述試劑盒還包含關(guān)于組合該試劑盒的內(nèi)容物的信息。
13.權(quán)利要求1或2之一的分子、權(quán)利要求3-11之一的組合物，其用作藥物。
14.包含權(quán)利要求1或2之一的分子和/或權(quán)利要求3-11之一的組合物的藥物，如果合適的話，所述藥物還包含藥物相容載體。
15.前述權(quán)利要求的藥物，其特征在于所述載體選自包括抗體、烷化劑、鉬類似物、嵌入劑、抗生素、有絲分裂抑制劑、紫杉烷類、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、抗代謝物和/或L-天冬酰胺酶、羥基脲、米托坦和/或鵝膏蕈堿的組中。
16.權(quán)利要求1或2的分子、權(quán)利要求3-11的組合物或者權(quán)利要求14或15的藥物在制備用于調(diào)節(jié)人類或動(dòng)物免疫系統(tǒng)或調(diào)節(jié)所述免疫系統(tǒng)活性的治療物中的應(yīng)用。
17.前述權(quán)利要求的應(yīng)用，其特征在于所述調(diào)節(jié)是所述免疫系統(tǒng)活性的提高，其中所述免疫系統(tǒng)的單細(xì)胞或細(xì)胞亞群的活性被刺激或加快或抑制或減弱。
18.前述權(quán)利要求的應(yīng)用，其特征在于所述調(diào)節(jié)包括T-細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)或T-細(xì)胞非依賴型免疫反應(yīng)。
19.前述權(quán)利要求的應(yīng)用，其特征在于所述免疫反應(yīng)包括B-細(xì)胞增殖和/或B-細(xì)胞激活。
20.前述權(quán)利要求之一的應(yīng)用，其特征在于所述免疫系統(tǒng)的刺激包括細(xì)胞因子的分泌。
21.前述權(quán)利要求之一的應(yīng)用，其特征在于所述權(quán)利要求1或2的分子和/或權(quán)利要求 3-11的組合物用作在治療或預(yù)防疫苗接種中的佐劑。
22.權(quán)利要求1或2的分子、權(quán)利要求3-11的組合物或者權(quán)利要求14或15的藥物在制備用于治療細(xì)胞生長(zhǎng)失調(diào)的治療物中的應(yīng)用。
23.前述權(quán)利要求的應(yīng)用，其特征在于所述細(xì)胞生長(zhǎng)失調(diào)是腫瘤疾病。
24.前述權(quán)利要求的應(yīng)用，其特征在于所述腫瘤疾病選自下組耳-鼻-喉區(qū)域的腫瘤，包括內(nèi)鼻、鼻竇、鼻咽、唇、口腔、口咽、喉、下咽、耳、唾液腺和副神經(jīng)節(jié)瘤的腫瘤；肺腫瘤，包括非小細(xì)胞支氣管癌、小細(xì)胞支氣管癌；縱隔膜的腫瘤；胃腸道的腫瘤，包括食道、胃、胰腺、肝、膽囊和膽道、小腸、結(jié)腸和直腸癌以及肛門癌的腫瘤；泌尿生殖器腫瘤，包括腎、輸尿管、膀胱、前列腺、尿道、陰莖以及睪丸的腫瘤；婦科腫瘤，包括子宮頸、陰道、外陰、 子宮癌、惡性滋養(yǎng)細(xì)胞病、卵巢癌的腫瘤、輸卵管的腫瘤(Tuba Faloppii)；腹腔腫瘤；乳腺癌；內(nèi)分泌器官的腫瘤，包括甲狀腺、甲狀旁腺、腎上腺皮質(zhì)的腫瘤、胰腺內(nèi)分泌腫瘤；類癌腫瘤和類癌綜合癥；多發(fā)性內(nèi)分泌瘤；骨和軟組織肉瘤；間皮瘤；皮膚腫瘤；黑色素瘤，包括皮膚和眼內(nèi)黑色素瘤；中樞神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤；嬰兒期的腫瘤，包括視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、維爾姆斯瘤、神經(jīng)纖維瘤病、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、尤因肉瘤家族腫瘤、橫紋肌肉瘤；淋巴瘤，包括非何杰金氏淋巴癌、皮膚T細(xì)胞淋巴瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的原發(fā)性淋巴瘤、霍奇金?。话籽?，包括急性白血病、慢性髓樣和淋巴性白血病、漿細(xì)胞腫瘤、骨髓增生異常綜合征；副腫瘤綜合征； 不明原發(fā)腫瘤轉(zhuǎn)移(CUP綜合癥)；腹膜癌??；免疫抑制相關(guān)惡性腫瘤，包括AIDS-相關(guān)惡性腫瘤如卡波西氏肉瘤、AIDS-相關(guān)淋巴瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的AIDS-相關(guān)淋巴瘤、AIDS-相關(guān)霍奇金病和AIDS-相關(guān)肛門生殖器腫瘤；移植相關(guān)惡性腫瘤；轉(zhuǎn)移性腫瘤，包括腦轉(zhuǎn)移、肺轉(zhuǎn)移、肝轉(zhuǎn)移、骨轉(zhuǎn)移、胸膜和心包轉(zhuǎn)移；以及惡性腹水。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種調(diào)節(jié)人類和動(dòng)物免疫系統(tǒng)活性的聚合的、非編碼核酸分子和其制備方法以及包括所述聚合的、非編碼核酸分子的疫苗，其中聚合的、非編碼核酸分子可理解為非編碼核酸分子，包括至少四個(gè)共價(jià)鍵合分子(四聚體)或由更多彼此共價(jià)鍵合的非編碼核酸分子組成(高分子聚合物)。
文檔編號(hào)A61K31/713GK102421901SQ201080019291
公開(kāi)日2012年4月18日 申請(qǐng)日期2010年4月30日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月30日
發(fā)明者B·維蒂希, C·克洛斯, M·施密特, M·施羅夫 申請(qǐng)人:莫洛根股份公司