專利名稱：黃蜀葵花總黃酮在制備防治肝纖維化藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及黃蜀葵花總黃酮的用途，確切地說是黃蜀葵花總黃酮在防治肝纖維化藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
黃蜀葵花為錦葵科植物黃蜀葵Abelmoschus manihot L. Medic的干燥花，收載于 《中國藥典》(2010年版)，其主要成份為金絲桃苷、槲皮素-3'-葡萄糖苷、異槲皮苷、棉皮素-3'-葡萄糖苷、槲皮素和楊梅素等黃酮類成份，民間用以治療疔瘡、腮腺炎、尿道感染、 肺熱咳嗽及燒燙傷等?，F(xiàn)有市售黃蜀葵花的制劑有黃葵膠囊，用于治療腎炎，也有研究表明黃蜀葵花總黃酮能夠治療口腔潰瘍和心腦血管性疾病，對缺血、缺氧性腦損傷有保護(hù)作用； 而對于肝纖維化作用的此藥物的研究開發(fā)還沒有。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供黃蜀葵花總黃酮的新用途，即在制藥中的新應(yīng)用。實(shí)際上，本發(fā)明提供了黃蜀葵花總黃酮在制備防治肝纖維化炎的藥物中的應(yīng)用。肝纖維化是一種病理狀態(tài)，是慢性肝損傷的代償性修復(fù)反應(yīng)，肝臟內(nèi)結(jié)締組織呈異常增生。生物化學(xué)測定表明，每克正常肝組織濕重平均有5. 5-6. 6毫克的膠原，而肝硬化的肝臟達(dá)20毫克以上。肝纖維化是慢性肝病進(jìn)一步向肝硬化發(fā)展的主要中間環(huán)節(jié)，故阻止和逆轉(zhuǎn)肝硬化的發(fā)展，促進(jìn)肝纖維化的逐步分解吸收，不僅能減輕損害程度，而且能防止肝硬化的發(fā)生。各種病因引起的慢性肝病絕大多數(shù)都有肝纖維化，其中25% -40%最終發(fā)展為肝硬化甚至肝癌。肝纖維化是可逆性病變，肝硬化是不可逆性病變，因此抗纖維化治療是控制肝纖維化進(jìn)展的重要途徑。目前治療肝纖維化的藥物有1.抗病毒類藥，包括干擾素和拉咪映定等；2.抑制肝細(xì)胞的炎癥反應(yīng)，包括白細(xì)胞介素10(IL-10)、馬洛替酯(malotilate)和前列腺素 (PGE) ；3.保護(hù)肝細(xì)胞類藥，包括?；撬岷途S生素E ;4.抑制HSC活化增殖和ECM的合成，包括促肝細(xì)胞生長素(HGF)、奧曲膚(OCT)、培噪普利和秋水仙堿等；5.促進(jìn)ECM的降解類藥， 包括多不飽和卵磷脂和松弛素；6.誘導(dǎo)肝星狀細(xì)胞凋亡類藥，包括精-甘-天-絲氨酸四肽(RGDS)和曲霉菌素等。但是上述藥物的療效還沒完全肯定，存在一定的毒副作用，而且治療費(fèi)用昂貴。近年來國內(nèi)廣泛開展了抗肝纖維化的中藥試驗(yàn)和臨床研究，取得了不少階段性成果，為臨床治療提供了許多寶貴經(jīng)驗(yàn)，顯示出特有的優(yōu)越性，可是真正由國家食品藥品監(jiān)督管理局(SFDA)批準(zhǔn)的上市抗肝纖維化的中藥并不多。根據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)理論，大多數(shù)慢性肝病及肝纖維化患者的中醫(yī)辨證診斷證型為肝郁脾虛證及瘀血阻絡(luò)證，相應(yīng)的治療應(yīng)為益氣養(yǎng)血，活血化瘀，舒肝健脾。本發(fā)明遵循這一治療原則，基于長期治療經(jīng)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)黃蜀葵花具有清熱解毒、散瘀消腫等功效，不僅有抗乙肝病毒作用，而且對其引起的肝纖維化也有很好的治療作用，為將其開發(fā)成對肝病作用的有效藥物提供非常珍貴的依據(jù)。我們提取黃蜀葵花總黃酮，通過動物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其有顯著的抗肝纖維化作用。為了更好的理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面用黃蜀葵花總黃酮的藥理實(shí)驗(yàn)及結(jié)果來說明其在防治肝纖維化藥物中的應(yīng)用。黃蜀葵花總黃酮防治肝纖維化試驗(yàn)如下(一 )黃蜀葵花總黃酮的制備取黃蜀葵花生藥粗粉，加10倍量70%乙醇回流提取3次，每次2小時，合并提取液，放冷，過濾，減壓回收乙醇至無醇味，并濃縮至相對密度為1. 3(70°C )的浸膏。加沸水?dāng)嚢枋谷芙?，過濾，濾液加于已處理好的聚酰胺柱或DlOl大孔樹脂柱上，用水洗脫至流出液呈淡黃色后，用70%乙醇洗脫，收集洗脫乙醇至洗脫液呈淡黃色為止，減壓回收乙醇，80°C 減壓干燥至干浸膏，粉碎，得黃蜀葵花總黃酮。本品為棕黃色粉末，其中有效成分總黃酮的含量為50% -90%。提取物可加入相應(yīng)的輔料，制成片劑、膠囊劑、滴丸、顆粒劑等，并可進(jìn)一步純化制成針劑。(二)動物實(shí)驗(yàn)1.總黃酮對四氯化碳致小鼠急性化學(xué)性肝損傷的保護(hù)作用1. 1材料及試劑黃蜀葵花總黃酮，0. 四氯化碳，聯(lián)苯雙酯，ALT，AST試劑盒，昆明種雄性小鼠60只，體重18-22克。1. 2方法正常小鼠60只隨機(jī)分6組，灌胃給藥(黃蜀葵花總黃酮60mg/kg、120mg/ kg、240mg/kg，陽性藥對照組聯(lián)苯雙酯100mg/Kg)或等體積生理鹽水(正常對照、模型)，每天2次，連續(xù)7d，與末次給藥后2h，正常對照組腹腔注射(ip) 10mg/kg花生油，其余5組均 ip 0. 1%四氯化碳10mg/kg，禁食16h后自小鼠叢后眼眶靜脈取血，測定血清ALT，AST活性， 并取肝臟左葉同一部位，固定，做病理切片，進(jìn)行肝臟病理組織學(xué)HE染色檢查，結(jié)果以光鏡下肝臟病理損傷程度評分為標(biāo)準(zhǔn)。肝組織病變程度分級方法光鏡下檢查，按肝臟壞死程度分為5級0級，正?；蚋闻K有輕微變性，肝細(xì)胞無壞死；I級，點(diǎn)狀壞死，壞死占肝小葉< 1/4 ；II級，點(diǎn)灶狀壞死，壞死占肝小葉1/4-1/3 ；III級，灶狀壞死，壞死占肝小葉< 1/2 ；IV級，片狀壞死，壞死占肝小葉> 1/2。1. 3結(jié)果表1結(jié)果表明，四氯化碳顯著升高小鼠血清中ALT、AST活性，而黃蜀葵花總黃酮顯著降低四氯化碳致急性化學(xué)性肝損傷小鼠血清過高的ALT、AST活性。表1黃蜀葵花總黃酮(TFA)對小鼠血清中ALT、AST的影響(Γ土SD, η = 10)
權(quán)利要求
1.黃蜀葵花總黃酮在制備防治肝纖維化藥物中的應(yīng)用，其特征在于總黃酮含量在 50%-90%的黃蜀葵花總黃酮在制備防治肝纖維化藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及黃蜀葵花總黃酮的用途，是黃蜀葵花總黃酮在預(yù)防和治療肝纖維化藥物中的應(yīng)用。黃蜀葵花總黃酮是從黃蜀葵花藥材中提取的有效部位。本發(fā)明通過動物實(shí)驗(yàn)說明其對小鼠四氯化碳引起的急性肝損傷具有保護(hù)作用；四氯化碳、豬血清造成的大鼠肝纖維化模型證明黃蜀葵花總黃酮對慢性肝纖維化具有較好的預(yù)防和治療作用。結(jié)果說明黃蜀葵花總黃酮具有確切的抗纖維化作用，因此可用來制備預(yù)防和治療肝纖維化的藥物。
文檔編號A61K36/185GK102462710SQ20101055747
公開日2012年5月23日 申請日期2010年11月16日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月16日
發(fā)明者周正華, 方明, 杜安全, 陳志武 申請人:周正華, 杜安全, 陳志武