專利名稱：一種新型魚(yú)類催產(chǎn)劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種在水產(chǎn)養(yǎng)殖中人工誘導(dǎo)魚(yú)類排卵的新型魚(yú)類催產(chǎn)劑。
背景技術(shù)：
魚(yú)類性腺的最后成熟和排卵受下丘腦_腦垂體_性腺軸分泌的激素所控制，此外， 環(huán)境因素對(duì)魚(yú)類的生殖活動(dòng)也有很大的影響。感覺(jué)器官把外界環(huán)境的刺激(如溫度、光照、 降雨等)傳送到腦，使下丘腦分泌促性腺激素釋放激素(GnRH)，激發(fā)腦垂體分泌促性腺激 素(GtH)作用于性腺并促進(jìn)性腺分泌性類固醇激素，以促使性腺發(fā)育成熟與排出精子和卵子。然而，很多魚(yú)類在性腺發(fā)育成熟的情況下，由于環(huán)境條件的不適合，導(dǎo)致魚(yú)類不能 正常排卵，使卵粒殘留在體內(nèi)，慢慢退化，這給魚(yú)類養(yǎng)殖的苗種需求帶來(lái)了極大的不便，因 此，對(duì)魚(yú)類進(jìn)行人工催產(chǎn)是滿足養(yǎng)殖魚(yú)類苗種需求的重要途徑，而催產(chǎn)劑的使用則是魚(yú)類 人工繁殖成功的關(guān)鍵。Kisspeptin首先在哺乳動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)，編碼kissp印tin的基因或其受體 GPR54基因的失活性突變，均會(huì)造成人類、小鼠的青春期啟動(dòng)失敗及生殖缺陷。經(jīng)研 究證實(shí)kissp印tin通過(guò)調(diào)控GnRH的釋放進(jìn)而控制生殖軸的活動(dòng)。在魚(yú)類中，同樣 存在kissp印tin/GPR54信號(hào)系統(tǒng)，本發(fā)明人于2009年，內(nèi)分泌學(xué)雜志Journal of Endocrinology (2009) 201，407-418 ；公開(kāi)了在金魚(yú)中克隆了兩種 kissp印tin 基因(kissl、 kiss2)及兩種GPR54基因(GPR54a、GPR54b)，首次證明魚(yú)類kissp印tin的核心十肽Tyr-Asn-Lys-Asn-Ser-Phe-Gly-Lys-Arg-Tyr(kiss 1-10)在在體條件下能有效地刺激腦垂體的 促黃體生成激素(LH)的大量釋放。本發(fā)明人推測(cè)kissp印tin對(duì)LH的刺激作用也可能是 通過(guò)調(diào)控下丘腦GnRH的釋放來(lái)實(shí)現(xiàn)的；本發(fā)明試圖通過(guò)注射魚(yú)類kissp印tin的核心十肽， 誘導(dǎo)魚(yú)類的排卵。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種用于魚(yú)類催產(chǎn)劑的多肽產(chǎn)品，為魚(yú)類催產(chǎn)技術(shù)的開(kāi)發(fā)和 應(yīng)用提供新思路。上述發(fā)明目的通過(guò)以下的技術(shù)措施來(lái)實(shí)現(xiàn)一種新型的魚(yú)類催產(chǎn)劑，該催產(chǎn)劑為 具有氨基酸序列Tyr-Asn-Lys-Asn-Ser-Phe-Gly-Lys-Arg-Tyr組成的多肽，或具有與所述 氨基酸序列同源性在60%以上的多肽。本發(fā)明所述的多肽為白色粉末狀；使用時(shí)將多肽溶于魚(yú)用生理鹽水后注射，每1 毫克多肽溶于1毫升生理鹽水；注射的劑量為每克魚(yú)體重注射0. 5-1 u g ；通過(guò)魚(yú)的胸鰭基 部或背鰭肌肉附近注射入魚(yú)體內(nèi)。本發(fā)明所述生理鹽水中的濃度為0. 7% -0. 9%。本發(fā)明用作人工誘導(dǎo)魚(yú)類排卵的外源性藥物。采用本發(fā)明進(jìn)行魚(yú)類人工催產(chǎn)，經(jīng)試驗(yàn)，能有效地誘導(dǎo)金魚(yú)、泥鰍、鯽魚(yú)的排卵活動(dòng)，具有催產(chǎn)的效果。注射了本發(fā)明催產(chǎn)劑后，有30%的金魚(yú)、10%的泥鰍、40%的鯽魚(yú)出現(xiàn) 了排卵現(xiàn)象。
具體實(shí)施例方式通過(guò)克隆金魚(yú)kissp印tin的基因kissl，然后根據(jù)信息生物學(xué)手段對(duì)克隆得到的 序列進(jìn)行分析，推測(cè)金魚(yú)kissp印tin基因發(fā)揮生物活性的十肽(kissl-10) :Tyr Asn Lys Asn Ser Phe Gly Lys Arg Tyr。通過(guò)人工化學(xué)合成這十個(gè)氨基酸的肽段。具體過(guò)程可參 見(jiàn)內(nèi)分泌學(xué)雜志Journal of Endocrinology (2009) 201，407-418。上述氨基酸序列的多肽 用作人工誘導(dǎo)魚(yú)類排卵的外源性藥物，對(duì)魚(yú)類催產(chǎn)。選取卵巢發(fā)育成熟的金魚(yú)20尾，分為對(duì)照組和處理組，每組各10尾。對(duì)照組注射 生理鹽水，處理組注射具有氨基酸序列Tyr-Asn-Lys-Asn-Ser-Phe-Gly-Lys-Arg-Tyr組成 的多肽(kissl-10)。將白色粉末狀的kissl-10溶于0.7%的魚(yú)用生理鹽水中，每1毫克多 肽溶于1毫升生理鹽水，劑量為每克魚(yú)體重注射1 P go然后將溶解好的kissl-10于金魚(yú)胸 鰭基部附近注射進(jìn)魚(yú)體，共進(jìn)行兩次注射，注射間隔時(shí)間為6小時(shí)。于18小時(shí)后檢查排卵 和產(chǎn)卵情況，輕按魚(yú)體腹部有成熟卵粒流出的為排卵。最后檢測(cè)結(jié)果為對(duì)照組具有排卵現(xiàn) 象的金魚(yú)為0尾，而注射了 kissl-10的組別中，具有3尾金魚(yú)排卵，催產(chǎn)效率為30%。選取卵巢發(fā)育成熟的泥鰍20尾，分為對(duì)照組和處理組，每組各10尾。對(duì)照組注射 生理鹽水，處理組注射kissl-10。將kissl-10溶于0.8%的魚(yú)用生理鹽水中，每1毫克多 肽溶于1毫升生理鹽水，劑量為每克魚(yú)體重注射0. 5 y g。然后將溶解好的kissl-10于泥鰍 背鰭附近的肌肉注射進(jìn)魚(yú)體，共進(jìn)行兩次注射，注射間隔時(shí)間為6小時(shí)。于18小時(shí)后檢查 排卵和產(chǎn)卵情況，輕按魚(yú)體腹部有成熟卵粒流出的為排卵。最后檢測(cè)結(jié)果為對(duì)照組具有排 卵現(xiàn)象的泥鰍為0尾，而注射了 kissl-10的組別中，具有1尾泥鰍排卵，催產(chǎn)效率為10%。選取卵巢發(fā)育成熟的鯽魚(yú)10尾，分為對(duì)照組和處理組，每組各5尾。對(duì)照組注射 生理鹽水，處理組注射kissl-10。將kissl-10溶于0.9%的魚(yú)用生理鹽水中，每1毫克多 肽溶于1毫升生理鹽水；劑量為每克魚(yú)體重注射0. 8 y g。然后將溶解好的kissl-10于鯽 魚(yú)胸鰭基部注射進(jìn)魚(yú)體，共進(jìn)行兩次注射，注射間隔時(shí)間為6小時(shí)。于18小時(shí)后檢查排卵 和產(chǎn)卵情況，輕按魚(yú)體腹部有成熟卵粒流出的為排卵。最后檢測(cè)結(jié)果為對(duì)照組具有排卵現(xiàn) 象的泥鰍為0尾，而注射了 kissl-10的組別中，具有2尾鯽魚(yú)排卵，催產(chǎn)效率為40%。另外，在與所述核心氨基酸序列同源性60%以上的多肽都可以實(shí)現(xiàn)催產(chǎn)。根據(jù) kissl-10的序列，對(duì)kissl-10的氨基酸序列進(jìn)行改造，序列為F-C6H4-C0-Phe-Gly-Leu-Arg-Phe-NH2，將其命名為kissl類似物(kisslal)。選取卵巢發(fā)育成熟的金魚(yú)21尾，分為 對(duì)照組(6尾)、kissl-10處理組(7尾)，kisslal處理組(8尾)。對(duì)照組注射生理鹽水， 處理組注射kissl-10或kisslal。將kissl-10和kisslal溶于0. 7%的魚(yú)用生理鹽水中， 每1毫克多肽溶于1毫升生理鹽水；劑量為每克魚(yú)體重1 P go然后將溶解好的kissl-10或 kisslal于金魚(yú)胸鰭基部附近注射進(jìn)魚(yú)體，共進(jìn)行兩次注射，注射間隔時(shí)間為6小時(shí)。于18 小時(shí)后檢查排卵和產(chǎn)卵情況，輕按魚(yú)體腹部有成熟卵粒流出的為排卵。最后檢測(cè)結(jié)果為對(duì) 照組具有排卵現(xiàn)象的金魚(yú)為0尾；而注射了 kissl-10的組別中，具有2尾金魚(yú)排卵，催產(chǎn)效 率為28 % ；注射了 kisslal的組別中，具有3尾金魚(yú)排卵，催產(chǎn)效率為37 %?？梢?jiàn)具有與所 述氨基酸序列同源性多肽，也具有相同的催產(chǎn)效果。
本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知 識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，本發(fā)明還可以做出其它多種形 式的修改、替換或變更的實(shí)施方式，不一一例舉；在與所述核心氨基酸序列同源性60%以 上的多肽都可以實(shí)現(xiàn)催產(chǎn)，均落在本發(fā)明權(quán)利保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
一種新型魚(yú)類催產(chǎn)劑，其特征在于該催產(chǎn)劑為具有氨基酸序列Tyr Asn Lys Asn Ser Phe Gly Lys Arg Tyr組成的多肽，或具有與所述氨基酸序列同源性在60％以上的多肽。
2.權(quán)利要求1所述魚(yú)類催產(chǎn)劑的使用方法，其特征在于使用時(shí)將多肽溶于魚(yú)用生理鹽 水后注射，每1毫克多肽溶于1毫升生理鹽水；注射的劑量為每克魚(yú)體重注射0. 5-1 μ g。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的使用方法，其特征在于通過(guò)魚(yú)的胸鰭基部或背鰭肌肉附近注 射入魚(yú)體內(nèi)。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的使用方法，其特征在于所述魚(yú)用生理鹽水中的濃度為 0. 7% -0. 9%。
5.權(quán)利要求1所述魚(yú)類催產(chǎn)劑的用途，其特征在于用作人工誘導(dǎo)魚(yú)類排卵的外源性藥物。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種新型魚(yú)類催產(chǎn)劑，該催產(chǎn)劑為具有氨基酸序列Tyr-Asn-Lys-Asn-Ser-Phe-Gly-Lys-Arg-Tyr組成的多肽，或具有與所述氨基酸序列同源性在60％以上的多肽。使用時(shí)將多肽溶于魚(yú)用生理鹽水后，每1毫克多肽溶于毫升生理鹽水；注射的劑量為每克魚(yú)體重注射0.5-1μg；通過(guò)魚(yú)的胸鰭基部或背鰭肌肉附近注射入魚(yú)體內(nèi)。本發(fā)明能有效誘導(dǎo)金魚(yú)、鯽魚(yú)、泥鰍的排卵，是一種具有重要生產(chǎn)應(yīng)用前景的新型魚(yú)類催產(chǎn)劑。
文檔編號(hào)A61K38/08GK101947308SQ20101025245
公開(kāi)日2011年1月19日 申請(qǐng)日期2010年8月12日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月12日
發(fā)明者劉云, 劉曉春, 張勇, 李水生, 林浩然 申請(qǐng)人:中山大學(xué)