專利名稱：中藥唐草片在制備升高白細(xì)胞藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥，具體涉及中藥唐草片的新適應(yīng)癥，尤其涉及中藥唐草片在制備升高白細(xì)胞藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
中藥唐草片是由20余味精選中藥材經(jīng)過精選、檢驗(yàn)、科學(xué)配伍、現(xiàn)代化加工制備得到的中藥制劑。中藥唐草片的組成成分多，包括老鸛草、金銀花、瓜蔞皮、柴胡、香薷、石榴皮、黃芪、甘草、木棉花、雞血藤、紅花、糯稻根、訶子、白花蛇舌草、菱角、銀杏葉、馬齒莧、胡黃連、龍葵、全蝎等。各成分所包含的化合物結(jié)構(gòu)多樣性，使其產(chǎn)生作用的靶點(diǎn)較多，現(xiàn)代藥理研究表明其具有明確的抑制HIV病毒復(fù)制、提高機(jī)體免疫功能、修復(fù)損傷的免疫細(xì)胞、抗氧化清除自由基的作用、保護(hù)肝臟、延緩艾滋病的進(jìn)程、防御患者的機(jī)會性感染等作用。中藥唐草片組方體現(xiàn)了中醫(yī)藥的整體調(diào)理、固本祛邪的理念，又在臨床實(shí)踐中不斷總結(jié)完善，現(xiàn)可用于HIV陽性的病毒感染者，彌補(bǔ)了“雞尾酒”療法的不足，同時(shí)又可以作為艾滋病患者的輔助治療手段。中藥唐草片的特點(diǎn)在于療效確切，對無癥狀感染者及各期艾滋患者均可服用。長期服用該藥能增強(qiáng)自身的抗病毒能力，提高CD4細(xì)胞數(shù)，提高患者整體生活質(zhì)量。是天然藥物用于治療艾滋病的典范。中藥唐草片的誕生，是抗擊艾滋病史上也是中藥史上的一個(gè)里程碑。本發(fā)明人對中藥唐草片的質(zhì)量進(jìn)行研究，提供了中藥唐草片的質(zhì)量控制方法，已申請中國發(fā)明專利申請?zhí)枮?00910048798. 6-“中藥唐草片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及檢測方法”。目前，在用一些抗艾滋病藥物治療或隨著病情進(jìn)展，由于骨髓抑制會引起白細(xì)胞降低，如高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART)方案中的齊多夫定等。由于白細(xì)胞的減少，造成機(jī)體免疫功能下降，易引起機(jī)會感染。而艾滋病感染者本身就是細(xì)胞免疫功能受損，因此，在治療的同時(shí)會帶來白細(xì)胞的減少的副作用。另外，抗腫瘤藥物的治療過程中更容易引起造血骨髓抑制，而目前臨床上經(jīng)常使用的一些具有升高白細(xì)胞的藥物其作用仍然有限，因此尋找具有骨髓保護(hù)，減輕化療藥物毒性，減少化學(xué)藥物治療所產(chǎn)生的毒副作用，提高患者的生存質(zhì)量具有非常重要的意義。本發(fā)明人在不斷的研究中，發(fā)現(xiàn)唐草片具有升高白細(xì)胞的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于克服上述不足之處，研究設(shè)計(jì)中藥唐草片的新適應(yīng)癥，擴(kuò)大應(yīng)用范圍。本發(fā)明提供了中藥唐草片在制備升高白細(xì)胞藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述中藥唐草片為中國國家SFDA批準(zhǔn)的合法上市藥品，其中藥原料組成成分及工藝路線為國家SFDA批準(zhǔn)的合法的內(nèi)容。為下列重量配比老鸛草120-150、黃芪 120-150、龍葵 120-200、金銀花 120-200、木棉花 60-100、訶子40-60、白花蛇舌草80-150、石榴皮40-60、糯稻根150-200、菱角80-150、瓜蔞皮40-60、柴胡60-100、香薷40-60、甘草60-80、雞血藤120-150、紅花40-60、銀杏葉40-60、馬齒莧 60-120、胡黃連40-60、全蝎沘-40。優(yōu)選的，本發(fā)明所述中藥唐草片的中藥原料組成成分為下列重量配比老鸛草120-150、黃芪 120-150、龍葵 120-200、金銀花 120-200、木棉花 60-100、訶子40-60、白花蛇舌草80-150、石榴皮40-60、糯稻根150-200、菱角80-150。更優(yōu)選的，本發(fā)明所述中藥唐草片的中藥原料組成成分為下列重量配比老鸛草180、黃芪180、龍葵180、金銀花180、木棉花120、訶子90、白花蛇舌草180、 石榴皮90、糯稻根300、菱角180。本發(fā)明人通過建立穩(wěn)定的中藥篩選研究的白細(xì)胞降低動物模型，觀察中藥唐草片對藥物造成白細(xì)胞降低的升白作用。本發(fā)明人在參考多種文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上反復(fù)摸索，設(shè)計(jì)建立了絲裂霉素為誘導(dǎo)劑的新方法，不僅適合觀察對白細(xì)胞的影響，也可以觀察對血小板的影響。應(yīng)用絲裂霉素造成正常小鼠白細(xì)胞降低模型，能較長時(shí)間的使動物處于白細(xì)胞降低水平，荷瘤小鼠接受絲裂霉素治療同時(shí)加用中藥唐草片，在不同時(shí)間取外周血測定白細(xì)胞等細(xì)胞數(shù)的變化，觀察唐草片在藥物引起的白細(xì)胞降低所起的作用。本發(fā)明經(jīng)研究唐草片的升白作用，發(fā)現(xiàn)中藥唐草片在中、小劑量提前應(yīng)用時(shí)可以加快化療藥物作用后白細(xì)胞的回升，即具有升高白細(xì)胞作用，比模型對照組的白細(xì)胞恢復(fù)時(shí)間提前至少10天，中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞也幾乎同步恢復(fù)至正常水平，預(yù)示著機(jī)體的免疫功能恢復(fù)。研究過程中，應(yīng)用了目前臨床公認(rèn)的升高白細(xì)胞比較有效的化學(xué)藥物重組人粒細(xì)胞集落刺激因子作陽性對照藥，在唐草片組起效后4天使白細(xì)胞恢復(fù)至正常水平，升高的強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間均有好的效果。另一方面，為觀察中藥唐草片在預(yù)防性用于化療藥物引起的白細(xì)胞減少時(shí)，是否會影響化療藥物的抗腫瘤作用，本發(fā)明進(jìn)行了中藥唐草片對小鼠實(shí)體瘤和腹水瘤的影響研究。結(jié)果顯示應(yīng)用中藥唐草片低劑量0. 5g/kg、中劑量1. Og/kg體重治療組比模型組提前恢復(fù)到正常水平。并且不干擾絲裂霉素的抗腫瘤作用，甚至有增強(qiáng)抗腫瘤作用，抑瘤率達(dá)到43. 5 %，極大地超過了單用絲裂霉素組抑瘤率11. 4%，也超過了化學(xué)藥物40%的有效標(biāo)準(zhǔn)，能預(yù)防性用于化療藥物引起的白細(xì)胞減少癥的治療。研究結(jié)果說明中藥唐草片在升白的同時(shí)并不影響化療藥物的抗腫瘤作用。中藥唐草片中劑量、低劑量組可以促進(jìn)模型中白細(xì)胞的升高，對中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的促進(jìn)作用和白細(xì)胞類似，中藥唐草片低劑量組升白作用更明顯；中劑量中藥唐草片也有一定的升高白細(xì)胞的作用。中藥唐草片能增加動物骨髓集落形成細(xì)胞數(shù)，是其升高白細(xì)胞作用的體現(xiàn)。中藥唐草片在荷瘤動物接受化療藥物絲裂霉素治療過程中，有升高白細(xì)胞的作用。中藥唐草片與抗腫瘤藥物合用能夠提高抗腫瘤化療藥物的抗腫瘤作用。中藥唐草片可以緩解抗腫瘤藥物對骨髓的抑制作用。此外，本發(fā)明研究觀察到中藥唐草片在治療艾滋病的同時(shí)，還具有保護(hù)骨髓造血功能，加快機(jī)體免疫功能的恢復(fù)和減輕常規(guī)抗艾滋病藥物(如齊多夫定等)骨髓抑制的不良反應(yīng)，也是本發(fā)明重要創(chuàng)新點(diǎn)。本發(fā)明的唐草片的低劑量升白作用更好，升白臨床使用量每次不高于16片，一日三次。本發(fā)明的唐草片升白的最佳臨床使用劑量為每次小于等于8片，一日三次。本發(fā)明的唐草片升白的最佳臨床使用劑量為每次相當(dāng)于服用藥材量為< 13.7克。本發(fā)明的唐草片升白的最佳服用劑量為每天相當(dāng)于服用藥材量為< 41. 1克。中藥唐草片具有抗艾滋病的作用，同時(shí)也具有升高白細(xì)胞的作用，可以對抗其他藥物治療方案的不良反應(yīng)，提高治療的綜合療效，增加中藥唐草片的適應(yīng)癥，擴(kuò)大應(yīng)用范圍，可用于制備升高白細(xì)胞作用的藥物，充分顯示中藥的治療優(yōu)勢，有較大的臨床應(yīng)用價(jià)值，具有明顯的社會效益和經(jīng)濟(jì)效益。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1中藥唐草片升高白細(xì)胞藥效學(xué)研究試驗(yàn)本發(fā)明應(yīng)用絲裂霉素造成正常小鼠白細(xì)胞降低模型，使白細(xì)胞減低到對照組的 35%以下，模型建立成功。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)藥物劑量過大，骨髓抑制過深，白細(xì)胞下降太多，動物容易死亡，也不利于藥物作用的表現(xiàn)，本發(fā)明采用小鼠腹腔注射絲裂霉素:3mg/kg —次，五天后再注射絲裂霉素ang/kg—次的方案，動物容易耐受，白細(xì)胞下降后維持時(shí)間比較長， 藥物有充分的作用時(shí)間，而且用藥方案更接近臨床實(shí)際的用藥方式，表現(xiàn)真正的造血抑制， 而不是外周白細(xì)胞的耗竭。絲裂霉素是廣譜的抗腫瘤藥物，同時(shí)造血抑制作用也比較強(qiáng)，持續(xù)時(shí)間長，這樣的模型表現(xiàn)出的藥物作用比較可靠。一.目的觀察中藥唐草片對化療藥物所引起的白細(xì)胞減少癥的療效。二 .材料和方法1.實(shí)驗(yàn)動物昆明種健康小鼠，清潔級，雄性，體重31 士 2克。2.藥品和試劑注射用絲裂霉素浙江海正藥業(yè)股份有限公司，批號090302重組人粒細(xì)胞集落刺激因子山東泉港藥業(yè)有限公司，批號20081四01中藥唐草片上海百歲行藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號081203，每片0.4g，含生藥量為 1. 708go(老鸛草180g、黃芪180g、龍葵180g、金銀花180g、木棉花120g、訶子90g、白花蛇舌草180g、石榴皮90g、糯稻根300g、菱角180g。制成1000片)3.動物模型根據(jù)文獻(xiàn)(Akahori H, Shibuya K, Ozai M, et al. Effects of pegylated recombinant human megakaryocyte growth and development factor on thrombocytopenia induced by a new myeIosuppressive chemotherapy regimen in mice. Stem Cells. 1996,14(6) :678-689 ；Shimomura K, Manda Τ, Mukumoto S, et al.Antitumor activity and hematotoxicity of a new, substituted dihydrobenzoxazine, FK973, in mice. Cancer Res. 1988，48 (5) :1166-1172)和預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，采用下述方法，小鼠腹腔注射絲裂霉素:3mg/kg —次，五天后再注射絲裂霉素ang/kg — 次。4.升高白細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分組和劑量動物根據(jù)體重隨機(jī)分為6組，每組10只。分為正常對照組、模型組、模型+中藥唐草片低劑量組、模型+中藥唐草片中劑量組、模型+中藥唐草片高劑量組、陽性藥對照組。中藥唐草片采用強(qiáng)制口服給藥方式。中藥唐草片用生理鹽水溶解后定容至所需體積，動物灌胃體積按0. lml/10g體重。中藥唐草片低、中、高劑量依次為0. 5,1. 0,2. 0g/kg體重，中藥唐草片用藥5天后腹腔注射絲裂霉素，中藥唐草片連續(xù)灌服21天，正常對照組、模型組灌服等量生理鹽水，陽性藥對照組在模型成功后皮下注射重組人粒細(xì)胞集落刺激因子50 μ g/kg，連續(xù)注射4天。5.荷瘤動物實(shí)驗(yàn)分組和劑量(徐叔云主編.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué).第二版.北京人民衛(wèi)生出版社，1994. 1243-1249)動物根據(jù)體重隨機(jī)分為5組，每組6只。分為正常對照組、 荷瘤動物組、荷瘤動物+中藥唐草片(1. Og/kg體重)組、荷瘤動物+中藥唐草片(1. Og/kg 體重)+絲裂霉素(5. Omg/kg體重)組、荷瘤動物+絲裂霉素(5. Omg/kg體重)組。預(yù)防應(yīng)用中藥唐草片5天，分別給小鼠接種鼠S180肉瘤和腹水瘤(107只，0. 2ml)，第二天同時(shí)應(yīng)用化療藥物絲裂霉素5. Omg/kg治療一次。接種鼠S180肉瘤組(形成實(shí)體瘤)中藥唐草片連續(xù)給藥11天，腹水瘤組中藥唐草片連續(xù)給藥18天。三.觀察指標(biāo)1.白細(xì)胞計(jì)數(shù)按常規(guī)方法取小鼠尾靜脈血50 μ 1，加入含有EDTA-I的150 μ 1 生理鹽水中，混勻，用血細(xì)胞分析儀分別計(jì)數(shù)外周血白細(xì)胞(WBC)數(shù)、血小板(PLT)數(shù)、紅細(xì)胞(RBC)數(shù)等。分別在給藥后不同時(shí)間計(jì)數(shù)細(xì)胞，模型組動物外周血白細(xì)胞數(shù)恢復(fù)到正常水平時(shí)終止。2.股骨有核細(xì)胞計(jì)數(shù)在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)用安死術(shù)處死小鼠，取一側(cè)股骨，按常規(guī)沖出骨髓有核細(xì)胞，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)有核細(xì)胞數(shù)。骨髓集落形成細(xì)胞培養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)用安死術(shù)處死小鼠，取一側(cè)股骨骨髓細(xì)胞，用6孔板做甲基纖維素培養(yǎng)，每樣品設(shè)3孔，主要觀察粒-單核細(xì)胞集落數(shù)(CFU-GM)。3.動物體重分別在給藥前和給藥后不同時(shí)間稱量動物體重。4.荷瘤動物分別觀察抑瘤率(實(shí)體瘤)和動物的壽命延長(腹水瘤)情況，并測定外周血細(xì)胞數(shù)等變化。四.統(tǒng)計(jì)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(X士 s)表示，應(yīng)用SPSS10. 0分析軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用多個(gè)樣本均數(shù)比較的單因素方差分析法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，取P < 0. 05為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。五·實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷尿?yàn)證從表1中可以看出，第一次注射絲裂霉素后4天，模型組白細(xì)胞數(shù)降低不明顯，第二次注射絲裂霉素后6天，即第一次注射絲裂霉素后10天，模型組白細(xì)胞數(shù)顯著低于正常對照組的35%，和正常對照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說明模型建立成功。所建立模型動物的白細(xì)胞、血小板數(shù)在低水平可以持續(xù)30天，紅細(xì)胞持續(xù)7天。2.外周血白細(xì)胞數(shù)的變化表1外周血白細(xì)胞數(shù)的變化(X 109/L)
權(quán)利要求
1.中藥唐草片在制備升高白細(xì)胞藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述中藥唐草片在制備升高白細(xì)胞藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述中藥唐草片的中藥原料組成成分為下列重量配比老鸛草120-150、黃芪120-150、龍葵 120-200、金銀花120-200、木棉花60-100、訶子40-60、白花蛇舌草80-150、石榴皮40-60、 糯稻根150-200、菱角80-150.瓜蔞皮40-60、柴胡60-100、香薷40-60、甘草60-80、雞血藤 120-150、紅花40-60、銀杏葉40-60、馬齒莧60-120、胡黃連40-60、全蝎沘_40。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于，所述中藥唐草片的中藥原料組成成分為下列重量配比老鸛草120-150、黃芪120-150、龍葵120-200、金銀花120-200、木棉花60-100、訶子 40-60、白花蛇舌草80-150、石榴皮40-60、糯稻根150-200、菱角80-150。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于，所述中藥唐草片的中藥原料組成成分為下列重量配比老鸛草180、黃芪180、龍葵180、金銀花180、木棉花120、訶子90、白花蛇舌草180、石榴皮90、糯稻根300、菱角180。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物為增加動物骨髓集落形成細(xì)胞數(shù)的藥物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物為緩解抗腫瘤藥物對骨髓的抑制作用的藥物。
全文摘要
本發(fā)明提供了中藥唐草片在制備升高白細(xì)胞藥物中的應(yīng)用。所述中藥唐草片的中藥原料組成成分為老鸛草、黃芪、龍葵、金銀花、木棉花、訶子、白花蛇舌草、石榴皮、糯稻根、菱角、瓜蔞皮、柴胡、香薷、雞血藤、紅花、銀杏葉、馬齒莧、胡黃連和全蝎。經(jīng)中藥唐草片對小鼠因化療藥物所引起的白細(xì)胞減少癥的療效實(shí)驗(yàn)，顯示其具有升高白細(xì)胞的作用，可以提高治療的綜合療效，增加中藥唐草片的適應(yīng)癥，擴(kuò)大應(yīng)用范圍，可用于制備升高白細(xì)胞作用的藥物，有較大的臨床應(yīng)用價(jià)值，具有明顯的社會效益和經(jīng)濟(jì)效益。
文檔編號A61P43/00GK102335353SQ20101022939
公開日2012年2月1日 申請日期2010年7月16日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月16日
發(fā)明者楊莉婭, 殷建華, 邵寶平, 黃艷春 申請人:上海百歲行藥業(yè)有限公司