專利名稱：脂溶性雙核鈷(iii)抗癌配合物及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于親脂性的鈷類抗腫瘤配合物。
背景技術(shù)：
化學(xué)療法是目前人類對付癌癥的三大手段之一，臨床上得到廣泛應(yīng)用?；瘜W(xué)療法的主要藥物均屬細(xì)胞毒性化合物，對癌細(xì)胞缺乏選擇性和特異性，在殺死癌細(xì)胞的同時 也極大傷害正常的組織細(xì)胞、導(dǎo)致嚴(yán)重的毒副作用[韓銳主編.腫瘤化學(xué)預(yù)防及藥物治 療.北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社.北京，1991年]?；煹幕A(chǔ)是化療藥 物，世界各國每年都投入大量人力物力和財力進(jìn)行抗癌藥物的研究。鈷是人體內(nèi)一種必要的微量元素，在生物體內(nèi)均以配合物的形式存在。由于它 可作為一種優(yōu)良的探針離子取代金屬蛋白和金屬酶中Zn (II)、Mn (II)、Fe (II)、Cu (II)、 Mg(II)等離子而具有載氧、氧化還原、水解等作用。文獻(xiàn)報導(dǎo)[Co2-(EGTB)Cl2] .[Co2(EGTB) Cl2] · (ClO4)2 ·5Η20具有一定的超氧化物歧化酶的活性，能很好地歧化超氧離子[朱莉，廖 展如，王哲明，嚴(yán)純?nèi)A，無機化學(xué)學(xué)報，2002，18 (7)，731-734] ]。A. Hammershai等提出了一類 新的含鈷藥物的模型[J. Inorg. Biochem. 1993,49 :295_304]，從抗癌藥物順鉬能特異地與 DNA結(jié)合推論有些金屬配合物如能與DNA結(jié)合也可能具有抗癌活性，而鈷螯合物作為催化 劑產(chǎn)生活性氧自由基，它們的靶分子是DNA和RNA，故鈷化合物有可能成為抗腫瘤、抗炎藥 物。但關(guān)于該類鈷配合物與DNA的作用迄今尚未見報道.目前，作為抗癌藥物的金屬藥物主要是鉬類抗癌藥物。由于其抗癌活性強、作用譜 較廣，作用機制獨特，與非鉬類抗癌藥物不產(chǎn)生交叉耐藥性，是治療許多腫瘤的首選藥物， 得到廣泛使用。但是，鉬類抗癌藥物存在較大的毒副作用，接受治療的癌癥患者通常出現(xiàn)骨 髓抑制如血小板低下、惡心嘔吐、腎和神經(jīng)損傷等嚴(yán)重毒副作用，因此研究毒性小的非鉬類 配合物仍是目前抗癌藥研究的主要方向之一。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種脂溶性雙核鈷(III)抗癌配合物，具有抗癌活性高、脂溶 性好的特征。本發(fā)明另一目的是提出一種制備脂溶性雙核鈷(III)抗癌配合物的方法。本發(fā)明目的通過以下方式實現(xiàn)(一 )脂溶性雙核鈷(III)抗癌配合物該配合物的化學(xué)名為N，N’ _雙水楊醛縮聯(lián)胺合鈷(III)，簡稱Co2 (C14H12N2O2)3,其 分子式C42H33Co2N6O6,其分子量Fff = 834. 63，化學(xué)結(jié)構(gòu)為 所述的抗癌配合物為紅褐色晶體，特征結(jié)構(gòu)參數(shù)(％ )的理論值為C，57.66 ；H, 4. 94 ；N, 11. 21，實驗值為:C,57. 70 ；H, 4. 92 ；N, 11. 19。所述的抗癌配合物溶于包括乙醇或乙醚或丙酮的有機溶劑，還溶于包括花生油或 山茶油或橄欖的油脂類化合物，其溶解度均高于10mg/ml。所述的抗癌配合物初篩后的配合物對HepG2人肝癌細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度GI5tl 為 0. 35μ g/mL。( 二 )制備脂溶性氧橋雙核鈷(III)抗癌配合物的方法包括以下步驟(1)以水合胼為原料，加入水楊醛，制備出N，N’ _水楊醛縮二胺黃色配體
C14H12N2O2 ；(2)取N，N’ -水楊醛縮二胺黃色固體溶于DMF中，攪拌下緩慢滴入等摩爾的 CoAc2 · 4H20,常溫下充分反應(yīng)后過濾，濾液在常溫下靜置10 15天得到N，N’ -雙水楊醛 縮聯(lián)胺合鈷(III)，化學(xué)反應(yīng)式如下 與鉬類抗腫瘤藥物比較，本發(fā)明具有如下優(yōu)勢和進(jìn)步(1)所合成的鈷席夫堿配合物屬于非鉬類抗腫瘤化合物，鈷金屬是人體必需的微 量元素，比鉬的毒性低；(2)鈷席夫堿配合物，有較好的水溶性和脂溶性，能保證水溶性和脂溶性的平衡， 有利于化合物在體內(nèi)的吸收和轉(zhuǎn)運；(3)本發(fā)明配合物的GI5tl值是0. 35 μ g/mL,明顯低于順鉬注射液的0. 57μ g/mL和 卡鉬的1. 82 μ g/mL，抗腫瘤活性分別是順鉬的1. 6倍和卡鉬的5倍，顯示出良好的抗腫瘤活 性；(4)本發(fā)明配合物制備方法以水合胼為原料，加入水楊醛，制備出黃色配體 C14H12N2O2 ；再在DMF溶液加入CoAc2 ·4Η20等摩爾定量反應(yīng)，收集配合物晶體，其合成路線和 化學(xué)反應(yīng)工藝簡單；(5)本發(fā)明為鈷席夫堿多核化合物的抗腫瘤研究提供了新的證據(jù)。
具體實施例方式(-)本發(fā)明配合物N，N’-雙水楊醛縮聯(lián)胺合鈷(III)的制備(1)配體N，N’ -水楊醛縮二胺的合成本發(fā)明Ν，Ν’_水楊醛縮二胺的合成參照文獻(xiàn)[B. Sreenivasulu, J. J. Vittal, [J], Angew. Chem. Int. Ed.，2004，43 :5769_5772]稱取水合胼 50mmol (2. 5g)，向其中緩慢滴加 入溶有20mL水楊醛50mmol (6. Ig)的無水甲醇溶液，邊加邊攪拌，溶液即變?yōu)辄S色。之后， 常溫下充分反應(yīng)后，得到大量的黃色沉淀，抽濾，THF(四氫呋喃)重結(jié)晶，即得N，N’ -水楊 醛縮二胺的黃色固體12g，真空干燥備用。N, N’ -水楊醛縮二胺產(chǎn)率85%。特征結(jié)構(gòu)參數(shù)為元素分析(％ )理論值C，
669. 99 ；H, 5. 03 ；N, 11. 66 ；實驗值C，70. 01 ；H, 5. 06 ；N, 11. 61。(2)N，N’ -雙水楊醛縮聯(lián)胺合鈷(III) [Co2(C14H12N2O2)3]的制備取上述所得黃色固 體12mmol(6g)溶于DMF (N，N’ _ 二甲基甲酰胺)中，攪拌下將12mmol (7g) CoAc2 · 4H20緩慢 滴加入以上DMF溶液內(nèi)，常溫下充分反應(yīng)后過濾，濾液在常溫下靜置10 15天，便培養(yǎng)得 到適宜X-射線單晶衍射測試的紅褐色晶體7. 5g。Co2 (C14H12N2O2)3產(chǎn)率76%0其分子量FW = 834. 63，特征結(jié)構(gòu)參數(shù)(% )的理論 值:C,57. 66 ；H, 4. 94 ；N, 11. 21。實驗值C，57. 70 ；H, 4. 92 ；N, 11. 19。( 二)本發(fā)明配合物的體外抗腫瘤活性試驗及結(jié)果本發(fā)明在體外抗腫瘤活性試驗中采用HepG2人肝癌細(xì)胞株評價所合成配合物的 體外活性，同時以順鉬和卡鉬作為陽性對照。實驗原理是以SRB染色法檢測細(xì)胞活力，觀察 樣品對腫瘤細(xì)胞增殖的影響，以評價樣品的抗腫瘤效果。采用的陽性參照化合物為Taxol， 實驗包括將細(xì)胞接種于96孔板，培養(yǎng)過夜，加入樣品(T)，同時做不加樣品對照(C)和加藥 前對照(T)。加藥前對照(T)的細(xì)胞加入TCA進(jìn)行固定，留置待用。加入樣品(T)和不加 樣品對照(C)的細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)48小時后再固定。所有固定好的細(xì)胞以SRB染液染色，再 用醋酸溶液洗去游離的染料，空氣干燥后加入Tris堿，振蕩溶解混勻后490nM測定OD值。 根據(jù)OD值計算生長率，如果T彡T。，生長率=(T-TQ)/(C-TQ)X100%;如果T<TQ，(T-T0)/ T0XlOOo初篩時每個樣品單濃度設(shè)雙復(fù)孔，重復(fù)兩次，生長率小于50%的樣品測定GI5tl值， 測定時每個樣品梯度稀釋五個濃度，每個濃度設(shè)雙復(fù)孔。本發(fā)明配合物初篩結(jié)果如表1，半數(shù)抑制濃度GI5tl結(jié)果如表2 表1配合物對H印G2人肝癌細(xì)胞的初篩結(jié)果 從表1數(shù)據(jù)可知，對于HepG2人肝癌細(xì)胞，本發(fā)明配合物的所抑制的體外生長率明 顯低于順鉬，而高于卡鉬。表2初篩后的配合物對H印G2人肝癌細(xì)胞生長的GI5tl值 表2顯示本發(fā)明配合物的GI5tl值是0. 35 μ g/mL,明顯低于順鉬注射液的 0. 57 μ g/mL和卡鉬的1. 82 μ g/mL，抗腫瘤活性分別是順鉬的1. 6倍和卡鉬的5倍，顯示出 良好的抗腫瘤活性。(三)本發(fā)明配合物的脂溶性按照中國藥典2005版二部附錄的溶解度測定方法，測定所發(fā)明配合物25°C時，在 有機溶劑和油脂類中的溶解度。結(jié)果表明所發(fā)明配合物在有機溶劑和油脂類中的溶解度均 高于10mg/ml，脂溶性好。如表3 表3 化合物的溶解度數(shù)據(jù)(25°C，mg/ml)
權(quán)利要求
脂溶性雙核鈷(III)抗癌配合物，其特征是該配合物的化學(xué)名為N，N’-雙水楊醛縮聯(lián)胺合鈷(III)，簡稱Co2(C14H12N2O2)3，其分子式C42H33Co2N6O6，其分子量FW＝834.63，化學(xué)結(jié)構(gòu)為FSA00000177567100011.tif
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂溶性雙核鈷(III)抗癌配合物，其特征是該配合物為紅褐 色晶體，特征結(jié)構(gòu)參數(shù)(% )的理論值為:C,57. 66 ；H,4. 94 ；N，11. 21，實驗值為:C，57. 70 ； H，4. 92 ；N, 11. 19。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的脂溶性雙核鈷(III)抗癌配合物，其特征是該配合物 溶于包括乙醇或乙醚或丙酮的有機溶劑，還溶于包括花生油或山茶油或橄欖的油脂類化合 物，其溶解度均高于10mg/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的脂溶性雙核鈷(III)抗癌配合物，其特征是該配合物初 篩后的配合物對IfepG2人肝癌細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度GI5(1為0. 35 y g/mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的脂溶性雙核鈷(III)抗癌配合物，其特征是該配合物初篩后 的配合物對H印G2人肝癌細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度GI5(1為0. 35 y g/mL。
6.一種制備如權(quán)利要求1 5所述的脂溶性雙核鈷(III)抗癌配合物的方法，包括以 下步驟(1)以水合胼為原料，加入水楊醛，制備出N，N’-水楊醛縮二胺黃色配體C14H12N202 ；(2)取N，N’-水楊醛縮二胺黃色固體溶于DMF中，攪拌下緩慢滴入等摩爾的 CoAc2 4H20，常溫下充分反應(yīng)后過濾，濾液在常溫下靜置10 15天得到N，N,-雙水楊醛 縮聯(lián)胺合鈷(III)，化學(xué)反應(yīng)式如下
全文摘要
脂溶性雙核鈷(III)抗癌配合物及制備方法，屬于親脂性的鈷類抗腫瘤配合物。本發(fā)明配合物的化學(xué)名為N，N′-雙水楊醛縮聯(lián)胺合鈷(III)(簡稱[Co2(C14H12N2O2)3])，分子式C42H33Co2N6O6，分子量FW＝834.63。制備是以CoAc2·4H2O為原料，在DMF溶劑中與配體N，N′-水楊醛縮聯(lián)胺定量反應(yīng)，析出產(chǎn)物。本發(fā)明配合物抗腫瘤活性為順鉑1.6倍、卡鉑5倍，抗癌GI50值為0.35μg/mL，活性高于順鉑和卡鉑，毒性低、有良好的脂溶性，用于臨床治療癌癥。
文檔編號A61P35/00GK101885689SQ20101022090
公開日2010年11月17日 申請日期2010年7月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月8日
發(fā)明者謝明進(jìn), 趙琦華, 金毅, 陳紅雁 申請人:云南大學(xué)