專利名稱：預防和治療糖尿病以及脂代謝紊亂的多肽的制作方法
預防和治療糖尿病以及脂代謝紊亂的多肽技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及預防和治療糖尿病和脂代謝紊亂疾病的藥物。 技術(shù)背景
糖尿病(diabetes)是由遺傳因素、免疫功能紊亂、微生物感染及其毒素、自由基 毒素、精神因素等等各種致病因子作用于機體導致胰島功能減退、胰島素抵抗(Insulin Resistance, IR)等而引發(fā)的糖、蛋白質(zhì)、脂肪、水和電解質(zhì)等一系列代謝紊亂綜合征。糖尿 病已經(jīng)成為人類繼癌癥、心腦血管疾病之后的第三大“健康殺手”。隨著經(jīng)濟發(fā)展，肥胖增多 以及人類結(jié)構(gòu)的老年化，糖尿病的發(fā)病率持續(xù)增長。
1980年，世界衛(wèi)生組織(world health organization, WHO)將糖尿病分為胰島 素依賴性糖尿病(insulin-dependent diabetes mellitus, IDDM，又稱I型)，非胰島素依 賴性糖尿病(noninsulin-d印endent diabetes mellitus，NIDDM，又稱 II 型)及其他類型 糖尿病。I型患者常起病于幼年，又稱為少年發(fā)病型，是由內(nèi)源性胰島素分泌不足引起，多需 要胰島素治療。II型患者多起病于40歲以后，有時稱陳年發(fā)病型，患者的高血糖癥主要是 由于胰島素信號通路障礙，胰島素刺激細胞攝取葡萄糖的能力下降。由于糖尿病病因復雜， 發(fā)病機制還不完全清楚，給治療帶來了極大的困難。
目前治療糖尿病以注射給予胰島素為主，而由于胰島素是一種水溶性多肽，易于 被胃腸道內(nèi)的酶降解，因此不適宜于口服給藥；而且糖尿病患者實施胰島素治療需要終生 每日皮下注射胰島素，長期頻繁注射不但給患者帶來痛苦，還可能產(chǎn)生皮下脂肪萎縮等多 種不良反應(yīng)。另外長期給予胰島素治療有引發(fā)低血糖癥的危險。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的任務(wù)是提供一種預防和治療糖尿病以及脂代謝紊亂的多肽及其制備方法。
實現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案是
本發(fā)明提供的這種預防和治療糖尿病以及脂代謝紊亂的多肽具有以下序列1至4 中任一項所示的氨基酸序列
序列1 :ASCNGVCSPFEMPPCGSSACRCIPVGLWGYCRHPSG
序列2 JSCNGVCSPFDIPPCGTPLCRCIPAGLFVGKCRHPYG
序列3 :VSCNGVCSPFDIPPCGTPLCRCIPYGLFVGNCRHPYG
序列 4 :VSCNGVCSPFEMPPCGSSACRCIPYGLVVGNCRHPSG
本發(fā)明提供的多肽可用于預防和治療糖尿病以及脂代謝紊亂疾病。以本發(fā)明多肽 為活性成分和藥學上可接受的載體，可制備用于預防和治療糖尿病以及脂代謝紊亂疾病的 藥物。
本發(fā)明多肽提取工藝
豌豆(大豆)或榨油后的豆粕，經(jīng)0. 5M醋酸浸泡過夜，打漿，漿液冷凍離心，離心上清液用海藻酸吸附，然后用0. 2M鹽酸洗脫，重復吸附和洗脫操作3遍，洗脫液進行鹽析， 鹽析后的產(chǎn)品經(jīng)過G-25柱脫鹽，脫鹽后的液體經(jīng)過G-50柱過濾，濾液冷凍干燥濃縮，用 HPLC進行分離，取不同的分離峰組分進行藥效學實驗，最終選擇有降糖作用的峰組分進行 蛋白測序。提取工藝流程圖見

圖1。
產(chǎn)率1kg大豆一打漿一離心一海藻酸吸附一鹽析(10g，l% )—脫鹽(6g， 0. 6% ) — G-50 柱過濾(3g，0. 3% ) — HPLC(500mg，0. 05% )
多肽的鑒定
1.收集HPLC中各分離峰的分離液(見圖2)分別進行藥效學試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)峰3， 峰4，峰5，峰7中的物質(zhì)有降糖效果，然后分別將這四種物質(zhì)進行蛋白測序，測序結(jié)果為
多肽1 (峰；3) ASCNGVCSPFEMPPCGSSACRCIPVGLVVGYCRHPSG (37)
多肽2 (峰 4) ISCNGVCSPFDIPPCGTPLCRCIPAGLFVGKCRHPYG (37)
多肽3 (峰幻 VSCNGVCSPFDIPPCGTPLCRCIPYGLFVGNCRHPYG (37)
多肽 4 (峰 7) VSCNGVCSPFEMPPCGSSACRCIPYGLVVGNCRHPSG (37)
其中，A-丙氨酸、C-半胱氨酸、D-天冬氨酸、E-谷氨酸、F-苯丙氨酸、G-甘氨酸、 H-組氨酸、I-異亮氨酸、K-賴氨酸、L-亮氨酸、M-甲硫氨酸、N-天冬酰胺、P-脯氨酸、R-精 氨酸、S-絲氨酸、T-蘇氨酸、V-纈氨酸、Y-酪氨酸
2.物理性狀
該四種化合物外觀均為白色粉末，極易溶解于水等極性溶劑，對熱穩(wěn)定，耐蛋白酶 水解。
3.命名
本發(fā)明專利申請將該四種多肽一起命名為legaglycins，中文名胰怡素。
藥效學實驗資料
1.實驗用藥及實驗動物
實驗用藥取本發(fā)明提供的四種多肽，均用生理鹽水分別配制成濃度為ang/ml的 口服液，供實驗灌胃使用。
實驗動物本實驗中的動物均為BABC小鼠，每組10只，隨機分組。
2.實驗方法及結(jié)果
1)治療II型糖尿病效果實驗
建立II型糖尿病小鼠動物模型100mg/kg —次性大劑量注射鏈脲佐菌素(STZ)， 并以高糖高脂飼料喂養(yǎng)，建立II型糖尿病小鼠動物模型。
將糖尿病小鼠隨機分為多肽灌胃組、二甲雙胍(陽性對照)組、模型對照組和空白 對照組，每組10只。隔日灌胃給藥，持續(xù)4周，給藥量為20ug/g，每周測定小鼠的血糖。結(jié) 果見表1。
表1 小鼠血糖變化情況
權(quán)利要求
1.用于預防和/或治療糖尿病和/或脂代謝紊亂的多肽，其特征在于，具有以下序列1 至4中任一項所示的氨基酸序列序列 1 :ASCNGVCSPFEMPPCGSSACRCIPVGLWGYCRHPSG 序列 2 JSCNGVCSPFDIPPCGTPLCRCIPAGLFVGKCRHPYG 序列 3 :VSCNGVCSPFDIPPCGTPLCRCIPYGLFVGNCRHPYG 序列 4 :VSCNGVCSPFEMPPCGSSACRCIPYGLVVGNCRHPSG
2.權(quán)利要求1所述的多肽在制備用于預防和/或治療糖尿病和/或脂代謝紊亂的藥物 中的應(yīng)用。
3.一種用于預防和/或治療糖尿病和/或脂代謝紊亂的藥劑，其特征在于含有有效量 的權(quán)利要求1所述的多肽和藥學上可接受的載體。
全文摘要
本發(fā)明提供了一類預防和治療糖尿病以及脂代謝紊亂的多肽，該類多肽對II型糖尿病有顯著的療效，其降糖作用是在高血糖基礎(chǔ)上發(fā)生，是依賴葡萄糖而降低高血糖濃度，不會導致低血糖，安全性好，而且對胰腺β細胞有一定的保護作用。該類多肽還具有明顯降低血中甘油三酯作用，可作為治療和預防糖尿病以及脂代謝紊亂疾病的疾病的藥物。因其耐酶解，適宜開發(fā)為口服制劑。
文檔編號A61K38/16GK102030820SQ20101018311
公開日2011年4月27日 申請日期2010年5月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月26日
發(fā)明者萬定一, 杜仲夏, 蓋文麗, 賈紹輝, 陸婕, 陳正望, 陳磊, 頓新鵬, 顏冬菁 申請人:華中科技大學