專利名稱：：博落回總生物堿離子對混合物的制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種來自中草藥博落回提取物制成的離子對混合物的藥物和制備方法，以及該藥物在抗菌方面具體是人用藥、獸用藥以及日化產(chǎn)品中的制藥用途，特別是涉及含有博落回總生物堿離子對混合物用于人用藥或獸用藥以及日化用品的用途。
背景技術(shù)：
：博落回Macleayacordate(Willd)R.Br.、小果博落回Macleayamicrocarpa(Maxim.)Fedde系罌粟科博落回屬多年生草本植物，在我國分布廣泛。在我國使用博落回治療疥癬、殺蟲滅蛆具有悠久的歷史。博落回中主要含有血根堿、白屈菜紅堿、原阿片堿、別隱品堿等異喹啉類生物堿，現(xiàn)代藥理藥效學(xué)研究表明，博落回中生物堿具有以下藥理藥效作用1、抗菌作用博落回植物中主要含有血根堿、白屈菜紅堿等生物堿。大量藥理研究資料表明血根堿、白屈萊紅堿及博落回總生物堿對金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、八迭桿菌、大腸桿菌、變形桿菌、綠膿桿菌、白假絲酵母、羊毛狀小抱霉菌以及流感病毒A有不同程度的抑制和殺傷作用。血根堿對葡萄球菌的最小抑菌濃度為1.95iig/mL，血根堿和白屈菜紅堿抗菌、抗病毒的機(jī)制可能是抑制DNA合成及逆轉(zhuǎn)錄酶，影響細(xì)胞膜的通透性。另外，研究表明血根堿和博落回紅堿具有較強(qiáng)的抗炎及抑制口腔細(xì)菌的效果，因此被用于口腔炎癥的治療。2、殺蟲作用袁濤忠等(1999)觀察了博落回總堿對絨尾蛆蠅三齡幼蟲的殺滅效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)對應(yīng)于O.16mmol/100mL的博落回總堿濃度可以在24h內(nèi)100%殺死全部幼蟲，其殺蟲效力相當(dāng)于0.025mmol/L的澳氰菊醋。博落回對茶黃毒蛾P(guān)seudoconspersa，對尖音庫蚊Cule鄧ipiers，對果蠅Drpsophilahydei有毒殺作用，對家蠅也有觸殺作用。藥理研究表明博落回有強(qiáng)大的殺陰道滴蟲作用，在玻片上將滴蟲與博落回浸膏相接觸，滴蟲立刻被全部殺死。此外，血根堿、白屈菜紅堿及博落回堿還有殺線蟲和防植物霉菌作用，其中的生物堿對植物蚜蟲也有殺滅作用。中國專利CN100366621C公開了博落回總生物堿鹽及其制備方法和應(yīng)用，博落回總生物堿鹽為博落回總生物堿水楊酸鹽、博落回總生物堿苯甲酸鹽、博落回總生物堿馬來酸鹽、博落回總生物堿酒石酸鹽或博落回總生物堿硼酸鹽，所制備的博落回總生物堿鹽應(yīng)用于抗菌藥品的制備。中國專利CN1957990A公開了將博落回總生物堿鹽加藥劑學(xué)相應(yīng)的輔料制成粉劑、散劑、片劑、膠囊劑或注射劑，以應(yīng)用于殺滅釘螺、螺卵、日本血吸蟲尾蚴從而起到預(yù)防血吸蟲病，或應(yīng)用于人畜體內(nèi)驅(qū)血吸蟲達(dá)到人畜血吸蟲病的治療。其中所述的博落回總生物堿鹽是通過博落回總生物堿與無機(jī)酸或有機(jī)酸反應(yīng)而得到，所述的無機(jī)酸或有機(jī)酸選自鹽酸、硫酸、硼酸、水楊酸、酒石酸、枸椽酸。中國專利CN101297870A也公開了博落回總生物堿或其鹽對血吸蟲所造成的肝纖維化具有良好的預(yù)防和治療作用，可用來制備預(yù)防和治療血吸蟲致肝纖維化的藥物。然而，博落回總生物堿在應(yīng)用過程中，對皮膚和鼻粘膜有較大大剌激作用，不利于其應(yīng)用在日化產(chǎn)品上，抗菌作用也還有待進(jìn)一步提升等諸多問題。黃芩或黃芩提取物作為抗菌藥物仍存著使用量大，抗菌效果不是很明顯的缺陷。此外，在長期的藥物研究中，由于黃芩苷極難溶于多種無機(jī)和有機(jī)溶劑，水溶性和脂溶性差，并且在堿液中不穩(wěn)定，因此限制了黃芩苷的生物利用度。另外，長期單一使用黃芩苷，也會導(dǎo)致耐藥菌株的產(chǎn)生，因此使得其抗菌譜不夠廣泛。綜合所述，目前需要提供一種能夠提高博落回總生物堿的生物利用度、擴(kuò)大博落回總生物堿的抗菌譜、增強(qiáng)博落回總生物堿藥效、同時(shí)降低對皮膚和鼻粘膜的剌激作用的方法及其產(chǎn)品。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明人基于通過多年對博落回和黃芩等天然物質(zhì)研究積累，突破對于博落回總生物堿開發(fā)的傳統(tǒng)思路，即不再局限于選擇適于博落回總生物堿的合適載體或配伍劑，也不再于對博落回總生物堿進(jìn)行酸/堿基團(tuán)的鹽化處理，而是創(chuàng)造性的選擇一種能夠增強(qiáng)博落回總生物堿的抑菌協(xié)同效應(yīng)、又能顯著提高生物利用度的與其生物堿能結(jié)合成離子對混合物來自另一種中藥種的其他化學(xué)成分、同時(shí)能夠降低對皮膚和鼻粘膜的剌激作用的離子對化合物的混合物，從而最終獲得一種來自中藥的新的離子對化合物的混合物。簡單的說，發(fā)明人通過多年在博落回生物堿領(lǐng)域的積累和研究，發(fā)現(xiàn)將博落回提取物中的生物堿與黃芩提取物中含有葡萄糖醛酸基的黃酮化合物為原料可制備生成含有離子對化合物的混合物，所述的混合物可增強(qiáng)博落回總生物堿的抗菌效果并提高臨床療效，增大博落回總生物堿的脂溶性和提高生物利用度，并且所生成的離子對混合物大大降低了對鼻粘膜和皮膚的剌激，拓展本發(fā)明成分的應(yīng)用領(lǐng)域。因此，本發(fā)明第一個(gè)目的是提供一種來自中草藥博落回和黃芩的提取物制備的博落回總生物堿離子對混合物，包括具有如下式I所示的結(jié)構(gòu)黃芩苷離子對化合物，和具有如下式II所示的結(jié)構(gòu)白屈菜紅堿離子對化合物OHO5其中式I所示的黃芩苷離子對化合物由黃芩苷中的葡萄糖醛酸基和血根堿的,kj衣靠分子間靜電作用結(jié)合而生成的水不溶性化合物；其中式II所示的白屈菜紅堿離子對化合物由黃芩苷中的葡萄糖醛酸基和白屈菜紅堿的一i、依靠分子間靜電作用結(jié)合而生成的水不溶性化合物；在一個(gè)實(shí)施方案中，所述博落回總生物堿以血根堿黃芩苷離子對化合物和白屈菜紅堿黃芩苷離子對化合物的混合物質(zhì)量百分比合計(jì)為3090%，基于性價(jià)比考慮，其中優(yōu)選5070%，最優(yōu)選6063%。本發(fā)明第二個(gè)目的是提供上述博落回總生物堿離子對混合物的制備方法，包括1)將博落回總生物堿的無機(jī)酸鹽在60IO(TC下制成0.2%2%質(zhì)量百分比濃度的水溶液，其中無機(jī)酸選自指鹽酸、硫酸、磷酸或硝酸；2)將黃芩苷在60IO(TC下用無機(jī)堿調(diào)pH至6.57.5制成1%10%量百分比濃度的水溶液，其中無機(jī)堿選自氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉或碳酸氫鈉；3)將上述溶液在60IO(TC下緩慢混勻，冷卻，沉淀過濾、干燥即得桔紅色的博落回總生物堿離子對混合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，其中可使用商用的博落回總生物堿(如購自湖南美可達(dá)生物資源有限公司，批號090220，其中血根堿和白屈菜紅堿含量為62%，黃芩提取物(如購自山東諸城市浩天藥業(yè)有限公司，批號YZ20090209，其中純度為76%;如購自山東諸城市浩天藥業(yè)有限公司，批號YZ20091225，其中純度為90%)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，使用通過傳統(tǒng)方法從博落回和黃芩提取的博落回總生物堿或黃芩苷，其中，在具體實(shí)施方案中，從博落回提取總生物堿并制成無機(jī)酸鹽的方法包括(1-1)取博落回果實(shí)，揀去雜質(zhì)，加入用硫酸調(diào)節(jié)pH值2-3的10(TC的熱酸水在3-6小時(shí)內(nèi)20倍量進(jìn)行循環(huán)提取。提取后固液分離，濾液用石灰乳或氫氧化鈉或氫氧化鉀調(diào)節(jié)pH值至ll，靜置24小時(shí)，沉淀過濾，干燥，得到博落回總生物堿粗品；或者(1-2)取花前期新鮮博落回全草藥材，揀去雜質(zhì)，榨汁過濾，濾液吸入濃縮器中進(jìn)行減壓濃縮，經(jīng)管式離心機(jī)離心，再進(jìn)行減壓濃縮到，將濃縮液放入真空干燥箱中干燥，即得博落回總生物堿；或者(1-3)取博落回的葉，揀去雜質(zhì)，加入用硫酸調(diào)節(jié)pH值2-3的IO(TC的熱酸水在3-6小時(shí)內(nèi)20倍量循環(huán)提取。提取后固液分離，濾液用石灰乳或氫氧化鈉或氫氧化鉀調(diào)節(jié)pH值至11，靜置24小時(shí)，沉淀過濾，干燥，得到博落回總生物堿粗品；(2)將所得博落回總生物堿粗品溶于乙醇中，攪拌加入鹽酸或硫酸或磷酸或硝酸，成鹽后析出晶體，純化干燥，得到博落回總生物堿的無機(jī)酸鹽。上述博落回植物來源包括博落回Macleayacordata(Willd.)R.Br.、小果博落回Macleayamicrocarpa(Maxim.)Fedde。其中，在具體的實(shí)施方案中，黃芩提取物的制備方法是(1)將黃芩根(最優(yōu)選為鮮根)，沸水提取，合并提取液，濃縮至適量，用鹽酸調(diào)pH值到1.02.0，7585t:保溫，靜置，濾過即為黃芩提取物。(2)精制可將黃芩提取物用氫氧化鈉溶液5565tH周m值到6.57.5，再用鹽酸調(diào)ra值1-2，濾過，洗滌，干燥即得。本發(fā)明第三個(gè)目的提供一種上述方法所制備的博落回總生物堿離子對混合物在制備抗菌消炎藥物中的用途，其中在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的藥物是人用藥或獸用藥。本發(fā)明第四個(gè)目的提供含有上述博落回總生物堿離子對混合物的除菌或消炎性日化產(chǎn)品，其中在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的日化產(chǎn)品是化妝品、洗滌用品(包括洗滌劑或洗滌液或洗衣粉、消毒液或消毒劑、洗手液或除垢劑等)、口腔用品或身體清潔用品(包括藥皂或香皂)、香味劑、除臭劑、驅(qū)蟲滅害產(chǎn)品。而且本發(fā)明博落回總生物堿離子對混合物不但在抗菌方面有很好的效果，還可同時(shí)有效地避免博落回總生物堿對皮膚和鼻粘膜的剌激作用。本發(fā)明第五個(gè)目的是提供含有上述博落回總生物堿離子對混合物的飼料或飼料添加劑，其中在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的飼料或飼料添加劑是家禽、牲畜或水產(chǎn)飼料或飼料添加劑。定義除非特別指明，本發(fā)明所述的"離子對化合物"，又名"離子對藥物"，是指大分子有機(jī)酸和有機(jī)堿通過分子間靜電吸引結(jié)合而生成的水不溶性化合物，具有親水性小，親脂性大的特點(diǎn)，其光譜也與形成離子對化合物之前不同。離子對化合物的形成改變了單體分子溶解性、穩(wěn)定性等理化性質(zhì)，并可發(fā)揮各自活性，有可能產(chǎn)生協(xié)同作用，從而影響藥物療效；同時(shí)又易于穿透親脂性的細(xì)胞膜，改善吸收。本發(fā)明所述的博落回植物，其來源包括博落回Macleayacordata(Willd.)R.Br.、小果博落回Macleayamicrocarpa(Maxim.)Fedde。本發(fā)明中博落回總生物堿是從中草藥博落回提取的總生物堿，主要含有血根堿和白屈菜紅堿。也可使用商用的博落回總生物堿(如購自湖南美可達(dá)生物資源有限公司，批號090220，其中血根堿和白屈菜紅堿含量總和為62%)。血根堿為苯并菲啶類生物堿，主要分布在罌粟科、蕓香科、小檗科等植物中。血根堿主要從罌粟科等植物(如博落回、血水草、白屈菜等)中提取分離得到或通過合成制備。其藥理作用主要為抗菌、抗炎、殺蟲、殺蛆、改善肝臟功能、增強(qiáng)免疫力、抗腫瘤等方面，最近研究發(fā)現(xiàn)血根堿還具有殺滅釘螺、防治血吸蟲病等生物活性。且血根堿原堿本身穩(wěn)定性較差，一般以鹽的形式才穩(wěn)定存在。血根堿分子式C2。H1404N+;分子量332.32，結(jié)構(gòu)式如下白屈菜紅堿為苯并菲啶類生物堿，又名白屈菜赤堿、白屈菜季銨堿。主要分布在罌粟科、蕓香科、小檗科等植物中。白屈菜紅堿主要從罌粟科植物如博落回、血水草、白屈菜等以及蕓香科植物如雙面針、飛龍掌血中提取分離得到或通過合成制備。其藥理作用主要為抗菌、抗炎、殺蟲、殺蛆、改善肝臟功能、抗肝纖維化、增強(qiáng)免疫力、抗腫瘤等，因其在藥理方面的獨(dú)特作用已受到高度重視。最新發(fā)現(xiàn)白屈菜紅堿能降低四氯化碳誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠7模型肝臟組織TGF-P1和a-SMA，從而保護(hù)肝臟。白屈菜紅堿也能夠抑制高糖誘導(dǎo)的乳鼠心肌細(xì)胞形態(tài)和功能的改變，并能抑制PKC-a、PKC_|32、NF_kB和C-fos的表達(dá)和活性，對高糖環(huán)境中的心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用。白屈菜紅堿分子式C21H1804N+;分子量348.37，結(jié)構(gòu)式如下其他博落回總生物堿還包括博落回堿、白屈菜如賓堿、白屈菜黃堿、原阿片堿、a-別隱品堿等。本發(fā)明所述的植物黃吝為唇形科植物黃吝ScutellariabaicalensisGeongi的干燥根，具有清熱燥濕、瀉火解毒之功效，而黃芩苷(baiCalin，C21H180u)是從唇形科植物黃芩(ScutellariabaicalensisGeorigi)的干燥根中提取的一種黃酮類化合物，其分子式為C2凡s0n、分子量為446.36，熔點(diǎn)223-225t:，[a]18D+123°C(c=0.2，妣啶-水)；易溶于N，N-二甲基甲酰胺，吡啶中，可溶于碳酸氫鈉、碳酸鈉、氫氧化鈉等堿性溶液中，但在堿液中不穩(wěn)定，漸變暗棕色，微溶于熱冰醋酸，難溶于甲酸、乙酸、丙酮，幾乎不溶于水，乙醚、苯、氯仿等。目前證實(shí)黃芩苷具有抗菌、抗炎、抗過敏、抗病毒、抗腫瘤、清除氧自由基、抗心律失常、擴(kuò)張心腦血管、保護(hù)腦神經(jīng)細(xì)胞、保肝利膽、降壓、利尿、鎮(zhèn)靜、解熱、抑制醛糖還原酶等作用，已收載入國家藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國家標(biāo)準(zhǔn)第10冊239號(國家藥典委員會編)，其中規(guī)定含黃芩苷不得少于90%(注射用)；黃芩苷不得少于83%(口服用)。2005年版《中國藥典》收載黃芩提取物，規(guī)定含黃芩苷不得少于85%。因此，已有將黃芩苷作為抗菌藥的應(yīng)用研究，已發(fā)揮其抑菌抗炎、清熱解毒、鎮(zhèn)靜、降壓、神經(jīng)保護(hù)等藥理作用。黃芩苷分子式C2凡s0n;分子量446.36，結(jié)構(gòu)式如下黃芩中其他成分還有野黃芩苷、去甲漢黃芩素-7-0-葡萄糖苷酸、千層紙素-7-0-葡萄糖苷酸、漢黃吝素-7-0-葡萄糖苷酸等。本發(fā)明中黃芩苷是從中草藥黃芩提取的黃芩苷。也可使用商用的黃芩提取物(如購自山東諸城市浩天藥業(yè)有限公司，批號YZ20090209，其中純度為76%;如購自山東諸城市浩天藥業(yè)有限公司，批號YZ20091225，其中純度為90%)。因此，本發(fā)明所述的博落回總生物堿離子對混合物，是指和黃芩提取物中含有葡萄糖醛酸的黃酮化合物與博落回總生物堿中的血根堿、白屈菜紅堿等生物堿形成的一系列離子對化合物，其中主要含有黃芩苷與血根堿和白屈菜紅堿組成的離子對化合物混合物。"除菌或消炎性的日化產(chǎn)品"，指含有本發(fā)明離子對藥物的化妝品、洗滌用品、口腔用品或身體清潔用品、香味劑、除臭劑、驅(qū)蟲滅害產(chǎn)品或其他日化產(chǎn)品。常見的日化產(chǎn)品包括美容化妝品、清潔化妝品、護(hù)膚品、發(fā)用化妝品、藥皂或香皂或洗手液、洗滌劑或洗滌液或洗衣粉、消毒液或消毒劑、洗手液或除垢劑、牙膏、漱口水、鞋油、地板蠟等。"含有上述博落回總生物堿離子對混合物的飼料添加劑"指用于預(yù)防動物疾病的非營養(yǎng)性飼料添加劑或藥物飼料添加劑，這類添加劑對動物沒有營養(yǎng)作用，但是可以通過防治疫病、促進(jìn)動物消化吸收等作用來達(dá)到促進(jìn)動物生長、提高飼料報(bào)酬，降低飼料成本，獲取更大經(jīng)濟(jì)效益之目的。常見的"含有上述博落回總生物堿離子對混合物的飼料添加劑或藥物飼料添加劑"包括抑菌促生長劑(抗生素、抗菌劑等)、激素類添加劑、酶類添加劑、微生物添加劑、驅(qū)蟲藥物添加劑、中藥添加劑、鎮(zhèn)靜類添加劑等。有益效果1.本發(fā)明所制備的博落回總生物堿離子對混合物具有親水性小，親脂性大的特點(diǎn)，改變了單體分子溶解性理化性質(zhì)，又易于穿透親脂性的細(xì)胞膜，改善吸收；2.博落回總生物堿離子對混合物由于有博落回生物堿與黃芩提取物中含有葡萄糖醛酸基的黃酮化合物生成的離子對化合物，其產(chǎn)品相對于博落回總生物堿更穩(wěn)定；3.所制備的博落回總生物堿離子對混合物既可發(fā)揮各自活性，也有產(chǎn)生協(xié)同作用，從而提高了生物利用度，進(jìn)一步提升藥物療效；4.通過將博落回總生物堿離子對混合物的抗菌活性測定、生物利用度研究和毒理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，該離子對化合物可成倍地增強(qiáng)博落回總生物堿離子對混合物抗菌效果、提高了生物利用度，并為擴(kuò)大博落回總生物堿離子對混合物的抗菌譜提供了可能，減少耐藥菌株的產(chǎn)生；5.本發(fā)明產(chǎn)品還可以有效避免博落回總生物堿剌激性味道的產(chǎn)生，使產(chǎn)品的應(yīng)用范圍可有效擴(kuò)展至日化產(chǎn)品領(lǐng)域。具體實(shí)施例方式如前所述，根據(jù)前面所公開的內(nèi)容，本領(lǐng)域的專業(yè)人員可最大限度地應(yīng)用本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)指出，本發(fā)明旨在提供一種新的抗菌消炎藥物。在以下具體實(shí)施方式部分提供了足以證實(shí)所述藥物的療效之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)制藥用途、日化產(chǎn)品用途以及飼料用途的常規(guī)技術(shù)，完全可以預(yù)料出本發(fā)明的黃芩苷離子對化合物能夠用于上述領(lǐng)域且能實(shí)現(xiàn)預(yù)期功能，因此下面的實(shí)施例可以幫助本領(lǐng)域的技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例1:博落回總生物堿離子對混合物的制備方法將黃吝提取物(黃吝苷含量76%)20.0g、Na0H1.8g溶于200mL中配制成黃吝提取物的水溶液(A);將博落回總生物堿鹽酸鹽(總生物堿質(zhì)量百分比62%)18.5g溶于1000mL水中，加熱至9(TC，直至博落回總生物堿鹽酸鹽全都溶解，制成博落回總生物堿鹽酸鹽水溶液(B);在9(TC條件下將黃芩苷鈉鹽水溶液(A)緩慢加入到博落回總生物堿鹽酸鹽水溶液(B)中，不斷攪拌，反應(yīng)2小時(shí)，冷卻至室溫，過濾，用純凈水充分洗滌沉淀，沉淀60°C真空干燥，即得博落回總生物堿離子對混合物36.5g。實(shí)施例2:博落回總生物堿離子對混合物的制備方法將黃吝提取物(黃吝苷含量90%)20.0g、Na0H2.Og溶于200mL中配制成黃吝提取物的水溶液(A);將博落回總生物堿硫酸氫鹽20.Og溶于lOOOmL水中，加熱至90°C以上，直至博落回總生物堿硫酸氫鹽全都溶解，制成博落回總生物堿硫酸氫鹽水溶液(B);在90°C以上條件下將黃芩苷鈉鹽水溶液(A)緩慢加入到博落回總生物堿硫酸氫鹽水溶液(B)中，不斷攪拌，反應(yīng)2小時(shí)，冷卻至室溫，過濾，用純凈水充分洗滌沉淀，沉淀6(TC真空干燥，即得博落回總生物堿離子對混合物36.2g。實(shí)驗(yàn)例3:博落回總生物堿離子對混合物的體外抗菌活性測定將實(shí)施例2得到的博落回總生物堿離子對混合物進(jìn)行抗菌活性試驗(yàn)，其試驗(yàn)是對幾種常見病菌按照下述方法測定抑菌活性。菌種系湖南省微生物研究所分離鑒定所得，菌種分別是大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，雞葡萄球菌，雞白痢沙門氏菌，豬霍亂沙門氏菌，大腸埃希氏菌；試驗(yàn)樣品的配置濃度均為2000iig/mL;抗菌過程中設(shè)相應(yīng)溶解基質(zhì)對照；采用瓊脂平板擴(kuò)散法和試管稀釋法測定。(l)MIC測定方法取無菌試管13支，排成一排，除第1管加入1.8mLMH用肉湯稀釋1000倍的菌液，其余每管加入MH肉湯lmL，在第1管加入抗菌藥物原液0.2mL混勻，然后吸取lmL至第2管，混勻后再吸取lmL至第3管，如此連續(xù)倍比稀釋至第12管，并從第12管中吸取lmL棄去，第13管為不含藥物的生長對照。37t:培養(yǎng)24h，以無細(xì)菌生長的最低濃度為最小抑菌濃度(MIC)。(2)MBC測定方法將高于MIC濃度(含MIC濃度)的試管中的液體無菌方式涂抹與相應(yīng)的平板上，37t:培養(yǎng)24小時(shí)，不長菌的平板對應(yīng)的那管試管濃度作為MBC濃度。表l體外抗菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果n=6<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>經(jīng)體外抗菌活性測定實(shí)驗(yàn)，離子對混合物對大腸桿菌，金黃葡色葡球菌，雞葡葡球菌，雞白痢沙門氏菌，豬霍亂沙門氏菌，大腸埃希氏菌均有抑菌作用，尤其是對大腸桿菌，金黃葡萄球菌，豬霍亂沙門氏菌具有較強(qiáng)的抑菌作用，其MIC均低于10i!g/mL，且離子對混合物的MIC值均低于博落回總生物堿和黃芩提取物，說明博落回總生物堿離子對混合物具有博落回總生物堿的抗菌活性，同時(shí)也具有黃芩提取物的抗菌活性，由于協(xié)同作用，增強(qiáng)了博落回總生物堿和黃芩提取物形成的離子對混合物的抗菌效果。實(shí)驗(yàn)例4:博落回總生物堿離子對混合物的生物利用度試驗(yàn)采用HPLC-UV法研究離子對混合物(血根堿黃吝苷離子對化合物和白屈菜紅堿黃芩苷離子對化合物混合物含量之和為62%)、博落回總生物堿(血根堿和白屈菜紅堿之和為62%)、黃芩提取物(黃芩苷含量90%)以灌胃方式給藥后的血藥濃度，比較藥代動力學(xué)參數(shù)，以揭示藥物在動物體內(nèi)動態(tài)變化的規(guī)律及其生物利用度。儀器與試劑Agilent1100高效液相色譜儀，QuatPump泵，VWD紫外-可見檢測器，Agilent全自動進(jìn)樣器，Agilent色譜工作站。移液器，GILSON;FZQ-2型渦旋混合器(江蘇泰縣醫(yī)療器械廠)；TGL-16G高速離心機(jī)(上海安亨科學(xué)儀器廠)。甲醇、乙腈、冰醋酸均為色譜純，鹽酸、乙酸乙酯為分析純，水為亞沸蒸餾水。實(shí)驗(yàn)動物成年Beagle犬，體重(9kg±0.6kg)，雌雄各半。色譜條件色譜柱反相C18柱LichrospherCR(4.6mmX250mm，5ym);流動相乙腈_1%的冰醋酸水溶液(10:90);流速1.0mL'min—1;柱溫30。C;波長:284nm;進(jìn)樣量:20iiL。血漿樣品處理取血漿樣品0.5mL，加入1%冰醋酸50mL，渦旋混勻，再加入(3mo1L—1)鹽酸溶液300mL，邊加邊渦旋，加入乙酸乙酯萃取4次，每次2mL，分離乙酸乙酯層，合并，于37t:水浴下N2吹干，殘?jiān)眉状?00mL溶解，離心，取上清液備用。進(jìn)樣20yL，記錄峰面積，采用外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法以峰面積比值定量。樣品采集與處理給藥前采集空白血樣，給藥組于O，O.25，0.5，1.0，1.5，2.0，4.0，5.0，7.0，9.0，12.0，24.0h在下肢靜脈取血5mL，將采集到的血樣置含肝素離心管中，離心(2000rmin—010min，取上層血槳-2(TC儲存。藥代動力學(xué)參數(shù)的計(jì)算DAS軟件擬合計(jì)算，確定房室模型，主要藥動學(xué)參數(shù)見表。表2Beagle犬灌胃藥物后的主要藥代動力學(xué)參數(shù)結(jié)果表明，博落回總生物堿的離子對混合物(血根堿離子對化合物+白屈菜紅堿離子對化合物)與黃芩苷比較，Tmax縮短，Cmax提高，AUC反應(yīng)藥物的生物利用度，博落回總生物堿的離子對混合物的AUC值也大大增加，生物利用度大大提高。實(shí)驗(yàn)例5:博落回總生物堿離子對混合物的動物急性毒性實(shí)驗(yàn)觀察博落回總生物堿離子對混合物、黃芩提取物、博落回總生物堿進(jìn)行一次灌胃給藥對動物所產(chǎn)生的急性毒性反應(yīng)及死亡情況，以測定其給藥毒性。實(shí)驗(yàn)動物清潔級昆明小鼠70只，雌雄各半，體重(20±2)g，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動物公司提供，實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號為SCXK(湘)2009-0004，實(shí)驗(yàn)動物合格證號為003465。鼠用全價(jià)顆粒飼料由湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。實(shí)驗(yàn)儀器AY-120電子分析天平。實(shí)驗(yàn)方法根據(jù)預(yù)試結(jié)果進(jìn)行急性毒性正式試驗(yàn)，取昆明小鼠70只，體重20.16±1.52g，雌雄各半，試驗(yàn)前禁食不禁水，14小時(shí)后按性別體重分層隨機(jī)分為7組，分別為博落回總生物堿離子對混合物組、黃芩提取物組、博落回總生物堿5個(gè)劑量組，灌胃給藥，給藥量為40mL/kg，給藥后每日觀察動物行為活動、糞便、飲食及毛色和14日內(nèi)動物存活情況，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)稱量動物體重，解剖觀察動物臟器情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果給藥觀察期間，博落回生物堿組有四個(gè)濃度組動物出現(xiàn)死亡，未死亡動物進(jìn)食進(jìn)水正常，未見異常行為，未觀察到病理分泌物，大便成形，小便無變化，除有一個(gè)濃度組外，其余各組生長狀況較正常組稍差。觀察14天后，處死動物，大致解剖后未發(fā)現(xiàn)明顯器官病變。給藥觀察期間，博落回總生物堿離子對混合物組、黃芩提取物組各動物未出現(xiàn)死亡，正常生長，進(jìn)食進(jìn)水正常，毛色光亮，呼吸正常，未見異常行為，未觀察到病理分泌物，大便成形，小便無變化。觀察14天后，處死動物，大致解剖后未發(fā)現(xiàn)明顯器官病變。表3急性毒性實(shí)驗(yàn)LD5。結(jié)果參數(shù)貨芩苷-血根堿離于對化合物tl/2ah0扁tl鄰h1.284AUC0-24mg/L-h0.821AUCo-mmg/L.h0.823MRT().mh3.030MRToh3.071丁maxhl扁Cmaxh0.363血根堿白屈菜紅堿3.3150.7390.2卯5.8300.8663,1360.6980.3440.0460.7040.3470.0466.8133.0532.9356.9723.0783.4170.5002.0002.0000,1060.1070.0271.7092.7151.8011.8443,3823.5577.0000.245^減化昔紅對物，菜子合12<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>結(jié)果顯示，博落回總生物堿離子對混合物組無明顯毒性，最大給藥量為4000mg/kg;黃芩提取物組無明顯毒性，最大給藥量為4000mg/kg;博落回總生物堿組LD5。為669mg/kg，95X可信限為574-781mg/kg。綜上所述，本發(fā)明的離子對化合物是指大分子有機(jī)酸和有機(jī)堿通過分子間靜電吸引結(jié)合而生成的水不溶性化合物，具有親水性小，親脂性大的特點(diǎn)，其光譜也與形成離子對化合物之前不同。離子對化合物的形成改變了單體分子溶解性、穩(wěn)定性等理化性質(zhì)，并可發(fā)揮各自活性，可能產(chǎn)生協(xié)同作用，又易于穿透親脂性的細(xì)胞膜，改善吸收。另外，本發(fā)明的離子對混合物，由于有博落回生物堿與黃芩提取物的葡萄糖醛酸基生成的離子對化合物，其產(chǎn)品相對于博落回總生物堿更穩(wěn)定，并具有較強(qiáng)的抗菌活性，更突出的是本發(fā)明的離子對混合物相對于黃芩提取物的抗菌活性成倍提升。且本發(fā)明通過博落回生物堿與黃芩提取物的葡萄糖醛酸基生成的離子對化合物內(nèi)部的協(xié)同作用，極大增強(qiáng)了博落回總生物堿的生物利用度，使臨床的應(yīng)用效果進(jìn)一步得到提升。另外，本發(fā)明產(chǎn)品還可以有效避免博落回總生物堿剌激性味道的產(chǎn)生，使產(chǎn)品的應(yīng)用范圍可有效擴(kuò)展至日化產(chǎn)品領(lǐng)域。權(quán)利要求一種來自中草藥博落回總生物堿提取物和黃芩提取物制備的博落回總生物堿離子對混合物，包括具有如下式I所示的結(jié)構(gòu)黃芩苷離子對化合物，和具有如下式II所示的結(jié)構(gòu)白屈菜紅堿離子對化合物其中式I所示的黃芩苷離子對化合物由黃芩苷中的葡萄糖醛酸基和血根堿的依靠分子間靜電作用結(jié)合而生成的水不溶性化合物；其中式II所示的白屈菜紅堿離子對化合物由黃芩苷中的葡萄糖醛酸基和白屈菜紅堿的依靠分子間靜電作用結(jié)合而生成的水不溶性化合物。FSA00000015381300011.tif,FSA00000015381300012.tif,FSA00000015381300013.tif2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的博落回總生物堿離子對混合物，其特征在于，混合物中血根堿黃芩苷離子對化合物和白屈菜紅堿黃芩苷離子對化合物質(zhì)量含量合計(jì)為3090%。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的博落回總生物堿離子對混合物，其特征在于，混合物中血根堿黃芩苷離子對化合物和白屈菜紅堿黃芩苷離子對化合物質(zhì)量含量合計(jì)為5070%。4.權(quán)利要求1或2或3的博落回總生物堿離子對混合物的制備方法，包括1)將博落回總生物堿提取物的無機(jī)酸鹽在60IO(TC下制成O.2%2%質(zhì)量百分比濃度的水溶液，其中無機(jī)酸選自指鹽酸、硫酸、磷酸或硝酸；2)將黃芩提取物在60IO(TC下用無機(jī)堿調(diào)pH至6.57.5制成1%10%質(zhì)量百分比濃度的水溶液，其中無機(jī)堿選自氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉或碳酸氫鈉；3)將上述溶液在6010(TC下緩慢混勻，冷卻，沉淀過濾、干燥即得博落回總生物堿離子對混合物。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其中使用通過傳統(tǒng)方法從博落回提取總生物堿提取物及黃芩制備的黃芩提取物中博落回提取物中的總生物堿質(zhì)量百分比3090%，優(yōu)選5070%，最優(yōu)選6063%;黃芩提取物中黃芩苷質(zhì)量百分比7590%。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其中博落回提取總生物堿由以下三種方式的任一種制成無機(jī)酸鹽A、取博落回果實(shí)，揀去雜質(zhì)，加入用硫酸調(diào)節(jié)pH值2-3的50IO(TC的熱酸水在3_6小時(shí)內(nèi)20倍量進(jìn)行循環(huán)提取。提取后固液分離，濾液用石灰乳或氫氧化鈉或氫氧化鉀調(diào)節(jié)pH值至11，靜置24小時(shí)，沉淀過濾，干燥，得到博落回總生物堿粗品；B、或者，取花前期新鮮博落回全草藥材，揀去雜質(zhì)，榨汁過濾，濾液吸入濃縮器中進(jìn)行減壓濃縮，經(jīng)管式離心機(jī)離心，再進(jìn)行減壓濃縮到，將濃縮液放入真空干燥箱中干燥，即得博落回總生物堿；C或者，取博落回的葉，揀去雜質(zhì)，加入用硫酸調(diào)節(jié)pH值2-3的50IO(TC的熱酸水在3-6小時(shí)內(nèi)20倍量循環(huán)提取。提取后固液分離，濾液用石灰乳或氫氧化鈉或氫氧化鉀調(diào)節(jié)pH值至ll，靜置24小時(shí)，沉淀過濾，干燥，得到博落回總生物堿粗品；將由A、B或C步所得博落回總生物堿粗品溶于乙醇中，攪拌加入鹽酸或硫酸或磷酸或硝酸，成鹽后析出晶體，純化干燥，得到博落回總生物堿的無機(jī)酸鹽。上述博落回的植物來源包括博落回Macleayacordata(Willd.)R.Br.、小果博落回Macleayamicrocarpa(Maxim.)Fedde。7.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的制備方法，其中黃芩提取黃芩苷的方法包括(1)將黃芩根(最好為鮮根)，沸水提取，合并提取液，濃縮，用鹽酸調(diào)PH值到1.02.0，7585t:保溫，靜置，濾過即為黃芩提取物；(2)精制方式為將黃芩提取物用氫氧化鈉溶液5565tH周ra值到6.57.5，再用鹽酸調(diào)pH值1.02.0，濾過，洗滌，干燥即得。8.上述任一權(quán)利要求所述的博落回總生物堿離子對混合物在制備抗菌消炎藥物中的用途，其中所述的藥物是人用藥或獸用藥。9.含有上述任一權(quán)利要求所述的博落回總生物堿離子對混合物的除菌或消炎性日化產(chǎn)品，其中所述的日化產(chǎn)品是化妝品、洗滌用品、口腔用品或身體清潔用品、香味劑、除臭劑、驅(qū)蟲滅害產(chǎn)品。10.含有上述任一權(quán)利要求所述的博落回總生物堿離子對混合物的飼料或飼料添加劑，其中所述的飼料或飼料添加劑是家禽、牲畜或水產(chǎn)飼料或飼料添加劑。全文摘要本發(fā)明涉及博落回總生物堿的離子對混合物的制備方法和應(yīng)用，本發(fā)明的博落回總生物堿和黃芩提取物形成的離子對混合物具有抗菌生物活性，而且活性明顯優(yōu)于博落回總生物堿。本發(fā)明涉及含有博落回總生物堿的離子對混合物在抗菌方面的人用藥品或獸藥的應(yīng)用。文檔編號A61K8/96GK101732417SQ20101011041公開日2010年6月16日申請日期2010年2月9日優(yōu)先權(quán)日2010年2月9日發(fā)明者曾建國,杜方麓,談滿良,賀曉華申請人:曾建國