專利名稱：：銀線草中具抗腫瘤活性的化合物及其有效部位和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一類倍半萜類的三種新化合物，尤其涉及一種中藥銀線草中分離得到的三種具抗腫瘤活性的金粟蘭內(nèi)酯型倍半萜類化合物及其制備方法，本發(fā)明進一步涉及銀線草抗腫瘤有效部位提取物及其制備方法，本發(fā)明還涉及該倍半萜類化合物以及銀線草抗腫瘤有效部位提取物在制備抗腫瘤藥物中的醫(yī)藥用途，屬于中藥銀線草提取物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：20世紀80年代以后，惡性腫瘤發(fā)病數(shù)以年均3%到5%的速度遞增，現(xiàn)已位居首要死亡病因，極大的危害了人們的身心健康，也制約了國家經(jīng)濟建設(shè)與社會發(fā)展，給個人、家庭與社會均造成了沉重的負擔(dān)，因此腫瘤治療藥物的研究刻不容緩。目前，國內(nèi)外抗腫瘤的藥物主要為化學(xué)合成藥物，雖具有一定療效，但對腫瘤的遠期效果較差，且毒副作用較大，臨床應(yīng)用常受其強烈毒性的制約。與之相比，中草藥治療腫瘤體現(xiàn)多方面的優(yōu)勢，以其療效獨特、毒副作用小、開發(fā)潛能巨大引起人們廣泛關(guān)注，中草藥的研究將是抗腫瘤藥物開發(fā)的有效途徑。銀線草ChloranthusjaponicusSieb為金粟蘭科植物，又名鬼督郵，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，別名有獨搖草、鬼獨搖草、四大天王、四葉金、四葉對、四葉草、四塊瓦、燈籠花、分葉芹、蘇葉蒿、山油菜、楊梅草、胡艽眼、四大金剛、四季香、四匹瓦、四代草等。其全草供藥用。銀線草藥用歷史悠久，生物活性較強，民間應(yīng)用十分廣泛。味辛、苦，性溫，有毒，具有祛濕散寒、活血止痛、散瘀解毒等作用，主治風(fēng)寒咳嗽、風(fēng)濕痛、閉經(jīng)，跌打損傷、瘀血腫痛、咳血等。民間用于跌打損傷，風(fēng)濕痹痛，風(fēng)寒感冒，腫毒瘡瘍，毒蛇咬傷等癥的治療。分布于我國黑龍江、吉林、河北、山西、山東、陜西、甘肅等省份。其天然植物資源極為豐富。但是迄今，對該植物幾乎沒有進行有效的開發(fā)和利用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的之一是提供一類從銀線草中分離得到的具有抗腫瘤活性的金粟蘭內(nèi)酯型倍半萜類化合物；本發(fā)明目的之二是提供一種制備上述具抗腫瘤活性的金粟蘭內(nèi)酯的倍半萜類化合物的方法；本發(fā)明目的之三是將上述金粟蘭內(nèi)酯的倍半萜類化合物應(yīng)用于制備抗腫瘤藥物；本發(fā)明目的之四是提供銀線草抗腫瘤有效部位及其提取方法；本發(fā)明目的之五是將上銀線草抗腫瘤有效部位應(yīng)用于制備抗腫瘤藥物。本發(fā)明的上述目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的一類具抗腫瘤活性的金粟蘭內(nèi)酯型倍半萜類化合物，其為銀線草素A、銀線草素B和銀線草素C，它們的結(jié)構(gòu)式分別為以下式I、式II和式III所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>本發(fā)明通過對銀線草的抗腫瘤活性篩選，發(fā)現(xiàn)銀線草總提取物對腫瘤有非常強的抑制作用，通過活性跟蹤研究發(fā)現(xiàn)，總提取物中的乙酸乙酯萃取部位或AB-8大孔吸附樹脂50%乙醇洗脫部位為抗腫瘤有效部位，對小鼠S18tl肉瘤、小鼠EAC腹水腫瘤和小鼠肝癌H22實體腫瘤具有較強的抑制作用，通過對銀線草抗腫瘤的有效部位的深入系統(tǒng)的化學(xué)成分和生物活性追蹤研究，進一步確定出了具有較強抗腫瘤活性的金粟蘭內(nèi)酯型倍半萜類化學(xué)成分——銀線草素A、銀線草素B、銀線草素C。上述三種化合物具有共同結(jié)構(gòu)母核，均為金粟蘭內(nèi)酯型倍半萜類化學(xué)成分，分別命名為銀線草素A(式I)(yinxiancaoninA),化學(xué)名:[(1α，3α,8β)-6β-hydroxy-lH-lindan-4,7(ll)-dien-4-formy-8,12-olide]；銀線草素B(式II)(yinxiancaoninB)，化學(xué)名[(1α，3α，6β,8β)-15-hydroxy-6,15-epoxy-lH-lindan-4,7(11)-dien-olide]；銀線草素C(式III)(yinxiancaoninC)，化學(xué)名:[(1α，3α，8β)-15-hydroxy-lH-lindan-4，7(ll)-dien-8，12-olide]。上述三種化合物可來源于原植物為金粟蘭科植物銀線草ChloranthusjaponicusSieb的全草，也可以來源于同科屬的近緣其它植物，也包括采用化學(xué)全合成途徑獲得三種化合物中的任何一種的化合物。也可以通過化學(xué)的提取分離方法直接得到三種新化合物，而植物的近緣品種往往具有共同的化學(xué)成分，也是尋找三種新化合物新的生物來源的有效途徑。此外，隨著化學(xué)合成技術(shù)的發(fā)展，對于新發(fā)現(xiàn)的活性化合物可以通過全合成途徑直接獲得，以上以制取三種新化合物為目的，從原植物中直接提取或通過合成、半合成途徑的抗腫瘤醫(yī)藥用途的應(yīng)用均落入本發(fā)明范圍。作為參考，一種從金粟蘭科植物銀線草的全草中提取、分離上述3種化合物的方法，包括如下步驟將銀線草干燥全草用95%Et0H回流提取，回收EtOH，得到EtOH提取物；再將EtOH提取物用水混懸后，依次分別用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到五個組分，對各組分進行抗腫瘤活性追蹤實驗，結(jié)果表明乙酸乙酯萃取部位具有較強的抗腫瘤活性，為抗腫瘤的有效部位；對乙酸乙酯萃取部位繼續(xù)采用硅膠柱色譜、ODS反相柱色譜以及制備型HPLC等分離方法和技術(shù)對該部位進行分離，并經(jīng)理化鑒別及各種波譜學(xué)數(shù)據(jù)的解析，分別得到銀線草素A、銀線草素B、銀線草素C。本發(fā)明的另外一種制備上述三種化合物的方法，包括將銀線草全草用95%EtOH回流提取后，得到EtOH提取物；再將此提取物用石油醚脫脂后進行AB-8型大孔樹脂柱色譜，依次分別用H20、50%Et0H,95%EtOH洗脫，得到石油醚、H20、50%Et0H,95%EtOH四個部分，通過藥效學(xué)實驗證明，50%EtOH洗脫部分亦為抗腫瘤活性有效部位；繼續(xù)采用硅膠柱色譜、ODS反相柱色譜以及HPLC等分離技術(shù)進行分離，亦可得到銀線草素A、銀線草素B、銀線草素C。繼續(xù)活性追蹤表明，從抗腫瘤有效部位乙酸乙酯萃取部位中或大孔吸附樹脂柱色譜50%乙醇洗脫部位分離得到的銀線草素A、銀線草素B、銀線草素C三種新化合物，具有顯著抗腫瘤作用，作用強度明顯高于組分中的其它化學(xué)成分，可以用作抗腫瘤治療藥物、或前體藥物。經(jīng)體外MTT抗腫瘤實驗證明，銀線草素A、銀線草素B、銀線草素C對人結(jié)腸癌L0V0、肝癌!fepG-2、前列腺癌PC-3、腎癌0S-RC-2、卵巢癌SK0V3、肺癌A549、食管癌Eca-109、宮頸癌Hela、乳腺癌MCF-7、胃癌SGC-7901等多種腫瘤細胞株，均具有明顯的抑制作用。三種化合物對常見腫瘤細胞株的IC50為13.883.0μg/ml，說明三種化合物具有較強的抗腫瘤作用；作用效果雖然弱于5-氟尿嘧啶組，但是副作用小，用藥更加安全；各給藥組在一定濃度范圍內(nèi)，抑制效果與濃度呈量效關(guān)系；各給藥組在培養(yǎng)72小時的抑瘤效果均明顯好于48小時的抑制效果；各化合物對人結(jié)腸癌LOVO細胞株、肝癌H印G-2的抑制效果優(yōu)于對其他腫瘤細胞株的作用效果。本發(fā)明還提供了銀線草素A、銀線草素B、銀線草素C的醫(yī)藥用途，其藥物組成可以由下列任何一種組合物構(gòu)成可以是銀線草素A、B、C的任何一種；可以是銀線草素A、B、C的任何兩種；可以是銀線草素A、B、C三種共同組成；亦可直接由包含此三種成分的銀線草抗腫瘤有效部位直接制成；或者由以上的各種組合物作為原料，再與其他種類藥物配伍的藥物組合物，均可加上藥學(xué)上可以接受的各種藥用載體和輔料，按照適宜的工藝和劑型制備而成。以上述組合配伍而成的藥物制劑、中藥制劑均將落入本發(fā)明。本發(fā)明所述的任何一種抗腫瘤藥物組合物，可將其制備成臨床上可接受的注射制劑或口服制劑；其中，所述的注射制劑包括注射劑、凍干粉針劑或輸液劑；所述的口服制劑包括片劑、顆粒劑、軟膠囊劑、硬膠囊劑或口服液及各種緩控釋型制劑。通常一種新的化合物可以作為前體藥物或先導(dǎo)藥物，通過結(jié)構(gòu)修飾和構(gòu)效關(guān)系研究發(fā)現(xiàn)新的化合物；本發(fā)明所述的三種抗腫瘤活性的新化合物銀線草素A、B、C可作為前體藥物，本領(lǐng)域技術(shù)人員通過結(jié)構(gòu)修飾，在銀線草素A、銀線草素B和銀線草素C所共有的母核結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，對其進行修飾或改造，在此基礎(chǔ)上所得到具有相同的母核并具有抗腫瘤活性的一系列的新化合物，這些新化合物及其抗腫瘤的醫(yī)藥用途均應(yīng)落入本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例來進一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點和特點將會隨著描述而更為清楚。但這些實施例僅是范例性的，并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細節(jié)和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。實施例1稱取銀線草干燥全草15kg，加10倍量體積比的95%乙醇回流提取，共提取2次，每次2小時，合并提取液，回收EtOH，得到EtOH提取物稠膏1208g；再將此提取物稠膏用18倍量體積比的水混懸，得到水混懸物；依次分別用與水混懸物等體積量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，每種溶劑分別萃取3次，回收溶劑，得到石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、水五個組分；活性跟蹤篩選結(jié)果證明，乙酸乙酯組分為抗腫瘤有效組分。再將乙酸乙酯組分進行硅膠柱色譜、ODS反相柱色譜以及制備HPLC，得到單體化合物共12個，其中包括三種金粟蘭內(nèi)酯型倍半萜類新化合物銀線草素A、銀線草素B、銀線草素C；對三種化合物采用UV光譜(MeOH),1H-WR(CD3OD)譜、13C-WR譜、1H-1HCOSY譜、DEPT、HSQC和HMBC譜的綜合解析，結(jié)合物理常數(shù)測定等，確定了三種化合物的結(jié)構(gòu)，經(jīng)過查新，證明為三種新的化合物，其化合物類型上屬于金粟蘭內(nèi)酯型倍半萜類化學(xué)成分。其中，銀線草素A為白色無定形粉末，易溶于甲醇，UV光譜(MeOH)在222nm處出現(xiàn)最大吸收，分子量為260，分子式為C15H1604。經(jīng)過1H-NMR(CD3OD)譜、13C-WR譜、1H-1HCOSY譜、DEPT、HSQC和HMBC譜的綜合解析，確定為(1α，3α，8β)_6β-hydroxy-lH-lindan-4,7(ll)-dien-4-formy-8,12-olide,為一種新的化合物，將其命名為銀線草素A(yinxiancaoninA)。銀線草素B為白色無定形粉末，易溶于甲醇；UV光譜(MeOH)在221nm處出現(xiàn)最大吸收，分子量為260，分子式為C15H16O4。經(jīng)過1H-NMR(CD3OD)譜、13C-NMR譜、1H-1HCOSY譜、DEPT、HSQC和HMBC譜的綜合解析，確定為(1α，3α，6β，8β)-15_hydroxy-6，15-印0Xy-lH-lindan-4，7(ll)-dien-0lide，為一種新的化合物，故將其命名為銀線草素B(yinxiancaoninB)。銀線草素C為白色無定形粉末，易溶于甲醇，UV光譜(MeOH)在224nm處出現(xiàn)最大吸收，分子量為246，分子式為C15H18O3。經(jīng)過1H-NMR(CD3OD)譜、13C-WR譜、1H-1HCOSY譜、DEPT、HSQC和HMBC譜的綜合解析，確定為(Ια，3α，8β)-15-hydroxy-lH-lindan_4，7(ll)-dien-8，12-olide，為一種新的化合物，命名為銀線草素C(yinxiancaoninC)。實施例2稱取銀線草干燥全草25kg，加10倍量體積比的95%乙醇回流提取，共提取2次，每次2小時，合并提取液，回收EtOH，得到EtOH提取物稠膏2150g，再將此提取物稠膏以石油醚脫脂后進行AB-8型大孔樹脂柱色譜，依次分別用H20、50%Et0H,95%EtOH洗脫，得到石油醚、H20,50%Et0H,95%EtOH四個部分。通過藥效學(xué)活性跟蹤實驗證明，50%EtOH部分為有效部位。繼續(xù)采用硅膠柱色譜、ODS反相柱色譜以及HPLC等分離技術(shù)對該部位進行分離，并經(jīng)理化分析及各種波譜學(xué)數(shù)據(jù)的解析，共分離、鑒定了5個金粟蘭內(nèi)酯型倍半萜類單體化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，其中包括新化合物銀線草素A、銀線草素B、銀線草素C。實施例3緩釋片劑、滴丸劑的制備取銀線草素A、銀線草素B、銀線草素C單體化合物，按照三者的任一種組合方式為主藥組成，也可以直接以銀線草有效部位作為主藥組成，加入緩釋劑、稀釋劑、崩解劑等輔料適量，混勻，制成顆粒，干燥，壓制成片，包衣或噴薄膜衣即得；或者加入適宜的基質(zhì)，滴制成緩釋滴丸劑，用于抗腫瘤治療用途。實施例4制成注射劑、輸液劑取銀線草素A、銀線草素B、銀線草素C單體化合物，按照三者的任一種組合方式為主藥組成，加入適量增溶劑，研磨，再加入少量注射用水進行稀釋，混勻，然后加入氯化鈉適量，溶解后再加注射用水至規(guī)定量，濾過，灌封，滅菌，即得。試驗例1銀線草素A、銀線草素B、銀線草素C三種單體化合物體外抗腫瘤實驗(MTT法)一、樣品制備1.三種銀線草素A、銀線草素B、銀線草素C化合物單體的供試樣本配制分別取各待測單體化合物用DMSO溶解，用培養(yǎng)液配制成2mg/ml的儲備液置于_20°C保存。臨用前，用培養(yǎng)液稀釋至終濃度分別為:2.5μg/ml、5.0μg/ml、10.0μg/ml、25.0μg/ml、50.0μg/ml和100.0μg/ml。其中任一稀釋供試液中DMSO終濃度控制在在0.01%以下。2.腫瘤細胞株將人結(jié)腸癌L0V0、肝癌H印G-2、前列腺癌PC-3、腎癌0S-RC-2、卵巢癌SK0V3、肺癌A549、食管癌Eca-109、宮頸癌Hela、乳腺癌MCF-7、胃癌SGC-7901貼壁細胞株用0.25%胰酶消化后，懸浮于含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中，用玻璃滴管輕輕吹打成單細胞懸液，進行細胞計數(shù)，用培養(yǎng)液稀釋至濃度為20000個細胞/ml。3.陽性對照藥取5-氟尿嘧啶用DMSO溶解，用培養(yǎng)液配制成2mg/ml的儲備液置于-20°C保存。臨用前，用培養(yǎng)液稀釋至終濃度分別為0.1μg/ml、1.0μg/ml、10.Oyg/ml、100.0μg/ml。其中任一稀釋供試液中DMSO終濃度控制在在0.01%以下。二、試驗方法在96孔培養(yǎng)板的每一個孔中加入100μ1生長良好的腫瘤細胞(約2000個細胞/孔)，24小時培養(yǎng)待細胞完全貼壁后，每孔分別加入100μ1供試品溶液，每組平行設(shè)六個復(fù)孔，同時設(shè)陽性對照、陰性對照(加培養(yǎng)基、細胞，不加藥)和空白對照(只加培養(yǎng)基，不加細胞)。于37°C，5%0)2條件下分別培養(yǎng)48h、72小時。然后，每孔加入MTT液20μ1(5mg/L)，繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄去培養(yǎng)液，每孔加入100μ1DMS0，待結(jié)晶完全溶解后，用酶標儀于490nm處測吸光度值，即OD值。計算細胞增殖抑制率。每組供試品重復(fù)實驗三次，取平均值。OD樣品-OD空白細胞存活率=-χ100%OD陰性對照—0D空白細胞增殖抑制率=100%-細胞存活率；IC50腫瘤細胞抑制率為50%時藥物的質(zhì)量濃度。三、試驗結(jié)果陰性對照，細胞生長良好，無生長抑制現(xiàn)象，說明試驗方法可行，加藥組所測得的IC50值見表1表1銀線草素A、B、C體外抑制腫瘤細胞株作用<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>四、試驗結(jié)論三種化合物對常見腫瘤細胞株的IC50為13.883.0μg/ml，說明三種化合物具有較強的抗腫瘤作用；作用效果雖然弱于5-氟尿嘧啶組，但是副作用小，用藥更加安全；各給藥組在一定濃度范圍內(nèi)，抑制效果與濃度呈量效關(guān)系；各給藥組在培養(yǎng)72小時的抑瘤效果均明顯好于48小時的抑制效果；各化合物對人結(jié)腸癌LOVO細胞株、肝癌H印G-2的抑制效果優(yōu)于對其他腫瘤細胞株的作用效果。試驗例2銀線草不同提取部位體內(nèi)抗腫瘤實驗一、試驗材料1.試驗樣品制備取銀線草用10倍體積的95%EtOH回流2次，每次1小時，濾過，合并濾液，減壓回收溶劑，得到總提取物；將總提取物懸浮于水中后以石油醚萃取，得到石油醚萃取物；繼之，采用大孔吸附樹脂柱色譜，依次分別用壓0、50%、95%EtOH進行洗脫，分別得到相應(yīng)的H20、50%、95%EtOH洗脫物。環(huán)磷酰胺(粉針劑)，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，規(guī)格200mg/瓶，批號060321。2.實驗動物昆明種小白鼠，雌雄兼?zhèn)?，體重22士2g，合格證號為P00102006號，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供小鼠肉瘤S18tl瘤株、小鼠肝癌H22瘤株、小鼠腹水EAC瘤株由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)腫瘤研究所引進，以腹水型傳代。試驗動物模型建立無菌條件下抽取接種7天、生長良好的S18(1、H22及EAC荷瘤小鼠腹水，用滅菌生理鹽水(<13)稀釋，按0.1ml/只經(jīng)右腋皮下或腹腔注射腹水，即約5XIO6個瘤細胞，活細胞率>95%，制成實體瘤型或腹水型荷瘤小鼠模型。二、試驗方法本試驗設(shè)空白對照組、環(huán)磷酰胺組、總提取物組、石油醚萃取物組及H20、50%、95%EtOH洗脫物組，各實驗組按折合相同生藥量給藥(因各組分的產(chǎn)率存在差別，故將各組分的給藥劑量折合成相同生藥量，以標示相同生藥量情況下，各組分抗腫瘤作用的強弱)，灌胃，空白對照組用0.9%生理鹽水灌胃(0.2mL/10g)，陽性對照組用環(huán)磷酰胺腹腔注射(0.lmL/10g)，實體瘤型小鼠于接種24小時后隨機分組，連續(xù)給藥8天后稱重、處死，分別取瘤，稱瘤重，計算抑瘤率；腹水瘤型小鼠于接種24小時后隨機分組，連續(xù)給藥8天，每天觀察并記錄小鼠死亡情況。三、試驗結(jié)果1.銀線草不同分離部位對小鼠S18tl肉瘤的影響結(jié)果見表2:表2銀線草不同分離部位對小鼠S18tl肉瘤的影響》士S)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注與空白對照組相比#P<0.01從表2可見，醚萃取物、水洗脫物對小鼠S18tl肉瘤抑制作用較弱，其抑制率與空白組相比無顯著性差異；50%醇洗脫物對小鼠S18tl肉瘤的抑制率為55.5%，與空白組有極顯著性差異(P<0.01)，抑瘤活性與總提取物比較，略低于總提取物組，但無顯著性差異(P>0.05)，故50%醇洗脫物是抗小鼠S18tl肉瘤活性部位。2.銀線草不同分離部位對小鼠肝癌H22實體瘤的影響試驗結(jié)果見下表3:表3不同分離部位對小鼠肝癌H22實體瘤的影響(叉士S)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注與空白對照組相比#P<0.01從上表可知，醚萃取物、水洗脫物對小鼠肝癌H22實體瘤抑制作用較弱，與空白對照組相比無顯著性差異。50%醇洗脫物對小鼠肝癌H22實體瘤的抑制率為53.0%，與空白組相比有極顯著性差異(P<0.01)，抑瘤活性雖然略低于總提取物組，但無顯著性差異(P>0.05)，為抗小鼠肝癌H22實體瘤活性部位。3.銀線草不同分離部位對EAC腹水瘤小鼠生存時間的影響試驗結(jié)果見表4:表4不同分離部位對EAC腹水瘤小鼠生存時間的影響》士S)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注與空白對照組相比#Ρ<0.01從表4可知，醚萃取物、水洗脫物、95%醇洗脫物對EAC腹水瘤小鼠生存時間影響較小，與空白對照組相比無顯著性差異；50%醇洗脫物口服給藥與空白對照組相比，對EAC腹水瘤小鼠的生命存活時間有明顯的延長作用，延長率率為37.3%，與空白對照相比有顯著差異(P<0.01)，與環(huán)磷酰胺組相比無顯著差異(P>0.05)，可視為延長EAC腹水瘤小鼠生存時間活性部位。四、試驗結(jié)論50%洗脫組分具有較強的抗腫瘤活性，對S180肉瘤小鼠、肝癌Η22實體瘤小鼠的腫瘤均有明顯抑制作用，可以明顯延長EAC腹水瘤小鼠的生存時間，為抗腫瘤的有效部位。進一步在抗腫瘤活性追蹤下，研究有效部位的化學(xué)成分，尋找抗腫瘤活性強的單體化合物是很有意義的。權(quán)利要求具有抗腫瘤活性的三個新化合物，其特征在于所述化合物為金粟蘭內(nèi)酯型倍半萜類化合物。2.按照權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于其為銀線草素A、銀線草素B和銀線草素C，它們的結(jié)構(gòu)式分別為以下式I、式II和式III所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>3.一種制備權(quán)利要求2所述化合物的方法，包括將銀線草干燥全草用95%EtOH回流提取，回收EtOH，得到EtOH提取物；再將EtOH提取物用水混懸后，依次分別用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別得到五個組分；對乙酸乙酯組分繼續(xù)采用硅膠柱色譜、ODS反相柱色譜或制備型HPLC方法對乙酸乙酯組分進行分離，經(jīng)理化鑒別及各種波譜學(xué)數(shù)據(jù)的解析，分別得到式I、式II和式III所示化合物。4.一種制備權(quán)利要求2所述化合物的方法，包括將銀線草全草用95%EtOH回流提取后，得到EtOH提取物；再將EtOH提取物用石油醚脫脂后進行AB-8型大孔樹脂柱色譜，依次分別用H20、50%Et0H,95%EtOH洗脫，收集50%EtOH洗脫部分；將50%EtOH洗脫部分采用硅膠柱色譜、ODS反相柱色譜或HPLC方法進行分離，分別得到式I、式II和式III所示化合物。5.銀線草抗腫瘤有效部位提取物，其制備方法包括將銀線草干燥全草用95%EtOH回流提取，回收EtOH，得到EtOH提取物；再將EtOH提取物用水混懸后，依次分別用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，收集乙酸乙酯萃取部位，即得。6.銀線草抗腫瘤有效部位提取物，其制備方法包括將銀線草全草用95%EtOH回流提取后，得到EtOH提取物；再將EtOH提取物用石油醚脫脂后進行AB-8型大孔樹脂柱色譜，依次分別用H20、50%EtOH.95%EtOH洗脫，收集50%EtOH洗脫部分，即得。7.權(quán)利要求1或2所述的化合物在制備抗腫瘤藥物中的用途。8.權(quán)利要求5或6所述的有效部位提取物在制備抗腫瘤藥物中的用途。9.一種抗腫瘤藥物組合物，其特征在于包括有效量的權(quán)利要求1或2所述的1-3種化合物和/或權(quán)利要求5或6所述的有效部位提取物，加入藥學(xué)上可接受的載體或輔料組成。10.按照權(quán)利要求9所述的抗腫瘤藥物組合物，其特征在于將其制備成臨床上可接受的注射制劑或口服制劑；其中，所述的注射制劑包括注射劑、凍干粉針劑或輸液劑；所述的口服制劑包括片劑、顆粒劑、軟膠囊劑、硬膠囊劑、口服液或緩控釋型制劑。全文摘要本發(fā)明公開了銀線草中的具抗腫瘤活性的化合物及其有效部位和用途。本發(fā)明從中藥銀線草中分離得到的具較強抗腫瘤活性的三種新化合物，即銀線草素A、銀線草素B、銀線草素C。其分離方法包括將銀線草95％乙醇回流提取物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，收集乙酸乙酯萃取部位；或?qū)?5％乙醇回流提取物用石油醚脫脂后，進行大孔樹脂柱色譜，依次用H2O、50％乙醇、95％乙醇洗脫；對乙酸乙酯萃取部位和50％乙醇組分進行硅膠柱層析和ODS柱制備液相分離，即得。體外抗腫瘤細胞活性研究證明，本發(fā)明三種化合物體外可以顯著抑制常見腫瘤細胞，具有顯著的抗腫瘤活性，可用于開發(fā)成來自天然中藥的、低毒的抗腫瘤新藥。文檔編號A61P35/00GK101824014SQ201010108628公開日2010年9月8日申請日期2010年2月11日優(yōu)先權(quán)日2010年2月11日發(fā)明者匡海學(xué),呂邵娃,夏永剛,孫光日,楊炳友,王秋紅,谷文倩申請人:匡海學(xué)