專利名稱：特異性地阻滯腫瘤抗原的生物活性的抗體的制作方法
特異性地阻滯腫瘤抗原的生物活性的抗體
技術領域：
本發(fā)明涉及特異性地結(jié)合KAAGl的單克隆抗體及其抗原結(jié)合片段和它們用于治療某些疾病的用途，所述用途包括診斷、預防和治療與卵巢癌有關的惡性腫瘤。本發(fā)明也涉及這些抗體用于診斷、預防和治療不同的其它癌癥類型的用途。
背景技術：
在婦科惡性腫瘤中，卵巢癌占美國婦女中最高的腫瘤相關死亡率(Jemal等人， 2005)。它是美國婦女癌癥相關死亡的第四大主要原因(Menon等人，2005)。美國癌癥學會 (American Cancer Society)估計在2005年共有22，220個新病例，并將16，210例死亡歸因于該疾病(Bonome等人，200幻。在過去的30年中，統(tǒng)計數(shù)字保持大致相同——大多數(shù)出現(xiàn)卵巢癌的婦女將死于該疾病(Chambers和Vanderhyden，2006)。該疾病具有1 70終生危險，且死亡率>60% (Chambers和Vanderhyden，2006)。高死亡率是由于難以早期檢測卵巢癌，此時惡性腫瘤已經(jīng)擴散至卵巢以外。實際上，> 80%的患者被診斷為晚期疾病 (III期或IV期)(Bonome等人，2005)。這些患者具有不良預后，這反映為< 45%的5-年存活率，盡管80%至90%在最初對化療有反應(Berek等人，2000)。與早些年的20% 5-年存活率相比，該增加的成功至少部分地是由于最佳消脹(debulk)腫瘤組織的能力(當腫瘤組織被限制在卵巢中的時候)，這是卵巢癌的重要預后因子(Bristow R.E. ,2000 ；Brown 等人，2004)。在診斷出早期疾病(I期)的患者中，5-年存活率范圍> 90(ChamberS和 Vanderhyden,2006)。卵巢癌包含不同的腫瘤組，它們源自卵巢的表面上皮或表面包裹體。它們分成血清的、粘蛋白的、子宮內(nèi)膜樣的、透明細胞和布倫納(過渡)類型，對應女性生殖道器官的不同上皮類型(Siih和Kurman，2005)。在它們中，血清腫瘤占診斷出的卵巢癌病例的 60%。 每個組織學子類進一步分成3組良性的、中間的(交界腫瘤或低惡性潛力(LMP))和惡性的，這反映了它們的臨床行為(Seidman等人，2002)。LMP占診斷出的血清腫瘤的10%至 15%，且是一個難題，因為它們表現(xiàn)出非典型核結(jié)構和轉(zhuǎn)移行為，然而它們的侵入性比高階血清腫瘤明顯更低。具有LMP腫瘤的患者的5-年存活率是95%，不同于晚期高階疾病在相同時段中的<45%存活率(Berek等人，2000)?，F(xiàn)在，卵巢癌的診斷部分地通過患者醫(yī)學史的常規(guī)分析和通過進行體檢、超聲檢查和X-射線檢查和血液學篩查來完成。已經(jīng)為血清生物標志物的早期血液檢測報道了 2 個替代策略。一個方案是，通過質(zhì)譜法分析血清樣品，以找到不明身份的蛋白或蛋白片段， 它們檢測癌癥的有無(Mor等人，2005 ；Kozak等人，2003)。但是，該策略是昂貴的，且不能廣泛地得到?；蛘撸褂每贵w微陣列、ELISA或其它類似方案，檢測血清中是否存在已知的蛋白/肽。稱作CA-125(癌抗原-125)的蛋白生物標志物的血清檢驗長期以來被廣泛地視作卵巢癌的標記物。但是，盡管卵巢癌細胞可能生成過量這樣的蛋白分子，一些其它的癌癥具有高水平的CA-125，所述癌癥包括輸卵管癌或子宮內(nèi)膜癌(子宮的襯里的癌)、60%的胰腺癌患者和20% -25%的其它惡性腫瘤患者。CA-125檢驗僅返回約50%的I期卵巢癌患者的真實陽性結(jié)果，且具有80%的機會返回II、III和IV期卵巢癌患者的真實陽性結(jié)果。 另外20%的卵巢癌患者沒有表現(xiàn)出CA-125濃度的任何增加。另外，升高的CA-125檢驗可能指示與癌癥無關的其它良性活性，諸如月經(jīng)、妊娠或子宮內(nèi)膜異位癥。結(jié)果，該檢驗對于仍然可治療的早期疾病的檢測而言具有非常有限的臨床用途，表現(xiàn)出< 10%的陽性預測值 (PPV)。即使給CA-125附加超聲篩查，PPV僅提高至約20% (Kozak等人，2003)。因而，該檢驗不是有效的篩查檢驗。盡管具有提高的該疾病的病原學知識、侵入性細胞減數(shù)手術和現(xiàn)代組合化療，死亡率僅有微小變化。差結(jié)果已經(jīng)歸因于(1)缺少用于早期疾病檢查的適當篩選檢驗，以及在該階段僅微弱的癥狀顯現(xiàn)一經(jīng)常只有在進展至晚期后才能做出診斷，在此時癌癥的腹膜擴散會限制有效的治療，和( 經(jīng)常出現(xiàn)對標準化療策略的耐受性，這限制了患者的 5-年存活率的提高。卵巢癌的初期化療方案包括卡波鉬(伯爾定)和紫杉醇(泰素)的組合。數(shù)年的臨床試驗已經(jīng)證實該組合在有效手術后是最有效的(在約80%的具有新診斷出的卵巢癌的婦女中減小腫瘤體積，且40%至50%具有完全消退)，但是繼續(xù)研究來尋找提高它的方法。最近的化療劑腹部輸注來靶向難以達到的細胞與靜脈內(nèi)遞送的組合已經(jīng)增加了有效性。但是，嚴重的副作用經(jīng)常導致不完全的療程。一些其它的化療劑包括多柔比星、 順鉬、環(huán)磷酰胺、博來霉素、依托泊苷、長春堿、鹽酸拓撲替康、異環(huán)磷酰胺、5-氟尿嘧啶和美法侖。更近地，臨床試驗已經(jīng)證實，與全身性靜脈內(nèi)化療相比，順鉬的腹膜內(nèi)施用會提供生存優(yōu)勢(Carmistra和McGuire，2007)。接受化療的具有早期疾病的婦女的優(yōu)良存活率會為開發(fā)提高卵巢癌檢測的策略的研究工作提供堅固的理論。此外，新的卵巢癌有關的生物標志物的發(fā)現(xiàn)，會導致用于卵巢癌的將來治療的、具有最小副作用的更有效的治療策略的發(fā)展。盡管在卵巢癌的理解和治療方面存在這些最近的進步，化療的應用總是伴有嚴重的不良反應，這限制了它們的應用。結(jié)果，對更特異性的策略(諸如組合抗原組織特異性和單克隆抗體的選擇性)的需要，會允許顯著減少脫靶相關的(off-target-associated)副作用。單克隆抗體用于治療卵巢癌的應用正在開始出現(xiàn)，具有日益增多的數(shù)目的進行中的臨床試驗(Oei等人，2008 ；Nicodemus和berek，2005)。這些試驗中的大多數(shù)已經(jīng)檢查了與放射性同位素(諸如釔-90)綴合的單克隆抗體的應用，或靶向在其它癌癥類型中已經(jīng)鑒別出的腫瘤抗原的抗體的應用。一個這樣的實例是貝伐單抗的應用，它靶向血管內(nèi)皮生長因子(Burger，2007)。存在非常少的卵巢癌特異性的抗原，它們目前處于作為單克隆抗體的治療靶標的研究中。一些實例包括稱作B7-H4的蛋白(Simon等人，2006)和更近的葉酸受體-a (Ebel等人，2007)的應用，后者最近已經(jīng)進入II期臨床試驗。最初從源自組織相容性白細胞抗原-Β7腎癌細胞系的cDNA文庫克隆出腎相關抗原1 (KAAGl)，作為呈遞給細胞毒性T淋巴細胞的抗原肽(Van den Eynde等人，1999 ； Genebank登記號Q9UBP8)。發(fā)現(xiàn)含有KAAGl的基因座編碼2個基因，它們在兩個方向轉(zhuǎn)錄到相反鏈上。發(fā)現(xiàn)有義鏈編碼這樣的轉(zhuǎn)錄物，其編碼稱作DCDC2的蛋白。這些作者的表達研究發(fā)現(xiàn)，KAAGl反義轉(zhuǎn)錄物是腫瘤特異性的，且在正常組織中表現(xiàn)出非常少的表達，而DCDC2 有義轉(zhuǎn)錄物普遍表達(Van den Eynde等人，1999)。KAAGl轉(zhuǎn)錄物在癌癥、尤其是卵巢癌、腎癌、肺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌和黑素瘤中的表達，公開在公布的專利申請?zhí)朠CT/CA2007/001134 中。Van den Eynde等人也觀察了在腎癌、結(jié)直腸癌、黑素瘤、肉瘤、白血病、腦腫瘤、甲狀腺腫瘤、乳腺癌、前列腺癌、食管癌、膀胱腫瘤、肺癌和頭和頸腫瘤中的RNA表達。最近，通過連鎖不平衡研究得到的有力遺傳證據(jù)發(fā)現(xiàn)，VMP/DCDC2/KAAG1基因座與誦讀困難有關 (Schumacher等人，2006 ；Cope等人，2005)。這些報告之一指向DCDC2標志物作為誦讀困難患者的原因，因為該蛋白在皮質(zhì)神經(jīng)元遷移中的功能與經(jīng)常表現(xiàn)出異常神經(jīng)元遷移和成熟的這些患者的癥狀相一致(Schumacher等人，2006)。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及KAAGl在腫瘤細胞中的表達。本發(fā)明也涉及特異性的抗-KAAGl抗體和抗原結(jié)合片段以及可用于治療、檢測和診斷癌癥的試劑盒。所述抗體和抗原結(jié)合片段可以更具體地用于治療、檢測和診斷其中腫瘤細胞表達KAAGl的癌癥，諸如卵巢癌、皮膚癌、 腎癌、結(jié)直腸癌、肉瘤、白血病、腦癌、甲狀腺癌、乳腺癌、前列腺癌、食道癌、膀胱癌、肺癌以及頭和頸癌。本發(fā)明在其一個方面提供了分離的或基本上純化的抗體或抗原結(jié)合片段，它們能特異性地結(jié)合腎相關抗原1 (在SEQ ID NO. 2中定義的KAAG1)或KAAGl變體。更具體地，且根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，所述抗體或抗原結(jié)合片段可以結(jié)合位于KAAGl的氨基酸30和氨基酸84之間的結(jié)構域。根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方案，所述抗體或抗原結(jié)合片段能結(jié)合包含在KAAGl的氨基酸1-35內(nèi)的表位。根據(jù)本發(fā)明的再一個實施方案，所述抗體或抗原結(jié)合片段能結(jié)合包含在KAAGl的氨基酸36-60內(nèi)的表位。根據(jù)本發(fā)明的再一個實施方案，所述抗體或抗原結(jié)合片段能結(jié)合包含在KAAGl的氨基酸61-84內(nèi)的表位。本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段尤其能特異性地結(jié)合分泌型KAAG1，S卩，其中已經(jīng)切掉信號肽的KAAGl形式。本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段尤其能結(jié)合KAAGl的胞外區(qū)域。這樣，本發(fā)明包括診斷和/或治療抗體或抗原結(jié)合片段，其具有對分泌型KAAGl或 KAAGl的胞外區(qū)域的特異性。本發(fā)明也包括具有與本發(fā)明抗體相同的表位特異性的抗體或抗原結(jié)合片段。通過測定它是否結(jié)合本文所述抗體結(jié)合的表位，和/或通過與已知結(jié)合所述表位的抗體或抗原結(jié)合片段進行競爭試驗，可以鑒別候選抗體。因此，本發(fā)明的另一個方面提供了分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其能與本文所述的抗體或抗原結(jié)合片段競爭。本發(fā)明的分離的抗體或抗原結(jié)合片段包括能誘導表達KAAGl的腫瘤細胞或表達 KAAGl變體的腫瘤細胞的殺死(消除、破壞、裂解)(例如，以ADCC-依賴性的方式)的那些。本發(fā)明的分離的抗體或抗原結(jié)合片段也包括特征在于它們的減少表達KAAGl的腫瘤細胞的擴散的能力的那些，以及特征在于它們的減少或損害表達KAAGl的腫瘤的形成的能力的那些。當KAAGl在表達KAAGl的腫瘤細胞的表面處表達時，所述抗體或抗原結(jié)合片段可能是特別有效的，且可以具體地用于靶向特征在于不依賴于錨著生長的表達KAAGl的腫瘤細胞。
本發(fā)明涉及具有本文所述特征的單克隆抗體、多克隆抗體、嵌合抗體、人源化抗體和人抗體(分離的)以及抗原結(jié)合片段。還一起包括這樣的抗體或抗原結(jié)合片段，其包括單克隆抗體、嵌合抗體、人源化抗體或人抗體之間的輕鏈和/或重鏈的置換。本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段因而可以包含人恒定區(qū)的氨基酸和/或人抗體的框架氨基酸。術語“抗體”是指完整抗體、單克隆抗體或多克隆抗體。術語“抗體”也包括多特異性的抗體，諸如雙特異性的抗體。人抗體通常由2個輕鏈和2個重鏈組成，每個鏈包括可變區(qū)和恒定區(qū)。輕鏈可變區(qū)包含3個側(cè)接框架區(qū)的⑶R，在本文中鑒定為⑶RL1、⑶RL2和 ⑶RL3。重鏈可變區(qū)含3個側(cè)接框架區(qū)的⑶R，在本文中鑒定為⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3。本文使用的術語“抗原結(jié)合片段”是指抗體的一個或多個片段，所述片段保留結(jié)合抗原(例如，KAAGl、分泌型KAAGl或其變體)的能力。已經(jīng)證實，抗體的抗原結(jié)合功能可以由完整抗體的片段來執(zhí)行。在術語抗體的“抗原結(jié)合片段”中包括的結(jié)合片段的實例包括 (i)Fab片段，即由VL、VH、CL和Chi結(jié)構域組成的單價片段；(ii)F(ab' )2片段，即包含2個通過鉸鏈區(qū)中的二硫鍵連接起來的Fab片段的二價片段；(iii)由Vh和Cm結(jié)構域組成的 Fd片段；(iv)Fv片段，其由抗體的一條臂的\和Vh結(jié)構域組成；(v) dAb片段(Ward等人， (1989)Nature 341 :544-546)，其由Vh結(jié)構域組成；和(vi)分離的互補性決定區(qū)(CDR)，例如，Vh⑶R3。此外，盡管Fv片段的2個結(jié)構域八和Vh由分開的基因編碼，使用重組方法， 可以通過合成連接物連接它們，所述合成連接物使它們成為單個多肽鏈，在這個單個多肽鏈中\(zhòng)和Vh區(qū)配對，以形成單價分子(稱作單鏈Fv(ScFv)；參見例如，Bird等人(1988) Science 242 :423-426 ；和 Huston 等人(1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85 :5879-5883)。 這樣的單鏈抗體也意圖包括在術語抗體的“抗原結(jié)合片段”內(nèi)。此外，抗原結(jié)合片段包括結(jié)合-結(jié)構域免疫球蛋白融合蛋白，其包含(i)與免疫球蛋白鉸鏈區(qū)多肽融合的結(jié)合結(jié)構域多肽(諸如重鏈可變區(qū)、輕鏈可變區(qū)或通過連接肽與輕鏈可變區(qū)融合的重鏈可變區(qū))，(ii) 與鉸鏈區(qū)融合的免疫球蛋白重鏈CH2恒定區(qū)，和(iii)與CH2恒定區(qū)融合的免疫球蛋白重鏈CH3恒定區(qū)。通過用絲氨酸殘基替換一個或多個半胱氨酸殘基，可以修飾鉸鏈區(qū)，以防止二聚化。在US 2003/0118592和US 2003/0133939中進一步公開了這樣的結(jié)合-結(jié)構域免疫球蛋白融合蛋白。使用本領域技術人員已知的常規(guī)技術，得到這些抗體片段，并以與完整抗體相同的方式篩選所述片段的效用。典型的抗原結(jié)合位點包含通過輕鏈免疫球蛋白和重鏈免疫球蛋白的配對形成的可變區(qū)?？贵w可變區(qū)的結(jié)構是非常一致的，且表現(xiàn)出非常類似的結(jié)構。這些可變區(qū)通常包含相對同源的框架區(qū)(FR)，它們中間夾雜3個稱作互補性決定區(qū)(CDR)的高變區(qū)。抗原結(jié)合片段的總結(jié)合活性經(jīng)常由CDR的序列決定。FR經(jīng)常在CDR的適當三維定位和排列中起作用，以實現(xiàn)最佳的抗原結(jié)合。本發(fā)明的抗體和/或抗原結(jié)合片段可能源自，例如，小鼠、大鼠或任意其它哺乳動物，或其它來源，諸如通過重組DNA技術。從在下文中提供的非限制性詳述，可以明白本發(fā)明的其它范圍、適用性和優(yōu)點。但是，應當理解，盡管指示本發(fā)明的示例性實施方案，該詳述僅作為實施例給出，并參考附圖。


圖IA顯示了使用半定量RT-PCR反應進行的表達概況分析，用于測量源自超過20 個卵巢腫瘤、良性(低惡性潛力)腫瘤、卵巢癌細胞系和30個正常組織的RNA樣品中的 KAAGlmRNA表達水平。對照圖顯示GAPDH表達，GAPDH即用于對比每個RT-PCR反應中的原
料量的管家基因。圖IB顯示的半定量RT-PCR實驗證實了 KAAGlmRNA在卵巢癌細胞系中表達，尤其是源自腹水的那些。圖IC顯示的簡圖解釋了卵巢癌細胞系形成稱作球狀體的3D結(jié)構的能力。左圖顯示了在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細胞，而5%血清刺激球狀體結(jié)構的形成。圖ID顯示的半定量RT-PCR實驗證實了在卵巢癌細胞系的球狀體形成過程中高度誘導 KAAGImRNA。圖2A顯示的簡圖解釋了創(chuàng)傷或抓傷試驗，即基于細胞的試驗，它是細胞系經(jīng)預定時間段遷移進裸露區(qū)中的能力的測量。攜帶KAAGl shRNA的T0V-21G細胞表現(xiàn)出填充裸露區(qū)的能力下降。圖2B顯示了產(chǎn)克隆試驗(也稱作集落存活試驗)的圖解。它測量稀釋的細胞經(jīng)幾天時段的存活。攜帶KAAGl shRNA的T0V-21G細胞表現(xiàn)出存活減少。圖3A顯示了用考馬斯藍染色的聚丙烯酰胺凝膠，且含有在瞬時轉(zhuǎn)染的細胞中產(chǎn)生的、純化的Fc-KAAGl融合蛋白的樣品(10 μ g)。圖;3B顯示了含有單個單克隆抗體的96-孔平板之一的ELISA結(jié)果，所述單克隆抗體選自含有抗-KAAGl Fab的Omniclonal文庫#3。結(jié)果表明，48個(用灰色突出顯示) Fab非常有效地與KAAGl相互作用。用粗體數(shù)字指示的孔含有示例性的單克隆3D3、3G10和 3C4。圖4A顯示了用考馬斯藍染色的聚丙烯酰胺凝膠，且含有下述樣品(IOyg)純化的Fc-KAAGl融合蛋白(泳道1)，跨氨基酸1-60的KAAGl的截短突變體(泳道幻，和跨氨基酸1-35的KAAGl的另一個截短突變體(泳道3)，它們在瞬時轉(zhuǎn)染的細胞中產(chǎn)生。 所有蛋白都是Fc融合蛋白。圖4B的線路圖解釋了 KAAGl的截短突變體，產(chǎn)生它用于表位作圖研究。圖4C顯示的圖描述了來自ELISA分析的結(jié)果，其對應被Omniclonal文庫#3中包含的抗-KAAGl抗體結(jié)合的表位。結(jié)果表明，大多數(shù)單克隆與KAAGl的中央?yún)^(qū)相互作用，且某些抗體結(jié)合KAAGl的氨基端或羧基端。圖5顯示的線路圖解釋了將小鼠Fab轉(zhuǎn)化成IgGl小鼠-人嵌合的mAb所涉及的步驟。圖6顯示的圖對比了小鼠抗-KAAGl Fab和對應的IgGl嵌合的單克隆抗體對示例性的抗體3D3、3G10和3C4的結(jié)合。結(jié)果表明，當轉(zhuǎn)移至完整人IgGl支架時，維持了 Fab可變區(qū)的相對結(jié)合。圖7顯示了在有嵌合的IgGl抗-KAAGl單克隆抗體存在下使用T0V-21G和0V-90 卵巢癌細胞系的球狀體形成實驗的描述。松散填充的結(jié)構更少侵入性的癌細胞系的指征。 結(jié)果顯示了用示例性的抗-KAAGl抗體3D3、3G10或3C4處理的球狀體。圖8A顯示了含有從卵巢瘤患者得到的大約70個活組織檢查樣品的組織微陣列的掃描。用3D3抗-KAAGl抗體印跡樣品，并證實，絕大多數(shù)卵巢腫瘤表達非常高水平的KAAGl抗原。圖8B是來自組織微陣列實驗的更高放大率圖片。箭頭顯示KAAGl在血清卵巢腫瘤細胞的上皮層的頂端表面處的膜定位。圖8C解釋了其它免疫組織化學研究，它們證實，KAAGl在所有卵巢癌類型中高度表達。顯示的組織型是血清的、粘蛋白的和子宮內(nèi)膜樣的。圖9A、9B和9C總結(jié)了使用ClustalW2程序得到的選擇的CDRL1、CDRL2或CDRL3 序列的比對結(jié)果；其中“*”表示該列中的殘基在所有比對的序列中是相同的，“”表示已經(jīng)觀察到保守置換，且“.”表示觀察到半-保守置換。使用ClustalW程序(Larkin Μ. A.， 等人，(2007) ClustalW 和 ClustalX 版本 2. Bioinformatics 2007 23(21) :2947-2948), Λ 生共有的⑶R。圖10Α、10Β和IOC總結(jié)了使用ClustalW2程序得到的選擇的CDRH1、CDRH2或CDRH3 序列的比對結(jié)果；其中“*”表示該列中的殘基在所有比對的序列中是相同的，“”表示已經(jīng)觀察到保守置換，且“.”表示觀察到半-保守置換。使用ClustalW程序(Larkin Μ. A.， 等人，(2007) ClustalW 和 ClustalX 版本 2. Bioinformatics 2007 23(21) :2947-2948), Λ 生共有的⑶R。圖11表示每個產(chǎn)生的輕鏈可變區(qū)和在SEQ ID NO :16、20、Μ或105中鑒別出的代表性的輕鏈可變區(qū)之間的序列對比。使用本文指出的Blast2測序程序，已經(jīng)測定了序列同一性百分比和序列相似性百分比。圖12表示每個產(chǎn)生的重鏈可變區(qū)和在SEQ ID NO :18、22、沈或132中鑒別出的代表性的重鏈可變區(qū)之間的序列對比。使用本文指出的Blast2測序程序，已經(jīng)測定了序列同一性百分比和序列相似性百分比。圖13，靶向KAAGl的IgG1抗體在體外可以有效地介導ADCC活性。用3D3溫育 PBMNC(AllCells，LLC，Emoryville，CA)30min，并以 1 25 的比例，與 0VCAR-3 或 WIL2-S 細胞相混合。在37°C溫育細胞4h，并通過測量培養(yǎng)基中的LDH水平測定細胞裂解。如下計算細胞的細胞毒性細胞毒性=(實驗值-自發(fā)的效應值-自發(fā)的靶物值)xlOO/(最大靶物值-自發(fā)的靶物值)。圖14，抗-KAAGl mAb阻止T0V-112D卵巢腫瘤的體內(nèi)擴散。以200 μ L的體積，將 IxlO6個細胞植入SCID小鼠的腹腔。2天后，以25mg/kg qwk的劑量，用PBS或在PBS中稀釋的抗體處理。通過腹部觸診檢測到腫瘤后，盡可能快地處死小鼠。用肉眼對腫瘤數(shù)目評分(B)，且將在圖A中的數(shù)據(jù)表示為腫瘤平均數(shù)/小鼠士 SE。圖15顯示了使用抗-KAAGl抗體在從鱗狀細胞癌和黑素瘤分離出的幾個切片的人皮膚腫瘤組織微陣列(Pantomics Inc. , Richmond, CA)上進行的免疫組織化學。圖16解釋了在有或沒有嵌合的3D3抗體存在下的黑素瘤細胞系(A375和 SK-MEL5)和腎細胞癌細胞系(A498和786-0)的球狀體形成。圖17A顯示的圖解釋了遞增濃度的3C4、3D3和3G10抗體向在不滲透細胞的條件下固定的細胞系(0V-90、T0V-21G和SK0V-3)的結(jié)合。圖17B的圖解釋了使用3D3抗體在I0V-3細胞系上進行的流式細胞術的結(jié)果。圖18A的圖解釋了 3D3抗體模型的結(jié)構。圖18B的圖解釋了 3C4抗體模型的結(jié)構。
圖19A的圖解釋了與嵌合的3D3抗體向重組KAAGl的結(jié)合相比，遞增濃度的人源化的3D3抗體的結(jié)合。圖19B的表總結(jié)了人源化的3D3抗體、嵌合的3D3抗體以及雜交抗體(包括嵌合或人源化抗體的輕鏈和重鏈的置換)的動力學參數(shù)。圖19C解釋了在人源化的3D3抗體、嵌合的3D3抗體存在下，或在緩沖液或?qū)φ?IgG存在下，SK0V-3卵巢癌細胞的球狀體形成。圖20A表示單克隆3D3輕鏈可變區(qū)(SEQ ID NO. 16)和人源化的3D3輕鏈可變區(qū) (SEQ ID NO. 178)的序列比對。人源化的3D3輕鏈可變區(qū)與單克隆3D3輕鏈可變區(qū)具有 86%同一性(94%序列相似性)，且它們的3個⑶R是100% (用粗體表示)。圖20B表示單克隆3D3重鏈可變區(qū)(SEQ ID NO. :18)和人源化的3D3重鏈可變區(qū) (SEQ ID NO. 179)的序列比對。人源化的3D3重鏈可變區(qū)與單克隆3D3重鏈可變區(qū)具有 82%同一性(91%序列相似性)，且它們的3個⑶R是100% (用粗體表示)。圖21A表示單克隆3C4輕鏈可變區(qū)(SEQ ID NO. :24)和人源化的3C4輕鏈可變區(qū) (SEQ ID NO. 182)的序列比對。人源化的3C4輕鏈可變區(qū)與單克隆3C4輕鏈可變區(qū)具有 85%同一性(93%序列相似性)，且它們的3個⑶R是100% (用粗體表示)。圖21B表示單克隆3C4重鏈可變區(qū)(SEQ ID NO. :26)和人源化的3C4重鏈可變區(qū) (SEQ ID NO. 183)的序列比對。人源化的3C4重鏈可變區(qū)與單克隆3C4重鏈可變區(qū)具有 86%同一性(93%序列相似性)，且它們的3個⑶R是100% (用粗體表示)。
具體實施方式KAAG1在癌細胞中的表達和生物活性本發(fā)明涉及靶向在不同的癌癥類型、尤其是卵巢癌中發(fā)現(xiàn)的腫瘤的抗體的應用。 為了把抗體引向腫瘤，必須鑒別在癌細胞的細胞表面處表達的腫瘤特異性抗原。有幾種技術可用于鑒別腫瘤特異性抗原，且在公布的專利申請?zhí)朠CT/CA2007/001134中，描述了用于鑒別卵巢腫瘤中的KAAGl的方法，即稱作基于減法轉(zhuǎn)錄的mRNA擴增(Subtractive Transcription-based Amplification of mRNA) (STAR)的創(chuàng)新發(fā)現(xiàn)平臺。卵巢癌STAR文庫的分析，產(chǎn)生了許多編碼分泌型和細胞表面蛋白的基因。它們中的一個稱作AB-0447，含有編碼84個氨基酸的多肽的開放讀碼框，所述多肽與SEQ ID N0. 2相對應，由具有SEQ ID NO. :1所示的核苷酸序列的885個堿基對的cDNA編碼。對可公開得到的數(shù)據(jù)庫的檢索揭示，AB-0447核苷酸序列與稱作KAAGl的基因的核苷酸序列相同。 生物信息學分析預測為膜-錨定的蛋白，它的功能結(jié)構域呈現(xiàn)給胞外隔室。KAAGl最初克隆自腎癌文庫，作為細胞表面抗原，即證實它的膜定位的結(jié)果。另外，我們的研究證實，該蛋白在它的氨基端被加工，該結(jié)果與在氨基酸30和34處或二者之間的功能信號肽的切割相一致。此外，全長cDNA的瞬時表達導致培養(yǎng)基中切割的KAAGl的檢測。該最后一個發(fā)現(xiàn)指示，當在高水平表達時，該膜-錨定的蛋白可以從細胞脫落。相反，KAAGl的氨基-截短突變體的表達導致蛋白的細胞內(nèi)保留。目前沒有關于它的功能的公開報道，且以前沒有記載本發(fā)明公開的KAAGl在卵巢癌中過表達。因此，我們已經(jīng)研究了 KAAGl是否可以用于基于抗體的診斷和治療。已經(jīng)建立了幾個基于卵巢癌細胞的模型，諸如T0V-21G、T0V-112D, 0V-90和其它模型，它們是本領域技術人員所熟知的。這些細胞是源自具有卵巢腫瘤或腹水液的患者的人卵巢癌細胞系集合的一部分。這些細胞系已經(jīng)經(jīng)歷徹底分析，包括在微陣列上的全基因表達模式，使得它們成為優(yōu)良的基于細胞的人卵巢癌模型。生長性質(zhì)、基因表達模式和對化療藥的應答表明，這些細胞系是體內(nèi)卵巢瘤行為的恰當代表(Beuoit等人，2007)。從這些卵巢癌細胞系分離的總RNA的RT-PCR分析表明，KAAGl轉(zhuǎn)錄物在源自原發(fā)腫瘤的細胞系中弱表達。相反，源自腹水液的細胞系含有高水平的KAAGl表達。在來自腹水液的細胞中增加的KAAGl表達暗示，細胞的環(huán)境會影響KAAGl基因的調(diào)節(jié)。腹水細胞與晚期疾病有關， 且該表達模式暗示，KAAGl水平的增加與不依賴于錨著生長有關。根據(jù)該后一種暗示，發(fā)現(xiàn) KAAGl表達在源自原發(fā)腫瘤的細胞系中顯著增加(當在3D培養(yǎng)中將這些細胞培養(yǎng)成球狀體時)。這些球狀體已經(jīng)被充分表征，且被發(fā)現(xiàn)在體內(nèi)表現(xiàn)出許多與腫瘤有關的性質(zhì)(Cody 等人，2008)。因而，發(fā)現(xiàn)KAAGl的表達在模仿進行性腫瘤的模型中顯著增加，尤其是在卵巢癌發(fā)展過程中。證實了卵巢癌細胞中的KAAGl表達受到調(diào)節(jié)，在基于細胞的試驗中檢查了該基因在卵巢癌細胞行為中的功能。為此，使用RNA干擾(RNAi)來敲低(knock down)內(nèi)源KAAGl 基因在卵巢癌細胞系中的表達，且發(fā)現(xiàn)，KAAGl表達的減少導致細胞遷移的顯著減少，這通過標準的細胞能動性試驗測得，且被創(chuàng)傷愈合(或抓傷)試驗證實。這類試驗測量細胞填充匯合單層中的裸露區(qū)的速率。KAAGl表達的減少導致卵巢癌細胞系存活的減少，這通過產(chǎn)克隆試驗(諸如集落存活試驗)測得。本領域技術人員可以使用其它方法來評價癌細胞行為(尤其是卵巢癌細胞)對KAAGl的需求?；贙AAGl在大部分卵巢腫瘤中的表達、它在正常組織中的有限表達、表達水平和惡性增加之間的一致性以及推定的KAAGl在卵巢癌細胞系行為中的生物學作用，選擇 KAAGl作為治療靶標，用于開發(fā)檢測、預防和治療卵巢癌的抗體。KAAGl在除了卵巢癌以外的癌癥中的表達，也引導申請人評價用于其它癌癥適應癥的治療或診斷抗體。因此，提供了多種抗-KAAGl抗體及其抗原結(jié)合片段，諸如單克隆抗體、多克隆抗體、嵌合和人源化抗體(包括人源化的單克隆抗體)、抗體片段、單鏈抗體、結(jié)構域抗體和具有抗原結(jié)合區(qū)的多肽，它們可用于靶向KAAG1。作為抗原的KAAGl和源自KAAGl的表位申請人:已經(jīng)意外地發(fā)現(xiàn)，KAAGl在幾個腫瘤類型中表達，且還在患者的血液和腹水液中發(fā)現(xiàn)。該抗原因而可以用于在體內(nèi)靶向表達該抗原的腫瘤細胞，且在檢測試驗的開發(fā)中，用于在體外或在體內(nèi)測量腫瘤相關抗原。在血液中循環(huán)的KAAGl抗原缺少信號肽。本發(fā)明因此提供了 KAAGl抗原，其可用于產(chǎn)生對KAAGl的循環(huán)形式特異性的和/ 或?qū)δ[瘤表達的KAAGl特異性的抗體。所述KAAGl抗原(S卩，表位)可以包含KAAGl的至少10個氨基酸(且至多84個氨基酸)的片段，且可以特別地結(jié)合KAAGl的胞外區(qū)域。一種示例性抗原是完整的KAAGl蛋白，或與SEQ ID NO. 2或其片段具有至少80% 序列同一性的變體形式。源自KAAGl的另一種示例性抗原是KAAGl的分泌形式或循環(huán)形式，其缺少KAAGl 的信號肽或胞外區(qū)域。該抗原可以更具體地缺少KAAGl的氨基酸1-25、1-26、1-27、1-28、 1-29、1-30、1-31、1-32、1-33、1-34、1-35 或 1-36。本文所述的抗原或表位可以與載體相融合，所述載體諸如鑰孔血藍蛋白(KHL)、牛血清白蛋白(BSA)、卵白蛋白(OVA)或其它，以便產(chǎn)生抗體和抗原結(jié)合片段。本發(fā)明也提供了表位，其包含在SEQ ID NO. 2的氨基酸1-35內(nèi)、SEQ ID NO. 2 的氨基酸36-60內(nèi)或SEQ ID NO. :2的氨基酸61-84內(nèi)，以產(chǎn)生本文所述的抗體和抗原結(jié)合片段。本發(fā)明另外提供了一種組合物，其用于產(chǎn)生針對KAAGl的分泌形式或循環(huán)形式或 KAAGl的胞外區(qū)域的抗體，所述組合物可以包含在SEQ ID NO. :2的氨基酸30-84中含有的 KAAGl的表位和載體。所述表位可以具體地包含KAAGl的至少10個氨基酸。組合物的示例性實施方案是這樣的藥物組合物，其用于產(chǎn)生針對KAAGl的分泌形式或循環(huán)形式或KAAGl的胞外區(qū)域的抗體。所述藥物組合物可以包含在SEQ ID NO. :2的氨基酸30-84中含有的KAAGl的表位和藥學上可接受的載體。在再一個方面，本發(fā)明提供了用于產(chǎn)生針對KAAGl的分泌形式或循環(huán)形式的抗體的方法。所述方法可以包括，施用多肽，所述多肽包含在SEQ ID NO. :2的氨基酸30-84中含有的KAAGl的表位，其中所述表位缺少KAAGl信號肽?；蛘撸龇椒梢园?，施用包含信號肽的表位，并選擇僅結(jié)合所述蛋白的分泌形式或胞外區(qū)域的抗體。在另一個方面，本發(fā)明提供了在SEQ ID NO. :2的氨基酸30_84中含有的KAAGl的表位用于產(chǎn)生抗體的應用，所述抗體針對KAAGl的分泌形式或循環(huán)形式。結(jié)合KAAGl的抗體和抗原結(jié)合片段關于對目標抗原的特異性，最初從Fab文庫分離抗體。表現(xiàn)出最大特征的抗體的輕鏈可變域或重鏈可變域的氨基酸序列的對比，允許我們?nèi)〉迷贑DR內(nèi)和在可變區(qū)內(nèi)的共有序列。在SEQ ID NO 74-90中提供了 CDR的共有序列。本文所述的可變區(qū)可以與希望物種的恒定區(qū)融合，由此允許希望物種的效應細胞識別抗體。所述恒定區(qū)可以源自，例如，IgGl、IgG2、IgG3或IgG4亞型。與可變區(qū)在框架內(nèi)克隆或合成恒定區(qū)，是在本領域技術人員知識范圍內(nèi)，且可以通過例如重組DNA技術來實現(xiàn)。在本發(fā)明的某些實施方案中，結(jié)合KAAGl的抗體可以屬于IgGl、IgG2、IgG3或IgG4 亞型。本發(fā)明的更具體的實施方案涉及IgGl亞型的抗體。所述抗體可以是IgGl亞型的人源化抗體，其在介導抗體依賴性的細胞毒性(ADCC)、補體介導的細胞毒性(CMC)中是有生物活性的，或與免疫復合物有關。典型的ADCC包含天然殺傷(NK)細胞的活化，且依賴于NK 細胞表面上的Fc受體對抗體包被的細胞的識別。Fc受體識別抗體的Fc結(jié)構域(諸如存在于IgGl上)，其結(jié)合靶細胞、尤其是表達抗原(諸如KAAG1)的癌細胞的表面。結(jié)合IgG 的Fc受體后，NK細胞釋放細胞因子和細胞毒性顆粒，它們進入靶細胞，并通過觸發(fā)細胞凋亡來促進細胞死亡。在某些情況下，具有與抗體3D3基本上相同的輕鏈和重鏈可變區(qū)的抗-KAAGl抗體會與KAAGl的氨基酸36-60(包括端值)區(qū)間的表位相互作用。在其它情況下，具有與抗體 3G10基本上相同的輕鏈和重鏈可變區(qū)的抗-KAAGl抗體會與KAAGl的氨基酸61-84 (包括端值)區(qū)間的表位相互作用。在另一個情況下，具有與抗體3C4基本上相同的輕鏈和重鏈可變區(qū)的抗-KAAGl抗體會與KAAGl的氨基酸1_35 (包括端值)區(qū)間的表位相互作用。本發(fā)明描述了結(jié)合KAAGl的抗體集合。在某些實施方案中，所述抗體可以選自多克隆抗體、單克隆抗體(諸如嵌合或人源化抗體)、抗體片段(諸如抗原結(jié)合片段、單鏈抗體、結(jié)構域抗體)和具有抗原結(jié)合區(qū)的多肽。在本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明的分離的抗體或抗原結(jié)合片段能誘導表達KAAGl的腫瘤細胞或表達KAAGl變體的腫瘤細胞的殺死(消除、破壞、裂解)(例如，以ADCC-依賴性的方式)。在本發(fā)明的另一個方面，本發(fā)明的分離的抗體或抗原結(jié)合片段的具體特征在于， 它的減少表達KAAGl的腫瘤細胞的擴散的能力。在本發(fā)明的另一個方面，本發(fā)明的分離的抗體或抗原結(jié)合片段的特征在于，它的減少或損害表達KAAGl的腫瘤的形成的能力。根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，當KAAGl在表達KAAGl的腫瘤細胞的表面處表達時， 所述抗體或抗原結(jié)合片段可以是更特別有效的。也根據(jù)本發(fā)明，所述抗體或抗原結(jié)合片段可以具體用于靶向特征在于不依賴于錨著生長的表達KAAGl的腫瘤細胞。在另一個方面，本發(fā)明涉及用于治療癌癥的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，所述癌癥包含表達KAAGl的腫瘤細胞。在再一個方面，本發(fā)明涉及用于檢測癌癥的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，所述癌癥包含表達KAAGl的腫瘤細胞。在本發(fā)明的一個示例性實施方案中，所述分離的抗體或抗原結(jié)合片段可以包含恒定區(qū)的氨基酸，所述恒定區(qū)可以源自例如人抗體。在本發(fā)明的另一個示例性實施方案中，所述分離的抗體或抗原結(jié)合片段可以包含人抗體的框架氨基酸。不限于本文呈現(xiàn)的示例性實施方案，申請人制備了可用于本文所述目的的具體抗體和抗原結(jié)合片段。本發(fā)明因此在一個示例性實施方案中提供了分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其包含輕鏈可變域，所述輕鏈可變域具有(a) CDRLl 序列，其選自 SEQ ID NO. :74 禾口 SEQ ID NO. :75;(b)CDRL2 序列，其選自 SEQ ID NO. 76、SEQ ID NO. :77 禾口 SEQ ID NO. :78，或;(c)CDRL3 序列，其選自 SEQ ID NO. 79、SEQ ID NO. :80 禾口 SEQ ID N0. :81。所述分離的抗體或抗原結(jié)合片段還可以包含重鏈可變域，所述重鏈可變域具有(a) CDRHl 序列，其包含 SEQ ID NO. :82 ；(b)CDRH2 序列，其選自 SEQ ID NO. :83、SEQ ID NO. :84、SEQ ID NO. :85, SEQ ID NO. 86 和 SEQ ID NO. :87，或；(c)CDRH3 序列，其選自 SEQ ID NO. :88、SEQ ID NO. :89 禾口 SEQ ID NO. :90。在一個示例性實施方案中，所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包含輕鏈可變區(qū)的任意單個⑶R或者⑶R1、⑶R2和/或⑶R3的組合?？梢愿唧w地選擇⑶R3。組合可以包括， 例如，CDRLl 和 CDRL3 ；CDRLl 和 CDRL2 ；CDRL2 和 CDRL3，和；CDRL1、CDRL2 和 CDRL3。在另一個示例性實施方案，所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包含重鏈可變區(qū)的任意單個⑶R或者⑶R1、⑶R2和/或⑶R3的組合?？梢愿唧w地選擇⑶R3。組合可以包括， 例如，CDRHl 禾口 CDRH3 ；CDRHl 禾口 CDRH2 ；CDRH2 禾口 CDRH3，禾口 ；CDRH1、CDRH2 禾口 CDRH3。根據(jù)本發(fā)明，所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包含⑶RL1、⑶RL2或⑶RL3中的至少2 個 CDR0也根據(jù)本發(fā)明，所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包含一個⑶RLl、一個⑶RL2和一個 CDRL3。進一步根據(jù)本發(fā)明，所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包含(a) CDRLl、CDRL2 或 CDRL3 中的至少 2 個 CDR，和；(b) CDRHl、一個 CDRH2 或一個 CDRH3 中的至少 2 個 CDR。所述抗體或抗原結(jié)合片段可以更優(yōu)選地包含一個⑶RL1、一個⑶RL2和一個 CDRL3。所述抗體或抗原結(jié)合片段還可以更優(yōu)選地包含一個⑶RH1、一個⑶RH2和一個 CDRH3。本發(fā)明的其它示例性實施方案涉及分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其包含重鏈可變域，所述重鏈可變域具有(a) CDRHl 序列，其包含 SEQ ID NO. :82 ；(b)CDRH2 序列，其選自 SEQ ID NO. :83、SEQ ID NO. :84、SEQ ID NO. :85, SEQ ID NO. 86 和 SEQ ID NO. :87，或；(c)CDRH3 序列，其選自 SEQ ID NO. :88、SEQ ID NO. :89 禾口 SEQ ID NO. :90。根據(jù)本發(fā)明，所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包含一個⑶RH1、一個⑶RH2或一個 CDRH3。根據(jù)本發(fā)明，所述抗體或抗原結(jié)合片段還可以包含一個⑶RH1、一個⑶RH2和一個 CDRH3。當僅可以得到一個輕鏈可變域或重鏈可變域時，使用本領域已知的方法 (Portolano φ A The Journal of Immunology(1993) 150 :880-887, Clarkson φ 人， Nature (1991) 352 :624-628)，通過篩選互補可變域的文庫，可以重建抗體或抗原結(jié)合片段。本發(fā)明也包括包含可變鏈的多肽或抗體，所述可變鏈具有在至少一個本文所述的 CDR中的至少一個保守氨基酸置換(相對于最初的CDR)。本發(fā)明也包括包含可變鏈的多肽或抗體，所述可變鏈在至少2個⑶R中具有至少一個保守氨基酸置換(相對于最初的CDR)。本發(fā)明也包括包含可變鏈的多肽或抗體，所述可變鏈在所述3個⑶R中具有至少一個保守氨基酸置換(相對于最初的CDR)。本發(fā)明也包括包含可變鏈的多肽或抗體，所述可變鏈在至少一個⑶R中具有至少 2個保守氨基酸置換(相對于最初的CDR)。本發(fā)明也包括包含可變鏈的多肽或抗體，所述可變鏈在至少2個⑶R中具有至少 2個保守氨基酸置換(相對于最初的CDR)。本發(fā)明也包括包含可變鏈的多肽或抗體，所述可變鏈在所述3個⑶R中具有至少 2個保守氨基酸置換(相對于最初的CDR)。在另一個方面，本發(fā)明涉及多肽、抗體或抗原結(jié)合片段，其包含(在單個多肽鏈上或在分開的多肽鏈上)本文所述抗體或抗原結(jié)合片段之一的輕鏈可變域的至少一個互補性決定區(qū)和重鏈可變域的至少一個互補性決定區(qū)。本發(fā)明在其另一個方面涉及抗-KAAGl抗體，其可以包含(在單個多肽鏈上或在分開的多肽鏈上)本文所述的抗體或抗原結(jié)合片段的所有6個互補性決定區(qū)(CDR)。本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可以另外包含額外的氨基酸，所述額外的氨基酸側(cè)接CDR的氨基和/或羧基區(qū)域。那些額外的氨基酸可以如表A或表B所示，或可以包括例如保守氨基酸置換。根據(jù)本發(fā)明，所述抗體可以包含⑶RLl序列，該序列包含下式或由其組成XlaSSX2aSLLX3aX4aX5aX6aX7aX8aX9aX10aLXlla(SEQ ID NO. :74)其中Xla可以是堿性氨基酸；其中L可以是堿性氨基酸；其中k可以是H、Y或N;其中X4a可以是S、T、N或R;其中Xta可以不存在，或是S或N;其中X6a可以是D、F或N;其中X7a可以是G或Q ；其中X8a可以是K、L或N;其中X9a可以是T或N;其中)(1(la可以是芳族氨基酸，且；其中)(lla可以是A、N、E或Y。在本發(fā)明的一個示例性實施方案中，Xla可以是K或R。在本發(fā)明的另一個實施方案中，可以是Q或K。在本發(fā)明的再一個實施方案中，可以是N或H。在本發(fā)明的另一個實施方案中，Xltla可以是Y或F。本發(fā)明的更具體的實施方案包括SEQ ID NO. :74的CDRL1，其中
X3a ^ N ；X3a ^ H ；X4a ^ S ；X4a ^ T ；X5a ^ S ；X5a；X6a ^ N ；X7a ^ Q ；X7a ^ G ；X8a ^ K ；
X9a ^ N ；X9a ^ T ；X10a ^ Y Xlla ^ A。根據(jù)本發(fā)明，所述抗體可以包含⑶RLl序列，該序列包含下式或由其組成KASQDXlbX2bX3bX4bX5bX6b (SEQ ID NO. :75)其中X^3可以是疏水氨基酸；其中可以是G或H;其中可以是T、N或R
其中)(4b可以是F、Y或A;其中)(5b可以是疏水氨基酸，且；其中X6b可以是N或A。在本發(fā)明的一個示例性實施方案中，X^3可以是V或I。在本發(fā)明的另一個示例性實施方案中，X5b可以是V或L。本發(fā)明的更具體的實施方案包括SEQ ID NO. :75的CDRL1，其中Xlb是I 是H ； ^ T ； X3b 是 N ；X4b 是 Y ；X4b 是 F ；X5b 是 L 或 X6b 是 N。根據(jù)本發(fā)明，所述抗體可以包含⑶RL2序列，該序列包含下式或由其組成FXlcSTX2cX3cS (SEQ ID NO. :76)其中Xlc是A或G ；
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其中&。是R或T，和；其中&。是 E、K 或 A。在本發(fā)明的一個示例性實施方案中，X1?？梢允茿，且&。可以是T。在本發(fā)明的另一個示例性實施方案中，X1?？梢允茿，且&?？梢允荝。本發(fā)明的其它具體實施方案包括SEQ ID NO. :76的CDRL2，其中X1。是A成。是R 或是已。根據(jù)本發(fā)明，所述抗體可以包含⑶RL2序列，該序列包含下式或由其組成XldVSX2dX3dX4dS(SEQ ID NO. :77)其中Xld可以是L或K;其中)(2d可以是堿性氨基酸；其中)(3d可以是L或R，和；其中)(4d可以是D或F。在本發(fā)明的一個示例性實施方案中，)(2d可以是K或N。本發(fā)明的其它具體實施方案包括SEQ ID NO. :77的CDRL2，其中Xld是L ;)(2d是K ； XjL或X4jD。根據(jù)本發(fā)明，所述抗體可以包含⑶RL2序列，該序列包含下式或由其組成XleANRLVX2e (SEQ ID NO. :78)其中Xle可以是堿性氨基酸，且；其中可以是D或A。在本發(fā)明的一個示例性實施方案中，Xle可以是R或H。本發(fā)明的其它具體實施方案包括SEQ ID NO. :78的⑶RL2，其中Xle是R或X2e是 D0根據(jù)本發(fā)明，所述抗體可以包含⑶RL3序列，該序列包含下式或由其組成XlfQX2fX3fX4fX5fPLT (SEQ ID NO. :79)其中Xlf可以是Q或L ；其中)(2f可以是芳族氨基酸；其中X3f可以是D、F或Y;其中X4f可以是E、A、N或S，和；其中X5f可以是I、F或T。在本發(fā)明的一個示例性實施方案中，)(2f可以是Y或H。
在本發(fā)明的另一個示例性實施方案中，X3f可以是Y或D。在本發(fā)明的另一個示例性實施方案中，X5f可以是I或T。本發(fā)明的其它具體實施方案包括SEQ ID NO. :79的⑶RL3，其中Xlf是Q ;X2f是H ； X3f 是 D ;X 3f 是 Y ； 是 S ； X‘f 是 E ； X‘f 是 A ； X5f 是T，或X 是I。根據(jù)本發(fā)明，所述抗體可以包含⑶RL3序列，該序列包含下式或由其組成QQHXlgX2gX3gPLT (SEQ ID NO. :80)其中Xlg可以是芳族氨基酸；其中可以是N或S，和；其中可以是I或T。
在本發(fā)明的一個示例性實施方案中，Xlg可以是F或Y。本發(fā)明的其它具體實施方案包括SEQ ID NO. :80的CDRL3，其中是S或\、是 T。根據(jù)本發(fā)明，所述抗體可以包含⑶RL3序列，該序列包含下式或由其組成XlhQGX2hHX3hPX4hT (SEQ ID NO. :81)其中)(lh可以是芳族氨基酸；其中)(2h可以是中性的親水氨基酸；其中Xa可以是F或V，和；其中X4h可以是R或L。在本發(fā)明的一個示例性實施方案中，Xlh可以是W或F。在本發(fā)明的另一個示例性實施方案中，)(2h可以是S或T。本發(fā)明的其它具體實施方案包括SEQ ID NO. 81的⑶RL3，其中父^是^成！^是丁 ； X3h是F，或X 4h 是R。根據(jù)本發(fā)明，所述抗體可以包含⑶RHl序列，該序列包含下式或由其組成GYXliFX2iX3iYX4iX5iH(SEQ ID NO. :82)其中Xli可以是Τ、I或K;其中X2i可以是中性的親水氨基酸；其中X3i可以是酸性氨基酸；其中)(4i可以是Ε、Ν或D，和；其中X5i可以是疏水氨基酸。在本發(fā)明的一個示例性實施方案中，)(2i可以是T或S。在本發(fā)明的另一個示例性實施方案中，X3i可以是D或E。在本發(fā)明的另一個示例性實施方案中，)(4i可以是N或E。在本發(fā)明的另一個示例性實施方案中，X5i可以是Μ、I或V。本發(fā)明的其它具體實施方案包括SEQ ID NO. :82的CDRH1，其中X2i是T ;X3i是D ； X4i 是 E；X51 是 I 或 X5i 是 M。根據(jù)本發(fā)明，所述抗體可以包含⑶RH2序列，該序列包含下式或由其組成XijX2jDPX3jTGX4jTX5j (SEQ ID N0. 83)其中Xlj可以是V或G ；其中、可以是疏水氨基酸；其中可以是A、G或E;其中X4j可以是R、G、D、A、S、N或V，且;其中X5j可以是疏水氨基酸。在本發(fā)明的一個示例性實施方案中，)(2j可以是I或L。在本發(fā)明的另一個示例性實施方案中，X^可以是A或V。本發(fā)明的其它具體實施方案包括SEQ ID NO. :83的⑶RH2，其中Xlj是V成」是I ； X3j 是 E； X4j 是 D 或 X5j 是 A。根據(jù)本發(fā)明，所述抗體可以包含⑶RH2序列，該序列包含下式或由其組成VXlkDPX2kTGX3kTA (SEQ ID NO. :84)
其中Xlk可以是疏水氨基酸；其中)(2k可以是A、E或G ；其中Xat可以是 R、G、A、S、N V 或 D。在本發(fā)明的一個示例性實施方案中，Xlk可以是L或I。本發(fā)明的其它具體實施方案包括SEQ ID NO. :84的⑶RH2，其中Xlk是I ；)(21;是已， 或)^是0。根據(jù)本發(fā)明，所述抗體可以包含⑶RH2序列，該序列包含下式或由其組成YIX11X21X31GX41X51X61 (SEQ ID NO. :85)其中X11可以是S或N;其中X21可以是芳族氨基酸；其中可以是D、E或N;其中)(41可以是D或H;其中)(51可以是Y、S或N;其中)(61可以是D、E或N。在本發(fā)明的一個示例性實施方案中，Xm可以是D或N。在本發(fā)明的另一個示例性實施方案中，)(61可以是D或N。本發(fā)明的其它具體實施方案包括SEQ ID NO. :85的CDRH2，其中^是F或Y，X31
是N，)(41是D或X61是N。根據(jù)本發(fā)明，所述抗體可以包含⑶RH2序列，該序列包含下式或由其組成XlmINPYNX2mVTE (SEQ ID NO. :86)其中Xlm可以是N或Y，且；其中Xan可以是E、D或N。在本發(fā)明的一個示例性實施方案中，可以是D或N。本發(fā)明的其它具體實施方案包括SEQ ID NO. :86的CDRH2，其中Xlm是N或X2m是 D0根據(jù)本發(fā)明，所述抗體可以包含⑶RH2序列，該序列包含下式或由其組成DINPXlnYGX2nX3nT (SEQ ID NO. :87)其中Xln可以是N或Y，其中Xai可以是G或T，和;其中Xto可以是I或T。根據(jù)本發(fā)明，所述抗體可以包含⑶RH3序列，該序列包含下式或由其組成MX10X20X30DY (SEQ ID NO. :88)其中X1。可以是G或S;其中&。可以是Y或H，且；其中&?？梢允茿或S。本發(fā)明的其它具體實施方案包括SEQ ID NO. :88的⑶RH3，其中Xio是G ；X2o是Y 或&。是S。根據(jù)本發(fā)明，所述抗體可以包含⑶RH3序列，該序列包含下式或由其組成IXlpYAX2pDY (SEQ ID NO. :89)
其中I可以是G或S，和；其中可以不存在，或是M。本發(fā)明的其它具體實施方案包括SEQ ID NO. :89的⑶RH3，其中是S或)(2p是 M0根據(jù)本發(fā)明，所述抗體可以包含⑶RH3序列，該序列包含下式或由其組成AXlqX2qGLRX3q(SEQ ID NO. :90)其中Xltl可以是R或W;其中可以是芳族氨基酸，且；其中可以是堿性氨基酸。在本發(fā)明的一個示例性實施方案中，X2q可以是W或F。在本發(fā)明的另一個示例性實施方案中，X^1可以是Q或N。本發(fā)明的其它具體實施方案包括SEQ ID NO. 90的CDRH3，其中Xlq是R ；X2q是W
或X^是N。本文所述的重鏈和/或輕鏈的框架區(qū)可以源自表A和B所示框架區(qū)中的一個或多個。所述抗體或抗原結(jié)合片段因而可以包含本文所述CDR中的一個或多個(例如，選自SEQ ID NO. :74-90的具體的⑶R或共有的⑶R)和源自表A和B所示那些中的框架區(qū)。在表A 和B中，預期的CDR用粗體顯示，而框架區(qū)則不然。表2描述了與抗-KAAGl抗體的具體實例的完整輕鏈和重鏈免疫球蛋白相對應的核苷酸和氨基酸的序列。表2-結(jié)合KAAGl的輕鏈和重鏈免疫球蛋白的完整序列
抗體命始φ..!. ； -ν- · ,-..-h- . 二:·····Λ■mmm■““ ■ . ■ ■ ■ 蠆·. Wc M ■雄灣 ■ -M- ·)氨棊稗序到召4、::3D3輕鏈(L)343D3重鏈(H)S63G10輕鏈783G10重鏈9103C4輕鏈11123C4重鏈1314可結(jié)合KAAGl的抗體或抗原結(jié)合片段可以包含在表2中列出的任意一個L鏈和任意一個H鏈免疫球蛋白。在某些實施方案中，抗體3D3的輕鏈可以與3D3的重鏈或3G10的重鏈相組合，以形成具有KAAGl結(jié)合活性的完整抗體。在本發(fā)明的一個示例性實施方案中， 3D3L鏈可以與3D3H鏈相組合，3G10L鏈可以與3G10H鏈相組合，或3C4L鏈可以與3C4H鏈相組合。另外，抗體或抗原結(jié)合片段的一些實例可以由來自表2列出的抗體列表的2個L 鏈和任意2個H鏈的任意組合組成。抗體3D3的輕和重免疫球蛋白鏈的完整核苷酸序列分別如SEQ ID NO :3和5所示，抗體3D3的輕和重免疫球蛋白鏈的對應氨基酸序列分別如SEQ ID NO :4和6所示。因而，在一個示例性實施方案中，結(jié)合KAAGl的抗體可以包含在SEQ ID NO. :4中所示的輕鏈氨基酸和在SEQ ID NO. :6中所示的重鏈氨基酸序列的組合。在另一個實施方案中，所述抗體可以包含2個相同的包含SEQ ID NO. :4的3D3輕鏈和2個相同的包含SEQ ID NO. :6的3D3重鏈?？贵w3G10的輕和重免疫球蛋白鏈的完整核苷酸序列分別如SEQ ID NO 7和9所示，抗體3G10的輕和重免疫球蛋白鏈的對應氨基酸序列分別如SEQ ID NO :8和10所示。因而，在一個示例性實施方案中，結(jié)合KAAGl的抗體可以包含在SEQ ID NO. :8中所示的輕鏈氨基酸和在SEQ ID NO. :10中所示的重鏈氨基酸序列的組合。在另一個實施方案中，所述抗體可以包含2個相同的包含SEQ ID NO. :8的3G10輕鏈和2個相同的包含SEQ ID NO. 10的3G10重鏈?？贵w3C4的輕和重免疫球蛋白鏈的完整核苷酸序列分別如SEQ ID NO :11和13所示，抗體3C4的輕和重免疫球蛋白鏈的對應氨基酸序列分別如SEQ ID N0:12和14所示。因而，在一個示例性實施方案中，結(jié)合KAAGl的抗體可以包含在SEQ ID NO. :12中所示的輕鏈氨基酸和在SEQ ID NO. :14中所示的重鏈氨基酸序列的組合。在另一個實施方案中，所述抗體可以包含2個相同的包含SEQ ID NO. :12的3C4輕鏈和2個相同的包含SEQ ID N0. 14的3C4重鏈。還提供了由輕和/或重免疫球蛋白鏈的組合形成的其它抗-KAAGl抗體或抗原結(jié)合片段的變體，它們可以各自獨立地與在表2中列出的氨基酸序列具有至少70%、75%、 80%、85%、90%、95%、97%或99%同一性。在某些實施方案中，所述抗體變體可以包含至少一個輕鏈和一個重鏈。在其它情況下，所述抗體變體可以包含2個相同的輕鏈和2個相同的重鏈。根據(jù)本發(fā)明，變化的區(qū)域可以位于恒定區(qū)或可變區(qū)。也根據(jù)本發(fā)明，變化的區(qū)域可以位于框架區(qū)。本發(fā)明也包括這樣的抗體，其具有包含表A所示可變區(qū)之一的輕鏈和包含表B所示可變區(qū)之一的重鏈。所述輕鏈和重鏈可以包含恒定結(jié)構域。本發(fā)明也包括表2、表A和表 B的輕鏈和重鏈的組合。本發(fā)明也提供了含有輕鏈和重鏈可變區(qū)的抗體或抗原結(jié)合片段。另外，某些實施方案包括這些輕鏈和重鏈可變區(qū)的抗原結(jié)合片段、變體和衍生物。本發(fā)明的其它示例性實施方案包括分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其能特異性地結(jié)合SEQ ID NO. :2,SEQ ID NO. :2的胞外部分、或SEQ ID NO. :2的分泌形式或其變體，所述抗體包含16中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID N0.
變域，
變域；
變域；
可變域，
可變域，
可變域，
(a)在 SEQ ID N0.
:18中定義的重鏈可
(b)在SEQ ID NO. :20中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID NO. :22中定義的重鏈可
(c)在SEQ ID NO. 中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID NO. J6中定義的重鏈可
(d)在SEQ ID NO. :105中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID NO. :132中定義的重鏈
(e)在SEQ ID NO. 106中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID NO. :133中定義的重鏈
(f)在SEQ ID NO. :107中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID NO. :134中定義的重鏈
可變域，
可變域，
可變域，
可變域，
可變域，
可變域，
可變域，
可變域，
可變域，
可變域，
可變域，
可變域，
可變域，
可變域，
可變域，
可變域，
可變域，
可變域，
可變域，
(g)在SEQ ID NO. :108中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID NO.:巧4中定義的重鏈
(h)在SEQ ID NO. :109中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID NO. :153中定義的重鏈
(i)在SEQ ID NO. :110中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID NO. :135中定義的重鏈
(j)在SEQ ID NO. :111中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID NO. :136中定義的重鏈
(k)在SEQ ID NO. :112中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID NO. :149中定義的重鏈
(1)在SEQ ID NO. :113中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID NO. :137中定義的重鏈
(m)在SEQ ID NO. :114中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID NO. :140中定義的重鏈
(η)在SEQ ID NO. :115中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID NO. :141中定義的重鏈
(ο)在SEQ ID NO. :116中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID NO. :142中定義的重鏈
(P)在SEQ ID NO. :117中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID NO. :139中定義的重鏈
(q)在SEQ ID NO. :119中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID NO. :143中定義的重鏈
(r)在SEQ ID NO. 120中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID NO. :152中定義的重鏈
(s)在SEQ ID NO. :121中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID NO. :146中定義的重鏈
(t)在SEQ ID NO. :122中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID NO. :138中定義的重鏈
(u)在SEQ ID NO. :123中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID NO. :150中定義的重鏈
(ν)在SEQ ID NO. :1 中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID NO. :144中定義的重鏈
(w)在SEQ ID NO. :1 中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID NO. :145中定義的重鏈
(χ)在SEQ ID NO. :127中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID NO. :157中定義的重鏈
(y)在SEQ ID NO. :1 中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID NO. :155中定義的重鏈
(ζ)在SEQ ID NO. :1 中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID NO. :156中定義的重鏈可變域，或；(aa)在SEQ ID NO. 130中定義的輕鏈可變域和在SEQ ID NO. :151中定義的重
鏈可變域。在本文中應當理解，上面提供的具體組合的輕鏈可變區(qū)可以變化為任意其它輕鏈可變區(qū)。類似地，上面提供的具體組合的重鏈可變區(qū)可以變化為任意其它重鏈可變區(qū)。在表3中公開了在這些輕鏈和重鏈可變區(qū)中存在的序列的具體實例。表3-結(jié)合KAAGl的輕鏈和重鏈可變區(qū)的序列
權利要求
1.一種分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其能特異性地結(jié)合KAAG1(SEQ ID NO. 2)或與 SEQ ID NO. :2具有至少80%序列同一性的KAAGl變體。
2.如權利要求1所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體能特異性地結(jié)合分泌型KAAGl或KAAGl的胞外區(qū)域。
3.如權利要求2所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體結(jié)合位于SEQID NO. :2的氨基酸30和氨基酸84之間的結(jié)構域。
4.如權利要求1或2所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體能結(jié)合在SEQ ID NO. 2的氨基酸1-35中包含的表位。
5.如權利要求1或2所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體能結(jié)合在SEQ ID NO. 2的氨基酸36-60中包含的表位。
6.如權利要求1或2所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體能結(jié)合在SEQ ID NO. :2的氨基酸61-84中包含的表位。
7.如權利要求1-6中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包含輕鏈可變域，所述輕鏈可變域包含選自下述的序列與SEQ ID NO. : 16具有至少80%同一性的序列，與SEQ ID NO. :20具有至少80%同一性的序列，與SEQ ID NO. : 具有至少80% 同一性的序列，與SEQ ID NO. :105具有至少80%同一性的序列，與SEQ ID NO. :109具有至少80%同一性的序列和與SEQ ID NO. :1 具有至少80%同一性的序列。
8.如權利要求7所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變域包含與SEQ ID NO. :27具有至少80%同一性的CDRLl序列、與SEQ ID NO. 具有至少80%同一性的 CDRL2序列和與SEQ ID NO. : 具有至少80%同一性的⑶RL3序列。
9.如權利要求8所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRLl序列與SEQID NO. :27具有至少90%同一性。
10.如權利要求9所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRLl序列與SEQID NO. :27具有100%同一性。
11.如權利要求8-10中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL2序列與SEQ ID NO. J8具有至少90%同一性。
12.如權利要求11所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL2序列與SEQID NO. 具有100%同一性。
13.如權利要求8-12中中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL3 序列與SEQ ID NO. : 具有至少90%同一性。
14.如權利要求13所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL3序列與SEQID NO. : 具有100%同一性。
15.如權利要求7所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變域包含與SEQ ID NO. :33具有至少80%同一性的CDRLl序列、與SEQ ID N0. :；34具有至少80%同一性的 CDRL2序列和與SEQ ID NO. :35具有至少80%同一性的⑶RL3序列。
16.如權利要求15所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRLl序列與SEQID NO. :33具有至少90%同一性。
17.如權利要求16所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRLl序列與SEQID NO. :33具有100%同一性。
18.如權利要求15-17中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL2序列與SEQ ID NO. :34具有至少90%同一性。
19.如權利要求18所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL2序列與SEQID NO. :；34 具有 100% 同一性。
20.如權利要求15-19中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL3序列與SEQ ID NO. :35具有至少90%同一性。
21.如權利要求20所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL3序列與SEQID NO. :35具有100%同一性。
22.如權利要求7所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變域包含與SEQ ID NO. :39具有至少80%同一性的CDRLl序列、與SEQ ID NO. :40具有至少80%同一性的 CDRL2序列和與SEQ ID NO. :41具有至少80%同一性的⑶RL3序列。
23.如權利要求22所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRLl序列與SEQID NO. :39具有至少90%同一性。
24.如權利要求23所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRLl序列與SEQID NO. :39具有100%同一性。
25.如權利要求22-M中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL2序列與SEQ ID NO. :40具有至少90%同一性。
26.如權利要求25所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL2序列與SEQID NO. :40具有100%同一性。
27.如權利要求2246中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL3序列與SEQ ID NO. :41具有至少90%同一性。
28.如權利要求27所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL3序列與SEQID NO. :41具有100%同一性。
29.如權利要求7所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變域包含與SEQ ID NO. :158具有至少80%同一性的CDRLl序列、與SEQ ID NO. :159具有至少80%同一性的CDRL2序列和與SEQ ID NO. :160具有至少80%同一性的CDRL3序列。
30.如權利要求四所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRLl序列與SEQID NO. :158具有至少90%同一性。
31.如權利要求30所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRLl序列與SEQID NO. :158 具有 100% 同一性。
32.如權利要求四-31中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL2序列與SEQ ID NO. :159具有至少90%同一性。
33.如權利要求32所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL2序列與SEQID NO. :159 具有 100% 同一性。
34.如權利要求四-33中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL3序列與SEQ ID NO. :160具有至少90%同一性。
35.如權利要求34所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL3序列與SEQID NO. :160 具有 100% 同一性。
36.如權利要求7所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變域包含與SEQID NO. :164具有至少80%同一性的CDRLl序列、與SEQ ID NO. :165具有至少80%同一性的CDRL2序列和與SEQ ID NO. :166具有至少80%同一性的CDRL3序列。
37.如權利要求36所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRLl序列與SEQID NO. :164具有至少90%同一性。
38.如權利要求37所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRLl序列與SEQID NO. :164 具有 100% 同一性。
39.如權利要求36-38中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL2序列與SEQ ID NO. :165具有至少90%同一性。
40.如權利要求39所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL2序列與SEQID NO. :165 具有 100% 同一性。
41.如權利要求36-40中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL3序列與SEQ ID NO. :166具有至少90%同一性。
42.如權利要求41所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL3序列與SEQID NO. :166 具有 100% 同一性。
43.如權利要求7所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變域包含與SEQ ID NO. :170具有至少80%同一性的CDRLl序列、與SEQ ID NO. :171具有至少80%同一性的⑶RL2序列和與SEQ ID NO. :172具有至少80%同一性的⑶RL3序列。
44.如權利要求43所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRLl序列與SEQID NO. :170具有至少90%同一性。
45.如權利要求44所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRLl序列與SEQID NO. :170 具有 100% 同一性。
46.如權利要求43-45中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL2序列與SEQ ID NO. :171具有至少90%同一性。
47.如權利要求46所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL2序列與SEQID N0. 171 具有 100% 同一性。
48.如權利要求43-47中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL3序列與SEQ ID NO. :172具有至少90%同一性。
49.如權利要求48所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL3序列與SEQID NO. :172 具有 100% 同一性。
50.如權利要求1-49中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包含重鏈可變域，所述重鏈可變域包含選自下述的序列與SEQ ID NO. :18具有至少80%同一性的序列，與SEQ ID NO. :22具有至少80%同一性的序列，與SEQ ID NO. J6具有至少80% 同一性的序列，與SEQ ID NO. :132具有至少80%同一性的序列，與SEQ ID NO. :145具有至少80%同一性的序列和與SEQ ID NO. :153具有至少80%同一性的序列。
51.如權利要求50所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述重鏈可變域包含與 SEQ ID NO. :30具有至少80%同一性的CDRHl序列、與SEQ ID NO. :31具有至少80%同一性的⑶RH2序列和與SEQ ID NO. :32具有至少80%同一性的CDRH3序列。
52.如權利要求51所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRHl序列與SEQID NO. :30具有至少90%同一性。
53.如權利要求52所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRHl序列與SEQID NO. :30具有100%同一性。
54.如權利要求51-53中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH2序列與SEQ ID NO. :31具有至少90%同一性。
55.如權利要求M所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH2序列與SEQID NO. :31具有100%同一性。
56.如權利要求51-55中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH3序列與SEQ ID NO. :32具有至少90%同一性。
57.如權利要求56所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH3序列與SEQID NO. :32具有100%同一性。
58.如權利要求50所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述重鏈可變域包含與 SEQ ID NO. :36具有至少80%同一性的CDRHl序列、與SEQ ID NO. :37具有至少80%同一性的⑶RH2序列和與SEQ ID NO. :38具有至少80%同一性的⑶RH3序列。
59.如權利要求58所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRHl序列與SEQID NO. :36具有至少90%同一性。
60.如權利要求59所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRHl序列與SEQID NO. :36具有100%同一性。
61.如權利要求58-60中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH2序列與SEQ ID NO. :37具有至少90%同一性。
62.如權利要求61所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH2序列與SEQID NO. :37具有100%同一性。
63.如權利要求58-62中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH3序列與SEQ ID NO. :38具有至少90%同一性。
64.如權利要求63所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH3序列與SEQID NO. :38具有100%同一性。
65.如權利要求50所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述重鏈可變域包含與 SEQ ID NO. :42具有至少80%同一性的CDRHl序列、與SEQ ID NO. :43具有至少80%同一性的⑶RH2序列和與SEQ ID NO. :44具有至少80%同一性的⑶RH3序列。
66.如權利要求65所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRHl序列與SEQID NO. :42具有至少90%同一性。
67.如權利要求66所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRHl序列與SEQID NO. :42具有100%同一性。
68.如權利要求65-67中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH2序列與SEQ ID NO. :43具有至少90%同一性。
69.如權利要求68所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH2序列與SEQID NO. :43具有100%同一性。
70.如權利要求65-69中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH3序列與SEQ ID NO. :44具有至少90%同一性。
71.如權利要求70所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH3序列與SEQIDNO. :44具有100%同一性。
72.如權利要求50所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述重鏈可變域包含與 SEQ ID NO. :161具有至少80%同一性的CDRHl序列、與SEQ ID NO. :162具有至少80%同一性的⑶RH2序列和與SEQ ID NO. :163具有至少80%同一性的⑶RH3序列。
73.如權利要求72所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRHl序列與SEQID NO. :161具有至少90%同一性。
74.如權利要求73所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRHl序列與SEQID NO. :161 具有 100% 同一性。
75.如權利要求72-74中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH2序列與SEQ ID NO. :162具有至少90%同一性。
76.如權利要求75所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH2序列與SEQID NO. :162 具有 100% 同一性。
77.如權利要求72-76中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH3序列與SEQ ID NO. :163具有至少90%同一性。
78.如權利要求77所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH3序列與SEQID NO. :163 具有 100% 同一性。
79.如權利要求50所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述重鏈可變域包含與 SEQ ID NO. :167具有至少80%同一性的CDRHl序列、與SEQ ID NO. :168具有至少80%同一性的⑶RH2序列和與SEQ ID NO. :169具有至少80%同一性的⑶RH3序列。
80.如權利要求79所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRHl序列與SEQID NO. :166具有至少90%同一性。
81.如權利要求80所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRHl序列與SEQID NO. :166 具有 100% 同一性。
82.如權利要求79-81中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH2序列與SEQ ID NO. :168具有至少90%同一性。
83.如權利要求82所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH2序列與SEQID NO. :168 具有 100% 同一性。
84.如權利要求79-83中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH3序列與SEQ ID NO. :169具有至少90%同一性。
85.如權利要求84所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH3序列與SEQID NO. :169 具有 100% 同一性。
86.如權利要求50所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述重鏈可變域包含與 SEQ ID NO. :173具有至少80%同一性的CDRHl序列、與SEQ ID NO. :174具有至少80%同一性的⑶RH2序列和與SEQ ID NO. :175具有至少80%同一性的⑶RH3序列。
87.如權利要求86所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRHl序列與SEQID NO. :173具有至少90%同一性。
88.如權利要求87所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRHl序列與SEQID NO. :173 具有 100% 同一性。
89.如權利要求87-88中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH2序列與SEQ ID NO. :174具有至少90%同一性。
90.如權利要求89所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH2序列與SEQID NO. :174 具有 100% 同一性。
91.如權利要求87-90中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH3序列與SEQ ID NO. :175具有至少90%同一性。
92.如權利要求91所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH3序列與SEQID NO. :175 具有 100% 同一性。
93.一種分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其包含輕鏈可變域，所述輕鏈可變域具有選自下述的CDR a.CDRLl 序列，其選自 SEQ ID NO. :74 禾口 SEQ ID NO. :75;b.CDRL2 序列，其選自 SEQ ID NO. 76、SEQ ID NO. :77 禾口 SEQ ID N0. :78，禾口 ；c.CDRL3 序列，其選自 SEQ ID N0. 79, SEQ ID NO. :80 禾口 SEQ ID N0. :81。
94.如權利要求93所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包含重鏈可變域，所述重鏈可變域具有選自下述的CDR a.CDRHl 序列，其包含 SEQ ID NO. :82 ；b.CDRH2 序列，其選自 SEQ ID NO. :83、SEQ ID NO. :84、SEQ ID NO. :85, SEQ ID NO. 86 和 SEQ ID NO. :87，和；c.CDRH3 序列，其選自 SEQ ID NO. :88, SEQ ID NO. :89 禾口 SEQ ID NO. :90。
95.如權利要求93或94所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包含 CDRLl、CDRL2 或 CDRL3 中的至少 2 個 CDR。
96.如權利要求95所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包含一個CDRL1、 一個 CDRL2 和一個 CDRL3。
97.如權利要求94所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包含a.CDRLl、CDRL2 或 CDRL3 中的至少 2 個 CDR,和；b.CDRHl、一個 CDRH2 或一個 CDRH3 中的至少 2 個 CDR。
98.如權利要求97所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包含一個CDRL1、 一個 CDRL2 和一個 CDRL3。
99.如權利要求97或98所述的分離的抗體，其中所述抗體包含一個⑶RHl、一個⑶RH2 和一個 CDRH3。
100.一種分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其包含重鏈可變域，所述重鏈可變域具有選自下述的⑶R a.CDRHl 序列，其包含 SEQ ID NO. :82 ；b.CDRH2 序列，其選自 SEQ ID NO. :83、SEQ ID NO. :84、SEQ ID NO. :85, SEQ ID NO. 86 和 SEQ ID NO. . 87，和；c.CDRH3 序列，其選自 SEQ ID NO. :88, SEQ ID NO. :89 禾口 SEQ ID NO. :90。
101.如權利要求100所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包含一個 CDRHl、一個 CDRH2 或一個 CDRH3。
102.如權利要求100所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包含一個 CDRHl、一個 CDRH2 和一個 CDRH3。
103.如權利要求7-102中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其在至少一個 ⑶R中包含至少一個保守氨基酸置換。
104.如權利要求7-102中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其在至少2個 ⑶R中包含至少一個保守氨基酸置換。
105.如權利要求7-102中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其在3個CDR中包含至少一個保守氨基酸置換。
106.如權利要求7-102中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其在至少一個 ⑶R中包含至少2個保守氨基酸置換。
107.如權利要求7-102中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其在至少2個 ⑶R中包含至少2個保守氨基酸置換。
108.如權利要求7-102中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其在3個CDR中包含至少2個保守氨基酸置換。
109.一種分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其能特異性地結(jié)合KAAG1、KAAGl的分泌形式、 KAAGl的胞外部分或其變體，所述抗體包含a.在SEQID NO. 16中定義的輕鏈可變域的3⑶R和在SEQ ID NO. :18中定義的重鏈可變域的3⑶R，b.在SEQID NO. :20中定義的輕鏈可變域的3⑶R和在SEQ ID NO. :22中定義的重鏈可變域的3CDR ；c.在SEQID NO. 中定義的輕鏈可變域的3⑶R和在SEQ ID NO. J6中定義的重鏈可變域的3⑶R ；d.在SEQID NO. :105中定義的輕鏈可變域的3⑶R和在SEQ ID NO. :132中定義的重鏈可變域的3⑶R，e.在SEQID NO. 106中定義的輕鏈可變域的3⑶R和在SEQ ID NO. :133中定義的重鏈可變域的3⑶R，f.在SEQID NO. :107中定義的輕鏈可變域的3⑶R和在SEQ ID N0. :1；34中定義的重鏈可變域的3⑶R，g.在SEQID NO. :108中定義的輕鏈可變域的3⑶R和在SEQ ID NO. :1 中定義的重鏈可變域的3⑶R，h.在SEQID NO. :109中定義的輕鏈可變域的3⑶R和在SEQ ID NO. :153中定義的重鏈可變域的3⑶R，i.在SEQID NO. :110中定義的輕鏈可變域的3CDR和在SEQ ID NO. :135中定義的重鏈可變域的3⑶R，j.在SEQ ID NO. :111中定義的輕鏈可變域的3⑶R和在SEQ ID NO. :136中定義的重鏈可變域的3⑶R，k.在SEQ ID NO. :112中定義的輕鏈可變域的3⑶R和在SEQ ID NO. :149中定義的重鏈可變域的3⑶R，、1.在SEQ ID NO. :113中定義的輕鏈可變域的3⑶R和在SEQ ID NO. :137中定義的重鏈可變域的3⑶R，m.在SEQ ID NO. :114中定義的輕鏈可變域的3⑶R和在SEQ ID NO. :140中定義的重鏈可變域的3⑶R，η.在SEQ ID NO. :115中定義的輕鏈可變域的3⑶R和在SEQ ID NO. :141中定義的重鏈可變域的3⑶R，ο.在SEQ ID NO. :116中定義的輕鏈可變域的3CDR和在SEQ ID NO. :142中定義的重鏈可變域的3⑶R，P.在SEQ ID NO. :117中定義的輕鏈可變域的3⑶R和在SEQ ID NO. :139中定義的重鏈可變域的3⑶R，q.在SEQ ID NO. :119中定義的輕鏈可變域的3CDR和在SEQ ID NO. :143中定義的重鏈可變域的3⑶R，r.在SEQ ID NO. 120中定義的輕鏈可變域的3CDR和在SEQ ID NO. :152中定義的重鏈可變域的3⑶R，s.在SEQ ID NO. :121中定義的輕鏈可變域的3⑶R和在SEQ ID NO. :146中定義的重鏈可變域的3CDR，t.在SEQ ID NO. :122中定義的輕鏈可變域的3⑶R和在SEQ ID NO. :138中定義的重鏈可變域的3⑶R，u.在SEQ ID NO. :123中定義的輕鏈可變域的3⑶R和在SEQ ID NO. :150中定義的重鏈可變域的3⑶R，v.在SEQ ID NO. :1 中定義的輕鏈可變域的3⑶R和在SEQ ID NO. :144中定義的重鏈可變域的3⑶R，w.在SEQ ID NO. :126中定義的輕鏈可變域的3CDR和在SEQ ID NO. :145中定義的重鏈可變域的3⑶R，χ.在SEQ ID NO. :127中定義的輕鏈可變域的3⑶R和在SEQ ID NO. :157中定義的重鏈可變域的3⑶R，y.在SEQ ID NO. 128中定義的輕鏈可變域的3CDR和在SEQ ID NO. :155中定義的重鏈可變域的3⑶R，ζ.在SEQ ID NO. :1 中定義的輕鏈可變域的3⑶R和在SEQ ID NO. :156中定義的重鏈可變域的3CDR，或；aa.在SEQ ID NO. :130中定義的輕鏈可變域的3⑶R和在SEQ ID NO. :151中定義的重鏈可變域的3⑶R。
110.如權利要求1-109中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其特征在于，它能誘導表達KAAGl的腫瘤細胞的裂解。
111.如權利要求110所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中KAAGl是在表達KAAGl 的腫瘤細胞的表面處表達。
112.如權利要求1-109中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其特征在于，它能減少表達KAAGl的腫瘤細胞的擴散。
113.如權利要求112所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中KAAGl是在表達KAAGl 的腫瘤細胞的表面處表達。
114.如權利要求112所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述表達KAAGl的腫瘤細胞的特征在于不依賴于錨著生長。
115.如權利要求1-109中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其特征在于，它能減少或損害表達KAAGl的腫瘤的形成。
116.如權利要求115所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中KAAGl是在表達KAAGl 的腫瘤細胞的表面處表達。
117.如權利要求1-109中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其用于治療包含表達KAAGl的腫瘤細胞的癌癥。
118.如權利要求117所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中KAAGl是在表達KAAGl 的腫瘤細胞的表面處表達。
119.如權利要求1-109中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其用于檢測包含表達KAAGl的腫瘤細胞的癌癥。
120.如權利要求119所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中KAAGl是在表達KAAGl 的腫瘤細胞的表面處表達。
121.如權利要求1-120中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包含恒定區(qū)的氨基酸。
122.如權利要求121所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述恒定區(qū)的氨基酸來自人抗體。
123.如權利要求1-122中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其包含人抗體的框架氨基酸。
124.如權利要求1-123中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗原結(jié)合片段是 scFv、Fab、Fab'或(Fab' )2。
125.如權利要求1-124中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體選自單克隆抗體、多克隆抗體、嵌合抗體和人源化抗體或它們的抗原結(jié)合片段。
126.如權利要求125所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體是單克隆抗體、嵌合抗體、人源化抗體或它們的抗原結(jié)合片段。
127.—種分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其能與如權利要求1-126中任一項所述的抗體或抗原結(jié)合片段競爭。
128.如權利要求1-127中任一項所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體綴合可檢測部分或細胞毒性部分。
129.—種核酸，其編碼能特異性地結(jié)合KAAGl的抗體的輕鏈可變域或重鏈可變域。
130.如權利要求1 所述的核酸，其中所述抗體能誘導表達KAAGl的腫瘤細胞的殺死。
131.如權利要求1 所述的核酸，其中所述抗體能減少表達KAAGl的腫瘤細胞的擴散。
132.如權利要求1 所述的核酸，其中所述抗體能減少或損害表達KAAGl的腫瘤的形成。
133.—種編碼輕鏈可變域的核酸，所述輕鏈可變域包含a.CDRLl 序列，其選自 SEQ ID NO. :74 禾口 SEQ ID NO. :75;b.CDRL2 序列，其選自 SEQ ID NO. 76、SEQ ID NO. :77 禾口 SEQ ID NO. :78，或;c.CDRL3 序列，其選自 SEQ ID NO. 79、SEQ ID NO. :80 禾口 SEQ ID N0. :81。
134.如權利要求133所述的核酸，其中所述輕鏈可變域包含⑶RL1、⑶RL2或⑶RL3中的至少2個⑶R。
135.如權利要求134所述的核酸，其中所述輕鏈可變域包含一個⑶RL1、一個⑶RL2和一個 CDRL3。
136.—種編碼重鏈可變域的核酸，所述重鏈可變域包含a.CDRHl 序列，其包含 SEQ ID NO. :82 ；b.CDRH2 序列，其選自 SEQ ID NO. :83、SEQ ID NO. :84、SEQ ID NO. :85, SEQ ID NO. 86 和 SEQ ID NO. :87，或；c.CDRH3 序列，其選自 SEQ ID NO. 88, SEQ ID NO. :89 禾口 SEQ ID NO. :90。
137.如權利要求136所述的核酸，其中所述重鏈可變域包含⑶RH1、⑶RH2或⑶RH3中的至少2個⑶R。
138.如權利要求137所述的核酸，其中所述重鏈可變域包含一個⑶RH1、一個⑶RH2和一個 CDRH3。
139.如權利要求133-138中任一項所述的核酸，其編碼包含至少一個保守氨基酸置換的 CDR。
140.如權利要求133-138中任一項所述的核酸，其編碼在至少2個⑶R中包含至少一個保守氨基酸置換的CDR。
141.如權利要求133-138中任一項所述的核酸，其編碼在3個⑶R中包含至少一個保守氨基酸置換的CDR。
142.如權利要求133-138中任一項所述的核酸，其編碼在至少一個⑶R中包含至少2 個保守氨基酸置換的CDR。
143.如權利要求133-138中任一項所述的核酸，其編碼在至少2個⑶R中包含至少2 個保守氨基酸置換的CDR。
144.如權利要求133-138中任一項所述的核酸，其編碼在3個⑶R中包含至少2個保守氨基酸置換的CDR。
145.一種編碼輕鏈可變域的核酸，所述輕鏈可變域與選自下述的序列具有至少80%序列同一性=SEQIDNO. :16, SEQ ID NO.:20, SEQ ID NO:24, SEQIDNO.:105, SEQ IDNO.:106, SEQIDNO.:107, SEQID N0.:108, SEQ ID NO.:109, SEQIDNO.:110, SEQ IDNO.:111, SEQIDNO.:112, SEQID NO.:113、SEQ ID NO.:114、 SEQIDNO.:115, SEQ IDNO.:116, SEQIDNO.:117, SEQID NO.:118、SEQ ID NO.:119, SEQIDNO.:120, SEQ IDNO.:121, SEQIDNO.:122, SEQID NO.:123, SEQ ID NO.:124, SEQIDNO.:125, SEQ IDNO.:126,SEQIDNO.:127,SEQID NO.128、SEQ ID NO.129、SEQ ID NO.130 和 SEQ IDNO.:131。
146. 一種編碼重i鏈可變域的核酸，所述重鏈可變域與選自下述的序列具有至少80 %序列同一性=SEQIDNO. :18, SEQ ID NO22 λ SECiID NO.:26, SEQIDNO.:132, SEQIDNO.:133, SEQIDN0.:134, SEQID NO.135、SEQIDNO.:136, SEQIDNO.:137, SEQIDNO.:138, SEQIDNO.:139, SEQID NO.140、SEQIDNO.:141, SEQIDNO.:142, SEQIDNO.:143, SEQIDNO.:144, SEQID NO.145、SEQIDNO.:146, SEQIDNO.:147, SEQIDNO.:148, SEQIDNO.:149, SEQID NO.150、SEQIDNO.:151, SEQIDNO.:152, SEQIDNO.:153,SEQIDNO.:154,SEQID NO.155、SEQIDNO.156、SEQIDNO.:157。
147. 一種載體，其包含如權利要求129-146中任--項所述的核醛S
148.如權利要求147所述的載體，其中所述載體是表達載體。
149.一種分離的細胞，其包含如權利要求129-146中任一項所述的核酸。
150.如權利要求149所述的分離的細胞，其中所述細胞包含編碼輕鏈可變域的核酸和編碼重鏈可變域的核酸。
151.如權利要求150所述的分離的細胞，其中所述細胞能表達、裝配和/或分泌抗體或其抗原結(jié)合片段。
152.一種分離的細胞，其包含或表達如權利要求1-128中任一項所述的抗體或抗原結(jié)合片段。
153.如權利要求152所述的分離的細胞，其中所述細胞包含編碼輕鏈可變域的核酸和編碼重鏈可變域的核酸。
154.如權利要求153所述的分離的細胞，其中所述細胞能表達、裝配和/或分泌抗體或其抗原結(jié)合片段。
155.—種藥物組合物，其包含如權利要求1-128中任一項所述的抗體或抗原結(jié)合片段和藥學上可接受的載體。
156.—種組合物，其包含如權利要求1-128中任一項所述的抗體或抗原結(jié)合片段和載體。
157.如權利要求1-128中任一項所述的分離的抗體在癌癥治療中的應用，所述癌癥包含表達KAAGl的細胞。
158.如權利要求157所述的應用，其中所述癌癥選自卵巢癌、皮膚癌、腎癌、結(jié)直腸癌、肉瘤、白血病、腦腫瘤、甲狀腺腫瘤、乳腺癌、前列腺癌、食道腫瘤、膀胱腫瘤、肺腫瘤以及頭和頸腫瘤。
159.如權利要求158所述的應用，其中所述癌癥被表征為惡性的。
160.如權利要求1-128中任一項所述的分離的抗體在癌癥診斷中的應用，所述癌癥包含表達KAAGl的細胞。
161.如權利要求160所述的應用，其中所述表達KAAGl的細胞的特征在于不依賴于錨著生長。
162.如權利要求160所述的應用，其中所述癌癥選自卵巢癌、皮膚癌、腎癌、結(jié)直腸癌、肉瘤、白血病、腦腫瘤、甲狀腺腫瘤、乳腺癌、前列腺癌、食道腫瘤、膀胱腫瘤、肺腫瘤以及頭和頸腫瘤。
163.如權利要求162所述的應用，其中所述癌癥被表征為惡性的。
164.如權利要求1-1 中任一項所述的分離的抗體在表達KAAGl的腫瘤細胞的檢測中的應用。
165.如權利要求164所述的應用，其中KAAGl是在表達KAAGl的腫瘤細胞的表面處表達。
166.如權利要求164所述的應用，其中所述腫瘤細胞選自卵巢癌細胞、皮膚癌細胞、 腎癌細胞、結(jié)直腸癌細胞、肉瘤細胞、白血病細胞、腦腫瘤細胞、甲狀腺腫瘤細胞、乳腺癌細胞、前列腺癌細胞、食道腫瘤細胞、膀胱腫瘤細胞、肺腫瘤細胞以及頭和頸腫瘤細胞。
167.如權利要求166所述的應用，其中所述癌癥細胞被表征為惡性的。
168.如權利要求166所述的應用，其中所述癌癥細胞的特征在于不依賴于錨著生長。
169.—種治療包含表達KAAGl的細胞的癌癥的方法，所述方法包括，將如權利要求 1-128中任一項所述的抗體施用給有需要的哺乳動物。
170.如權利要求169所述的方法，其中所述癌癥選自卵巢癌、皮膚癌、腎癌、結(jié)直腸癌、肉瘤、白血病、腦腫瘤、甲狀腺腫瘤、乳腺癌、前列腺癌、食道腫瘤、膀胱腫瘤、肺腫瘤以及頭和頸腫瘤。
171.—種檢測包含表達KAAGl的細胞的腫瘤的方法，所述方法包括，將如權利要求 1-128中任一項所述的抗體施用給有需要的哺乳動物。
172.如權利要求171所述的方法，其中KAAGl是在表達KAAGl的細胞的表面處表達。
173.如權利要求172所述的方法，其中所述癌癥選自卵巢癌、皮膚癌、腎癌、結(jié)直腸癌、肉瘤、白血病、腦腫瘤、甲狀腺腫瘤、乳腺癌、前列腺癌、食道腫瘤、膀胱腫瘤、肺腫瘤以及頭和頸腫瘤。
174.一種用于檢測KAAGl (SEQ ID NO. :2)或與SEQ ID NO. :2具有至少80%序列同一性的KAAGl變體的方法，所述方法包括，使表達KAAGl或KAAGl變體的細胞或者包含或疑似包含KAAGl或KAAGl變體的樣品接觸如權利要求1_128中任一項所述的抗體，并測量結(jié)合。
175.如權利要求174所述的方法，其中所述樣品是來自哺乳動物。
176.如權利要求175所述的方法，其中所述哺乳動物具有或疑似具有癌癥。
177.如權利要求174-176中任一項所述的方法，其中所述樣品是從所述哺乳動物得到的血清樣品、血漿樣品或血液樣品。
178.如權利要求174-176中任一項所述的方法，其中所述樣品是從所述哺乳動物得到的組織樣品。
179.如權利要求174所述的方法，其中所述樣品是細胞培養(yǎng)物或上清液。
180.如權利要求174-179中任一項所述的方法，其包括，定量與KAAGl或KAAGl變體結(jié)合的抗體的量。
181.—種試劑盒，其包含如權利要求1-129中任一項所述的抗體。
182.分泌型KAAGl或KAAGl的胞外區(qū)域在抗體制備中的應用。
183.如權利要求182所述的應用，其中KAAGl缺少信號肽。
184.如權利要求182所述的應用，其中KAAGl缺少氨基酸1_30。
185.包含SEQID NO. :2的至少10個氨基酸的表位用于產(chǎn)生抗體的應用，所述抗體用于診斷或治療癌癥。
186.如權利要求185所述的應用，其中所述表位是來自KAAGl的胞外區(qū)域。
187.一種用于產(chǎn)生針對分泌型KAAGl或KAAGl的胞外區(qū)域的抗體的組合物，所述組合物包含在SEQ ID NO. 2的氨基酸30-84中含有的KAAGl的表位和載體。
188.—種用于產(chǎn)生針對分泌型KAAGl或KAAGl的胞外區(qū)域的抗體的藥物組合物，所述組合物包含在SEQ ID NO. :2的氨基酸30-84中含有的KAAGl的表位和藥學上可接受的載體。
189.一種用于產(chǎn)生針對分泌型KAAGl或KAAGl的胞外區(qū)域的抗體的方法，所述方法包括，施用多肽，所述多肽包含在SEQ ID NO. :2的氨基酸30-84中含有的KAAGl的表位，其中所述表位缺少KAAGl信號肽。
190.在SEQID NO. :2的氨基酸30-84中含有的KAAGl的表位用于產(chǎn)生抗體的應用，所述抗體針對分泌型KAAGl或KAAGl的胞外區(qū)域。
191.如權利要求1-128中任一項所述的分離的抗體用于減少腫瘤擴散、腫瘤侵入或腫瘤形成或用于誘導腫瘤裂解的應用，其中所述腫瘤表達KAAGl或KAAGl變體。
192.根據(jù)權利要求191所述的應用，其中所述腫瘤是惡性腫瘤。
193.根據(jù)權利要求192所述的應用，其中所述惡性腫瘤具有轉(zhuǎn)移能力。
194.根據(jù)權利要求191所述的應用，其中所述腫瘤包含特征在于不依賴于錨著生長的腫瘤細胞。
195.—種用于減少腫瘤擴散、腫瘤侵入、腫瘤形成或用于誘導腫瘤裂解的方法，所述方法包括，將如權利要求1-128中任一項所述的分離的抗體施用給有需要的哺乳動物，其中所述腫瘤表達KAAGl或KAAGl變體。
196.如權利要求195所述的方法，其中所述有需要的哺乳動物具有惡性腫瘤。
197.如權利要求196所述的方法，其中所述惡性腫瘤具有轉(zhuǎn)移能力。
198.選自下述的核酸損害表達KAAGl的腫瘤細胞的遷移或存活的應用SEQID NO. USEQ ID NO. 1的10至884個核苷酸的片段和補體。
199.如權利要求198所述的應用，其中所述表達KAAGl的腫瘤細胞的特征在于不依賴于錨著生長。
全文摘要
描述了特異性地結(jié)合KAAG1的新的單克隆抗體。在有些實施方案中，所述抗體阻滯KAAG1的生物活性，且可用于某些癌癥的組合物中，更具體地，所述癌癥是具有KAAG1的細胞表面表達增加的癌癥，諸如卵巢癌、腎癌、肺癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌、腦癌和前列腺癌以及黑素瘤。本發(fā)明也涉及表達單克隆抗體和抗原結(jié)合片段(諸如人源化的和嵌合的抗體)的細胞。另外，還公開了使用所述抗體和片段檢測和治療癌癥的方法。
文檔編號A61K48/00GK102245773SQ200980143778
公開日2011年11月16日 申請日期2009年11月3日 優(yōu)先權日2008年11月3日
發(fā)明者G·B·特倫布利, M·菲利翁, T·蘇雷 申請人:加拿大國家研究委員會, 阿萊斯亞生物療法股份有限公司