專利名稱：癌癥的抑制的制作方法
癌癥的抑制本發(fā)明涉及常見癌癥，特別是結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、乳腺癌和肺癌的生長(zhǎng)、維持 和進(jìn)展的抑制。結(jié)腸直腸癌在美國(guó)男性和女性兩者中都是第三大常見癌癥，根據(jù)世界衛(wèi)生組織在 2003年4月關(guān)于全球患癌率的報(bào)告，每年有超過(guò)940000新病例被診斷并且每年全世界報(bào) 道近500，000例死亡。結(jié)腸癌的總體5年存活率大約為60%，并且在美國(guó)每年有近60，000 人死于該疾病。目前采用的療法主要根據(jù)結(jié)腸或直腸中腫瘤的位置和疾病階段，并且可以包括a) 外科手術(shù)，b)化療，c)生物療法或d)放射療法。去除原發(fā)腫瘤的外科手術(shù)是主要的一線治 療。然而，外科手術(shù)的常見不良副作用包括手術(shù)出血、腿部血塊以及手術(shù)過(guò)程中對(duì)鄰近器官 的損害。手術(shù)選擇包括⑴腸切除，其包括切入腹部以達(dá)到受癌影響的結(jié)腸或直腸區(qū)域。 外科醫(yī)生去除癌及其附近的結(jié)腸或直腸的部分。然后，將結(jié)腸或直腸的兩個(gè)健康末端重新 縫合在一起；(ii)肝切除，其包括去除已經(jīng)從結(jié)腸直腸區(qū)域擴(kuò)散至肝的轉(zhuǎn)移灶以及癌附近 的肝部分。多達(dá)一半的肝可以被去除，只要剩余部分是健康的。破壞肝中癌細(xì)胞的兩種其他 方法包括放射波(射頻消蝕)和熱(微波凝固)，和(iii)冷凍手術(shù)(還稱為冷凍療法)， 其采用液氮冷凍并破壞已經(jīng)擴(kuò)散至肝的結(jié)腸直腸癌。其在肝中腫瘤尺寸小時(shí)被使用。化療通常用作針對(duì)少數(shù)患者外科手術(shù)的輔助，通常針對(duì)腫瘤已經(jīng)擴(kuò)散至淋巴結(jié)、 化療對(duì)其益處已經(jīng)明確的那些患者。然而，化療副作用包括惡心、嘔吐、食欲不振、脫發(fā)、 口腔潰瘍、手足疹，還包括感染風(fēng)險(xiǎn)、輕傷的出血或青腫、以及貧血相關(guān)的疲勞?；熆?以在多種情況下使用(i)首選化療通常在結(jié)腸直腸癌晚期并已擴(kuò)散至身體其他部分時(shí)使 用。這種情況下，外科手術(shù)不能清除癌，所以此時(shí)醫(yī)生通常建議化療，化療可以收縮腫瘤結(jié) 節(jié)、緩解癥狀并延長(zhǎng)壽命；(ii)輔助化療在癌已經(jīng)被手術(shù)去除之后給予化療時(shí)采用。外科 手術(shù)可能不會(huì)清除所有癌，因此輔助化療治療通常用于殺傷可能被漏掉的任何癌細(xì)胞，例 如可能已經(jīng)轉(zhuǎn)移或擴(kuò)散至肝的細(xì)胞；和(iii)新輔助化療可以在外科手術(shù)之前采用以收縮 腫瘤，以便外科醫(yī)生能夠完全去除腫瘤而產(chǎn)生較少并發(fā)癥?；熗ǔＥc放射一起使用以使 放射更有效。生物療法可以被指定用于患有已經(jīng)擴(kuò)散的癌癥的人。目前療法包括使用(i)生 物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑，其不直接破壞癌，而是觸發(fā)免疫系統(tǒng)反應(yīng)對(duì)抗腫瘤。生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑包括細(xì) 胞因子，例如干擾素和白介素。然而，該策略包括通過(guò)注射或輸注的大施用劑量的使用，希 望刺激免疫系統(tǒng)的細(xì)胞更有效地發(fā)揮作用。此外，生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑的使用通常伴隨流感樣 癥狀，包括發(fā)熱、寒戰(zhàn)、惡心和食欲不振。其他不希望的副作用包括注射部位皮疹或腫脹、 治療導(dǎo)致的血壓下降、和疲勞；(ii)集落刺激因子，其刺激產(chǎn)生骨髓細(xì)胞，例如紅細(xì)胞和白 細(xì)胞和血小板。因此，集落刺激因子不直接影響腫瘤，而是在癌癥治療過(guò)程中幫助支持免疫 系統(tǒng)。但遺憾的是，集落刺激因子的使用伴隨不希望的副作用，例如骨痛、疲勞、發(fā)熱和食欲 不振；和(iii)腫瘤疫苗，其促使免疫系統(tǒng)識(shí)別癌細(xì)胞。所述疫苗通常在癌癥發(fā)作之后采 用，因此是抑制性而非預(yù)防性的。效力差，并且腫瘤疫苗的使用伴隨肌肉疼痛和低熱。
結(jié)腸直腸癌治療的主要困難在于20-25%患者在最初診斷時(shí)具有臨床可檢測(cè)的肝 轉(zhuǎn)移，并且另外有40-50%患者在初次手術(shù)之后三年內(nèi)發(fā)展肝轉(zhuǎn)移，通常轉(zhuǎn)移性疾病首先在 肝中發(fā)展。除了非黑素瘤皮膚癌之外，乳腺癌是女性中最常見的癌癥類型。在2007年，估計(jì) 美國(guó)女性中有近180，000例侵襲性乳腺癌新病例被診斷。女性發(fā)生侵襲性乳腺癌的終生風(fēng) 險(xiǎn)是約1/8(13% )0目前療法包括外科手術(shù)、放射療法、化療、激素療法和生物療法。選擇一種療法而 不選擇另一種療法涉及如下考慮腫瘤尺寸和位置，組織學(xué)因素(例如淋巴侵襲和組織學(xué) 亞型確定)，疾病階段或程度，以及患者年齡和健康狀況。外科手術(shù)選擇包括乳房切除術(shù)和腫塊切除術(shù)(還稱為保乳療法或乳房部分切除 術(shù))，去除或不去除淋巴結(jié)。不幸的是，經(jīng)歷乳房切除術(shù)的患者通常遭受下述一種或多種 傷口感染和膿腫、皮瓣壞死、胸壁感覺異常、乳房假體綜合征、術(shù)后疼痛綜合征、血清腫或淋 巴水腫。類似地，腫塊切除術(shù)伴隨的并發(fā)癥包括腋靜脈損傷或血栓形成、血清腫形成、淋巴 水腫、肩運(yùn)動(dòng)受損、臂叢損傷和胸壁痛。放射療法伴隨如下并發(fā)癥乳房軟組織壞死、長(zhǎng)期乳房水腫、肋骨骨折、肩活動(dòng)性 降低、具有感覺異常和臂痛的臂叢病變、淋巴水腫、血管肉瘤、肺癌、冠狀動(dòng)脈疾病和癥狀性 肺炎。然而，目前的化療選擇伴隨不希望的副作用，例如惡心、脫發(fā)、絕經(jīng)期提前、熱潮 紅、疲勞和暫時(shí)降低的血球計(jì)數(shù)。此外，更嚴(yán)重的副作用包括肝毒性、出血性膀胱炎、閉經(jīng)、 小腦共濟(jì)失調(diào)、心肌功能不全、外周神經(jīng)病變、骨髓抑制、神經(jīng)毒性、禿頂和胸膜滲漏。迄今，激素療法集中于Tamoxifen 的使用和/或芳香酶抑制劑例如Arimidex 、 Aromasir^^^ni^mara 的使用。這些治療分子通過(guò)抑制激素特別是雌激素活性而起作用， 并因此抑制可在乳腺癌手術(shù)后保留的乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。但不幸的是，激素療法伴隨不希 望的副作用，例如熱潮紅和陰道干燥。特別是已經(jīng)顯示Tamoxifen 治療增加子宮內(nèi)膜癌風(fēng) 險(xiǎn)、誘導(dǎo)圍絕經(jīng)期癥狀并增加發(fā)展白內(nèi)障的風(fēng)險(xiǎn)。迄今，生物療法集中于Here印tin 的使用。然而，該治療分子的使用伴隨如下不 良作用心臟毒性、發(fā)熱、寒戰(zhàn)、惡心、嘔吐，并且特別是在初次輸注之后可發(fā)生疼痛。前列腺癌是死于癌癥的美國(guó)男性中第二大死亡原因，并且是美國(guó)男性中診斷的最 常見癌癥。在美國(guó)，估計(jì)10個(gè)男性中有一個(gè)將在其生命中發(fā)展前列腺癌。與其他癌癥類型一樣，可用的治療根據(jù)多種因素，例如癌癥級(jí)別和階段，患者年齡 和健康狀況。目前療法包括(i)基于PSA血液測(cè)試的觀察等待，PSA血液測(cè)試被定期進(jìn)行 以檢查患者病癥還未惡化。該方法被推薦用于影響老年男性的小的、緩慢生長(zhǎng)的、非侵略性 癌癥，其中所述癌癥不影響他們的預(yù)期壽命；(ii)前列腺切除術(shù)(即，去除前列腺)，但是其 伴隨如下副作用膀胱控制問(wèn)題、漏尿、陽(yáng)痿和吻合口狹窄；(iii)放射療法，例如使用高功 率X射線的外部束放射療法(EBRT)，但是該療法伴隨直腸問(wèn)題、持續(xù)出血和直腸潰瘍?？?選地，可以使用直接植入前列腺的放射性粒源植入體(radioactive seed implant)。該療 法還稱為短距離放射療法，并且遞送比通常用外部束所實(shí)現(xiàn)的更低的放射劑量(在較長(zhǎng)時(shí) 段內(nèi))。不幸的是，該類型的療法伴隨諸如緩慢且疼痛的排尿和陽(yáng)痿等并發(fā)癥；(iv)激素療 法，其被設(shè)計(jì)為預(yù)防雄性激素刺激癌細(xì)胞生長(zhǎng)。這通常是通過(guò)化學(xué)抑制雄性激素分泌或通過(guò)外科手術(shù)方式(睪丸去除)來(lái)實(shí)現(xiàn)。不幸的是，這些療法伴隨如下副作用乳房增大、性 欲降低、陽(yáng)痿、熱潮紅、體重增加和肌肉和骨質(zhì)量減少。此外，已經(jīng)顯示一些激素療法藥物導(dǎo) 致惡心、腹瀉、疲勞和肝損傷；(V)化療-采用與上文結(jié)腸直腸癌、乳腺癌或前列腺癌上下文 中描述的相同類型的藥物；和(Vi)冷凍療法，其通過(guò)冷凍受影響組織而破壞癌細(xì)胞。遺憾 的是，該療法受到限制，因?yàn)殡y以監(jiān)測(cè)冷凍過(guò)程的程度，經(jīng)常導(dǎo)致對(duì)膀胱周圍組織的損傷和 長(zhǎng)期并發(fā)癥(例如，對(duì)直腸或控制排尿的肌肉的損傷)。肺癌是世界上男性和女性中癌癥相關(guān)死亡的首要原因。世界范圍內(nèi)，肺癌依然是 最常見的惡性疾病，估計(jì)每年有104萬(wàn)新病例，這占被診斷的癌癥新病例的12. 8%。肺癌導(dǎo) 致世界上每年921，000例死亡，占癌癥相關(guān)死亡的近18%。目前肺癌療法包括單獨(dú)或組合的外科手術(shù)、放射療法和化療。當(dāng)采用所述療法時(shí)， 醫(yī)生考慮肺癌類型(小細(xì)胞或非小細(xì)胞)，腫瘤尺寸和位置，腫瘤階段(肺之外是否存在 轉(zhuǎn)移)，和患者的健康狀況。對(duì)于非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)，目前可用的治療包括(i)化療-不幸的是，NSCLC 對(duì)化療僅中度敏感。單劑療法應(yīng)答率大約為15%，較新的藥劑(例如Gemcitabine 、 PaclitaxelT\Docetaxel ,Vinorelbine )具有略高的應(yīng)答率 Q0_25%)。此外，化療伴隨 如下并發(fā)癥血細(xì)胞數(shù)目減少、惡心、嘔吐、腹瀉、口瘡和口腔潰瘍、脫發(fā)和疲勞；(ii)生物 療法-最近的研究努力重點(diǎn)集中于鑒定分子靶標(biāo)并利用該認(rèn)識(shí)來(lái)發(fā)展分子靶向療法。雖然 幾種分鐘靶向療法目前被開發(fā)并在NSCLC中測(cè)試，但這些療法伴隨不希望的副作用，包括 流感樣癥狀，例如寒戰(zhàn)、發(fā)熱、肌肉疼痛、疲勞、食欲不振、惡心、嘔吐和腹瀉；(iii)放射療 法。該類型療法通常用作外科手術(shù)的輔助，或者在因?yàn)橛邢薜姆蝺?chǔ)備或存在合并癥而不能 手術(shù)切除時(shí)單獨(dú)使用。在早期NSCLC中，單獨(dú)的放射療法僅伴隨12-16%的5年后存活率。 遺憾的是，并發(fā)癥是常見的，并且包括惡心、疲勞、皮膚反應(yīng)、脫發(fā)、持續(xù)咳嗽、咽喉干燥或 疼痛、以及吞咽困難；(iv)聯(lián)合化療放療-最近研究已經(jīng)顯示，當(dāng)用共存(而非順序)的基 于鉬的化療和放射療法治療時(shí)，具有不可切切除的III期疾病的患者中有限的存活。然而， 與上述癌癥類型一樣，化療和放療的使用具有許多不希望的副作用；(ν)外科手術(shù)-這通常 在腫瘤處于早期和/或腫瘤還未擴(kuò)散時(shí)采用。實(shí)例包括楔形切除術(shù)，其包括去除三角形的 組織薄片。楔形切除術(shù)被用來(lái)去除腫瘤及其周圍的小量正常組織。當(dāng)處理較大量組織時(shí)，稱 為分段切除；葉切除術(shù)，其包括肺的整個(gè)葉(段)的去除；和肺切除術(shù)，其包括一個(gè)完整肺 的去除。這些治療介入之后遭遇的副作用包括疼痛、感染，還包括肺炎、出血、血塊和其 他感染。此外，手術(shù)期間的死亡率肺切除術(shù)是6%，葉切除術(shù)是3%，而肺段切除術(shù)是1 %。對(duì)于小細(xì)胞肺癌(SCLC)，目前可用的治療包括(i)化療-單劑化療顯示范圍從 17%至50%的應(yīng)答率。聯(lián)合化療具有良好的應(yīng)答率和存活率，但是主要副作用包括骨髓 抑制、腎毒性、腫瘤溶解綜合征(特征為高尿酸血癥、高磷酸鹽血癥、低血鈣癥、脫水和血 鉀過(guò)多癥)、脊髓受壓和低血鈉；(ii)放射療法-該療法僅用于減輕癥狀，并且患者一定會(huì) 復(fù)發(fā)；(iii)外科手術(shù)-大部分SCLC患者非手術(shù)治療。例外是具有局限于肺而沒(méi)有涉及任 何淋巴結(jié)的非常早期疾病的相對(duì)小數(shù)目的患者(< 5% )。此類患者通常在最初診斷程序 時(shí)經(jīng)歷肺腫瘤切除術(shù)。然而，即使對(duì)于這些患者，單獨(dú)的外科手術(shù)被認(rèn)為不是治愈性的。
具有復(fù)發(fā)型SCLC的患者具有極差的預(yù)后，大約65-70 %的SCLC患者在展示時(shí)具有 彌散的疾病。擴(kuò)散階段的SCLC目前是不可治愈的，并且具有擴(kuò)散性疾病的患者的中值存活時(shí)間小于1年。即使呈現(xiàn)局部疾病(即，局限期)的患者，其中值存活時(shí)間小于2年。SCLC 的5年存活率小于20%。就上述討論的目前可用的全部療法(對(duì)于討論的癌癥類型的每一個(gè)_結(jié)腸直腸 癌、乳腺癌、前列腺癌和肺癌)而言，存在另一個(gè)問(wèn)題，即，腫瘤溶解綜合征(TLS)。TLS是非 常嚴(yán)重且有時(shí)威脅生命的癌癥療法并發(fā)癥。其可以被定義為自發(fā)的或治療相關(guān)的腫瘤壞死 或爆發(fā)性細(xì)胞凋亡導(dǎo)致的代謝異常集合。TLS患者中觀察到的代謝異常包括血鉀過(guò)多癥、 高尿酸血癥和高磷酸鹽血癥與繼發(fā)性低血鈣癥；并且可以導(dǎo)致急性腎衰竭(ARF)。癌癥(尤其是結(jié)腸直腸癌、乳腺癌、前列腺癌和肺癌)繼續(xù)成為全球范圍內(nèi)動(dòng)物保 健的主要問(wèn)題。因此，本領(lǐng)域存在對(duì)解決上述問(wèn)題的一個(gè)或多個(gè)的替代和/或改良的癌癥 治療劑和療法的需求。本發(fā)明通過(guò)提供新一類非細(xì)胞毒性抗癌劑而解決了所述問(wèn)題的一個(gè)或多個(gè)。更具體說(shuō)，本發(fā)明第一方面提供了用于治療癌癥的多肽，所述多肽包括a.非細(xì)胞毒性蛋白酶，所述蛋白酶能夠在生長(zhǎng)激素分泌細(xì)胞中切割細(xì)胞外融合器 (exocytic fusion apparatus)的胃白；b.靶向部分(TM)，其能夠與生長(zhǎng)激素分泌細(xì)胞上的結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合，所述結(jié)合位點(diǎn) 能夠經(jīng)歷胞吞作用以被并入所述生長(zhǎng)激素分泌細(xì)胞的內(nèi)體；和c.易位結(jié)構(gòu)域，其能夠從所述內(nèi)體內(nèi)、跨內(nèi)體膜和進(jìn)入所述生長(zhǎng)激素分泌細(xì)胞的 胞質(zhì)溶膠中易位所述蛋白酶。使用中，本發(fā)明多肽結(jié)合生長(zhǎng)激素分泌細(xì)胞。此后，易位組分導(dǎo)致蛋白酶組分轉(zhuǎn)運(yùn) 入生長(zhǎng)激素分泌細(xì)胞的胞質(zhì)溶膠。最后，一旦在內(nèi)部，蛋白酶抑制生長(zhǎng)激素分泌細(xì)胞的細(xì)胞 外融合過(guò)程。因此，通過(guò)失活生長(zhǎng)激素分泌細(xì)胞的細(xì)胞外融合器，本發(fā)明多肽抑制生長(zhǎng)激素 從其釋放/分泌。本發(fā)明多肽的‘生物活性’組分由非細(xì)胞毒性蛋白酶提供。這一獨(dú)特的蛋白酶 組通過(guò)蛋白酶切割稱為SNARE蛋白的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(例如，SNAP-25、VAMP或突觸融合 蛋白)而發(fā)揮作用-參見Gerald K(2002) "Cell and Molecular Biology (細(xì)胞分子生 物學(xué))，，(第四版)John Wiley &Sons, Inc0首字母縮寫SNARE源自術(shù)語(yǔ)可溶性NSF附著 受體(Soluble NSFAttachment Receptor)，其中NSF指N-乙基馬來(lái)酰亞胺-敏感因子 (N-ethylmaleimide-Sensitive Factor)。SNARE蛋白是細(xì)胞內(nèi)囊泡形成以及由此通過(guò)囊泡 轉(zhuǎn)運(yùn)從細(xì)胞分泌分子所必不可少的。因此，一旦被遞送至預(yù)期靶細(xì)胞，則非細(xì)胞毒性蛋白酶 能夠抑制靶細(xì)胞的細(xì)胞分泌。本發(fā)明多肽結(jié)合的主要靶細(xì)胞是分泌生長(zhǎng)激素正常的、非病態(tài)的、非癌細(xì)胞。然 而，這些細(xì)胞不同于根據(jù)本發(fā)明治療的最終的‘下游’癌細(xì)胞。本發(fā)明提供能夠(并用于)減少/最小化生長(zhǎng)激素和/或胰島素樣生長(zhǎng)因子 (IGF-I)的全身或血清水平的多肽。還提供了用于減少/最小化腫瘤溶解綜合征(TLS)的 多肽。本發(fā)明多肽特別適合用于治療以下的一種或多種結(jié)腸直腸癌、乳腺癌、前列腺癌 和/或肺癌(例如SCLC或NSCLC)；包括它們的轉(zhuǎn)移、癌前狀態(tài)及其癥狀。就這方面而言， ‘治療’包括減少、預(yù)防或消除局部、區(qū)域或體循環(huán)中的癌細(xì)胞及其擴(kuò)散。因此，在本發(fā)明的一個(gè)相關(guān)方面，提供了用于治療患者癌癥的方法，所述方法包括向患者施用治療有效量的本發(fā)明多肽。本發(fā)明還提供了用于減少患者中生長(zhǎng)激素和/或 IGF-I水平(優(yōu)選全身和/或血清水平)的方法，所述方法包括向患者施用治療有效量的本 發(fā)明多肽。作為實(shí)例，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明允許保持生長(zhǎng)激素基礎(chǔ)水平在約lOng/ml、 優(yōu)選小于6ng/ml、更優(yōu)選小于4或5ng/ml的閾值。在正常人中，每日生長(zhǎng)激素水平可以在 睡眠開始后約1小時(shí)達(dá)到峰值，水平約35ng/ml。就這一點(diǎn)而言，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明 允許所述峰值被控制在約25ng/ml、優(yōu)選小于20ng/ml、更優(yōu)選小于15ng/ml的閾值。還提 供了用于減少/最小化腫瘤溶解綜合征(TLS)的方法。不希望受任何理論束縛，本發(fā)明人相信升高的生長(zhǎng)激素全身水平導(dǎo)致全身IGF-I 的水平變得升高，并且后者導(dǎo)致增加的IGF-IR活化和癌基因活化的伴隨增加，這轉(zhuǎn)而導(dǎo)致 增加的細(xì)胞增殖和腫瘤形成/生長(zhǎng)。在本發(fā)明多肽施用之后，觀察到生長(zhǎng)激素(例如，人GH)從垂體前部的分泌下降。 類似地，觀察到循環(huán)IGF-I水平的水平降低。GH/IGF-1水平的所述降低與腫瘤收縮相關(guān)。 因此，本發(fā)明多肽的使用通過(guò)去除主要的對(duì)抗作用生物途徑之一而提供了用于癌癥治療的 有利環(huán)境。施用之后，癌癥的區(qū)域和遠(yuǎn)端擴(kuò)散被減少或消除。就這方面而言，不希望受任何理 論束縛，本發(fā)明人相信，轉(zhuǎn)移的擴(kuò)散被本發(fā)明多肽所抑制，本發(fā)明多肽降低了 IGF-I的循環(huán) 濃度。本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)在于，癌癥治療之后，垂體功能恢復(fù)正常。換言之，本發(fā)明提供 了對(duì)垂體具有最小治療后作用的短效療法。因此，與目前垂體切除療法不同，本發(fā)明不需要 為防止最初癌癥治療導(dǎo)致的并發(fā)癥的復(fù)雜且令人不悅的治療后(通常是長(zhǎng)期的)方案，所 述并發(fā)癥例如骨質(zhì)疏松、短腸綜合征、可導(dǎo)致阿爾茨海默病的記憶喪失、關(guān)節(jié)炎、背痛、纖 維肌痛和慢性疲勞。本發(fā)明多肽的生物活性組分是非細(xì)胞毒性蛋白酶。非細(xì)胞毒性蛋白酶是不殺傷細(xì) 胞的獨(dú)立的一類分子；相反，它們通過(guò)抑制除了蛋白合成外的細(xì)胞過(guò)程而發(fā)揮作用。非細(xì)胞 毒性蛋白酶作為較大毒性分子的部分由多種植物和多種微生物產(chǎn)生，所述微生物例如梭狀 芽抱桿菌(Clostridium sp.)禾口奈瑟菌(Neisseria sp.)。梭菌神經(jīng)毒素代表主要的一組非細(xì)胞毒性毒素分子，并且包括通過(guò)二硫鍵連接在 一起的兩條多肽鏈。兩條鏈被稱為重鏈(H-鏈)和輕鏈(L-鏈)，重鏈分子量為大約IOOkDa, 輕鏈分子量為大約50kDa。L鏈具有蛋白酶功能并表現(xiàn)出對(duì)參與細(xì)胞外過(guò)程的囊泡和/或質(zhì) 膜相關(guān)(SNARE)蛋白(例如，小突觸泡蛋白、突觸融合蛋白或SNAP-2Q高底物特異性。這 些底物是神經(jīng)分泌器的重要組分。 主要來(lái)自淋球菌(N. gonorrhoeae)種的奈瑟菌和主要來(lái)自肺炎鏈球菌 (S. pneumoniae)種的鏈球菌產(chǎn)生功能上類似的非細(xì)胞毒性毒素分子。此類非細(xì)胞毒性蛋白 酶的實(shí)例是IgA蛋白酶(參見W099/58571，其在此通過(guò)引用整體并入)。因此，本發(fā)明的非細(xì)胞毒性蛋白酶優(yōu)選是梭菌神經(jīng)毒素蛋白酶或IgA蛋白酶。現(xiàn)在討論本發(fā)明的靶向部分(TM)組分，該組分使本發(fā)明多肽結(jié)合生長(zhǎng)激素分泌 細(xì)胞、優(yōu)選結(jié)合垂體細(xì)胞和/或結(jié)合外垂體細(xì)胞(extrapituitarycell)。在一個(gè)實(shí)施方案 中，TM結(jié)合垂體腺的前部區(qū)域，例如結(jié)合促生長(zhǎng)素細(xì)胞和/或腺垂體細(xì)胞。適合的TM包括生長(zhǎng)激素分泌細(xì)胞受體的配體，例如細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、神經(jīng)肽、凝集素和抗體-該術(shù)語(yǔ)包括單克隆抗體和抗體片段，例如Fab、F(ab) ‘ 2、Fv、ScFv等。本發(fā)明TM結(jié)合生長(zhǎng)激素分泌細(xì)胞例如垂體細(xì)胞上的受體。作為實(shí)例，TM可以結(jié)合 瘦蛋白(OB)受體及其同種型、生長(zhǎng)素釋放肽受體、促生長(zhǎng)素抑制素(sst)受體(例如sstp Sst2, sst3、SSt4和SSt5及其剪接變體)、胰島素生長(zhǎng)因子(IGF)受體(例如IGF-1)、erbB 受體(例如erbBl、erbB2、erbB3和erbB4及其剪接變體)、VIP-胰高血糖素-GRF-促胰液 素超家族受體(包括其剪接變體)例如垂體腺苷酸環(huán)化酶活化肽(PACAP)受體(例如PAC、 VPAC1和/或VPAC2)、食欲肽(OX)受體和剪接變體(例如OX1和/或0 )、白介素(IL)受 體(例如IL-l、IL-2、IL-6和IL-10受體)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NTR)受體(例如TrkA(NTR)和 p75 (NTR))、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)受體(例如VEGFR1、VEGFR2和VEGFR3)、鈴蟾肽受體 (例如BRS-I、BRS-2或BRS-3)、硬骨魚緊張肽(urotensin)受體、黑色素濃縮激素受體1、 促乳素釋放激素受體、KiSS-I受體、促腎上腺皮質(zhì)素釋放因子受體1和生長(zhǎng)激素釋放激素 (GHRH)受體。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明TM結(jié)合瘦蛋白受體。此類TM的適合實(shí)例包括瘦蛋白 肽，例如全長(zhǎng)瘦蛋白肽(例如瘦蛋白^57)及其截短物或肽類似物，例如瘦蛋白、瘦蛋白
70-95 禾口瘦蛋白 116-122。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的TM結(jié)合生長(zhǎng)素釋放肽受體。這方面適合的TM的 實(shí)例包括生長(zhǎng)素釋放肽，例如全長(zhǎng)生長(zhǎng)素釋放肽(例如生長(zhǎng)素釋放肽117)及其截短物或肽 類似物，例如生長(zhǎng)素釋放肽24_117和生長(zhǎng)素釋放肽52_117 ； [Trp3,Arg5]-生長(zhǎng)素釋放肽(1_5)、 des-Gln-生長(zhǎng)素釋放肽、皮質(zhì)抑素(cortistatin)-8、His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys_NH2、 生長(zhǎng)激素釋放肽(例如GHRP-6)或海沙瑞林(hexarelin)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的TM結(jié)合促生長(zhǎng)素抑制素(SST)受體。作為實(shí)例， 適合的TM包括SST肽和皮質(zhì)抑素(CST)-肽及其肽類似物，例如D-Phe-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH2 (BIM 23052)、D-Phe-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Va 1 -Phe-D-Na 1-NH2 (BIM 23056)或 c[Cys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2(BIM-23^8)。其他實(shí)例包括 SST 肽SST-14和SST-觀；以及肽和肽類似物，例如奧曲肽、蘭樂(lè)肽、BIM23027、伐普肽、司格列肽 和S0M230。這些TM是用于結(jié)合SST受體、特別是sst^sst^sst^ss、和sst5受體的優(yōu)選 TM。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的TM結(jié)合胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF)受體。適合的實(shí)例 包括例如IGF-I肽和IGF-2肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的TM結(jié)合VIP-胰高血糖素-GRF-促胰液素超家族受 體，例如結(jié)合PAC (例如PAC1)或結(jié)合VPAC (例如VPAC-I或VPAC-2)受體。此類TM的適合 實(shí)例包括垂體腺苷酸環(huán)化酶活化肽(PACAP)、血管活性腸肽(VIP)及其截短物和肽類似物。在一個(gè)實(shí)施方案中，TM是VIP肽，包括VIP-I和VIP-2肽，例如VIP (1-28)或其截 短物或肽類似物。這些TM顯示與VPAC-I的選擇性結(jié)合?？蛇x地，可以采用顯示與VPAC2 選擇性結(jié)合的TM，例如mR0M(參見Yu等，Peptides 27 (6) pl359_66 (2006)，其在此通過(guò)引 用并入)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，TM可以是PACAP肽，例如PACAP(1-38)或PACAP(1_27)或 其截短物或肽類似物。這些TM是結(jié)合PACHf^nPAC-I)受體的優(yōu)選TM。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的TM結(jié)合食欲肽受體(例如(^或 ^受體)。適 合的TM的實(shí)例包括全長(zhǎng)食欲肽-A肽及其截短物或肽類似物，和食欲肽-B肽及其截短物或肽類似物。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的TM結(jié)合白介素受體。適合的TM的實(shí)例包括IL_1 肽(例如IL-I α、IL-β、IL-18肽)及其截短物或肽類似物、IL-2肽(例如IL_2、IL-3、 IL-12、IL-23肽)及其截短物或肽類似物、和IL-17肽(例如11-17A、IL-17C肽)及其截 短物或肽類似物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的TM結(jié)合NGF受體。適合的TM的實(shí)例包括全長(zhǎng)NGF 及其截短物或肽類似物。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的TM結(jié)合血管活性表皮生長(zhǎng)因子(VEGF)受體。適合 的TM的實(shí)例包括VEGF肽(例如VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D或VEGF-E及相關(guān)的剪接 變體)及其截短物或肽類似物，和胎盤生長(zhǎng)因子(PIGF)及其截短物或肽類似物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的TM結(jié)合ErbB受體。作為實(shí)例，TM選自EGF 肽、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α (TGF-α)肽、EGF和TGF-α嵌合體、雙調(diào)蛋白肽、β細(xì)胞調(diào)節(jié)素 (betacellulin)肽、印igen肽、表皮調(diào)節(jié)素(印iregulin)肽、肝素結(jié)合EGF (HB-EGF)肽、神 經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白(NRG)肽，例如NRGl α ,NRGl β、NRG2 α、NRG2 β、NRG3、NRG4和神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白剪 接變體、tomoregulin 1和2肽、神經(jīng)蛋白聚糖-C肽、lin-3肽、vein肽、gurken肽、spitz 肽或keren肽；及其截短物和肽類似物。存在4類ErbB受體(稱為ErbB 1、erbB2、erbB3 和erbB4)，其還被稱為HER受體。存在這些受體的許多變體，其產(chǎn)生自全長(zhǎng)受體的可變剪接 和/或切割(例如EGFR vl翻譯起始在aa543 ；EGFR vll缺失aa521_603 ；EGFR vIII缺失 aa 6-273 ；EGFRvIII/Δ 12-13缺失aa 6-273和409-520 ；EGFR vIV缺失aa 959-1030 ；EGFR vV 截短在殘基 958 ；EGFR TDM/2-7 串聯(lián)重復(fù) 6-273 ；EGFRTDM/18-25 串聯(lián)重復(fù) 664-1030 ； EGFR-TDM/18-26串聯(lián)重復(fù)664-1014)。此外，存在四種ErbB4受體同種型，稱為erbB4JM_a、 erbB4JM-b、erbB4CYT_l 和 erbB4 CYT-1。優(yōu)選的TM結(jié)合ErbB受體(例如ErbBl、ErbB2、ErbB3、ErbB4)及其剪接變體，特別 是ErbBl受體。ErbB TM還可以包括含有EGF基序的蛋白，在六半胱氨酸EGF-模塊中的第四 個(gè)半胱氨酸與第五個(gè)半胱氨酸之間具有剪接位點(diǎn)，其中所述模塊緊鄰潛在配體的跨膜區(qū)。 例如，感光細(xì)胞間(interphotoreceptor)基質(zhì)蛋白聚糖_2 (IMP-2)、跨膜肽酶(MEP) 1 α、 ΜΕΡΙ β、粘蛋白(MUC) 3、MUC4、MUC12和MUC17，以及具有T結(jié)支架的蛋白，例如馬鈴薯羧肽 酶抑制劑，和ErbB受體的抗體，例如西妥昔單抗、ABX-EGF,曲妥單抗或EMD72000。其他實(shí) 例包括不同ErbB配體的交換結(jié)構(gòu)域(環(huán)序列和/或連接氨基酸)產(chǎn)生的嵌合體，例如其中 B-環(huán)序列已經(jīng)被昆蟲(果蠅)ErbB配體中存在的B-環(huán)序列替代的哺乳動(dòng)物erbB受體配 體、其中EGF的C-環(huán)序列已經(jīng)被TGF α (44-50)的C-環(huán)序列替代的ErbB配體、其中一個(gè)或 多個(gè)結(jié)構(gòu)域已經(jīng)被TGF α中相應(yīng)序列替代而產(chǎn)生EGF/TGFa嵌合體(例如E3T、T3E、E4T、 T4E、T3E4T、T6E和E3T4E)的EGF配體，和其中N-末端TGF α序列(WSHFND)或神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋 白序列(SHLVK)已經(jīng)用于替代第一個(gè)半胱氨酸殘基C末端的N-末端EGF序列(NSDSE)的 EGF嵌合體、TlE和Biregulin。而其他嵌合體包括其中結(jié)構(gòu)域已經(jīng)被另一個(gè)蛋白的EGF樣 結(jié)構(gòu)域代替的EGF，所述另一蛋白例如血液凝固蛋白、神經(jīng)發(fā)育蛋白或細(xì)胞粘附蛋白(例如 Notch 3、Delta 1、EMR1、F4/80、EMR3 和 EMR4 受體)。在進(jìn)一步實(shí)施方案中，本發(fā)明的TM結(jié)合黑色素濃縮激素受體1。在這方面適合的 TM的實(shí)例包括黑色素濃縮激素(MCH)肽，例如全長(zhǎng)MCH及其截短物和類似物。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的TM結(jié)合促乳素釋放激素受體。在這方面適合的TM 的實(shí)例包括促乳素釋放肽及其截短物和類似物。在進(jìn)一步實(shí)施方案中，本發(fā)明的TM結(jié)合KiSS-I受體。在這方面適合的TM的實(shí)例 包括Kissp印tin-10、Kisspeptin-54肽及其截短物和類似物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的TM結(jié)合促腎上腺皮質(zhì)素釋放因子受體1。在這方 面適合的TM的實(shí)例包括促腎上腺皮質(zhì)素-釋放激素、尿皮質(zhì)素(urocortin) 1和尿皮質(zhì)素 2，包括其截短物和類似物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的TM結(jié)合生長(zhǎng)激素釋放激素(GHRH)受 體。GHRH還被稱為生長(zhǎng)激素釋放因子(GRF或GHRF)或somatocrinin。本發(fā)明的 適合的TM實(shí)例包括全長(zhǎng)GHRH(1-44)肽及其截短物或肽類似物，例如GHRH(1_29)； GHRH(l-37) ；hGHRH(l-40)-OH ； [MeTyrl, Alal5,22, Nle27]-hGHRH(1-29)-NH2 ； [MeTyrl, Ala8，9，15,22,28, Nle 27]-hGHRH(1-29)-NH2 ；cyclo (25-29)[MeTyrl, Alal5, DAsp25, Nle27, 0rn29+++]-hGHRH(1-29)-NH2 ； (D-Tyr1)-GHRH(1-29)-NH2 ； (D-Ala2)-GHRH (1-29)-NH2 ； (D_Asp3)-GHRH(1-29)-NH2(D_Ala4)-GHRH(1-29) -NH2 ； (D-Thr7)-GHRH(1-29)-NH2 ； (D_Asn8)-GHRH(1_29)-NH2 ； (D-Ser9)-GHRH(1-29) -NH2 ； (D-TyrlO)-GHRH(1-29)-NH2 ；(Phe4)-GHRH(1-29)-NH2 ； (pCl_Phe6)-GHRH(1-29)-NH2 ； (N-Ac-Tyrl)-GHRH(1-29)-NH2 ； (N-Ac-Tyrl, D_Ala2)-GHRH(1-29)-NH2 ； (N-Ac-D-Tyrl， D-Ala2)-GHRH(1-29)-NH2 ； (N-Ac-D-Tyrl, D-Ala 2，D_Asp3)-GHRH(1-29)-NH2 ； (D_Ala2， NLeu27) -GHRH (1-29) -NH2 ； (Hi s 1，D_Ala2，NLeu27) -GHRH (1-29) -NH2 ； (N-Ac-Hi s 1，D_Ala2， N-Leu27)-GHRH(1-29)-NH2 ； (Hisi,D-Ala 2，D-Ala 4，Nleu27)-GHRH(1-29)-NH2 ； (D_Ala2， D-Asp3, D-Asn8, NLeu27)-GHRH(1-29)-NH2 ； (D_Asp3，D_Asn8，NLeu27)-GHRH(1-29)-NH2 ； [Hisl, NLeu27]-hGHRH(1-29)-NH2 ； [NLeu27]-hGHRH(1-29)-NH2 ；H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile -Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-L eu_NH2 ；H-Tyr-Ala-Asp-Ala-IIe-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-NH2 ；H-Tyr-D-Ala-Asp-Ala-IIe-P he-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-As p-Ile-Met-Ser-Arg-NH2 ；H-Tyr-Ala-Asp-Ala-IIe-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-IIe-L eu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-IIe-Met-Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-Gl u-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly-Ala-Lys-Val-Arg-Leu~NH2 ；H-Tyr-Ala-Asp-Ala-IIe-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-I Ie-Met-Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly-Ala-Lys-Val-Arg-Leu-N H2 ；H is-Val-Asp-Ala-IIe-Phe-Thr-Gln-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Ala-Gln-Leu-Ser-A Ia-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Leu-Asn-Arg ；禾口 His-Val-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Gln-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Ala-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Leu-A sn-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly-Ala.在進(jìn)一步實(shí)施方案中，TM結(jié)合鈴蟾肽受體(例如BRS-1、BRS_2或BRS-3)。用于本 發(fā)明的結(jié)合鈴蟾肽受體的TM包括鈴蟾肽-最初從蛙皮膚分離的14氨基酸肽(pGlu-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2)；和哺乳動(dòng)物中兩個(gè)已知的同系物，即神經(jīng)調(diào)節(jié)肽B和促胃液素釋放肽(GRP)，例如豬GRP-Ala-Pro-Val-Ser-Val-Gly-Gl y-Gly-Thr-Val-Leu-Ala-Lys-Met-Tyr-Pro-Arg-Gly-Asn-HiS-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu -Mel-NH2,和人 GRP-Val-Pro-Leu-Pro-Ala-Gly-Gly-Gly-Thr-Val-Leu-Thr-Lys-Met-Tyr-Pro-Arg-Gly-Asn-His-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2。額外的 TM包括相應(yīng)的鈴蟾肽、 神經(jīng)調(diào)節(jié)肽B和GRP截短物及其肽類似物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的TM結(jié)合硬骨魚緊張肽受體。在這方面適 合的TM包括硬骨魚緊張肽及其截短物和肽類似物，例如環(huán)狀神經(jīng)肽硬骨魚緊張 肽-II (U-II)。U-II的C末端環(huán)區(qū)域在不同物種中是強(qiáng)烈保守的，并且包括六個(gè)氨基 酸殘基(-Cys Ple-Trp-Lys-Tyr-Cys-)，其結(jié)構(gòu)類似于促生長(zhǎng)素抑制素-14的中央?yún)^(qū)域 (-Phe-Trp-Lys-Thr-)。適用于本發(fā)明的硬骨魚緊張肽包括U-II前體肽，例如前原-硬骨 魚緊張肽-II (包括其兩個(gè)人1 和139同種型)，及其截短物和類似物，例如十一殘基成熟 肽形式。根據(jù)本發(fā)明的第二個(gè)方面，提供了物質(zhì)組合物，即，包括以下的多肽a.非細(xì)胞毒性蛋白酶，所述蛋白酶能夠在生長(zhǎng)激素分泌細(xì)胞中切割細(xì)胞外融合器 的蛋白；b.靶向部分(TM)，其能夠與生長(zhǎng)激素分泌細(xì)胞上的結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合，所述結(jié)合位點(diǎn) 能夠經(jīng)歷胞吞作用以被并入所述生長(zhǎng)激素分泌細(xì)胞的內(nèi)體；和d.易位結(jié)構(gòu)域，其能夠從所述內(nèi)體內(nèi)易位、跨內(nèi)體膜和進(jìn)入所述生長(zhǎng)激素分泌細(xì) 胞的胞質(zhì)溶膠中易位所述蛋白酶。本發(fā)明第一方面的所有特征等同應(yīng)用于上述第二方面。在本發(fā)明第一方面和/或第二方面的優(yōu)選實(shí)施方案中，TM具有人肽氨基酸序列。 因此，優(yōu)選的TM是例如人GHRH肽、人CST肽或人SST肽。多肽制備本發(fā)明多肽包括3個(gè)主要組分‘生物活性’(即，非細(xì)胞毒性蛋白酶)；TM ；和易位 結(jié)構(gòu)域。與制備此類融合蛋白相關(guān)的通用技術(shù)通常被稱為再靶向毒素技術(shù)。作為示例，我 們參考W094/21300；W096/33273 ；W098/07864 ；W000/10598 ；W001/21213 ；W006/059093 ； W000/62814 ；W000/04926 ；W093/15766 ；W000/61192 ；和 W099/58571。所有這些出版物在此 通過(guò)引用并入。更具體說(shuō)，本發(fā)明TM組分可以與本發(fā)明的蛋白酶組分或易位組分融合。所述融合 優(yōu)選通過(guò)共價(jià)鍵，例如直接共價(jià)鍵或通過(guò)間隔分子/接頭分子。蛋白酶組分和易位組分優(yōu) 選通過(guò)共價(jià)鍵連接在一起，所述共價(jià)鍵例如直接共價(jià)鍵或通過(guò)間隔分子/接頭分子。適合 的間隔分子/接頭分子是本領(lǐng)域公知的，并且通常包括基于氨基酸的序列，長(zhǎng)度為5至40、 優(yōu)選10至30個(gè)氨基酸殘基。使用中，多肽具有雙鏈構(gòu)象，其中蛋白酶組分和易位組分優(yōu)選通過(guò)二硫鍵連接在一起。本發(fā)明多肽可通過(guò)技術(shù)人員公知的常規(guī)化學(xué)軛合技術(shù)來(lái)制備。作為實(shí)例，參考 Hermanson, GT. (1996)，Bioconjugate techniques (生物輒合技術(shù))，Academic Press，禾口 Wong，S. S. (1991)，Chemistry of protein conjugationand cross_linking(蛋白輒合禾口 交聯(lián)的化學(xué))，CRC Press, Nagy等，PNAS 95第1794-99頁(yè)(1998)。使合成TM與本發(fā)明多肽連接的更詳細(xì)方法提供于例如EP0257742。上述軛合出版物在此通過(guò)引用并入?？蛇x地，所述多肽可通過(guò)單個(gè)多肽融合蛋白的重組制備來(lái)制備(參見例如 W098/07864)。該技術(shù)基于天然梭菌神經(jīng)毒素(即，全毒素)被制備的體內(nèi)細(xì)菌機(jī)制，并得 到具有下述‘簡(jiǎn)化’結(jié)構(gòu)排列的融合蛋白NH2-[蛋白酶組分]-[易位組分]-[TM] -COOH根據(jù)W098/07864，TM被置于融合蛋白C末端。然后融合蛋白通過(guò)蛋白酶處理而被 活化，所述蛋白酶切割蛋白酶組分和易位組分之間的位點(diǎn)。由此產(chǎn)生雙鏈蛋白，包括作為與 另一單多肽鏈共價(jià)連接(通過(guò)二硫鍵)的單多肽鏈的蛋白酶組分，所述另一單多肽鏈含有 易位組分和TM?？蛇x地，根據(jù)W006/059093，融合蛋白的TM組分位于線性融合蛋白序列中間，在蛋 白酶切割位點(diǎn)和易位組分之間。這確保TM與易位結(jié)構(gòu)域連接(即，如天然梭菌全毒素所發(fā) 生的)，但是在這種情況下，兩個(gè)組分的順序與天然全毒素相反。蛋白酶切割位點(diǎn)的隨后切 割暴露TM的N末端部分并提供雙鏈多肽融合蛋白。上述蛋白酶切割序列可以通過(guò)常規(guī)方式以DNA水平被引入(和/或去除任何固 有的切割序列)，例如通過(guò)定點(diǎn)誘變?？梢匀斯せ蛟谟?jì)算機(jī)軟件(例如DNASTAR，Inc.的 MapDraw程序)輔助下進(jìn)行篩選以確認(rèn)切割序列的存在。雖然可以采用任何蛋白酶切割位 點(diǎn)(即，梭菌的或非梭菌的)，但下述是優(yōu)選的腸激酶(DDDDK I )Xa 因子(IEGR J, /IDGR J,)TEV (煙草刻蝕病毒)(ENLYFQ I G)凝血酶(LVPR 丨 GS)PreScission(LEVLFQ J, GP)。其他蛋白酶切割位點(diǎn)包括被非細(xì)胞毒性蛋白酶，例如被梭菌神經(jīng)毒素切割的識(shí)別 序列。這些包括被非細(xì)胞毒性蛋白酶例如梭菌神經(jīng)毒素切割的SNARE(例如SNAP-25、突觸 融合蛋白、VAMP)蛋白識(shí)別序列。具體實(shí)例提供于US2007/0166332，其在此通過(guò)引用整體并 入。術(shù)語(yǔ)蛋白酶切割位點(diǎn)還包括內(nèi)蛋白，其是自切割序列。自剪接反應(yīng)是可控的，例如 通過(guò)改變存在的還原劑的濃度。上述‘活化’切割位點(diǎn)可以被用作‘破壞性’切割位點(diǎn)(下 文討論)，將要并入本發(fā)明多肽的切割位點(diǎn)。在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明融合蛋白可以包括一個(gè)或多個(gè)位于N末端和/或C末 端的純化標(biāo)簽。雖然可以采用任何純化標(biāo)簽，但下述是優(yōu)選的His-標(biāo)簽(例如6 X組氨酸)，優(yōu)選作為C-末端和/或N-末端標(biāo)簽MBP-標(biāo)簽(麥芽糖結(jié)合蛋白)，優(yōu)選作為N-末端標(biāo)簽GST-標(biāo)簽(谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶)，優(yōu)選作為N-末端標(biāo)簽Hi S-MBP-標(biāo)簽，優(yōu)選作為N-末端標(biāo)簽GST-MBP-標(biāo)簽，優(yōu)選作為N-末端標(biāo)簽硫氧還蛋白-標(biāo)簽，優(yōu)選作為N-末端標(biāo)簽CBD-標(biāo)簽(殼多糖結(jié)合結(jié)構(gòu)域)，優(yōu)選作為N-末端標(biāo)簽。融合蛋白中可以包括一個(gè)或多個(gè)肽間隔分子/接頭分子。例如，肽間隔物可以在純化標(biāo)簽與融合蛋白分子其余部分之間使用。因此，本發(fā)明第三方面提供了編碼上述多肽(即，本發(fā)明第二方面)的核酸(例如 DNA)序列。所述核酸可以包括在載體形式中，例如質(zhì)粒中，其可以任選包括復(fù)制起點(diǎn)、核酸整 合位點(diǎn)、啟動(dòng)子、終止子和核糖體結(jié)合位點(diǎn)的一個(gè)或多個(gè)。本發(fā)明還包括用于在宿主細(xì)胞特別是大腸桿菌中或通過(guò)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá) 所述核酸序列(即，本發(fā)明第三方面)的方法。本發(fā)明還包括用于活化本發(fā)明多肽的方法，所述方法包括使所述多肽與蛋白酶接 觸，所述蛋白酶在位于非細(xì)胞毒性蛋白酶組分和易位組分之間的識(shí)別位點(diǎn)(切割位點(diǎn))切 割所述多肽，從而使所述多肽轉(zhuǎn)化為雙鏈多肽，其中非細(xì)胞毒性蛋白酶組分和易位組分通 過(guò)二硫鍵連接在一起。在優(yōu)選實(shí)施方案中，識(shí)別位點(diǎn)對(duì)于天然存在的梭菌神經(jīng)毒素和/或 天然存在的IgA蛋白酶不是天然的。本發(fā)明多肽可被進(jìn)一步修飾以減少或預(yù)防與分散至非靶向區(qū)域相關(guān)的不想要的 副作用。根據(jù)該實(shí)施方案，所述多肽包括破壞性切割位點(diǎn)。所述破壞性切割位點(diǎn)不同于‘活 化’位點(diǎn)(即，雙鏈形成)，并且可被第二蛋白酶切割并且不可被非細(xì)胞毒性蛋白酶切割。而 且，當(dāng)通過(guò)第二蛋白酶在破壞性切割位點(diǎn)如此切割時(shí)，所述多肽效價(jià)降低(例如對(duì)預(yù)期靶 細(xì)胞的結(jié)合能力降低，易位活性降低和/或非細(xì)胞毒性蛋白酶活性降低)。為了完整性，本 發(fā)明的任何‘破壞性’切割位點(diǎn)可以單獨(dú)用作本發(fā)明多肽的‘活化’位點(diǎn)。因此，根據(jù)該實(shí)施方案，本發(fā)明提供了可在位點(diǎn)外(off-site)位置被可控制地失 活和/或破壞的多肽。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述破壞性切割位點(diǎn)被第二蛋白酶(即，破壞性蛋白酶)識(shí)別 并切割，所述第二蛋白酶選自循環(huán)蛋白酶(例如，胞外蛋白酶，例如血清蛋白酶或凝血級(jí)聯(lián) 的蛋白酶)、組織相關(guān)蛋白酶(例如，基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)，例如肌肉的MMP)和細(xì)胞內(nèi)蛋 白酶(優(yōu)選靶細(xì)胞不存在的蛋白酶)。因此，在使用中，如果本發(fā)明多肽分散遠(yuǎn)離其預(yù)期靶細(xì)胞和/或被非靶細(xì)胞攝取， 則所述多肽將通過(guò)破壞性切割位點(diǎn)的切割(通過(guò)第二蛋白酶)而被失活。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述破壞性切割位點(diǎn)被位點(diǎn)外細(xì)胞類型中存在的第二蛋白酶 識(shí)別并切割。在該實(shí)施方案中，位點(diǎn)外細(xì)胞和靶細(xì)胞優(yōu)選為不同的細(xì)胞類型。可選地(或 附加地)，破壞性切割位點(diǎn)被位點(diǎn)外位置(例如靶細(xì)胞的遠(yuǎn)端)存在的第二蛋白酶識(shí)別并切 割。因此，當(dāng)破壞性切割在細(xì)胞外發(fā)生時(shí)，靶細(xì)胞和位點(diǎn)外細(xì)胞可以是相同或不同的細(xì)胞類 型。就這一點(diǎn)而言，靶細(xì)胞和位點(diǎn)外細(xì)胞可以各自具有與本發(fā)明相同多肽結(jié)合的受體。本發(fā)明破壞性切割位點(diǎn)在所述多肽處于位點(diǎn)外位置中或位點(diǎn)外位置處時(shí)提供所 述多肽的失活/破壞。就這方面而言，在破壞性切割位點(diǎn)處的切割使多肽效價(jià)最小化(當(dāng) 與缺少相同的破壞性切割位點(diǎn)或具有相同的破壞性位點(diǎn)但是為未切割形式的相同多肽相 比較)。作為實(shí)例，減小的效價(jià)包括降低的結(jié)合(與哺乳動(dòng)物細(xì)胞受體)和/或減少的易 位(向胞質(zhì)溶膠方向跨哺乳動(dòng)物細(xì)胞的內(nèi)體膜)和/或減少的SNARE蛋白切割。當(dāng)選擇本發(fā)明上下文中的破壞性切割位點(diǎn)時(shí)，優(yōu)選地，所述破壞性切割位點(diǎn)不是 可以單獨(dú)用于作為其生產(chǎn)過(guò)程的一部分的本發(fā)明多肽的翻譯后修飾的任何蛋白酶的底物。 就這方面而言，本發(fā)明非細(xì)胞毒性蛋白酶通常采用蛋白酶活化事件(通過(guò)單獨(dú)的‘活化’蛋白酶切割位點(diǎn)，其在結(jié)構(gòu)上不同于本發(fā)明的破壞性切割位點(diǎn))?；罨懈钗稽c(diǎn)的目的是切割 非細(xì)胞毒性蛋白酶與本發(fā)明多肽的易位組分或結(jié)合組分之間的肽鍵，從而提供其中所述兩 個(gè)組分通過(guò)二硫鍵連接在一起的‘活化’雙鏈多肽。因此，為了幫助確保本發(fā)明多肽的破壞性切割位點(diǎn)不負(fù)面影響‘活化’切割位點(diǎn)和 隨后的二硫鍵形成，前者優(yōu)選被引入本發(fā)明多肽中距離‘活化’切割位點(diǎn)至少20、至少30、 至少40、至少50和更優(yōu)選至少60、至少70、至少80個(gè)(連續(xù)的)氨基酸殘基的位置。破壞性切割位點(diǎn)和活化切割位點(diǎn)相對(duì)于多肽的天然組分而言優(yōu)選是外源的(即， 改造/人工的)。換言之，所述切割位點(diǎn)優(yōu)選不是多肽相應(yīng)天然組分所固有的。作為實(shí)例， 基于BoNT/A L-鏈或H-鏈(分別地)的蛋白酶或易位組分可以根據(jù)本發(fā)明被改造而包括 切割位點(diǎn)。但是，所述切割位點(diǎn)不會(huì)存在于相應(yīng)的BoNT天然L-鏈或H-鏈。類似地，當(dāng)多 肽的靶向部分組分被改造為包括蛋白酶切割位點(diǎn)時(shí)，所述切割位點(diǎn)不會(huì)存在于相應(yīng)靶向部 分的相應(yīng)天然序列中。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，破壞性切割位點(diǎn)和‘活化’切割位點(diǎn)不被同一蛋白酶 切割。在一個(gè)實(shí)施方案中，兩個(gè)切割位點(diǎn)彼此不同，因?yàn)楦髯宰R(shí)別序列內(nèi)的耐受氨基酸的至 少一個(gè)、更優(yōu)選至少兩個(gè)、特別優(yōu)選至少三個(gè)和最優(yōu)選至少四個(gè)是不同的。作為實(shí)例，在梭菌L-鏈和Hn組分之間含有)(a因子‘活化’位點(diǎn)的多肽嵌合體的情 況下，優(yōu)選在非)(a因子位點(diǎn)的位點(diǎn)采用破壞性切割位點(diǎn)，其被插入L-鏈和/或Hn和/或TM 組分中的其他地方。這種情況下，多肽可以被修飾以在L-鏈和Hn組分之間容納可選的‘活 化’位點(diǎn)(例如，腸激酶切割位點(diǎn))，這種情況下，單獨(dú)的敘因子切割位點(diǎn)可以作為破壞性 切割位點(diǎn)在其他地方被并入所述多肽?？蛇x地，L-鏈和&組分之間存在的fe因子‘活化’ 位點(diǎn)可以被保留，并且諸如凝血酶切割位點(diǎn)的可選切割位點(diǎn)作為破壞性切割位點(diǎn)被并入。當(dāng)在本發(fā)明任何組分的一級(jí)序列中鑒定用于加入切割位點(diǎn)的適合位點(diǎn)時(shí)，優(yōu)選選 擇與將要插入的建議切割位點(diǎn)密切匹配的一級(jí)序列。通過(guò)這樣做，最小的結(jié)構(gòu)變化被引入 多肽。作為實(shí)例，切割位點(diǎn)通常包括至少3個(gè)連續(xù)的氨基酸殘基。因此，在優(yōu)選的實(shí)施方案 中，選擇已經(jīng)具有(在正確的位置)為引入新切割位點(diǎn)所需要的氨基酸殘基的至少一個(gè)、優(yōu) 選至少兩個(gè)的切割位點(diǎn)。作為實(shí)例，在一個(gè)實(shí)施方案中，胱天蛋白酶3切割位點(diǎn)(DMQD)可 以被引入。就這方面而言，優(yōu)選的插入位置被鑒定，其已經(jīng)包括選自例如DXXX、XMXX、XXQX、 xxxD、DMxx> DxQx> DxxD> xMQx、xMxD、xxQD、DMQx> xMQD、DxQD 禾口 DMxD 的一級(jí)序列。類似地，優(yōu)選將切割位點(diǎn)引入表面暴露的區(qū)域。在表面暴露區(qū)域內(nèi)，存在的環(huán)區(qū)域 是優(yōu)選的。在本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案中，破壞性切割位點(diǎn)被引入在下述位置的一個(gè)或多個(gè)，其 基于BoNT/A的一級(jí)氨基酸序列。雖然插入位置是參考BoNT/A被鑒定的(為了方便)，但是 可選蛋白酶結(jié)構(gòu)域和/或易位結(jié)構(gòu)域的一級(jí)氨基酸序列可以容易地與所述BoNT/A位置對(duì) 齊。對(duì)于蛋白酶組分，優(yōu)選下述位置的一個(gè)或多個(gè)27-31、56-63、73-75,78-81、 99-105、120-124、137-144、161-165、169-173、187-194、202-214、237-241、243-250、 300-304、323-335、375-382、391-400和413-423。以上編號(hào)優(yōu)選始于本發(fā)明蛋白酶組分的
N-末端。在優(yōu)選實(shí)施方案中，破壞性切割位點(diǎn)位于距離蛋白酶組分N-末端大于8個(gè)氨基酸殘基、優(yōu)選大于10個(gè)氨基酸殘基、更優(yōu)選大于25個(gè)氨基酸殘基、特別優(yōu)選大于50個(gè)氨基酸 殘基的位置。類似地，在優(yōu)選實(shí)施方案中，破壞性切割位點(diǎn)位于距離蛋白酶組分C-末端大 于20個(gè)氨基酸殘基、優(yōu)選大于30個(gè)氨基酸殘基、更優(yōu)選大于40個(gè)氨基酸殘基、特別優(yōu)選大 于50個(gè)氨基酸殘基的位置。對(duì)于易位組分，優(yōu)選下述位置的一個(gè)或多個(gè)474-479、483-495、507-543、 557-567、576-580、618-631、643-650、669-677、751-767、823-834、845-859。上述編號(hào)優(yōu)選 明確本發(fā)明易位結(jié)構(gòu)域組分的N-末端449起始位置和易位結(jié)構(gòu)域組分C-末端871終止位置。在優(yōu)選實(shí)施方案中，破壞性切割位點(diǎn)位于從易位組分N-末端大于10個(gè)氨基酸殘 基、優(yōu)選大于25個(gè)氨基酸殘基、更優(yōu)選大于40個(gè)氨基酸殘基、特別優(yōu)選大于50個(gè)氨基酸殘 基的位置。類似地，在優(yōu)選實(shí)施方案中，破壞性切割位點(diǎn)位于從易位組分C-末端大于10個(gè) 氨基酸殘基、優(yōu)選大于25個(gè)氨基酸殘基、更優(yōu)選大于40個(gè)氨基酸殘基、特別優(yōu)選大于50個(gè) 氨基酸殘基的位置。在優(yōu)選實(shí)施方案中，破壞性切割位點(diǎn)位于從TM組分N-末端大于10個(gè)氨基酸殘 基、優(yōu)選大于25個(gè)氨基酸殘基、更優(yōu)選大于40個(gè)氨基酸殘基、特別優(yōu)選大于50個(gè)氨基酸殘 基的位置。類似地，在優(yōu)選實(shí)施方案中，破壞性切割位點(diǎn)位于從TM組分C-末端大于10個(gè) 氨基酸殘基、優(yōu)選大于25個(gè)氨基酸殘基、更優(yōu)選大于40個(gè)氨基酸殘基、特別優(yōu)選大于50個(gè) 氨基酸殘基的位置。本發(fā)明多肽可以包括一個(gè)或多個(gè)(例如兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)或更多個(gè))破壞性 蛋白酶切割位點(diǎn)。當(dāng)包括超過(guò)一個(gè)破壞性切割位點(diǎn)時(shí)，每個(gè)切割位點(diǎn)可以相同或不同。就 這一點(diǎn)而言，超過(guò)一個(gè)破壞性切割位點(diǎn)的使用提供了提高的位點(diǎn)外失活。類似地，兩個(gè)或多 個(gè)不同的破壞性切割位點(diǎn)的使用提供了額外的設(shè)計(jì)靈活性。破壞性切割位點(diǎn)可以被加入下述多肽組分的任何一個(gè)中非細(xì)胞毒性蛋白酶組 分；易位組分；靶向部分；或間隔肽(如果存在)。就這一點(diǎn)而言，破壞性切割位點(diǎn)被選擇以 確保對(duì)多肽效價(jià)的不利影響最小(例如，通過(guò)對(duì)靶向/結(jié)合區(qū)和/或易位結(jié)構(gòu)域、和/或?qū)?非細(xì)胞毒性蛋白酶結(jié)構(gòu)域的影響最小)，同時(shí)確保多肽遠(yuǎn)離其靶位點(diǎn)/靶細(xì)胞時(shí)不穩(wěn)定。優(yōu)選的破壞性切割位點(diǎn)(加上相應(yīng)的第二蛋白酶)列于下表中。所列切割位點(diǎn)純 粹是示例說(shuō)明性的并且不是要限制本發(fā)明。0123
權(quán)利要求
1.一種多肽，所述多肽應(yīng)用于抑制癌癥，所述多肽包括a.非細(xì)胞毒性蛋白酶，所述蛋白酶能夠在生長(zhǎng)激素分泌細(xì)胞中切割細(xì)胞外融合器的蛋白；b.靶向部分(TM)，其與生長(zhǎng)激素分泌細(xì)胞上的結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合，所述結(jié)合位點(diǎn)能夠經(jīng)歷 胞吞作用以被并入所述生長(zhǎng)激素分泌細(xì)胞的內(nèi)體；和c.易位結(jié)構(gòu)域，其從所述內(nèi)體內(nèi)、跨內(nèi)體膜和進(jìn)入所述生長(zhǎng)激素分泌細(xì)胞的胞質(zhì)溶膠 中易位所述蛋白酶。
2.根據(jù)權(quán)利要求1應(yīng)用的多肽，其中所述生長(zhǎng)激素分泌細(xì)胞是垂體細(xì)胞。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2應(yīng)用的多肽，其中所述TM結(jié)合選自由以下組成的組的 受體生長(zhǎng)激素釋放激素(GHRH)受體、瘦蛋白(OB)受體、生長(zhǎng)素釋放肽受體、促生長(zhǎng)素抑制 素(sst)受體、胰島素生長(zhǎng)因子(IGF)受體、ErbB受體、VIP-胰高血糖素-GRF-促胰液素超 家族受體、食欲肽(OX)受體、白介素(IL)受體、神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NTR)受體、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因 子(VEGF)受體、鈴蟾肽受體、硬骨魚緊張肽受體、黑色素濃縮激素受體1、促乳素釋放激素 受體、KiSS-I受體或促腎上腺皮質(zhì)素釋放因子受體1。
4.根據(jù)任一前述權(quán)利要求應(yīng)用的多肽，其中所述TM選自由以下組成的組生長(zhǎng)激素釋 放激素(GHRH)肽、瘦蛋白肽、生長(zhǎng)素釋放肽、促生長(zhǎng)素抑制素(SST)肽、皮質(zhì)抑素肽、胰島素 樣生長(zhǎng)因子(IGF)肽、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)肽、VIP-胰高血糖素-GRF-促胰液素超家族肽、 PACAP肽、血管活性腸肽(VIP)、食欲肽、白介素肽、神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)肽、血管內(nèi)皮生長(zhǎng) 因子(VEGF)肽、甲狀腺激素肽、雌激素肽、ErbB肽、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)肽、EGF和TGF-α 嵌合肽、雙調(diào)蛋白肽、β細(xì)胞調(diào)節(jié)素肽、印igen肽、表皮調(diào)節(jié)素肽、肝素結(jié)合EGF(HB-EGF) 肽、鈴蟾肽、硬骨魚緊張肽、黑色素濃縮激素(MCH)肽、促乳素釋放肽、Kissp印tin-ΙΟ肽、 Kisspeptin-54肽、促腎上腺皮質(zhì)素釋放激素肽、尿皮質(zhì)素1肽或尿皮質(zhì)素2肽。
5.根據(jù)任一前述權(quán)利要求應(yīng)用的多肽，其中所述非細(xì)胞毒性蛋白酶包括梭菌神經(jīng)毒素 內(nèi)肽酶。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)應(yīng)用的多肽，其中所述非細(xì)胞毒性蛋白酶包括IgA蛋白酶。
7.根據(jù)任一前述權(quán)利要求應(yīng)用的多肽，其中所述易位結(jié)構(gòu)域包括梭菌神經(jīng)毒素易位結(jié) 構(gòu)域。
8.一種多肽，包括a.非細(xì)胞毒性蛋白酶，所述蛋白酶能夠在生長(zhǎng)激素分泌細(xì)胞中切割細(xì)胞外融合器的蛋白；b.靶向部分(TM)，其與生長(zhǎng)激素分泌細(xì)胞上的結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合，所述結(jié)合位點(diǎn)能夠經(jīng)歷 胞吞作用以被并入所述生長(zhǎng)激素分泌細(xì)胞的內(nèi)體；和c.易位結(jié)構(gòu)域，其從所述內(nèi)體內(nèi)、跨內(nèi)體膜和進(jìn)入所述生長(zhǎng)激素分泌細(xì)胞的胞質(zhì)溶膠 中易位所述蛋白酶。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的多肽，其中所述生長(zhǎng)激素分泌細(xì)胞是垂體細(xì)胞。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或權(quán)利要求9所述的多肽，其中所述TM結(jié)合選自由以下組成的組 的受體生長(zhǎng)激素釋放激素(GHRH)受體、瘦蛋白(OB)受體、生長(zhǎng)素釋放肽受體、促生長(zhǎng)素抑 制素(sst)受體、胰島素生長(zhǎng)因子(IGF)受體、ErbB受體、VIP-胰高血糖素-GRF-促胰液素 超家族受體、食欲肽(OX)受體、白介素(IL)受體、神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NTR)受體、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)受體、鈴蟾肽受體、硬骨魚緊張肽受體、黑色素濃縮激素受體1、促乳素釋放激 素受體、KiSS-I受體或促腎上腺皮質(zhì)素釋放因子受體1。
11.根據(jù)權(quán)利要求8-10任一項(xiàng)所述的多肽，其中所述TM選自由以下組成的組生長(zhǎng)激 素釋放激素(GHRH)肽、瘦蛋白肽、生長(zhǎng)素釋放肽、促生長(zhǎng)素抑制素(SST)肽、皮質(zhì)抑素肽、胰 島素樣生長(zhǎng)因子(IGF)肽、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)肽、VIP-胰高血糖素-GRF-促胰液素超家族 肽、PACAP肽、血管活性腸肽(VIP)、食欲肽、白介素肽、神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)肽、血管內(nèi)皮生 長(zhǎng)因子(VEGF)肽、甲狀腺激素肽、雌激素肽、ErbB肽、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)肽、EGF和TGF-α 嵌合肽、雙調(diào)蛋白肽、β細(xì)胞調(diào)節(jié)素肽、印igen肽、表皮調(diào)節(jié)素肽、肝素結(jié)合EGF(HB-EGF) 肽、鈴蟾肽、硬骨魚緊張肽、黑色素濃縮激素(MCH)肽、促乳素釋放肽、Kissp印tin-ΙΟ肽、 Kisspeptin-54肽、促腎上腺皮質(zhì)素釋放激素肽、尿皮質(zhì)素1肽或尿皮質(zhì)素2肽。
12.根據(jù)權(quán)利要求8-11任一項(xiàng)所述的多肽，其中所述非細(xì)胞毒性蛋白酶包括梭菌神經(jīng) 毒素內(nèi)肽酶。
13.根據(jù)權(quán)利要求8-11任一項(xiàng)所述的多肽，其中所述非細(xì)胞毒性蛋白酶包括IgA蛋白酶。
14.根據(jù)權(quán)利要求8-13任一項(xiàng)所述的多肽，其中所述易位結(jié)構(gòu)域包括梭菌神經(jīng)毒素易 位結(jié)構(gòu)域。
15.根據(jù)權(quán)利要求8所述的多肽，其中所述多肽包括與SEQID N0:8、9、10、ll、12、 13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、33、34、35、36、37、38、39、 40、41、42、43、44、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、 73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87 的任一個(gè)具有至少 90-92%、或至少 95-97%、或至少98-99%序列同一性的氨基酸序列。
16.一種核酸序列，所述核酸序列編碼根據(jù)權(quán)利要求8-15任一項(xiàng)的多肽。
17.一種核酸，所述核酸編碼根據(jù)權(quán)利要求8的多肽，其中所述核酸包括與SEQ ID NO 7和32的任一個(gè)具有至少90-94%、或至少95-97%、或至少98-99%序列同一性的核酸序 列。
18.—種抑制患者癌癥的方法，包括向患者施用有效量的根據(jù)權(quán)利要求8-15任一項(xiàng)的 多肽或根據(jù)權(quán)利要求16或17的核酸。
19.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的應(yīng)用或者根據(jù)權(quán)利要求18的方法，用于抑制選自由以 下組成的組的一種或多種癌癥前列腺癌、肺癌、乳腺癌或結(jié)腸直腸癌。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于抑制或治療癌癥的方法，特別涉及用于抑制或治療結(jié)腸直腸癌、乳腺癌、前列腺癌和/或肺癌的一種或多種的方法。該療法采用靶向于生長(zhǎng)激素分泌細(xì)胞例如靶向于垂體細(xì)胞的非細(xì)胞毒性蛋白酶。當(dāng)如此被遞送時(shí)，所述蛋白酶被內(nèi)化并抑制生長(zhǎng)激素從所述細(xì)胞的分泌/傳輸。本發(fā)明還涉及用于所述方法的多肽和核酸。
文檔編號(hào)A61K38/00GK102083451SQ200980122092
公開日2011年6月1日 申請(qǐng)日期2009年6月11日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月12日
發(fā)明者K·福斯特, P·馬科斯, 弗雷德里克·馬代克, 菲爾·萊卡納 申請(qǐng)人:賽恩泰新公司