專利名稱：肝癌治療劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于治療或預(yù)防肝癌的藥物組合物或使用該藥物組合物的治療 方法的領(lǐng)域，所述藥物組合物是對肝癌治療有效、且組合了化療劑及磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 抗體而形成的。
背景技術(shù)：
有報(bào)道稱肝細(xì)胞癌引起的死亡每年約有60萬，位居世界癌癥引起的死亡中的第 五位(非專利文獻(xiàn)1)。大部分肝細(xì)胞癌在診斷為該疾病后1年以內(nèi)死亡。不幸的是，經(jīng)常 出現(xiàn)在能夠治愈的療法不怎么發(fā)揮療效的后期階段診斷出肝細(xì)胞癌的例子。對上述患者 進(jìn)行包括化學(xué)療法、化學(xué)塞栓術(shù)、燒灼和電子束療法的醫(yī)療處置所獲得的效果依然不充分。 大多數(shù)患者表現(xiàn)出疾病復(fù)發(fā)，上述情況伴隨血管浸潤及多部位肝內(nèi)轉(zhuǎn)移迅速發(fā)展到進(jìn)行階 段，其5年存活率僅為7% (非專利文獻(xiàn)幻?？梢赃M(jìn)行局部癌切除術(shù)的肝細(xì)胞癌患者的預(yù) 后較好，但其5年存活率仍停留在15%至39% (非專利文獻(xiàn)幻。本技術(shù)領(lǐng)域中，人們尋求 對上述惡性疾病即肝細(xì)胞癌的新型療法。有報(bào)道稱在日本肝細(xì)胞癌占原發(fā)性肝癌的90%以上。作為針對上述肝細(xì)胞癌的 治療方法，可以采用TAE(經(jīng)導(dǎo)管動脈栓塞術(shù)CTranscatheter arterial embolization)), 即，使用化療劑，將油性造影劑(Lipiodol)、抗癌劑和塞栓物質(zhì)(Gelfoam)混合后注入對腫 瘤供給營養(yǎng)的營養(yǎng)供給通路即肝動脈，使?fàn)I養(yǎng)動脈阻塞，由此選擇性地導(dǎo)致肝細(xì)胞癌壞死。 另外，作為將化療劑單獨(dú)或與IFN(干擾素)并用進(jìn)行治療的方法，已經(jīng)進(jìn)行了全身化學(xué)療 法的臨床試驗(yàn)，所述化學(xué)劑為5-FU (氟尿嘧啶)、UFT (尿嘧啶和替加氟)、MMC (絲裂霉素C)、 DHAD (米托蒽醌)、ADR(阿霉素)、EPI (表柔比星)、CDDP (順鉬)等(非專利文獻(xiàn)4)。但 是，尚未確立肝癌的標(biāo)準(zhǔn)療法(非專利文獻(xiàn)5)。近年來，為了達(dá)到適于肝癌治療的目的，研究了以生長因子為靶向的多種藥物。上 述研究暗示人肝癌細(xì)胞中，上皮因子受體/人上皮因子受體KEGFR/HER1)以活性型表達(dá)。 在對肝癌患者進(jìn)行的II期臨床試驗(yàn)中已經(jīng)研究了對上皮因子受體/人上皮因子受體1的 抑制劑即厄洛替尼(Erlotinib)、及對上皮因子受體/人上皮因子受體1和ErbB_2 (Her2/ neu)的雙重酪氨酸激酶抑制劑即拉帕替尼(Lapatinib)。給與厄洛替尼的患者的應(yīng)答比例 為4-9%，未惡化時(shí)間為2. 1個月至3. 2個月，存活率為5. 8-13個月。另一方面，給與拉帕替 尼的患者的應(yīng)答比例為0%，未惡化生存期為1.8個月(非專利文獻(xiàn)6)。另一方面，作為激 酶抑制劑的口服活性型索拉非尼(Nexavar,BAY43-9006)通過在Raf激酶的階段抑制Raf/ MEK/ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)來阻止癌細(xì)胞增殖，并且通過將VEGFR-2、VEGFR-3及PDGFR- β酪氨酸激 酶作為靶向，發(fā)揮抗血管形成效果，與上述化療劑相比顯示出較有利的效果。在以非日本人及日本人為對象的II期臨床試驗(yàn)中，未惡化時(shí)間為4. 2至4. 9個月，應(yīng)答比例為2至4%， 未惡化生存期為9. 2至15. 6個月(非專利文獻(xiàn)7)。與索拉非尼同樣地，具有抑制多種激 酶的作用的多激酶抑制劑(Multi-kinase inhibitor)即舒尼替尼(SUl 1M8)(非專利文獻(xiàn) 8)也被用于肝細(xì)胞癌的臨床試驗(yàn)。在對34名進(jìn)展中的肝細(xì)胞患者給與舒尼替尼的該試驗(yàn) 中，可以確認(rèn)到12周為止對1名患者部分有效，確認(rèn)17名患者處于穩(wěn)定狀態(tài)?？偵嫫谥?間值為9. 8個月，另一方面，未惡化生存期中間值為3. 9個月(95%可信區(qū)間2. 6-6. 9)，3個 月未惡化存活率為56%，6個月未惡化存活率僅為32%，由此暗示舒尼替尼對肝細(xì)胞癌發(fā) 揮抗月中瘤活性(Zhu A, Sahani D, di Tomaso E et al. ， ；99th AACR annual meeting. San Diego, CA, USA 12-16 April (2008))。通常，伴隨肝癌的進(jìn)展，可以觀察到伴有肝功能障礙 的肝癌特有的癥狀，如食欲不振、體重減少、全身倦怠感、可觸知的右季肋部腫瘤、右季肋部 痛、腹部膨滿感、發(fā)熱、黃疸等。但是，索拉非尼、拉帕替尼等化療劑存在下述必須克服的課 題，即，并發(fā)化療劑固有的副作用，如腹瀉或便秘、貧血、引起(致死的嚴(yán)重程度的)感染及 敗血癥程度的免疫系統(tǒng)的抑制、出血、心毒性、肝毒性、腎毒性、食欲不振、體重減少等。通常，在初期觀察不到肝癌特有的初期癥狀，但伴隨肝癌進(jìn)展，可以觀察到伴有肝 功能障礙的肝癌特有的癥狀，如食欲不振、體重減少、全身倦怠感、可觸知的右季肋部腫瘤、 右季肋部痛、腹部膨滿感、發(fā)熱、黃疸等。在臨床上觀察到通過使用上述化療劑可以加劇這 些癥狀。例如，檢測出肝癌細(xì)胞患者的食欲不振、及伴隨食欲不振或與其相獨(dú)立地產(chǎn)生的體 重減少等癥狀，通過對該患者給與化療劑，與不給與化療劑相比，有時(shí)會加劇此癥狀。有時(shí) 在呈現(xiàn)出這些癥狀時(shí)不得不停止使用該化療劑，上述癥狀的加劇成為妨礙使用化療劑進(jìn)行 治療的主要原因。因此，要求確立在治療效果的提高及接受治療的患者的QOL改善等方面更優(yōu)異的 治療方法。本說明書中引用的參考文獻(xiàn)如下所示。這些文獻(xiàn)記載的內(nèi)容作為參照全部引入本 說明書。這些文獻(xiàn)均不是針對本說明書的現(xiàn)有技術(shù)。專利文獻(xiàn)1 :W02003/000883專利文獻(xiàn)2 :W02006/006693非專利文獻(xiàn) 1 :Llovet, J. Μ.，Burroughs, Α.，Bruix, J. =Lancet (2003), 362, 1907-172 =Bosch, F. X. ， Ribes, J. ， Cleries, R. =Gastroenterology (2004)， 127，S5-16非專禾丨J文獻(xiàn) 3 :Takenaka, K. , Kawahara, N. , Yamamoto, K. , Kajiyama, K. , Maeda, Τ. , Itasaka, H. , Shirabe, K. , Nishizaki, Τ. , Yanaga, K. , Sugimachi, K. :Arch Surg. (1996)，131,71-6非專利文獻(xiàn)4 :Yeo, W.，Mok, Τ. S.，Zee, B.，Leung, Τ. W.，Lai，P. B.，Lau，W. Y.， Koh, J.，Mo, F. K.，Yu, S. C.，Chan, Α. Τ.，Hui，P.，Ma, B.，Lam, K. C.，Ho, W. Μ.，Wong, H. Τ.， Tang, Α.，Johnson, P. J. J. Natl. Cancer Inst. (2005) ,97,1532-8非專利文獻(xiàn) 5 :Furuse, J. , Ishii, H. , Nakachi, K. , Suzuki, Ε. , Shimizu, S., Nakajima, K. =Cancer Sci., (2007), Oct. 22 (E-Pub)非專利文獻(xiàn) 6 :Philip,P. A. ,Mahoney,M. R. ,Allmer,C. ,Thomas, J.，Pitot，H.C.，Kim, G. , Donehower, R. C. , Fitch, Τ. , Picus, J. , Erlichman, C. J. Clin. Oncol. (2005), 23, 6657-63非專利文獻(xiàn) 7 Thomas, Μ. B. , Dutta, Α. , Brown, Τ. , Charnsangavej, C. , Rashid, Α.，Hoff, P. Μ.，Dancey, J.，Abbruzzese, J. L. J. Clin. Oncol.，(2005)，2005 ASCO Annual Meeting Proceedings,23,16S非專利文獻(xiàn)8 =Mendel DB, Laird AD, Xin X，Louie SG, Christensen JG, Li G, Schreck RE,Abrams TJ,Ngai TJ,Lee LB,Murray LJ,Carver J,Chan E,Moss KG,Haznedar JO, Sukbuntherng J, Blake RA, Sun L, Tang C, Miller T, Shirazian S, McMahon G, Cherrington JM ；Clin Cancer Res(2003)，9，327-3
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是鑒于上述情況而完成的，本發(fā)明的目的在于提供一種肝癌治療劑，所述 肝癌治療劑針對觀察到伴隨癌的進(jìn)展而出現(xiàn)的體重減少等肝癌固有癥狀的患者，能夠降低 因給與激酶抑制劑等化療劑而引起的化療劑所固有的副作用，即，腹瀉或便秘、貧血、引起 (致死的嚴(yán)重程度的)感染和敗血癥程度的免疫系統(tǒng)的抑制、出血、心毒性、肝毒性、腎毒 性、食欲不振、體重減少等，且能夠增大對肝癌的治療效果。本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)通過組合治療用抗體和肝癌治療劑，能夠發(fā)揮與單獨(dú)給與肝癌患 者該化療劑時(shí)相比更有效的治療效果，所述治療用抗體是與肝癌細(xì)胞中高度表達(dá)的蛋白質(zhì) 結(jié)合、且具有對該細(xì)胞發(fā)揮細(xì)胞毒性的能力的治療用抗體，所述肝癌治療劑是含有對肝癌 細(xì)胞有效的化療劑作為有效成分的肝癌治療劑。另外，本發(fā)明人等還發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的治療劑 不僅發(fā)揮上述有效的效果，而且還可以顯著地降低在單獨(dú)給與該化療劑時(shí)出現(xiàn)的化療劑所 固有的副作用，即，腹瀉或便秘、貧血、引起(致死的嚴(yán)重程度的)感染和敗血癥程度的免疫 系統(tǒng)的抑制、出血、心毒性、肝毒性、腎毒性、食欲不振、體重減少等，能夠發(fā)揮有效的治療效^ ο進(jìn)而，如下述實(shí)施例所示，使用移植了 HepG2的非人動物肝癌模型作為具有伴隨 肝癌進(jìn)展的食欲不振和體重減少等癥狀的模型時(shí)，證實(shí)了因給與化療劑，更具體而言給與 索拉非尼導(dǎo)致其體重減少增大，而通過給與本發(fā)明的治療劑，體重減少被抑制。S卩，本發(fā)明為以下發(fā)明[1] 一種用于治療或預(yù)防肝癌的藥物組合物，所述藥物組合物是組合化療劑及磷 脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體而形成的。[2]如[1]所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物為配合劑。[3]如[1]所述的藥物組合物，其特征在于，并用化療劑及磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 抗體。[4]如[3]所述的藥物組合物，其特征在于，同時(shí)或依次給與化療劑和磷脂酰肌醇 蛋白聚糖3抗體。[5]如[3]所述的藥物組合物，其特征在于，分別給與化療劑和磷脂酰肌醇蛋白聚 糖3抗體。[6] 一種用于治療或預(yù)防肝癌的藥物組合物，所述藥物組合物含有磷脂酰肌醇蛋 白聚糖3抗體作為有效成分、且與化療劑并用。
[7]如[6]所述的藥物組合物，其特征在于，同時(shí)給與磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體 和化療劑。[8]如[6]所述的藥物組合物，其特征在于，在給與化療劑之前或在給與之后，給 與磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體。[9] 一種用于治療或預(yù)防肝癌的藥物組合物，所述藥物組合物含有化療劑作為有 效成分、且與磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體并用。[10]如[9]所述的藥物組合物，其特征在于，同時(shí)給與化療劑和磷脂酰肌醇蛋白 聚糖3抗體。[11]如[9]所述的藥物組合物，其特征在于，在給與磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體之 前或在給與之后，給與化療劑。[12]如[1]至[11]中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，化療劑為激酶抑制 劑。[13]如[12]所述的藥物組合物，其特征在于，化療劑為多激酶抑制劑。[14]如[12]或[13]所述的藥物組合物，其特征在于，化療劑為索拉非尼 (BAY43-9006)。[15]如[12]或[13]所述的藥物組合物，其特征在于，化療劑為舒尼替尼。[16]如[1]至[15]中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚 糖3抗體為具有細(xì)胞毒性的抗體。[17]如[1]至[16]中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚 糖3抗體是包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號6表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號8表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號M表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。[18]如[1]至[17]中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚 糖3抗體是可以與第2抗體能夠結(jié)合的表位相結(jié)合的抗體，所述第2抗體是包含H鏈可變 區(qū)及L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有分別包含序列號5、6及7表示的氨基酸序列的 ⑶Rl、2及3，所述L鏈可變區(qū)具有分別包含序列號8J4及25表示的氨基酸序列的⑶Rl、2 及3。[19]如[1]至[16]或[18]中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇 蛋白聚糖3抗體是包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號6表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號9至23中任一個表示的氨基酸序列的⑶Rl、包含 序列號M表示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。[20]如[1]至[16]或[18]中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇 蛋白聚糖3抗體是包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號沈表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；
所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號觀表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號M表 示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。[21]如[1]至[16]或[18]中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇 蛋白聚糖3抗體是包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號30表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號32表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號M表 示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。[22]如[1]至[21]中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗 體為人源化抗體。[23]如[22]所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含 H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號3表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號4表示的氨基酸序列。[24]如[22]所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含 H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號3表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號4表示的氨基酸序列中的第34號Gly被不同的氨基 酸取代的氨基酸序列。[25]如[22]所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含 H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號27表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號四表示的氨基酸序列。[26]如[22]所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含 H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號31表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號33表示的氨基酸序列。[27] 一種副作用降低劑，用于降低化療劑治療肝癌而產(chǎn)生的副作用，所述副作用 降低劑含有治療用抗體作為有效成分。[28]如[27]所述的副作用降低劑，其特征在于，化療劑為激酶抑制劑。[29]如[27]或[28]所述的副作用降低劑，其特征在于，化療劑為多激酶抑制劑。[30]如[28]或[29]所述的副作用降低劑，其特征在于，化療劑為索拉非尼 (BAY43-9006)。[31]如[28]或[29]所述的副作用降低劑，其特征在于，化療劑為舒尼替尼。[32]如[27]至[31]中任一項(xiàng)所述的副作用降低劑，其特征在于，副作用為體重減 少。[33]如[27]至[32]中任一項(xiàng)所述的副作用降低劑，其特征在于，治療用抗體為磷 脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體。[34]如[33]所述的副作用降低劑，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為具有細(xì)胞毒性的抗體。[35]如[33]或[34]所述的副作用降低劑，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗 體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號6表示 的氨基酸序列的CDR2，及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號8表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號M表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。[36]如[33]至[35]中任一項(xiàng)所述的副作用降低劑，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋 白聚糖3抗體是可以與第2抗體能夠結(jié)合的表位相結(jié)合的抗體，所述第2抗體是包含H鏈 可變區(qū)及L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有分別包含序列號5、6及7表示的氨基酸 序列的CDR1、2及3，所述L鏈可變區(qū)具有分別包含序列號8J4及25表示的氨基酸序列的 CDRU 2 及 3。[37]如[33]、[34]或[36]中任一項(xiàng)所述的副作用降低劑，其特征在于，磷脂酰肌 醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號6表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號9至23中任一個表示的氨基酸序列的⑶Rl、包含 序列號M表示的氨基酸序列的CDR2，及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。[38]如[33]、[34]或[36]中任一項(xiàng)所述的副作用降低劑，其特征在于，磷脂酰肌 醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號沈表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號觀表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號M表 示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。[39]如[33]、[34]或[36]中任一項(xiàng)所述的副作用降低劑，其特征在于，磷脂酰肌 醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號30表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號32表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號M表 示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。[40]如[33]至[39]中任一項(xiàng)所述的副作用降低劑，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體 為人源化抗體。[41]如WO]所述的副作用降低劑，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包 含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號3表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號4表示的氨基酸序列。[42]如WO]所述的副作用降低劑，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包 含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號3表示的氨基酸序列；
所述L鏈可變區(qū)包含序列號4表示的氨基酸序列中的第34號Gly被不同的氨基 酸取代的氨基酸序列。[43]如WO]所述的副作用降低劑，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包 含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號27表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號四表示的氨基酸序列。[44]如WO]所述的副作用降低劑，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包 含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號31表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號33表示的氨基酸序列。[45] 一種用于增強(qiáng)化療劑的肝癌治療效果的藥物組合物，所述藥物組合物含有磷 脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體作為有效成分。[46]如W5]所述的藥物組合物，其特征在于，同時(shí)給與磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗 體和化療劑。[47]如所述的藥物組合物，其特征在于，在給與化療劑之前或在給與之后， 給與磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體。[48]如W5]至W7]中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，化療劑為激酶抑制 劑。[49]如W8]所述的藥物組合物，其特征在于，化療劑為多激酶抑制劑。[50]如W5]至W9]中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，化療劑為索拉非尼 (BAY43-9006)。[51]如W5]至W9]中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，化療劑為舒尼替尼。[52]如W5]至[51]中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚 糖3抗體是具有細(xì)胞毒性的抗體。[53]如W5]至[52]中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚 糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號6表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號8表示的氨基酸序列的⑶Rl、包含序列號M表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。[54]如W5]至[53]中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚 糖3抗體是可以與第2抗體能夠結(jié)合的表位相結(jié)合的抗體，所述第2抗體是包含H鏈可變區(qū) 及L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有分別包含序列號5、6及7表示的氨基酸序列的 ⑶Rl、2及3，所述L鏈可變區(qū)具有分別包含序列號8J4及25表示的氨基酸序列的⑶Rl、2 及3。[55]如W5]至[52]或[54]中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌 醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號6表示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號9至23中任一個表示的氨基酸序列的⑶Rl、包含 序列號M表示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。[56]如W5]至[52]或[54]中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌 醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號沈表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號觀表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號M表 示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。[57]如W5]至[52]或[54]中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌 醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號30表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號32表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號M表 示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。[58]如W5]至[57]中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗 體為人源化抗體。[59]如[58]所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含 H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號3表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號4表示的氨基酸序列。[60]如[58]所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含 H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號3表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號4表示的氨基酸序列中的第34號Gly被不同的氨基 酸取代的氨基酸序列。[61]如[58]所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含 H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號27表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號四表示的氨基酸序列。[62]如[58]所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含 H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號31表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號33表示的氨基酸序列。[63] 一種治療或預(yù)防受試者體內(nèi)肝癌的方法，所述方法包括將有效量的化療劑及 有效量的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體組合、給與受試者。[64]如W3]所述的方法，其特征在于，同時(shí)或依次給與化療劑和磷脂酰肌醇蛋白 聚糖3抗體。[65]如W3]所述的方法，其特征在于，分別給與化療劑和磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體。[66]如W3]至W5]中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，化療劑為激酶抑制劑。[67]如W6]所述的方法，其特征在于，化療劑為多激酶抑制劑。[68]如W6]或W7]所述的方法，其特征在于，化療劑為索拉非尼(BAY43-9006)。[69]如W6]或W7]所述的方法，其特征在于，化療劑為舒尼替尼。[70]如W3]至W9]中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗 體是具有細(xì)胞毒性的抗體。[71]如W3]至[70]中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗 體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號6表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號8表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號M表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。[72]如W3]至[71]中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗 體是可以與第2抗體能夠結(jié)合的表位相結(jié)合的抗體，所述第2抗體是包含H鏈可變區(qū)及L鏈 可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有分別包含序列號5、6及7表示的氨基酸序列的CDR1、2 及3，所述L鏈可變區(qū)具有分別包含序列號8J4及25表示的氨基酸序列的⑶Rl、2及3。[73]如W3]至[70]或[72]中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白 聚糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號6表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號9至23中任一個表示的氨基酸序列的⑶R1、包含 序列號M表示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。[74]如W3]至[70]或[72]中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白 聚糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，
所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的⑶Rl、包含序列號沈表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號觀表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號M表 示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。[75]如W3]至[70]或[72]中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白 聚糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號30表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號32表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號M表 示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。[76]如W3]至[75]中任一項(xiàng)所述的方法，其中，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為人 源化抗體。[77]如[76]所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈可 變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，
所述H鏈可變區(qū)包含序列號3表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號4表示的氨基酸序列。[78]如[76]所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈可 變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號3表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號4表示的氨基酸序列中的第34號Gly被不同的氨基 酸取代的氨基酸序列。[79]如[76]所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈可 變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號27表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號四表示的氨基酸序列。[80]如[76]所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈可 變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號31表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號33表示的氨基酸序列。[81] 一種降低受試者因利用化療劑治療肝癌而產(chǎn)生的副作用的方法，所述方法包 括給與受試者有效量的治療用抗體。[82]如[81]所述的方法，其特征在于，化療劑為激酶抑制劑。[83]如[81]或[82]所述的方法，其特征在于，化療劑為多激酶抑制劑。[84]如[82]或[83]所述的方法，其特征在于，化療劑為索拉非尼(BAY43-9006)。[85]如[82]或[83]所述的方法，其特征在于，化療劑為舒尼替尼。[86]如[81]至[85]中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，副作用為體重減少。[87]如[81]至[86]中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，治療用抗體為磷脂酰肌醇 蛋白聚糖3抗體。[88]如[87]所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體是具有細(xì)胞毒 性的抗體。[89]如[87]或[88]所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含 H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號6表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號8表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號M表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。[90]如[87]至[89]中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗 體是可以與第2抗體能夠結(jié)合的表位相結(jié)合的抗體，所述第2抗體是包含H鏈可變區(qū)及L鏈 可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有分別包含序列號5、6及7表示的氨基酸序列的CDR1、2 及3，所述L鏈可變區(qū)具有分別包含序列號8J4及25表示的氨基酸序列的⑶Rl、2及3。[91]如[87]、[88]或[90]中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚 糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號6表示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號9至23中任一個表示的氨基酸序列的⑶R1、包含 序列號M表示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。[92]如[87]、[88]或[90]中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚 糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號沈表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號觀表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號M表 示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。[93]如[87]、[88]或[90]中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚 糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號30表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號32表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號M表 示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。[94]如[87]至[93]中任一項(xiàng)所述的方法，其中，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為人 源化抗體。[95]如[94]所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈可 變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號3表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號4表示的氨基酸序列。[96]如[94]所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈可 變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號3表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號4表示的氨基酸序列中的第34號Gly被不同的氨基 酸取代的氨基酸序列。[97]如[94]所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈可 變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號27表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號四表示的氨基酸序列。[98]如[94]所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈可 變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號31表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號33表示的氨基酸序列。[99] 一種在受試者體內(nèi)增強(qiáng)化療劑的肝癌治療效果的方法，所述方法包括給與受 試者有效量的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體。[100]如[99]所述的方法，其特征在于，同時(shí)給與磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體和化 療劑。[101]如[99]所述的方法，其特征在于，在給與化療劑之前或在給與之后，給與磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體。[102]如[99]至[101]中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，化療劑為激酶抑制劑。[103]如[102]所述的方法，其特征在于，化療劑為多激酶抑制劑。[104]如[99]至[103]中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，化療劑為索拉非尼 (BAY43-9006)。[105]如[99]至[103]中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，化療劑為舒尼替尼。[106]如[99]至[105]中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 抗體是具有細(xì)胞毒性的抗體。[107]如[99]至[106]中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號6表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號8表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號M表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。[108]如[99]至[107]中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 抗體是可以與第2抗體能夠結(jié)合的表位相結(jié)合的抗體，所述第2抗體是包含H鏈可變區(qū)及L 鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有分別包含序列號5、6及7表示的氨基酸序列的CDR1、 2及3，所述L鏈可變區(qū)具有分別包含序列號8、M及25表示的氨基酸序列的⑶Rl、2及3。[109]如[99]至[106]或[108]中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋 白聚糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號6表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號9至23中任一個表示的氨基酸序列的⑶Rl、包含 序列號M表示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。[110]如[99]至[106]或[108]中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋 白聚糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號沈表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號觀表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號M表 示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。[111]如[99]至[106]或[108]中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋 白聚糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號30表示 的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號32表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號M表 示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。[112]如[99]至[111]中任一項(xiàng)所述的方法，其中，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為 人源化抗體。[113]如[112]所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號3表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號4表示的氨基酸序列。[114]如[112]所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈 可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號3表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號4表示的氨基酸序列中的第34號Gly被不同的氨基 酸取代的氨基酸序列。[115]如[112]所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈 可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號27表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號四表示的氨基酸序列。[116]如[112]所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈 可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號31表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號33表示的氨基酸序列。


[圖1]圖1為表示并用給與阿得里亞霉素(DOX)或米托蒽醌(MX)與GC33抗體產(chǎn) 生的肝癌細(xì)胞增殖抑制效果的曲線圖。[圖2]圖2為表示基于腫瘤體積變化的、hGC33抗體及索拉非尼對人肝癌細(xì)胞株 Huh-7細(xì)胞移植小鼠模型的抗腫瘤效果的曲線圖。[圖3]圖3為表示基于腫瘤體積變化的、hGC33抗體及索拉非尼對人肝癌細(xì)胞株 HepG2細(xì)胞移植小鼠模型的抗腫瘤效果的曲線圖。[圖4]圖4為表示基于模型的體重變化的、hGC33抗體及索拉非尼對人肝癌細(xì)胞 株!fepG2細(xì)胞移植小鼠模型體重減少的效果的曲線圖。[圖5]圖5為表示基于腫瘤體積變化的、pH7pL16抗體及索拉非尼對人肝癌細(xì)胞 株HepG2細(xì)胞移植小鼠模型的抗腫瘤效果的曲線圖。[圖6]圖6為表示基于該模型體重變化的、pH7pL16抗體及索拉非尼對人肝癌細(xì) 胞株!fepG2細(xì)胞移植小鼠模型體重減少的效果的曲線圖。[圖7]圖7為表示基于腫瘤體積變化(平均+標(biāo)準(zhǔn)偏差)的、hGC33抗體及舒尼 替尼對人肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞移植小鼠模型的抗腫瘤效果的曲線圖。[圖8]圖8表示本發(fā)明中優(yōu)選使用的人源化抗體的H鏈可變區(qū)及L鏈可變區(qū)的氨基酸序列。[圖9]圖9表示本發(fā)明中優(yōu)選使用的人源化抗體的H鏈可變區(qū)及L鏈可變區(qū)的 ⑶R的氨基酸序列。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供一種組合化療劑及磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體而形成的、用于治療或預(yù)防肝癌的藥物組合物。本發(fā)明中，所謂“組合化療劑及磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體而形成的、用于治療或 預(yù)防肝癌的藥物組合物”，是指為了在肝癌的治療或預(yù)防中同時(shí)、分別或依次給與化療劑及 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體而組合得到的藥物組合物。本發(fā)明的藥物組合物可以以同時(shí)含 有化療劑及磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的配合劑的形式提供。另外，分別提供了含有化療 劑的藥物和含有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的藥物，也可以同時(shí)、分別或依次使用這些藥 物。進(jìn)而，還可以提供由含有化療劑的藥物和含有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的藥物構(gòu)成 的試劑盒。上述藥物組合物中，化療劑和磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體以含在分別的藥物中的 形式進(jìn)行提供時(shí)，上述藥物的劑型可以為相同劑型，也可以為不同的劑型。例如，雙方可以 為互不相同的劑型，為非口服制劑、注射劑、點(diǎn)滴劑、靜脈內(nèi)點(diǎn)滴劑中的一種，雙方可以也可 以為同類劑型，為非口服制劑、注射劑、點(diǎn)滴劑、靜脈內(nèi)點(diǎn)滴劑中的一種。另外，還可以進(jìn)一 步將不同的一種以上的制劑與上述藥物組合物組合。從另一觀點(diǎn)考慮，本發(fā)明提供一種含有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體作為有效成 分、與化療劑并用的用于治療或預(yù)防肝癌的藥物組合物。含有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體 作為有效成分的本發(fā)明的藥物組合物與化療劑并用時(shí)，可以與化療劑同時(shí)給與，也可以在 化療劑給與之前或給與之后給與。在化療劑給與之前或給與之后給與磷脂酰肌醇蛋白聚糖 3抗體時(shí)，通過測定受試者中的該化療劑的殘留濃度，可以使其給與時(shí)間最佳化。該濃度可 以基于本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的分析方法使用各種色譜法等分離裝置對從受試者采集的試 樣進(jìn)行分析來確定。從另一觀點(diǎn)考慮，本發(fā)明提供一種含有化療劑作為有效成分、與磷脂酰肌醇蛋白 聚糖3抗體并用的用于治療或預(yù)防肝癌的藥物組合物。含有化療劑作為有效成分的藥物組 合物與磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體并用時(shí)，可以在給與磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的同時(shí) 給與，可以在磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體給與之前或給與之后給與。在磷脂酰肌醇蛋白聚 糖3抗體給與之前或給與之后給與化療劑時(shí)，通過測定受試者中的該磷脂酰肌醇蛋白聚糖 3抗體的殘留濃度，可以使其給與時(shí)間最佳化。該濃度可以基于本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的下述 ELISA等免疫的測定法對從受試者采集的試樣進(jìn)行分析來確定。化療劑本發(fā)明中使用的化療劑還包括在癌的化學(xué)療法中使用的或暗示對癌的化學(xué)療法 有用的化療劑?；焺┛梢跃植孔⑷?，或者也可以全身給與。局部注入可以采用本領(lǐng)域技 術(shù)人員公知的方法進(jìn)行。例如，TAE(經(jīng)導(dǎo)管動脈栓塞術(shù))中，將油性造影劑(Lipiodol)、抗 癌劑和塞栓物質(zhì)(Gelfoam)混合后注入對腫瘤供給營養(yǎng)的營養(yǎng)供給通路即肝動脈，使?fàn)I養(yǎng) 動脈阻塞，由此選擇性地使肝細(xì)胞癌壞死。另一方面，全身化學(xué)療法中，5-FU (氟尿嘧啶)、 UFT(尿嘧啶和替加氟)、MMC(絲裂霉素C)、DHAD(米托蒽醌)、ADR(阿霉素)(作為別名 也指DXR(阿得里亞霉素))、EPI (表柔比星)、⑶DP(順鉬)等可以單獨(dú)使用，并且還可以 與IFN(干擾素)適當(dāng)并用。進(jìn)而，拉帕替尼等具有抑制激酶的作用機(jī)制的化療劑也優(yōu)選 用作本發(fā)明中的化療劑。進(jìn)而，具有抑制激酶的作用機(jī)制的索拉非尼也優(yōu)選用作本發(fā)明的 化療劑。另外，無論作用機(jī)制如何，給與患有肝癌的受試者、結(jié)果使該受試者產(chǎn)生化療法固 有的副作用的化療劑，優(yōu)選用作本發(fā)明中的化療劑，所述副作用包括腹瀉或便秘、貧血、引起(致死的嚴(yán)重程度的)感染及敗血癥程度的免疫系統(tǒng)的抑制、出血、心毒性、肝毒性、腎毒 性、食欲不振、體重減少等。索拉非尼[4-[[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]氨基甲?；被鵠苯氧基]-N-甲 基吡啶-2-甲酰胺)是具有分子量464. 7的摩爾重量的口服活性型低分子化合物，其甲基 苯磺酸(甲苯磺酸)鹽即索拉非尼甲基苯磺酸鹽(BAY43-9006)作為肝癌全身化學(xué)療法中 使用的治療劑已經(jīng)在歐洲及美國得到認(rèn)可。另外，肝細(xì)胞癌的臨床試驗(yàn)中對肝細(xì)胞癌發(fā)揮 抗腫瘤活性的舒尼替尼(SU11248)，也可以與索拉非尼同樣地適當(dāng)用作本發(fā)明中使用的化 療劑。索拉非尼或舒尼替尼也可以優(yōu)選以藥學(xué)上能夠允許的鹽的形式進(jìn)行使用。作為鹽，例 如可以優(yōu)選舉出鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽等無機(jī)酸鹽；甲磺酸鹽、苯磺 酸鹽、甲苯磺酸鹽等磺酸鹽；甲酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、檸檬酸鹽、蘋果 酸鹽、琥珀酸鹽、丙二酸鹽、葡萄糖酸鹽、扁桃酸鹽、苯甲酸鹽、水楊酸鹽、氟乙酸鹽、三氟乙 酸鹽、酒石酸鹽、丙酸鹽、戊二酸鹽等羧酸鹽；鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽、銫鹽、銣鹽等堿金屬鹽；鎂 鹽、鈣鹽等堿土類金屬鹽；銨鹽、烷基銨鹽、二烷基銨鹽、三烷基銨鹽、四烷基銨鹽等銨鹽等。 其中，還優(yōu)選使用甲基苯磺酸(甲苯磺酸)鹽即BAY43-9006。本發(fā)明中使用的化療劑的給與途徑可以適當(dāng)?shù)厥褂每诜蚍强诜械娜我环N，優(yōu) 選采用口服給與。作為用于口服投與的劑型，例如可以從液體制劑、散劑、顆粒劑、片劑、腸 溶劑及膠囊劑等任意劑型中適當(dāng)選擇。具有上述劑型的化療劑可以采用本領(lǐng)域技術(shù)人員公 知的方法進(jìn)行制劑化。例如，可以將其與藥理學(xué)上允許的載體或介質(zhì)適當(dāng)組合，具體而言， 與滅菌水、生理食鹽水、植物油、乳化劑、混懸劑、表面活性劑、穩(wěn)定劑、香味劑、賦形劑、載 體、防腐劑及粘合劑等適當(dāng)組合，以通常認(rèn)可的制藥過程所要求的單位用量的形式混合后， 采用凍干、壓片成型等制劑化操作進(jìn)行制劑化?；焺┮部梢砸耘c水或除此之外的藥學(xué)上能夠允許的液體形成的無菌性溶液或 混懸液劑等注射劑的形式，通過非口服使用。可以適當(dāng)選擇上述制劑中的有效成分量，使其 能夠給與指示的范圍內(nèi)的適當(dāng)用量?？梢允褂米⑸溆谜麴s水之類載體，按照通常的制劑過 程，得到用于注射的無菌組合物。作為注射用水溶液，例如可以舉出含有生理食鹽水、葡萄 糖及其他輔藥的等滲液例如D-山梨糖醇、D-甘露糖、D-甘露糖醇、氯化鈉，可以與適當(dāng)?shù)闹?溶劑例如醇，具體而言，乙醇、多元醇例如丙二醇、聚乙二醇、非離子型表面活性劑例如聚山 梨酸酯80(TM)、HC0-50適當(dāng)并用。作為油性液，可以舉出芝麻油、大豆油，作為助溶劑，也可 以與苯甲酸芐酯、芐醇并用。另外，可以與緩沖劑例如磷酸鹽緩沖液、乙酸鈉緩沖液，鎮(zhèn)痛劑 例如鹽酸普魯卡因，穩(wěn)定劑例如芐醇、苯酚，抗氧化劑適當(dāng)?shù)嘏浜稀Ｖ委熡每贵w本發(fā)明的藥物組合物中使用的治療用抗體只要是與肝癌細(xì)胞中表達(dá)的蛋白質(zhì)結(jié) 合、可以對該細(xì)胞發(fā)揮細(xì)胞毒性的抗體即可，還可以適當(dāng)?shù)厥褂萌我饪贵w。優(yōu)選為抗體靶分 子的蛋白質(zhì)是在肝癌細(xì)胞的細(xì)胞表面表達(dá)的蛋白質(zhì)。從可以得到抗體治療的效果的方面考 慮，優(yōu)選靶分子在細(xì)胞表面表達(dá)的分子數(shù)較多，但該效果并不一定依賴于分子數(shù)。即，與正 常細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)相比，優(yōu)選在癌細(xì)胞中特異性地表達(dá)的分子作為靶分子。作為上述蛋白質(zhì) 的例子，優(yōu)選舉出磷脂酰肌醇蛋白聚糖3。磷脂酰肌醇蛋白聚糖3是存在于細(xì)胞表面上的硫酸乙酰肝素蛋白多糖的家族之 一，暗示其可能與產(chǎn)生的細(xì)胞分裂、及癌細(xì)胞的增殖有關(guān)，但其機(jī)制尚不明確。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)與磷脂酰肌醇蛋白聚糖3結(jié)合的某種抗體具有ADCC活性及CDC活性發(fā)揮細(xì)胞增殖抑制作用 (W02003/000883 專利文獻(xiàn)1)。另外，已知與特定表位結(jié)合的GC33抗體對肝癌細(xì)胞發(fā)揮較 強(qiáng)的ADCC活性及⑶C活性(W02006/006693 專利文獻(xiàn)幻。本發(fā)明的肝癌治療劑中，可以優(yōu) 選使用磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體。作為上述優(yōu)選的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體，可以舉 出GC33抗體(W02006/006693)。GC33抗體可變區(qū)的H鏈及L鏈的氨基酸序列分別如序列 號1及2所示。磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體可以基于公知的制備方法從雜交瘤中獲得 (W02006006693)。另外，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體可以通過基因工程學(xué)方法制作。艮口， 從雜交瘤中克隆抗體基因，組入適當(dāng)?shù)妮d體中，將其導(dǎo)入宿主，利用基因重組技術(shù)制作重 組型抗體(例如參見 Vandamme，A. M. et al.，Eur. J. Biochem. (1990)，192，767-75)。具 體而言，從產(chǎn)生抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的雜交瘤中，分離編碼抗磷脂酰肌醇蛋白聚 糖3抗體可變(V)區(qū)的mRNA。mRNA的分離可以如下進(jìn)行采用公知的方法例如胍超離心 法(Chirgwin, J. Μ. et al.，Biochemistry(1979) 18，5294-5299)、AGPC 法(Chomczynski, P. et al.，Anal. Biochem. (1987) 162，156-159)等從該雜交瘤細(xì)胞中制備后，使用 mRNA Purification Kit (Pharmacia 制)等，制備目標(biāo) mRNA。另外，通過使用 QuickPr印 mRNA Purification Kit (Pharmacia制)，可以從該雜交瘤中直接制備mRNA。使用逆轉(zhuǎn)錄酶，由所得的mRNA合成抗體V區(qū)的cDNA。cDNA的合成可以采用AMV Reverse Transcriptase First-strand cDNA Synthesis Kit(LUi^lH) · (ξ 。 另外，為了合成及擴(kuò)增cDNA，還可以優(yōu)選利用使用5，-Ampli FINDER RACE Kit(Clontech 制)及 PCR 的 5，-RACE 法(Frohman, M. A. et al.，Proc. Natl. Acad. Sci. USA(1988)85, 8998-9002、Belyavsky，A. et al.，Nucleic Acids Res. (1989) 17,2919-2932)等，在上述 cDNA的合成過程中，在cDNA的兩末端導(dǎo)入下述合適的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)。確認(rèn)所得cDNA 的序列后，插入包含該C區(qū)的表達(dá)載體，使編碼目標(biāo)磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的V區(qū)的 cDNA與編碼所期望的抗體恒定區(qū)(C區(qū))的DNA以符合讀框的方式融合。為了制備本發(fā)明中使用的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體，可以優(yōu)選使用下述方法， 即，將抗體基因組入表達(dá)載體，使抗體基因在表達(dá)控制區(qū)域例如增強(qiáng)子、啟動子的控制下表 達(dá)。接著，使用上述表達(dá)載體，適當(dāng)?shù)剞D(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，由此獲得重組細(xì)胞，所述重組細(xì)胞表達(dá) 編碼磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的DNA。抗體基因的表達(dá)，可以通過將編碼抗體重鏈(H鏈)或輕鏈(L鏈)的DNA分別組 入表達(dá)載體使宿主細(xì)胞同時(shí)轉(zhuǎn)化，或者也可以通過將編碼H鏈及L鏈的DNA組入單一表達(dá) 載體使宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)化(W01994011523)。將抗體基因分離導(dǎo)入合適的宿主制作抗體時(shí)，可以優(yōu)選使用合適的宿主和表達(dá)載 體的組合。使用真核細(xì)胞作為宿主時(shí)，優(yōu)選使用動物細(xì)胞、植物細(xì)胞、真菌細(xì)胞。作為動物 細(xì)胞，可以優(yōu)選舉出(1)哺乳類細(xì)胞，例如CH0、C0S、骨髓瘤、BHK(幼倉鼠腎)、Hela、Ver0 ； ⑵兩棲類細(xì)胞，例如非洲爪蟾卵母細(xì)胞；或(3)昆蟲細(xì)胞，例如Sf9、Sf21、Tn5等。作為植 物細(xì)胞，可以舉出來自煙草(Nicotiana)屬例如煙草(Nicotiana tabacum)的細(xì)胞，對它們 進(jìn)行例如愈傷組織培養(yǎng)。作為真菌細(xì)胞，可以舉出酵母，例如酵母屬(Saccharomyces)例如 釀酒酵母(Saccharomyces serevisiae)；絲狀真菌,例如曲霉屬(Aspergillus)例如黑曲 霉(Aspergillus niger)等。使用原核細(xì)胞時(shí)，優(yōu)選利用使用細(xì)菌細(xì)胞的生產(chǎn)系統(tǒng)。作為細(xì)菌細(xì)胞，可以舉出大腸桿菌(Ecoli)、枯草桿菌。將包含目標(biāo)抗體基因的表達(dá)載體通過轉(zhuǎn) 化導(dǎo)入這些細(xì)胞中，將轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞在體外進(jìn)行培養(yǎng)，由此可以從該轉(zhuǎn)化細(xì)胞的培養(yǎng)物中 得到所期望的抗體。另外，為了產(chǎn)生重組型抗體，不僅可以使用上述宿主細(xì)胞，還可以適當(dāng)使用轉(zhuǎn)基因 動物。例如將抗體基因以框內(nèi)的方式插入編碼乳汁中本身產(chǎn)生的蛋白質(zhì)(山羊β酪蛋白 等)的基因內(nèi)部，由此構(gòu)筑融合基因。將包含插入了抗體基因的融合基因的DNA片斷注入 山羊胚胎，將該注入胚胎導(dǎo)入雌性山羊。可以從乳汁中獲得所期望的抗體，所述乳汁是由接 受了胚胎的山羊生出的轉(zhuǎn)基因山羊或其子孫產(chǎn)生的。另外，為了增加含有由轉(zhuǎn)基因山羊產(chǎn) 生的所期望的抗體的乳汁量，可以對轉(zhuǎn)基因山羊適當(dāng)使用激素 bert，K. Μ. et al.，Bio/ Technology(1994) 121,699-702)。本發(fā)明中，為了降低對人的異種抗原性，可以使用經(jīng)過人為改變的基因重組型抗 體，例如嵌合抗體(Chimeric antibody)、人源化抗體(Humanized antibody)等。上述改變 抗體可以利用公知的方法制備。嵌合抗體是包含人以外的哺乳動物例如小鼠抗體的重鏈、 輕鏈可變區(qū)和人抗體的重鏈、輕鏈恒定區(qū)的抗體，將編碼小鼠抗體可變區(qū)的DNA與編碼人 抗體恒定區(qū)的DNA連接，將其在適當(dāng)?shù)乃拗髦斜磉_(dá)，由此可以得到該嵌合抗體。人源化抗體 的優(yōu)選例為hGC33抗體(W02006/00669;3)。hGC33抗體可變區(qū)的H鏈及L鏈的氨基酸序列 分別如序列號3及4所示。嵌合抗體及人源化抗體的C區(qū)中可以使用人抗體的C區(qū)，例如可以使用Cy 1、 CY2、CY3、CY4作為H鏈，使用CK、CX作為L鏈。上述序列是公知的。另外，為了改善 抗體或其產(chǎn)生的穩(wěn)定性，可以對人抗體C區(qū)進(jìn)行修飾。嵌合抗體由來自人以外的哺乳動物的抗體的V區(qū)和來自人抗體的C區(qū)構(gòu)成。另一 方面，人源化抗體由來自人以外的哺乳動物的抗體的互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR complementarity determining region)、來自人抗體的構(gòu)架區(qū)(FR framework region)及來自人抗體的C區(qū) 構(gòu)成。由于人源化抗體的人體內(nèi)的抗原性降低，所以作為本發(fā)明的治療劑的有效成分有用。人源化抗體可以稱作重構(gòu)(reshaped)人抗體，是將人以外的哺乳動物例如小鼠 抗體的CDR變?yōu)槿丝贵w的CDR并移植得到的，其通常的基因重組方法也是已知的。具體而 言，以使小鼠抗體的CDR和人抗體的FR框內(nèi)融合的方式進(jìn)行設(shè)計(jì)得到的DNA序列，可以通 過使用多個寡核苷酸作為引物的PCR法合成上述DNA序列，所述多個寡核苷酸被設(shè)計(jì)成 末端部具有重疊部分。使如上所述得到的DNA和編碼人抗體C區(qū)的DNA框內(nèi)融合，插入 表達(dá)載體中，使其在適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞中表達(dá)，由此可以制備人源化抗體(參見EP239400、 W096002576)。選擇人源化抗體的制作中使用的來自人抗體的FR區(qū)，在通過CDR進(jìn)行連接時(shí)使該 CDR形成良好的抗原結(jié)合部位。通過對如上所述制作的人源化抗體對抗原的結(jié)合活性進(jìn)行 定性或定量地測定、評價(jià)，可以適當(dāng)?shù)剡x擇人抗體的FR?？梢愿鶕?jù)需要，取代抗體V區(qū)中的 FR的氨基酸，使重構(gòu)人抗體的CDR形成適當(dāng)?shù)目乖Y(jié)合部位。上述氨基酸的取代可以通過 常用的PCR法容易地導(dǎo)入。通過對取代了氨基酸的變異型抗體對抗原的結(jié)合活性進(jìn)行測 定、評價(jià)，可以選擇具有所期望的性質(zhì)的變異FR序列(Sato, K. et al.，Cancer Res, 1993, 53,851-856)。另外，人抗體的取得方法也是已知的。例如在體外利用所期望的抗原或表達(dá)所期望抗原的細(xì)胞將人淋巴細(xì)胞致敏后，將致敏淋巴細(xì)胞與人骨髓瘤細(xì)胞、例如U266融合，由 此可以得到對抗原具有結(jié)合活性的所期望的人抗體(參見日本特公平1-59878)。另外， 通過對具有人抗體基因的所有組成成分的轉(zhuǎn)基因動物用所期望的抗原進(jìn)行免疫，可以得到 所期望的人抗體(國際公開 W01993012227、W0199203918、W01994002602、W01994025585、 W01996034096、W01996033735)。進(jìn)而，使用人抗體庫，通過淘選獲得人抗體的技術(shù)也是已 知的。例如利用噬菌體展示法，將人抗體V區(qū)以單鏈抗體(scFv)的形式表達(dá)在噬菌體表 面，可以選擇得到與抗原結(jié)合的噬菌體。通過分析被選擇的噬菌體的基因，可以確定編碼 與抗原結(jié)合的人抗體V區(qū)的DNA序列。確定與抗原結(jié)合的scFv的DNA序列后，使該V區(qū) 的序列與所期望的人抗體C區(qū)的序列框內(nèi)融合得到的融合蛋白質(zhì)在適當(dāng)?shù)募?xì)胞中表達(dá)，由 此得到人抗體。上述方法已經(jīng)是公知的，可以參考國際公開W01992001047、W01992020791、 W01993006213、W01993011236、W01993019172, W01995001438, W01995015388 進(jìn)行。如上所述構(gòu)筑的抗體基因可以通過公知的方法表達(dá)并獲得。使用哺乳類細(xì)胞時(shí)， 通過將常用的有用的啟動子、表達(dá)的抗體基因及其3’側(cè)下游的poly A信號功能性地結(jié)合， 可以使該抗體基因表達(dá)。例如作為啟動子/增強(qiáng)子，優(yōu)選舉出人巨細(xì)胞病毒即刻早期啟動 子 / 增強(qiáng)子(human cytomegalovirus immediate early promoter/enhancer)。作為其他 有用的啟動子/增強(qiáng)子，可以優(yōu)選舉出逆轉(zhuǎn)錄病毒、多瘤病毒、腺病毒、猴腎病毒40(SV40) 等病毒啟動子/增強(qiáng)子、或者人延伸因子Ια (HEFlci)等來自哺乳類細(xì)胞的啟動子/增強(qiáng)丁寸。使用SV40啟動子/增強(qiáng)子時(shí)，利用Mulligan等的方法(Nature (1979) 277，108) 可以容易地使基因表達(dá)，另外，使用HEFl α啟動子/增強(qiáng)子時(shí)，利用Mizushima等的方法 (Nucleic Acids Res. (1990) 18,5322)可以容易地使基因表達(dá)。使用大腸桿菌時(shí)，通過功能性地結(jié)合常用的有用的啟動子、用于抗體分泌的信號 序列及表達(dá)的抗體基因，可以使該基因表達(dá)。作為啟動子，例如可以優(yōu)選舉出IacZ啟動子、 araB啟動子。使用IacZ啟動子時(shí)利用Ward等的方法(Nature (1989) ；341，M4-546 ；FASEBJ. (1992)6,2422-2427)可以使該基因表達(dá)，或者使用araB啟動子時(shí)利用Better等的方法 (Science (1988) 240,1041-1043)可以使該基因表達(dá)。作為用于抗體分泌的信號序列，當(dāng)該抗體產(chǎn)生于大腸桿菌的周質(zhì)時(shí)，可以使用 pelB 信號序列(Lei, S. P. et al J. Bacteriol. (1987) 169,4379)。然后，將在周質(zhì)中產(chǎn)生的 抗體分離后，使用如尿素及鹽酸胍之類蛋白質(zhì)變性劑，由此改組(重折疊)抗體的結(jié)構(gòu)使其 具有所期望的結(jié)合活性。作為插入表達(dá)載體中的復(fù)制起源，優(yōu)選使用來自SV40、多瘤病毒、腺病毒、牛乳頭 瘤病毒(BPV)等的復(fù)制起源，進(jìn)而，為了在宿主細(xì)胞體系中擴(kuò)增基因拷貝數(shù)，可以優(yōu)選向表 達(dá)載體中插入選擇標(biāo)記，所述選擇標(biāo)記為氨基糖苷轉(zhuǎn)移酶(APH)基因、胸苷激酶(TK)基因、 大腸桿菌黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶(Ecogpt)基因、二氫葉酸還原酶(dhfr)基因等。為了制備本發(fā)明中使用的抗體，可以使用任意表達(dá)體系、例如真核細(xì)胞或原核細(xì) 胞體系。作為真核細(xì)胞，例如可以優(yōu)選舉出已經(jīng)被確立的哺乳類細(xì)胞體系、昆蟲細(xì)胞體系等 動物細(xì)胞等、以及絲狀真菌細(xì)胞及酵母細(xì)胞，作為原核細(xì)胞，例如可以優(yōu)選舉出大腸桿菌細(xì) 胞等細(xì)菌細(xì)胞。本發(fā)明中使用的抗體優(yōu)選使用哺乳類細(xì)胞例如CH0、C0S、骨髓瘤、BHK、Ver0、 Hela細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)。
然后，將轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞在體外或體內(nèi)培養(yǎng)，產(chǎn)生目標(biāo)抗體。宿主細(xì)胞的培養(yǎng)按照 公知的方法進(jìn)行。例如，作為培養(yǎng)液，可以使用DMEM、MEM、RPMI 1640、IMDM，也可以并用胎 牛血清(FCQ等血清補(bǔ)液。如上所述表達(dá)、產(chǎn)生的抗體可以通過單獨(dú)或者適當(dāng)組合使用通常在蛋白質(zhì)純化 中采用的公知方法進(jìn)行純化。例如，通過對A蛋白柱等親和柱、色譜柱、過濾、超濾、鹽析、 透析等進(jìn)行適當(dāng)選擇、組合，可以分離、純化抗體(Antibodies A Laboratory Manual. Ed Harlow, David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory,1988)。作為本發(fā)明中使用的抗體，也可以優(yōu)選使用糖鏈被改變的抗體。已知通過改變抗 體的糖鏈，可以增強(qiáng)下述的抗體的ADCC活性。即，抗體結(jié)合的抗原在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)沒 有達(dá)到能夠較強(qiáng)地發(fā)揮ADCC活性的程度的情況下，可以優(yōu)選使用糖鏈被改變的抗體。作為 糖鏈被改變的抗體，例如已知有經(jīng)糖基化修飾的抗體(W099/54342等)、糖鏈中附加的巖藻 糖缺失的抗體(W02000061739、W02002031140等)、具有含有截開型GIcNAC的糖鏈的抗體 (W02002079255 等)等?？贵w與其目標(biāo)(即，抗原)是否結(jié)合可以通過使用公知的方法適當(dāng)?shù)剡M(jìn)行評價(jià)。 具體而言，作為測定抗體對表達(dá)抗原的細(xì)胞的結(jié)合活性的方法，可以舉出在Antibodies A Laboratory Manual. (Ed Harlow, David Lane， Cold Spring Harbor Laboratory,1988) 中359-420頁中記載的方法。即，可以根據(jù)以細(xì)胞作為抗原的ELISA或FACS(熒光激活細(xì) 胞分選術(shù))的原理適當(dāng)?shù)剡M(jìn)行評價(jià)。在ELISAformat中，通過比較由酶反應(yīng)產(chǎn)生的信號水 平，可以定量地評價(jià)抗體對細(xì)胞的結(jié)合活性。即，將受試抗體加到固定化有各過量表達(dá)細(xì)胞 的ELISA板上，利用識別受試抗體的酶標(biāo)志第2抗體，能夠檢測與細(xì)胞結(jié)合的抗體?；蛘咴?FACS中，制備受試抗體的稀釋系列，確定抗體對各過量表達(dá)細(xì)胞的結(jié)合效價(jià)(titer)，由此 可以比較其對細(xì)胞的結(jié)合活性。在FACS format中，測定在細(xì)胞表面上表達(dá)的抗原與對應(yīng)于該抗原的抗體之間 的結(jié)合，所述細(xì)胞不與ELISA板等載體結(jié)合并懸浮于緩沖液等中。作為利用FACS format 測定中使用的流式細(xì)胞儀，例如可以舉出FACSCanto (商標(biāo))II、FACSAria (商標(biāo))、 FACSArray (商標(biāo))、FACS Vantage (商標(biāo))SE、FACSCalibur (商標(biāo))(以上 BD Biosciences) 和EPICS ALTRA HyPerSort、Cytomics FC 500,EPICS XL-MCL ADC、EPICS XL ADCXell Lab Quanta/Cell Lab Quanta SC( VXJl Beckman Coulter)等。作為受試抗體對抗原的結(jié)合活性的優(yōu)選測定方法之一例，可以舉出如下方法使 表達(dá)抗原的細(xì)胞與受試抗體反應(yīng)，接著用識別受試抗體的經(jīng)FITC標(biāo)記的二次抗體對上述 細(xì)胞染色后，采用FACSCalibur(BD)進(jìn)行測定，利用CELL QUEST Software (BD)解析其熒光 強(qiáng)度。將根據(jù)本方法使用受試抗體得到的幾何平均值(受試Ge0-Mean值)與利用對照抗 體得到的對照Ge0-Mean值進(jìn)行比較，由此可以判斷受試抗體的結(jié)合活性。求出Ge0-Mean 值(幾何平均值)的計(jì)算式記載在CELL QUEST軟件用戶指南(BD biosciences公司)中。本發(fā)明中使用的抗體還優(yōu)選使用下述抗體，即，可以與GC33抗體能夠結(jié)合的表位 相結(jié)合的抗體。本發(fā)明中使用的抗體是否能與該表位結(jié)合，可以通過以上所述的FACS及 ELISA進(jìn)行試驗(yàn)得到。可以通過測定試驗(yàn)的受試抗體是否和與GC33抗體結(jié)合的表位相同的 表位結(jié)合，即是否與GC33抗體共有表位，兩者是否對相同的表位競爭來進(jìn)行研究。本發(fā)明 中，抗體間的競爭可以利用FACS及交叉阻斷測定(cross-blocking assay)等檢測。FACS中，首先使GC33抗體與GPC3表達(dá)細(xì)胞結(jié)合，測定熒光信號。然后，使候選競爭抗體反應(yīng)后， 使GC33抗體與相同的細(xì)胞反應(yīng)，同樣地利用FACS進(jìn)行解析?；蛘?，可以使GC33抗體和受 試競爭抗體同時(shí)與相同的細(xì)胞反應(yīng)。在競爭抗體存在下如果GC33抗體的FACS的解析圖發(fā) 生變化，則可以確認(rèn)競爭抗體識別與GC33抗體相同的表位。交叉阻斷測定除本說明書中具 體記載的方法之外，還可以適當(dāng)采用例如Antibodies，A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory，Harlow 及 David Lane 編(1988)等中記載的公知的方法。例如競爭ELISA測定為優(yōu)選的交叉阻斷測定。具體而言，在交叉阻斷測定中，在 微量滴定板的孔上固定已表達(dá)了 GPC3蛋白質(zhì)的細(xì)胞。在候選競爭抗體的存在下或不存在 下，對該孔進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)后，向該孔中添加GC33抗體。與孔中的GPC3蛋白質(zhì)表達(dá)細(xì)胞結(jié)合的 GC33抗體的量，與對相同表位的結(jié)合發(fā)生競爭的候選競爭抗體(受試抗體)的結(jié)合能反相 關(guān)。即，受試抗體對同一表位的親合性越大，GC33抗體對固定有GPC3蛋白質(zhì)表達(dá)細(xì)胞的孔 的結(jié)合量越低?；蛘?，相反地受試抗體對同一表位的親合性越大，受試抗體對固定有GPC3 蛋白質(zhì)表達(dá)細(xì)胞的孔的結(jié)合量越大。與孔結(jié)合的抗體量可以通過預(yù)先標(biāo)記抗體而容易地測定。例如，生物素標(biāo)記的抗 體，可以通過使用親和素過氧化物酶綴合物和適當(dāng)?shù)幕|(zhì)進(jìn)行測定。將利用過氧化物酶等 酶標(biāo)記的交叉阻斷測定特別地稱作競爭ELISA測定?？贵w可以用能夠檢測或者測定的其他 標(biāo)記物進(jìn)行標(biāo)記。具體而言，公知的有放射標(biāo)記或者熒光標(biāo)記等。進(jìn)而，當(dāng)受試抗體具有來自與GC33抗體不同的種的恒定區(qū)時(shí)，通過使用特異性地 識別來自任意的種的恒定區(qū)的標(biāo)記抗體，可以測定與孔結(jié)合的任一種抗體。或者，為來自相 同種的抗體，但類別不同時(shí)，通過特異性地識別各類別的抗體，可以較好地測定與孔結(jié)合的 抗體。與在不存在候選競爭抗體下實(shí)施的對照試驗(yàn)中得到的結(jié)合活性相比，如果候選抗 體能夠以至少20 %、優(yōu)選至少20-50 %、更優(yōu)選至少50 %阻斷GC33抗體結(jié)合，則該候選競爭 抗體和GC33抗體與實(shí)質(zhì)相同的表位結(jié)合的抗體、或者該候選競爭抗體對與相同表位的結(jié)合產(chǎn)生競爭。作為和GC33抗體與實(shí)質(zhì)相同的表位結(jié)合、或者對與相同表位的結(jié)合產(chǎn)生競爭的 抗體，在本發(fā)明的實(shí)施例中，可以優(yōu)選舉出下述抗體一種抗體，包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示 的氨基酸序列的CDR1、包含序列號6表示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨 基酸序列的⑶R3，所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號9至23中任一個表示的氨基酸序列的⑶Rl、包含 序列號M表示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3 ；和
一種抗體，包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示 的氨基酸序列的CDRl、包含序列號沈表示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨 基酸序列的⑶R3，所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號觀表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號M表 示的氨基酸序列額CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3 ；或者一種抗體，包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示 的氨基酸序列的CDRl、包含序列號30表示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的⑶R3，所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號32表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列號M表 示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3，但不限定于此，可以通過上述交叉阻斷測定等適當(dāng)選擇。本發(fā)明中優(yōu)選使用的示 例人源化抗體的H鏈可變區(qū)及L鏈可變區(qū)以及各CDR的氨基酸序列如圖8及圖9所示。本發(fā)明中使用的抗體具有細(xì)胞毒性。所謂細(xì)胞毒性，是指抗體對表達(dá)其對應(yīng)抗原 的靶細(xì)胞產(chǎn)生傷害的活性?？乖谄湫再|(zhì)上為在抗原與抗體之間形成的抗原抗體復(fù)合體 在細(xì)胞內(nèi)不發(fā)生內(nèi)化的抗原時(shí)，作為抗體發(fā)揮的細(xì)胞毒性，可以優(yōu)選舉出抗體依賴性細(xì)胞 毒性(Antibody-d印endent cellular cytotoxicity，以下稱作 “ADCC 活性”)或補(bǔ)體依賴 性細(xì)胞毒性(Complement-d印endent cellular cytotoxicity，以下稱作“CDC 活性”)。另 一方面，抗原在其性質(zhì)上為在抗原與抗體之間形成的抗原抗體復(fù)合體在細(xì)胞內(nèi)發(fā)生內(nèi)化的 抗原時(shí)，優(yōu)選使用化療劑、放射性同位元素或毒性物質(zhì)與抗體結(jié)合的綴合抗體(conjugated antibody)。上述情況下，抗體發(fā)揮的細(xì)胞毒性是與綴合抗體結(jié)合的化療劑、放射性同位元 素或毒性物質(zhì)所發(fā)揮的細(xì)胞毒性。可以通過公知的方法適當(dāng)測定本發(fā)明中使用的抗體是否發(fā)揮ADCC活性或者是 否發(fā)揮 CDC 活性(例如，Current protocols in Immunology, Chapter 7. Immunologic studies in humans，Editor，John E，Coligan et al.，John Wiley & Sons，Inc.，(1993)寸乂 O具體而言，首先，按照下述要領(lǐng)，配制效應(yīng)細(xì)胞、補(bǔ)體溶液、靶細(xì)胞。(1)效應(yīng)細(xì)胞的配制從CBA/N小鼠等中摘出脾臟，在RPMI 1640培養(yǎng)基(Invitrogen)中分離脾臟細(xì) 胞。用含有10%胎牛血清(FBS、HyClone)的相同培養(yǎng)基清洗后，將細(xì)胞濃度配制成5X IO6/ ml，由此可以配制效應(yīng)細(xì)胞。(2)補(bǔ)體溶液的配制可以將Baby Rabbit Complement (CEDARLANE)用含有 10 % FBS 的培養(yǎng)基 (Invitrogen)稀釋10倍，配制補(bǔ)體溶液。3)靶細(xì)胞的配制將表達(dá)抗原的細(xì)胞與0. 2mCi 的 51Cr_ 鉻酸鈉(GE HealthcareBiosciences) 一起 在含有10% FBS的DMEM培養(yǎng)基中于37°C下培養(yǎng)1小時(shí)，由此可以將該靶細(xì)胞進(jìn)行放射性 標(biāo)記。作為表達(dá)抗原的細(xì)胞，可以優(yōu)選使用用編碼抗原的基因轉(zhuǎn)化得到的細(xì)胞、原發(fā)性肝細(xì) 胞癌、轉(zhuǎn)移性肝細(xì)胞癌等。放射性標(biāo)記后，將細(xì)胞用含有10% FBS的RPMI 1640培養(yǎng)基清洗 3次，將細(xì)胞濃度配制成2X IO5細(xì)胞/ml，由此可以配制靶細(xì)胞。ADCC活性或者⑶C活性可以根據(jù)下述方法測定。測定ADCC活性時(shí)，在96孔U底 培養(yǎng)板(Becton Dickinson)中加入靶細(xì)胞和本發(fā)明的抗體，每1個孔各50 μ 1，在冰上使 其反應(yīng)15分鐘。然后，在每1個孔中各加入100 μ 1效應(yīng)細(xì)胞，將板在二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培 養(yǎng)4小時(shí)。設(shè)定抗體的最終濃度為0或10yg/ml，但可以基于該抗體的活性適當(dāng)調(diào)整。培 養(yǎng)后，每1個孔中回收100 μ 1上清液，用Y計(jì)數(shù)器(C0BRAII AUTO-GAMMA、MODEL D5005、 Packard Instrument Company)測定放射活性?？梢允褂盟玫姆派浠钚缘闹蹈鶕?jù)計(jì)算式 (A-C)/(B-C) X 100，計(jì)算細(xì)胞毒性(％)。上述計(jì)算式中，A表示各試樣的放射活性(cpm),B表示加入NP-40(nacalai tesque)的試樣的放射活性(cpm)，C表示只含靶細(xì)胞的試 樣的放射活性(cpm)。測定⑶C活性時(shí)，在96孔平底培養(yǎng)板(Becton Dickinson)中加入靶細(xì)胞和本發(fā) 明的抗體，每1個孔各50 μ 1，在冰上使其反應(yīng)15分鐘。然后，在每1個孔中加入100 μ 1 補(bǔ)體溶液，在二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)4小時(shí)，但可以基于該抗體的活性適當(dāng)調(diào)整。設(shè)定抗體 的最終濃度為0或3μ g/ml，但可以基于該抗體的活性適當(dāng)調(diào)整。培養(yǎng)后，每1個孔中回收 IOOyl上清液，用Y計(jì)數(shù)器測定放射活性?？梢耘cADCC活性測定中使用的方法同樣地計(jì) 算細(xì)胞毒性。綴合抗體所發(fā)揮的細(xì)胞毒性，優(yōu)選通過測定與綴合抗體結(jié)合的化療劑、放射性同 位元素或毒性物質(zhì)所發(fā)揮的細(xì)胞毒性來評價(jià)。測定與綴合抗體結(jié)合的化療劑、放射性同位 元素或毒性物質(zhì)所發(fā)揮的細(xì)胞毒性時(shí)，在96孔平底培養(yǎng)板(Becton Dickinson)中加入靶 細(xì)胞和本發(fā)明的綴合抗體，每1個孔各50μ 1，在冰上使其反應(yīng)15分鐘。然后，在二氧化碳 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)1至4小時(shí)。設(shè)定抗體的最終濃度為0或3 μ g/ml，但可以基于該綴合抗體的 活性適當(dāng)調(diào)整。培養(yǎng)后，回收100μ1的上清液，用γ計(jì)數(shù)器測定放射活性?？梢耘cADCC 活性測定中使用的方法同樣地計(jì)算細(xì)胞毒性。作為與本發(fā)明的抗體結(jié)合、發(fā)揮細(xì)胞毒性的化療劑，例如可以舉出以下化療 劑。即，阿扎立平(azaribine)、阿納托唑(anastrozole)、氮胞苷(azacytidine)、博 來霉素(bleomycin)、硼替佐米(bortezomib)、苔蘚抑素_1 (bryostatin-Ι)、白消安 (busulfan)、喜樹喊(camptothecin)、10-輕基喜樹喊(10-hydroxycamptothecin) > 卡氮芥(carmustine)、西樂葆(celebrex)、苯丁 酸氮芥(chlorambucil)、順鉬 (cisplatin)、依立替康(irinotecan)、卡鉬(carboplatin)、克拉屈濱(cladribine)、 環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)、阿糖胞苷(cytarabine)、達(dá)卡巴嗪(dacarbazine)、多 西他賽(docetaxel)、放線菌素D(dactinomycin)、柔紅霉素葡萄糖苷酸(daunomycin glucuronide)、柔紅霄素(daunorubicin)、地塞米豐公(dexamethasone)、己；I；希雌 ) (diethylstilbestrol)、阿得里亞霉素(doxorubicin)、阿霉素葡萄糖苷酸(doxorubicin glucuronide)、表柔比星(epirubicin)、乙塊雌 二醇(ethinyl estradiol)、雌莫司 Π" (estramustine)、依托泊昔(etoposide)、依托泊昔葡萄糖昔酸(etoposide glucuronide)、 氟尿苷(floxuridine)、氟達(dá)拉濱(fludarabine)、氟他胺(flutamide)、氟尿嘧啶 (f luorouracil)、氟甲睪酮(f luoxymesterone)、吉西他濱(gemcitabine)、己酸輕孕 Sf (hydroxyprogesterone caproate)、pi 基月尿(hydroxyurea)、去甲氧基柔紅霄素 (idarubicin)、異環(huán)磷酰胺(ifosfamide)、亞葉酸(Ieucovorin)、洛莫司汀(Iomustine)、 氮芥(mechlorethamine)、乙酸甲輕孕酮(medroxyprogesteroneacetate)、乙酸甲地 孕酮(megestrol acetate)、美法倉(melphalan)、巰基 口票呤(mercaptopurine)、甲氨 喋呤(methotrexate)、米托蒽醌(mitoxantrone)、光輝霉素(mithramycin)、絲裂霉素 (mitomycin)、米托坦(mitotane)、丁酸苯酉旨(phenylbutyrate)、撥尼松(prednisone)、 甲基芐胼(procartazine)、紫杉醇(paclitaxel)、噴司他丁(pentostatin)、司莫司汀 (semustine)、鏈佐星(str印tozocin)、他莫昔芬(tamoxifen)、紫杉燒類(taxanes)、紫杉 酚(taxol)、丙酸睪丸酮(testosterone propionate)、沙利度胺(thalidomide)、硫鳥嘌呤 (thiogimnine)、噻替派(thiot印a)、替尼泊苷(teniposide)、托泊替康(topotecan)、烏拉莫司丁 (uracil mustard)、長春堿(vinblastine)、長春瑞濱(vinorelbine)、長春新堿 (vincristine)。本發(fā)明中，優(yōu)選的化療劑為低分子化療劑。低分子化療劑即使與抗體結(jié)合后，影響 抗體功能的可能性也低。本發(fā)明中，低分子化療劑通常具有100 2000、優(yōu)選200 1000 的分子量。此處列舉的化療劑均為低分子化療劑。上述本發(fā)明中的化療劑中包含在生物體 內(nèi)轉(zhuǎn)化為活性的化療劑的前藥。前藥通過酶的轉(zhuǎn)化、也可以通過非酶的轉(zhuǎn)化被適當(dāng)?shù)鼗罨?。另外，?yōu)選使用蓖麻毒素(ricin)、相思豆毒素(abrin)、核糖核酸酶、豹蛙酶 (onconase)、DNase I、葡萄球菌腸毒素-A、美洲商陸(pokeweed)抗病毒蛋白質(zhì)、白樹毒素 (gelonin)、白喉毒素、假單胞菌外毒素、假單胞菌內(nèi)毒素、L-天門冬酰胺酶、PEG L-天門冬 酰胺酶等毒性肽，對抗體進(jìn)行修飾。另外，在其他方案中，可以將一個或二個以上低分子化 療劑和毒性肽分別組合，用于抗體修飾。本發(fā)明的抗體和上述低分子化療劑的結(jié)合可以適 當(dāng)?shù)厥褂霉矁r(jià)鍵或非共價(jià)鍵。結(jié)合有這些化療劑的抗體的制作方法是公知的。進(jìn)而，蛋白質(zhì)性的藥物和毒素可以優(yōu)選通過基因工程學(xué)方法與抗體結(jié)合。具體而 言，例如使編碼上述細(xì)胞毒性肽的DNA與編碼本發(fā)明的抗體的DNA框內(nèi)融合，在合適的宿主 細(xì)胞中表達(dá)，由此可以優(yōu)選以融合蛋白質(zhì)的形態(tài)得到結(jié)合了毒性肽的本發(fā)明的抗體。得到 與抗體形成的融合蛋白質(zhì)時(shí)，通常在抗體的C末端側(cè)配置蛋白質(zhì)性的藥物或毒素。在抗體 與蛋白質(zhì)性藥物或毒素之間優(yōu)選通過肽連接體連接。藥物組合物本發(fā)明中，提供用于治療或預(yù)防肝癌的藥物組合物或使用該藥物組合物的治療方 法，所述藥物組合物對肝癌治療有效、且組合了化療劑及磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體。另 外，本發(fā)明的其他方案中，提供一種方法，即，利用化療劑對肝癌患者進(jìn)行治療時(shí)，通過使用 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體，可以增強(qiáng)該化療劑的治療效果，且降低由該化療劑引起的副 作用。此處，所謂治療效果的增強(qiáng)，是指治療的效率提高、降低為了治療而給與的化療劑的 量、及/或縮短使用化療劑的治療時(shí)間。另外，在本發(fā)明的其他方案中，提供一種用于制備 藥物組合物的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的使用方法，所述藥物組合物是含有化療劑及磷 脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體作為有效成分、用于治療或預(yù)防肝癌的藥物組合物。進(jìn)而，本發(fā)明 提供一種治療或預(yù)防肝癌的方法，其特征在于使用化療劑及磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體。本發(fā)明中，所謂含有化療劑及/或磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體作為有效成分，是指 含有化療劑及/或磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體作為主要活性成分，對化療劑及/或磷脂酰 肌醇蛋白聚糖3抗體的含有率沒有限制。另外，所謂“治療”，是指通過給與受試者本發(fā)明的 藥物組合物，使肝癌細(xì)胞凋亡或其細(xì)胞數(shù)減少、抑制肝癌細(xì)胞的增殖、改善由肝癌引起的各 種癥狀。另外，所謂“預(yù)防”，是指防止由減少的肝癌細(xì)胞再次增殖導(dǎo)致的其數(shù)量增加，防止 增殖被抑制的肝癌細(xì)胞的再次增殖。本發(fā)明的治療用抗體的給藥方式可以通過口服給藥、非口服給藥中的任一種方法 給藥。特別優(yōu)選非口服給藥的給藥方式，作為相關(guān)的給藥方式，具體而言，可以優(yōu)選舉出注 射給藥、經(jīng)鼻給藥、經(jīng)肺給藥、經(jīng)皮給藥等。作為注射給藥的例子，例如可以通過靜脈內(nèi)注 射、肌肉內(nèi)注射、腹腔內(nèi)注射、皮下注射等全身或局部地給藥本發(fā)明的治療用抗體。另外， 可以根據(jù)患者的年齡、癥狀適當(dāng)選擇給藥方式。作為給藥量，例如，可以在每一次給與、每 Ikg體重為0. OOOlmg至IOOOmg的范圍內(nèi)選擇給藥量?；蛘?，例如，在每位患者0. 001至100000mg/body的范圍內(nèi)選擇給藥量。但是，本發(fā)明的治療用抗體并不限定于上述給藥量。本發(fā)明中的化療劑和磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體并用，是指同時(shí)給與或使用(以 下簡稱作“給與”)化療劑和磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體，給藥順序和給藥間隔等不作限定 性解釋。另外，還可以以本發(fā)明的組合有化療劑和磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的試劑盒形 式進(jìn)行使用。進(jìn)而，根據(jù)本發(fā)明，并用化療劑和磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體時(shí)，可以根據(jù)期 望，與任意一方單獨(dú)使用的給藥量相比分別以較少的給藥量給與。本發(fā)明的化療劑和磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的給與順序，可以在給與磷脂酰肌 醇蛋白聚糖3抗體后給與化療劑，也可以同時(shí)給與化療劑和磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體，還 可以在給與化療劑后給與磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體。分別給與本發(fā)明的化療劑和磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體時(shí)，化療劑和磷脂酰肌醇 蛋白聚糖3抗體的給與間隔沒有特別限定，可以根據(jù)給藥方式和劑型等主要因素設(shè)定。例 如為0小時(shí) 168小時(shí)，優(yōu)選為0小時(shí) 72小時(shí)，較優(yōu)選為0 M小時(shí)，更優(yōu)選為0小時(shí) 12小時(shí)。另外，除給藥方式和劑型等主要因素之外，還可以考慮本發(fā)明的化療劑和磷脂酰肌 醇蛋白聚糖3抗體在受試者體內(nèi)的殘留濃度。即，在給與磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體前給 與化療劑時(shí)，可以在下述時(shí)刻給與磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體，即，檢測到受試者體內(nèi)的該 化療劑的殘留濃度滿足于能夠得到磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的所期望的效果的時(shí)刻。使 用各種色譜法等分離裝置、采用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的分析方法對從受試者采集的試樣進(jìn) 行分析，基于此結(jié)果可以確定該濃度。與此相反地，給與化療劑前給與磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體時(shí)，可以在下述時(shí)刻 給與化療劑，即，檢測到受試者體內(nèi)的該磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的殘留濃度滿足能夠 得到化療劑的所期望的效果的時(shí)刻。采用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的ELISA等免疫的測定法對 從受試者采集的試樣進(jìn)行分析，基于此結(jié)果可以確定該濃度。本發(fā)明的治療用抗體可以按照常規(guī)方法進(jìn)行制劑化(例如，Remington' s Pharmaceutical Science，Latest edition，Mark Publishing Company, Easton，U. S. A)， 也可以同時(shí)含有藥物中允許的載體或添加物。例如可以舉出表面活性劑、賦形劑、著色 齊U、香料、防腐劑、穩(wěn)定劑、緩沖劑、懸浮劑、等滲劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、流動性促進(jìn) 劑、矯味劑等，但并不限定于此，可以適當(dāng)?shù)厥褂闷渌Ｓ玫妮d體。具體而言，可以優(yōu)選 舉出輕質(zhì)無水硅酸、乳糖、結(jié)晶纖維素、甘露醇、淀粉、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉、 羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、聚乙烯醇縮乙醛二乙氨基乙酸酯(polyvinyl acetal diethylamino acetate)、聚乙烯吡咯烷酮、明膠、中鏈脂肪酸三甘油酯、聚氧乙烯氫化蓖麻 油60、白糖、羧甲基纖維素、玉米淀粉、無機(jī)鹽類等。本說明書中明確引用的全部專利及參考文獻(xiàn)的內(nèi)容作為參照全部引入本說明書。以下，根據(jù)實(shí)施例的記載具體地說明本發(fā)明，但本發(fā)明對于該記載不作限定性解釋。實(shí)施例實(shí)施例1并用磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體與化療劑(米托蒽醌或鹽酸阿得里亞霉素)對表 達(dá)磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的人肝癌細(xì)胞株移植小鼠模型的效果(1)細(xì)胞株
使用HuH-7 細(xì)胞(Human Science Research Resource Bank)及H印G2 細(xì)胞(ATCC) 作為表達(dá)磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的人肝癌細(xì)胞株。HuH-7細(xì)胞用含有10% FBS(BIONET) 的Dulbecco，s Modifid Eagle's Medium培養(yǎng)基(SIGMA)維持并傳代培養(yǎng)，H印G2細(xì)胞 用含有10% FBS、lmmol/l MEM的丙酮酸鈉Qnvitrogen)、lmmol/1 MEM的非必需氨基酸 (Invitrogen)的 Minimum Essential Medium Eagle 培養(yǎng)基(SIGMA)維持并傳代培養(yǎng)。(2)人肝癌細(xì)胞株移植小鼠模型的制作使用含有等量各繼代培養(yǎng)用培養(yǎng)基與MATRIGEL Matrix(BD Bioscience)的溶液， 制備各細(xì)胞，使之為5 X IO7細(xì)胞/ml。向SCID小鼠(雄性、5周齡)(日本CLEA)的腹部皮 下移植100 μ 1該細(xì)胞懸浮液(即，每只小鼠5 X IO6個細(xì)胞)，所述SCID小鼠在細(xì)胞移植的 前一天已經(jīng)預(yù)先向腹腔內(nèi)給與了 ΙΟΟμΙ抗脫唾液酸GMl抗體(和光純藥，將1安瓿中的內(nèi) 容物溶解成5ml)。腫瘤體積使用下述公式算出，在腫瘤體積的平均值達(dá)到237498mm3的時(shí) 刻，判斷完成模型。公式腫瘤體積=長徑X短徑X短徑/2(3)抗體及化療劑的制備使用PBS(-)，將小鼠抗人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3克隆抗體(克隆名稱GC33，記載 于 W02006006693)配制成 0. 5mg/ml (5mg/kg 給藥組)及 0. lmg/ml (lmg/kg 給藥組)。將鹽 酸阿霉素(Adriacin注射、協(xié)和發(fā)酵)用注射用蒸餾水(大塚制藥)溶解使其濃度為IOmg/ ml后，使用PBS (-)稀釋使其濃度為0. 5mg/ml。將鹽酸米托蒽醌(Novantrone注射、Wyeth) 用生理食鹽水(大塚制藥)溶解至10mg/ml后，使用PBS(-)稀釋至0. lmg/ml。(4)化療劑的給與對于O)中制作的人肝癌移植小鼠模型，HuH-7細(xì)胞xenograft模型從移植后第 11日開始、！fepG2細(xì)胞xenograft模型從移植后第20日開始，將上述(3)中配制的抗體試 樣以10ml/kg的用量通過尾靜脈進(jìn)行給與，每周各1次、共三周。作為陰性對照，同樣地將 經(jīng)過濾滅菌的PBS(-)(載體)以10ml/kg的用量通過尾靜脈進(jìn)行給與，每周1次、共三周。 另外，HuH-7細(xì)胞xenograft模型在移植后第10日分別以10ml/kg的用量通過尾靜脈給與 上述⑶中配制的鹽酸阿霉素(DOX)或作為陰性對照的PBS(-)，1次。另外，Hep G2細(xì)胞 xenograft模型從移植后第20日開始分別以10ml/kg的用量通過尾靜脈給與上述( 中配 制的鹽酸米托蒽醌(MX)或作為陰性對照的PBS(-)，每周各1次、共三周。各組的構(gòu)成均為 每1組6只。另外，化療劑的詳細(xì)處置方法如表1及2所示。[表 1]HuH-7 Xenograft 模型
權(quán)利要求
1.一種用于治療或預(yù)防肝癌的藥物組合物，所述藥物組合物是組合化療劑及磷脂酰肌 醇蛋白聚糖3抗體而形成的。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物為配合劑。
3.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，并用化療劑及磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 抗體。
4.如權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其特征在于，同時(shí)或依次給與化療劑和磷脂酰肌 醇蛋白聚糖3抗體。
5.如權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其特征在于，分別給與化療劑和磷脂酰肌醇蛋白 聚糖3抗體。
6.一種用于治療或預(yù)防肝癌的藥物組合物，所述藥物組合物含有磷脂酰肌醇蛋白聚糖 3抗體作為有效成分且與化療劑并用。
7.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，同時(shí)給與磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體 和化療劑。
8.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，在給與化療劑之前或在給與之后，給 與磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體。
9.一種用于治療或預(yù)防肝癌的藥物組合物，所述藥物組合物含有化療劑作為有效成分 且與磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體并用。
10.如權(quán)利要求9所述的藥物組合物，其特征在于，同時(shí)給與化療劑和磷脂酰肌醇蛋白 聚糖3抗體。
11.如權(quán)利要求9所述的藥物組合物，其特征在于，在給與磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體 之前或在給與之后，給與化療劑。
12.如權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，化療劑為激酶抑制劑。
13.如權(quán)利要求12所述的藥物組合物，其特征在于，化療劑為多激酶抑制劑。
14.如權(quán)利要求12或13所述的藥物組合物，其特征在于，化療劑為索拉非尼 (BAY43-9006)。
15.如權(quán)利要求12或13所述的藥物組合物，其特征在于，化療劑為舒尼替尼。
16.如權(quán)利要求1至15中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖 3抗體為具有細(xì)胞毒性的抗體。
17.如權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖 3抗體是包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號6表示的氨 基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號8表示的氨基酸序列的CDRl、包含序列號M表示的氨 基酸序列的⑶R2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的⑶R3。
18.如權(quán)利要求1至17中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖 3抗體是可以與第2抗體能夠結(jié)合的表位相結(jié)合的抗體，所述第2抗體是包含H鏈可變區(qū) 及L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有分別包含序列號5、6及7表示的氨基酸序列的 ⑶Rl、2及3，所述L鏈可變區(qū)具有分別包含序列號8J4及25表示的氨基酸序列的⑶Rl、2及3。
19.如權(quán)利要求1至16或18中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋 白聚糖3抗體是包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號6表示的氨 基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號9至23中任一個表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列 號M表示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。
20.如權(quán)利要求1至16或18中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋 白聚糖3抗體是包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號沈表示的氨 基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號觀表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號M表示的 氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。
21.如權(quán)利要求1至16或18中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋 白聚糖3抗體是包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號30表示的氨 基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號32表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號M表示的 氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。
22.如權(quán)利要求1至21中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體 為人源化抗體。
23.如權(quán)利要求22所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含 H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號3表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號4表示的氨基酸序列。
24.如權(quán)利要求22所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含 H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號3表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號4表示的氨基酸序列中的第34號Gly被不同的氨基酸取 代的氨基酸序列。
25.如權(quán)利要求22所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含 H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號27表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號四表示的氨基酸序列。
26.如權(quán)利要求22所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含 H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號31表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號33表示的氨基酸序列。
27.一種副作用降低劑，用于降低化療劑治療肝癌而產(chǎn)生的副作用，其中含有治療用抗體作為有效成分。
28.如權(quán)利要求27所述的副作用降低劑，其特征在于，化療劑為激酶抑制劑。
29.如權(quán)利要求27或觀所述的副作用降低劑，其特征在于，化療劑為多激酶抑制劑。
30.如權(quán)利要求觀或四所述的副作用降低劑，其特征在于，化療劑為索拉非尼 (BAY43-9006)。
31.如權(quán)利要求28或四所述的副作用降低劑，其特征在于，化療劑為舒尼替尼。
32.如權(quán)利要求27至31中任一項(xiàng)所述的副作用降低劑，其特征在于，副作用為體重減少。
33.如權(quán)利要求27至32中任一項(xiàng)所述的副作用降低劑，其特征在于，治療用抗體為磷 脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體。
34.如權(quán)利要求33所述的副作用降低劑，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為具 有細(xì)胞毒性的抗體。
35.如權(quán)利要求33或34所述的副作用降低劑，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗 體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號6表示的氨 基酸序列的CDR2，及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號8表示的氨基酸序列的CDRl、包含序列號M表示的氨 基酸序列的⑶R2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的⑶R3。
36.如權(quán)利要求33至35中任一項(xiàng)所述的副作用降低劑，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白 聚糖3抗體是可以與第2抗體能夠結(jié)合的表位相結(jié)合的抗體，所述第2抗體是包含H鏈可變 區(qū)及L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有分別包含序列號5、6及7表示的氨基酸序列的 ⑶Rl、2及3，所述L鏈可變區(qū)具有分別包含序列號8J4及25表示的氨基酸序列的⑶Rl、2 及3。
37.如權(quán)利要求33、34或36中任一項(xiàng)所述的副作用降低劑，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋 白聚糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號6表示的氨 基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號9至23中任一個表示的氨基酸序列的⑶Rl、包含序列 號M表示的氨基酸序列的CDR2，及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。
38.如權(quán)利要求33、34或36中任一項(xiàng)所述的副作用降低劑，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋 白聚糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號沈表示的氨 基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號觀表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號M表示的 氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。
39.如權(quán)利要求33、34或36中任一項(xiàng)所述的副作用降低劑，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋 白聚糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號30表示的氨 基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號32表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號M表示的 氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。
40.權(quán)利要求33至39中任一項(xiàng)所述的副作用降低劑，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為人 源化抗體。
41.如權(quán)利要求40所述的副作用降低劑，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包 含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號3表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號4表示的氨基酸序列。
42.如權(quán)利要求40所述的副作用降低劑，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包 含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號3表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號4表示的氨基酸序列中的第34號Gly被不同的氨基酸取 代的氨基酸序列。
43.如權(quán)利要求40所述的副作用降低劑，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包 含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號27表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號四表示的氨基酸序列。
44.如權(quán)利要求40所述的副作用降低劑，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包 含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號31表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號33表示的氨基酸序列。
45.一種用于增強(qiáng)化療劑的肝癌治療效果的藥物組合物，所述藥物組合物含有磷脂酰 肌醇蛋白聚糖3抗體作為有效成分。
46.如權(quán)利要求45所述的藥物組合物，其特征在于，同時(shí)給與磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗 體和化療劑。
47.如權(quán)利要求45所述的藥物組合物，其特征在于，在給與化療劑之前或在給與之后， 給與磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體。
48.如權(quán)利要求45至47中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，化療劑為激酶抑制劑。
49.如權(quán)利要求48所述的藥物組合物，其特征在于，化療劑為多激酶抑制劑。
50.如權(quán)利要求45至49中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，化療劑為索拉非尼 (BAY43-9006)。
51.如權(quán)利要求45至49中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，化療劑為舒尼替尼。
52.如權(quán)利要求45至51中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚 糖3抗體是具有細(xì)胞毒性的抗體。
53.如權(quán)利要求45至52中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚 糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號6表示的氨 基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號8表示的氨基酸序列的CDRl、包含序列號M表示的氨 基酸序列的⑶R2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的⑶R3。
54.如權(quán)利要求45至53中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚 糖3抗體是可以與第2抗體能夠結(jié)合的表位相結(jié)合的抗體，所述第2抗體是包含H鏈可變區(qū) 及L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有分別包含序列號5、6及7表示的氨基酸序列的 ⑶Rl、2及3，所述L鏈可變區(qū)具有分別包含序列號8J4及25表示的氨基酸序列的⑶Rl、2 及3。
55.如權(quán)利要求45至52或M中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋 白聚糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號6表示的氨 基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號9至23中任一個表示的氨基酸序列的⑶Rl、包含序列 號M表示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。
56.如權(quán)利要求45至52或M中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋 白聚糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號沈表示的氨 基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號觀表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號M表示的 氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。
57.如權(quán)利要求45至52或M中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋 白聚糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號30表示的氨 基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號32表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號M表示的 氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。
58.如權(quán)利要求45至57中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗 體為人源化抗體。
59.如權(quán)利要求58所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含 H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號3表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號4表示的氨基酸序列。
60.如權(quán)利要求58所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含 H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號3表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號4表示的氨基酸序列中的第34號Gly被不同的氨基酸取 代的氨基酸序列。
61.如權(quán)利要求58所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含 H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號27表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號四表示的氨基酸序列。
62.如權(quán)利要求58所述的藥物組合物，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含 H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號31表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號33表示的氨基酸序列。
63.一種治療或預(yù)防受試者體內(nèi)肝癌的方法，所述方法包括將有效量的化療劑及有效 量的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體組合、給與受試者。
64.如權(quán)利要求63所述的方法，其特征在于，同時(shí)或依次給與化療劑和磷脂酰肌醇蛋 白聚糖3抗體。
65.如權(quán)利要求63所述的方法，其特征在于，分別給與化療劑和磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 抗體。
66.如權(quán)利要求63至65中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，化療劑為激酶抑制劑。
67.如權(quán)利要求66所述的方法，其特征在于，化療劑為多激酶抑制劑。
68.如權(quán)利要求66或67所述的方法，其特征在于，化療劑為索拉非尼(BAY43-9006)。
69.如權(quán)利要求66或67所述的方法，其特征在于，化療劑為舒尼替尼。
70.如權(quán)利要求63至69中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗 體是具有細(xì)胞毒性的抗體。
71.如權(quán)利要求63至70中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗 體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號6表示的氨 基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號8表示的氨基酸序列的CDRl、包含序列號M表示的氨 基酸序列的⑶R2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的⑶R3。
72.如權(quán)利要求63至71中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗 體是可以與第2抗體能夠結(jié)合的表位相結(jié)合的抗體，所述第2抗體是包含H鏈可變區(qū)及L鏈 可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有分別包含序列號5、6及7表示的氨基酸序列的CDR1、2 及3，所述L鏈可變區(qū)具有分別包含序列號8J4及25表示的氨基酸序列的⑶Rl、2及3。
73.如權(quán)利要求63至70或72中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖 3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號6表示的氨 基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號9至23中任一個表示的氨基酸序列的⑶Rl、包含序列 號M表示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。
74.如權(quán)利要求63至70或72中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖 3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號沈表示的氨 基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號觀表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號M表示的 氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。
75.如權(quán)利要求63至70或72中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖 3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的CDRl、包含序列號30表示的氨 基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號32表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號M表示的 氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。
76.如權(quán)利要求63至75中任一項(xiàng)所述的方法，其中，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為人 源化抗體。
77.如權(quán)利要求76所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈可 變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號3表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號4表示的氨基酸序列。
78.如權(quán)利要求76所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈可 變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號3表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號4表示的氨基酸序列中的第34號Gly被不同的氨基酸取 代的氨基酸序列。
79.如權(quán)利要求76所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈可 變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號27表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號四表示的氨基酸序列。
80.如權(quán)利要求76所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈可 變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號31表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號33表示的氨基酸序列。
81.一種降低受試者因利用化療劑治療肝癌而產(chǎn)生的副作用的方法，所述方法包括給 與受試者有效量的治療用抗體。
82.如權(quán)利要求81所述的方法，其特征在于，化療劑為激酶抑制劑。
83.如權(quán)利要求81或82所述的方法，其特征在于，化療劑為多激酶抑制劑。
84.如權(quán)利要求82或83所述的方法，其特征在于，化療劑為索拉非尼(BAY43-9006)。
85.如權(quán)利要求82或83所述的方法，其特征在于，化療劑為舒尼替尼。
86.如權(quán)利要求81至85中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，副作用為體重減少。
87.如權(quán)利要求81至86中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，治療用抗體為磷脂酰肌醇 蛋白聚糖3抗體。
88.如權(quán)利要求87所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體是具有細(xì)胞毒 性的抗體。
89.如權(quán)利要求87或88所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含 H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號6表示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號8表示的氨基酸序列的CDRl、包含序列號M表示的氨 基酸序列的⑶R2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的⑶R3。
90.如權(quán)利要求87至89中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗 體是可以與第2抗體能夠結(jié)合的表位相結(jié)合的抗體，所述第2抗體是包含H鏈可變區(qū)及L鏈 可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有分別包含序列號5、6及7表示的氨基酸序列的CDR1、2 及3，所述L鏈可變區(qū)具有分別包含序列號8J4及25表示的氨基酸序列的⑶Rl、2及3。
91.如權(quán)利要求87、88或90中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號6表示的氨 基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號9至23中任一個表示的氨基酸序列的⑶Rl、包含序列 號M表示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。
92.如權(quán)利要求87、88或90中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號沈表示的氨 基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號觀表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號M表示的 氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。
93.如權(quán)利要求87、88或90中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的CDRl、包含序列號30表示的氨 基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號32表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號M表示的 氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。
94.如權(quán)利要求87至93中任一項(xiàng)所述的方法，其中，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為人 源化抗體。
95.如權(quán)利要求94所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈可 變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號3表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號4表示的氨基酸序列。
96.如權(quán)利要求94所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈可 變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號3表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號4表示的氨基酸序列中的第34號Gly被不同的氨基酸取 代的氨基酸序列。
97.如權(quán)利要求94所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈可 變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號27表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號四表示的氨基酸序列。
98.如權(quán)利要求94所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈可 變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號31表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號33表示的氨基酸序列。
99.一種在受試者體內(nèi)增強(qiáng)化療劑的肝癌治療效果的方法，所述方法包括給與受試者 有效量的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體。
100.如權(quán)利要求99所述的方法，其特征在于，同時(shí)給與磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體和 化療劑。
101.如權(quán)利要求99所述的方法，其特征在于，在給與化療劑之前或在給與之后，給與 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體。
102.如權(quán)利要求99至101中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，化療劑為激酶抑制劑。
103.如權(quán)利要求102所述的方法，其特征在于，化療劑為多激酶抑制劑。
104.如權(quán)利要求99至103中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，化療劑為索拉非尼 (BAY43-9006)。
105.如權(quán)利要求99至103中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，化療劑為舒尼替尼。
106.如權(quán)利要求99至105中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 抗體是具有細(xì)胞毒性的抗體。
107.如權(quán)利要求99至106中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號6表示的氨 基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號8表示的氨基酸序列的CDRl、包含序列號M表示的氨 基酸序列的⑶R2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的⑶R3。
108.如權(quán)利要求99至107中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 抗體是可以與第2抗體能夠結(jié)合的表位相結(jié)合的抗體，所述第2抗體是包含H鏈可變區(qū)及L 鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有分別包含序列號5、6及7表示的氨基酸序列的CDR1、 2及3，所述L鏈可變區(qū)具有分別包含序列號8、M及25表示的氨基酸序列的⑶Rl、2及3。
109.如權(quán)利要求99至106或108中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白 聚糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號6表示的氨 基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號9至23中任一個表示的氨基酸序列的⑶R1、包含序列 號M表示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。
110.如權(quán)利要求99至106或108中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白 聚糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的CDRl、包含序列號沈表示的氨 基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號28表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號M表示的氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。
111.如權(quán)利要求99至106或108中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白 聚糖3抗體為包含H鏈可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)具有包含序列號5表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號30表示的氨 基酸序列的CDR2、及包含序列號7表示的氨基酸序列的CDR3 ；所述L鏈可變區(qū)具有包含序列號32表示的氨基酸序列的CDR1、包含序列號M表示的 氨基酸序列的CDR2、及包含序列號25表示的氨基酸序列的CDR3。
112.如權(quán)利要求99至111中任一項(xiàng)所述的方法，其中，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為 人源化抗體。
113.如權(quán)利要求112所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈 可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號3表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號4表示的氨基酸序列。
114.如權(quán)利要求112所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈 可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號3表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號4表示的氨基酸序列中的第34號Gly被不同的氨基酸取 代的氨基酸序列。
115.如權(quán)利要求112所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈 可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號27表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號四表示的氨基酸序列。
116.如權(quán)利要求112所述的方法，其特征在于，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為包含H鏈 可變區(qū)和L鏈可變區(qū)的抗體，所述H鏈可變區(qū)包含序列號31表示的氨基酸序列；所述L鏈可變區(qū)包含序列號33表示的氨基酸序列。
全文摘要
本發(fā)明提供一種用于治療或預(yù)防肝細(xì)胞癌的新型藥物組合物及治療方法。本發(fā)明公開了一種用于治療或預(yù)防肝癌的藥物組合物，所述藥物組合物是組合化療劑及磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體而形成的。另外，本發(fā)明還公開了含有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體作為有效成分、與化療劑并用的用于治療或預(yù)防肝癌的藥物組合物，以及含有化療劑作為有效成分、與磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體并用的用于治療或預(yù)防肝癌的藥物組合物。通過并用化療劑和磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體，可以發(fā)揮比單獨(dú)給與化療劑更有效的治療效果，降低利用化療劑治療肝癌所產(chǎn)生的副作用。
文檔編號A61K31/44GK102046200SQ200980119069
公開日2011年5月4日 申請日期2009年3月19日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月4日
發(fā)明者木下恭子, 杉本正道, 石黑敬弘 申請人:中外制藥株式會社