專利名稱：一種尿多酸肽組合物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體的說，涉及一種尿多酸肽組合物的制備方法。
背景技術(shù)：
尿多酸肽是從健康人尿中分離提取、純化的一組細胞分化誘導劑。臨床前實驗表 明，尿多酸肽對多種腫瘤具有抑制生長、誘導分化凋亡的作用。研究表明，尿多酸肽可明顯 改善晚期癌癥患者的生活質(zhì)量，在腫瘤臨床治療中具有一定的應用價值。當尿多酸肽與其 它抗腫瘤藥物聯(lián)合給藥時，能夠更為顯著的提高治療效果。目前常用的尿液提取方法主要有如下方法專利申請99122050. 1公開了一種尿多酸肽組合物的制備方法，將新鮮尿酸化，過 濾除去酸化尿中的大顆粒；超濾除去酸化尿中分子量較大的有機物質(zhì)，將超濾后的酸化尿 加入吸附柱內(nèi)，吸附其中的有效成分；用軟水洗滌未被吸附劑吸附但殘留在吸附劑中的無 機物及親水性有機物用醇洗脫吸附在吸附柱上的有效成分；收集有色流出液，濃縮后，干燥 得到干品；加水溶解，用堿調(diào)整PH至中性，低溫靜置析出濃縮過程中形成的雜質(zhì)，經(jīng)除熱 源、除病毒等工藝進一步純化。專利申請200410000753. 9公開了一種制備方法將新鮮人尿經(jīng)酸化、過濾，樹脂 柱吸附，洗脫后，經(jīng)低PH值乙醇病毒滅活，再減壓濃縮，過濾得到尿多酸肽組合物。經(jīng)過該 方法處理，尿液中的大量雜質(zhì)，如尿素等難以清除干凈，對于人們的用藥安全產(chǎn)生威脅。上述專利公開了尿多酸肽的提取工藝，但隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展和對藥品安全 要求的不斷提高，為了更進一步減少提取物中的雜質(zhì)和病毒，保證有效成分能充分發(fā)揮藥 效，還需對尿提取物的提取工藝、滅活病毒工藝的驗證等方面做進一步研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種尿多酸肽的制備方法，本方法制備的尿多酸肽有效成分 含量高，雜質(zhì)含量低，作為藥品使用安全系數(shù)高。一種尿多酸肽組合物的制備方法，所述尿多酸肽組合物按照如下步驟制備(1)將新鮮人尿液酸化，過濾，濾液進行超濾；(2)將超濾后的濾液使用樹脂柱柱層析并收集洗脫液；(3)將收集的洗脫液加入氫氧化鋇溶液，然后脫鹽、脫色處理；(4)將脫色處理得到的溶液進行病毒滅活；(5)將滅活后得到溶液調(diào)節(jié)pH到6. 0 6. 5后濃縮，濃縮液調(diào)節(jié)pH到7. 0 8. 0 后進行超濾，優(yōu)選為濃縮液調(diào)節(jié)PH到7. 0 7. 5后進行超濾，收集濾液即得。尿素是蛋白質(zhì)分解后的產(chǎn)物，在尿液中含量非常高。以往的尿多酸肽制備中，僅僅 采用柱層析和超濾難以完全去除其中含有的尿素，導致最終產(chǎn)品中尿素含量較高。本發(fā)明 在使用樹脂柱柱層析后加入氫氧化鋇，使尿素與之發(fā)生化學反應，產(chǎn)生碳酸鋇沉淀和氨氣、 水。選擇氫氧化鋇，是因為鋇鹽可以用弱酸性陽離子樹脂除去。增加除尿素的反應，降低藥品中的銨離子，銨離子對肝臟有損害。發(fā)生的是沉淀反應。氫氧化鋇溶液優(yōu)選濃度為5%， 用量根據(jù)實際產(chǎn)量確定?？梢酝耆コ睔庥孟×蛩峄蛩幚?。根據(jù)前面所述的尿多酸肽組合物的制備方法，步驟⑴酸化為將尿液先調(diào)節(jié)PH為 2 5，經(jīng)30 90目篩網(wǎng)過濾后再調(diào)節(jié)pH為2 3 ；優(yōu)選為將尿液先調(diào)節(jié)pH為2 4，經(jīng) 50 70目篩網(wǎng)過濾后再調(diào)節(jié)pH為1.7。本發(fā)明分兩階段調(diào)節(jié)pH值，第一次調(diào)節(jié)pH2 4，是防止尿液腐敗，第二次調(diào)節(jié) PHI. 7，增加有效成分的吸附。本發(fā)明還優(yōu)選采用鹽酸調(diào)節(jié)pH值，更進一步優(yōu)選采用濃度為 2mol/L的鹽酸。根據(jù)前面所述的尿多酸肽組合物的制備方法，步驟⑴所述過濾為順序分別使用 孔徑為15 30 μ m、4 10 μ m、l 3. 5 μ m的過濾介質(zhì)過濾，優(yōu)選為順序分別使用孔徑為 20 25 μ m、5 7 μ m、1 3 μ m的過濾介質(zhì)過濾；所述超濾為使用截留分子量為5000 20000的超濾膜，優(yōu)選為使用截留分子量為10000的超濾膜。根據(jù)前面所述的尿多酸肽組合物的制備方法，步驟(3)在加入氫氧化鋇溶液后， 在脫鹽處理前還優(yōu)選進行二次吸附，所述二次吸附為將脫鹽處理前的溶液用樹脂柱柱層 析。本發(fā)明優(yōu)選采用采用二次吸附，可以更進一步提高產(chǎn)品的純度。根據(jù)前面所述的尿多酸肽組合物的制備方法，所述樹脂柱的吸附劑為大孔樹脂吸 附劑，優(yōu)選為HP3、XAD-16、XAD-7中的一種或幾種的任意組合；吸附劑體積同尿液體積比為 1 8 1 15，優(yōu)選為1 11. 9;樹脂柱內(nèi)吸附劑填料直徑與高度比為1 1.5 1 3， 優(yōu)選為1 2。根據(jù)前面所述的尿多酸肽組合物的制備方法，所述的柱層析可以參考現(xiàn)有技術(shù)任 何類似的柱層析操作，本領(lǐng)域技術(shù)人員通常能夠知曉這種柱層析操作。然而本發(fā)明所述柱 層析可以優(yōu)選為將預處理得到的尿液加入樹脂柱中進行吸附，加入速度為每分鐘加入尿液 總體積的1/30 1/20，棄去液體，然后將純化水加入入樹脂柱中洗滌，純化水加入速度為 每分鐘加入純化水總體積的1/30 1/20，純化水用量同尿液體積比為1 0.8 1 1.2， 待純化水液面距吸附劑頂部10 15cm時，加入醇溶液洗脫，加入速度為每分鐘加入醇溶液 總量的3/125 9/125，醇溶液用量同尿液體積比為1 3 1 5 ；更優(yōu)選為尿液加入速 度為每分鐘加入尿液總體積的1/25，純化水加入速度為純化水總體積的1/25，純化水用量 同尿液體積比為1 1，醇溶液加入速度為每分鐘加入醇溶液總量的6/125，醇溶液用量同 尿液體積比為1 4;所述醇溶液優(yōu)選為甲醇或乙醇溶液，更優(yōu)選為乙醇溶液；醇溶液濃度 為80 100%，優(yōu)選為90 95%。根據(jù)前面所述的尿多酸肽組合物的制備方法，步驟(3)所述氫氧化鋇加入量為使 得溶液中氫氧化鋇濃度為80 120mg/L，優(yōu)選為100mg/L。也就是說加入氫氧化鋇使得在除尿素后溶液中氫氧化鋇濃度為80 120mg/L，優(yōu) 選為 100mg/L。根據(jù)前面所述的尿多酸肽組合物的制備方法，步驟(3)所述脫鹽處理為采用陽離 子樹脂，優(yōu)選為D113型陽離子樹脂；所述脫色處理為采用陰離子樹脂，優(yōu)選用D118型陰離 子樹脂。這里所述的陽離子樹脂脫鹽可以為現(xiàn)有技術(shù)任何的陽離子樹脂脫鹽操作，所述的陰離子樹脂脫色也可以為現(xiàn)有技術(shù)任何的陰離子樹脂脫色，即本領(lǐng)域技術(shù)人員均知曉上 述的操作，無需再付出創(chuàng)造性勞動。譬如優(yōu)選可以采用的是樹脂重量用量為尿液體積的 1/12 1/20，流速為每分鐘尿液總量的1/20 1/30，樹脂用完后用體積為尿液總量1/2 1/3的純化水洗滌；更優(yōu)選為樹脂重量用量為尿液體積的1/16，流速為每分鐘尿液總量的 1/25，純化水體積為尿液總量1/2. 5。根據(jù)前面所述的尿多酸肽組合物的制備方法，步驟(4)所述病毒滅活可以參考現(xiàn) 有技術(shù)任何的病毒滅活操作，本發(fā)明優(yōu)選為調(diào)節(jié)脫色處理得到的溶液醇濃度為73 75%， 用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH在4. 5 5. 0，然后在20 30°C下放置6小時。根據(jù)前面所述的尿多酸肽組合物的制備方法，步驟(5)優(yōu)選所述濃縮為在溫度低 于40°C濃縮到固體物質(zhì)總含量為150 500mg/ml，更優(yōu)選為在30 40°C下濃縮到固體 物質(zhì)總含量為250 350mg/ml ；所述超濾的過濾介質(zhì)孔徑為0. 8 3 μ m，優(yōu)選為1. 0 1. 5 μ m。本發(fā)明還可再進一步詳細為新鮮人尿500L經(jīng)2mol/LHCl稀鹽酸酸化后，經(jīng)60目篩網(wǎng)粗濾后裝入pH調(diào)節(jié)罐混 勻，用2mol/LHCl調(diào)節(jié)pH值在1. 7。酸化尿液經(jīng)pH調(diào)節(jié)罐泵入板框過濾機，用120 14(747〃 )號濾布濾去酸化尿液 中粒徑大于20 μ m的雜質(zhì)，再經(jīng)5 μ m精密過濾器濾除尿液中粒徑大于5 μ m的雜質(zhì)，并收集 濾液至超濾前酸化尿儲罐。將經(jīng)精密過濾器過濾后的酸化尿經(jīng)孔徑為1 3 μ m精密過濾器過濾后進入超濾 機，用截留1萬分子量超濾膜超濾，除去酸化尿分子量大于10000道爾頓的有機雜質(zhì)。將超濾并經(jīng)PH確認后的酸化尿打入高位槽中，經(jīng)電磁閥、流量計放入提取柱(每 柱內(nèi)HP3、XAD-16、XAD-7吸附劑為42L約30kg，樹脂徑高比為1:2)，保持吸附劑上方液面 高度以使吸附劑保持穩(wěn)定靜止，每次以約20L/分的速度均勻放入酸化尿500L (每柱)，使酸 化尿中的有效成分被吸附，流穿液棄去。上柱前確認酸化尿PH值為1.7 2.0。吸附結(jié)束，將高位槽中的純化水以20L/分的速度均勻放入提取柱(每柱)，洗滌吸 附樹脂上滯留的無機鹽類和其他水溶性物質(zhì)。水洗過程中應保持吸附劑上方液面高度以使 吸附劑保持穩(wěn)定靜止，洗滌液棄去。(每柱)需純化水500L。洗滌結(jié)束，待純化水液面降至吸附劑頂部10 15cm時，用95%乙醇以6L/分的速 度均勻放入提取柱，洗脫吸附在吸附樹脂上的有效成分。收集洗脫液，(每柱)需95%乙醇 125L。提取結(jié)束，待乙醇液面降至吸附劑頂部10 15cm時，將高位槽中的純化水均勻放 入提取柱(每柱)，洗滌吸附樹脂上滯留的提取液。(每柱)需純化水125L。收集的洗脫液邊攪拌邊加入BaOH溶液，去除尿液中的氨氣，得提取溶液，提取液 中氫氧化鋇濃度為80 120mg/L，優(yōu)選為100mg/L。提取溶液再重復吸附、洗脫一次；收集進一步純化的提取液，重復的吸附、洗脫同 前面所述的操作相同。二次吸附得提取溶液經(jīng)弱酸性陽離子樹脂(D113)進行脫鹽處理。經(jīng)脫鹽處理處理得提取溶液經(jīng)弱堿性陰離子樹脂(D118)進行脫色處理。將經(jīng)過上述工序得溶液收集攪拌均勻，在滅活罐內(nèi)用95%乙醇或純化水調(diào)整乙醇含量在73-75 %之間，用2mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值在4. 5-5. 0，攪拌均勻后，在25 士 5°C溫 度下放置6小時進行病毒滅活。用2mol/L NaOH溶液調(diào)整已滅活提取液pH值至6. 0 6. 5。利用真空干燥機內(nèi)的 負壓，將調(diào)整PH值后的提取液吸入真空干燥機內(nèi)，開機加熱，干燥機內(nèi)膽溫度設(shè)定不超過 40°C。內(nèi)膽真空在0. 080 0. IOOMPa之間，濃縮干燥除去乙醇和部分水分，濃縮至固總含 量為250 350mg/ml出料并收集濃縮液。用2mol/L NaOH調(diào)濃縮液pH值至7. 0-7. 5，用孔徑為1. 2 μ m的濾芯(膜)過濾， 收集過濾液即為新型抗癌原料藥。新型抗癌制劑原料儲存PE塑料桶盛裝，IO0C以下密閉保存。本發(fā)明所述技術(shù)方案具有如下優(yōu)點(1)本發(fā)明所提供的制備方法簡單易行，適于工業(yè)化生產(chǎn)。(2)本發(fā)明方法制備的尿多酸肽純度高，雜質(zhì)含量低，患者用藥更加安全。(3)本發(fā)明方法在大幅度提高產(chǎn)品純度的基礎(chǔ)上對于收率沒有明顯的影響。


圖1為本發(fā)明所述尿多酸肽組合物制備方法的流程圖。
具體實施例方式下面的實施例將對本發(fā)明作更具體的解釋，但本發(fā)明并不僅僅局限于這些實施 例，同樣這些實施例也不以任何方式限制本發(fā)明。實施例1新鮮人尿500L經(jīng)2mol/LHCl稀鹽酸酸化至pH為2 3后，經(jīng)60目篩網(wǎng)粗濾后裝 入PH調(diào)節(jié)罐混勻，用2mol/LHCl調(diào)節(jié)pH值在1. 7。酸化尿液經(jīng)pH調(diào)節(jié)罐泵入板框過濾機， 用120 14(747")號濾布濾去酸化尿液中粒徑大于20 μ m的雜質(zhì)，再經(jīng)5 μ m精密過濾器 濾除尿液中粒徑大于5 μ m的雜質(zhì)，并收集濾液至超濾前酸化尿儲罐。將經(jīng)精密過濾器過濾 后的酸化尿經(jīng)孔徑為1 3 μ m精密過濾器過濾后進入超濾機，用截留1萬分子量超濾膜超 濾，除去酸化尿分子量大于10000道爾頓的有機雜質(zhì)。將超濾并經(jīng)PH確認后的酸化尿打入高位槽中，經(jīng)電磁閥、流量計放入提取柱(每 柱內(nèi)HP3、XAD-16、XAD-7吸附劑為42L約30kg，樹脂徑高比為1:2)，保持吸附劑上方液面 高度以使吸附劑保持穩(wěn)定靜止，每次以約20L/分的速度均勻放入酸化尿500L (每柱)，使酸 化尿中的有效成分被吸附，流穿液棄去。上柱前確認酸化尿PH值為1.7 2.0。吸附結(jié)束， 將高位槽中的純化水以20L/分的速度均勻放入提取柱(每柱)，洗滌吸附樹脂上滯留的無 機鹽類和其他水溶性物質(zhì)。水洗過程中應保持吸附劑上方液面高度以使吸附劑保持穩(wěn)定靜 止，洗滌液棄去。(每柱)需純化水500L。洗滌結(jié)束，待純化水液面降至吸附劑頂部10 15cm時，用95%乙醇以6L/分的速度均勻放入提取柱，洗脫吸附在吸附樹脂上的有效成分。 收集洗脫液，(每柱)需95%乙醇125L。提取結(jié)束，待乙醇液面降至吸附劑頂部10 15cm 時，將高位槽中的純化水均勻放入提取柱(每柱)，洗滌吸附樹脂上滯留的提取液。(每柱) 需純化水125L。收集的洗脫液邊攪拌邊加入BaOH溶液，去除尿液中的氨氣，得提取溶液，提取液中氫氧化鋇濃度為80 120mg/L，優(yōu)選為100mg/L。提取溶液再重復吸附、洗脫一次；收集 進一步純化的提取液，重復的吸附、洗脫同前面所述的操作相同。二次吸附得提取溶液經(jīng)弱 酸性陽離子樹脂(D113)進行脫鹽處理。經(jīng)脫鹽處理處理得提取溶液經(jīng)弱堿性陰離子樹脂 (D118)進行脫色處理。樹脂用量為30kg，流速為20L/分，樹脂用完后用200L純化水洗滌。將經(jīng)過上述工序得溶液收集攪拌均勻，在滅活罐內(nèi)用95%乙醇或純化水調(diào)整乙醇 含量在73-75 %之間，用2mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值在4. 5-5. 0，攪拌均勻后，在25 士 5°C溫 度下放置6小時進行病毒滅活。用2mol/L NaOH溶液調(diào)整已滅活提取液pH值至6. 0 6. 5。利用真空干燥機內(nèi) 的負壓，將調(diào)整PH值后的提取液吸入真空干燥機內(nèi)，開機加熱，干燥機內(nèi)膽溫度設(shè)定30 40°C。內(nèi)膽真空在0. 080 0. IOOMPa之間，濃縮干燥除去乙醇和部分水分，濃縮至固總含 量為250 350mg/ml出料并收集濃縮液。用2mol/L NaOH調(diào)濃縮液pH值至7. 0-7. 5，用 孔徑為1.2μπι的濾芯(膜)過濾，收集過濾液即為新型抗癌原料藥。新型抗癌制劑原料儲 存ΡΕ塑料桶盛裝，IO0C以下密閉保存。實施例2新鮮人尿500L經(jīng)1. 5mol/LHCl稀鹽酸酸化至pH值為3 4，經(jīng)50目篩網(wǎng)粗濾，用 2mol/LHCl調(diào)節(jié)pH值在1. 7。用孔徑為25 μ m的濾布過濾，再經(jīng)6 μ m精密過濾器過濾，并 收集濾液用孔徑為2μπι精密過濾器過濾，用截留1萬分子量超濾膜超濾。將超濾并經(jīng)PH確認后的酸化尿打入放入提取柱(每柱內(nèi)XAD-16吸附劑為42L，樹 脂徑高比為1 2)，每次以約20L/分的速度均勻放入，使酸化尿中的有效成分被吸附，流穿 液棄去。吸附結(jié)束，將純化水以20L/分的速度均勻放入提取柱，共500L。水洗過程中應保 持吸附劑上方液面高度以使吸附劑保持穩(wěn)定靜止，洗滌液棄去。洗滌結(jié)束，待純化水液面降 至吸附劑頂部10 15cm時，用95%乙醇以6L/分的速度均勻放入提取柱，洗脫吸附在吸附 樹脂上的有效成分。收集洗脫液，需95%乙醇125L。提取結(jié)束，待乙醇液面降至吸附劑頂 部10 15cm時，將150L純化水均勻放入提取柱，洗滌吸附樹脂上滯留的提取液。收集的洗脫液邊攪拌邊加入BaOH溶液，得提取溶液，提取液中氫氧化鋇濃度為 100mg/L。提取溶液再重復吸附、洗脫一次；收集進一步純化的提取液，重復的吸附、洗脫同 前面所述的操作相同。二次吸附得提取溶液經(jīng)弱酸性陽離子樹脂(D113)進行脫鹽處理。經(jīng) 脫鹽處理處理得提取溶液經(jīng)弱堿性陰離子樹脂(D118)進行脫色處理。樹脂用量為30kg，流 速為20L/分，樹脂用完后用200L純化水洗滌。將經(jīng)過上述工序得溶液收集攪拌均勻，在滅活罐內(nèi)用95%乙醇或純化水調(diào)整乙醇 含量在73-75%之間，用lmol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值在4. 5-5. 0，攪拌均勻后，在25士5°C溫 度下放置6小時進行病毒滅活。用1. 5mol/L NaOH溶液調(diào)整已滅活提取液pH值至6. 0 6. 5。真空干燥機內(nèi)膽溫 度設(shè)定30 40°C。內(nèi)膽真空在0. 080 0. IOOMPa之間，濃縮干燥除去乙醇和部分水分， 濃縮至固總含量為250 350mg/ml出料并收集濃縮液。用2mol/L NaOH調(diào)濃縮液pH值至 7. 0-7.5，用孔徑為1.24!11的濾芯(膜)過濾，收集過濾液用PE塑料桶盛裝，10°C以下密閉保存。實施例3新鮮人尿500L經(jīng)l.Omol/LHCl稀鹽酸酸化至pH值為2 4，經(jīng)70目篩網(wǎng)粗濾，用
1. 5mol/LHCl調(diào)節(jié)pH值在1. 7。用孔徑為23 μ m的濾布過濾，再經(jīng)7 μ m精密過濾器過濾， 并收集濾液用孔徑為3μπι精密過濾器過濾，用截留1萬分子量超濾膜超濾。將超濾并經(jīng)PH確認后的酸化尿打入放入提取柱(每柱內(nèi)XAD-7吸附劑為42L，樹 脂徑高比為1 2)，每次以約20L/分的速度均勻放入，使酸化尿中的有效成分被吸附，流穿 液棄去。吸附結(jié)束，將純化水以20L/分的速度均勻放入提取柱，共500L。洗滌液棄去。洗 滌結(jié)束，待純化水液面降至吸附劑頂部13 15cm時，將95%乙醇以6L/分的速度均勻放入 提取柱，共125L，洗脫吸附在吸附樹脂上的有效成分。收集洗脫液。提取結(jié)束，待乙醇液面 降至吸附劑頂部10 15cm時，將150L純化水均勻放入提取柱，洗滌吸附樹脂上滯留的提 取液。收集的洗脫液邊攪拌邊加入BaOH溶液，得提取溶液，提取液中氫氧化鋇濃度為 100mg/L。提取溶液再重復吸附、洗脫一次；收集進一步純化的提取液，重復的吸附、洗脫同 前面所述的操作相同。二次吸附得提取溶液經(jīng)弱酸性陽離子樹脂(D113)進行脫鹽處理。經(jīng) 脫鹽處理處理得提取溶液經(jīng)弱堿性陰離子樹脂(D118)進行脫色處理。樹脂用量為30kg，流 速為20L/分，樹脂用完后用200L純化水洗滌。將經(jīng)過上述工序得溶液收集攪拌均勻，在滅活罐內(nèi)用95%乙醇或純化水調(diào)整乙醇 含量在73-75%之間，用lmol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值在4. 5-5. 0，攪拌均勻后，在25士5°C溫 度下放置6小時進行病毒滅活。用1. Omol/L NaOH溶液調(diào)整已滅活提取液pH值至6. 0 6. 5。真空干燥機內(nèi)膽溫 度設(shè)定30 40°C。內(nèi)膽真空在0. 080 0. IOOMPa之間，濃縮干燥除去乙醇和部分水分， 濃縮至固總含量為250 350mg/ml出料并收集濃縮液。用2mol/L NaOH調(diào)濃縮液pH值至 7. 0-7.5，用孔徑為1.24!11的濾芯(膜)過濾，收集過濾液用PE塑料桶盛裝，10°C以下密閉保存。實施例4新鮮人尿500L經(jīng)2. Omol/LHCl稀鹽酸酸化至pH值為3 5，經(jīng)90目篩網(wǎng)粗濾， 用1. Omol/LHCl調(diào)節(jié)pH值在2 3。用孔徑為30 μ m的濾布過濾，再經(jīng)9 μ m精密過濾器過 濾，并收集濾液用孔徑為3. 5 μ m精密過濾器過濾，用截留0. 5萬分子量超濾膜超濾。將超濾并經(jīng)PH確認后的酸化尿打入放入提取柱(每柱內(nèi)XAD-7吸附劑為60L，樹 脂徑高比為1 1.5)，每次以約25L/分的速度均勻放入，使酸化尿中的有效成分被吸附，流 穿液棄去。吸附結(jié)束，將純化水以17L/分的速度均勻放入提取柱，共420L。洗滌液棄去。 洗滌結(jié)束，待純化水液面降至吸附劑頂部10 12cm時，將80%乙醇以3L/分的速度均勻放 入提取柱，共100L，洗脫吸附在吸附樹脂上的有效成分。收集洗脫液。提取結(jié)束，待乙醇液 面降至吸附劑頂部10 15cm時，將100L純化水均勻放入提取柱，洗滌吸附樹脂上滯留的 提取液。收集的洗脫液邊攪拌邊加入BaOH溶液，得提取溶液，提取液中氫氧化鋇濃度為 80mg/L。提取溶液再重復吸附、洗脫一次；收集進一步純化的提取液，重復的吸附、洗脫同前 面所述的操作相同。二次吸附得提取溶液經(jīng)弱酸性陽離子樹脂(D113)進行脫鹽處理。經(jīng) 脫鹽處理處理得提取溶液經(jīng)弱堿性陰離子樹脂(D118)進行脫色處理。樹脂用量為41kg，流 速為25L/分，樹脂用完后用250L純化水洗滌。將經(jīng)過上述工序得溶液收集攪拌均勻，在滅活罐內(nèi)用90%乙醇或純化水調(diào)整乙醇含量在73-75%之間，用lmol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值在4. 5-5. 0，攪拌均勻后，在25士5°C溫 度下放置6小時進行病毒滅活。用1. Omol/L NaOH溶液調(diào)整已滅活提取液pH值至6. 0 6. 5。真空干燥機內(nèi)膽溫 度設(shè)定不超過40°C。內(nèi)膽真空在0. 080 0. 200MPa之間，濃縮干燥除去乙醇和部分水分， 濃縮至固總含量為150 250mg/ml出料并收集濃縮液。用2mol/L NaOH調(diào)濃縮液pH值至 7. 5-8. 0，用孔徑為0. 8 μ m的濾芯(膜)過濾，收集過濾液用PE塑料桶盛裝，10°C以下密閉保存。實施例5新鮮人尿500L經(jīng)1. Omol/LHCl稀鹽酸酸化至pH值為2 3，經(jīng)30目篩網(wǎng)粗濾， 用1. Omol/LHCl調(diào)節(jié)pH值在2 3。用孔徑為15 μ m的濾布過濾，再經(jīng)4 μ m精密過濾器過 濾，并收集濾液用孔徑為1 μ m精密過濾器過濾，用截留2萬分子量超濾膜超濾。將超濾并經(jīng)PH確認后的酸化尿打入放入提取柱(每柱內(nèi)XAD-7和XAD-16任意比 例的吸附劑為35L，樹脂徑高比為1 3)，每次以約17L/分的速度均勻放入，使酸化尿中的 有效成分被吸附，流穿液棄去。吸附結(jié)束，將純化水以25L/分的速度均勻放入提取柱，共 625L。洗滌液棄去。洗滌結(jié)束，待純化水液面降至吸附劑頂部10 12cm時，將98%甲醇以 IlL/分的速度均勻放入提取柱，共166L，洗脫吸附在吸附樹脂上的有效成分。收集洗脫液。 提取結(jié)束，待甲醇液面降至吸附劑頂部10 15cm時，將300L純化水均勻放入提取柱，洗滌 吸附樹脂上滯留的提取液。收集的洗脫液邊攪拌邊加入BaOH溶液，得提取溶液，提取液中氫氧化鋇濃度為 120mg/L。提取溶液再重復吸附、洗脫一次；收集進一步純化的提取液，重復的吸附、洗脫同 前面所述的操作相同。二次吸附得提取溶液經(jīng)弱酸性陽離子樹脂(D113)進行脫鹽處理。經(jīng) 脫鹽處理處理得提取溶液經(jīng)弱堿性陰離子樹脂(D118)進行脫色處理。樹脂用量為25kg，流 速為17L/分，樹脂用完后用170L純化水洗滌。將經(jīng)過上述工序得溶液收集攪拌均勻，在滅活罐內(nèi)用90%甲醇或純化水調(diào)整甲醇 含量在73-75%之間，用lmol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值在4. 5-5. 0，攪拌均勻后，在25士5°C溫 度下放置6小時進行病毒滅活。用1. 0mol/L NaOH溶液調(diào)整已滅活提取液pH值至6. 0 6. 5。真空干燥機內(nèi)膽溫 度設(shè)定不超過40°C。內(nèi)膽真空在0. 030 0. 200MPa之間，濃縮干燥除去甲醇和部分水分， 濃縮至固總含量為250 350mg/ml出料并收集濃縮液。用2mol/L NaOH調(diào)濃縮液pH值至 7. 3-7.8，用孔徑為34!11的濾芯(膜)過濾，收集過濾液用PE塑料桶盛裝，10°C以下密閉保存。實施例6新鮮人尿500L經(jīng)2. Omol/LHCl稀鹽酸酸化至pH值為3 5，經(jīng)40目篩網(wǎng)粗濾， 用1. Omol/LHCl調(diào)節(jié)pH值在2 3。用孔徑為18 μ m的濾布過濾，再經(jīng)5 μ m精密過濾器過 濾，并收集濾液用孔徑為3 μ m精密過濾器過濾，用截留1. 5萬分子量超濾膜超濾。將超濾并經(jīng)PH確認后的酸化尿打入放入提取柱(每柱內(nèi)HP3、XAD_7和XAD-16任 意比例混合的吸附劑為50L，樹脂徑高比為1 2. 5)，每次以約20L/分的速度均勻放入，使 酸化尿中的有效成分被吸附，流穿液棄去。吸附結(jié)束，將純化水以25L/分的速度均勻放入 提取柱，共550L。洗滌液棄去。洗滌結(jié)束，待純化水液面降至吸附劑頂部12 15cm時，將90%乙醇以4L/分的速度均勻放入提取柱，共120L，洗脫吸附在吸附樹脂上的有效成分。收 集洗脫液。提取結(jié)束，待乙醇液面降至吸附劑頂部10 15cm時，將200L純化水均勻放入 提取柱，洗滌吸附樹脂上滯留的提取液。收集的洗脫液邊攪拌邊加入BaOH溶液，得提取溶液，提取液中氫氧化鋇濃度為 100mg/L。提取溶液經(jīng)弱酸性陽離子樹脂(D113)進行脫鹽處理。經(jīng)脫鹽處理處理得提取溶 液經(jīng)弱堿性陰離子樹脂(D118)進行脫色處理。樹脂用量為40kg，流速為20L/分，樹脂用完 后用200L純化水洗滌。將經(jīng)過上述工序得溶液收集攪拌均勻，在滅活罐內(nèi)用90%乙醇或純化水調(diào)整乙醇 含量在73-75%之間，用lmol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值在4. 5-5. 0，攪拌均勻后，在25士5°C溫 度下放置6小時進行病毒滅活。用1. Omol/L NaOH溶液調(diào)整已滅活提取液pH值至6. 0 6. 5。真空干燥機內(nèi)膽溫 度設(shè)定不超過40°C。內(nèi)膽真空在0. 030 0. 200MPa之間，濃縮干燥除去乙醇和部分水分， 濃縮至固總含量為250 350mg/ml出料并收集濃縮液。用2mol/L NaOH調(diào)濃縮液pH值至 7. 3-7.8，用孔徑為34!11的濾芯(膜)過濾，收集過濾液用PE塑料桶盛裝，10°C以下密閉保存。本發(fā)明還提供了如下的試驗例，以進一步說明本發(fā)明所提供的技術(shù)方案。試驗例1本發(fā)明還進行了如下試驗，以檢驗本發(fā)明所述技術(shù)方案同其它制備方法的對比本試驗例以500L新鮮尿液為原料進行制備
權(quán)利要求
1.一種尿多酸肽組合物的制備方法，其特征在于所述尿多酸肽組合物按照如下步驟 制備(1)將新鮮人尿液酸化，過濾，濾液進行超濾；(2)將超濾后的濾液使用樹脂柱柱層析并收集洗脫液；(3)將收集的洗脫液加入氫氧化鋇溶液，然后脫鹽、脫色處理；(4)將脫色處理得到的溶液進行病毒滅活；(5)將滅活后得到溶液調(diào)節(jié)pH到6.0 6. 5后濃縮，濃縮液調(diào)節(jié)pH到7. 0 8. 0后進 行超濾，優(yōu)選為濃縮液調(diào)節(jié)PH到7. 0 7. 5后進行超濾，收集濾液即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿多酸肽組合物的制備方法，其特征在于步驟(1)酸化為 將尿液先調(diào)節(jié)pH為2 5，經(jīng)30 90目篩網(wǎng)過濾后再調(diào)節(jié)pH為2 3 ；優(yōu)選為將尿液先 調(diào)節(jié)pH為2 4，經(jīng)50 70目篩網(wǎng)過濾后再調(diào)節(jié)pH為1. 7。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿多酸肽組合物的制備方法，其特征在于步驟(1)所述過 濾為順序分別使用孔徑為15 30 μ m、4 10 μ m、1 3. 5 μ m的過濾介質(zhì)過濾，優(yōu)選為順 序分別使用孔徑為20 25 μ m、5 7 μ m、1 3 μ m的過濾介質(zhì)過濾；所述超濾為使用截留 分子量為5000 20000的超濾膜，優(yōu)選為使用截留分子量為10000的超濾膜。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿多酸肽組合物的制備方法，其特征在于步驟⑶在加入 氫氧化鋇溶液后，在脫鹽處理前還進行二次吸附，所述二次吸附為將脫鹽處理前的溶液用 樹脂柱柱層析。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的尿多酸肽組合物的制備方法，其特征在于所述樹脂柱 的吸附劑為大孔樹脂吸附劑，優(yōu)選為HP3、XAD-16、XAD-7中的一種或幾種的任意組合；吸附 劑體積同尿液體積比為1 8 1 15，優(yōu)選為1 11. 9;樹脂柱內(nèi)吸附劑填料直徑與高 度比為1 1.5 1 3，優(yōu)選為1 2。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的尿多酸肽組合物的制備方法，其特征在于所述柱層 析為將預處理得到的尿液加入樹脂柱中進行吸附，加入速度為每分鐘加入尿液總體積的 1/30 1/20，棄去液體，然后將純化水加入入樹脂柱中洗滌，純化水加入速度為每分鐘加 入純化水總體積的1/30 1/20，純化水用量同尿液體積比為1 0. 8 1 1. 2，待純化 水液面距吸附劑頂部10 15cm時，加入醇溶液洗脫，加入速度為每分鐘加入醇溶液總量 的3/125 9/125，醇溶液用量同尿液體積比為1 3 1 5 ；優(yōu)選為尿液加入速度為每 分鐘加入尿液總體積的1/25，純化水加入速度為純化水總體積的1/25，純化水用量同尿液 體積比為1 1，醇溶液加入速度為每分鐘加入醇溶液總量的6/125，醇溶液用量同尿液體 積比為1 4 ；所述醇溶液優(yōu)選為甲醇或乙醇溶液，更優(yōu)選為乙醇溶液；醇溶液濃度為80 100%,優(yōu)選為90 95%。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的尿多酸肽組合物的制備方法，其特征在于步驟(3)所 述氫氧化鋇加入量為使得溶液中氫氧化鋇濃度為80 120mg/L，優(yōu)選為100mg/L。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的尿多酸肽組合物的制備方法，其特征在于步驟(3)所 述脫鹽處理為采用陽離子樹脂，優(yōu)選為D113型陽離子樹脂；所述脫色處理為采用陰離子樹 脂，優(yōu)選用D118型陰離子樹脂。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿多酸肽組合物的制備方法，其特征在于步驟(4)所述病 毒滅活為調(diào)節(jié)脫色處理得到的溶液醇濃度為73 75%，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH在4. 5 (5. 0，然后在20 30°C下放置6小時。
10.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的尿多酸肽組合物的制備方法，其特征在于步驟(5)所 述濃縮為在溫度低于40°C濃縮到固體物質(zhì)總含量為150 500mg/ml，優(yōu)選為在30 40°C 下濃縮到固體物質(zhì)總含量為250 350mg/ml ；所述超濾的過濾介質(zhì)孔徑為0. 8 3 μ m，優(yōu) 選為1. 0 1. 5 μ m。
全文摘要
本發(fā)明提供一種尿多酸肽組合物的制備方法，所述尿多酸肽組合物按照如下步驟制備(1)將新鮮人尿液酸化，過濾，濾液進行超濾；(2)將超濾后的濾液使用樹脂柱柱層析并收集洗脫液；(3)將收集的洗脫液加入氫氧化鋇溶液，然后脫鹽、脫色處理；(4)將脫色處理得到的溶液進行病毒滅活；(5)將滅活后得到溶液調(diào)節(jié)pH到6.0～6.5后濃縮，濃縮液調(diào)節(jié)pH到7.0～8.0后進行超濾，優(yōu)選為濃縮液調(diào)節(jié)pH到7.0～7.5后進行超濾，收集濾液即得。本發(fā)明所提供的制備方法簡單易行，適于工業(yè)化生產(chǎn)；本發(fā)明方法制備的尿多酸肽純度高，雜質(zhì)含量低，患者用藥更加安全；本發(fā)明方法在大幅度提高產(chǎn)品純度的基礎(chǔ)上對于收率沒有明顯的影響。
文檔編號A61K35/22GK101991601SQ20091030544
公開日2011年3月30日 申請日期2009年8月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月10日
發(fā)明者張義興 申請人:張義興