專利名稱：用于錸和锝的三羰基絡合物的雙功能三齒的含吡唑基配體的制作方法
技術領域：
背景技術：
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R6為H、烷基或芳基；η 為 1、2、3、4、5、6、7、8、9 或 10 ；和當R1 = R3 = CH3 時，R2> R4 和 R5 三個不都為 H。這些分子兼有兩種功能。一種功能用于穩(wěn)定金屬中心(包括放射性金屬)，并包 括不同的供電子原子集合(sets)，并且另一功能是用于結(jié)合有意義的分子(molecule of interest)的功能團。烷基為C1烷基、C2烷基、C3烷基、C4烷基、C5烷基或C6烷基，特別是選自甲基、乙 基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、異戊基、新戊基、正己基、異己 基(2-甲基戊基)、新己基(2，2_ 二甲基丁基)、3_甲基戊基、2，3_ 二甲基丁基。該芳基為單環(huán)C5-C8或多環(huán)Cltl-C18,并該芳基任選被烷基、羧基、氧代、氨基、烷氧基 或醛基所取代。η為2、3、4、5或6，并優(yōu)選為2、3或4。該螯合劑為例如下列通式的吡唑基-多胺(polyamine) 其中禮、&、1 3、1 4和R5如上所定義。或者，該螯合劑為下列通式的吡唑基_氨基硫醚 其中禮、&、1 3、RjPR5如上所定義。在另一實施方案中，該螯合劑為下列通式的吡唑基_多硫醚 其中禮、&、1 3、RjPR5如上所定義。在另一實施方案中，該螯合劑為下列通式的吡唑基-氨基膦 其中禮、&、1 3、RjPR5如上所定義。在另一實施方案中，該螯合劑為下列通式的吡唑基-硫醚膦
(E)其中禮、&、1 3、1 4和R5如上所定義。本發(fā)明更特別地提供了式I螯合劑，其中X和Y為N，R6為H、C1烷基、C2烷基、C3 烷基、C4烷基、C5烷基或C6烷基、單環(huán)芳基優(yōu)選為苯基或芐基，或多環(huán)Cltl-C18芳基，所述單 環(huán)芳基或多環(huán)Cltl-C18芳基任選被烷基、羧基、氧代、氨基、烷氧基或醛基所取代，或為生物分 子，并且R^n R4和R5如表1中所列出的。在另一實施方案中，本發(fā)明涉及式I的螯合劑，其中X和Y為S，R6為IC1烷基、C2 烷基、C3烷基、C4烷基、C5烷基或C6烷基、單環(huán)芳基優(yōu)選為苯基或芐基，或多環(huán)Cltl-C18芳基， 所述單環(huán)芳基或多環(huán)Cltl-C18芳基任選被烷基、羧基、氧代、氨基、烷氧基或醛基所取代，或為 生物分子，并且禮、R2、R3、R4和R5如表ι中所列出的。在另一實施方案中，提供了式I的螯合劑，其中X為N且Y為S，R6為IC1烷基、C2 烷基、C3烷基、C4烷基、C5烷基或C6烷基、單環(huán)芳基優(yōu)選為苯基或芐基，或多環(huán)Cltl-C18芳基， 所述單環(huán)芳基或多環(huán)Cltl-C18芳基任選被烷基、羧基、氧代、氨基、烷氧基或醛基所取代，或為 生物分子，并且禮、R2、R3、R4和R5如表ι中所列出的。根據(jù)其另一方面，本發(fā)明涉及式I的螯合劑，其中X為S且Y為N，R6為IC1烷基、 C2烷基、C3烷基、C4烷基、C5烷基或C6烷基、單環(huán)芳基優(yōu)選為苯基或芐基，或多環(huán)Cltl-C18芳 基，所述單環(huán)芳基或多環(huán)Cltl-C18芳基任選被烷基、羧基、氧代、氨基、烷氧基或醛基所取代， 或為生物分子，并且R” R2、R3、R4和R5如表1中所列出的。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了式I的螯合劑，其中X為N并且Y為P，&為!1、 C1烷基、C2烷基、C3烷基、C4烷基、C5烷基或C6烷基、單環(huán)芳基優(yōu)選為苯基或芐基，或多環(huán) C10-C18芳基，所述單環(huán)芳基或多環(huán)Cltl-C18芳基任選被烷基、羧基、氧代、氨基、烷氧基或醛基 所取代，或為生物分子，并且R” R2、R3、R4和R5如表1中所列出的。在另一實施方案中，本發(fā)明涉及式I的螯合劑，其中X為S并且Y為P，R6為H、 C1烷基、C2烷基、C3烷基、C4烷基、C5烷基或C6烷基、單環(huán)芳基優(yōu)選為苯基或芐基，或多環(huán) C10-C18芳基，所述單環(huán)芳基或多環(huán)Cltl-C18芳基任選被烷基、羧基、氧代、氨基、烷氧基或醛基 所取代，或為生物分子，并且R” R2、R3、R4和R5如表1中所列出的。為了獲得對靶標具有高特異性的標記的生物分子，本發(fā)明的螯合劑特別適于連接 生物分子與羰基部分。因此，在式I中R6可為生物分子。生物分子(BM)可能的位置如圖1中所示。
生物分子可以是能用于治療和診斷腫瘤，并可與本發(fā)明的螯合劑相偶聯(lián)的任何物 質(zhì)。一般技術人員能確定本發(fā)明的螯合劑可用于何種生物分子。特別地，該生物分子選自 氨基酸、肽、蛋白質(zhì)、寡核苷酸、多核苷酸、糖。更特別地，該生物分子選自抗體、腫瘤受體的配體如CCK、硫代葡萄糖、葡糖胺、 促生長素抑制素、神經(jīng)降壓素、鈴蟾肽、CCK、膜聯(lián)蛋白、白細胞介素、生長因子、類固醇激 素和結(jié)合至GPIIb/IIIa受體的分子。其它生物分子可為葡萄糖、硫代葡萄糖、神經(jīng)遞質(zhì)、 酪氨酸激酶活性的抑制劑如苯并噻喃酮(benzothiopyranones)、苯胺基鄰苯二甲酰亞胺 (anilinophthalimides)、喹唑啉、吡啶并嘧啶和吡咯并嘧啶。本發(fā)明特別的試劑如下 具有或不具有偶聯(lián)至其上的生物分子的所有螯合劑可與式[M(CO)3]+的羰基部分 絡合，其中M為錸(Re)、锝(Tc)或錳(Mn)。本發(fā)明的螯合劑為根據(jù)式I的分子，其中X和Y可為N和N、N和S、S和N、S和S、 N和P、或S和P中之一。這些組合中的每個可與VHR4和R5的不同組合相結(jié)合。禮、 R2> R3> R4和R5的所有可能的組合列在表1中。在表1中，烷基為C1烷基、C2烷基、C3烷基、 C4烷基、C5烷基或C6烷基，特別是選自甲基、乙基、正-丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁 基、叔丁基、正戊基、異戊基、新戊基、正己基、異己基(2-甲基戊基)、新己基(2，2_二甲基丁 基)、3_甲基戊基、2，3- 二甲基丁基；該芳基為單環(huán)C5-C8或多環(huán)Cltl-C18,并且該芳基任選被 烷基、羧基、氧代、氨基、烷氧基或醛基所取代，并且該芳基特別地為苯基或芐基，且η為1、 2、3、4、5、6、7、8、9或10。R6為H、烷基、芳基或如上所定義的生物分子。將上述每個變項引 入表格中將得到權(quán)利要求1中的所有化合物，其因此被公開。表1
HHH燒基(CH2)nOR6HHH芳基HHHH芳基燒基HHH芳基芳基HHH芳基(CH2)nCOOR6HHH芳基(CH2)nOR6HHH(CH2)nCOOR6HHHH(CH2)nCOOR6燒基HHH(CH2)nCOOR6芳基HHH(CH2)nCOOR6(CH2)nCOOR6HHH(CH2)nCOOR6(CH2)nOR6HHH(CH2)nOR6HHHH(CH2)nOR6燒基HHH(CH2)nOR6芳基HHH(CH2)nOR6(CH2)nCOOR6HHH(CH2)nOR6(CH2)nOR6HH燒基HHHH燒基H燒基HH燒基H芳基HH燒基H(CH2)nCOOR6HH燒基H(CH2)nOR6HH燒基燒基HHH燒基燒基燒基HH燒基燒基芳基HH燒基燒基(CH2)nCOOR6HH燒基燒基(CH2)nOR6HH燒基芳基HHH燒基芳基燒基HH燒基芳基芳基HH燒基芳基(CH2)nCOOR6HH燒基芳基(CH2)nOR6HH燒基(CH2)nCOOR6HHH燒基(CH2)nCOOR6燒基HH燒基(CH2)nCOOR6芳基HH燒基(CH2)nCOOR6(CH2)nCOOR6HH燒基(CH2)nCOOR6(CH2)nOR6
HNHR6HH燒基HNHR6HH芳基HNHR6HH(CH2)nCOOR6HNHR6HH(CH2)nOR6HNHR6H燒基HHNHR6H燒基燒基HNHR6H燒基芳基HNHR6H燒基(CH2)nCOOR6HNHR6H燒基(CH2)nOR6HNHR6H芳基HHNHR6H芳基燒基HNHR6H芳基芳基HNHR6H芳基(CH2)nCOOR6HNHR6H芳基(CH2)nOR6HNHR6H(CH2)nCOOR6HHNHR6H(CH2)nCOOR6燒基HNHR6H(CH2)nCOOR6芳基HNHR6H(CH2)nCOOR6(CH2)nCOOR6HNHR6H(CH2)nCOOR6(CH2)nOR6HNHR6H(CH2)nOR6HHNHR6H(CH2)nOR6燒基HNHR6H(CH2)nOR6芳基HNHR6H(CH2)nOR6(CH2)nCOOR6HNHR6H(CH2)nOR6(CH2)nOR6HNHR6燒基HHHNHR6燒基H燒基HNHR6燒基H芳基HNHR6燒基H(CH2)nCOOR6HNHR6燒基H(CH2)nOR6HNHR6燒基燒基HHNHR6燒基燒基燒基
燒基H芳基芳基(CH2)nCOOR6燒基H芳基芳基(CH2)nOR6燒基H芳基(CH2)nCOOR6H燒基H芳基(CH2)nCOOR6燒基燒基H芳基(CH2)nCOOR6芳基燒基H芳基(CH2)nCOOR6(CH2)nCOOR6燒基H芳基(CH2)nCOOR6(CH2)nOR6燒基H芳基(CH2)nOR6H燒基H芳基(CH2)nOR6燒基燒基H芳基(CH2)nOR6芳基燒基H芳基(CH2)nOR6(CH2)nCOOR6燒基H芳基(CH2)nOR6(CH2)nOR6燒基COOHHHH燒基COOHHH燒基燒基COOHHH芳基燒基COOHHH(CH2)nCOOR6燒基COOHHH(CH2)nOR6燒基COOHH燒基H燒基COOHH燒基燒基燒基COOHH燒基芳基燒基COOHH燒基(CH2)nCOOR6燒基COOHH燒基(CH2)nOR6燒基COOHH芳基H燒基COOHH芳基燒基燒基COOHH芳基芳基燒基COOHH芳基(CH2)nCOOR6燒基COOHH芳基(CH2)nOR6燒基COOHH(CH2)nCOOR6H燒基COOHH(CH2)nCOOR6燒基燒基COOHH(CH2)nCOOR6芳基燒基COOHH(CH2)nCOOR6(CH2)nCOOR6燒基COOHH(CH2)nCOOR6(CH2)nOR6燒基COOHH(CH2)nOR6H燒基COOHH(CH2)nOR6燒基燒基COOHH(CH2)nOR6芳基
焼基COOHH(CH2)nOR6(CH2)nCOOR6焼基COOHH(CH2)nOR6(CH2)nOR6焼基COOH焼基HH焼基COOH焼基H燒基焼基COOH焼基H芳基焼基COOH焼基H(CH2)nCOOR6
燒基NHR6芳基H(CH2)nCOOR6燒基NHR6芳基H(CH2)nOR6燒基NHR6芳基燒基H燒基NHR6芳基燒基燒基燒基NHR6芳基燒基芳基燒基NHR6芳基燒基(CH2)nCOOR6燒基NHR6芳基燒基(CH2)nOR6燒基NHR6芳基芳基H燒基NHR6芳基芳基燒基燒基NHR6芳基芳基芳基燒基NHR6芳基芳基(CH2)nCOOR6燒基NHR6芳基芳基(CH2)nOR6燒基NHR6芳基(CH2)nCOOR6H燒基NHR6芳基(CH2)nCOOR6燒基燒基NHR6芳基(CH2)nCOOR6芳基燒基NHR6芳基(CH2)nCOOR6(CH2)nCOOR6燒基NHR6芳基(CH2)nCOOR6(CH2)nOR6燒基NHR6芳基(CH2)nOR6H燒基NHR6芳基(CH2)nOR6燒基燒基NHR6芳基(CH2)nOR6芳基燒基NHR6芳基(CH2)nOR6(CH2)nCOOR6燒基NHR6芳基(CH2)nOR6(CH2)nOR6燒基(CH2)nCOOR6HHH燒基(CH2)nCOOR6HH燒基燒基(CH2)nCOOR6HH芳基燒基(CH2)nCOOR6HH(CH2)nCOOR6燒基(CH2)nCOOR6HH(CH2)nOR6燒基(CH2)nCOOR6H燒基H燒基(CH2)nCOOR6H燒基燒基燒基(CH2)nCOOR6H燒基芳基燒基(CH2)nCOOR6H燒基(CH2)nCOOR6燒基(CH2)nCOOR6H燒基(CH2)nOR6燒基(CH2)nCOOR6H芳基H燒基(CH2)nCOOR6H芳基燒基燒基(CH2)nCOOR6H芳基芳基燒基(CH2)nCOOR6H芳基(CH2)nCOOR6燒基(CH2)nCOOR6H芳基(CH2)nOR6燒基(CH2)nCOOR6H(CH2)nCOOR6H
芳基H燒基(CH2)nCOOR6(CH2)nCOOR6芳基H燒基(CH2)nCOOR6(CH2)nOR6芳基H燒基(CH2)nOR6H芳基H燒基(CH2)nOR6燒基芳基H燒基(CH2)nOR6芳基芳基H燒基(CH2)nOR6(CH2)nCOOR6芳基H燒基(CH2)nOR6(CH2)nOR6芳基H芳基HH芳基H芳基H燒基芳基H芳基H芳基芳基H芳基H(CH2)nCOOR6芳基H芳基H(CH2)nOR6芳基H芳基燒基H芳基H芳基燒基燒基芳基H芳基燒基芳基芳基H芳基燒基(CH2)nCOOR6芳基H芳基燒基(CH2)nOR6芳基H芳基芳基H芳基H芳基芳基燒基芳基H芳基芳基芳基芳基H芳基芳基(CH2)nCOOR6芳基H芳基芳基(CH2)nOR6芳基H芳基(CH2)nCOOR6H芳基H芳基(CH2)nCOOR6燒基芳基H芳基(CH2)nCOOR6芳基芳基H芳基(CH2)nCOOR6(CH2)nCOOR6芳基H芳基(CH2)nCOOR6(CH2)nOR6芳基H芳基(CH2)nOR6H芳基H芳基(CH2)nOR6燒基芳基H芳基(CH2)nOR6芳基芳基H芳基(CH2)nOR6(CH2)nCOOR6芳基H芳基(CH2)nOR6(CH2)nOR6芳基COOHHHH芳基COOHHH燒基芳基COOHHH芳基
芳基NHR6芳基(CH2)nCOOR6(CH2)nCOOR6芳基NHR6芳基(CH2)nCOOR6(CH2)nOR6芳基NHR6芳基(CH2)nOR6H芳基NHR6芳基(CH2)nOR6燒基芳基NHR6芳基(CH2)nOR6芳基芳基NHR6芳基(CH2)nOR6(CH2)nCOOR6芳基NHR6芳基(CH2)nOR6(CH2)nOR6芳基(CH2)nCOOR6HHH芳基(CH2)nCOOR6HH燒基芳基(CH2)nCOOR6HH芳基芳基(CH2)nCOOR6HH(CH2)nCOOR6芳基(CH2)nCOOR6HH(CH2)nOR6芳基(CH2)nCOOR6H燒基H芳基(CH2)nCOOR6H燒基燒基芳基(CH2)nCOOR6H燒基芳基芳基(CH2)nCOOR6H燒基(CH2)nCOOR6芳基(CH2)nCOOR6H燒基(CH2)nOR6芳基(CH2)nCOOR6H芳基H芳基(CH2)nCOOR6H芳基燒基芳基(CH2)nCOOR6H芳基芳基芳基(CH2)nCOOR6H芳基(CH2)nCOOR6芳基(CH2)nCOOR6H芳基(CH2)nOR6芳基(CH2)nCOOR6H(CH2)nCOOR6H芳基(CH2)nCOOR6H(CH2)nCOOR6燒基芳基(CH2)nCOOR6H(CH2)nCOOR6芳基芳基(CH2)nCOOR6H(CH2)nCOOR6(CH2)nCOOR6芳基(CH2)nCOOR6H(CH2)nCOOR6(CH2)nOR6芳基(CH2)nCOOR6H(CH2)nOR6H芳基(CH2)nCOOR6H(CH2)nOR6燒基芳基(CH2)nCOOR6H(CH2)nOR6芳基芳基(CH2)nCOOR6H(CH2)nOR6(CH2)nCOOR6芳基(CH2)nCOOR6H(CH2)nOR6(CH2)nOR6芳基(CH2)nCOOR6燒基HH芳基(CH2)nCOOR6燒基H燒基芳基(CH2)nCOOR6燒基H芳基芳基(CH2)nCOOR6燒基H(CH2)nCOOR6芳基(CH2)nCOOR6燒基H(CH2)nOR6芳基(CH2)nCOOR6燒基燒基H芳基(CH2)nCOOR6燒基燒基燒基芳基(CH2)nCOOR6燒基燒基芳基芳基(CH2)nCOOR6燒基燒基(CH2)nCOOR6芳基(CH2)nCOOR6燒基燒基(CH2)nOR6芳基(CH2)nCOOR6燒基芳基H 本發(fā)明還涉及制備放射性標記的生物分子的方法，所述方法包括a)在用于形成螯合劑-羰基絡合物的條件下，使本發(fā)明的螯合劑與式[M(CO)3] +的 羰基部分接觸，其中M為錸(Re)或锝(Tc)；和b)使該絡合物與生物分子接觸，獲得放射性標記的生物分子。此方法特別適用于 標記對溫度和最終(extreme)pH敏感的生物分子。此方法可例如用試劑盒來完成，所述試劑盒包括具有本發(fā)明螯合劑的第一小瓶(vial)，任選地用于使螯合劑與羰基部分接觸的第一反應小瓶，具有生物分子的第二小瓶， 以及任選地用于使生物分子與反應第一步驟中獲得的螯合劑_羰基絡合物反應的第二反 應小瓶。在本發(fā)明另外的實施方案中，提供了一種用于制備放射性標記的生物分子的方 法，所述方法包括a)使本發(fā)明的螯合劑與生物分子接觸用于獲得螯合劑_生物分子；和b)在用于形成放射性標記的生物分子的條件下，使螯合劑_生物分子與式 [M(CO)3]+的羰基部分接觸，其中M為錸(Re)或锝(Tc)。用于完成此方法的試劑盒包括，例如具有本發(fā)明螯合劑的第一小瓶，任選地用于 使螯合劑與生物分子反應的第一反應小瓶，具有羰基部分的第二小瓶，以及任選地用于使 反應第一步驟中獲得的螯合劑_生物分子與羰基反應的第二反應小瓶。本發(fā)明將根據(jù)下面的實施例進一步加以說明。
實施例介紹所述的雙功能吡唑基-多胺、批唑基_多硫醚、吡唑基氨基-硫醚配體、吡唑 基-氨基膦和吡唑基-硫醚膦含有不同的供電子原子集合以穩(wěn)定金屬，并在可與尋求的分 子(seeking molecules)例如單克隆抗體、肽、寡核苷酸和糖蛋白偶聯(lián)的不同位置上具有不 同的功能團。它們在主鏈的不同位置還可具有不同的取代基和烷基鏈用于調(diào)節(jié)分子的物 理_化學特性。


圖1給出了一般性的概述，其顯示了 [M(C0)3] + (M = Re、Tc、Mn)類型的金屬片段 的可能組合。為本發(fā)明主題的這五種不同類型的含雙功能三齒的吡唑基的配體示意地描述 在圖2中。在圖3-6中將進一步詳細描述本發(fā)明，其僅僅是用于使本發(fā)明清楚。此類配體可 獲得熱力學穩(wěn)定的絡合物，并且主鏈的多樣性是調(diào)節(jié)化合物的物理_化學特性以及明顯地 調(diào)節(jié)它的藥物代謝動力學的重要因素。在圖6中，示意地描述了作為實例的某些Re和Tc 絡合物。
圖7描述了吡唑基-氨基膦的合成。 圖8描述了吡唑基-硫醚膦的合成。
具體實施例方式物質(zhì)和方法1. 2-[2_(吡唑-1-基)乙基亞胺基]乙胺(pz (CH2)2NH(CH2)2NH2) (1)的合成(參 見圖3)將1-(2_溴乙基)吡唑[6d] (12mmol)的四氫呋喃溶液滴加到乙二胺(0. 24mol) 的水溶液中。將混合物回流4小時。真空除去THF，并將水相用二氯甲烷洗。真空干燥后得 到黃色的油狀物，其以pz(CH2)2NH(CH2)2NHjl)表示。產(chǎn)率50%
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1H-NMR (D2O) :7.53(d，Η(3)ρζ，1Η) ；7. 45 (d, Η(5)ρζ，1Η) ；6. 23(t, Η(4)ρζ，1Η)； 4. 14 (t, CH2, 2H) ；2. 91 (t，CH2, 2H) ；2. 77 (t, CH2, 2H) ；2. 62 (t, CH2, 2H)。2. pz (CH2) 2N[ (CH2) 3C00H] (CH2) 2NH2 (4)的合成(參見圖 3)2. 1. BOC-ON 保護將1(1. Ig ；7mmol)的 DMF(20ml)溶液冷卻至 0°C，并滴加 BOC-ON(1，7g ；7mmol)的 DMF(20ml)溶液。將反應混合物于0°C攪拌3小時。真空除去溶劑，并將固體殘余物溶于 水中，并用氯仿洗3次，生成油狀物的2。產(chǎn)率68%。1H-NMR(D2O) -J. 55 (d, Η(3)ρζ,1Η)； 7. 47 (d, H(5)pz, 1H) ；6.24 (t，Η(4)ρζ，1Η) ；4. 38 (t, CH2, 2H) ；3. 40 (t, CH2, 2H) ；3.20 (t， CH2, 2H) ；2. 99 (t, CH2, 2H) ； 1. 25 (s，CH3,9H)。2. 2.用4-溴丁酸乙酯烷基化、水解和脫保護將化合物2 (757mg ；3mmol)溶于IOml乙腈中。將碳酸鉀(829mg ；6mmol)和催化量 的碘化鉀加入到該溶液中，并滴加4-溴丁酸乙酯(858ml，16mmol)。回流3天后，過濾分離 上層清液并真空干燥得到3。將此化合物(733mg，2mmol)溶于Na0H(800mg，20mmol)的水溶 液中，并于室溫下反應一天。然后將該溶液用IN的HCl中和并真空干燥。將該固體殘余物 溶于甲醇中，過濾除去沉淀的鹽并真空除去溶劑，得到黃色/褐色油狀物，表示為4。產(chǎn)率 (50% )。1H-NMR (D2O) 7. 78(d, Η(3)ρζ，1Η) ；7. 64 (d, Η(5)ρζ，1Η) ；6. 42 (t, Η(4)ρζ，1Η)； 4. 36 (t, CH2, 2H) ；3.10 (t，CH2, 2H) ；3.02 (t，CH2, 2H) ；2.86 (t，CH2, 2H) ；2.64 (t，CH2, 2H)； 2. 15 (t, CH2, 2H) ； 1. 68(q，CH2，2H)。3. (4-羧酸)pz (CH2) 2NH (CH2) 2NH2 (7)的合成(參見圖 3)3. 1. N-2-羥基乙基-4-吡嗶羧酸乙酯(5)使用制備吡唑[7]的典型方法制備化合物5。將2-甲?；?3-氧代丙酸乙酯 (2. 80g ；20mmol)溶于20ml乙醇中，并冷卻至0°C。將2-羥基乙基胼(1. 44g ;20mmol)溶于 IOOml乙醇中，并將其滴加到2-甲?；?3-氧代丙酸乙酯的溶液中。使反應混合物于室溫 放置過夜。真空除去溶劑，生成黃色的油狀物。產(chǎn)率95%1H-NMR(CDCl3) -J. 93 (s, Η(3)ρζ，1Η) ；7. 91 (s, Η(5)ρζ，1Η) ；4. 30-4. 22 (m, CH2+0CH2, 5H) ；3. 99 (t, CH2, 2H) ；1. 30 (t, CH3, 3H)。3. 2. N-(2-對甲苯磺酰基乙基)-4-吡嗶羧酸乙酯(6)將N-2-羥基乙基-4-吡唑羧酸乙酯(5) (2. 76g，15mmol)和對甲苯磺酰氯(2. 85g， 15mmol)懸浮于丙酮(15ml)和水(15ml)的溶液中，并冷卻至0°C。用15分鐘的時間滴加 NaOH(0. 6g,15mmol)的水(IOml)溶液。然后使混合物達到室溫，并劇烈攪拌過夜。蒸發(fā)丙 酮，并將水溶液用氯仿萃取3次，生成黃色的油狀物。產(chǎn)率60%1H-NMR(CDCl3) :7.82(s，H⑶ρζ，1Η) ；7. 76(s, Η(5)ρζ，1Η) ；7. 61 (d, H(ph)，2H)； 7. 26(d，H(ph)，2H) ；4. 35 (q, OCH2, 2H) ；4· 24 (t，CH2, 2H) ；2. 15 (s，CH3, 3H) 1· 33 (t，CH2, 2H)。按照如下制備化合物7。將乙二胺(16ml ；0. 24mol)溶于NaOH (9. 6g ；0. 24mol)的 水(20ml)溶液中。將N-(2-對甲苯磺?；一?-4_吡唑羧酸乙酯(6) (4. 06g ；12mmol)的 THF(IOml)溶液滴加到該乙二胺溶液中。將反應混合物回流24小時。其后，真空除去溶劑， 并將產(chǎn)物通過硅膠柱色譜法純化(洗脫液甲醇-NH3/甲醇(50 50))，生成暗黃色固體。 產(chǎn)率50%0
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1H-NMR (D2O) δ 7. 80(s, H(3)pz, 1H) ；7. 64(s, H(5)pz, 1H) ；4. 27 (t, CH2, 2H)； 3. 24 (t, CH2, 2H) ；3. 11-3. 00 (m, 2CH2,4H). IV (KBr) (v/cnT1) 1690 (C = 0)。4. 3，5_M印ζ (CH2)2N[(CH2)3GlyGlyOEt)] (CH2) 2ΝΗ2 (13)的合成(圖 4)4. 1. BOC-ON 保護(9)將化合物8(3. 41g，18. 71mmol) [4c]溶于 THF(25mL)中，并冷卻至-10°C至 0°C 的 溫度。滴加BOC-ON(4. 60g, 18. 71mmol)的THF(20ml)溶液，并于0°C將反應混合物攪拌2小 時，導致8的完全轉(zhuǎn)化，其通過TLC檢測(Rf = 0. 5，100% MeOH)。然后將反應混合物溫熱 至室溫，并在飽和的Na2CO3水溶液和二氯甲烷之間分配。分離有機層，經(jīng)無水MgSO4干燥， 過濾，并減壓濃縮，得到定量產(chǎn)率的高粘稠的無色油狀物的產(chǎn)物9 (由1H-NMR可知)。此產(chǎn) 物不需進一步純化用于下一步驟。1H-WR(CDCl3) δ 5. 76 (s，批唑，1Η)，5. 08 (s br.，ΝΗ，1Η)，4. 04 (t，CH2, 2Η)，
3.18 (m, CH2, 2H)，2. 99 (t, CH2, 2H)，2. 72 (t, CH2, 2H)，2. 18 (s, CH3, 3H)，2. 20 (s, CH3, 3H)， 1. 40 (s，C (CH3) 3，9H)。4. 2. 3, 5-Me,pz (CHj ,N「(CHj XOOHl (CE1) ,NHBOC(Il)的合成向該粗產(chǎn)物9(1. 02g)的CH3CN(15mL)的攪拌溶液中加入4_溴丁酸乙酯(1. 4g， 7. 20mmol)、K2CO3(1. 00g，7. 20mmol)和催化量的ΚΙ。在劇烈攪拌11天下，使生成的混懸液 反應，通過TLC監(jiān)測該反應(Rf產(chǎn)物=0.4，10% MeOH/CH2Cl2)。在過濾除去混懸液中的白 色固體后，真空除去溶劑，獲得淡黃色的粘稠狀的油狀物。將該粗產(chǎn)物用75-100%乙酸乙酯 /己烷(梯度)的合適硅膠柱色譜處理，得到淡黃色粘稠的油狀物的10，其在室溫下靜置多 天固化。產(chǎn)率0. 73g(51%產(chǎn)率)。將10(4. 6g, 11. 60mmol)的 THF(190mL)溶液和 NaOH(8. 3mL 的 14N NaOH 溶液， 116. (Mimol)水溶液回流8小時。此反應通過TLC監(jiān)測(Rf產(chǎn)物=0. 2，10% MeOH/CH2Cl2)。 用4N的HCl中和后(pH6-7)，將THF/H20溶液減壓蒸發(fā)至干。將該粗的產(chǎn)物用10-50% MeOH/ CHCl3(梯度)的合適硅膠柱色譜處理，得到高粘稠的無色油狀物的11，其在靜置多天后結(jié) 晶。產(chǎn)率2. 82g(66% )。化合物10 =1H-匪 R (CDCl3) δ 5. 75 (s,吡唑，1H)，4. 09 (q，CH2, 2H) ,3. 98 (s br., CH2, 2H)，3. 08 (s br.，CH2, 2H)，2. 78 (s br.，CH2, 2H)，2. 45-2. 51 (m, CH2,4H)，2. 23 (s, CH3, 3H)，2. 18 (m, CH3, CH2, 5H)，1. 63 (s br.，CH2, 2H)，1. 41 (s，C (CH3) 3，9H)，1. 23 (t, CH3, 3H)?；衔?1 =1H-WR(CDCl3) δ 5. 81 (s，吡唑，1H)，4. 93 (s br. , NH, 1H)4. 12 (t br., CH2, 2H)，3. 04 (q br.，CH2, 2H)，2. 86 (t br.，CH2, 2H)，2. 58-2. 64 (m, CH2,4H)，2. 42 (t, CH2, 2H), 2. 24 (s，CH3, 3H) ,2. 19 (s，CH3, 3H)，1. 79 (m, CH2, 2H)，1. 40 (s, C(CH3)3，9H)。化合物3，5_Me2pz (CH2)2N [(CH2)3CONHGlyGlyOEt] (CH2) 2NH2 (13)是按照如下制備得 到的(參見圖4)。向11(1. 51g，4. 09mmol)的 CH3CN(48mL)溶液中加入 GlyGly 乙酯鹽酸鹽(0. 57g，
4.09mmol)、三乙胺(1. 24g，12. 27mmol)和 HBTU (1. 55g，4. 09mmol)。將反應混合物在氮氣下 于室溫攪拌20小時。將反應通過TLC監(jiān)測(Rf產(chǎn)物=0.8,20% MeOH/CH2Cl2)。蒸發(fā)溶劑， 并將所得的粗產(chǎn)物用3-5% MeOH/CHCl3 (梯度)在合適的硅膠柱上通過色譜法純化，得到粘 稠的無色油狀的12。產(chǎn)率1. 23g(59% )。使3，5-Me2pz (CH2)2N[(CH2)3CONHGlyGlyOEt] (CH2) 2NHB0C (12) (1. 23g，2. 4Immo 1)
30在CH2Cl2/TFA(25mL/4. ImL)中的溶液反應2小時。將反應通過TLC監(jiān)測(Rf = 0. 4,20% MeOH/CH2Cl2)。減壓蒸發(fā)溶劑和TFA，并獲得高度粘稠的淡黃色的油狀物。將此油狀物溶于 水中，用IN的NaOH(pH 7-8)中和，并蒸發(fā)溶劑至干。TLC =Rf = 0. 2,20% MeOH/CH2Cl2。將 該化合物進一步用20-40% MeOH/CHCl3 (梯度)在合適的硅膠柱上通過色譜法純化，得到粘 稠的無色油狀的13。產(chǎn)率0. 97g(98% )?；衔?2 ^h-NMR(CDCI3) δ 8. 66 (s br.，NH，1H)，7. 00 (s br.，NH，1H)，5. 80 (s， 吡唑，1H)，4. 91 (s br.，ΝΗ，1Η)4· 15 (q.，CH2, 2H) ,4. 04 (s br.，CH2, 2H) ,3. 97 (d, CH2, 2H), 3. 90 (d, CH2, 2H)，2. 89 (s br.，CH2, 2H)，2. 69 (s br.，CH2, 2H)，2. 51 (s br.，CH2, 2H)，2. 39 (s br.，CH2, 2H)，2. 30 (s br.，CH2, 2H)，2. 20 (s, CH3, 3H)，2. 18 (s, CH3, 3H)，1. 74 (s br.，CH2, 2H)，1. 38 (s，C (CH3) 3，9H)，1. 23 (t, CH3, 3H)?；衔颕s=1H-NMR(Cdsod) δ 5. 84 (s,吡唑，1H)，4· 17(q，CH2, 2H) ,4. 06 (t, CH2, 2H)，3. 91(d，CH2, 4H) ,2. 97 (t, CH2, 2H) ,2. 71-2. 80 (m, CH2,4H) ,2. 51 (t, CH2, 2H) ,2. 25 (s, CH3, 3H)，2. 15 (s，CH3, 3H)，2. 12 (t, CH2, 2H)，1. 66 (m, CH2, 2H)，1. 25 (t, CH3, 3H)。5. 3，5H\fepz (CH2)2S (CH2)2S (CH2) COOEt (16)的合成(圖 5)5. 13, 5-Meoz (CHJ2S (CHJ2OH(14)的合成將0. 70ml (IOmmol)的 HSCH2CH2OH 與 0. 40g(IOmmol)的 NaOH 在水中混和，并將 溶液回流5分鐘。于室溫下，向此溶液中滴加溶于四氫呋喃(THF)中的2. 78g(IOmmol)的 N- (2-對甲苯磺?；一?-3，5- 二甲基吡唑，隨后溫和回流3小時。將混合物用氯仿萃取， 真空干燥后從其中回收1.62g黃色油狀的14(8. 1 Ommol,81% )0化合物14 ^H-WR(CDCl3) 5. 67 (s, pz_H，1H) ；4. 39 (s, OH, 1H) ；4. 03 (t, CH2, 2H)； 3. 60 (t, CH2, 2H) ；2. 83 (t, CH2, 2H) ；2. 50 (t, CH2, 2H) ；2. 14 (s, CH3, 3H) ；2. 09 (s，CH3, 3H)。5. 23, 5-Mepz (CE1) 0S (CH9)2Br (15)的合成將0. 19ml (2mmol)的PBr3加入到溶于氯仿的14 (0. 40g，2mmol)中，并在N2下將生 成的溶液回流24小時。將混合物用20ml的10% NaHCO3溶液處理。分離有機相，并減壓除 去氯仿，得到0. 329g黃色油狀的15 (1.25讓ol，63% )。1H-NMR(CDci3) :5· 82 (s，pz_H，1H) ；4· 15 (t，CH2, 2H) ；3· 36 (t，CH2, 2H) ；3. 00 (t, CH2, 2H) ；2. 70 (t, CH2, 2H) ；2. 26 (s, CH3, 3H) ；2. 23 (s，CH3, 3H)。在N2下，將干燥的乙醇加入到金屬鈉(0. 15g、4. 56mmol)中，并將混合物于室溫下 攪拌直至完全轉(zhuǎn)化為乙醇鈉。向此混合物中滴加2-巰基乙酸乙酯(0.50ml、4.56mmol)的 乙醇溶液，隨后加入1.20g(4. 56mmol) ^ 3, 5-Mepz (CH2)2S (CH2)2Br (15)的乙醇溶液。將反 應混合物于室溫下攪拌過夜。此時后，真空除去溶劑，并將生成的油狀物溶于氯仿中。在用 水洗后，將有機層真空干燥，得到1. OOg黃色油狀的16(3. 3mmol、72. 4% ) 0化合物16 ^H-WR(CDCl3) 5. 82 (s, pz_H，1H) ；4. 14 (m, CH2, CH2-COO, 4H) ；3. 25 (s, CH2, 2H) ；2. 92(t，CH2，2H) ；2. 75 (t, CH2, 2H) ；2. 57 (t，CH2, 2H) ；2. 2(s, CH3, 3H) ；2. 16 (s，CH3, 3H) ；1. 25 (t, CH3, 3H)。6. Re和Tc化合物(參見圖6)6. 1.「Re (CO), ( κ a-pz (CH9) ,NH (CH9) m) 1 Br (17a)的合成將IOOmg (0. 130mmol)的(NEt4) 2 [ReBr3 (CO) 3]與 20mg (0. 130mmol)的化合物 I(Pz(CH2)2NH(CH2)2NH2)在水中混和，并將溶液回流2小時。然后在減壓下減少該體積，并于4°C放置該混合物直至沉淀出白色固體。由1H-NMR測產(chǎn)率> 90%，1H-NMR(D2O) 7. 82(d, Η(3)ρζ，1Η) ；7. 76 (d, Η(5)ρζ，1Η) ；6. 54(s br, NH, 1H)； 6. 39 (t, Η(4)ρζ，1Η) ；4.86 (s，寬廣(largo), NH2,1 H) ；4. 43 (m, CH2,1 H) ；4. 16 (m, CH2,1 H)；
3.94 (s，寬廣，NH2,1H) ；3.50 (m，CH2,1 H) ；2.87 (m，CH2,1 H) ；2.71 (m，CH2, 2H) ；2.48 (m，CH2, 1H) ；2. 08 (m, CH2,1H).6. 2.「a Tc (CQ), ( κ 3-pz (CE1) ,NH (CHj ,NHj 1 + (17b)的合成將100 μ 1 化合物 I(Pz(CH2)2NH(CH2)2NH2)IO-4M 的溶液加入到 Iml 的 [99mTc (OH)3 (CO) 3] + (l-2mCi)的磷酸鹽緩沖液溶液中。將溶液于100°C孵育30分鐘，并然后 通過HPLC分析。該放射化學試劑的純度為>90%。6. 3.「Re (CO) ,(κ1- (4~ 羧酸)dz (CHj ,NH (CHj ,NHj ] Br (18a)的合成將IOOmg (0. 130mmol)的(NEt4) 2 [ReBr3 (CO) 3]與 26mg (0. 130mmol)的化合物 7 在 水中混和，并將溶液回流2小時。然后真空減少體積，并將混合物于4°C放置直至有白色沉 淀產(chǎn)生。由 1H-WR 測定產(chǎn)率> 90 %1H-WR(D2O) δ 8. 22 (s, H(3)pz, 1H) ；8· 20 (s，H(5)pz，1H) ；6. 62 (s，寬廣，NH，1H)；
4.94 (s，寬廣，NH2，1H) ；4. 43 (m, CH2,1 H) ；4.25 (m，CH2,1 H) ；4· 05 (s，寬廣，NH2,1H) ； 3.52 (m， CH2,1H) ；2. 92 (m, CH2,1H) ；2. 76 (m, CH2, 2H) ；2. 53 (m, CH2,1H) ；2. 14 (m, CH2,1H) ·IV (KBr) (v/cnT1) :2010(C = 0) ； 1885 (C = 0) ； 1690 (C = 0 配體(Iigando)6. 4.「Re (CO) ,(κ a~3, 5~Me,pz (CE1) ,N (CE1), (glygly) NHj 1 Br (19a)的合成將IOOmg (0. 130mmol)的(NEt4) 2 [ReBr3 (CO) 3]與 53mg (0. 130mmol)的配體 13 在水 中混和，并將溶液回流過夜。由1H-NMR 測定產(chǎn)率100%1H-WR(D2O) δ 6. 04(s,H(4)pz, 1H) ；5. 05 (s，br，NH2,1H) ；4· 36-4. 31 (m，CH2,1H)； 4. 16-4. 04 (m, CH2,1 H) ；3. 88 (s, NHCH2CO, 2H) ；3.84 (s，NHCH2CO, 2H) ；3.65 (s，br, NH2,1 H)； 3. 53 (m, CH2,1H) ；3.30 (m，CH2, 2H) ；2.86 (m，CH2,1 H) ；2.74 (m，CH2, 2H) ；2.57 (m，CH2,1 H)； 2. 40 (m, CH2,1H) ；2. 31 (m, CH2,1 H) ；2. 73 (s, CH3, 3H) ；2. 16 (s, CH3, 3H) ；2. 10 (m, CH2,1 H)； 1. 95 (m, CH2,1H)。 6. 5.「—Tc (CO),(k3-3, 5~Me,pz (CHz),N(CH2)。(rIyrIy)NH,) 1^1%)的合成將100ml 的 13 (I(T3M)溶液加入到 Iml 的["mTc (OH) 3 (CO) 3] + (l_2mCi)的磷酸鹽緩 沖液溶液中。將該溶液于100°c孵育1小時，并然后通過HPLC分析。放射化學試劑的純度 為> 90%。7.吡唑基_氨基膦的合成(圖7)本發(fā)明的吡唑基-氨基膦的制備包括1-(2_氨基乙基)吡唑與(2-溴乙基)磷酸 二乙酯的烷基化作用，得到吡唑-氨基-磷酸酯衍生物(化合物a)。該化合物與氫化鋰鋁 (LAH)還原得到伯膦(化合物b)，然后通過用甲醛的酸性介質(zhì)處理將其轉(zhuǎn)化為最終的螯合 劑(化合物 c) (Katti 等人，J. Am. Chem. Soc. 122,1554(2000)。8.吡唑基-硫醚膦的合成(圖8)本發(fā)明的吡唑基-硫醚膦的制備包括1-(2_巰基乙基)吡唑與(2-溴乙基)磷酸 二乙酯的反應，得到吡唑_硫醚_磷酸酯衍生物(化合物d) (Katti等人，Angew. Chem. Int.Ed. 38，2020 (1999)。用氫化鋰鋁使化合物d還原，隨后將生成的伯膦(化合物e)用甲醛的 酸性介質(zhì)處理，得到最終的螯合劑(化合物f)。文獻[l]a)Alberto 等人 WO 洲/幼別8，b) Alberto 等人，WO 00/50086，c) Alberto 等人，WO 01/00637d) Alberto 等人，US 6，344，178B1[2]a)Hilger 等人，US 6，488，909B1.[3] a) Alberto 等人，Polyhedron 17(1998) 1303b) Alberto 等人，J. Med. Chem. 41 (1998) 4429c) Alberto 等人，J.Am. Chem. Soc. 121(1999)6076d) Alberto 等人，J. Nuc 1. Med. 40(1999) 1913e) Schibli 等人，Nucl. Med. and Biol. 26 (1999) 711f) Alberto 等人，Bioconjugate Chem. 11 (2000) 414g) Alberto 等人，Bioconjugate Chem. 11 (2000) 345h) Alberto 等人，Chem. Eu r. Journal 7(2001) 1868i) Alberto 等人，Angew. Chem. Int. Ed. 40(2001)3062j) Alberto 等人，Bioconjugate Chem. 13 (2002) 750.[4] a) Santos 等人，J. Am. Chem. Soc. 122 (2000) 11240b) Santos 等人，Inorg. Chem. 40 (2001) 5147c) Santos 等人，J. Chem. Soc. Dalton Trans. (2002) 4714.[5] a) Valliant 等人，Inorg Chem. Commun. 41(2002)628b) Valliant 等人，Inorg Chem. 41 (2002)6417[6] a) Sorrell 等人，Inorg. Chem. 22(1983) 1883b) Driessen 等人 J. Chem. Soc. Dalton Trans. (1992) 481c) Parkin 等人，Inorg. Chem. 35 (1996) 2415d)Ballesteros ^A, Bioorganic and Medicinal Chem. 7(1999)517.e) Bouwman 等人，Inorg. Chim. Acta (2000) 183[7]Holzer 等人，J. Heterocyclic Chem. 130(1993)865
3權(quán)利要求
下列通式的螯合劑其中m為0或1；X為NR4；Y為SR5、NHR5或P(R5)2；R1和R3相同或不同，并選自H、烷基或芳基；R2為COOH、NHR6或(CH2)nCOOR6；R4為(CH2)nCOOR6或(CH2)nOR6；R5為H、烷基、芳基、(CH2)nCOOR6或(CH2)nOR6；R6為H、生物分子、烷基或芳基；和n為1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。F2009102081676C00011.tif
2.根據(jù)權(quán)利要求1的螯合劑，其中該烷基為C1烷基、C2烷基、C3烷基、C4烷基、C5烷基 或(6烷基。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的螯合劑，其中該烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁 基、仲丁基、叔丁基、正戊基、異戊基、新戊基、正己基、異己基(2-甲基戊基)、新己基(2， 2_ 二甲基丁基)、3_甲基戊基、2，3_ 二甲基丁基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的螯合劑，其中該芳基為單環(huán)的，或多環(huán)的，Cltl-C18，并且該芳基任選 被一個或多個選自烷基、羧基、氧代、氨基、烷氧基和醛基的基團所取代。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的螯合劑，其中該芳基為苯基或芐基。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的螯合劑，其中η為2、3、4、5或6。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的螯合劑，該試劑為下列通式的吡唑基_多胺 其中R1, R2, R3> R4和R5如權(quán)利要求1中所定義。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的螯合劑，該試劑為下列通式的吡唑基-氨基膦 其中R1, R2, R3> R4和R5如權(quán)利要求1中所定義。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的螯合劑，其中X為NR4和Y為NHR5,R6為H、C1烷基、C2烷基、C3烷 基、C4烷基、C5烷基或C6烷基、苯基、芐基或生物分子。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的螯合劑，其中X為NR4,Y為P (R5)2，R6為H、C1烷基、C2烷基、C3 烷基、C4烷基、C5烷基或C6烷基、苯基、芐基或生物分子。
11.根據(jù)權(quán)利要求1至8任一項的螯合劑，其中R6為生物分子。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的螯合劑，其中該生物分子選自氨基酸、肽、蛋白質(zhì)、寡核苷酸、多 核苷酸和糖。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的螯合劑，其中該生物分子選自抗體和腫瘤受體的配體。
14.根據(jù)權(quán)利要求12的螯合劑，其中該生物分子選自CCK、硫代葡萄糖、葡糖胺、促生 長素抑制素、神經(jīng)降壓素、鈴蟾肽、膜聯(lián)蛋白、白細胞介素、生長因子、類固醇激素和結(jié)合至 GPIIb/IIIa受體的分子。
15.根據(jù)權(quán)利要求12的螯合劑，其中該生物分子選自葡萄糖、硫代葡萄糖和神經(jīng)遞質(zhì)。
16.根據(jù)權(quán)利要求12的螯合劑，其中該生物分子為酪氨酸激酶活性的抑制劑。
17.根據(jù)權(quán)利要求12的螯合劑，其中該生物分子選自苯并噻喃酮、苯胺基鄰苯二甲酰 亞胺、喹唑啉、吡啶并嘧啶和吡咯并嘧啶。
18.根據(jù)權(quán)利要求1的螯合劑，該試劑為下式的化合物
全文摘要
本發(fā)明涉及用于錸和锝的三羰基絡合物的雙功能三齒的含吡唑基配體。本發(fā)明涉及通式(I)的螯合劑，其中m為0或1；X為NR4或S；Y為SR5、NHR5或P(R5)2；R1和R3相同或不同，并選自H、烷基或芳基；R2為H、COOH、NHR6或(CH2)nCOOR6；R4為H、烷基、芳基、(CH2)nCOOR6或(CH2)nOR6；R5為H、烷基、芳基、(CH2)nCOOR6或(CH2)nOR6；R6為H、烷基或芳基；n為1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；和當R1＝R3＝CH3時，R2、R4和R5三個不都為H。本發(fā)明進一步涉及當使用該螯合劑時用于制備放射性標記的生物分子的方法和試劑盒。
文檔編號A61K51/10GK101928327SQ20091020816
公開日2010年12月29日 申請日期2004年4月15日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月15日
發(fā)明者喬奧·D·加蘭巴科雷亞, 伊莎貝爾·R·桑托斯, 安東尼奧·M·羅查保羅, 拉特·維托爾, 蘇薩娜·阿爾維斯 申請人:馬林克羅特公司