專利名稱：殼聚糖修飾順磁性金屬離子磁共振成像對比劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及磁共振成像技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種新型磁共振成像對比劑的制備方法。
背景技術(shù)：
磁共振成像(Magnetic Resonance Imaging, MRI)是一種利用生物體不同組織在外磁場影 響下產(chǎn)生不同磁共振信號來成像的醫(yī)學(xué)影像技術(shù)。MRI具有無電離輻射、可實現(xiàn)多核與多參 數(shù)成像、無需改變體位便可實行任意方位層面的掃描、較高的空間分辨率和對比度而無骨質(zhì) 偽影、能反映被檢組織水質(zhì)子周圍環(huán)境并獲取相關(guān)生理生化信息等優(yōu)點，成為臨床最有效的 診斷手段之一。為確保臨床診斷的準(zhǔn)確性，30%以上的MRI需要磁共振成像對比劑(簡稱 對比劑或稱造影劑)來提高圖像對比度，全球含釓金屬離子對比劑(簡稱釓基對比劑)年銷 量在30噸以上，系高附加值醫(yī)藥產(chǎn)品。優(yōu)良的對比劑應(yīng)具有i)足夠的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性；ii)自身 低毒性；iii)馳豫效能高；iv)對組織器官有選擇性(靶向性)；V)在體內(nèi)有適當(dāng)?shù)拇媪魰r間且易 于從體內(nèi)排出。釓基對比劑在磁共振成像對比劑中占據(jù)著重要的地位，相應(yīng)的配體有二乙 三胺五乙酸(DTPA); 1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二垸；1,4,7，10-四乙酸(DOTA)和乙二胺四乙酸
(EDTA)及它們的衍生物。已經(jīng)進入臨床應(yīng)用的有Gd—DTPA (馬根維顯，Magnevist)， Gd—DTPA—BMA， Gd—D03A—HP (禮替醇，Prohance)， Gd—DOTA (Dotarem)。然而， 自1987年來發(fā)現(xiàn)釓基對比劑會對腎小管造成直接損害，近年來證實傳統(tǒng)的釓基成像對比劑會 引起腎細胞纖維化。因此，怎樣避免附加毒副作用是未來釓基對比劑的研發(fā)方向。目前國際 上的發(fā)展趨勢還是在保障對比劑分子穩(wěn)定、低毒、高弛豫率的基礎(chǔ)上，追求針對特定組織及 器官設(shè)計合成選擇性高、靶向性強的對比劑分子，包括對釓基磁共振成像對比劑的化學(xué)結(jié)構(gòu) 修飾及探索新型超順磁性(基于Fe304)對比劑和水溶性順磁性對比劑。這些化合物可經(jīng)過白 蛋白、葡聚糖、聚苯乙烯、單克隆抗體等的進一步化學(xué)物理修飾，增強靶向性。但由于大多 處于研發(fā)階段，沒有最后的定論，同時注意到尋求具有更低毒副作用的對比劑也是今后研究 的方向。
作為天然多糖的一種，殼聚糖屬氨基直鏈多糖，屬純天然豐產(chǎn)可再生綠色資源。選擇殼 聚糖來修飾對比劑是因為其具有很多優(yōu)良特性，如i)自身零毒性、良好的水溶性以及與重 金屬離子的親和特性；ii)與多胺多酸對比劑類化合物容易通過共價鍵結(jié)合，結(jié)合后利用殼聚 糖的長鏈纏繞特性將螯合的順磁性金屬離子包在核心，同時增加弛豫效率；iii)進入體內(nèi)后 殼聚糖會降解，但需要一定時間，保證對比劑的金屬離子在體內(nèi)存留時處于包裹狀態(tài)不外泄;W)殼聚糖聚合度在12 6時與人體血清蛋白等運送蛋白的結(jié)合能力最強，可在成像測定結(jié) 束后將未完全降解的對比劑代謝排出體外；v)糖類化合物對不同器官或病灶器官會有不同的 親和能力，以此提高對比劑的靶向性；vi)殼聚糖自身還能提高生命體的免疫力，并具有一 定的抗癌作用，有望增強協(xié)同作用；vii)殼聚糖易于加工成微膠囊，因此在劑型制備方面也 有著優(yōu)勢。這些特點很符合作為MRI對比劑的先決條件。另外從目前對葡聚糖和其他糖類化 合物的造影對比性能研究來看，殼聚糖極其有望成為一種新型、性能優(yōu)良的MRI對比劑。
本方法將通過多胺多酸化合物的酸酐與殼聚糖氨基通過共價鍵結(jié)合起來，再絡(luò)合稀土或 過渡金屬等順磁性離子，如釓、鐵、錳等，使之成為具有一定靶向性和適宜體內(nèi)滯留時間、 弛豫效率高于馬根維顯、毒性小的新型磁共振成像對比劑。其優(yōu)勢還在于i)酰胺鍵鍵聯(lián) 的殼聚糖自身無毒性，可減少藥物申報程序環(huán)節(jié)，容易上市；ii)糖類分子對不同器官組織和 病灶有識別作用，提高相應(yīng)的選擇性；iii)用馬根維顯l/4至2/3的含釓量就可達到同樣的成 像對比效果，可進一步減少金屬離子在體內(nèi)可能引起毒性的風(fēng)險；iv)加工制備工藝簡單， 設(shè)備要求低，易于加工生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了降低傳統(tǒng)釓基對比劑對器官產(chǎn)生的毒副作用，提供一種潛在新功能 核磁共振成像對比劑及其制備方法，在提高弛豫效率、延長體內(nèi)弛豫時間的同時改良對不同 器官組織或病灶的選擇性，并降低毒副作用。
本發(fā)明殼聚糖修飾順磁性金屬離子磁共振成像對比劑的制備方法如下-(l)在反應(yīng)容器中，加入一定質(zhì)量的多胺多羧酸固體，然后再分別加入一定體積的無水乙 酸酐，其中所述的多胺多羧酸可以是二乙三胺五乙酸(DTPA)或者乙二胺四乙酸(EDTA)，其中 多胺多羧酸和無水乙酸酐的比值(質(zhì)量:體積)為1:1~3，再加入一定體積的無水吡啶作為催化 劑，通干燥氮氣保護，在55 60'C下攪拌反應(yīng)24h后抽濾，分別用無水乙酸酐、無水N,N，-二甲基甲酰胺(DMF)和無水乙醚洗滌，得到多胺多羧酸的相應(yīng)酸酐，所得到的多胺多羧酸的 酸酐是二乙三胺五乙酸酸酐(DTPAA)或者乙二胺四乙酸酸酐(EDTAA)。
(2)在無水N,N'-二甲基甲酰胺(DMF)或二甲基亞砜(DMSO)中加入水溶性殼聚糖或窄分子 量分布水溶性殼聚糖，再加入4-二甲氨基吡啶或三乙胺或吡啶作為催化劑，常溫攪拌下加入 步驟(l)中制備得到的多胺多羧酸酸酐，其中殼聚糖與多胺多羧酸酸酐的摩爾比為1:1 5，于 室溫下攪拌36 72h，冰浴冷卻后加入蒸餾水繼續(xù)攪拌12 120h。真空濃縮至小體積，加入 無水乙醇沉析出淡黃色固體，真空干燥。
4(3)稱取Sephadex G-25型凝膠，活化后裝柱。將步驟(2)中所得到的固體溶解于少量蒸餾 水中，其中固體與蒸餾水比值(質(zhì)量:體積)為1:2 100，上柱，以蒸餾水為洗脫溶劑，0.1%茚 三酮正丁醇溶液顯色，用紫外分析儀進行檢測(檢測波長為254nm)，在洗脫的過程中出現(xiàn)兩 個洗脫峰，配體的洗脫峰首先出柱，將其收集后真空濃縮至小體積，冷卻后加入無水乙醇得 淡黃色沉淀，過濾，真空干燥得配體粉末。 (4)稱取步驟(3:i中所得到的配體粉末溶解于蒸餾水中，其中配體粉末與蒸餾水比值(質(zhì)量:體積) 為1:5 20，攪拌下加入金屬無機鹽，配體與金屬無機鹽的摩爾比為1:1 5，于室溫下持續(xù) 攪拌2 24h，將溶液真空濃縮，冷卻后加入無水乙醇沉淀，洗滌過濾，干燥后得到磁共振成 像對比劑的固體粉末0.3 3.0g。其中所述的金屬無機鹽為所有順磁性稀土及過渡金屬離子的 鹽類，包括含不同結(jié)晶水的鹽酸鹽、硝酸鹽、乙酸鹽、硫酸鹽或高氯酸鹽，優(yōu)選Gc^+的鹽類， M^+的鹽類、F^+的鹽類。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下顯著優(yōu)點
l)在常溫下反應(yīng)，反應(yīng)操作與所需設(shè)備簡單，成本低廉，易于實現(xiàn)規(guī)模化生產(chǎn)；2)產(chǎn)品水溶 性好，弛豫率為10 14Lmmor^s—、是Gd-DTPA弛豫率的1 3倍；3)對肝臟和腎臟組織有 著靶向性的選擇，可有效的提高肝臟和腎臟的造影對比的清晰度；4)與馬根維顯對照對比的 小鼠體內(nèi)試驗結(jié)果表明，停藥后30天釓離子在肝和腎臟的殘留可降低2/5 2/3; 5)殼聚糖是 天然豐產(chǎn)可再生綠色資源，具有良好的生物相容性和降解性，自身無毒無害。
具體實施實例 實例l
水溶性殼聚糖的制備方法如下稱取一定質(zhì)量的高分子量殼聚糖于三口燒瓶中，加入一
定體積的體積分?jǐn)?shù)為0.5%的乙酸溶液，其中殼聚糖與乙酸的比值(質(zhì)量:體積)為1:50，在攪拌 下,加入一定體積的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10。/。的雙氧7jC,其中殼聚糖與雙氧水的比值(質(zhì)量:體積)為1:1， 攪拌約10min。將所得到的溶液進行微波處理，設(shè)置微波參數(shù)(微波時間:30min,微波溫度:60 'C)，微波結(jié)束后，靜置冷卻，調(diào)節(jié)pH至中性。再將所得到的溶液真空濃縮至一定體積，加 入乙醇沉析出固體，再用乙醚洗滌，真空干燥，即得到平均分子量為1980(聚合度為11，分 子量分布指數(shù)(DPI或Mw/M )= 1.9)的水溶性殼聚糖。
(l)在三頸燒瓶中，加入一定質(zhì)量的二乙三胺五乙酸(DTPA)固體，然后加入一定體積的無 水乙酸酐，其中DTPA與無水乙酸酐的比值(質(zhì)量:體積)為1:1,再加入一定體積的無水吡瞎作 為催化劑，通干燥氮氣保護，在55 6(TC下攪拌反應(yīng)24h后抽濾，分別用無水乙酸酐、無水 N,N，-二甲基甲酰胺(DMF)和無水乙醚洗滌，得到多胺多羧酸的酸酐DTPAA的白色固體
5粉末。(2)在無水N,N'-二甲基甲酰胺(DMF)中加入步驟(1)中制備得到的殼聚糖，再加入4-二 甲氨基吡啶作為催化劑，常溫攪拌下加入步驟(l)中制備得到的多胺多羧酸酸酐，其中殼聚糖 與多胺多酸酸酐的摩爾比為1:1，于室溫下攪拌36h，冰浴冷卻后加入蒸餾水繼續(xù)攪拌12h。 真空濃縮至小體積，加入無水乙醇沉析出淡黃色固體，真空干燥。(3)稱取Sephadex G-25型 凝膠，活化后裝柱。將步驟(2)中所得到的固體溶解于少量蒸餾水中，其中固體與蒸餾水比值 (質(zhì)量:體積)為1:2，上柱，以蒸餾水為洗脫溶劑，0.1%茚三酮正丁醇溶液顯色，用紫外分析 儀進行檢測(波長為254nm),在洗脫的過程中出現(xiàn)兩個洗脫峰，配體的洗脫峰首先出柱，將 其收集后真空濃縮至小體積，冷卻后加入無水乙醇得淡黃色沉淀，過濾，真空干燥得配體粉 末。(4)稱取步驟(3)中所得到的配體粉末溶解于蒸餾水中，其中配體粉末與蒸餾水比值(質(zhì)量: 體積)為1:5，攪拌下加入金屬無機鹽GdCl3，6H20，其中配體與GdCl3*6H20的摩爾比為1:1， 于室溫下持續(xù)攪拌2h,將溶液真空濃縮，冷卻后加入無水乙醇沉淀，洗滌過濾，干燥后得到 磁共振成像對比劑的固體粉末l.Og左右。 實例2
(l)在三頸燒瓶中，加入一定質(zhì)量的二乙三胺五乙酸(DTPA)固體，然后加入一定體積的 無水乙酸酐，其中DTPA與無水乙酸酐的比值(質(zhì)量:體積)為1:3，再加入一定體積無水吡咬作 為催化劑，通干燥氮氣保護，在55 6(TC下攪拌反應(yīng)24h后抽濾，分別用無水乙酸酐、無水 N,N'-二甲基甲酰胺(DMF)和無水乙醚洗滌，得到多胺多羧酸的酸酐DTPAA的白色固體粉末。 (2)在無水N,N'-二甲基甲酰胺(DMF)中加入平均分子量為1460(聚合度為8，分子量分布指數(shù) (DPI或Mw/M"^ 1.06)的水溶性殼聚糖(該原料由海南省精細化工重點實驗室提供，制備方法 同實例l)，再加入4-二甲氨基吡啶作為催化劑，常溫攪拌下加入歩驟(l)中制備得到的多胺多 羧酸酸酐，其中殼聚糖與多胺多酸酸酐DTPAA的摩爾比為1:5，于室溫下攪拌72 h，冰浴冷 卻后加入蒸餾水繼續(xù)攪拌120h。真空濃縮至小體積，加入無水乙醇沉析出淡黃色固體，真空 干燥。(3)稱取Sephadex G-25型凝膠，活化后裝柱。將步驟(2)中所得到的固體溶解于少量蒸 餾水中，其中固體與蒸餾水比值(質(zhì)量:體積)為1:100，上柱，以蒸餾水為洗脫溶劑，0.1%茚 三酮正丁醇溶液顯色，用紫外分析儀進行檢測(波長為254nm)，在洗脫的過程中出現(xiàn)兩個洗 脫峰，配體的洗脫峰首先出柱，將其收集后真空濃縮至小體積，冷卻后加入無水乙醇得淡黃 色沉淀，過濾，真空干燥得配體粉末。(4)稱取步驟(3)中所得到的配體粉末溶解于蒸餾水中， 其中配體粉末與蒸餾水比值(質(zhì)量:體積)為1:20,攪拌下加入金屬無機鹽MnCl2*4H20，其中配 體與MnC1^4H20的摩爾比為1:5，于室溫下持續(xù)攪拌24h，將溶液真空濃縮，冷卻后加入無 水乙醇沉淀，洗滌過濾，干燥后得到磁共振成像對比劑的固體粉末l.Og。實例3
(l)在三頸燒瓶中，加入二乙三胺五乙酸(DTPA)固體，然后加入一定體積的無水乙酸酐， 其中DTPA與無水乙酸酐的比值(質(zhì)量:體積)為1:1，再加入一定體積的無水吡啶作為催化劑， 通干燥氮氣保護，在55 60'C下攪拌反應(yīng)24h后抽濾，分別用無水乙酸酐、無水N，N，-二甲 基甲酰胺(DMF)和無水乙醚洗滌，得到多胺多羧酸的酸酐DTPAA的白色固體粉末。(2)在無 水二甲基亞砜(DMSO)中加入平均分子量為1080(聚合度為6，分子量分布指數(shù)(DPI或Mw/M"一 1.03)的水溶性殼聚糖(該原料由海南省精細化工重點實驗室提供，制備方法同實例1)，再加入 三乙胺作為催化劑，常溫攪拌下加入步驟(l)中制備得到的多胺多羧酸酸酐，其中殼聚糖與多 胺多酸酸酐DTPAA的摩爾比為1:1，于室溫下攪拌36h,冰浴冷卻后加入蒸餾水繼續(xù)攪拌12 h。真空濃縮至小體積，加入無水乙醇沉析出淡黃色固體，真空干燥。(3)稱取Sephadex G-25 型凝膠，活化后裝柱。將步驟(2)中所得到的固體溶解于少量蒸餾水中，其中固體與蒸餾水比 值(質(zhì)量:體積)為1:2,上柱，以蒸餾水為洗脫溶劑，0.1%茚三酮正丁醇溶液顯色，用紫外分 析儀進行檢測(波長為254nm)，在洗脫的過程中出現(xiàn)兩個洗脫峰，配體的洗脫峰首先出柱， 將其收集后真空濃縮至小體積，冷卻后加入無水乙醇得淡黃色沉淀，過濾，真空千燥得配體 粉末。(4)稱取步驟(3)中所得到的配體粉末溶解于蒸餾水中，其中配體粉末與蒸餾水比值(質(zhì) 量:體積)為1:5，攪拌下加入金屬無機鹽GdCl3.6H20，其中配體與GdCl3.6H20的摩爾比為1:1， 于室溫下持續(xù)攪拌2h，將溶液真空濃縮，冷卻后加入無水乙醇沉淀，洗滌過濾，千燥后得到 磁共振成像對比劑的固體粉末0.5g左右。 實例4
(l)在三頸燒瓶中，加入乙二胺四乙酸(EDTA)固體，然后加入一定體積的無水乙酸酐， 其中EDTA與無水乙酸酐的比值(質(zhì)量:體積)為1:3，再加入一定體積的無水吡啶作為催化劑， 通干燥氮氣保護，在55 60'C下攪拌反應(yīng)24h后抽濾，分別用無水乙酸酐、無水N，N，-二甲 基甲酰胺(DMF)和無水乙醚洗滌，得到多胺多羧酸的酸酐EDTAA的白色固體粉末。(2)在無 水N,N'-二甲基甲酰胺(DMF)中加入平均分子量為1080(聚合度為6，分子量分布指數(shù)(DPI或 MUM。"1.03)的水溶性殼聚糖(該原料由海南省精細化工重點實驗室提供，制備方法同實例1)， 再加入4-二甲氨基吡啶作為催化劑，常溫攪拌下加入步驟(l)中制備得到的多胺多羧酸酸酐， 其中殼聚糖與多胺多酸酸酐EDTAA的摩爾比為1:5，于室溫下攪拌72 h，冰浴冷卻后加入蒸 餾水繼續(xù)攪拌120 h。真空濃縮至小體積，加入無水乙醇沉析出淡黃色固體，真空干燥。(3) 稱取Sephadex G-25型凝膠，活化后裝柱。將步驟(2)中所得到的固體用少量蒸餾水溶解，其 中固體與蒸餾水比值(質(zhì)量:體積)為1:2，上柱，以蒸餾水為洗脫溶劑，0.1%茚三酮正丁醇溶
7液顯色，用紫外分析儀進行檢測(波長為254nm)，在洗脫的過程中出現(xiàn)兩個洗脫峰，配體的 洗脫峰首先出柱，將其收集后真空濃縮至小體積，冷卻后加入無水乙醇得淡黃色沉淀，過濾， 真空干燥得配體粉末。(4)稱取步驟(3)中所得到的配體粉末溶解于蒸餾水中，其中配體粉末與 蒸餾水比值(質(zhì)量:體積)為1:20，攪拌下加入金屬無機鹽GdCl3*6H20，其中配體與GdCl3*6H20 的摩爾比為1:5，于室溫下持續(xù)攪拌24h，將溶液真空濃縮，冷卻后加入無水乙醇沉淀，洗錄 過濾，干燥后得到磁共振成像對比劑的固體粉末1.5g左右。 實例5
(l)在三頸燒瓶中，加入乙二胺四乙酸(EDTA)固體，然后加入一定體積的無水乙酸酐，其 中EDTA與無水乙酸酐的比值(質(zhì)量:體積)為1:3，再加入一定體積的無水吡啶作為催化劑， 通干燥氮氣保護，在55 6(TC下攪拌反應(yīng)24h后抽濾，分別用無水乙酸酐、無水N，N'-二甲 基甲酰胺(DMF)和無水乙醚洗滌，得到多胺多羧酸的酸酐EDTAA的白色固體粉末。(2)在無 水N，N'-二甲基甲酰胺(DMF)中加入平均分子量為1460(聚合度為8，分子量分布指數(shù)(DPI或
Mw/Mn"1.06)的水溶性殼聚糖(該原料由海南省精細化工重點實驗室提供,制備方法同實例l)，
再加入吡啶作為催化劑，常溫攪拌下加入步驟(l)中制備得到的多胺多羧酸酸酐，其中殼聚糖 與多胺多酸酸酐EDTAA的摩爾比為1:5，于室溫下攪拌72h，冰浴冷卻后加入蒸餾水繼續(xù)攪 拌120h。真空濃縮至小體積，加入無水乙醇沉析出淡黃色固體，真空干燥。(3)稱取Sephadex G-25型凝膠，活化后裝柱。將步驟P)中所得到的固體溶解于少量蒸餾水中，其中固體與蒸餾 水比值(質(zhì)量:體積)為1:100，上柱，以蒸餾水為洗脫溶劑，0.1%茚三酮正丁醇溶液顯色，用 紫外分析儀進行檢測(波長為254nm)，在洗脫的過程中出現(xiàn)兩個洗脫峰，配體的洗脫峰首先 出柱，將其收集后真空濃縮至小體積，冷卻后加入無水乙醇得淡黃色沉淀，過濾，真空干燥 得配體粉末。(4)稱取步驟(3)中所得到的配體粉末溶解于蒸餾水中，其中配體粉末與蒸餾水比 值(質(zhì)量:體積)為1:20，攪拌下加入金屬無機鹽MnCl2*4H20，其中配體與MnCl2 4H20的摩爾 比為1:5，于室溫下持續(xù)攪拌24h，將溶液真空濃縮，冷卻后加入無水乙醇沉淀，洗滌過濾， 干燥后得到磁共振成像對比劑的固體粉末1.5g左右。
實例6
(l)在三頸燒瓶中，加入二乙三胺五乙酸(DTPA)固體，然后加入一定體積的無水乙酸酐， 其中DTPA與無水乙酸酐的比值(質(zhì)量:體積)為1:1，再加入一定體積的無水吡啶作為催化劑， 通干燥氮氣保護，在55 60。C下攪拌反應(yīng)24 h后抽濾，分別用無水乙酸酐、無水N,N'-二甲 基甲酰胺(DMF)和無水乙醚洗滌，得到多胺多羧酸的酸酐DTPAA的白色固體粉末。(2)在無 水二甲基亞砜(DMSO)中加入平均分子量為1980(聚合度為11，分子量分布指數(shù)(DPI或Mw/M""1.08)的水溶性殼聚糖(該原料由海南省精細化工重點實驗室提供，制備方法同實例l)， 再加入4-二甲氨基吡啶作為催化劑，常溫攪拌下加入步驟(l)中制備得到的多胺多羧酸酸酐， 其中殼聚糖與多胺多酸酸酐DTPAA的摩爾比為1:1，于室溫下攪拌36h，冰浴冷卻后加入蒸 餾水繼續(xù)攪拌12h。真空濃縮至小體積，加入無水乙醇沉析出淡黃色固體，真空干燥。(3)稱 取Sephadex G-25型凝膠，活化后裝柱。將步驟(2)中所得到的固體溶解于少量蒸餾水中，其 中固體與蒸餾水比值(質(zhì)量:體積)為1:2，上柱，以蒸餾水為洗脫溶劑，0.1%茚三酮正丁醇溶 液顯色，用紫外分析儀進行檢測(波長為254nm)，在洗脫的過程中出現(xiàn)兩個洗脫峰，配體的 洗脫峰首先出柱，將其收集后真空濃縮至小體積，冷卻后加入無水乙醇得淡黃色沉淀，過濾， 真空干燥得配體粉末。(4)稱取步驟(3)中所得到的配體粉末溶解于蒸餾水中，其中配體粉末與 蒸餾水比值(質(zhì)量:體積)為1:5,攪拌下加入金屬無機鹽GdCl3.6H20，其中配體與GdCl3.6H20 的摩爾比為l:l，于室溫下持續(xù)攪拌2h，將溶液真空濃縮，冷卻后加入無水乙醇沉淀，洗滌 過濾，干燥后得到磁共振成像對比劑的固體粉末1.2g左右。 實例7
(l)稱取一定質(zhì)量的高分子量殼聚糖于三口燒瓶中，加入一定體積的體積分?jǐn)?shù)為0.5%的 乙酸溶液，其中殼聚糖與乙酸的比值(質(zhì)量:體積)為1:50,在攪拌下，加入一定體積的10%雙 氧7jC，其中殼聚糖與雙氧水的比值(質(zhì)量:體積)為1:1，攪拌約10min。將所得到的溶液進行微 波處理，設(shè)置微波參數(shù)(微波時間:30min，微波溫度:6(TC),微波結(jié)束后，靜置冷卻，調(diào)節(jié)pH 至中性。再將所得到的溶液真空濃縮至小體積，加入乙醇沉析出固體，再用乙醚洗滌，真空 干燥，即得到平均分子量為1980(聚合度為11，分子量分布指數(shù)(DPI或Mw/M )= 1.9)的水溶 性殼聚糖。(2)在三頸燒瓶中，加入乙二胺四乙酸(EDTA)固體，然后加入一定體積的無水乙酸 酐，其中EDTA與無水乙酸酐的比值(質(zhì)量:體積)為1:1,再加入一定體積的無水吡啶作為催 化劑，通干燥氮氣保護，在55 60'C下攪拌反應(yīng)24h后抽濾，分別用無水乙酸酐、無水N,N，-二甲基甲酰胺(DMF)和無水乙醚洗滌，得到多胺多羧酸的酸酐EDTAA的白色固體粉末。(3) 在無水N，N'-二甲基甲酰胺(DMF)中加入步驟(1)中制備得到的殼聚糖，再加入4-二甲氨基吡 啶作為催化劑，常溫攪拌下加入步驟(2)中制備得到的多胺多羧酸酸酐，其中殼聚糖與多胺多 酸酸酐EDTAA的摩爾比為1:1，于室溫下攪拌36h，冰浴冷卻后加入蒸餾水繼續(xù)攪拌12h。 真空濃縮至小體積，加入無水乙醇沉析出淡黃色固體，真空干燥。(4)稱取Sephadex G-25型 凝膠，活化后裝柱。將步驟(3)中所得到的固體溶解于少量蒸餾水中，其中固體與蒸餾水比值 (質(zhì)量:體積)為1:100,上柱，以蒸餾水為洗脫溶劑，0.1%茚三酮正丁醇溶液顯色，用紫外分 析儀進行檢測(波長為254nm)，在洗脫的過程中出現(xiàn)兩個洗脫峰，配體的洗脫峰首先出柱，
9將其收集后真空濃縮至小體積，冷卻后加入無水乙醇得淡黃色沉淀，過濾，真空干燥得配體 粉末。(5)稱取步驟(4)中所得到的配體粉末溶解于蒸餾水中，其中配體粉末與蒸餾水比值(質(zhì) 量:體積)為1:5，攪拌下加入金屬無機鹽0(103.6&0，其中配體與0(103.61120的摩爾比為1:1， 于室溫下持續(xù)攪拌2h，將溶液真空濃縮，冷卻后加入無水乙醇沉淀，洗滌過濾，干燥后得到 磁共振成像對比劑的固體粉末l.Og左右。
權(quán)利要求
1、殼聚糖修飾順磁性金屬離子磁共振成像對比劑的制備方法，其特征在于按以下步驟進行(1)在反應(yīng)容器中，加入一定質(zhì)量的多胺多羧酸固體和一定體積的無水乙酸酐，再加入無水吡啶作為催化劑，通干燥氮氣保護，在55～60℃下攪拌反應(yīng)24h后抽濾，分別用無水乙酸酐、無水N，N’-二甲基甲酰胺和無水乙醚洗滌，得到多胺多羧酸的相應(yīng)酸酐，其中多胺多羧酸和無水乙酸酐的比值以質(zhì)量與體積比計為1∶1～3；(2)在無水N，N’-二甲基甲酰胺或二甲基亞砜中加入水溶性殼聚糖或窄分子量分布水溶性殼聚糖，再加入4-二甲氨基吡啶或三乙胺或吡啶作為催化劑，常溫攪拌下加入步驟(1)中制備得到的多胺多羧酸酸酐，其中殼聚糖與多胺多羧酸酸酐的摩爾比為1∶1～5，于室溫下攪拌36～72h，冰浴冷卻后加入蒸餾水繼續(xù)攪拌12～120h，真空濃縮至小體積，加入無水乙醇沉析出淡黃色固體，真空干燥；(3)稱取Sephadex G-25型凝膠，活化后裝柱，將步驟(2)中所得到的固體溶解于少量蒸餾水中，其中固體與蒸餾水比值以質(zhì)量與體積比計為1∶2～100，上柱，以蒸餾水為洗脫溶劑，0.1％茚三酮正丁醇溶液顯色，用紫外分析儀進行檢測，檢測波長為254nm，在洗脫的過程中出現(xiàn)兩個洗脫峰，配體的洗脫峰首先出柱，將其收集后真空濃縮至小體積，冷卻后加入無水乙醇得淡黃色沉淀，過濾，真空干燥得配體粉末；(4)稱取步驟(3)中所得到的配體粉末溶解于蒸餾水中，其中配體粉末與蒸餾水比值以質(zhì)量與體積比計為1∶5～20，攪拌下加入金屬無機鹽，配體與金屬無機鹽的摩爾比為1∶1～5，于室溫下持續(xù)攪拌2～24h，將溶液真空濃縮，冷卻后加入無水乙醇沉淀，洗滌過濾，干燥后得到磁共振成像對比劑的固體粉末0.3～3.0g。
2、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的殼聚糖修飾順磁性金屬離子磁共振成像對比劑的制備方法，其特征 在于多胺多羧酸可以是二乙三胺五乙酸或者乙二胺四乙酸。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的殼聚糖修飾順磁性金屬離子磁共振成像對比劑的制備方法，其特征 在于其中所述的金屬無機鹽可以是所有順磁性稀土及過渡金屬離子的鹽類，包括含不同結(jié)晶 水的鹽酸鹽、硝酸鹽、乙酸鹽、硫酸鹽或高氯酸鹽，優(yōu)選GcP的鹽類，Mn"的鹽類、Fe^的 鹽類。
全文摘要
殼聚糖修飾順磁性金屬離子磁共振成像對比劑的制備方法，屬于磁共振成像對比劑技術(shù)領(lǐng)域。按下步驟進行首先制備得到的多胺多羧酸的酸酐，在催化劑的作用下與水溶性殼聚糖或窄分子量分布水溶性殼聚糖反應(yīng)，再經(jīng)無水乙醇沉析出固體，將該固體過Sephadex G-25型凝膠柱，純化得到殼聚糖的配體，再將該配體與順磁性金屬無機鹽反應(yīng)，最后無水乙醇沉淀，干燥后即可得到磁共振成像對比劑的固體粉末。本發(fā)明將通過多胺多酸化合物的酸酐與殼聚糖氨基通過共價鍵結(jié)合起來，再絡(luò)合順磁性的稀土或過渡金屬離子，使之成為具有一定靶向性和適宜體內(nèi)滯留時間、弛豫效率高于馬根維顯、毒性小的新型磁共振成像對比劑。本發(fā)明加工制備工藝簡單，設(shè)備要求低，易于加工生產(chǎn)。
文檔編號A61K49/06GK101642579SQ20091018420
公開日2010年2月10日 申請日期2009年8月14日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月14日
發(fā)明者岐 張, 顧海波, 燕 黃 申請人:江蘇大學(xué)