專利名稱：異戊烯基黃酮化合物作為胰脂肪酶抑制劑的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，更具體而言，本發(fā)明涉及一種從光葉桂木中分離得到的異戊烯基黃酮化合物作為胰脂肪酶抑制劑的用途。
背景技術(shù)：
在近20年中，全世界尤其是發(fā)達(dá)國家的肥胖癥發(fā)病率日益增多。由于經(jīng)濟(jì)的快速 發(fā)展和生活水平的不斷提高，現(xiàn)代人生活方式中始終存在運(yùn)動(dòng)不足和攝食能量相對過剩的 問題，這導(dǎo)致了眾多現(xiàn)代人機(jī)體能量的攝入超過了能量消耗，過剩的能量中會(huì)有一部分作 為脂肪貯存在脂肪組織中，由于它的積累會(huì)導(dǎo)致肥胖以及相關(guān)疾病，如糖尿病、癌癥、心臟 病、高脂血癥和脂肪肝等的發(fā)生。目前，肥胖癥的治療主要在于開發(fā)增加能量消耗的藥物或減少能量攝取的藥物。 其中，減少能量攝取的主要方法就是減少身體消化和吸收食物中的營養(yǎng)物質(zhì)，尤其是脂肪。 胰脂肪酶是腸道中脂肪消化吸收所必需的酶，食物中的脂肪在胰脂肪酶作用下被水解為單 酰甘油和游離脂肪酸，在腸道被重新吸收后，在體內(nèi)再次合成脂肪，作為能量存儲(chǔ)，引起脂 肪堆積，最終導(dǎo)致肥胖以及相伴的高脂血癥、糖尿病等代謝性疾病的發(fā)生。胰脂肪酶抑制 劑可有效抑制腸道中胰脂肪酶對脂肪的催化分解作用，達(dá)到減少脂肪吸收和治療肥胖的目 的，因而開發(fā)和應(yīng)用有效的胰脂肪酶抑制劑受到人們的普遍關(guān)注。目前市場暢銷的胰脂肪 酶抑制劑是賽尼可，賽尼可具有活性強(qiáng)，穩(wěn)定性好等特點(diǎn)，但同時(shí)具有難以控制的腸道癥 狀、油便和嘔吐腹?jié)q等缺點(diǎn)。因此尋找新的胰脂肪酶抑制劑對肥胖以及糖尿病等代謝性疾 病的防治具有重要的意義。有文獻(xiàn)報(bào)道，Enos Tangke Arimg等從波羅蜜屬植物波羅蜜中分離得到如式 (I)所示的化合物norartocarpin。該化合物具有抑制黑色素合成的生物活性(Planta Medica, 2006, 72 (9) :847_850)。另有研究表明，該化合物具有抑制睪酮_5 α -還原酶活 性、抑制細(xì)胞增殖、抑制環(huán)氧合酶活性、抑制5-脂氧合酶活性，相關(guān)專利申請有國際公開 號(hào)為 WO 2008020490 Al 的國際專利申請(Artocarpin derivative or artocarpin-like compound, and hair growth/restoration composition, skin-whitening cosmetic composition,pharmaceutical as anti-cancer,antiphlogistic/analgesic,antipyretic or antiallergic agent and pharmaceutical for treatment of pigmented skin lesion each comprising the same)。但是未見式(I)所示的化合物有關(guān)抑制胰脂肪酶活性的報(bào) 道。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的目的是提供一種如下結(jié)構(gòu)式(I)所示的異戊烯基黃酮化合物在制備胰脂肪酶抑制劑藥物中的用途，特別是在制備預(yù)防或治療肥胖癥的藥物中的用途。
(I)結(jié)構(gòu)式(I)所示的異戊烯基黃酮化合物是從光葉桂木中提取得到，本發(fā)明采用結(jié) 構(gòu)式(I)的化合物進(jìn)行了胰脂肪酶活性測試和動(dòng)物體內(nèi)減肥作用考察，結(jié)果表明結(jié)構(gòu)式 (I)的化合物具有明顯的胰脂肪酶抑制活性和減肥作用，可作為研制新的預(yù)防或治療肥胖 癥及相關(guān)代謝性疾病藥物的先導(dǎo)化合物，也可用于制備預(yù)防或治療臨床常見多發(fā)的肥胖癥 及相關(guān)代謝性疾病的藥物。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明中的異戊烯基黃酮化合物可以從光葉桂木中提取得到將光葉桂木(Artocarpus nitidus Tr6c.)的莖枝粉碎后，用有機(jī)溶劑或/和水 提取制備得到總提取物，所用的有機(jī)溶劑可采用醇類，如乙醇、甲醇等，其中優(yōu)選95% (體 積比)乙醇。將總提取物溶于水后，分別以石油醚、鹵代烴類溶劑萃取，取鹵代烴類溶劑萃 取相，回收溶劑后干燥，即得到鹵代烴類提取物，所用的鹵代烴類溶劑可以用氯仿或二氯甲 烷，其中優(yōu)選氯仿。將鹵代烴類提取物進(jìn)行硅膠柱層析，用石油醚-丙酮梯度洗脫；其中將石油醚-丙 酮4 1洗脫部分濃縮后進(jìn)行硅膠柱層析，以石油醚-異丙醇梯度洗脫；其中將石油醚-異 丙醇10 1洗脫部分濃縮后進(jìn)行硅膠柱層析，經(jīng)氯仿-甲醇(100 1)洗脫后得到化合 物(E) -2- (2,4- 二羥基苯基)-5，7- 二羥基-3- (3-甲基-2- 丁烯基)-6- (3-甲基-1- 丁烯 基)-4H-苯并吡喃-4-酮，用波譜方法鑒定其結(jié)構(gòu)，如其結(jié)構(gòu)如結(jié)構(gòu)式(I)所示。下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但不限制本發(fā)明。實(shí)施例1從光葉桂木中提取化合物(E)-2_(2，4-二羥基苯基)-5，7_ 二羥 基-3- (3-甲基-2- 丁烯基)-6- (3-甲基-1- 丁烯基)-4H-苯并吡喃_4_酮(1)提取將20公斤光葉桂木干燥莖枝粉粹后，用95%含水乙醇100升浸泡12h 后滲漉，浸泡后添加95%含水乙醇，收集滲漉液400升，濃縮干燥，得到浸膏1. 5公斤。將此 浸膏溶于水后用氯仿萃取，回收溶劑濃縮至干，得氯仿提取物50克。(2)分離將氯仿提取物10克進(jìn)行硅膠柱層析，用石油醚-丙酮 (10 1 — 7 1 — 4 1 — 2 1)梯度洗脫，每個(gè)梯度用量1500毫升，收集各洗 脫液；其中將石油醚-丙酮4 1洗脫液濃縮后進(jìn)行硅膠柱層析，以石油醚-異丙醇 (20 1-10 1-7 1-4 1)梯度洗脫，每個(gè)梯度用量500毫升；其中將石油醚-異 丙醇10 1洗脫液濃縮后進(jìn)行硅膠柱層析，用氯仿-甲醇(100 1)洗脫后得到化合物 (E)-2-(2，4- 二羥基苯基)-5，7- 二羥基-3-(3-甲基-2- 丁烯基)_6-(3_ 甲基-1- 丁烯 基)-4H-苯并吡喃-4-酮100毫克。該化合物的理化性質(zhì)及光譜數(shù)據(jù)如下分子式為C25H26O6 ；分子量為422 ；性狀為黃色無定形粉末；
紫外光譜最大吸收波長值(甲醇):376,321,313,265,206nm；紅外光譜最大吸收頻率值(溴化鉀)3500，2920，1650，1621，1525，1457， 1358cm-1 ；電子轟擊質(zhì)譜(質(zhì)荷比)422[M]+;核磁共振氫譜(400MHz)數(shù)據(jù)(化學(xué)位移ppm，偶合常數(shù)Hz，溶劑氘代丙酮) 14. 08(lH，s，0H-5)，7. 19(lH，d，J = 8. 4Hz，H_6' )，6. 76 (1H，dd，J = 7.0，16. 1Ηζ，Η_17)，
6.63(lH,br d, J = 16. 1Hz，H—16)，6. 55 (1H，d，J = 2. 2Hz，H_3' )，6. 50 (1H，dd，J = 2.2， 8. 4Hz, H-5' ) ,6. 40 (1H, s, H_8)，5. 11 (1H, br t, J = 7. OHz, H_12)，3. 10 (2H, br d, J =
7.0Hz, H-ll) ,2. 43 (1H, br q，J = 7. 0Hz，H-18)，1. 55 (3H，br s，H3_14)，1. 41 (3H，br s, H3-15)，1. 08 (6H, d, J = 7. OHz, H3_19，20)；核磁共振碳譜(100MHz)數(shù)據(jù)(化學(xué)位移ppm，溶劑氘代丙酮):183.7(C_4)， 162. 2(C-2)，162. 1 (C-7)，161. 5(C-4 ‘ )，160. 8 (C-5)，157. 2 (C-2 ‘ )，157. O (C-9)， 141. 8(C-17)，132. 3 (C—6 ‘ )，132. 1 (C—13)，122. 6(C_12)，121. 6(C_3) ,117. 3(C_16)， 113. 0(C-1 ‘ )，109. 2(C-6)，105. O(C-IO)，103. 9(C-3‘ )，108. 1 (C-5‘ )，93.8(C_8)， 33. 9 (C-18)，25. 8 (C—14)，24. 6 (C-Il)，23. 1 (C—19，20)，17. 5 (C—15)。實(shí)施例2結(jié)構(gòu)式(I)的化合物對胰脂肪酶的抑制活性測定胰脂肪酶抑制活性的測定方法如下首先底物乙酸對硝基苯酯(p-Nitrophenyl acetate) (sigma公司)用磷酸緩沖 液(PBS, pH 7. 4)配成1. 35M ；豬胰脂肪酶(sigma公司)用磷酸緩沖液(PBS, pH 7. 4)配 成10mg/ml ；結(jié)構(gòu)式(I)的化合物用磷酸緩沖液(PBS，pH7. 4)配制成不同濃度的溶液。然 后在96孔板中依次加入50 μ 1稀釋20倍后的酶溶液、40 μ 1稀釋1000倍后的底物溶液以 及10 μ 1不同濃度的受試樣品，混勻。25°C下反應(yīng)20分鐘，每隔2分鐘在405nm下檢測每 孔的吸光度。根據(jù)在405nm下的吸光度計(jì)算受試樣品對胰脂肪酶的活性抑制率(％ )，以蒸餾水 為對照并將酶的活性抑制率(％ )達(dá)到50%時(shí)抑制劑的濃度測定為IC5tl值?；钚砸种坡?(%)可以根據(jù)下式進(jìn)行活性抑制率(%) = [ (A-B) - (C-D) ] / (A-B) X 100上式中，A表示反應(yīng)后空白孔在405nm下的吸光度，B表示反應(yīng)前空白孔在405nm下的吸光度，C表示反應(yīng)后樣品孔在405nm下的吸光度，D表示反應(yīng)前樣品孔在405nm下的吸光度。測定結(jié)構(gòu)式(I)的化合物對胰脂肪酶抑制活性，結(jié)果IC5tl為1.79 士0.076 μ M，表 明結(jié)構(gòu)式(I)的化合物對胰脂肪酶的活性具有很強(qiáng)的抑制作用。實(shí)施例3 結(jié)構(gòu)式(I)的化合物對Zucker肥胖大鼠的減肥作用Zucker肥胖大鼠(遺傳性肥胖大鼠)由中國科學(xué)院上海藥物所動(dòng)物房繁殖，雄性， 6周齡。取正常Zucker大鼠6只，作為空白對照組。將肥胖Zucker大鼠分成2組，即模型 對照組和給藥組，每組6只。結(jié)構(gòu)式(I)的化合物用0. 5% CMC-Na助溶，劑量為120mg/kg ； 空白和模型對照組給予同等體積的0. 5% CMC-Na, 口服灌胃給藥二周。定期檢測飲食和體重。
結(jié)果見表1。表1結(jié)構(gòu)式(I)的化合物對Zucker大鼠體重和飲食的影響 與模型組相比，*P < 0. 05。從表1可以看出，結(jié)構(gòu)式(I)的化合物明顯抑制了 Zucker肥胖大鼠體重增加，具 有減肥作用，對飲食沒有顯著性影響，而且大鼠糞便形狀未見異常。脂肪攝入過多可能導(dǎo)致肥胖以及與肥胖相關(guān)的糖尿病、高脂血癥、脂肪肝等代謝 失調(diào)性疾病。抑制胰脂肪酶可以抑制脂肪在小腸的分解，從而抑制脂肪的吸收。結(jié)構(gòu)式(I) 的化合物作為胰脂肪酶抑制劑，并具有減肥作用，可用于預(yù)防或治療肥胖癥等疾病。
權(quán)利要求
如結(jié)構(gòu)式(I)所示的化合物在制備胰脂肪酶抑制劑藥物中的用途，F(xiàn)2009100477522C0000011.tif
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征是，所述化合物作為胰脂肪酶抑制劑在制備預(yù) 防或治療肥胖癥藥物中的用途。
3.一種治療肥胖癥的方法，該方法包括向肥胖癥患者給予治療有效量的如結(jié)構(gòu)式 (I)所示的化合物 (I)
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，更具體而言，涉及異戊烯基黃酮化合物作為胰脂肪酶抑制劑的用途。該化合物結(jié)構(gòu)式如下，化學(xué)名稱為(E)-2-(2，4-二羥基苯基)-5，7-二羥基-3-(3-甲基-2-丁烯基)-6-(3-甲基-1-丁烯基)-4H-苯并吡喃-4-酮，可以從光葉桂木中提取得到。胰脂肪酶活性測試和動(dòng)物體內(nèi)減肥作用實(shí)驗(yàn)表明該化合物具有明顯的胰脂肪酶抑制活性和減肥作用，可作為研制新的預(yù)防或治療肥胖癥及相關(guān)代謝性疾病藥物的先導(dǎo)化合物，也可用于制備預(yù)防或治療臨床常見多發(fā)的肥胖癥及相關(guān)代謝性疾病的藥物。
文檔編號(hào)A61K31/352GK101836975SQ20091004775
公開日2010年9月22日 申請日期2009年3月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月18日
發(fā)明者侯愛君, 朱維良, 王賀瑤, 趙婷, 閆桂蕊 申請人:中國科學(xué)院上海藥物研究所;復(fù)旦大學(xué)