專利名稱：用α胸腺肽和抗細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(CTLA4)的抗體的組合治療黑素瘤的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及黑素瘤治療領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
在美國(guó)皮膚癌是癌癥的最常見形式。在2007年，美國(guó)癌癥學(xué)會(huì)(American Cancer Society)估計(jì)約8，110例死亡來自黑素瘤，并且預(yù)期在該國(guó)家診斷出另外59，940例黑素瘤。黑素瘤是主要見于皮膚并且也見于腸和眼(葡萄膜黑素瘤(uvealmelanoma))中 的黑素細(xì)胞的惡性瘤。它是比較罕見類型的皮膚癌的一種，但引起大多數(shù)皮膚癌相關(guān)的死亡。所述治療包括通過外科手術(shù)除去腫瘤；輔助治療；化學(xué)療法和免疫療法或放射療 法。原發(fā)性黑素瘤轉(zhuǎn)移是特別危險(xiǎn)的。在本領(lǐng)域仍然需要改進(jìn)的黑素瘤治療。

發(fā)明內(nèi)容
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，在人類患者中治療黑素瘤或黑素瘤轉(zhuǎn)移的方法為 組合療法，其包括在治療方案期間將黑素瘤治療組合給藥于人類黑素瘤患者，所述組合包 括a胸腺肽(alpha thymosin peptide)和抗細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(CTLA4， cytotoxic T lymphocyte-associated antigen 4)的抗體。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明涉及在人類患者中治療黑素瘤或黑素瘤轉(zhuǎn)移的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中， 所述方法包括將有效治療黑素瘤的組合給藥于人類黑素瘤患者，所述組合包括a胸腺肽 和抗細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(CTLA4)的抗體。在某些實(shí)施方案中，所述組合還包括對(duì)抗黑素瘤或治療黑素瘤的一種或多種其他 藥物。a胸腺肽包括胸腺肽a l(Ta 1)肽，所述T a 1包括天然存在的T a 1以及合成性 T a 1和具有天然存在的T a 1的氨基酸序列、與天然存在的T a 1的氨基酸序列基本相似或 為其縮短的序列形式的重組T a 1，以及具有取代的、刪除的、延長(zhǎng)的、置換的或修飾的序列 的Ta 1的生物活性類似物，所述生物活性類似物具有與Ta 1基本相似的生物活性，例如 Tal衍生的肽具有與Ta 1的足夠氨基酸同源性，從而其以基本相同的方式發(fā)揮功能，具有
3與Ta 1基本相同的活性。a胸腺肽的合適劑量可以在約0. 001-10mg/kg/日的范圍內(nèi)。術(shù)語(yǔ)“胸腺肽a 1”和“T a 1”是指具有美國(guó)專利號(hào)4，079，137中披露的氨基酸序 列的肽，將其內(nèi)容引入本申請(qǐng)作為參考。胸腺肽a 1 (T a 1)最初從胸腺肽級(jí)分5 (Thymosin Fraction 5，TF5)中分離，已經(jīng) 對(duì)其進(jìn)行了序列分析和化學(xué)合成。Ta 1是具有28個(gè)氨基酸的肽，分子量為3108。有效量的a胸腺肽為下述的量其可以是對(duì)應(yīng)于約0. l-20mg Ta 1，或約1-lOmg Ta 1或約2-10mg Ta 1或約2_7mg Ta 1范圍內(nèi)的劑量單位。所述劑量單位可以在3-6. 5mg 的范圍內(nèi)，并可包含約1.6、3. 2或6. 4mg T a 1，或約3. 2或約6. 4mg Tal。一個(gè)劑量單位 可每日給藥一次，或每日給藥數(shù)次。黑素瘤具有各種時(shí)期(stage)，其可包括0期、I期、II期、III期和IV期以及它們的 進(jìn)一步分類。在某些實(shí)施方案中，所治療的黑素瘤是惡性轉(zhuǎn)移性黑素瘤。在某些實(shí)施方案 中，所治療的黑素瘤是I期、II期、III期或IV期黑素瘤。在其他實(shí)施方案中，所治療的黑素瘤 是Mia期、Mlb期或Mlc期黑素瘤。達(dá)卡巴嗪(DTIC)是對(duì)黑素瘤患者而言常規(guī)的化學(xué)治療 藥物。可在治療方案中給藥a胸腺肽，所述治療方案包括給予患者抗細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4的抗體(CTLA4)。這些抗體包括但不限于9H10 (EBI0SCIENCE)、 MDX010 (MEDAREX)、1F4(GENETEX)、BNI3 (GENETEX)、Q01(ABN0VA)、A01 (ABN0VA)、 M08 (ABN0VA)、1B8(ABCAM)、WKH203(ABCAM)、ab9984(ABCAM)、ab13486(ABCAM)、ipilimumab、 ticilimumab或它們的組合。9H10是抗T細(xì)胞上的CTLA-4的功能性-級(jí)別倉(cāng)鼠抗小鼠抗體(functional-grade hamster anti-mouse antibody)。本發(fā)明的方法可包括在治療方案的療程期間將a胸腺肽與抗細(xì)胞毒性T淋巴細(xì) 胞相關(guān)抗原4的抗體(CTLA4) —起給藥。在治療方案期間所述CTLA4抗體可與a胸腺肽 同時(shí)給藥或與胸腺肽分開給藥，例如在治療方案的療程期間在與給藥a胸腺肽相同的一 天(或同樣的幾天)或在不同的幾天給藥CTLA4抗體。在某些實(shí)施方案中，所述CTLA4抗 體給藥的劑量范圍為例如0. 001-50mg/kg所給藥的患者體重/日，或約0. 01-20mg/kg或約 l_15mg/kg0如上所述，在某些實(shí)施方案中，所述組合還包括對(duì)抗黑素瘤或治療黑素瘤的一種 或多種其他藥物。所述其他藥物可以是抗腫瘤藥如烷化抗腫瘤藥(AlkAA)，其包括但不限于 達(dá)卡巴嗪(DTIC)。組合中的其他一種或多種藥物如烷化抗腫瘤藥(AlkAA)可在以下的劑 量范圍內(nèi)給藥于患者例如約700-1300mg/m2/日，更優(yōu)選在約800-1200mg/m2/日的劑量范 圍，最優(yōu)選約1000mg/m2/日。在治療方案中組合中的各種組分可與其他組分同時(shí)或分開給藥。在某些實(shí)施方案中，治療方案包括數(shù)天，用a胸腺肽(包括胸腺肽a l(Ta 1))來 治療，其中在治療方案的至少一部分以約0. 5-10mg/日的劑量范圍將Ta 1給藥于患者。在 某些實(shí)施方案中，所述劑量在約1.5-7mg/日的范圍內(nèi)，或在約1.6-6. 4mg/日的范圍內(nèi)。在 某些實(shí)施方案中，所述劑量在約1. 7-10mg/日的范圍內(nèi)，或約1. 7-7mg/日或約3_7mg/日的 范圍內(nèi)。示例性劑量包括1. 6,3. 2和6. 4mg/日。在某些實(shí)施方案中，治療方案包括給藥a胸腺肽約1-10日的一段時(shí)間，接下來的約1-5日不給藥a胸腺肽。a胸腺肽可每日給藥，持續(xù)約3-5日，接下來的約2_4日不給 藥a胸腺肽。a胸腺肽可每日給藥，持續(xù)約4日，接下來的約3日不給藥a胸腺肽。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明包括a胸腺肽和CTLA4抗體在制備有效治療黑素瘤的 藥物組合或藥物中的用途，所述藥物組合或藥物用于在治療方案中在人類黑素瘤患者中治 療黑素瘤或黑素瘤轉(zhuǎn)移。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，所述藥物以有效治療黑素瘤或黑素瘤轉(zhuǎn)移的量用在治療方案 中，在所述治療方案期間基本上不包括將任何免疫刺激性細(xì)胞因子給藥于所述患者。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，所述LDH血液水平低于475IU/L。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，所述LDH血液水平在100-335IU/L之間。一個(gè)實(shí)施方案是包括所述a胸腺肽的藥物組合，所述組合還包括CTLA4抗體，其 用在治療方案的療程期間，其中胸腺肽和CTLA4抗體可分開或一起給藥。根據(jù)--個(gè)實(shí)施方案，所述CTLA4抗體包括ipilimumab。
根據(jù)--個(gè)實(shí)施方案，所述CTLA4抗體包括ticilimumab。
根據(jù)--個(gè)實(shí)施方案，所述CTLA4抗體包括9H10。
根據(jù)--個(gè)實(shí)施方案，所述CTLA4抗體包括MDX010。
根據(jù)--個(gè)實(shí)施方案，所述CTLA4抗體包括Q01。
根據(jù)--個(gè)實(shí)施方案，所述CTLA4抗體包括A01。
根據(jù)--個(gè)實(shí)施方案，所述CTLA4抗體包括M08。
根據(jù)--個(gè)實(shí)施方案，所述CTLA4抗體包括1B8。
根據(jù)--個(gè)實(shí)施方案，所述CTLA4抗體包括WKH203。
根據(jù)--個(gè)實(shí)施方案，所述CTLA4抗體包括ab9984。
根據(jù)--個(gè)實(shí)施方案，所述CTLA4抗體包括ab 13486。
根據(jù)--個(gè)實(shí)施方案，所述藥物用在包含數(shù)日的治療方案中，所述a胸腺肽包括胸腺肽al(Tal),以及在治療方案的至少一部分期間以0. 5-10mg/日的劑量范圍將T a 1給藥于所述患者。
根據(jù)--個(gè)實(shí)施方案，所述劑量在1.5-7mg/日的范圍內(nèi)。
根據(jù)--個(gè)實(shí)施方案，所述劑量為3. 2mg/日。
根據(jù)--個(gè)實(shí)施方案，所述劑量為6. 4mg/日。
根據(jù)--個(gè)實(shí)施方案，所述a胸腺肽為Tal，以及所述藥物用在治療方案中，所述治療方案包括每日給藥Ta 1 1-10日的一段時(shí)間，接下來的約1-5日不給藥所述Ta 1。
根據(jù)--個(gè)實(shí)施方案，所述T a 1用于每日給藥，持續(xù)約3-5日，接下來的約2-4日不給藥所述Ta 1。
根據(jù)--個(gè)實(shí)施方案，所述Ta 1用于每日給藥，持續(xù)約4日，接下來的約3日不給藥
所述Ta 1。實(shí)施例1 (9H10)對(duì)C57BL/6小鼠皮下植入鼠類B16 黑素瘤細(xì)胞(Cell Culture Center, Institute of Basic Medical Sciences, Peking Union Medical College and ChineseAcademy of Medical Sciences PUMC&CAMS，Beijing, P. R. China)，接著用 TA-1 或 DTIC 單獨(dú)或組合處 理連續(xù)的14日。將腫瘤植入的那天定義為第0日。同時(shí)在第3、6和9日分兩組通過腹腔注射(i.P.)給予9H10。通過皮下注射每日給藥TA-1和DTIC?？傆?jì)使用5組小鼠(n = 10)組 1 媒介物；組 2 :DTIC 5mg/kg ；組 3 :TA_16mg/kg ；組 4 :DTIC 5mg/kg+9H10 (第 3 日 (100 y g)，第 6 日(50 ii g)，第 9 日(50 u g))；組 5 :DTIC 5mg/kg+TA_16mg/kg+9H10 (第 3 日 (lOOyg)，第6日(50110，第9日(50110)(表1)。在研究的開始動(dòng)物為六周齡，稱重在 18和22克之間。每隔三日測(cè)量腫瘤體積和體重，在研究末期在第16日測(cè)量腫瘤重量。表1 治療方案和研究設(shè)計(jì) 使用磷酸鹽緩沖生理鹽水(PBS)作為陰性對(duì)照品(媒介物)。將測(cè)試物品TA-1溶 于PBS中，以達(dá)到表2中所指明的適當(dāng)劑量濃度。TA-1溶液在2-8°C儲(chǔ)存，并在一周內(nèi)用完。 將DTIC(SIGMA)首先溶于0.01N HC1中，然后用PBS稀釋至lmg/mL。DTIC給藥溶液保存在 冰上，避光，并且在一日內(nèi)使。最終給藥溶液在使用的那天通過用水將儲(chǔ)備溶液稀釋至1倍 來制備。抗體試劑9H10 (EBI0SCIENCE)以lmg/mL的濃度隨時(shí)可用。表2:給藥制劑 死亡率(mortality)和垂死率(moribundity)每日檢查兩次，每隔3日記錄一次 體重，每隔3日使用測(cè)徑器測(cè)量一次腫瘤。在研究的末期(第16日)，通過C02窒息法對(duì)動(dòng) 物實(shí)施安樂死，將腫瘤切除并稱重。當(dāng)單獨(dú)或組合使用時(shí)，在整個(gè)研究過程中TA-1未引起任何體重?fù)p失，表明TA-1不 是有毒的。在第3日和第6日僅有幾只小鼠具有可觸及的腫瘤，媒介物對(duì)照組和任何治療組 之間不存在腫瘤體積的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在第9日，組1(媒介物對(duì)照)、組2(DTIC)和組3(TA-1)中的多數(shù)小鼠以及組4(9H10+DTIC)和組5(9H10+DTIC+TA-1)中的僅有幾只小鼠具有可觸 及的腫瘤；組4和5的平均腫瘤體積在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著小于組1的平均腫瘤體積(P < 0. 05)。 在第12日和第15日，組1-5中的所有小鼠均顯示出可觸及的腫瘤，除了組2(DTIC)之外的 每個(gè)藥物治療組的平均腫瘤體積在統(tǒng)計(jì)學(xué)上均顯著小于媒介物對(duì)照組(P <0.05)的平均 腫瘤體積。基于腫瘤大小，用下式計(jì)算腫瘤體積(TV) :[TV=(長(zhǎng)χ寬χ寬)/2]。根據(jù)以下 方程計(jì)算對(duì)TV (PItv)的百分比抑制(PI)PItv (% ) = (TV媒介物-TV藥物治療的)/TV媒介物X 100用在實(shí)體剖檢(necropsy)日(第16日)測(cè)量的腫瘤重量(TW)評(píng)價(jià)測(cè)試物品的 抗腫瘤作用。使用以下方程計(jì)算對(duì)TW的PI PItw (% ) = 100X (TW媒介物.-TW藥物治療的)/TW媒介物。在第16日，所有治療組的平均腫瘤重量均低于組1。組2、組3、組4和組5的PItw 值分別為28. 41%,43. 35%,51. 35%和62. 05%，表明所有治療方案的有效性。在第0、3和6日每個(gè)治療組和媒介物對(duì)照組之間不存在顯著差異。在第9、12和 15日，與媒介物組相比，其它組的體重沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異。在第16日，在僅TA-I治療的動(dòng)物中腫瘤重量減少了 43. 35%。DTIC僅引起了對(duì) 腫瘤生長(zhǎng)的適度抑制(例如基于腫瘤重量抑制28. 41 % )，而它與9H10的組合將對(duì)腫瘤 的抑制增加至51. 35%。當(dāng)9H10+DTIC與TA-I進(jìn)一步組合時(shí)，腫瘤抑制率進(jìn)一步增加到 62. 05%。實(shí)施例2 (Τ α 1+ipilimumab)在治療方案中將Τα 1作為組合療法給藥于黑素瘤患者，劑量范圍為0.5_10mg/曰。除了用Ta 1治療外，在第一種實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中還用ipilimumab治療黑素瘤患者， 在一組中所有劑量都以3mg/kg的劑量水平接受(receive) ipilimumab，或者在另一組中 ipilimumab的最初負(fù)荷劑量(loading dose)為3mg/kg，接著給藥lmg/kg的后續(xù)劑量。黑素瘤患者用患者間劑量增加的ipilimumab (intrapatient ipi Iimumabdose escalation)治療，直到達(dá)到客觀的臨床響應(yīng)、自身免疫> 3級(jí)或達(dá)到了其它劑量限制性毒 性。在組I中劑量可始于3mg/kg，在組II中始于5mg/kg。劑量可每隔3周給予，每隔一次 劑量可增加至5mg/kg或9mg/kg并持續(xù)，直到在9mg/kg抗體上觀察到響應(yīng)、不良事件或疾 病進(jìn)展。實(shí)施例3 (Τ α 1+ticilimumab)在治療方案中將Τα 1作為組合療法給藥于黑素瘤患者，劑量范圍為0.5_10mg/曰。除了用T α 1治療外，還以0. 01至15mg/kg的單劑量水平或3至15mg/kg的多劑量 水平給藥TiciIimumab。給藥方案可包括給予單劑量或多劑量，例如每1個(gè)月(qlmonth)， 每3個(gè)月(q3month)等。
權(quán)利要求
在人類患者中用組合治療來治療黑素瘤或黑素瘤轉(zhuǎn)移的方法，所述方法包括在治療方案期間將有效治療黑素瘤的組合給藥于人類黑素瘤患者，所述組合包括α胸腺肽和抗細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(CTLA4)的抗體。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述CTLA4抗體包括9H10、MDX010、1F4、BNI3、Q01、A01、 M08、1B8、WKH203、ab9984、ab 13486、ipi 1 imumab、tici 1 imumab 或它們的組合。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述CTLA4抗體包括ipilimumab。
4.權(quán)利要求1的方法，其中所述CTLA4抗體包括ticilimumab。
5.權(quán)利要求1的方法，其中所述CTLA4抗體包括9H10。
6.權(quán)利要求1的方法，其中所述治療方案包含數(shù)日，所述a胸腺肽包括胸腺肽 al(Tal),以及在所述治療方案的至少一部分期間以約0. 5-10mg/日的劑量范圍將T a 1 給藥于所述患者。
7.權(quán)利要求6的方法，其中所述劑量在約1.5-7mg/日的范圍內(nèi)。
8.權(quán)利要求6的方法，其中所述劑量在約3-7mg/日的范圍內(nèi)。
9.權(quán)利要求6的方法，其中所述劑量為約3.2mg/日。
10.權(quán)利要求6的方法，其中所述劑量為約6.4mg/日。
11.權(quán)利要求1的方法，其中所述a胸腺肽為Ta 1，以及所述治療方案包括每日給藥 Ta 11-10日的一段時(shí)間，接下來的約1-5日不給藥所述T a 1。
12.權(quán)利要求11的方法，其中所述Ta 1每日給藥，持續(xù)約3-5日，接下來的約2-4日不 給藥所述T a 1。
13.權(quán)利要求11的方法，其中所述Ta 1每日給藥，持續(xù)約4日，接下來的約3日不給藥 所述Ta 1。
14.權(quán)利要求1的方法，其中所述抗細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4的抗體(CTLA4)以 約0. 001-50mg/kg所給藥的患者體重/日的劑量范圍給藥于所述患者。
15.權(quán)利要求1的方法，其中所述抗細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4的抗體(CTLA4)以 約0. 01-20mg/kg的劑量給藥于所述患者。
16.權(quán)利要求1的方法，其中所述組合還包括給藥烷化抗腫瘤藥(AlkAA)。
17.權(quán)利要求16的方法，其中所述烷化抗腫瘤藥(AlkAA)包括達(dá)卡巴嗪(DTIC).
18.權(quán)利要求16的方法，其中所述烷化抗腫瘤藥(AlkAA)以約700-1300mg/m2/日的劑 量范圍給藥于所述患者。
19.權(quán)利要求16的方法，其中所述烷化抗腫瘤藥(AlkAA)以約800-1200mg/m2/日的劑 量范圍給藥于所述患者。
全文摘要
在組合療法中在人類患者中治療黑素瘤或黑素瘤轉(zhuǎn)移，其包括在治療方案期間將黑素瘤治療組合給藥于人類黑素瘤患者，所述組合包括α胸腺肽和抗細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(CTLA4)的抗體。
文檔編號(hào)A61K38/24GK101896190SQ200880120694
公開日2010年11月24日 申請(qǐng)日期2008年12月8日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月12日
發(fā)明者伊斯雷爾·里奧斯, 辛西婭·W·塔特希爾 申請(qǐng)人:賽生制藥有限公司