專利名稱：由凝膠持續(xù)遞送坎普他汀類似物的制作方法
由凝膠持續(xù)遞送坎普他汀類似物相關(guān)申請案的交叉參考本申請案主張2007年10月2日申請的美國臨時專利申請案第USSN 60/976，919 號和2008年2月5日申請的第USSN 61/026，460號的優(yōu)先權(quán)和權(quán)益。這些申請案的內(nèi)容 都是以引用的方式并入本文中。
背景技術(shù)：
補體系統(tǒng)包含30多種血清蛋白和細胞蛋白，這些血清蛋白和細胞蛋白涉及三種 主要路徑，稱為經(jīng)典路徑、旁路路徑和凝集素路徑。經(jīng)典路徑通常是由抗原與IgM或IgG抗 體的復合物結(jié)合至C1而觸發(fā)(但某些其它激活因子也可以啟動此路徑)。激活的C1裂解 C4和C2，除C2a和C2b之外，還產(chǎn)生C4a和C4b。C4b與C2a組合形成C3轉(zhuǎn)化酶，其裂解C3， 形成C3a和C3b。C3b結(jié)合至C3轉(zhuǎn)化酶，產(chǎn)生C5轉(zhuǎn)化酶，其將C5裂解成C5a和C5b。C3a、 C4a和C5a是過敏毒素，并且介導急性炎癥反應(yīng)中的多種反應(yīng)。C3a和C5a還是趨化因子， 其吸引免疫系統(tǒng)細胞，例如嗜中性粒細胞。旁路路徑是由微生物表面和各種復合多糖啟動。在此路徑中，C3裂解(以低水平 自發(fā)發(fā)生)所產(chǎn)生的C3b與例如細胞表面上的靶結(jié)合，并與因子B形成復合物，所述復合物 隨后經(jīng)因子D裂解，產(chǎn)生C3轉(zhuǎn)化酶。C3裂解以及另一分子C3b與C3轉(zhuǎn)化酶結(jié)合，產(chǎn)生C5 轉(zhuǎn)化酶。此路徑中的C3和C5轉(zhuǎn)化酶受CR1、DAF、MCP和fH調(diào)控。這些蛋白質(zhì)的作用模式 涉及衰變加速活性(即，離解轉(zhuǎn)化酶的能力)、充當因子I降解C3b或C4b的輔因子的能力， 或二者。兩種路徑中產(chǎn)生的C5轉(zhuǎn)化酶裂解C5，產(chǎn)生C5a和C5b。接著C5b結(jié)合至C6、C7 和C8，形成C5b-8，其催化C9聚合，形成C5b-9膜攻擊復合物(membrane attack complex, MAC)。MAC本身插入靶細胞膜中，并引起細胞溶解(cell lysis)。細胞膜上少量的MAC可 能造成除細胞死亡外的多種后果。凝集素補體路徑是由甘露糖結(jié)合凝集素(mannose-binding lectin, MBL)和MBL 相關(guān)絲氨酸蛋白酶(MBL-associated serine protease, MASP)結(jié)合至碳水化合物而啟動。 MB1-1基因(在人類中，稱為LMAN-1)編碼位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高爾基體(Golgi)之間的中間區(qū)中 的I型內(nèi)在膜蛋白。MBL-2基因編碼血清中所見的可溶性甘露糖結(jié)合蛋白。在人凝集素路 徑中，MASP-1和MASP-2涉及于C4和C2的蛋白水解，產(chǎn)生上文所述的C3轉(zhuǎn)化酶。補體活性受稱作補體調(diào)節(jié)蛋白(complement control protein, CCP)或補體激活 調(diào)控蛋白(regulators of complement activation, RCA)的各種哺乳動物蛋白調(diào)控(美 國專利第6，897，290號)。這些蛋白質(zhì)的配體特異性和補體抑制機制不同。它們可加速 轉(zhuǎn)化酶的正常衰變，和/或充當因子I的輔因子，以將C3b和/或C4b酶促裂解成較小的 片段。CCP的特征是存在多個(通常4到56個)同源基元，稱為短一致重復序列(short consensusrepeat，SCR)、補體調(diào)節(jié)蛋白(CCP)模組或SUSHI結(jié)構(gòu)域。這些結(jié)構(gòu)域是由約 50到70個氨基酸、通常約60個氨基酸組成，以包括四個以二硫鍵鍵結(jié)的半胱氨酸(兩個 二硫鍵)、脯氨酸、色氨酸和許多疏水殘基的保守基元為特征。CCP家族包括補體受體1型(complement receptor type 1，CR1 ；C3b :C4b 受體)、補體受體 2 型(CR2)、膜輔蛋白 (membrane cofactor protein, MCP ；CD46)、衰變力口速因子(decay-accelerating factor, DAF)、補體因子 H(complement factor H, fH)和 C4b 結(jié)合蛋白(C4bp)。CD59 是一種結(jié)構(gòu)與 CCP無關(guān)的膜結(jié)合補體調(diào)控蛋白。關(guān)于補體系統(tǒng)和其激活路徑的進一步詳情見于以下參考文獻中SC馬克德斯 (Makrides，SC)，藥學評述(Pharm Rev.) ,50(1) :59_87，1998 ；MK利斯瓦斯基(Lisczewski, MK)和JP安特金森(Atkinson，JP)，健康與疾病相關(guān)性人補體系統(tǒng)(The HumanComplement System in Health and Disease), JE 瓦蘭納奇斯(Volanakis, JE)和 MM 弗蘭克(Frank, MM)編，萊克公司(Dekker)，紐約(New York)，第149-66頁，1998 ；庫比免疫學(Kuby Immunology) ,2000 ；ff. E.保羅(Paul, W. E.)，免疫學基礎(chǔ)(FundamentalImmunology)，利 平科特 威廉姆斯&威爾金斯工作室(Lippincott ffilliams&ffilkins)；第5版，2003; 和MJ.瓦普特(WalportMJ.)，補體-兩部分中的第一部分(Complement. First of two parts.)新英格蘭醫(yī)學雜志(N Engl J Med. )，344 (14) : 1058-66，2001。盡管補體激活在先天性和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)中起重要作用，但人們越來越認識到補 體系統(tǒng)涉及于多種局部缺血性、炎癥性和自身免疫性疾病期間的組織損傷(SC馬克德斯 (Makrides，SC)，藥學評述(Pharm Rev.) ,50(1) :59_87，1998 ；MK利斯瓦斯基(Lisczewski, MK)和JP安特金森(Atkinson，JP)，健康與疾病相關(guān)性人補體系統(tǒng)(The HumanComplement System in Health and Disease), JE 瓦蘭納奇斯(Volanakis, JE)和 MM 弗蘭克(Frank, MM)編，萊克公司(Dekker)，紐約(New York)，第149-66頁，1998)。已提出補體抑制作為許 多此類疾病的治療策略?？财账?compstatin)和其類似物是環(huán)狀肽，其結(jié)合至C3并抑 制其激活。此項技術(shù)中需要投予坎普他汀類似物的新組合物和方法。此項技術(shù)中還需要改 進的藥物遞送系統(tǒng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供對哺乳動物個體持續(xù)釋放投予坎普他汀類似物的新穎調(diào)配物和方法。 一方面，本發(fā)明提供一種液體組合物，其包含足量的坎普他汀類似物，以當引入到哺乳動物 個體體內(nèi)的血管外位置中時，形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)。在本發(fā)明某些實施例中，血管外位置是 玻璃體腔。在其它實施例中，血管外位置是結(jié)膜下腔。在一些實施例中，血管外位置是球后、 結(jié)膜下、筋膜下(sub-Tenon' s)或視網(wǎng)膜下腔。在本發(fā)明某些實施例中，坎普他汀類似物 的活性是坎普他汀活性的至少100倍。在本發(fā)明某些實施例中，坎普他汀類似物的活性是 坎普他汀活性的至少150倍。在本發(fā)明某些實施例中，坎普他汀類似物的活性是坎普他汀 活性的至少200倍。在本發(fā)明某些實施例中，坎普他汀類似物的活性是坎普他汀活性的至 少250倍。在涉及對個體投藥的本發(fā)明任何方法的某些實施例中，本發(fā)明個體是非人類靈 長類動物。在涉及對個體投藥的本發(fā)明任何方法的某些實施例中，個體是人類。在一些實施例中，液體組合物包含坎普他汀類似物以及除所述坎普他汀類似物外 的第二活性劑。第二活性劑可以是多肽、肽、非肽小分子、核酸等。在一些實施例中，第二活 性劑是補體抑制劑。在一些實施例中，第二活性劑是血管生成抑制劑。本發(fā)明進一步提供一種治療哺乳動物個體的補體介導的病癥的方法，其包含對個 體投予任何上述液體組合物。一方面，本發(fā)明提供一種治療補體介導的病癥的方法，其包含
8以下步驟將包含有效量坎普他汀類似物的液體組合物投予個體體內(nèi)的血管外位置，其中 所述有效量足以在所述血管外位置內(nèi)形成含有坎普他汀類似物的宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)。在某些 實施例中，所述有效量足以形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)，其尺寸隨時間減小，但在至少2周內(nèi)仍易 于檢測到。在某些實施例中，宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)的尺寸隨時間減小，并釋放出活性形式的坎普 他汀類似物，以便在血管外位置中達到治療濃度，持續(xù)至少2周、至少4周、至少2個月、至 少3個月、至少6個月、至少9個月或至少12個月。在某些實施例中，宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)在至 少2周、至少4周、至少2個月、至少3個月、至少6個月、至少9個月或至少12個月，例如 長達約18個月或約24個月內(nèi)仍易于檢測到?！盎钚孕问健钡目财账☆愃莆锉Ａ艚Y(jié)合至C3 并抑制其裂解的能力。在一些實施例中，將組合物投予患有年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)或有患AMD風險 的個體的玻璃體腔。在一些實施例中，個體患有干性AMD或有患干性AMD的風險。在一些 實施例中，個體患有糖尿病性視網(wǎng)膜病變、葡萄膜炎、青光眼或視網(wǎng)膜色素變性，或有患所 述疾病的風險。在一些實施例中，將組合物投予個體的鞘內(nèi)腔。個體可能患有脊髓損傷或慢性疼痛。在一些實施例中，將組合物投予個體的顱腔，例如腦室內(nèi)。個體可能患有多發(fā)性硬 化、帕金森氏病(Parkinson' s disease)、阿爾茨海默氏病(Alzheimer‘ s disease)或中 風。在一些實施例中，將組合物投予個體的滑膜腔或滑膜囊。個體可能患有關(guān)節(jié)炎，例 如類風濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、賴特綜合癥(Reiter' s syndrome)、幼年型關(guān)節(jié)炎或痛 風。另一方面，還提供制備本發(fā)明組合物的方法。在一些方面中，本發(fā)明提供一種治療補體介導的病癥的方法，其包含以下步驟將 包含有效量坎普他汀類似物的液體組合物投予個體的血管外位置，其中所述有效量足以在 所述血管外位置內(nèi)形成含有坎普他汀類似物的離散、宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)。在一些實施例中，有 效量足以形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)，其尺寸隨時間減小，但在至少2周內(nèi)仍易于檢測到。在一 些實施例中，有效量足以形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)，其尺寸隨時間減小，并釋放出活性形式的坎 普他汀類似物，持續(xù)至少2周。在一些實施例中，有效量足以形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)，其尺寸 隨時間減小，但在至少3個月內(nèi)仍易于檢測到。在一些實施例中，有效量足以形成宏觀凝 膠狀結(jié)構(gòu)，其尺寸隨時間減小，并釋放出活性形式的坎普他汀類似物，持續(xù)至少3個月。在 一些實施例中，有效量足以形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)，其尺寸隨時間減小，并釋放出活性形式的 坎普他汀類似物，以使所述坎普他汀類似物在血管外位置或鄰近組織內(nèi)達到治療濃度，持 續(xù)至少2周。在一些實施例中，有效量足以形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)，其尺寸隨時間減小，并釋 放出活性形式的坎普他汀類似物，以使所述坎普他汀類似物在血管外位置或鄰近組織內(nèi)達 到治療濃度，持續(xù)至少3個月。在一些實施例中，坎普他汀類似物包含序列包含選自由SEQ ID N0:3、4、5、6和7組成的群組的序列的肽。在一些實施例中，坎普他汀類似物的活性是 SEQ ID NO :8的至少100倍。在一些實施例中，坎普他汀類似物的活性是SEQ ID NO :8的 至少200倍。在一些實施例中，坎普他汀類似物的序列選自SEQ ID NO :14、21、28、29、30、 31、32、33、34和36。在一些實施例中，坎普他汀類似物的序列選自SEQ ID NO :28、32和34。在一些實施例中，坎普他汀類似物是SEQ ID NO: 14的肽。在一些實施例中，坎普他汀類似 物是SEQID N0:28的肽。在一些實施例中，坎普他汀類似物是SEQ ID NO :30的肽。在一 些實施例中，坎普他汀類似物是SEQ ID N0:32的肽。在一些實施例中，坎普他汀類似物是 SEQ ID N0:33的肽。在一些實施例中，坎普他汀類似物是SEQ ID NO :34的肽。在一些實 施例中，液體組合物中所述坎普他汀類似物的量介于lmg/ml與50mg/ml之間。在一些實施 例中，液體組合物中所述坎普他汀類似物的量介于2mg/ml與25mg/ml之間。在一些實施例 中，將介于50 y g與5000 u g之間量的坎普他汀類似物投予玻璃體腔。在一些實施例中，將 介于150 y g與2000 y g之間量的坎普他汀類似物投予玻璃體腔。在一些實施例中，將介于 400 ii g與1500 ii g之間量的坎普他汀類似物投予玻璃體腔。在一些實施例中，將約450 ii g 坎普他汀類似物投予玻璃體腔。在一些實施例中，將約1050 yg坎普他汀類似物投予玻璃 體腔。在一些實施例中，以介于25 yl與125 yl之間的體積將坎普他汀類似物投予玻璃體 腔。在一些實施例中，以約50 yl的體積將坎普他汀類似物投予玻璃體腔。在一些實施例 中，以約75 yl的體積將坎普他汀類似物投予玻璃體腔。在一些實施例中，個體患有年齡相 關(guān)性黃斑變性，并且液體組合物是投予玻璃體腔。在一些實施例中，液體組合物進一步包含 有效量的第二治療劑。在一些實施例中，第二治療劑是補體抑制劑、血管生成抑制劑、類固 醇、消炎劑、抗感染劑或鎮(zhèn)痛劑。在一些實施例中，組合物經(jīng)玻璃體內(nèi)注射投予。在一些實施 例中，組合物包含多個微米粒子或納米粒子。微米粒子或納米粒子可包含治療劑，其可(但 未必)為坎普他汀類似物，并且當其為坎普他汀類似物時，其可(但未必)與形成凝膠的坎 普他汀類似物相同。在一些實施例中，至少一些微米粒子或納米粒子在投藥后被截留在凝 膠中。本發(fā)明提供一種凝膠狀結(jié)構(gòu)，其包含坎普他汀類似物和至少一種通常存在于個體 的血管外位置中的內(nèi)源性多肽。在一些實施例中，所述多肽是存在于選自由以下組成的群 組的血管外位置中的多肽玻璃體腔、結(jié)膜下腔、筋膜下腔、視網(wǎng)膜下腔、滑膜腔和腦脊髓腔。本發(fā)明提供一種包含坎普他汀類似物的液體組合物，其中所述組合物的特征在 于，其當投予哺乳動物個體的玻璃體腔內(nèi)時形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)。在一些實施例中，坎普他 汀類似物是以足量存在，以在經(jīng)玻璃體內(nèi)注射(例如，體積為約50 yl到約100 yl)投予個 體的玻璃體腔時，形成離散的宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)。在一些實施例中，坎普他汀類似物是以足以 形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)的量存在，所述結(jié)構(gòu)的尺寸隨時間減小，但在至少2周內(nèi)仍易于檢測 到。在一些實施例中，坎普他汀類似物是以足以形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)的量存在，所述結(jié)構(gòu)的 尺寸隨時間減小，并釋放出活性形式的坎普他汀類似物，持續(xù)至少2周。在一些實施例中， 坎普他汀類似物是以足以形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)的量存在，所述結(jié)構(gòu)的尺寸隨時間減小，但 在至少3個月內(nèi)仍易于檢測到。在一些實施例中，坎普他汀類似物是以足以形成宏觀凝膠 狀結(jié)構(gòu)的量存在，所述結(jié)構(gòu)的尺寸隨時間減小，并釋放出活性形式的坎普他汀類似物，持續(xù) 至少3個月。在一些實施例中，坎普他汀類似物是以足以形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)的量存在，所 述結(jié)構(gòu)的尺寸隨時間減小，但在至少6個月內(nèi)仍易于檢測到。在一些實施例中，坎普他汀類 似物是以足以形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)的量存在，所述結(jié)構(gòu)的尺寸隨時間減小，并釋放出活性 坎普他汀類似物，持續(xù)至少6個月。在一些實施例中，坎普他汀類似物是以足以形成宏觀凝 膠狀結(jié)構(gòu)的量存在，所述結(jié)構(gòu)的尺寸隨時間減小，并釋放出活性形式的坎普他汀類似物，以
10便使所述坎普他汀類似物在玻璃體腔或鄰近組織內(nèi)達到治療濃度，持續(xù)至少2周。在一些 實施例中，坎普他汀類似物是以足以形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)的量存在，所述結(jié)構(gòu)的尺寸隨時 間減小，并釋放出活性形式的坎普他汀類似物，以便使所述坎普他汀類似物在玻璃體腔或 鄰近組織內(nèi)達到治療濃度，持續(xù)至少3個月。在一些實施例中，坎普他汀類似物包含序列包 含選自由SEQ ID N0:3、4、5、6和7組成的群組的序列的肽。在一些實施例中，坎普他汀類 似物的活性是SEQ ID NO 8的至少100倍。在一些實施例中，坎普他汀類似物的活性是SEQ ID NO :8的至少200倍。在一些實施例中，坎普他汀類似物的序列包含選自SEQ ID NO 14, 21、28、29、30、31、32、33、34和36的序列。在一些實施例中，坎普他汀類似物的序列包含選 自SEQ IDN0:28、32和34的序列。在一些實施例中，坎普他汀類似物的序列包含SEQ ID N0:28。在一些實施例中，坎普他汀類似物的序列包含SEQ ID NO :32。在一些實施例中，坎 普他汀類似物的序列包含SEQ ID NO 340在一些實施例中，液體組合物中所述坎普他汀類 似物的量介于lmg/ml與50mg/ml之間。在一些實施例中，液體組合物中所述坎普他汀類似 物的量介于3mg/ml與25mg/ml之間。在一些實施例中，組合物含有介于150 y g與5000 u g 之間量的坎普他汀類似物。在一些實施例中，組合物含有介于250 y g與2000 u g之間量的 坎普他汀類似物。在一些實施例中，組合物含有介于400 ii g與1500 u g之間量的坎普他汀 類似物。在一些實施例中，組合物的體積介于25 ill與125 ill之間。在一些實施例中，組 合物在介于50 ill與100 ill之間的體積中含有介于150 ii g與2000 u g量的坎普他汀類似 物。在一些實施例中，組合物基本上由存于水中的坎普他汀類似物組成。在一些實施例中， 組合物實質(zhì)上無賦形劑。在一些實施例中，組合物包含選自由糖醇和氨基酸組成的群組的 組分。在一些實施例中，所述組分的存在調(diào)節(jié)沉積物在體內(nèi)消失的速率。在一些實施例中， 組合物包含組氨酸。在一些實施例中，組合物包含緩沖劑。在一些實施例中，組合物包含乙 酸鈉。在一些實施例中，組合物包含甘露醇。在一些實施例中，液體組合物進一步包含有效 量的第二治療劑。在一些實施例中，所述第二治療劑是補體抑制劑、血管生成抑制劑、類固 醇、消炎劑、抗感染劑或鎮(zhèn)痛劑。本發(fā)明還提供一種制備經(jīng)較長時間段遞送治療劑的組合物的方法，其包含制備 包含治療劑和坎普他汀類似物的液體組合物，其中坎普他汀類似物是以足量存在，以在將 組合物投予哺乳動物個體的血管外位置時，形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)。在一些實施例中，所述方 法進一步包含將液體組合物投予哺乳動物個體體內(nèi)的血管外位置。在一些實施例中，血管 外位置是玻璃體腔。在一些實施例中，血管外位置是玻璃體腔，并且個體患有AMD。在一些方面中，本發(fā)明提供一種治療患有AMD或有患AMD風險的個體的方法，其包 含將包含坎普他汀類似物的液體組合物直接投予個體的玻璃體腔，其中液體組合物含有足 量的坎普他汀類似物，以在投藥后形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)。在某些實施例中，坎普他汀類似物 包含序列包含選自由SEQ ID NO :3、4、5、6和7組成的群組的序列的肽。在某些實施例中， 坎普他汀類似物的活性是SEQ ID NO :8的至少100倍。在某些實施例中，坎普他汀類似物 的活性是SEQ ID NO :8的至少200倍。在某些實施例中，坎普他汀類似物的序列選自SEQ ID NO :14、21、28、29、30、31、32、33、34和36。在某些實施例中，坎普他汀類似物的序列選自 SEQ ID NO :28、32和34。在某些實施例中，坎普他汀類似物的量介于2mg/ml與20mg/ml之 間。在某些實施例中，將介于lOOyg與2，000i!g之間量的坎普他汀類似物投予眼睛。在 某些實施例中，將介于250iig與l，500i!g之間量的坎普他汀類似物投予眼睛。在某些實施例中，將介于400 y g與1，200 y g之間量的坎普他汀類似物投予眼睛。在某些實施例中， 液體組合物進一步包含血管生成抑制劑。本發(fā)明提供包含坎普他汀類似物和水的液體組合物，其中坎普他汀類似物的濃度 介于3mg/ml與50mg/ml之間。在某些實施例中，坎普他汀類似物的濃度介于5mg/ml與 30mg/ml之間。在某些實施例中，坎普他汀類似物的濃度介于8mg/ml與25mg/ml之間。在 關(guān)于任何所述組合物的某些實施例中，坎普他汀類似物包含選自由SEQ ID N0:3、4、5、6和 7組成的群組的肽。在關(guān)于任何所述組合物的某些實施例中，坎普他汀類似物的活性是SEQ ID NO :8的至少100倍。在關(guān)于任何所述組合物的某些實施例中，坎普他汀類似物的活性 是SEQ ID NO :8的至少200倍。在關(guān)于任何所述組合物的某些實施例中，坎普他汀類似物 的序列選自SEQ ID NO :14、21、28、29、30、31、32、33、34和36。在關(guān)于任何所述組合物的某 些實施例中，坎普他汀類似物的序列選自SEQ ID N0:28、32和34。在關(guān)于任何所述組合物 的某些實施例中，組合物基本上由坎普他汀類似物和水組成。在關(guān)于任何所述組合物的某 些實施例中，組合物進一步包含選自氨基酸和糖醇的賦形劑。本發(fā)明提供包含坎普他汀類 似物和水的液體組合物，其中坎普他汀類似物的濃度介于100mg/ml與2000mg/ml之間，例 如介于100mg/ml與1000mg/ml之間，或介于100mg/ml與500mg/ml之間，其中組合物包含 改變組合物特性的組分，以致在投予血管外位置(例如玻璃體腔)后形成的凝膠降解或崩 解比不存在所述組分時快。在一些實施例中，所述組分是選自糖醇和氨基酸的賦形劑。在 一些實施例中，氨基酸是標準氨基酸，例如組氨酸。在一些實施例中，糖醇是甘露醇。在一 些實施例中，所述組分是緩沖劑，例如乙酸鈉。除非另作說明，否則本發(fā)明利用分子生物學、化學、細胞培養(yǎng)、動物養(yǎng)護、醫(yī)學和 獸醫(yī)檢查等標準方法，并使用技術(shù)公認的術(shù)語含義。本申請案參考多種專利和出版物。 本申請案中提及的所有科技論文、書籍、專利、專利申請案和其它出版物的內(nèi)容都以引用 的方式并入本文中。此外，以下出版物都以引用的方式并入本文中當前分子生物學方 案(Current Protocols in Molecular Biology),當前免疫學方案(Current Protocols inlmmunology)，當前蛋白質(zhì)禾斗學方案(Current Protocols in Protein Science)禾口當 前細胞生物學方案(Current Protocols in Cell Biology)，均是紐約約翰威立出版公司 (John ffiley&Sons, N. Y.)，2002 年 7 月出版；薩姆布魯克(Sambrook)，魯塞爾(Russell) 和薩姆布魯克，分子克隆實驗室手冊(Molecular Cloning :A Laboratory Manual), 第3版，冷泉港實驗室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press)，冷泉港(Cold Spring Harbor) ,2001 ；庫比免疫學(Kuby Immunology)，第 4 版，R. A.古斯比(Goldsby， R. A.)，T. J.金迪特(Kindt, T. J.)和 B.奧斯波尼(Osborne, B.)(編)，W. H.弗雷曼公 司(W. H. Freeman)，2000，古德曼和吉爾曼治療學的藥理學基礎(chǔ)(Goodman and Gilman' s ThePharmacological Basis of Therapeutics),第 10 版,麥格勞-希爾出版公司(McGraw Hill),2001, B.卡祖格(Katzung, B.)(編)基礎(chǔ)和臨床藥理學(Basic and Clinical Pharmacology)，麥格勞-希爾 / 艾普頓 & 朗格公司(McGraw-Hill/Appleton&Lange)；第 9 版(2003年12月)；古德曼和奧斯羅(Goldman&Ausiello)，希氏內(nèi)科學(Cecil Textbook of Medicine)，第22版，ff. B.索恩德(ff. B. Saunders)，2003。在并入的任何文獻與本說明 書之間出現(xiàn)沖突或矛盾的情況下，應(yīng)以本說明書(包括其任何修正)為準。除非另作說明， 否則本文中使用技術(shù)認可的氨基酸縮寫。
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圖1顯示從通過玻璃體內(nèi)注射而投予強效坎普他汀類似物的兔的玻璃體取出的 宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)。圖2顯示注射強效坎普他汀類似物后12天(左圖)和8周(右圖)時動物的B 超掃描圖像。沉積物在注射后12天明顯，而在8周后小得多，但仍能檢測到。圖3是經(jīng)染色以顯示沉積物中存在的蛋白質(zhì)連同強效坎普他汀類似物的 SDS-PAGE凝膠。也顯示在注射或不注射坎普他汀類似物情況下于玻璃體內(nèi)所發(fā)現(xiàn)的蛋白 質(zhì)。圖4是繪示沉積物中存在的坎普他汀類似物隨時間保持穩(wěn)定并且保留補體抑制 活性的圖。藍色方形坎普他汀類似物(標準物質(zhì))；綠色方形由從注射后6周的兔玻璃 體取出的凝膠獲得的坎普他汀類似物；褐色菱形由從注射后8個月的兔玻璃體取出的凝 膠獲得的坎普他汀類似物；紅色橢圓形無活性對照肽G8A。圖5是繪示玻璃體內(nèi)注射0、450 ii g、1050 y g或2100 P g化合物后14天所測量的
食蟹猴血清和玻璃體中坎普他汀類似物的濃度的圖。所有值都表示為平均值士標準誤差； 對于每一玻璃體，n = 4，并且對于血清，n = 8。應(yīng)注意，血清的實際值是所示值的1/100， 即，在同一投藥劑量下，是玻璃體濃度的約1/100。
具體實施例方式定義在詳細描述本發(fā)明之前，應(yīng)了解，本發(fā)明不局限于特別舉例說明的系統(tǒng)或參數(shù)，其 當然可以變化。還應(yīng)了解，本文所使用的術(shù)語只是出于描述本發(fā)明特定實施例的目的，而不 打算以任何方式限制本發(fā)明的范圍。為方便讀者，提供以下定義，并且除非具體說明，否則 預期所述定義與此項技術(shù)中此類術(shù)語的用法不沖突。術(shù)語“血管生成抑制劑”與“抗血管生成劑”在本文中可互換使用，以指能夠抑制 或減少一個或多個與新血管形成、生長和/或發(fā)育有關(guān)的過程(包括但不限于，內(nèi)皮細胞增 殖、內(nèi)皮細胞遷移和毛細管形成)的藥劑。此外，所述藥劑可抑制血管中流體滲出。術(shù)語“拮抗劑”是指抑制(例如拮抗、減少、降低、阻斷或逆轉(zhuǎn))給定分子的作用的 化合物。拮抗劑能夠針對特定分子的活性以一定方式起作用，使得以與所述分子的一種或 多種天然作用相拮抗(例如對抗、對立、相反)的方式降低或阻斷所述分子的生物活性。拮 抗劑可包括(但不限于)抗體或其抗原結(jié)合片段、蛋白質(zhì)、肽、核酸(例如RNAi劑、核糖酶 和反義核酸)或小分子。術(shù)語“抗體”是指免疫球蛋白，或其含有能結(jié)合抗原的免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的衍生 物?？贵w可以來源于任何物種，例如人類、嚙齒動物、兔、山羊、雞等?？贵w可以是任一類免 疫球蛋白的成員，包括以下任一人類類別IgG、IgM、IgA、IgD和IgE，或其亞類，例如IgGl、 IgG2等。在本發(fā)明各個實施例中，抗體是片段，例如Fab'、F(ab' )2、scFv(單鏈可變)或 保留抗原結(jié)合位點的其它片段，或重組產(chǎn)生的scFv片段，包括多種重組產(chǎn)生的片段。例如 參看 T 艾倫(Allen，T.)，自然-癌癥評述(Nature Reviews Cancer)，第 2 卷，750-765， 2002，和其中的參考文獻?？贵w可以是單價、二價或多價的?？贵w可以是嵌合抗體或“人化”抗體，其中例如嚙齒動物來源的可變結(jié)構(gòu)域與人類來源的恒定結(jié)構(gòu)域融合，由此保留了嚙 齒動物抗體的特異性。就所述人類來源的結(jié)構(gòu)域最初是人類合成的意義上看，其無需直接 源自于人類。而是，“人類”結(jié)構(gòu)域可在基因組中并入有人類免疫球蛋白基因的嚙齒動物中 產(chǎn)生。例如參看瓦格罕(Vaughan)等人(1998)，自然-生物技術(shù)(Nature Biotechnology)， 16:535-539。抗體可以是部分或完全人化的。抗體可以是多克隆或單克隆抗體，但出于本 發(fā)明的目的，一般優(yōu)選單克隆抗體。此項技術(shù)中已知產(chǎn)生特異性結(jié)合幾乎任何所關(guān)注分子 的抗體的方法。例如，單克隆或多克隆抗體可從產(chǎn)生所述抗體(例如自然暴露于所述分子 或其抗原片段后，或經(jīng)所述分子或其抗原片段免疫后)的動物的血液或腹水純化得到；可 使用重組技術(shù)在細胞培養(yǎng)物或轉(zhuǎn)基因生物體中產(chǎn)生；或可至少部分利用化學合成制備。除非另作說明或另外從上下文中顯而易見，否則有關(guān)數(shù)字時的術(shù)語“大約”或“約” 一般包括在所述數(shù)字的士 10%內(nèi)；在一些實施例中士5%內(nèi)；在一些實施例中士 內(nèi)；在 一些實施例中士 0.5%內(nèi)的數(shù)字(所述數(shù)字不允許超過可能值的100%的情形除外)?！吧锵嗳菪浴钡挠梅ㄅc其在此項技術(shù)中的用法一致，并且指在體外對細胞實質(zhì)上 無毒的物質(zhì)，例如在某些實施例中，如果其添加到培養(yǎng)中的細胞的量接近所預期的體內(nèi)使 用的量，則引起小于或等于20 %的細胞死亡。如果一種物質(zhì)以所用的量在所用的位置對接 受者的細胞和組織實質(zhì)上無毒，并且也不會對接受者的身體造成或引起顯著有害或不利影 響，例如免疫或炎癥反應(yīng)、形成不可接受的瘢痕組織等，則認為此物質(zhì)對于所述接受者是生 物相容的?！吧锟山到狻币馑贾敢环N物質(zhì)能夠例如通過在生理條件下水解，通過天然生物過 程(例如細胞內(nèi)或體內(nèi)存在的酶的作用)等，在細胞內(nèi)或個體體內(nèi)的細胞外區(qū)室內(nèi)物理和/ 或化學分解，而形成可被代謝并且任選再使用和/或排泄或以其它方式處置的較小化學物 質(zhì)?！吧锟山到狻蔽镔|(zhì)的范圍內(nèi)包括在生理條件下消蝕、崩解或退化成較小片段的物質(zhì)，例 如可溶性分子或超分子復合物。生物可降解物質(zhì)優(yōu)選為生物相容性的。“生物大分子”是一種由生物系統(tǒng)中所見的一種類型的較小亞基構(gòu)成的大分子。生 物大分子的實例包括多肽、核酸和多糖。通常，生物大分子含有至少3個亞基(例如氨基酸、 核苷、單糖等)。生物大分子可以(但未必)是天然存在的多肽、核酸或多糖。生物大分子 可經(jīng)修飾，例如其可與例如合成聚合物等非生物分子連結(jié)(conjugated)。“補體組分”或“補體蛋白”是補體系統(tǒng)激活所涉及或參與一種或多種補體介導的 活性的分子。經(jīng)典補體路徑的組分包括例如Clq、Clr、CIs、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9和 C5b-9復合物(也稱為膜攻擊復合物(MAC))，和任何上述的活性片段或酶促裂解產(chǎn)物(例 如C3a、C3b、C4a、C4b、C5a等)。旁路路徑的組分包括例如因子B、因子D、因子I和備解素 (properdin)。凝集素路徑的組分包括例如MBL2、MASP_1和MASP-2。補體組分還包括細胞 結(jié)合受體作為可溶性補體組分。此類受體包括例如C5a受體(C5aR)、C3a受體(C3aR)、補 體受體1(CR1)、補體受體2(CR2)、補體受體3(CR3)等。應(yīng)理解，術(shù)語“補體組分”不打算包 括充當補體激活“觸發(fā)劑”的那些分子和分子結(jié)構(gòu)，例如抗原_抗體復合物、微生物或人工 表面上所見的外來結(jié)構(gòu)等。“補體調(diào)控蛋白”是調(diào)控補體活性所涉及的蛋白質(zhì)，例如哺乳動物蛋白補體因子 H(CFH)?！把a體調(diào)節(jié)蛋白”是包含多個SCR模組的補體調(diào)控蛋白。
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“補體樣蛋白”是序列長度的至少20%與補體蛋白或補體調(diào)節(jié)蛋白具有顯著序列 一致性，和/或與補體蛋白或補體調(diào)節(jié)蛋白特異性競爭與其靶結(jié)合(例如，親和力高達至少 10%)的蛋白質(zhì)。編碼所述蛋白質(zhì)的基因可在緊鄰編碼具有類似序列的補體蛋白或補體調(diào) 節(jié)蛋白的基因處發(fā)現(xiàn)。例如，CFH基因簇含有眾多CFH樣基因(例如CFHR1、CFHR1、CFHR3、 CFHR4 和 CFHR5)。“補體相關(guān)蛋白”總體上指補體組分、補體調(diào)控蛋白和補體樣蛋白；然而，在本發(fā)明 大體上提及補體相關(guān)蛋白時，應(yīng)了解，本發(fā)明涵蓋明確提及補體組分、補體調(diào)控蛋白、補體 樣蛋白和其組合的實施例?；钚詣?例如補體抑制劑)的“有效量”是指足以引起所需生物反應(yīng)(或等同地， 抑制不合需要的生物反應(yīng))的活性劑的量。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，特定藥劑的絕對有 效量可視例如所需生物終點、欲遞送的藥劑、靶組織等因素而變化。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員將進 一步了解，“有效量”可以單一劑量投予，或可通過投予多個劑量實現(xiàn)。例如，有效量可以是 足以減輕病癥的至少一種癥狀的量。有效量可以是足以減緩慢性和進行性病癥的進展，例 如延遲所述病癥表現(xiàn)其一種或多種癥狀或病征的時間，或延遲患有所述病癥的個體達到某 種程度的損傷的時間的量。有效量可以是足以使損傷比不存在所述藥劑時恢復更快或更多 的量。“一致性”是指兩個或兩個以上核酸或多肽相同的程度。在評估窗口內(nèi)，例如在 所關(guān)注序列的長度內(nèi)，所關(guān)注序列與第二序列之間的一致性百分比可通過以下步驟計算 比對所述序列，測定評估窗口內(nèi)為相對一致殘基的殘基(核苷酸或氨基酸)的數(shù)量，從而 允許引入空位(gap)以使一致性最大化，除以所關(guān)注序列或第二序列中落在窗口內(nèi)的殘基 總數(shù)(取較大者)，并乘以100?？瘴灰馑贾感蛄兄形幢粴埢紦?jù)的一部分。當計算達到 特定一致性百分比所需的一致殘基的數(shù)量時，分數(shù)應(yīng)四舍五入為最接近的整數(shù)。一致性百 分比可利用此項技術(shù)中已知的多種計算機程序計算。例如，如BLAST2、BLASTN、BLASTP、 Gapped BLAST等計算機程序產(chǎn)生比對并提供所關(guān)注序列與多個公共數(shù)據(jù)庫中任一個中的 序列之間的一致性百分比。根據(jù)卡林(Karlin)和奧斯舒爾(Altschul)，美國國家科學院 院刊(Proc. Natl. Acad. Sci. USA) 90 :5873_5877，1993中修改的卡林和奧斯舒爾算法(卡 林(Karlin)和奧斯舒爾(Altschul)，美國國家科學院院刊(Proc. Natl. Acad. Sci. USA) 87 22264-2268，1990)被并入到奧斯舒爾等人的NBLAST和XBLAST程序中(奧斯舒爾等人，分 子生物學雜志(J. Mol. Biol.) 215 =403-410,1990) 為獲得帶空位的比對以供比較，利用 奧斯舒爾等人中所述的GappedBLAST (奧斯舒爾等人，核酸研究(Nucleic Acids Res.) 25 3389-3402,1997) 0當利用BLAST和Gapped BLAST程序時，可使用各自程序的默認參數(shù)?？?使用PAM250或BL0SUM62矩陣。有關(guān)這些程序，參看網(wǎng)頁URL www, ncbi. nlm. nih. rov0在 具體實施例中，使用利用默認參數(shù)的BLAST2計算所關(guān)注序列與第二序列的一致性百分比。術(shù)語“分離的”意思指1)與至少一些通常在自然界與其締合的組分分開；2)通過 涉及人工的方法制備或純化；和/或3)自然界中不存在。例如，從產(chǎn)生分子的細胞中取出 所述分子，即為“分離的”?；瘜W合成的分子是“分離的”。術(shù)語“聯(lián)接的”用于兩個或兩個以上部分時，意思指所述部分彼此以物理方式締合 或連接，形成足夠穩(wěn)定的分子結(jié)構(gòu)，以致所述部分在形成聯(lián)接的條件下，并且優(yōu)選在使用新 分子結(jié)構(gòu)的條件下，例如在生理條件下，保持締合。在本發(fā)明某些優(yōu)選實施例中，聯(lián)接是共價聯(lián)接。在其它實施例中，聯(lián)接是非共價的。各部分可直接或間接聯(lián)接。當兩個部分直接 聯(lián)接時，其彼此共價鍵結(jié)或足夠緊鄰以致兩個部分之間的分子間力保持其締合。當兩個部 分間接聯(lián)接時，其各自共價或非共價聯(lián)接至第三部分，所述第三部分保持兩個部分之間的 締合。一般當提及兩個部分是通過“聯(lián)接基團”或“聯(lián)接部分”聯(lián)接時，這兩個被聯(lián)接的部分 之間的聯(lián)接是間接的，并且通常被聯(lián)接的部分各自共價鍵結(jié)至聯(lián)接基團。聯(lián)接基團可以是 與欲聯(lián)接的兩個部分在合理時間段內(nèi)在符合所述部分(必要時，其取決于條件可經(jīng)保護) 的穩(wěn)定性的條件下足量反應(yīng)，產(chǎn)生合理產(chǎn)率的任何合適部分?！耙后w組合物”是指包含至少一種在室溫下為液體的化學物質(zhì)的組合物。液體組合 物可含有治療劑。治療劑可例如溶解、混懸或分散于其中。治療劑的存在形式可以是點綴 著液體分子的個別分子，或是微觀或宏觀聚集體或粒子等，只要所述聚集體或粒子不妨礙 組合物作為液體的易流動性即可。關(guān)于組合物或藥劑遞送的“局部投藥”或“局部遞送”是指不通過血管系統(tǒng)將所述 組合物或藥劑運送到其預定靶組織或位點的遞送。組合物或藥劑可直接遞送到其預定靶組 織或位點，或其附近，例如緊鄰預定靶組織或位點。例如，組合物可經(jīng)組合物的注射或輸注 遞送。在緊鄰靶組織或位點局部投藥后，組合物或者其一種或多種組分可擴散到預定靶組 織或位點。應(yīng)了解，在局部遞送后，一部分治療劑(通常僅極小部分投藥劑量)可能進入血 管系統(tǒng)，并被運送到另一位置，包括運送回其預定靶組織或位點?！熬植考せ睢笔侵冈谘芟到y(tǒng)外發(fā)生的補體激活?！岸鄠€(種)，，意思指多于一個(種)。如本文所使用，“多肽”是指氨基酸聚合物，任選包括一個或多個氨基酸類似物。蛋 白質(zhì)是由一個或多個多肽構(gòu)成的分子。肽是相對較短的多肽，長度通常介于約2個與60個 氨基酸之間，例如長度介于8個與40個氨基酸之間。術(shù)語“蛋白質(zhì)”、“多肽”和“肽”可互換 使用。本文使用的多肽可含有例如蛋白質(zhì)中天然可見的氨基酸、蛋白質(zhì)中非天然可見的氨 基酸，和/或不為氨基酸的氨基酸類似物。如本文所使用，一種氨基酸的“類似物”可以是結(jié) 構(gòu)與所述氨基酸類似的不同氨基酸，或結(jié)構(gòu)與所述氨基酸類似的除氨基酸外的化合物。已 知大量技術(shù)認可的在蛋白質(zhì)中常見的20種氨基酸(“標準”氨基酸)的類似物?？衫缤?過添加化學實體，如碳水化合物基團、磷酸酯基、法呢基、異法呢基、脂肪酸基團、用于連結(jié)、 官能化或其它修飾的聯(lián)接基團等，來修飾多肽中的一個或多個氨基酸。某些合適的非限制 性類似物和修飾描述于PCT公開案W02004026328和W02007062249中。多肽可例如在N末 端乙?；?或例如在C末端酰胺化。修飾可以在多肽中任何地方進行，包括肽主鏈、氨基 酸側(cè)鏈和氨基或羧基末端。給定多肽可含有許多類修飾。多肽可為分支的，和/或環(huán)狀，其 中可存在或不存在分支。多肽可例如從天然來源純化得到；在合適表達系統(tǒng)中(例如通過 重組宿主細胞或在轉(zhuǎn)基因動物或植物中)使用重組DNA技術(shù)，在體外或體內(nèi)于合適表達系 統(tǒng)中產(chǎn)生；通過例如常規(guī)固相肽合成和/或涉及所合成肽化學連接(chemical ligation) 的方法等化學方式合成(例如參看S.肯特(Kent，S.)，肽科學雜志(JP印t Sci.),9(9) 574-93，2003)，或上述任何組合。眾所周知這些方法，并且所屬領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠選擇并 實施合成本文所述肽和多肽的合適方法。多肽可包含一個或多個化學連接位點，如例如美 國公開案第20040115774號中所述。在某些實施例中，使用一種或多種這一公開案中所述 或參考的方法，用聚合物修飾本發(fā)明多肽。如本文所使用，術(shù)語“多肽序列”或“氨基酸序
16列”可以指多肽物質(zhì)本身，并且不限于以生物化學方式表征多肽的序列信息(即，選自用作 氨基酸名稱縮寫的字母和代碼的連續(xù)字母或三字母代碼)。除非另作說明，否則本文提供的 多肽序列是沿N末端到C末端方向呈現(xiàn)。如本文所使用，“純化的”意思指實體或物質(zhì)與先前在未純化之前與其一起發(fā)現(xiàn)的 一個或多個其它實體或物質(zhì)分開。實體或物質(zhì)可以是部分純化、實質(zhì)上純化或純的。當將物 質(zhì)或?qū)嶓w(例如核酸或多肽)從除溶劑和溶劑中所含的任何離子外實質(zhì)上所有其它化合物 或?qū)嶓w移出時，認為其是純的，即，其占組合物干重至少約90%、更優(yōu)選至少約91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或高于99%。部分或?qū)嵸|(zhì)上純化的化合物或?qū)嶓w (例如核酸或多肽)可從至少50重量％、至少60重量％、至少70重量％或至少80重量％ 天然與其一起發(fā)現(xiàn)的物質(zhì)(例如細胞物質(zhì)如細胞蛋白和/或核酸)移出。在某些實施例 中，分別以組合物中總核酸或多肽的干重計，純化的核酸或多肽占至少約10%、20%、30%、 40%,50%,60%,70%,80%,90%,95%、99%或甚至更多。此項技術(shù)中已知評定純度的方 法，并且包括色譜分析法、免疫法、電泳法等。本文所述任何多核苷酸或多肽都可為純化的。如本文所使用，“反應(yīng)性官能團”是指包括(但不限于)以下的基團烯烴、炔烴、 醇、酚、醚、氧化物、商化物、醛、酮、羧酸、酯、酰胺、氰酸酯、異氰酸酯、硫氰酸酯、異硫氰酸 酯、胺、胼、腙、酰胼、重氮基、重氮鹽、硝基、腈、硫醇、硫化物、二硫化物、亞砜、砜、磺酸、亞磺 酸、縮醛、縮酮、酸酐、硫酸酯、次磺酸異腈、脒、酰亞胺、亞氨酯(imidate)、硝酮(nitrone)、 羥胺、肟、異羥肟酸硫代異羥肟酸、聯(lián)烯(allene)、原酸酯、亞硫酸酯、烯胺、炔胺、脲、假脲、 氨基脲、碳化二亞胺、氨基甲酸酯、亞胺、疊氮化物、偶氮化合物、氧化偶氮基化合物和亞硝 基化合物。反應(yīng)性官能團還包括常用于制備生物連結(jié)物(bioconjugate)的官能團，例如 N-羥基琥珀酰亞胺酯、順丁烯二酰亞胺、硫氫基等(例如參看G.赫曼森(Hermanson，G.)， 生物連結(jié)物技術(shù)(BioconjugateTechniques)，圣地亞哥學術(shù)出版社(Academic press, San Diego)，1996)。此項技術(shù)中眾所周知制備每一所述官能團的方法，并且其對于特定目的 的應(yīng)用或修飾都在所屬領(lǐng)域技術(shù)人員的技能范圍內(nèi)(例如參看薩德勒(Sandler)和卡洛 (Karo)編，有機官能團制備(ORGANIC FUNCTIONAL GROUP PREPARATIONS)，圣地亞哥學術(shù)出 版社(Academic press, San Diego)，1989)。術(shù)語“RNA干擾”或“RNAi，，于本文中如此項技術(shù)中所理解一般使用，例如，其是指 通過在靶細胞或生物體中引入或表達序列符合所關(guān)注基因的雙鏈RNA(dsRNA，稱為“RNAi 劑”)，尤其含有與所關(guān)注基因的信使RNA互補的鏈的短雙鏈RNA(siRNA)，來降低基因或基 因產(chǎn)物的表達的任何方法?！疤禺愋越Y(jié)合” 一般是指靶多肽(或更一般地說，靶分子)與結(jié)合分子(例如抗體 或配體)之間的物理締合。所述締合通常依賴于可由結(jié)合分子識別的靶的特定結(jié)構(gòu)特征 (例如抗原決定簇、表位、結(jié)合口袋或裂隙)的存在。例如，如果抗體對表位A具特異性，則 含有表位A的多肽的存在，或在含有游離的標記A和與其結(jié)合的結(jié)合分子的反應(yīng)中游離的 未標記A的存在，將降低與結(jié)合分子結(jié)合的標記A的量。應(yīng)了解，特異性不需要是絕對的， 而一般是指發(fā)生結(jié)合的情形。例如，此項技術(shù)中眾所周知，眾多抗體除與靶分子中存在的表 位反應(yīng)外，還與其它表位交叉反應(yīng)。取決于欲使用抗體的應(yīng)用，所述交叉反應(yīng)性可以是可接 受的。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠選擇特異性程度足以適合在任何給定應(yīng)用(例如檢測靶分 子、治療目的等)中進行的抗體或配體。還應(yīng)了解，可在額外因素的情形中，例如結(jié)合分子對靶的親和力相對于結(jié)合分子對其它靶(例如競爭劑)的親和力，評估特異性。如果結(jié)合 分子對需要檢測的靶分子展現(xiàn)高親和力并且對非靶分子展現(xiàn)低親和力，則所述抗體將很可 能為可接受的試劑。在從一個或多個情形中確立結(jié)合分子的特異性后，即可將其用于其它、 優(yōu)選類似的情形，而無需再評估其特異性。如果在所測試的條件下，例如在生理條件下，平 衡離解常數(shù)(Kd)為10_3M或更小，優(yōu)選為10_4M或更小，更優(yōu)選為10_5M或更小，例如為10_6M 或更小、10_7M或更小、10_8M或更小，或10_9M或更小，則可認為兩個或兩個以上分子的結(jié)合 是特異性的?！帮@著序列一致性”用于氨基酸序列時，意思指所述序列與參考序列至少約20%、 30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或95%—致。在具體實施例中，用于氨基酸序列時， 意思指所述序列與參考序列至少約70%、80%、85%、90%、95%、98%或99%—致。在具體 實施例中，相對于參考序列，保守性置換至少20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %、90 % 或95%的非一致氨基酸。可根據(jù)L.夏爾(Shyer，L.)，生物化學(Biochemistry)，第3版， 1988，確定保守置換，根據(jù)所述文獻，以下群組中的氨基酸在例如電荷、疏水性、芳香性等側(cè) 鏈特性方面具有類似特征(1)脂肪族側(cè)鏈G、A、V、L、I ； (2)芳香族側(cè)鏈F、Y、W ； (3)含 硫側(cè)鏈C、M;(4)脂肪族羥基側(cè)鏈S、T; (5)堿性側(cè)鏈1(、1 、11;(6)酸性氨基酸D、E、N、Q; (7)環(huán)狀脂肪族側(cè)鏈P，其可視為屬于群組(1)。在另一公認的分類中，保守取代發(fā)生于以 下群組內(nèi)(1)非極性A、L、I、V、G、P、F、W、M;(2)極性S、T、C、Y、N、Q ； (3)堿性K、R、H; ⑷酸性D、E。具有較小側(cè)鏈的氨基酸(G、A、S、T、M)也形成可進行保守取代的群組。此 項技術(shù)中已知的其它分類方法也可使用。此外，可根據(jù)這些方案，對氨基酸類似物和非天然 氨基酸進行分類。如本文所使用，“個體”是指欲遞送藥劑例如以達到實驗、診斷和/或治療目的的個 體。除非另作說明，否則個體為哺乳動物，例如家養(yǎng)哺乳動物，如狗、貓、兔等；非人類靈長類 動物，或人類。如本文提及補體組分時所使用，“全身的(systemic) ”是指由肝細胞合成并進入血 流中，或由循環(huán)巨噬細胞或單核細胞合成并分泌到血流中的補體蛋白。“治療劑”在本文中用于指適用于治療病癥的任何藥理學活性劑。所述術(shù)語包括 任何醫(yī)藥學上可接受的鹽、前藥、前藥的鹽，以及此項技術(shù)中已知的或使用此項技術(shù)中已知 的標準方法容易制備的所述藥劑的衍生物?！扒八帯笔侵杆巹┑那绑w，其中前藥本身不具有 藥理學活性(或活性比藥物的所需活性低或與其不同)，但在投藥后轉(zhuǎn)化(例如通過代謝) 成醫(yī)藥學上活性藥物。治療劑可以是(不限于)小分子或生物大分子，例如多肽、抗體，或 核酸，如適配子、RNAi劑(例如小干擾RNA(siRNA))等。在本文中，治療劑有時被稱為“活 性劑”或“藥物”。小分子通常是分子量為1，500道爾頓(Dalt0n，Da)或更小，例如1，OOODa 或更小，例如500Da或更小，并且具有多個碳-碳鍵的有機化合物。如本文所使用，“治療”是指提供治療，S卩，對個體提供任何類型的醫(yī)學或手術(shù)處 理?？商峁┲委熞员隳孓D(zhuǎn)、緩解疾病、病癥或病況；抑制其進展；預防或降低其可能性，或以 便逆轉(zhuǎn)、緩解疾病、病癥或病況的一種或多種癥狀或表現(xiàn)；抑制或防止其進展；預防或降低 其可能性?！邦A防”是指使至少一些個體在至少一段時間內(nèi)不會出現(xiàn)疾病、病癥、病況或者其 癥狀或表現(xiàn)。治療可包括在發(fā)展出指示補體介導的病況的一種或多種癥狀或表現(xiàn)后，對個 體投予藥劑，例如以便逆轉(zhuǎn)、緩解、降低所述病況的嚴重程度，和/或抑制或防止其進展，和
18/或逆轉(zhuǎn)、緩解、降低所述病況的一種或多種癥狀或表現(xiàn)的嚴重程度，和/或抑制或所述病 況的一種或多種癥狀或表現(xiàn)。本發(fā)明組合物可投予已發(fā)展補體介導的病癥或相對于一般群 體的成員發(fā)展此類病癥的風險較高的個體。本發(fā)明組合物可出于預防目的投予，即，在發(fā)展 出所述病況的任何癥狀或表現(xiàn)前投予(例如，投予具有至少一個發(fā)展所述病況的風險因子 的個體)。如本文所使用，“烷基”是指具有約1到約22個碳原子(以及其中碳原子范圍和具 體個數(shù)的所有組合和子組合)的飽和直鏈、支鏈或環(huán)狀烴，其中在本發(fā)明某些實施例中，優(yōu) 選為約1到約12個，或約1到約7個碳原子。烷基包括(但不限于)甲基、乙基、正丙基、 異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、環(huán)戊基、異戊基、新戊基、正己基、異己基、環(huán)己基、 環(huán)辛基、金剛烷基、3-甲基戊基、2，2-二甲基丁基和2，3-二甲基丁基。如本文所使用，“鹵基”是指F、CI、Br或I。如本文所使用，“烷酰基”是指具有約1到10個碳原子(以及其中碳原子范圍和 具體個數(shù)的所有組合和子組合)，例如約1到7個碳原子的任選取代的直鏈或支鏈脂肪族無 環(huán)殘基。烷?；?但不限于)甲酰基、乙?；?、丙?；⒍□；惗□；⑽祯；愇??；?-甲基-丁?；?，2_ 二甲氧基丙?；?、己?；⒏；⑿刘；??！暗吞紨?shù)烷?；?是指具有約1到約5個碳原子(以及碳原子范圍和具體個數(shù)的所有組合和子組合)的任選 取代的直鏈或支鏈脂肪族無環(huán)殘基。此類基團包括(但不限于)甲?；⒁阴；⒈；?、 丁?；?、異丁?；⑽祯；?、異戊?；?。如本文所使用，“芳基”是指具有約5到約14個碳原子(以及其中碳原子范圍和 具體個數(shù)的所有組合和子組合)的任選取代的單環(huán)或雙環(huán)芳香族環(huán)系統(tǒng)，其中優(yōu)選具有約 6到約10個碳。非限制性實例包括例如苯基和萘基。如本文所使用，“芳烷基”是指帶有芳基取代基的烷基并且具有約6到約22個碳原 子(以及其中碳原子范圍和具體個數(shù)的所有組合和子組合)，其中在某些實施例中優(yōu)選具 有約6到約12個碳原子。芳烷基可任選經(jīng)取代。非限制性實例包括例如苯甲基、萘甲基、
二苯甲基、三苯甲基、苯乙基和二苯乙基。如本文所使用，術(shù)語“烷氧基”是指任選取代的烷基-0-基團，其中烷基如先前所 定義。例示性烷氧基包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基和庚氧基。如本文所使用，“羧基”是指-C ( = 0) 0H基團。如本文所使用，“烷氧羰基”是指_C( = 0)0-烷基，其中烷基如先前所定義。如本文所使用，“芳?；笔侵竉C( = 0)_芳基，其中芳基如先前所定義。例示性芳 酰基包括苯甲?；洼良柞；?。通常，經(jīng)取代的化學部分包括一個或多個替代氫的取代基。例示性取代基包 括例如鹵基、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基、硫氫基、羥基(-0H)、烷氧基、氰基(-CN)、羧基 (-C00H)、-C( = 0)0-烷基、氨基羰基(-C( = 0)NH2)、-N經(jīng)取代的氨基羰基(_C( = 0) NHR" )、〔&、〔&〔&等。關(guān)于上文所述的取代基，各部分R"可獨立地為例如H、烷基、環(huán)烷 基、芳基或芳烷基中任一個。如本文所使用，“L-氨基酸”是指通常存在于蛋白質(zhì)中的任何天然存在的左旋 a-氨基酸，或所述a-氨基酸的烷基酯。術(shù)語“D-氨基酸”是指右旋a-氨基酸。除非另 作說明，否則本文中所提及的所有氨基酸都是L-氨基酸。
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如本文所使用，“芳香族氨基酸”是包含至少一個芳香環(huán)的氨基酸，例如其包含一 個芳基。如本文所使用，“芳香族氨基酸類似物”是包含至少一個芳香環(huán)的氨基酸類似物， 例如其包含一個芳基。
具體實施例方式由凝膠狀結(jié)構(gòu)持續(xù)釋放坎普他汀類似物本發(fā)明涉及通過由凝膠狀結(jié)構(gòu)釋放坎普他汀類似物來持續(xù)遞送所述坎普他汀類 似物，所述凝膠狀結(jié)構(gòu)是在將包含坎普他汀類似物的液體組合物引入哺乳動物個體體內(nèi)的 血管外位置(例如玻璃體腔)中后形成。本發(fā)明還涉及通過由凝膠狀結(jié)構(gòu)釋放坎普他汀類 似物來持續(xù)遞送所述坎普他汀類似物，所述凝膠狀結(jié)構(gòu)是在使包含坎普他汀類似物的液體 組合物與身體物質(zhì)接觸后形成。所述身體物質(zhì)通常是除血液(或源自血液的物質(zhì)，例如血 漿或血清)或尿液外的其它流體或含流體物質(zhì)。例如，所述物質(zhì)可以是玻璃體液。所述身體物質(zhì)通常含有蛋白質(zhì)、無機或有機離子，和/或糖胺聚糖。這些成分中有 一種或多種可起始或促成凝膠狀結(jié)構(gòu)的形成。在本發(fā)明某些實施例中，凝膠狀結(jié)構(gòu)含有一 種或多種在身體物質(zhì)中所見的內(nèi)源性蛋白質(zhì)或糖胺聚糖，其中所述內(nèi)源性蛋白質(zhì)或糖胺聚 糖是在凝膠狀結(jié)構(gòu)于體內(nèi)形成時并入其中。本發(fā)明還涉及通過將含有治療劑和坎普他汀類似物的液體組合物引入哺乳動物 個體體內(nèi)的血管外位置，由此形成凝膠狀結(jié)構(gòu)，來持續(xù)遞送治療劑。本發(fā)明還涉及通過由凝 膠狀結(jié)構(gòu)釋放治療劑來持續(xù)遞送所述治療劑，所述凝膠狀結(jié)構(gòu)是在使包含坎普他汀類似物 和治療劑的液體組合物與身體物質(zhì)(例如含蛋白質(zhì)的身體物質(zhì))接觸后形成。所述身體物 質(zhì)通常是除血液(或源自血液的流體，例如血漿或血清)或尿液外的其它流體或含流體物 質(zhì)。例如，所述物質(zhì)可以是玻璃體液。本發(fā)明還涉及一種通過使包含坎普他汀類似物的液體組合物與一種或多種足以 驅(qū)使凝膠形成的蛋白質(zhì)、離子或糖胺聚糖或其組合接觸，而在身體外部(離體)形成的凝膠 狀結(jié)構(gòu)。所述蛋白質(zhì)、離子或糖胺聚糖的結(jié)構(gòu)或序列可與例如玻璃體腔、滑膜腔等體腔中天 然所見的那些類似或基本上相同。凝膠狀結(jié)構(gòu)可進一步含有額外治療劑。本發(fā)明進一步涉 及通過對有需要的個體投予凝膠狀結(jié)構(gòu)，例如通過將其注射、植入或施用于需要補體抑制 的部位，來持續(xù)遞送坎普他汀類似物以及任選使用的額外治療劑。在本發(fā)明某些實施例中，液體組合物的特征在于，除坎普他汀類似物外，其缺乏形 成凝膠的物質(zhì)。如果組合物中刪除掉坎普他汀類似物，則在存在適量坎普他汀類似物時 (例如在玻璃體內(nèi)注射后)將易于形成凝膠狀結(jié)構(gòu)的情況下，將液體組合物投予個體后不 會形成凝膠狀結(jié)構(gòu)。在本發(fā)明某些實施例中，液體組合物的特征在于，其含有形成凝膠的物 質(zhì)，但所述物質(zhì)并非以足量存在，以致在不存在坎普他汀類似物時，在存在適量坎普他汀類 似物時(例如在玻璃體內(nèi)注射后)將易于形成凝膠狀結(jié)構(gòu)的情況下，不會形成凝膠。因此， 在本發(fā)明某些實施例中，液體組合物不同于含有例如膠原蛋白、合成聚合物等形成凝膠的 物質(zhì)的組合物，所述形成凝膠的物質(zhì)可以足量包括在其它坎普他汀類似物調(diào)配物中，以在 不存在坎普他汀類似物的情況下能形成凝膠。在本發(fā)明某些實施例中，液體組合物基本上由坎普他汀類似物和一種或多種在室溫下呈液態(tài)的化學物質(zhì)(例如水)組成。在某些實施例中，以干重計，組合物的至少50%、 至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或 至少99%由坎普他汀類似物組成。在一些實施例中，液體組合物含有水和有機溶劑。在一 些實施例中，液體組合物除坎普他汀類似物外，還包含無機離子、緩沖劑、增溶劑或其組合， 其中所述組合物在無坎普他汀類似物的情況下，投藥后不會形成凝膠狀結(jié)構(gòu)。液體組合物 任選包含坎普他汀類似物和一種或多種額外治療劑。本發(fā)明還涉及調(diào)節(jié)利用包含坎普他汀類似物的液體組合物形成凝膠的方法，和/ 或調(diào)節(jié)由包含坎普他汀類似物的液體組合物所形成的凝膠的特性的方法，和測試試劑以確 定其是否合意地調(diào)節(jié)一種或多種凝膠特性和/或一種或多種形成特征(例如凝膠形成或消 失的速率、密度、稠度、坎普他汀類似物含量、坎普他汀類似物釋放速率等)的方法。所述方 法包括制備包含坎普他汀類似物、液體物質(zhì)(例如水)和測試劑的液體組合物；將液體組 合物投予哺乳動物個體的血管外位置(例如玻璃體腔)；和評定投藥后組合物在體內(nèi)的一 種或多種特性。所述方法可用于鑒別合意地影響凝膠和/或其形成的一種或多種特性的試 劑。待測試的試劑包括標準賦形劑、粘度調(diào)節(jié)劑、無機和有機離子、緩沖劑等。本發(fā)明一方面是液體組合物，其包含坎普他汀類似物、液體物質(zhì)以及凝膠或凝膠 形成的一種或多種特性的調(diào)節(jié)劑?？财账∈且环N環(huán)狀肽，其結(jié)合至補體組分C3并抑制補體激活。美國專利第 6，319，897 號描述一種具有序列 Ile-[Cys-Val-Val-Gln-Asp-Trp-Gly-His-His-Arg-Cy s]-Thr(SEQ ID NO 44)的肽，其中兩個半胱氨酸之間的二硫鍵由括號表示。應(yīng)了解，美 國專利第6，319，897號中未使用“坎普他汀”這一名稱，但在隨后的科技文獻和專利文獻 (例如參看默瑞斯(Morikis)等人，蛋白質(zhì)科學(Protein Sci.),7(3) =619-27,1998)中 采用，指序列與美國專利第6，319，897號中所揭示的SEQ ID NO :2相同，但如表1中所示 在C末端酰胺化的肽(SEQ ID N0:8)。術(shù)語“坎普他汀”在本文中的用法與所述用法相 符(即，指SEQ ID N0:8)。已開發(fā)出補體抑制活性高于坎普他汀的坎普他汀類似物。例 如參看 W02004/026328(PCT/US2003/029653) ；D.默瑞斯(Morikis, D.)等人，生物化學 學會快報(Biochem Soc Trans.) 32 (Pt 1) :28_32，2004 ;B.默里克(Mallik，B.)等人， 醫(yī)藥化學雜志(J. Med. Chem. )，274-286，2005 ；M.卡特拉格達(Katragadda，M.)等人，醫(yī) 藥化學雜志(J. Med. Chem.) ,49 4616-4622, 2006 ；W02007062249 (PCT/US2006/045539)； W02007044668 (PCT/US2006/039397) ；USSN 11/544，389 (用于眼病的坎普他汀和其類似物 (Compstatin and Analogs Thereof for Eye Disorders))，禾口下文白勺論述。本發(fā)明至少部分源自于意外的發(fā)現(xiàn)玻璃體內(nèi)投予含有存于水中的強效坎普他汀 類似物的液體組合物，導致形成玻璃體內(nèi)宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)，也稱為“沉積物”或簡稱為“凝 膠”(參看圖1)。如本文所使用，“凝膠狀”是指凝膠或具有凝膠所特有的物理特性的任何 物質(zhì)組合物(例如明膠)。因此，術(shù)語“凝膠狀”旨在描述膠狀或膠凝結(jié)構(gòu)的物理性質(zhì)，而不 是代表特定物理結(jié)構(gòu)。例示性物理特性是粘度、彈性、硬度和可壓縮性。術(shù)語“凝膠狀”包 括(但不限于)可具有與膠體化學領(lǐng)域技術(shù)人員一般所認為屬于凝膠的相同的均勻結(jié)構(gòu)的 組合物，其中凝膠可定義為互連粒子(通常是納米級)的多孔網(wǎng)絡(luò)覆蓋液體介質(zhì)整個體積 的膠體系統(tǒng)。血管外位置可含有身體物質(zhì)，其可具有不同粘度。所述物質(zhì)可以是體液。就 稠度來說，所述物質(zhì)本身可至少略呈凝膠狀。在本發(fā)明某些實施例中，在投予坎普他汀類似物后形成的凝膠狀結(jié)構(gòu)具有比形成所述凝膠狀結(jié)構(gòu)的血管外位置的內(nèi)含物高的粘度和更 高的固體稠度(solid consistency)。本發(fā)明的發(fā)明人認識到，所述沉積物可用作坎普他汀類似物的獨特持續(xù)遞送系 統(tǒng)。已發(fā)現(xiàn)，沉積物含有較大部分所投予的坎普他汀類似物，并且所述化合物保留活性并隨 時間被釋放。沉積物是離散結(jié)構(gòu)，通?？稍谄湫纬珊罅⒓唇馄蕰r并且當使用濃度足夠高的 坎普他汀類似物時，將其與玻璃體物質(zhì)分離。隨時間推移和/或如果使用較低濃度，則凝膠 不夠“堅固”，而且柔軟并在處理后容易裂開，這與其隨時間崩解一致。在本發(fā)明某些實施例 中，凝膠近似呈球形，并且實質(zhì)上呈半透明。在某些實施例中，宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)的尺寸和/ 或密度(如使用超聲波掃描術(shù)觀察到的)隨時間減小，并釋放出活性形式的坎普他汀類似 物，以便達到治療濃度，持續(xù)至少2周、至少4周、至少2個月、至少3個月、至少6個月、至 少9個月或至少12個月(例如在不同實施例中，達約3、6、9、12、18或24個月)。血管外位 置可以是可含有流體或半流體身體物質(zhì)的離散小室、區(qū)室或腔。所述位置可為玻璃體腔、滑 膜腔、鞘內(nèi)腔等。所述小室、腔或區(qū)室內(nèi)可至少部分排列有，或可含有在補體介導的病癥中 補體對其施加不合需要的作用的組織。在一些實施例中，所述組織不與所述小室的內(nèi)部直 接接觸，但與其足夠接近，以致補體抑制劑可擴散到浸浴所述組織的細胞外流體中。例如， 所述組織可鄰近所述區(qū)室的內(nèi)層，例如與所述區(qū)室內(nèi)層的距離在10mm到20mm內(nèi)，在一些實 施例中在5mm至lj 10mm內(nèi)、在1mm至lj 5mm內(nèi)、在0. 5mm至lj 1mm內(nèi)、在0. 1mm至lj 0. 5mm內(nèi)或在小 于.1mm內(nèi)，并且不經(jīng)會阻礙補體抑制劑擴散到組織的屏障分開?？蓽y量血管外位置內(nèi)所發(fā) 現(xiàn)的物質(zhì)內(nèi)(例如玻璃體液)或其內(nèi)排列的組織內(nèi)或鄰近組織內(nèi)治療劑的濃度。在某些實施例中，宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)在至少2周、至少4周、至少2個月、至少3個 月、至少6個月、至少9個月或至少12個月(例如在不同實施例中，達約3、6、9、12、18或24 個月)內(nèi)仍易于檢測到。應(yīng)了解，個體之間可能存在差異，并且上述值可反映所研究的個體 群體中的平均值。“易于檢測到”意思指可⑴通過標準檢眼鏡檢查；(ii)不經(jīng)放大利用解 剖；和/或(iii)使用超聲波成像，看到沉積物。在一些實施例中，沉積物的初始直徑(或 者最長軸的尺寸，或表面上兩個點之間的最大距離)為約5mm，但取決于例如所投予的液體 組合物的體積和坎普他汀類似物的濃度，所述直徑可更小或更大。在一些實施例中，宏觀凝 膠狀結(jié)構(gòu)的直徑(或者最長軸的尺寸，或表面上兩個點之間的最大距離)保持在至少1mm， 持續(xù)至少2周、至少4周、至少2個月、至少3個月、至少6個月、至少9個月或至少12個月 (例如在不同實施例中，達約3、6、9、12、18或24個月)。通常，僅一部分所投予的坎普他汀類似物被捕獲在沉積物內(nèi)。當所注射的化合物 的濃度和總量增加時，隨后在沉積物中發(fā)現(xiàn)的投藥劑量的分率也增加。在本發(fā)明某些實施 例中，在沉積物中最初保留至少25 %的投藥劑量。例如，在某些實施例中，介于25 %與50 % 之間，或介于50%與75%之間量的所投予的坎普他汀類似物保留在沉積物中。在本發(fā)明某 些實施例中，在沉積物中最初保留介于75%與90%之間量的所投予的坎普他汀類似物。應(yīng) 了解，個體之間可能存在差異，并且上述值可反映所研究的個體群體中的平均值。沉積物在所測試的劑量下明顯無毒，并且看起來似乎不會改變眼睛的正常生理機 能或干擾視力。其除含有坎普他汀類似物外，還含有通常存在于玻璃體內(nèi)的蛋白質(zhì)。沉積 物可存留較長時間段，在此期間，其釋放坎普他汀類似物。如本文所使用，“釋放” 一般是指 使沉積物的外部(例如體內(nèi))能獲得活性劑(例如坎普他汀類似物)，但并不隱含發(fā)生所述
22過程的任何特定機制。例如，隨著沉積物降解或崩解，通過將所述藥劑擴散到沉積物外等， 可發(fā)生釋放。所釋放的坎普他汀類似物保留相當大活性。在一些實施例中，以摩爾濃度計， 所釋放的坎普他汀類似物保留至少50%的所投予化合物的活性(例如原有活性的50%到 75%,75%|lj 95%,95%|lj 100%。因此，沉積物提供坎普他汀類似物的儲庫，并提供一種新穎的持續(xù)遞送方式。預期 當將包含坎普他汀類似物的液體組合物引入含有體液(例如滑膜腔、滑膜囊、顱腔、顱腔中 的腦室、鞘內(nèi)腔等中存在的體液)的血管外位置中時，可在體內(nèi)形成與玻璃體內(nèi)投藥后所 形成的沉積物類似的凝膠狀沉積物。所述沉積物將含有坎普他汀類似物，和一種或多種存 在于所述位置所發(fā)現(xiàn)的各自體液中的物質(zhì)，例如離子、蛋白質(zhì)或糖胺聚糖。還預期，可由包 含坎普他汀類似物和一種或多種蛋白質(zhì)、離子或糖胺聚糖(與在體內(nèi)于血管外位置所發(fā)現(xiàn) 的那些類似或相同)的液體組合物，離體形成凝膠狀沉積物。本發(fā)明另外提供一種治療補體介導的病癥的方法，其包含以下步驟將包含有效 量坎普他汀類似物的液體組合物投予個體的血管外位置，其中所述有效量足以在所述血管 外位置內(nèi)形成含有所述坎普他汀類似物的離散的宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)。在本發(fā)明某些實施例 中，例如通過玻璃體內(nèi)注射，將組合物投予玻璃體腔中。在某些實施例中，使用27號到30 號針。本發(fā)明另外提供一種凝膠狀物質(zhì)，其包含坎普他汀類似物，和一種或多種在哺乳 動物個體的血管外位置天然發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)、離子和/或糖胺聚糖(GAG)。在一個實施例中， 蛋白質(zhì)、離子和/或糖胺聚糖通常是在玻璃體液中發(fā)現(xiàn)。在另一實施例中，蛋白質(zhì)、離子和 /或糖胺聚糖通常是在滑膜液中發(fā)現(xiàn)。在另一實施例中，蛋白質(zhì)、離子和/或糖胺聚糖通常 是在腦脊髓液(CSF)中發(fā)現(xiàn)。在本發(fā)明某些實施例中，凝膠狀物質(zhì)含有至少2、3、4、5、6、7、 8、9、10種或更多種不同的蛋白質(zhì)和/或GAG。在本發(fā)明某些實施例中，蛋白質(zhì)或GAG不是 此項技術(shù)中常用于制備持續(xù)釋放組合物的物質(zhì)。在本發(fā)明某些實施例中，蛋白質(zhì)或GAG不 是此項技術(shù)中已知的治療劑。在本發(fā)明某些實施例中，凝膠狀物質(zhì)存在于個體中或從個體分離。在這些實施例 中，凝膠狀物質(zhì)可含有所述特定個體的內(nèi)源性蛋白質(zhì)、離子和/或糖胺聚糖(即，其天然存 在于所述特定個體中)。在某些實施例中，凝膠狀物質(zhì)是離體形成。在后一情況下，沉積物 可含有與欲投予凝膠的個體類似或相同，但不是從所述個體獲得的蛋白質(zhì)、離子或糖胺聚 糖。例如，其可從天然來源純化得到、使用化學或重組合成技術(shù)合成等。在本發(fā)明某些實施例中，在適于在玻璃體腔中形成凝膠狀沉積物的條件下投予坎 普他汀類似物，以便治療有患影響眼睛的病癥的風險或患有所述病癥的個體。在本發(fā)明一 些實施例中，病癥是在患有所述病癥的個體的眼睛中檢測到的補體激活水平比未患所述病 癥的個體的眼睛中的補體激活水平高(例如，通過補體激活產(chǎn)物的含量增加所證實)的一 種病癥。在本發(fā)明一些實施例中，病癥是在患有所述病癥的個體眼睛中檢測到的MAC含量 比未患有所述病癥的個體眼睛中的MAC含量高的一種病癥。在一些實施例中，所述病癥是黃斑變性，例如年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)。在一些 實施例中，病癥是濕性AMD。在一些實施例中，病癥是干性AMD。在一些實施例中，個體患有 地圖樣萎縮(GA)。在一些實施例中，個體患有年齡相關(guān)性黃斑病，這一術(shù)語是指尚未發(fā)展成 GA的早期到中期干性AMD。在一些實施例中，病癥是糖尿病性視網(wǎng)膜病變。在一些實施例
23中，病癥是青光眼。在一些實施例中，眼病是后段葡萄膜炎或角膜炎。在一些實施例中，眼 病是視網(wǎng)膜色素變性。有關(guān)這些和其它眼病的進一步信息，參見同在申請中的專利申請案 USSN 11/247，886、USSN 11/544，389 和 USSN 11/612，751，以及 J.坎斯基(Kanski，J.)，臨 床眼科學系統(tǒng)方法(Clinical Ophthalmology :A SystematicApproach)巴特沃茲-海尼 曼公司(Butterworth-Heinemann)；第6版(2007年5月4日)。在一些實施例中，組合物 是經(jīng)玻璃體內(nèi)投予，例如經(jīng)玻璃體內(nèi)注射。在一些實施例中，組合物是投予眼睛的前房。血管外位置按所治療病癥的需要來選擇。例如，如果病況是關(guān)節(jié)炎，則可將補體 抑制劑直接投予滑膜腔中?？赏队璞景l(fā)明液體組合物的關(guān)節(jié)內(nèi)關(guān)節(jié)的實例包括髖關(guān)節(jié)、 膝關(guān)節(jié)、肘關(guān)節(jié)、腕關(guān)節(jié)(wrist)、胸鎖關(guān)節(jié)、顳下頌關(guān)節(jié)、腕關(guān)節(jié)(carpal)、跗關(guān)節(jié)、踝關(guān)節(jié) 和經(jīng)歷關(guān)節(jié)炎病況的任何其它關(guān)節(jié)。所述組合物也適于投予滑膜囊?？赏队璞景l(fā)明組合 物的滑膜囊的實例包括肩峰(acromial)囊、肱二頭肌橈骨(bicipitoradial)囊、肘骨間 (cubitoradial)囊、三角肌(deltoid)囊、髕下(infrapatellar)囊、坐骨(ischial)囊和 所屬領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它滑膜囊。如果病況是脊髓損傷或慢性疼痛，則可經(jīng)鞘內(nèi)投予 組合物。如果病況是中風、阿爾茨海默氏病、帕金森氏病或中風，則可將組合物投予腦室系 統(tǒng)(例如第三、第四或側(cè)腦室)，其包含腦中與脊髓中央管相連的結(jié)構(gòu)組。可使用此項技術(shù) 中已知的將治療劑投予這些位置的方法(參看下文)。可至少部分根據(jù)所關(guān)注血管外位置或鄰近組織的內(nèi)含物內(nèi)補體蛋白含量和/或 補體激活水平，來選擇坎普他汀類似物的合適量?？筛鶕?jù)多個個體中所作的測量來在欲治 療的個別個體中進行測定。在本發(fā)明某些實施例中，至少部分根據(jù)此信息，并且任選通過使 用所述小室近似體積估算補體蛋白的總量，來選擇坎普他汀類似物的合適劑量。例如，可選 擇坎普他汀類似物的合適劑量，以在所述小室內(nèi)實現(xiàn)至少足以結(jié)合50%、60%、70%、80%、 90%、95%或更多現(xiàn)存C3的平均或穩(wěn)態(tài)濃度。在某些實施例中，對劑量加以選擇，以達到等 于C3濃度的1、2、5、10、20、50倍或介于1與50之間的任何中間子范圍倍數(shù)的平均或穩(wěn)態(tài) 濃度。在本發(fā)明某些實施例中，從沉積物釋放出坎普他汀類似物，以致在較長時間段內(nèi)，例 如2到4周、4到6周、1到3個月、3到6個月、6到12個月、12到24個月內(nèi)，提供有效的平 均或穩(wěn)態(tài)濃度。在一些實施例中，選擇劑量以使在玻璃體腔中的釋放速率介于約0. 01微克 /天與約3到5微克/天之間，例如介于約0. 05微克/天與3微克/天之間、介于0. 1微克 /天與約3微克/天之間、約0. 5微克/天與約3微克/天之間、約0. 5微克/天與2微克 /天之間等，持續(xù)至少2周，例如2到4周、4到6周、1到3個月、3到6個月、6到12個月、 12到24個月。在一些實施例中，選擇劑量以使在玻璃體腔中的釋放速率介于約0. 5微克/ 天與1微克/天之間或介于約1微克/天與約3微克/天之間，持續(xù)至少2周，例如2到4 周、4到6周、1到3個月、3到6個月、6到12個月、12到24個月。本發(fā)明提供一種單位劑量的本文所述的組合物，其通常在容器中包含足量的液體 組合物(或可與液體醫(yī)藥載劑組合得到液體組合物的干粉)以對患者產(chǎn)生所需的治療作 用，即，足以單次投予有需要的患者的量。在一個實施例中，單位劑量是無菌的且凍干的。在 另一實施例中，單位劑量是無菌的，并且是以例如經(jīng)注射或浸潤來投予患者可接受的液體 形式提供。在另一實施例中，單位劑量是于液體中的混懸液或分散液，其適于例如經(jīng)注射、 浸潤等投予患者。在一些實施例中，液體組合物含有每毫升液體至少lmg坎普他汀類似物， 例如每毫升液體約lmg與約300mg之間坎普他汀類似物?？财账☆愃莆餆o需完全溶解于液體中，例如至少一部分坎普他汀類似物可以顆粒形式存在。在一些實施例中，組合物中坎 普他汀類似物的濃度介于2mg/ml與20mg/ml之間。在一些實施例中，組合物中坎普他汀類 似物的濃度介于2mg/ml與10mg/ml之間，例如介于2mg/ml與5mg/ml之間。在一些實施例 中，組合物中坎普他汀類似物的濃度介于8mg/ml與25mg/ml之間。在一些實施例中，溶解 的坎普他汀類似物的濃度介于2mg/ml與20mg/ml之間。在一些實施例中，溶解的坎普他汀 類似物的濃度介于2mg/ml與10mg/ml之間，例如介于2mg/ml與5mg/ml之間。在一些實施 例中，溶解的坎普他汀類似物的濃度介于8mg/ml與25mg/ml之間。在一些實施例中，將至少25iU體積中濃度為至少lmg/ml，例如介于lmg/ml與 10mg/ml之間，例如介于2mg/ml與5mg/ml之間的坎普他汀類似物投予玻璃體腔(例如通 過玻璃體內(nèi)注射)。在一些實施例中，體積介于25 ill與150 ill之間，例如介于40 ill與 125 ill之間，例如介于50iil與lOOiil之間。在一些實施例中，體積為約50iU，例如介 于45iil與55ii 1之間。在一些實施例中，體積為約100 ii 1，例如介于90iil與llOiil之 間。在一些實施例中，投予介于50 ii g與2mg之間，例如介于100 ii g與500 y g之間的坎普 他汀類似物。在一些實施例中，投予介于500 iig與lmg之間的坎普他汀類似物。在一些實 施例中，投予介于lmg與1. 5mg之間的坎普他汀類似物。在一些實施例中，投予介于1. 5mg 與2. Omg之間的坎普他汀類似物。在一些實施例中，將介于約150 u g與約250 u g之間的坎普他汀類似物投予玻璃 體腔。在一些實施例中，將介于約250 u g與約350 u g之間的坎普他汀類似物投予玻璃體 腔。在一些實施例中，將介于約350 u g與約450 u g之間的坎普他汀類似物投予玻璃體腔。 在一些實施例中，將介于約450 u g與約550 u g之間的坎普他汀類似物投予玻璃體腔。在 一些實施例中，將介于約550 u g與約650 u g之間的坎普他汀類似物投予玻璃體腔。在一 些實施例中，將介于約650 u g與約750 u g之間的坎普他汀類似物投予玻璃體腔。在一些 實施例中，將介于約750 u g與約850 u g之間的坎普他汀類似物投予玻璃體腔。在一些實 施例中，將介于約850 u g與約950 u g之間的坎普他汀類似物投予玻璃體腔。在一些實施 例中，將介于約950 ii g與約1050 ii g之間的坎普他汀類似物投予玻璃體腔。在一些實施例 中，將介于約1050 u g與約1150 ii g之間的坎普他汀類似物投予玻璃體腔。在一些實施例 中，將介于約1150 ii g與約1250 u g之間的坎普他汀類似物投予玻璃體腔。在一些實施例 中，將介于約1250 u g與約1350 u g之間的坎普他汀類似物投予玻璃體腔。在一些實施例 中，將介于約1350 u g與約1450 u g之間的坎普他汀類似物投予玻璃體腔。在一些實施例 中，將介于約1450 u g與約1550 u g之間的坎普他汀類似物投予玻璃體腔。在一些實施例 中，將介于約1550 u g與約1650 u g之間的坎普他汀類似物投予玻璃體腔。在一些實施例 中，將介于約1650 u g與約1750 u g之間的坎普他汀類似物投予玻璃體腔。在一些實施例 中，將介于約1850 u g與約1950 u g之間的坎普他汀類似物投予玻璃體腔。在一些實施例 中，將介于約1950 u g與約2050 u g之間的坎普他汀類似物投予玻璃體腔。如實例3中所述和圖5中所示，實驗顯示，在玻璃體內(nèi)投藥后，可在血清中測量到 坎普他汀類似物。已發(fā)現(xiàn)，血清濃度與玻璃體濃度密切相關(guān)。本發(fā)明提供一種評定局部投 藥至血管外位置后坎普他汀類似物的局部濃度的方法，所述方法包含測量將坎普他汀類 似物投予血管外位置后血液中坎普他汀類似物的濃度，和根據(jù)已知的血液中濃度與所述位 置中濃度之間的相關(guān)性，確定所述位置的局部濃度。本發(fā)明提供一種評定玻璃體中坎普他汀類似物濃度的方法，其包含測量眼內(nèi)(例如玻璃體內(nèi))投予坎普他汀類似物后血液中 坎普他汀類似物的濃度，和根據(jù)已知的血液中濃度與玻璃體濃度之間的相關(guān)性，確定玻璃 體濃度。這些方法提供一種便利的方式來監(jiān)測坎普他汀類似物的局部濃度(例如玻璃體濃 度)，并提供一種確定何時應(yīng)對患者進行再治療的方式。例如，當血清濃度(并且由此局部 (例如玻璃體)濃度)降到低于所需值時，需對患者進行再治療。因此，本方法允許從業(yè)人 員定制用于所治療的特定患者的劑量之間的時間間隔。由此，本發(fā)明提供一種在局部投予(例如眼內(nèi)投予)坎普他汀類似物后，監(jiān)測個體 的方法。應(yīng)了解，可使用多種方法，例如使用利用紫外或熒光檢測的高效液相色譜(HPLC) 分析連同或聯(lián)合質(zhì)譜(LC-MS)，對血漿或血清進行分析。另外，已發(fā)現(xiàn)，可使用超聲波檢測凝膠狀結(jié)構(gòu)(圖2)?？呻S時間監(jiān)測沉積物的尺寸 和密度，由此提供另一種監(jiān)測個體并確定何時再治療的方式。例如，當沉積物的直徑或密度 降到低于預先選定的限度值時，可提供再治療。在使用血清分析的同時，可使用或不使用超 聲波，來監(jiān)測沉積物的尺寸，并提供與決定是否再治療和何時再治療相關(guān)的信息。應(yīng)了解，給定劑量的坎普他汀類似物可在一些個體中形成凝膠狀沉積物，但未必 在所有個體中都形成凝膠狀沉積物。還應(yīng)了解，坎普他汀類似物當引入某些血管外位置中 時可形成凝膠狀沉積物，但在其它位置中時并不形成凝膠狀沉積物。劑量和具體坎普他汀 類似物按需要來選擇。例如，可選擇當投予特定血管外位置時，在至少50%、至少60%、至 少70%、至少80%、至少90%或至少95%個體(例如非人類靈長類動物或人類)中形成沉 積物的劑量和坎普他汀類似物?？财账『推漕愃莆锶缟衔乃?，本發(fā)明至少部分源自于偶然而意外的發(fā)現(xiàn)含有足夠量和/或足夠 濃度的強效坎普他汀類似物的液體組合物當投予哺乳動物個體的玻璃體腔時，形成宏觀凝 膠狀結(jié)構(gòu)。盡管不希望受任何理論束縛，但本發(fā)明的發(fā)明人提出，此特性可能由多種坎普他 汀類似物展現(xiàn)。根據(jù)本文的揭示，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地測試坎普他汀類似物，以確定 其當引入玻璃體腔中或不同血管外位置中時是否展現(xiàn)類似特性。包含所述坎普他汀類似物 的液體組合物和使用所述組合物投予坎普他汀類似物和任選使用的額外活性劑的方法都 是本發(fā)明的方面。在某些實施例中，液體組合物包含第一和第二坎普他汀類似物，其中至少 一種坎普他汀類似物在投予血管外位置后形成凝膠狀沉積物。在某些實施例中，液體組合 物包含坎普他汀類似物，和不是坎普他汀類似物的第二活性劑。如本文所使用，術(shù)語“坎普他汀類似物”涵蓋坎普他汀和其任何補體抑制類似物。 應(yīng)了解，在術(shù)語“坎普他汀類似物”在本申請案中用于描述或指本發(fā)明一個方面的情況下， 除非另作說明，否則本發(fā)明包括坎普他汀類似物是如實例中所述所研究的化合物(SEQ ID NO 32)的實施例。術(shù)語“坎普他汀類似物”涵蓋坎普他汀，以及根據(jù)坎普他汀設(shè)計或鑒別 并且當使用例如此項技術(shù)中認可的任何補體激活分析或?qū)嵸|(zhì)上類似或相當?shù)姆治鰷y量時， 補體抑制活性是坎普他汀的至少50%的其它化合物。所述分析可例如測量經(jīng)典或旁路路 徑介導的紅細胞溶解。在某些實施例中，所述分析是ELISA分析。W02004/026328 ；默瑞斯 (Morikis)，同上文；默里克(Mallik)，同上文；卡特拉格達(Katragadda) 2006,同上文，以 及其它參考文獻中描述了測定化合物抑制補體激活的能力的方法?？财账』蚱溲a體抑制 類似物(在N末端和/或C末端適當修飾)的連環(huán)體或多聚體也可用于本發(fā)明中。
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坎普他汀類似物的活性可用其例如在特定血漿濃度下的IC5(I值(抑制50%補體激 活的化合物的濃度)來表示，其中如此項技術(shù)中所公認，較低IC5(I值指示較高活性。用于本 發(fā)明中的優(yōu)選坎普他汀類似物的活性至少與坎普他汀相同。已知某些修飾可降低或消除補 體抑制活性，并且其可明確地排除在本發(fā)明任何實施例之外。應(yīng)了解，所測量的給定坎普他 汀類似物的準確IC5(I值將隨實驗條件而變化。例如從在實質(zhì)上相同的條件下，測定多種不 同化合物的IC5(I值的實驗所獲得的比較值是有用的。在一個實施例中，坎普他汀類似物的 IC5Q值不超過坎普他汀的IC5(I值。在本發(fā)明某些實施例中，坎普他汀類似物的活性是坎普他 汀的2到99倍(即，所述類似物的IC5(I值是坎普他汀IC5(I值的1/2到1/99)。例如，所述 活性可以是坎普他汀的10倍到50倍，或是坎普他汀的50倍到99倍。在本發(fā)明某些實施 例中，坎普他汀類似物的活性是坎普他汀的99倍到264倍。例如，所述活性可以是坎普他 汀的 100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260 或 264 倍。在本發(fā)明某些實施例中，坎普他汀類似物是強效的坎普他汀類似物，例如活性是坎普他 汀的至少100倍的類似物。在本發(fā)明某些實施例中，坎普他汀類似物的活性是坎普他汀的 至少150倍、至少200倍或至少250倍。表1提供多種此類類似物的序列。在某些實施例 中，本發(fā)明涵蓋活性是坎普他汀的264到300倍、300到350倍、350到400倍或400到500 倍的類似物的用途。本發(fā)明進一步涵蓋活性是坎普他汀的500到1000倍的坎普他汀類似 物的用途。已使用等溫滴定量熱法，測量各種坎普他汀類似物結(jié)合C3的Kd值(卡特拉格達 (Katragadda)等人，生物化學雜志(J. Biol. Chem.)，279 (53)，54987-54995，2004)。已將多 種坎普他汀類似物與C3的結(jié)合親和力與其活性相關(guān)，其中如此項技術(shù)中所公認，較低Kd值 指示較高結(jié)合親和力。某些測試的類似物顯示出結(jié)合親和力與活性之間的線性關(guān)系(卡特 拉格達，2004，同上文；卡特拉格達，2006，同上文)。在本發(fā)明某些實施例中，坎普他汀類似 物結(jié)合C3的Kd值介于0. 111] 與1.011]\1之間、介于0. 05uM%0. 1口] 之間、介于0. 025 u M 與0. 05 ii M之間、介于0. 015 ii M與0. 025 u M之間、介于0. 01 ii M與0. 015 u M之間或介于
0.001 ii M與0. 01 ii M之間。在某些實施例中，坎普他汀類似物的IC5(1值介于約0. 2 ii M與 約0. 5 ii M之間。在某些實施例中，坎普他汀類似物的IC5(1值介于約0. 1 ii M與約0. 2 ii M之 間。在某些實施例中，坎普他汀類似物的IC5(1值介于約0. 05 ii M與約0. 1 ii M之間。在某些 實施例中，坎普他汀類似物的IC5(1值介于約0. 001 ii M與約0. 05 ii M之間?！案鶕?jù)坎普他汀設(shè)計或鑒別的”化合物包括(但不限于)包含通過以下方式獲得序 列的氨基酸鏈的化合物(i)修飾坎普他汀的序列(例如，用不同氨基酸或氨基酸類似物置 換坎普他汀序列的一個或多個氨基酸；將一個或多個氨基酸或氨基酸類似物插入坎普他汀 的序列中；或使坎普他汀序列缺失一個或多個氨基酸)；(ii)從坎普他汀的一個或多個氨 基酸經(jīng)隨機化的噬菌體呈現(xiàn)肽文庫選擇，并任選進一步根據(jù)方法(i)進行修飾；或(iii)通 過篩選與坎普他汀或利用方法(i)或(ii)獲得的其任何類似物競爭結(jié)合C3或其片段的化 合物來鑒別。許多有用的坎普他汀類似物包含疏水簇、0轉(zhuǎn)角和二硫橋鍵。在本發(fā)明某些實施例中，坎普他汀類似物的序列包含通過在坎普他汀序列中進行
1、2、3或4次取代(S卩，由不同標準氨基酸或非標準氨基酸置換坎普他汀序列中的1、2、3或 4個氨基酸)而獲得的序列，或基本上由所述序列組成。在本發(fā)明某些實施例中，4位的氨 基酸改變。在本發(fā)明某些實施例中，9位的氨基酸改變。在本發(fā)明某些實施例中，4位和9位的氨基酸改變。在本發(fā)明某些實施例中，僅4位和9位的氨基酸改變。在本發(fā)明某些實 施例中，4位或9位的氨基酸改變，或在某些實施例中，4位和9位的氨基酸都改變，而且位 于選自1、7、10、11和13位的另外多達兩個氨基酸也改變。在本發(fā)明某些實施例中，4位、7 位和9位的氨基酸改變。在本發(fā)明某些實施例中，2位、12位或兩個位置的氨基酸都改變， 只要所述改變保留欲環(huán)化的化合物的能力即可。所述在2位和/或12位的改變可以是除 1、4、7、9、10、11和/或13位改變之外還有的改變。序列是通過置換坎普他汀序列的一個或 多個氨基酸而獲得的任何坎普他汀類似物的序列任選在C末端進一步包括多達1、2或3個 額外氨基酸。在一個實施例中，所述額外氨基酸是Gly。序列是通過置換坎普他汀序列的一 個或多個氨基酸而獲得的任何坎普他汀類似物的序列任選在C末端進一步包括多達5或多 達10個額外氨基酸。應(yīng)了解，除非另作說明或從上下文顯而易見，否則坎普他汀類似物可 具有本文所述各種實施例的任何一個或多個特性或特征，并且任一實施例的特性或特征可 另外表征本文所述的任何其它實施例。在本發(fā)明某些實施例中，坎普他汀類似物的序列包 含除對應(yīng)于坎普他汀序列4位和9位的位置外都與坎普他汀一致的序列，或基本上由所述 序列組成?？财账『突钚月愿哂诳财账〉哪承┛财账☆愃莆飪H含有標準氨基酸(“標 準氨基酸”為甘氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、天冬氨 酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、半胱氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、賴氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇 氨酸和組氨酸)。活性改進的某些坎普他汀類似物中并有一個或多個非標準氨基酸。有用的 非標準氨基酸包括單鹵化和多鹵化(例如氟化)氨基酸、D-氨基酸、高氨基酸、N-烷基氨基 酸、脫氫氨基酸、芳香族氨基酸(除苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸外)、鄰氨基苯甲酸、間氨基 苯甲酸或?qū)Π被郊姿?、磷酸_氨基酸、甲氧基化氨基酸和a，a-雙取代氨基酸。在本發(fā)明 某些實施例中，通過用相應(yīng)的D-氨基酸置換本文在別處所述坎普他汀類似物中的一個或 多個L-氨基酸，來設(shè)計坎普他汀類似物。所述化合物和其使用方法是本發(fā)明的一個方面。 適用的例示性非標準氨基酸包括2-萘基丙氨酸(2-NaI)、1_萘基丙氨酸(1-NaI)、2_茚滿 基甘氨酸甲酸(2Igl)、二氫色氨酸(Dht)、4_苯甲?；?L-苯丙氨酸(Bpa)、2-a-氨基丁酸 (2-Abu)、3-a -氨基丁酸(3-Abu)、4_a -氨基丁酸(4_Abu)、環(huán)己基丙氨酸(Cha)、高環(huán)己基 丙氨酸(hCha)、4_氟-L-色氨酸(4fW)、5_氟-L-色氨酸(5fW)、6_氟-L-色氨酸(6fW)、 4-羥基-L-色氨酸(40H-W)、5_羥基-L-色氨酸(50H-W)、6_羥基-L-色氨酸(60H-W)、1_甲 基-L-色氨酸(lMeW)、4_甲基-L-色氨酸(4MeW)、5_甲基_L_色氨酸(5MeW)、7_氮雜_L_色 氨酸(7aW)、a -甲基-L-色氨酸(a Meff)、0 -甲基_L_色氨酸(0 Meff)、N_甲基_L_色氨 酸(匪eW)、5-甲氧基-色氨酸、鳥氨酸(orn)、瓜氨酸、正亮氨酸、谷氨酸等。在本發(fā)明某些實施例中，坎普他汀類似物包含一種或多種Trp類似物(例如相對 于坎普他汀序列，在4位和/或7位)。例示性Trp類似物于上文提及。也參看比尼(Beene) 等人，生物化學(Biochemistry) 41 10262-10269，2002 (特別描述單鹵化和多鹵化Trp類 似物)；貝比茲克(Babitzke)和雅諾斯奇(Yanofsky)，生物化學雜志(J. Biol. Chem. ) 270 12452-12456，1995 (特別描述甲基化和鹵化Trp以及其它Trp和吲哚類似物)；以及美國 專利 6，214，790,6, 169，057,5, 776，970,4, 870，097,4, 576，750 和 4，299，838。其它 Trp 類 似物包括a或0碳以及任選在吲哚環(huán)的一個或多個位置經(jīng)取代(例如經(jīng)甲基取代)的變 體。包含兩個或兩個以上芳香環(huán)(包括其經(jīng)取代、未經(jīng)取代或在其它位置(alternatively)經(jīng)取代的變體)的氨基酸作為Trp類似物是值得關(guān)注的。在本發(fā)明某些實施例中，在例如 4位的Trp類似物是5-甲氧基、5-甲基_、1-甲基-或1-甲?；?色氨酸。在本發(fā)明某些 實施例中，使用包含1-烷基取代基(例如低碳數(shù)烷基(例如CrC5)取代基)的Trp類似物 (例如在4位)。在某些實施例中，使用N( a)甲基色氨酸或5-甲基色氨酸。在一些實施 例中，使用包含1-烷?；〈?例如低碳數(shù)烷酰基(例如Ci-C》)的類似物。實例包括 1-乙酰基-L-色氨酸和L- 0 -色氨酸。在某些實施例中，Trp類似物的疏水性相對于Trp有所增加。例如，吲哚環(huán)可經(jīng)一 個或多個烷基(例如甲基)取代。在某些實施例中，Trp類似物參加與C3的疏水相互作用。 此類Trp類似物可位于例如相對于坎普他汀序列的4位。在某些實施例中，Trp類似物包 含經(jīng)取代或未經(jīng)取代的雙環(huán)芳香環(huán)組分，或者包含兩個或兩個以上經(jīng)取代或未經(jīng)取代的單 環(huán)芳香環(huán)組分。在某些實施例中，Trp類似物與C3形成氫鍵的傾向相對于Trp增加，但疏水性相 對于Trp沒有增加。Trp類似物的極性比Trp強，和/或參加與C3上氫鍵供體靜電相互作 用的能力有所增加。氫鍵形成性質(zhì)增加的某些例示性Trp類似物在吲哚環(huán)上包含帶負電荷 的取代基。此類Trp類似物可位于例如相對于坎普他汀序列的7位。在本發(fā)明某些實施例中，坎普他汀類似物包含一種或多種Ala類似物(例如在相 對于坎普他汀序列的9位)，例如除在側(cè)鏈包含一個或多個CH2基團外都與Ala —致的Ala 類似物。在某些實施例中，Ala類似物是無支鏈的單甲基氨基酸，例如2-Abu。在本發(fā)明某 些實施例中，坎普他汀類似物包含一種或多種Trp類似物(例如，在相對于坎普他汀序列的 4位和/或7位)和一種Ala類似物(例如，在相對于坎普他汀序列的9位)。在本發(fā)明某些實施例中，坎普他汀類似物是包含序列為(X ’ aa) n-Gln-Asp-Xaa_Gly-(X〃 aa)m(SEQ ID NO :2)的肽的化合物，其中各 X' aa 和各 X〃 aa 是 獨立選擇的氨基酸或氨基酸類似物，其中Xaa是Trp或Trp類似物，并且其中n > 1和m > 1，而且n+m介于5與21之間。所述肽的核心序列為Gln-Asp-Xaa-Gly，其中Xaa是Trp或 Trp類似物，例如，與氫鍵供體形成氫鍵的傾向相對于Trp有所增加，但在某些實施例中疏 水性相對于Trp沒有增加的Trp類似物。例如，所述類似物可以是Trp的吲哚環(huán)經(jīng)帶負電 部分(例如鹵素，例如氟)取代的類似物。在一個實施例中，Xaa是5-氟色氨酸。在沒有相 反證據(jù)的情況下，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員將認識到，序列包含此核心序列并且抑制補體激活和/ 或結(jié)合C3的任何非天然存在的肽都將能根據(jù)坎普他汀序列設(shè)計出來。在另一實施例中， Xaa是除Trp類似物外允許Gln-Asp-Xaa-Gly肽形成0轉(zhuǎn)角的氨基酸或氨基酸類似物。在本發(fā)明某些實施例中，所述肽的核心序列為X' aa-Gln-Asp-Xaa-Gly(SEQ ID NO :3)，其中X' aa和Xaa選自Trp和Trp類似物。在本發(fā)明某些實施例中，所述肽的核心 序列為 X' aa-Gln-Asp-Xaa-Gly (SEQ IDN0:3)，其中 X' aa 和 Xaa 選自 Trp、Trp 類似物， 以及包含至少一個芳香環(huán)的其它氨基酸或氨基酸類似物。在本發(fā)明某些實施例中，在肽的 情況下，核心序列形成0轉(zhuǎn)角。0轉(zhuǎn)角可以是可彎曲的，以致當例如使用核磁共振(NMR) 評定時，所述肽可呈現(xiàn)兩種或兩種以上構(gòu)象。在某些實施例中，X' aa是包含經(jīng)取代或未經(jīng) 取代的雙環(huán)芳香環(huán)組分，或者包含兩個或兩個以上經(jīng)取代或未經(jīng)取代的單環(huán)芳香環(huán)組分的 Trp類似物。在本發(fā)明某些實施例中，X' aa選自由2-萘基丙氨酸、1-萘基丙氨酸、2-茚 滿基甘氨酸甲酸、二氫色氨酸和苯甲?；奖彼峤M成的群組。在本發(fā)明某些實施例中，
29X' aa是疏水性比Trp強的Trp類似物。例如，X' aa可以是1_甲基色氨酸。在本發(fā)明某 些實施例中，Xaa是形成氫鍵的傾向相對于Trp有所增加，但在某些實施例中疏水性相對于 Trp沒有增加的Trp類似物。在本發(fā)明某些實施例中，形成氫鍵的傾向相對于Trp有所增加 的Trp類似物在Trp的吲哚環(huán)上，例如在5位，包含修飾，例如鹵素原子取代5位的氫原子。 例如，Xaa可以是5-氟色氨酸。在本發(fā)明某些實施例中，所述肽的核心序列為 X ‘ aa-Gln-Asp-Xaa-Gly-X “ aa (SEQID NO :4)，其中 X ‘ aa 和 Xaa 各獨立地選自 Trp 和 Trp類似物，并且X" aa選自His、Ala、Ala類似物、Phe和Trp。在本發(fā)明某些實施例中， X' aa是疏水性比Trp強的Trp類似物，例如1-甲基色氨酸，或在吲哚環(huán)上(例如1、4、 5或6位)具有烷基取代基的另一 Trp類似物。在某些實施例中，X' aa是包含經(jīng)取代或 未經(jīng)取代的雙環(huán)芳香環(huán)組分，或者包含兩個或兩個以上經(jīng)取代或未經(jīng)取代的單環(huán)芳香環(huán) 組分的Trp類似物。在本發(fā)明某些實施例中，X' aa選自由2-萘基丙氨酸、1-萘基丙氨 酸、2-茚滿基甘氨酸甲酸、二氫色氨酸和苯甲酰基苯丙氨酸組成的群組。在本發(fā)明某些實 施例中，Xaa是與C3形成氫鍵的傾向相對于Trp有所增加，但在某些實施例中疏水性相對 于Trp沒有增加的Trp類似物。在本發(fā)明某些實施例中，形成氫鍵的傾向相對于Trp有 所增加的Trp類似物在Trp的吲哚環(huán)上，例如在5位，包含修飾，例如鹵素原子取代5位 的氫原子。例如，Xaa可以是5-氟色氨酸。在某些實施例中，X〃 aa是Ala或Ala類似 物，例如Abu，或另一無支鏈單甲基氨基酸。在本發(fā)明某些實施例中，所述肽的核心序列為 X' aa-Gln-Asp-Xaa-Gly-X“ aa(SEQ ID NO :4)，其中 X' aa 和 Xaa 各獨立地選自 Trp、Trp 類似物以及包含至少一個芳香族側(cè)鏈的氨基酸或氨基酸類似物，并且X" aa選自His、Ala、 Ala類似物、Phe和Trp。在某些實施例中，X" aa選自Trp類似物、芳香族氨基酸和芳香族 氨基酸類似物。在本發(fā)明某些優(yōu)選實施例中，坎普他汀類似物是環(huán)狀的。所述肽可通過任何兩個 氨基酸之間的鍵環(huán)化，其中一個氨基酸是(x' aa)n，而另一個位于(x〃。在某些實 施例中，肽的環(huán)狀部分是9到15個氨基酸長，例如10到12個氨基酸長。在某些實施例中， 肽的環(huán)狀部分是11個氨基酸長，并且在2位與12位氨基酸之間具有鍵(例如二硫鍵)。例 如，肽可以是13個氨基酸長，并且在2位與12位氨基酸之間具有鍵，由此產(chǎn)生11個氨基酸 長的環(huán)狀部分。在某些實施例中，所述肽包含序列X' aal-X' aa2_X' aa3_X' aa4-Gln_Asp-Xaa-Gly-X" aal-X" aa2_X〃 aa3_X〃 aa4_X〃 aa5 (SEQ ID NO :5)或由所述序列組成。在某些實 施例中，X' aa4 禾口 Xaa 選自 Trp 禾口 Trp 類似物，并且 X' aal、X' aa2、X' aa3、X" aal、 X〃 aa2、X〃 aa3、X〃 aa4和X〃 aa5獨立地選自氨基酸和氨基酸類似物。在某些實施例 中，X' aa4和Xaa選自芳香族氨基酸和芳香族氨基酸類似物。X' aal.X' aa2、X' aa3、 X" aaUX" aa2、X〃 aa3、X〃 aa4和X〃 aa5中任何一個或多個可與坎普他汀中相應(yīng)位置 的氨基酸一致。在一個實施例中，X" aal是Ala或無支鏈單甲基氨基酸。肽可通過(i) X' aal、X' aa2 或 X' aa3 ；與(ii)X" aa2、X" aa3、X" aa4 或 X" aa5 之間的共價鍵環(huán) 化。在一個實施例中，肽通過X' aa2與X〃 aa4之間的共價鍵環(huán)化。在一個實施例中，共 價結(jié)合的氨基酸是各Cys，而且共價鍵是二硫(S-S)鍵。在其它實施例中，共價鍵是C-C、 C-0、C-S或C-N鍵。在某些實施例中，一個共價結(jié)合的殘基是側(cè)鏈包含伯胺或仲胺的氨基
30酸或氨基酸類似物，另一共價結(jié)合的殘基是側(cè)鏈包含羧酸基團的氨基酸或氨基酸類似物， 并且共價鍵是酰胺鍵。側(cè)鏈包含伯胺或仲胺的氨基酸或氨基酸類似物包括賴氨酸，和通用 結(jié)構(gòu)為NH2(CH2)nCH(NH2)C00H的二氨基羧酸，例如2，3- 二氨基丙酸(dapa) ,2,4- 二氨基丁 酸(daba)和鳥氨酸(orn)，其中n分別為1 (dapa)、2 (daba)和3 (orn)。側(cè)鏈包含羧酸基團 的氨基酸的實例包括二羧基氨基酸，例如谷氨酸和天冬氨酸。還可使用類似物，例如羥 基-L-谷氨酸。在某些實施例中，坎普他汀類似物是包含具有以下序列的肽的化合物Xaal-Cys-Val-Xaa2-Gln-Asp-Xaa2*-Gly-Xaa3-His-Arg-Cys-Xaa4(SEQID NO 6)，其中Xaal 是 lie、Val、Leu、B^Ile、B-Val, B^Leu，或包含 Gly-Ile 或 W-Gly-Ile 的 二肽，并且B1表示第一封端部分；Xaa2和Xaa2*獨立地選自Trp和Trp類似物；Xaa3是His、Ala或Ala類似物、Phe或Phe類似物、Trp或Trp類似物；Xaa4 是 L_Thr、D_Thr、lie、Val、Gly、選自 Thr-Ala 和 Thr-Asn 的二肽，或包含 Thr-Ala-Asn 的三肽，其中 L_Thr、D_Thr、Ile、Val、Gly、Ala 或 Asn 中任一個的羧基末端 _0H 任選經(jīng)第二封端部分B2置換；并且兩個Cys殘基由二硫鍵連接。在其它實施例中，Xaal不存在，或為任何氨基酸或氨基酸類似物，并且Xaa2、 Xaa2*、Xaa3和Xaa4如上文所定義。如果Xaal不存在，則N末端Cys殘基可連接有封端部 分B1。在另一實施例中，Xaa4為任何氨基酸或氨基酸類似物，并且Xaal、Xaa2、Xaa2*和 Xaa3如上文所定義。在另一實施例中，Xaa4是選自由Thr_Ala和Thr-Asn組成的群組的二 肽，其中羧基末端-0H或者Ala或Asn任選經(jīng)第二封端部分B2置換。在SEQ ID NO 6坎普他汀類似物的任一實施例中，Xaa2可以是Trp。在SEQ ID NO :6坎普他汀類似物的任一實施例中，Xaa2可以是包含經(jīng)取代或未 經(jīng)取代的雙環(huán)芳香環(huán)組分，或者包含兩個或兩個以上經(jīng)取代或未經(jīng)取代的單環(huán)芳香環(huán)組分 的Trp類似物。例如，Trp類似物可選自2-萘基丙氨酸(2_Nal)、1-萘基丙氨酸(l_Nal)、 2_茚滿基甘氨酸甲酸(Igl)、二氫色氨酸(Dht)和4-苯甲?；?L-苯丙氨酸。在SEQ ID NO 6坎普他汀類似物的任一實施例中，Xaa2可以是疏水性比Trp強的 Trp類似物。例如，所述Trp類似物可選自1-甲基色氨酸、4-甲基色氨酸、5-甲基色氨酸和 6_甲基色氨酸。在一個實施例中，Trp類似物是1-甲基色氨酸。在一個實施例中，Xaa2是 1-甲基色氨酸，Xaa2*是Trp，Xaa3是Ala，并且其它氨基酸與坎普他汀中的一致。在SEQ ID NO 6坎普他汀類似物的任一實施例中，Xaa2*可以是Trp類似物，例如 與C3形成氫鍵的傾向相對于Trp有所增加并且在某些實施例中疏水性相對于Trp沒有增 加的Trp類似物。在某些實施例中，Trp類似物在吲哚環(huán)上包含帶負電取代基。例如，Trp 類似物可選自5-氟色氨酸和6-氟色氨酸。在本發(fā)明某些實施例中，Xaa2是Trp，并且Xaa2*是與C3形成氫鍵的傾向相對于 Trp有所增加并且在某些實施例中疏水性相對于Trp沒有增加的Trp類似物。在SEQ IDN0 6坎普他汀類似物的某些實施例中，Xaa2是疏水性比Trp強的Trp類似物，例如選自1_甲 基色氨酸、4-甲基色氨酸、5-甲基色氨酸和6-甲基色氨酸的Trp類似物，并且Xaa2*是與 C3形成氫鍵的傾向相對于Trp有所增加并且在某些實施例中疏水性相對于Trp沒有增加的 Trp類似物。例如，在一個實施例中，Xaa2是甲基色氨酸，并且Xaa2*是5_氟色氨酸。在上述某些實施例中，Xaa3是Ala。在上述某些實施例中，Xaa3是無支鏈的單甲 基氨基酸，例如Abu。在本發(fā)明某些實施例中，Xaa3是Phe。在某些實施例中，本發(fā)明使用如上文所述的SEQ ID NO :6坎普他汀類似物，其中 Xaa2和Xaa2*獨立地選自Trp、Trp類似物，以及包含至少一個芳香環(huán)的其它氨基酸或氨基 酸類似物，并且Xaa3是His、Ala或Ala類似物、Phe、Trp、Trp類似物，或另一芳香族氨基酸 或芳香族氨基酸類似物。在本發(fā)明某些實施例中，任一本文所述的坎普他汀類似物的N末端或C末端存在 的封端部分是使肽穩(wěn)定以防降解(否則其將在哺乳動物(例如人類或非人類靈長類動物) 血液或玻璃體中發(fā)生)的任何部分。例如，封端部分B1可以是改變肽的N末端結(jié)構(gòu)以抑制 肽的N末端氨基酸與相鄰氨基酸之間的肽鍵裂解的任何部分。封端部分B2可以是改變肽的 C末端結(jié)構(gòu)以抑制肽的C末端氨基酸與相鄰氨基酸之間的肽鍵裂解的任何部分?？墒褂么?項技術(shù)中已知的任何合適的封端部分。在本發(fā)明某些實施例中，封端部分B1包含酰基(即， 羧酸在去除-0H基團后剩余的部分)，在本文中也稱為“烷?；薄ｕ；ǔ０?到12個 碳，例如1到6個碳。例如，在本發(fā)明某些實施例中，封端部分B1選自由以下組成的群組 甲酰基、乙?；?、丙?；?、丁酰基、異丁酰基、戊酰基、異戊酰基等。在一個實施例中，封端部 分 B1 是乙?；珺P, Xaal 是 Ac-Ile、Ac-Val、Ac_Leu 或 Ac-Gly-Ile。在本發(fā)明某些實施例中，封端部分B2是伯胺或仲胺(_NH2或-NHR1，其中R是有機 部分，例如烷基)。在本發(fā)明某些實施例中，封端部分B1是中和或降低負電荷(否則其可在生理pH值 下存在于N末端)的任何部分。在本發(fā)明某些實施例中，封端部分B2是中和或降低負電荷 (否則其可在生理PH值下存在于C末端)的任何部分。在本發(fā)明某些實施例中，坎普他汀類似物分別在N末端和/或C末端乙酰化或酰 胺化?？财账☆愃莆锟稍贜末端乙?；⒃贑末端酰胺化，和或在N末端乙酰化和在C末 端酰胺化。在本發(fā)明某些實施例中，坎普他汀類似物在N末端包含烷基或芳基，而非乙?；?。在某些實施例中，坎普他汀類似物是包含具有以下序列的肽的化合物Xaal-Cys-Val-Xaa2-Gln-Asp-Xaa2*-Gly-Xaa3-His-Arg-Cys-Xaa4(SEQID NO 7)，其中Xaal 是 Ile、Val、Leu、Ac-Ile、Ac-Val、Ac_Leu，或包含 Gly-Ile 或 Ac-Gly-Ile 的 二肽；Xaa2和Xaa2*獨立地選自Trp和Trp類似物；Xaa3是His、Ala或Ala類似物、Phe或Phe類似物、Trp或Trp類似物；Xaa4 是 L_Thr、D_Thr、lie、Val、Gly、選自 Thr-Ala 和 Thr-Asn 的 二肽，或包含 Thr-Ala-Asn 的三肽，其中 L_Thr、D_Thr、Ile、Val、Gly、Ala 或 Asn 中任一個的羧基末端 _0H
32任選經(jīng)_NH2置換；并且兩個Cys殘基由二硫鍵連接。Xaal、Xaa2、Xaa2*、Xaa3和Xaa4如上文關(guān)于SEQ ID NO 6的各個實施例所述。例 如，在某些實施例中，Xaa2*是Trp。在某些實施例中，Xaa2是疏水性比Trp強的Trp類似 物，例如1-甲基色氨酸。在某些實施例中，Xaa3是Ala。在某些實施例中，Xaa3是無支鏈 的單甲基氨基酸。在本發(fā)明某些實施例中，Xaal是lie并且Xaa4是L_Thr。在本發(fā)明某些實施例中，Xaal是lie，Xaa2*是Trp并且Xaa4是L_Thr。在某些實施例中，本發(fā)明利用如上文所述的SEQ ID NO :7坎普他汀類似物，其中 Xaa2和Xaa2*獨立地選自Trp、Trp類似物、其它氨基酸或芳香族氨基酸類似物，并且Xaa3 是His、Ala或Ala類似物、Phe或Phe類似物、Trp、Trp類似物，或另一芳香族氨基酸或芳 香族氨基酸類似物。在本文所述任一坎普他汀類似物的某些實施例中，Xaa3是His類似物。在本文所 述任一坎普他汀類似物的某些實施例中，Xaa3是Phe。表1提供適用于本發(fā)明各實施例中的非限制性坎普他汀類似物清單。所述類似物 在左邊一欄中以縮寫形式提及，指示在指定位置(1-13)與母肽坎普他汀相比較的特定修 飾。與此項技術(shù)中的用法一致，如本文所使用的“坎普他汀”和本文所述坎普他汀類似物相 對于坎普他汀的活性，是指在C末端酰胺化的坎普他汀肽。除非另作說明，否則肽的C末端 經(jīng)酰胺化。粗體字用于指示某些修飾。相對于坎普他汀的活性是根據(jù)公開的數(shù)據(jù)和其中所 述的分析(例如 W02004/026326 ；默里克(Mai 1 ik), 2005 ；卡特拉格達(Katragadda)，2006 ； W02007/062249)。當參考多個報導活性的出版物時，使用最新公開的值，并且應(yīng)認識到，在 各分析之間存在差異的情況下，可對值進行調(diào)整。還應(yīng)了解，表1中所列的肽當用于本發(fā)明 組合物和方法中時，通常通過兩個Cys殘基之間的二硫鍵環(huán)化。然而，也可使用使肽環(huán)化的 其它方式。表1 NA=不適用在本發(fā)明組合物和方法的某些實施例中，坎普他汀類似物的序列選自序列9到 36。在本發(fā)明組合物和方法的某些實施例中，坎普他汀類似物的序列選自SEQ ID N0:14、 21、28、29、32、33、34和36。在本發(fā)明組合物和方法的某些實施例中，坎普他汀類似物具有 SEQ ID N0:28。在本發(fā)明組合物和方法的某些實施例中，坎普他汀類似物具有SEQ ID NO: 29。在本發(fā)明組合物和方法的某些實施例中，坎普他汀類似物的序列選自SEQ ID N0:30和 31。在本發(fā)明組合物和方法的某些實施例中，坎普他汀類似物具有SEQ ID N0:32。在本發(fā) 明組合物和方法的某些實施例中，坎普他汀類似物具有SEQ IDN0:33。在本發(fā)明組合物和 方法的某些實施例中，坎普他汀類似物具有SEQ ID NO 340在本發(fā)明組合物和方法的某些 實施例中，坎普他汀類似物具有SEQ ID NO 360在其它實施例中，使用具有表1中所述序列但Ac-基團經(jīng)如上文所述的替代封端 部分B1置換的坎普他汀類似物。在其它實施例中，使用具有表1中所述序列但_NH2基團經(jīng)如上文所述的替代封端部分B2置換的坎普他汀類似物。在一個實施例中，坎普他汀類似物與坎普他汀結(jié)合至人類C3的0鏈的實質(zhì)上相 同的區(qū)域。在一個實施例中，坎普他汀類似物是結(jié)合至坎普他汀所結(jié)合的人類C30鏈C末 端部分的分子量為約40kDa的片段的化合物(A.M.索利卡(Soulika，A.M.)等人，分子免 疫學(Mol. Immunol) ,35 160，1998 ；A. M.索利卡(Soulika, A.M.)等人，分子免疫學(Mol. Immunol). 43(12) =2023-9,2006)。在某些實施例中，坎普他汀類似物是結(jié)合至如在坎普他 汀-C3結(jié)構(gòu)(例如晶體結(jié)構(gòu)或由NMR得到的3D結(jié)構(gòu))中確定的坎普他汀結(jié)合位點的化合 物。在某些實施例中，坎普他汀類似物是可取代坎普他汀-C3結(jié)構(gòu)中的坎普他汀并且能與 C3形成與坎普他汀所形成實質(zhì)上相同的分子間接觸的化合物。在某些實施例中，坎普他汀 類似物是結(jié)合至肽-C3結(jié)構(gòu)(例如晶體結(jié)構(gòu))中具有表1所述序列(例如SEQ ID NO :14、 21、28、29或32)的肽的結(jié)合位點的化合物。在某些實施例中，坎普他汀類似物是結(jié)合至 肽-C3結(jié)構(gòu)(例如晶體結(jié)構(gòu))中具有SEQ ID NO :30或31的肽的結(jié)合位點的化合物。在某 些實施例中，坎普他汀類似物是可取代肽-C3結(jié)構(gòu)中具有SEQID N0 9到36 (例如SEQ ID NO :14、21、28、29、30、32、34或36)的肽并且能與C3形成與所述肽所形成實質(zhì)上相同的分 子間接觸的化合物。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員能夠使用常規(guī)實驗方法，容易地確定坎普他汀類似物是否結(jié)合 C33鏈C末端部分的片段。例如，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員可通過在坎普他汀類似物中，例如序 列的C末端，包括光交聯(lián)氨基酸，例如對苯甲?；?L-苯丙氨酸(Bpa)，來合成可光交聯(lián)形 式的化合物(A.M.索利卡(Soulika，A.M.)等人，同上文)。可包括任選使用的額外氨基 酸，例如表位標簽，如FLAG標簽或HA標簽，來便利檢測(例如通過免疫印跡法(Western blotting))化合物。將坎普他汀類似物與所述片段一起培育，并起始交聯(lián)?？财账☆愃?物與C3片段的共定位(colocalization)指示結(jié)合。也可使用表面等離子共振來確定坎普 他汀類似物是否結(jié)合C3或其片段上的坎普他汀結(jié)合位點。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員能夠使用分 子建模軟件程序來預測一種化合物是否能與C3形成與坎普他汀或具有表1中一個或多個 肽的序列(例如SEQ ID NO :14、21、28、29或32，或在其它實施例中，SEQ ID NO :30或31) 的肽所形成實質(zhì)上相同的分子間接觸?？财账☆愃莆锟衫么隧椉夹g(shù)中已知的多種肽合成方法，例如根據(jù)常規(guī)肽合成 方法，經(jīng)由氨基酸殘基的縮合來制備；可使用此項技術(shù)中已知的方法，通過在體外或在活細 胞中由編碼其的合適核酸序列表達來制備。例如，可使用如馬立克(Malik)，同上文；卡特 拉格達(Katragadda)，同上文；和/或W02004026328中所述的標準固相方法，來合成肽。 可使用此項技術(shù)中已知的各種保護基和方法對潛在反應(yīng)性部分，例如氨基和羧基、反應(yīng)性 官能團等，進行保護和隨后脫保護。例如參看"有機合成中的保護基(ProtectiveGroups in Organic Synthesis)“，第 3 版 T.W.格林尼(Greene，T. W.)和 P. G.伍茲(Wuts，P.G.) 編，約翰威立公司(John Wiley&Sons)，紐約(New York) 1999。可使用標準方法，例如反相 HPLC，純化肽。必要時，可使用已知方法，例如反相HPLC，進行非對映異構(gòu)肽的分離。必要 時可將制劑凍干，隨后溶解于例如水等合適溶劑中?？墒褂脡A(例如NaOH)，調(diào)整所得溶液 的PH值，例如調(diào)到生理pH值。必要時，可利用質(zhì)譜來表征肽制劑，例如以確認質(zhì)量和/或 二硫鍵形成。例如參看默里克(Mallik)，2005和卡特拉格達(Katragadda)，2006。此項技術(shù)中已知坎普他汀的結(jié)構(gòu)，而且活性比坎普他汀高的多種坎普他汀類似物
35的NMR結(jié)構(gòu)也是已知的(馬立克(Malik)，同上文)?？墒褂媒Y(jié)構(gòu)信息來設(shè)計坎普他汀模擬 物。在一個實施例中，坎普他汀模擬物是與坎普他汀或任何坎普他汀類似物(例如序列如 表1中所述的坎普他汀類似物)競爭與C3或其片段(例如坎普他汀所結(jié)合的0鏈的40kDa 片段)結(jié)合并且活性等于或高于坎普他汀的任何化合物?？财账∧M物可以是肽、核酸 或小分子。在某些實施例中，坎普他汀模擬物是結(jié)合至如在坎普他汀-C3結(jié)構(gòu)(例如晶體 結(jié)構(gòu)或由NMR實驗得到的3D結(jié)構(gòu))中確定的坎普他汀結(jié)合位點的化合物。在某些實施例 中，坎普他汀模擬物是可取代坎普他汀-C3結(jié)構(gòu)中的坎普他汀并且能與C3形成與坎普他汀 所形成實質(zhì)上相同的分子間接觸的化合物。在多個實施例中，坎普他汀模擬物是結(jié)合至在 肽-C3結(jié)構(gòu)中具有表1中所述序列的肽的結(jié)合位點的化合物。在某些實施例中，坎普他汀 模擬物具有非肽主鏈，而側(cè)鏈排列成根據(jù)坎普他汀序列設(shè)計的序列。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，在確定短肽的特定所需構(gòu)象后，眾所周知設(shè)計肽或肽 模擬物以配合所述構(gòu)象的方法。例如參看G. R.馬西爾(G. R. Marshall) (1993)，四面體通訊 (Tetrahedron)，49 :3547_3558 ；胡比(Hruby)和尼克弗維奇(Nikiforovich) (1991)，分子 構(gòu)象禾口生物相互作用(Molecular Conformation and Biological Interactions),P.貝拉 姆(P. Balaram)和 S.瑞瑪西漢(S. Ramasehan)編，印度科學院(Indian Acad, of Sci.)， 班加羅爾(Bangalore)，第 429-455 頁)；M 優(yōu)奇(Eguchi M)，M.卡恩(Kahn M.)，藥物化學 短評(Mini Rev Med Chem.)，2 (5) :447_62，2002。可如此項技術(shù)中關(guān)于坎普他汀和其類似 物所述，通過考慮各種氨基酸殘基側(cè)鏈的貢獻，例如對于官能團的作用或空間考慮等，進一 步改進肽類似物的設(shè)計。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，肽模擬物與肽的作用能充分等同，以便提供結(jié)合C3和 抑制補體激活所需的特定主鏈構(gòu)象和側(cè)鏈官能性。因此，本發(fā)明的范圍內(nèi)涵蓋通過使用能 連接形成合適主鏈構(gòu)象的天然存在的氨基酸、氨基酸衍生物、類似物或非氨基酸分子，制備 結(jié)合C3、抑制補體的化合物，并利用結(jié)合C3、抑制補體的化合物。非肽類似物或包含肽和非 肽組分的類似物在本文中有時稱為“肽模擬物”或“電子等排模擬物”，用于指具有大致相同 的主鏈構(gòu)象特征和/或其它官能性的肽的取代或衍生化，以致其與例示性說明的肽足夠類 似以抑制補體激活。更一般來說，坎普他汀模擬物是藥效團的位置類似于其在坎普他汀中 的定位(即使主鏈不同)的任何化合物。此項技術(shù)中眾所周知肽模擬物用于開發(fā)高親和力肽類似物的用途。假定旋轉(zhuǎn) 約束(rotational constraint)與一種肽內(nèi)的氨基酸殘基類似，可借助拉馬錢德蘭圖 (Ramachandran plot ；胡比(Hruby)和尼克弗維奇(Nikiforovich) 1991)和其它已知技術(shù)， 來分析包含非氨基酸部分的類似物，并驗證其構(gòu)象基元?？墒褂锰摂M篩選方法鑒別結(jié)合C3 的坎普他汀模擬物。所述方法可包含使用合適的算法，用計算機對多種候選結(jié)構(gòu)進行對接、 評分和任選分級。可使用多種可用軟件程序中任一種來進行虛擬篩選方法。適用于靈活分 子對接的例示性程序包括 DOCK 4. 0、FlexX 1. 8、AutoDock 3. 0、G0LD1. 2、I CM 2. 8 和其較 新的版本。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠容易地確立合適的篩選分析，以鑒別額外坎普他汀模擬 物并選擇具有所需抑制活性的模擬物。例如，坎普他汀或其類似物可經(jīng)標記(例如，用放射 性或熒光標記)，并在不同濃度測試化合物存在下與C3接觸。評估測試化合物減少坎普他 汀類似物與C3結(jié)合的能力。使坎普他汀類似物與C3的結(jié)合明顯減少的測試化合物是候選
36坎普他汀模擬物。例如，使坎普他汀類似物-C3復合物的穩(wěn)態(tài)濃度減少，或使坎普他汀類 似物-C3復合物的形成速率降低至少25%或至少50%的測試化合物是候選坎普他汀模擬 物。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員將認識到，可使用所述篩選分析的多種變化形式。欲篩選的化合物包 括天然產(chǎn)物、適配子文庫、噬菌體呈現(xiàn)文庫、使用組合化學合成的化合物文庫等。本發(fā)明涵 蓋根據(jù)上述核心序列合成化合物的組合文庫，和篩選所述文庫以鑒別坎普他汀模擬物。還 可使用任何所述方法，鑒別抑制活性高于迄今所測試的坎普他汀類似物的新坎普他汀類似 物。組合療法和組合物本發(fā)明提供液體組合物，其包含(a)坎普他汀類似物，其量足以在引入哺乳動物 個體的血管外位置中后形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)；和(b)額外治療劑，其中所述額外治療劑不 是坎普他汀類似物。本發(fā)明涵蓋使用坎普他汀類似物連同一種或多種其它有效治療病癥的 第二藥劑。所述藥劑可作用于相同靶或路徑或者不同靶或路徑?？财账☆愃莆锱c第二藥 劑的作用可以是加和的或協(xié)同的(其中藥劑的組合活性高于其獨立投予時活性的總和)。 在一些實施例中，投予第二藥劑以治療與補體激活無關(guān)的病癥，即，凝膠狀結(jié)構(gòu)基本上被用 作第二藥劑的持續(xù)釋放遞送系統(tǒng)。在一些實施例中，使用包含選自SEQID N0:3、4、5、6或7 的序列的肽，形成凝膠狀結(jié)構(gòu)，其中肽的補體抑制活性低于坎普他汀。在一些實施例中，肽 的活性是坎普他汀的50%或更低。第二藥劑按待治療病癥的需要來選擇。合適藥劑包括消炎劑，例如皮質(zhì)類固醇、 非類固醇消炎劑、白三烯或白三烯受體拮抗劑、細胞因子或細胞因子受體拮抗劑(例如抗 TNFa劑，如抗體或可溶性TNF a受體，或其結(jié)合TNFa的片段)、抗IgE劑(例如抗體，或 結(jié)合IgE或IgE受體的抗體片段)、血管生成抑制劑、鎮(zhèn)痛劑和抗感染劑。在一些實施例中，第二藥劑是神經(jīng)保護劑或抗氧化劑，或者抑制或減緩視覺周期 的化合物。在本發(fā)明某些實施例中，額外活性劑是血管生成抑制劑?？墒褂枚喾N多樣的血管 生成抑制劑。在本發(fā)明某些實施例中，血管生成抑制劑特異性結(jié)合一種或多種血管內(nèi)皮生 長因子(VEGF)同功異型體或受體。血管生成抑制劑可以是抗體、抗體片段、多肽、肽、核 酸、適配子或siRNA。在本發(fā)明某些實施例中，血管生成抑制劑特異性結(jié)合一種、多于一種 或所有血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)同功異型體或受體。在一些實施例中，第二治療劑是結(jié) 合血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的人化單克隆抗體，例如LG普雷斯塔(Presta，LG)等人，癌 癥研究(Cancer Res.)，57，4593-4599 (1997)中所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，或者結(jié)合 相同表位的抗體或抗體片段。在本發(fā)明某些實施例中，血管生成抑制劑是或包含哺乳動物 肽或多肽，例如色素上皮衍生因子(PEDF)、血管抑素、內(nèi)皮抑素等，或其保留抗血管生成活 性的片段。血管生成抑制劑可以是此項技術(shù)中認可的適用于治療AMD和/或CNV或RNV 的血管生成抑制劑，例如Lucentis (雷尼株單抗(ranibizumab))、Avastin (貝伐單抗 (bevacizumab))或Macugen (哌加他尼鈉(pegaptanib sodium))。在一些實施例中，提供 的雷尼株單抗、貝伐單抗或哌加他尼的濃度或量是所批準的作為單一藥劑在臨床上用于濕 性AMD的約0. 5倍到約5倍。在例示性實施例中，所述量是約0. 3mg、0. 5mg、1. Omg或1. 5mg。 在一些實施例中，包含坎普他汀類似物和血管生成抑制劑的液體組合物是投予顯現(xiàn)脈絡(luò)膜 新血管形成(choroidal neovascularization, CNV)和/或視網(wǎng)膜新血管形成(retinal
37neovascularization, RNV)的眼睛，例如患有濕性AMD的眼睛。所述抑制劑可例如使用重 組技術(shù)、雜交瘤技術(shù)、化學合成而制備得到，或從天然存在的來源中分離。本發(fā)明還提供一種方法，其包含(a)對哺乳動物個體投予坎普他汀類似物，其量 足以在引入個體的血管外位置中后形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)；和(b)對個體投予血管生成抑制 劑。在本發(fā)明不同實施例中，血管生成抑制劑可在或不在所述液體組合物中投予。血管生 成抑制劑若以不同組合物投藥，則可投予相同血管外位置或不同位置。如果分開投予，則液 體組合物可在投予血管生成抑制劑之前、基本上同時或之后投予。在一些實施例中，首先投 予血管生成抑制劑，并且在一定時間間隔后投予本發(fā)明的液體組合物。所述時間間隔可以 是例如投予血管生成抑制劑后多達1、2或4周，或投予血管生成抑制劑后多達2或3個月。 在一些實施例中，在患有AMD的個體的視力提高，和/或視網(wǎng)膜厚度降低，和/或眼睛中血 管滲漏減少(例如使用光學相干斷層掃描術(shù)或熒光素血管造影術(shù))后，將本發(fā)明液體組合 物投予個體的眼睛。血管生成抑制劑可以投予此類藥劑的標準劑量和標準途徑(例如玻璃 體內(nèi)投藥)使用。本發(fā)明提供液體組合物，其包含(a)坎普他汀類似物，其量足以在引入哺乳動物 個體的血管外位置中后形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)；和(b)額外補體抑制劑，其中所述額外補體 抑制劑不是坎普他汀類似物。在各個實施例中，第二補體抑制劑是肽、多肽、非肽小分子、適 配子、抗體或核酸。在本發(fā)明某些實施例中，第二藥劑是環(huán)狀肽。在某些實施例中，所述藥 劑是C5a受體(C5aR)拮抗劑。例示性C5a受體拮抗劑包括多種小環(huán)狀肽，例如美國專利第 6，821，950 號、USSN 11/375，587 和 / 或 PCT/US06/08960 (W02006/099330)中所述的那些。 在本發(fā)明某些實施例中，使用包含序列[OPdChaWR] (SEQ ID NO 33)的環(huán)狀肽。在本發(fā)明某 些實施例中，使用包含序列[KPdChaWR] (SEQID NO 37)的環(huán)狀肽。在某些實施例中，使用包 含序列(Xaa)n[OPdChaWR] (SEQ ID NO 38)的肽，其中Xaa是氨基酸殘基，并且n介于1與5 之間。在某些實施例中，使用包含序列(Xaa)n[KPdChaWR] (SEQ ID NO 39)的肽，其中Xaa是 氨基酸殘基，并且n介于1與5之間。在本發(fā)明某些實施例中，n是1。在本發(fā)明某些實施 例中，n是1，并且Xaa是標準或非標準芳香族氨基酸。例如，肽F_[OPdChaWR] (SEQ ID NO 40)、F-[KPdChaWR](SEQ ID NO 41),Cin-[OPdChaWR](SEQ ID NO 42)和 HCin-[OPdChaWR] (SEQ ID NO :43)是值得關(guān)注的。游離末端任選包含封端部分，例如末端氨基酸經(jīng)乙?；?(縮寫0 鳥氨酸；Cha 環(huán)己基丙氨酸；Cin 肉桂?；?；Hcin 氫化肉桂?；?；方括號表示 內(nèi)部肽鍵)。含粒子組合物在某些實施例中，液體組合物除包含足以形成凝膠狀結(jié)構(gòu)的量的坎普他汀類似物 外，還包含包括治療劑的粒子群，其中所述組合物能夠釋放所述治療劑。所述組合物以及包 含所述組合物的凝膠是本發(fā)明的一個方面。所述粒子可以例如是微米粒子或納米粒子。微 米粒子或納米粒子可以是聚合物基粒子(例如，含有合成有機聚合物、多肽等)；脂質(zhì)基或 含脂質(zhì)粒子，例如脂質(zhì)體、非離子表面活性劑囊泡(niosome)、膠束等。在本發(fā)明某些實施例 中，治療劑是補體抑制劑。粒子被保留在凝膠狀結(jié)構(gòu)中，并且隨著凝膠狀結(jié)構(gòu)崩解或溶解， 隨時間而釋放出來。粒子在截留于凝膠中的同時，可至少部分崩解或溶解。補體抑制劑可 以是坎普他汀類似物，其可與形成凝膠狀結(jié)構(gòu)的坎普他汀類似物相同，或者是不同的坎普 他汀類似物。上文已論述其它有用的治療劑。
納米粒子或微米粒子可使用此項技術(shù)中已知的任何方法制造，包括(但不限于) 噴霧干燥、相分離、單乳化和雙乳化、溶劑蒸發(fā)、溶劑萃取以及單凝聚和復凝聚。也可使用粒 化、擠出和/或滾圓來制造顆粒狀聚合物組合物。例如參看美國公開案第20040092470號。 此項技術(shù)中已知制備脂質(zhì)體和其它脂質(zhì)基粒子的方法。在一些實施例中，粒子基本上由一 種或多種坎普他汀類似物組成。在一些實施例中，粒子是由至少50% (以干重計)坎普他 汀類似物構(gòu)成。所述粒子任選含有一種或多種賦形劑。一種組合物可含有具有不同組成和/或特性的納米粒子或微米粒子?？筛淖冇糜?制備粒子的條件，得到具有所需尺寸或特性(例如，疏水性、親水性、外部形態(tài)、密度、硬度、 “粘性”、形狀等)的粒子。制備粒子的方法和所用條件(例如溶劑、溫度、濃度、氣流速率 等)也可取決于治療劑和/或聚合物基質(zhì)的組成。一般需要避免可能導致補體抑制劑明顯 降解的極端溫度或PH值。應(yīng)了解，降解程度可能隨特定條件和補體抑制劑暴露于所述條件 的時間，以及藥劑本身的結(jié)構(gòu)和特性而變化。例如，穩(wěn)定肽(例如坎普他汀類似物)可具有 顯著優(yōu)勢。可對組合物進行測試，以確定在保留足夠功效方面，所選方法是否適合。在某些 實施例中，所選調(diào)配方法產(chǎn)生在調(diào)配后使化合物保留所輸入化合物的至少10%、優(yōu)選至少 20%,50%或更高活性水平的組合物。制備粒子的方法和所用條件(例如溶劑、溫度、濃度、氣流速率等)也可取決于特 定活性劑和組合物中所包括的其它組分。如果利用上述任一方法制備的粒子具有超出所需 范圍的尺寸范圍，那么可例如使用篩網(wǎng)、通過研磨等，來分選粒子?？墒褂梅椒ǖ慕M合。用于本發(fā)明中的微米粒子和納米粒子可具有多種尺寸。一般來說，微米粒子的直 徑將為500微米或更小，例如介于1微米與500微米之間、介于50微米與500微米之間、介 于100微米與250微米之間、介于20微米與50微米之間、介于1微米與20微米之間、介于 1微米與10微米之間等，而納米粒子的直徑將小于1微米，例如介于10納米與100納米之 間、介于100納米與250納米之間、介于100納米與500納米之間、介于250納米與500納 米之間、介于250納米與750納米之間、介于500納米與750微米之間。30.在一些實施例 中，微米粒子的直徑在5到750微米的范圍內(nèi)。在一些實施例中，微米粒子的直徑在10到 500微米的范圍內(nèi)。在一些實施例中，微米粒子的直徑在20到200微米的范圍內(nèi)。在一些 實施例中，納米粒子的直徑在5到750納米的范圍內(nèi)。在一些實施例中，納米粒子的直徑在 10至IJ 500納米的范圍內(nèi)。在一些實施例中，納米粒子的直徑在20到200納米的范圍內(nèi)。在 一些實施例中，對尺寸進行選擇，以最小化或避免跨毛細管壁轉(zhuǎn)運，由此最小程度地進入血 管系統(tǒng)中。在一些實施例中，微米粒子或納米粒子由選自由以下組成的群組的聚合物形 成透明質(zhì)烷、殼聚糖、膠原蛋白、明膠、海藻酸鹽、聚(丙交酯)、聚(乙交酯)、聚(丙交 酯-共-乙交酯)、聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚己內(nèi)酯、聚碳酸 酯、聚酯酰胺、聚酸酐、聚(氨基酸)、聚原酸酯、聚乙?；⒕矍杌┧狨?、聚醚酯、聚(對 二氧雜環(huán)己酮)、聚(烷酸烷二酯)、聚乙二醇與聚原酸酯的共聚物、生物可降解聚氨基甲酸 酯，其摻合物和共聚物。例如，聚合物可以是聚乳酸(PLLA)、聚乙醇酸(PGA)或PLGA。粒子 的尺寸(例如，直徑)或形狀可實質(zhì)上均勻，或其尺寸和/或形狀可不均勻。其可實質(zhì)上 呈球形，或可具有其它形狀，在此情況下，相關(guān)尺寸將為粒子表面上兩點之間的最長直線尺 寸，而非直徑。粒子群可由約20%到約100%，例如約40%、40%、50%、60%、70%、80%、90 %等在上述任一尺寸范圍內(nèi)的粒子組成。液體組合物和其制備方法一般說來，使用此項技術(shù)中已知并且適于所述類別化合物的標準方法，來制造補 體抑制劑和其它治療劑?？墒褂脴藴使滔嚯暮铣杉夹g(shù)制造肽，例如坎普他汀類似物和本 文論述的其它肽。例如，可通過受保護肽的固相合成，使用Fmoc化學、樹脂中肽的裂解 (leavage)以及側(cè)鏈保護基的去除、Cys2與Cysl2間形成二硫鍵，隨后純化，和被氧化的肽 轉(zhuǎn)化成乙酸酯形式，來制備坎普他汀類似物。必要時，可將塊狀產(chǎn)物凍干。肽制造商包括例 如以下公司先進化學技術(shù)公司(Advanced Chemtech)、安拜法姆公司(Ambiopharm)、美國 肽制品公司(American P印tide)、道爾頓制藥公司(Dalton PharmaServices)、基因斯普 特公司(GenScript)、生物分子綜合公司(Integrated Biomolecule)、龍澤公司(Lonza)、 新英格蘭肽制品公司(New England P印tide)、肽2. 0公司(P印tide2. 0)、辛斯泰克公司 (Synthetech)等。可使用如 USSN 11/247，886 和 PCT/US2005/36547 (W02006042252)中所 述的標準重組核酸技術(shù)，制備重組多肽。有關(guān)重組多肽的制備和多肽純化的其它信息，例如 參看C哈丁(Hardin，C)等人(編)，“克隆、基因表達和蛋白質(zhì)純化實驗程序和方法原 理(Cloning, Gene Expression and Protein Purification-Experimental Procedures and Process Rationale)“,牛津大學出版社(Oxford UniversityPress),牛津(Oxford), 2001?？贵w(例如單克隆抗體)可從雜交瘤采集，或使用此項技術(shù)中已知的重組方法制備。 核酸，例如siRNA、適配子等，使用標準方法合成?？墒褂脴藴史椒ㄟM行化學修飾，例如聚乙 二醇化。本發(fā)明液體組合物包含坎普他汀類似物和醫(yī)藥學上可接受的載劑。術(shù)語“醫(yī)藥學 上可接受的載劑”是指不會破壞用其調(diào)配的化合物的藥理學活性的無毒載劑。可用于本發(fā) 明組合物中的醫(yī)藥學上可接受的載劑或媒劑包括(但不限于)液體，例如水、生理鹽水等。 在本發(fā)明某些實施例中，醫(yī)藥學上可接受的載劑是水。在一些實施例中，液體組合物的PH 值在3. 5與6. 5之間。在一些實施例中，液體組合物的pH值在4. 0與4. 5之間。在一些實 施例中，液體組合物的pH值在4. 5與5. 0之間。在一些實施例中，液體組合物的pH值在 5. 0與5. 5之間。在一些實施例中，液體組合物的pH值在5. 0與6. 5之間。在本發(fā)明某些實施例中，液體組合物可含有多種額外成分。例如，可包括緩沖劑、 PH值調(diào)節(jié)劑、增溶劑、摩爾滲透壓濃度調(diào)節(jié)劑(例如糖)等?？墒褂么隧椉夹g(shù)中已知的標準 賦形劑。在一些實施例中，將坎普他汀類似物溶解于添加有一種或多種緩沖劑或賦形劑的 液體介質(zhì)(例如水)中。例如，制備出含有例如氨基酸或多元醇(例如糖醇)等賦形劑和 /或緩沖劑的溶液?？财账☆愃莆镆苑勰┬问教砑?，并溶解。必要時，可過濾溶液?？墒褂冕t(yī)藥學上可接受的坎普他汀類似物的鹽，例如由醫(yī)藥學上可接受的無機和 有機酸和堿得到的鹽。此外，應(yīng)了解，本發(fā)明涵蓋本文所述活性劑的溶劑化物、水合物、對映 異構(gòu)形式、構(gòu)象異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、多晶形形式等。在一些實施例中，提供具有乙酸根作為 平衡離子的坎普他汀類似物。組合物中坎普他汀類似物的量和濃度可視多種因素而變化，包括(但不限于)坎 普他汀類似物的特性、所治療的病況和其嚴重程度等，只要當投予組合物時，所述量和濃度 足以形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)即可?？赏ㄟ^適當選擇所投予的坎普他汀類似物的量和/或濃 度，來調(diào)控釋放的持續(xù)時間。還應(yīng)了解，形成凝膠狀沉積物所需的坎普他汀類似物的最小量和/或濃度可視例如個體物種、年齡等因素而變化。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員可容易確定適當值。 此外，組合物不必在每一所治療的個體中都形成凝膠狀沉積物。在一些實施例中，本發(fā)明提供一種包含坎普他汀類似物的組合物，其中所述組合 物的特征在于，當經(jīng)玻璃體內(nèi)投予靈長類動物后，組合物即形成凝膠，其在至少3個月內(nèi)仍 能利用超聲波和/或眼科檢查，在至少75% (例如至少80%、至少85%、至少90%、至少 95%或更多)被投予組合物的眼睛中檢測到。在一些實施例中，本發(fā)明提供一種包含坎普 他汀類似物的組合物，其中所述組合物的特征在于，當經(jīng)玻璃體內(nèi)投予靈長類動物后，組合 物即形成凝膠，其在至少6個月內(nèi)仍能利用超聲波和/或眼科檢查，在至少75%被投予組合 物的眼睛中檢測到。在一些實施例中，本發(fā)明提供一種包含坎普他汀類似物的組合物，其中 所述組合物的特征在于，當經(jīng)玻璃體內(nèi)投予靈長類動物后，組合物即形成凝膠，其在至少9 個月內(nèi)仍能利用超聲波和/或眼科檢查，在至少75%被投予組合物的眼睛中檢測到。在一 些實施例中，靈長類動物是非人類靈長類動物，例如食蟹猴。在一些實施例中，靈長類動物 為人類。在本發(fā)明一些實施例中，在投藥的12、15、18或24個月內(nèi)，利用超聲波在至少75% (例如至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或更多)眼睛中不能檢測到凝膠。在一 些實施例中，凝膠每天釋放1 P g到5 ii g坎普他汀類似物，例如每天約3 u g，持續(xù)至少3個 月，例如持續(xù)3到6個月、6到9個月或9到12個月。本發(fā)明提供包含坎普他汀類似物和一種或多種賦形劑或緩沖劑的液體組合物。在 一些實施例中，賦形劑為氨基酸。在一些實施例中，氨基酸是精氨酸、組氨酸或絲氨酸。在 一些實施例中，賦形劑是“糖醇”(也稱為“多元醇”)。在一些實施例中，賦形劑選自由以下 組成的群組乙二醇、甘油、赤蘚糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、核糖醇、甘露醇、山梨醇、異麥芽 酮糖醇、麥芽糖醇和乳糖醇。在一些實施例中，賦形劑的存在濃度在ImM到250mM范圍內(nèi)， 例如介于10mM與lOOmM之間，或介于10mM與50mM之間，例如為約20到45mM。在一些實施 例中，組合物包含兩種或兩種以上賦形劑。在一些實施例中，緩沖劑選自乙酸鹽緩沖劑和磷 酸鹽緩沖劑。在一些實施例中，緩沖劑是乙酸鈉。在一些實施例中，緩沖劑濃度介于10mM 與1M之間，例如介于20mM與500mM之間，例如介于50mM與200mM之間。如實例4中所述，觀察到液體組合物中某些賦形劑和/或緩沖劑的存在所產(chǎn)生的 凝膠與由僅含有相同量坎普他汀類似物和水的組合物形成的凝膠相比，具有不同且更易碎 的稠度。此外，在經(jīng)玻璃體內(nèi)投藥后，此類凝膠比由僅含有相同量坎普他汀類似物和水的組 合物形成的凝膠消失的快。本發(fā)明的發(fā)明人認識到，此類賦形劑和緩沖劑提供一種調(diào)節(jié)凝 膠的各種物理特性和調(diào)節(jié)在體內(nèi)凝膠釋放坎普他汀類似物的速率的有用方式。本發(fā)明提供 一種調(diào)節(jié)含有坎普他汀類似物的凝膠中所述坎普他汀類似物的釋放速率的方法，所述方法 包含將所述坎普他汀類似物提供于包含賦形劑或緩沖劑的液體組合物中，其中賦形劑或緩 沖劑的存在調(diào)節(jié)(例如增加或降低)在體內(nèi)投予組合物后所形成的凝膠溶解或降解的速 率。本發(fā)明一個方面認識到，增加凝膠在體內(nèi)的溶解/崩解速率的賦形劑可允許投予 較大量的坎普他汀類似物，和/或投予較高濃度的坎普他汀類似物，同時避免形成過于穩(wěn) 定而無法隨時間釋放出所需量的坎普他汀類似物的凝膠。測量補體抑制可使用任何合適方法來評定藥劑抑制補體激活(或任何其它相關(guān)特性)的能力。
41可使用多種體外分析。例如，可通過測量在藥劑存在或不存在下，人類血清或一組補體組分 產(chǎn)生的補體介導的紅細胞(例如抗體致敏或未致敏的兔或羊的紅細胞)溶血，來評定所述 藥劑抑制經(jīng)典或旁路補體路徑的能力。如果在本抑制分析中，藥劑將溶血作用降低到統(tǒng)計 學顯著的程度(P< 0.05)，則其抑制補體。藥劑結(jié)合例如C3、C5、因子B、因子D等一種或 多種補體組分的能力可使用等溫滴定量熱法或其它適于在液相中進行的方法進行評定。在 另一實施例中，使用ELISA分析測量藥劑結(jié)合補體組分的能力。例如，用所述藥劑涂覆微量 滴定板各孔?？蓪⒀a體抑制劑官能化，以便利其與板的結(jié)合。例如，可將藥劑生物素化，并 使用涂覆有抗生蛋白鏈菌素的板。將補體組分添加到各孔中。在培育一段時間后，洗滌各 孔，并使用針對所關(guān)注補體組分的抗體檢測結(jié)合的補體組分。其它使用方法包括表面等離 子共振、平衡透析等。此項技術(shù)中已知測量在體外或體內(nèi)發(fā)生的全身或局部補體激活的方法以及測定 補體抑制劑抑制所述激活的能力的方法。例如，補體激活產(chǎn)物(例如C3a、C5a、C3bBb、 C5b_9、經(jīng)典路徑識別分子(Clq)與經(jīng)激活的C4之間的共價復合物等)的測量將指示補體 激活的程度。在本發(fā)明某些實施例中，所述產(chǎn)物的量的減少指示補體激活的抑制。在一些 實施例中，測量活性裂解產(chǎn)物與其無活性desArg形式之間的比率(例如C3a/C3adesArg)。 所屬領(lǐng)域技術(shù)人員可通過適當選擇所測量的補體激活產(chǎn)物和/或適合的補體激活劑(例如 酵母多糖(zymosan)、脂多糖、免疫復合物等)來辨別經(jīng)典路徑、旁路路徑與凝集素路徑激 活。其它方法涉及測量由最終復合物形成引起的補體介導的紅細胞溶血?？衫煤线m生物樣品測量體內(nèi)補體激活和/或補體抑制劑對其的抑制。例如，可 利用血液或血漿樣品測量全身補體激活和/或補體抑制劑對其的抑制。可利用玻璃體液樣 品測量玻璃體液中的局部激活和/或抑制?？衫锰狄簶悠窚y量呼吸道中的局部激活和/ 或抑制?？衫没ひ簶悠窚y量關(guān)節(jié)中的局部激活和/或抑制?？衫肅SF樣品測量CNS 中的局部激活和/或抑制。在投予補體抑制劑之前開始的連續(xù)測量將指示補體抑制劑抑制 補體激活的程度以及抑制的時程和持續(xù)時間。應(yīng)了解，只有在投予補體抑制劑之前存在的 激活產(chǎn)物降解或清除后，激活產(chǎn)物的減少才變得明顯。合適方法描述于本文引用的多篇參考文獻中(美國專利第5，157，110號、 第 6,551,595 號；美國專利第 6，319，897 號；W02004/026328 (PCT/US2003/029653)； USSN 10/937, 912 ；默瑞斯(Morikis)，2004 ；默里克(Mallik)，2005 ；M.卡特拉格達 (Katragadda, M.)，2006)。監(jiān)測包含坎普他汀類似物的凝膠狀沉積物的降解如上文所述，可在體內(nèi)通過超聲波檢測本發(fā)明某些凝膠狀沉積物。必要時，還可通 過在待投予的液體組合物中包括可檢測部分，來評定沉積物的降解。如本文所使用，“可檢 測部分”是當存在于體內(nèi)時，可利用相關(guān)的一種或多種特定方法檢測的部分，例如分子或超 分子復合物。通常，檢測方法是外部的且是非侵入性的，也就是說，方法不涉及穿透皮膚或 另外從外部可到達的體表或進入身體中。在某些實施例中，可使用對可檢測部分的檢測，來 評定投藥后時間“X”時仍保持完整的持續(xù)釋放調(diào)配物或裝置的質(zhì)量或體積，和/或評定投 藥后時間“X”時已降解的持續(xù)釋放調(diào)配物或裝置的質(zhì)量或體積。如果確定預定質(zhì)量或體積 的調(diào)配物已降解或仍保留，則可在合適時間段內(nèi)對個體進行再治療。例如，可安排再治療在 測定或預計調(diào)配物至少70%、80%、90%、95%、99%或100%降解時的1、2、3或4周內(nèi)進行。或者或另外，可使用對可檢測部分的檢測，來評定持續(xù)釋放調(diào)配物或裝置內(nèi)仍保留的治 療劑的量，即，尚未釋放的量。治療和患者詵擇方法本發(fā)明提供治療個體的方法，其包含將包含坎普他汀類似物的液體組合物以足以 形成宏觀凝膠狀沉積物的量投予個體的血管外位置。本發(fā)明方法可包括提供欲被投予本發(fā) 明組合物的個體。所述個體通常有患例如補體介導的病癥等病癥的風險或患有所述病癥。 在某些實施例中，個體有患黃斑變性(例如年齡相關(guān)性黃斑變性)的風險或患有所述疾病。 在一些實施例中，個體患有至少一種以眼睛炎癥為特征的補體介導的病癥。在某些實施例 中，個體除以黃斑變性或眼睛炎癥為特征的眼病外還有患至少一種補體介導的病癥的風險 或患有所述病癥。通常將所述組合物投予個體以治療或預防此類病癥的發(fā)展。因此，所述個體通常 已被鑒別為有患此類病況的風險或患有所述病況?？墒褂萌魏魏线m的測試和標準來鑒別有 患本文所關(guān)注病癥的風險或患有所述病癥的個體。此項技術(shù)中已知診斷本文所關(guān)注病癥和 評定對療法的反應(yīng)的方法。在本發(fā)明某些實施例中，治療方法包含測定個體是否呈現(xiàn)與發(fā)展或罹患所述病癥 的風險增加相關(guān)的遺傳多態(tài)性。如本文所使用，“測定”是指通過實施或定制合適測試，或通 過接收由其它人實施或定制的測試的結(jié)果，來確定個體呈現(xiàn)使患病癥風險增加的多態(tài)性， 其中所述測試探查個體是否呈現(xiàn)所述多態(tài)性。應(yīng)了解，適用的遺傳測試未必是100%準確 的。多態(tài)性可能是在編碼補體組分的基因中。遺傳研究已顯示編碼各種補體相關(guān)蛋白的基因的某些等位基因與發(fā)展AMD的易 感性增加和/或發(fā)展嚴重形式AMD的可能性增加之間的關(guān)聯(lián)。與病癥或病況發(fā)展的可能性 增加，和/或發(fā)展所述病癥或病況的嚴重形式的可能性增加，或具有所述病癥或病況引起 的不良結(jié)果的等位基因，在本文中稱為所述病癥或病況的“風險等位基因(risk allele)”， 而基因稱為病癥或病況的“風險修飾基因(risk modifier)”。某些風險等位基因是編碼 補體因子(CFH)的基因的等位基因，其中等位基因含有產(chǎn)生在402位含有His而非Tyr 的CHI同功異型體的多態(tài)性(Tyr402His多態(tài)性)。在不希望受任何理論束縛的情況下， CFH的Tyr402His變體在控制補體激活方面可能不太有效，和/或可能具有不利影響其補 體控制能力的組織定位改變。隨后的研究發(fā)現(xiàn)，其它CFH同功異型體與AMD風險密切相關(guān) (R. J.克雷文(Klein，R. J.)等人，年齡相關(guān)性黃斑變性中的補體因子H多態(tài)性(Complement Factor H Polymorphism in Age-Related Macular Degeneration.)禾斗學(Science) (2005) ；A. 0.愛德華(Edwards，A. 0.)等人，補體因子H多態(tài)性和年齡相關(guān)性黃斑變性 (Complement Factor H Polymorphism and Age-Related Macular Degeneration.)禾斗學 (Science) (2005) ;J. L.海尼斯(Haines, J. L.)等人，補體因子H變體增加年齡相關(guān)性黃斑 變性的風險(Complement Factor H Variant Increases the Risk of Age-Re 1 atedMacu 1 ar Degeneration.)科學(Science) (2005))。此外，編碼補體蛋白 C2、C3、因子 B、C7 和 MBL-2 的基因的變體也已與AMD風險關(guān)聯(lián)(B.古德(Gold，B.)等人，因子B(BF)和補體組分2 (C2) 基因的變異與年齡相關(guān)性黃斑變性相關(guān)(Variation in factor B(BF)and complement component 2 (C2)genes is associated with age-related maculardegeneration.)自 然-遺傳學(Nat. Genet.) 38,458-462 (2006) ；V.戴努(Dinu, V.)等人，有關(guān)多個補體路徑
43■ iggAMDtll]白勺白勺iiEig (Evidence for Association betweenMultiple Complement Pathway Genes and AMD.)遺傳流行病學(Genet. Epidem.) 31，224-237 (2007) ;J. R. ff.亞 特斯(Yates，J. R. W.)，補體C3變體與年齡相關(guān)性黃斑變性的風險(Complement C3Variant and the Risk of Age—Related Macular Degeneration, ) If^ll-^BI'^^^ (N. Engl. J.Med. )，357 =19-27, 2007) 此夕卜，編碼CFHR1、CFHR3和CFI的基因的變體已與AMD風險關(guān) 聯(lián)，并且可使用至少部分基于此類變體檢測的方法。本發(fā)明涵蓋評定個體的于上文參考文獻中所述任何基因和/或多態(tài)性的基因 型，或編碼補體相關(guān)蛋白的任何其它基因(參看上文)的基因型；和至少部分基于所述評 定的結(jié)果，將個體選為適于投予包含坎普他汀類似物的液體組合物的個體(例如，如果評 定指示個體發(fā)展或罹患例如AMD等補體介導病癥的風險增加，則投予組合物)。應(yīng)了解， 多態(tài)性(例如SNP)可與位于同一染色體上的其它多態(tài)性(例如其它SNP)處于連鎖不平 衡(linkage disequilibrium，LD)。此類SNP可存在于單體型中。例如，一些SNP可在 多達100kB，或甚至150kB或更大的距離上被連鎖(D.E.瑞琪(Reich，D. E.)等人，自然 (Nature) ,411,199-204，2001)。因此，在一些實施例中，本發(fā)明方法包含測定個體是否呈現(xiàn) 包含至少一個與患補體介導病癥的風險增加相關(guān)的多態(tài)性變體的單體型，其中所述多態(tài)性 是在補體相關(guān)基因中。在一些實施例中，單體型包含編碼Tyr402His的(FH基因變體。在 一些實施例中，單體型是不包含編碼Tyr402His的變體的(FH單體型(例如參看李(Li)等 人，同上文)。個體的基因型可使用多種方法中任一種測定。所用特定方法對于本發(fā)明并不重 要，而且由于所述方法在此項技術(shù)中眾所周知，故無需在本文中詳細描述。所述方法通常利 用從個體獲得的生物樣品，其中樣品包含核酸和/或蛋白質(zhì)。如本文所使用，“生物樣品” 是指以下任一種一個或多個細胞、一部分組織，體液，例如血液、尿液、唾液、腦脊髓液等。 術(shù)語“生物樣品”還包括通過處理前文所定義的生物樣品(例如通過從樣品中分離或純化 DNA、RNA和/或蛋白質(zhì)，通過使樣品或其一部分經(jīng)歷擴增、限制性酶消化等)而得到的任何 物質(zhì)。通常使用血液或組織樣品。方法可涉及測試個體的DNA，以確定所述DNA是否包含所 關(guān)注的等位基因或多態(tài)性。還可使用RNA，如果所關(guān)注的多態(tài)性位于基因被轉(zhuǎn)錄的一部分 中。在一些實施例中，所述方法涉及測定特定核苷酸的特性，其中在所述核苷酸位置的多態(tài) 性與外傷后出現(xiàn)不良結(jié)果的風險增加和/或AMD或另一補體介導病癥的易感性增加有關(guān)。此項技術(shù)中眾所周知進行所述測試的方法，并且包括例如分離出DNA或RNA，任 選對其進行擴增(例如，使用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)或逆轉(zhuǎn)錄酶-PCR)，和實施多種方法， 例如等位基因特異性引物延伸、等位基因特異性雜交、限制性酶消化、測序等。在一些實 施例中，使用微陣列或“芯片(chip)”進行基因分型。在一些實施例中，使用珠?；?析，例如Luminex平臺，來進行基因分型。其它有用方法包括寡核苷酸連接分析(美國專 利第5，185，243號、第5，679，524號和第5，573，907號)、裂解分析、異源雙鏈追蹤分析 (heteroduplex tracking analysis，HTA)等。實例包括Taqman 分析(應(yīng)用生物系統(tǒng)公 司(Applied Biosystems))(美國專利第5，723，591號)。還可使用環(huán)狀探針技術(shù)(cycling probe technology，CPT)，這是一種基于信號或探針擴增而非靶擴增的核酸檢測系統(tǒng)(美國 專利第5，011，769號、第5，403，711號、第5，660，988號和第4，876，187號)。也可使用侵 入性裂解分析，例如侵入性RTM分析(Invader. RTM. assay)(第三波科技公司(Third WaveTechnologies))，如 P. S.埃斯(Eis, P. S.)等人，自然-生物技術(shù)(Nat. Biotechnol.) 19 673,2001中所述?？墒褂没诜肿有艠?molecular beacon)的分析(美國專利第 6，277，607 號、第 6，150，097 號、第 6，037，130 號)或熒光能量轉(zhuǎn)移(fluorescenceenergy transfer,FRET)。美國公開案第20050069908號和其中的參考文獻描述可用于檢測核酸的 多種其它方法。美國專利第5，854，033號、第6，143，495號和第6，239，150號描述用于所 關(guān)注分子的擴增和多重檢測的涉及滾環(huán)式復制(rolling circle replication)的組合物 和方法。所述方法適用于同時檢測樣品中的多種特定核酸。任選對核酸進行測序。美國公 開案第20050026180號描述進行包括擴增、檢測和基因分型在內(nèi)的多重核酸反應(yīng)的方法， 其可用于測定所關(guān)注特定位置的序列，以便確定個體是否呈現(xiàn)與外傷后出現(xiàn)不良結(jié)果的風 險增加相關(guān)的基因型。總的說來(而不限于)，適合方法包括基于雜交的方法，例如動態(tài)等位基因特異性 雜交、使用分子信標、SNP微陣列；基于酶的方法，例如基于限制性片段長度多態(tài)性的方法、 基于PCR的方法、使用側(cè)翼核酸內(nèi)切酶、引物延伸、5'-核酸酶、寡核苷酸連接酶分析的方 法；其它基于DNA物理特性、單鏈構(gòu)象多態(tài)性、溫度梯度凝膠電泳、變性高效液相色譜和測 序的擴增后方法。高通量測序正迅速變得更加有效，而且預見測序可能成為基因分型目的 中的常規(guī)程序?？墒褂没诮沽姿釡y序、原位測序、珠?；鶞y序(US2007087362)等方法。有 關(guān)進一步信息和相關(guān)定義，也參看PCT/US2006/029449 (W02007014338)。在某些實施例中，將溶液例如經(jīng)眼內(nèi)注射直接投予眼睛?？墒褂醚蹆?nèi)投藥的標準 方法，例如玻璃體內(nèi)注射、注射到前房等。在本發(fā)明某些實施例中，通過筋膜下注射、球后注 射或以結(jié)膜下方式投予組合物。在一些實施例中，用血管生成抑制劑治療患有眼新血管形成的個體(例如患有濕 性AMD或增生性糖尿病性視網(wǎng)膜病變的個體)，以便在投予本發(fā)明組合物之前，抑制出血和 /或流體滲出。在一些實施例中，用血管生成抑制劑治療個體，并且在投予血管生成抑制劑 后1周到6周投予本發(fā)明組合物。在某些實施例中，將溶液投予關(guān)節(jié)中或關(guān)節(jié)附近。可通過注射(例如使用25、27或30號針等)、導管等實現(xiàn)遞送。在本發(fā)明某些實施例中，將含有坎普他汀類似物的組合物遞送到中樞神經(jīng)系統(tǒng)中 一個或多個含有CSF的腔或小室(例如腦室或顱后窩池)中。為了使用輸注泵將藥劑遞送 到腦室或顱后窩池，可植入導管，以使排出部分處于所述腦室或所述池中，從而在其中形成 凝膠狀沉積物?？财账☆愃莆锼巹U散到腦室或顱后窩池外。因此，向這些位置的遞送 允許將藥劑遞送到腦中相對較寬的區(qū)域，而不是將其更緊密地局限于局部特定位點。在本 發(fā)明某些實施例中，通過手術(shù)植入導管穿過顱骨，使尖端可以到達含CSF腔，來實現(xiàn)向所述 腔的遞送。隨后將導管的另一端連接到儲液囊(例如Ommaya儲液囊)，所述儲液囊放于頭 皮之下(皮下)。此項技術(shù)中眾所周知鞘內(nèi)投藥的方法。如果個體患有脊髓損傷，則植入導管，以使 排出部分處于鞘內(nèi)腔中，而另一端與泵式儲液囊連接。所述方法常用于治療慢性疼痛，并且 是經(jīng)數(shù)月時間遞送鎮(zhèn)痛劑的常規(guī)使用程序。類似方法在本發(fā)明中可用于以在鞘內(nèi)腔中有效 形成宏觀凝膠狀沉積物的量，遞送包含坎普他汀類似物的液體組合物。在本發(fā)明一個實施例中，通過在適于形成包含坎普他汀類似物的宏觀凝膠狀沉積
45物的條件下投予坎普他汀類似物，來治療患有外傷性腦損傷、中風或脊髓損傷的個體。在某 些實施例中，在本發(fā)明各種實施例中，還全身和/或局部投予神經(jīng)保護劑或神經(jīng)營養(yǎng)劑。在 某些實施例中，神經(jīng)保護劑或神經(jīng)營養(yǎng)劑連同補體抑制劑一起以單一組合物形式投予。每次投藥所遞送坎普他汀類似物的給藥時間間隔(即，本發(fā)明組合物各別投藥之 間的時間)和劑量可改變。在某些實施例中，間隔超過6周時間，例如間隔2、3、4、5或6個 月，或其間任何周數(shù)，例如8、10、12、14、16周等，遞送組合物。在其它實施例中，甚至間隔更 長時間，例如間隔7、8、9、10、11或12個月時間，遞送組合物。在其它實施例中，時間間隔為 6周或更短，例如1、2、3、4、5或6周。例如，可平均每2周、每4周、每30天等，投予一次組 合物。當然，時間間隔可改變。例如，每次給藥之間的時間間隔可在6周或更短與超過6周 之間變換。在某些實施例中，本發(fā)明組合物每次投藥之間的平均時間間隔為至少6周，例如 2、3、4、5或6個月，或其間任何周數(shù)，例如8、10、12、14、16周等。在本發(fā)明某些實施例中，平 均間隔至少6、8、10或12周，或平均間隔3、4、6、8、12、15、18或24個月等間隔時間，多次投 予組合物?？赏队杞M合物至少1、2、5、10、15、20或更多次。可以各種時間間隔對患有補體 介導的病癥(例如AMD)或有患所述病癥的風險的個體長期投予組合物。實例實例1 玻璃體內(nèi)投予非人類靈長類動物以強效坎普他汀類似物后形成凝膠狀沉 積物坎普他汀類似物的合成遵循馬力菲爾德(Merrifield)(美國化學會志(J.Amer. Chem. Soc. )85， 2149(1963))所述的固相方法，合成強效坎普他汀類似物(在實例1到3中也稱為“化合 物”)。用Fmoc基團保護各氨基酸的a-氨基。還用各種適合的保護基將側(cè)鏈官能團封端。 通過在RinkAmide AM樹脂上c末端氨基酸(即，Thr)的衍生化，隨后氨基酸的順次偶聯(lián) (sequentialcoupling)，側(cè)鏈保護基的去除和從樹脂的裂解，來形成肽鏈。當完成全部肽序 列時，將肽樹脂的N末端乙?；?使用包含體積比為6 50 3的Ac20/CH2C12/DIEA的封 端溶液)，隨后用相繼體積量的MeOH和DMF漂洗樹脂。使用標準方法從樹脂裂解后，通過 12氧化，在肽的Cys2與Cys12殘基之間形成二硫橋鍵。首先，將線性肽溶解于20% ACN水溶 液中，制得濃度為lmg/mL的肽溶液。其次，在攪拌下，將I2/Nal溶液逐滴加到所述肽溶液 中(Nal用于增加12于H20中的溶解度)。在添加起初，12的黃色在接觸后消失。在12的 黃色保留(已添加足夠12的標志)時，再攪拌燒瓶30分鐘，以完成氧化。添加抗壞血酸溶 液(0. 1M)以中和過量的12并中止反應(yīng)。用過程控制高壓液相色譜(HPLC)法監(jiān)測反應(yīng)。氧化完成后，接著使反應(yīng)混合物濾過1 P m玻璃纖維濾膜，準備進行制備型HPLC純 化。將過濾后的肽溶液加載到充填C18反相樹脂的制備型HPLC柱上，其利用制備型HPLC系 統(tǒng)(瓦里安HPLC(Varian HPLC))進行操作。用緩沖液“A”
和使用緩沖液“B”W. 1%TFA的乙腈溶液-1 1000 (v/v)]的線性梯度洗脫柱。利用裝備有分析型HPLC柱(科羅馬斯(Kromasil) C185 u m)的分析型HPLC系統(tǒng) (瓦里安HPLC)分析從制備型柱收集到的洗脫部分。隨后匯集滿足純度需求的洗脫部分， 以進行下一處理步驟。對不滿足純度需求的洗脫部分進行再純化，以達到純度需求，并隨后 匯集。所述過程是設(shè)計達到至少95%純度。接著，將匯集的純化洗脫部分再加載到制備型 HPLC柱上，用乙酸銨緩沖液洗滌，并用所需緩沖液系統(tǒng)洗脫，以將肽鹽形式交換成所需鹽，
46在此處為乙酸鹽。利用分析型HPLC再次分析洗脫部分，并匯集滿足最終純度標準的洗脫部 分，并準備進行凍干。使用歧管型凍干機，并在冷凍后將不超過350mL的純化肽溶液放入各 凍干瓶中。冷凍干燥進行至少3天。使用反相HPLC評估最終塊狀肽的純度。制造液體組合物通過將化合物溶解于注射用水中達到以下不同濃度(i)0. 299mg/mL，稱為LD ；和 (ii)4. 51mg/mL，稱為HD，并通過密理博(Millipore)Durapore系列 47mm 0. 22iim濾膜無菌 過濾，而制得兩種不同調(diào)配物。將液體組合物分裝到個別小瓶中(各250iU)。LD組合物 的PH值為5. 48，而HD組合物的pH值是6. 0。玻璃體內(nèi)投藥在進行涉及玻璃體內(nèi)投予非人類靈長類動物以含坎普他汀類似物(其合成如上 文所述，SEQ ID NO :32)的注射用水的研究期間，觀察到，所述化合物在玻璃體內(nèi)注射后，可 在靈長類動物(食蟹猴)的眼睛中形成近似球形的凝膠狀玻璃體內(nèi)沉積物。沉積物是在注 射部位形成，并且只在所測試的兩種濃度中較高的濃度下形成。高劑量由玻璃體內(nèi)(IVT) 注射50 y L體積含有150 u g估計劑量化合物的注射用水組成，而低劑量由50 y L體積含有 3 Pg估計劑量化合物的注射用水組成。裂隙燈眼前節(jié)檢查顯示，投藥后第2天和第15天時 無異常。第2天時進行的雙眼間接檢眼鏡檢查法顯示，在IVT給予每只眼3微克的一只動 物的右眼中和在IVT給予每只眼睛150 y g的4只動物中出現(xiàn)彌漫性玻璃體混濁。第15天 時，這些動物中有4只仍存在玻璃體混濁，而且注意到另外兩只動物首次顯現(xiàn)玻璃體混濁。 并無證據(jù)證實化合物在玻璃體腔內(nèi)引起任何明顯不利反應(yīng)。ERG值在正常界限內(nèi)，而且眼壓 測量法指示眼內(nèi)壓不存在由投予化合物引起的藥物相關(guān)改變。尸檢時，在剖開眼睛后，大多數(shù)(10/12) IVT給予每只眼150 yg化合物的雄性動物 中觀察到球形凝膠狀玻璃體內(nèi)沉積物。分離出這些沉積物，并分析所述化合物的存在。結(jié)果 表明，化合物含量在每一沉積物7. 0 y g到72 y g的范圍內(nèi)。在IVT注射單次劑量后2周被 處死的兩只動物中有一只未顯示球形玻璃體內(nèi)沉積物，并因此未觀察到可檢測的化合物。 類似地，在治療后4小時被處死的一只IVT給予每只眼睛150 u g的動物，也未顯現(xiàn)球形玻 璃體內(nèi)沉積物。因此，最初在第一時間點(治療后4小時)時觀察到沉積物，并且在2周結(jié) 束時處死的兩只動物中有一只仍存在沉積物。在存在或不存在玻璃體內(nèi)沉積物的情況下， 利用組織病理學，在給予化合物的任一動物的眼睛中都未觀察到藥物相關(guān)的異常。分析沉積物中的藥物含量，并使用HPLC觀察和測量藥物含量。發(fā)現(xiàn)沉積物含有較 大量的化合物。每只眼睛經(jīng)玻璃體內(nèi)給予150 y g劑量水平化合物的所有動物的玻璃體，在 檢查的所有時間點(投藥后4小時到2周)都顯示出化合物的存在。這些結(jié)果表明，當形 成沉積物時，其會隨時間釋放化合物。實例2 表征玻璃體內(nèi)投予兔以強效坎普他汀類似物后形成的凝膠狀沉積物使用新西蘭白(New Zealand White, NZW)兔進行研究，以更詳細地表征沉積物的 形成，由此找到在玻璃體內(nèi)注射后使沉積物形成的最低化合物濃度，并評定玻璃體內(nèi)注射 后化合物的急性毒理學特性。^^化合物溶液的制備如實例1中所述制備HD組合物，并在無菌條件下用WFI稀釋，得到不同劑量的化合物。將50iU體積經(jīng)玻璃體內(nèi)注射到兔眼中。治療的動物本研究檢查劑量在每只眼0 到 200ii g(0、25、50、75、100、125、150、175、200ii g)范 圍內(nèi)的化合物在玻璃體內(nèi)注射后于眼睛中形成沉積物的能力(表2)。將各種濃度注射到3 只眼睛中。對于劑量范圍，使用13只動物。對于組織學分析，再使用5只動物。動物程序麻醉通過肌肉內(nèi)注射氯胺酮(Ketamine ；50mg/kg) +塞拉嗪(xylazine，10mg/kg) 溶液使動物麻醉。表2.有關(guān)在新西蘭白兔中形成玻璃體沉積物的劑量范圍研究 A這些程序是在治療后27小時進行。0E=眼科檢查DIS =剖開HIST0 =組織病理學分析注射前程序?qū)?滴局麻劑(0. 5%普魯卡因胺(procainamide))和2滴5%聚維 酮碘(povidone iodine)滴眼液先后直接滴到眼睛上，由此準備眼睛。采取特殊護理，以使 聚維酮碘溶液覆蓋計劃注射的部位。用4X4紗布片吸干眼周區(qū)域過量的液體。使局麻劑 和聚維酮碘溶液作用至少5分鐘，隨后進行玻璃體內(nèi)注射。注射程序使用0. 5cc結(jié)核菌素注射器(永久式連接29G 1/2英寸針)投予玻璃 體內(nèi)注射液；從小瓶中抽取0. 2ml化合物溶液。排出過量液體，以使注射器只含有單次注射 所需體積的液體(50 yl)。使用眼撐(eye lid speculum)使眼睛保持打開狀態(tài)。將針插入 顳上象限中，穿過緣后部3. 5-4. 0mm的區(qū)域，避開水平子午線，并朝向眼睛中心。只將針總 長度(1/2英寸)的一半(1/4英寸)插入眼睛中。緩慢遞送注射體積，以防止眼內(nèi)壓迅速 增加。為確保所有溶液都在眼睛中和避免推回經(jīng)過注射部位，緩慢取出針。
注射后程序注射后立即用標準生理鹽水溶液洗滌眼睛。用4X4紗布片吸干眼周 區(qū)域上過量的液體。隨后添加2滴抗微生物滴眼液(Vigamox ，莫西沙星(moxifloxacin)， 0. 5%滴眼液)。眼科檢查在處死前，由從業(yè)的臨床眼科醫(yī)師對所有動物進行眼科檢查(間接檢 眼鏡)。檢查評分要點顯示于表3中。安樂死使用22號針經(jīng)由耳靜脈注射約2-3cc Beuthanasia-D (先靈葆雅公司 (Schering Plough))，對麻醉的兔實施安樂死。表3.間接檢眼鏡檢查評分要點 摘出眼睛以準備眼球用一只手保持眼瞼全開，并使用解剖刀沿角膜邊緣切開結(jié) 膜。以順時針方式切開眼外肌，并切下和取出瞬膜。從鼻側(cè)進入眼眶，用摘出剪切下視神經(jīng)。 通過剖開眼睛眼球后區(qū)室的結(jié)構(gòu)，“完整(en-block)”揀出眼球。借助于小彎剪去除連帶的 眶筋膜、眶脂肪和眼外肌，來修整所摘出的各眼球。從分離出的眼球中收集兔玻璃體液、球形玻璃體內(nèi)沉積物和視網(wǎng)膜層將修整過 的兔眼球放入無菌皮氏培養(yǎng)皿(Petri dish)中。用1X2的精細拔牙鉗抓住眼睛，用11號 解剖刀在緣后5mm處輕輕地穿過鞏膜做一個切口。隨后，切開鞏膜并沿眼睛周圍切開視網(wǎng) 膜，分離出冠部(crown)。用鑷子小心地揀出沉積物，隨后轉(zhuǎn)移到艾本多夫管(印pendorf tube)中并在冰上保存。如果沉積物太易碎，則用15號解剖刀舀取。通過用拔牙鉗揀取玻璃 體液來進行收集，隨后轉(zhuǎn)移到艾本多夫管中，并在冰上保存。用15號解剖刀從眼睛背面剝 下各眼球的視網(wǎng)膜層，并用RNA Later (艾姆拜公司(Ambion)，德克薩斯州奧斯汀(Austin， TX))立即轉(zhuǎn)移到艾本多夫管中，并在冰上保存。冷凍所有收集到的物質(zhì)(玻璃體液、沉積物 和視網(wǎng)膜層)，并在-20°C下儲存。沉積物評分如果在物質(zhì)收集期間注意到沉積物，則對其進行評分并加以收集。沉 積物的評分標準顯示于表4中。
表4.沉積物評分要點 組織病理學分析檢查后，對動物實施安樂死，并摘出眼睛，用戴維森溶液 (Davidson' s solution)固定，切片并進行H/E染色。由美國病理學委員會認證的病理學 家檢查每只眼接收25、50或100 y g化合物的動物(表2，最后3只動物)的兩只眼睛的切 片，并由委員會認證和認可的專業(yè)獸醫(yī)病理學家進行互評。HPLC 分析沉積物樣品制備 分析前冷凍干燥沉積物 將沉積物再懸浮于50 ill 80%乙酸/20%水中 從凝膠溶液中取出8 ill 添加20 u 1內(nèi)標儲備液(于流動相A中的1/16稀釋液) 添加52 U 1流動相A玻璃體樣品制備遵循修改過的S0P-D0002vl，制備玻璃體樣品。此時，將20 yl內(nèi)標品(序列與所 述化合物密切相關(guān))(于水中的1/8稀釋液)添加到50 u 1玻璃體中，隨后進行樣品提取。樣品分析通過HPLC，使用反相柱(C18Hypersil Gold AQ，2. 1 X 150mm，5 ii m(美國熱電公司 (Thermo Electron))和在214nm波長下進行UV檢測，來分析沉積物和玻璃體樣品。產(chǎn)生單 獨校準曲線以進行沉積物和玻璃體分析。 兔玻璃體內(nèi)沉積物樣品的SDS-PAGE分析1.將冷凍干燥的沉積物溶解于PBS 乙酸(1 1)中后，將兔玻璃體沉積物樣品 等分于艾本多夫管中。(沉積物樣品來自動物#1341、1310A和1339)2.添加上樣染料(4X)和巰基乙醇。3.在加熱板上將樣品煮沸5分鐘。4.在冰上冷卻樣品數(shù)分鐘。5.在10，OOOrpm下離心樣品2分鐘。6.將2種體積(5ul和20ul)的各樣品分別加載到SDS-PAGE凝膠的孔中，其間留 下一個孔作為空白。
分鐘。

IT研究結(jié)果
*沉積物過少而無法收集 表5中顯示間接檢查的結(jié)果和評分，以及動物數(shù)量和劑量。在每只眼接收等于或 高于125微克化合物劑量的所有眼睛中都發(fā)現(xiàn)沉積物。在每只眼接收25微克化合物的眼 睛中未檢測到沉積物。在其它濃度下，以各種出現(xiàn)率形成沉積物。在本研究中，利用間接檢
7.加載SeeBlue蛋白標志物以供比較。
8.以200伏恒定電壓跑膠1小時。
9.從所述組裝件中取出凝膠，并利用考馬斯藍染料(Coomasieblue dye)染色30
10.從凝膠上切下可見的蛋白質(zhì)譜帶，放入單獨管中，并送交質(zhì)譜設(shè)備。 結(jié)果
表5提供研究結(jié)果的概述。查不能可靠地檢測沉積物。應(yīng)注意，甚至在濃度低于形成沉積物的濃度的情況下，眼科醫(yī)生 也可以檢測到輕微的渾濁。間接檢眼鏡檢查未展示出與玻璃體內(nèi)化合物注射相關(guān)的任何病理學改變。除一只 動物#1339出現(xiàn)眼科醫(yī)師將其歸因于由注射針引起的損傷的視網(wǎng)膜出血外，其余眼底檢查 都很正常。在32只檢查的眼睛中，有9只觀察到玻璃體混濁。渾濁的存在與化合物劑量不 存在強相關(guān)性。組織病理學評估在本研究中，還處理5只動物以進行組織病理學評估。表6中顯示動物和其所接 收的治療。由兩位病理學家對眼睛進行評估。這兩位病理學家都同意，所有所評估的眼睛 都是正常的。角膜、虹膜、睫狀體、晶狀體、鞏膜、視網(wǎng)膜和玻璃體都是正常的。沉積物分析利用HPLC分析沉積物，以確認化合物的存在并定量。還進行 SDS-PAGE分析以檢測無法通過所用HPLC方案(主要檢測低MW肽)鑒別的其它蛋白質(zhì)的存 在可能。在UV檢測下，未鑒別到除化合物外的其它組分。數(shù)據(jù)證實了假說沉積物中存在 的化合物含量與注射到玻璃體中的化合物的量相關(guān)。測量每一劑量下玻璃體內(nèi)注射后兔玻 璃體中化合物的濃度。注射27小時后，不能觀察到存在的化合物與所注射的化合物之間的 相關(guān)性。圖3提供兔1341右眼(20ug化合物)、1310右眼(150ug化合物)和1339右眼 (175ug化合物)中沉積物的SDS-PAGE分析。切下第2道的蛋白質(zhì)譜帶并送交質(zhì)譜鑒別。 利用MS/MALDI方法，成功地鑒別出來自兔玻璃體沉積物的所有可見蛋白質(zhì)譜帶。結(jié)果顯示 于下表中
52 1 馬斯科特搜索(Mascot Search)www. matrixscience. com。這很可能是利用 MALDI-MS分析的蛋白質(zhì)的特性。較高得分反映較高的置信水平。2如果最高得分不是兔，則可能兔方案不在數(shù)據(jù)庫中。3混合物中其它兩種組分確定為來自家鼠(Rattus rattu)的 CAA42911 (RRHARTABC) (81分)和來自穴兔(兔)的HBB_RABIT (血紅蛋白亞基3 -1/2)。總之，沉積物的形成是劑量依賴性的。利用每只眼25 U g劑量，從未觀察到沉積物 形成，并且在接收每只眼125 u g或更高劑量(體積都為50 u 1)的眼睛中確實形成沉積物。 對于球形凝膠狀玻璃體內(nèi)沉積物的分析顯示，活性化合物是沉積物中的主要組分，并且還 顯示，沉積物中蛋白質(zhì)含量局限于兔玻璃體液中存在的蛋白質(zhì)。注射后24小時，對每只眼 玻璃體內(nèi)注射單次劑量25、50和100 yg化合物的兔的眼睛進行組織病理學評估。兩位病 理學家同意所檢查的所有眼睛切片都是正常的。在接下來的研究中，玻璃體內(nèi)投予化合物后，飼養(yǎng)新西蘭白兔超過8個月。在投藥 后6周到8個月時從兔玻璃體中取出的凝膠中所提取的化合物，在標準分析中仍保持穩(wěn)定 并保留相當大部分的補體抑制活性。在其它研究中，在初始治療后3個月，對兔進行再治療(在初始治療后形成的凝膠 狀沉積物的明顯消失以后)。第二次治療導致形成新的沉積物，確認了使用此持續(xù)釋放方式 進行重復治療的可行性。
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實例3 非人類靈長類動物中坎普他汀類似物沉積物的進一步研究為了進一步研究非人類靈長類動物眼睛中沉積物隨時間的行為(behavior)，進行 額外研究。與在兔中的情形相同，發(fā)現(xiàn)可在檢眼鏡檢查下目測觀察沉積物，并使用超聲波隨 時間對其跟蹤。在一項研究中，通過玻璃體內(nèi)注射，對食蟹猴投予50iU含0、150、450、1050或 2100 ug化合物的WFI。注意到，在注射后2周時，在所有給予150 u g劑量的眼睛中以及投 予更高劑量的眼睛中，可見到沉積物。在投藥后14天，處死一部分投予0、450、1050或2100 y g的動物，并測量血清和玻 璃體中化合物的濃度。使用HPLC進行化合物測量。如圖5中所示，猴玻璃體內(nèi)的沉積物緩 慢釋放出化合物，持續(xù)至少2周。當投藥濃度過低而無法形成沉積物時，化合物被從食蟹猴 玻璃體中清除，其中T1/2為約22小時。因此，很明顯，2周后在本實驗中測量的化合物須反 映從沉積物中的釋放，而非從不存在于沉積物中的殘余化合物。繼續(xù)進行本研究，以評估沉積物隨時間的行為。投予150 y g劑量時形成的沉積物 在2個月后仍能檢測到，但尺寸變小。有一些在3個月時完全消失，而一些持續(xù)存在長達6 個月。投予450、1050或2100i!g劑量形成的沉積物在6個月后仍能檢測到。有證據(jù)表明， 在6個月時間點時，其尺寸和/或密度減小。在大部分情況下，投予450、1050和2100 y g 劑量水平時形成的沉積物在37周時間點以及到研究結(jié)束時止長達1年的時間點仍能觀察 到。利用檢眼鏡檢查和超聲波都能觀察到沉積物。看起來，其尺寸隨時間繼續(xù)減小和/或 分裂成多個更小的沉積物。此外，如通過測量從這些動物獲得的血清樣品中的坎普他汀類 似物所確定，在此期間，發(fā)生坎普他汀類似物的持續(xù)釋放。在一項獨立研究中，當通過玻璃體內(nèi)注射投予濃度低到lmg/ml (50 ii g于50 ill 中)的含化合物的水時，通過檢眼鏡檢查和超聲波都觀察到凝膠狀沉積物。到給藥后約1 周時，使用這些技術(shù)無法檢測到沉積物。注意到，總體上，與在兔中所見的情形相比，在猴中沉積物的形成和消失速率具有 更高可再現(xiàn)性。一般說來，注意到，與投予相同劑量的猴相比，在兔中形成的沉積物更致密 并且持續(xù)時間更長。在猴或兔研究中，利用組織病理學檢查或在體格檢查期間都未觀察到 由沉積物引起的不利影響。實例4 調(diào)節(jié)沉積物特性測試各種賦形劑、緩沖劑和pH值范圍，以評定其改變實例1到3中所用坎普他汀 類似物的凝膠形成特性的潛力，并且評定其對體外和體內(nèi)凝膠特性的影響。評定包括精氨 酸、絲氨酸和組氨酸在內(nèi)的氨基酸。發(fā)現(xiàn)，含有組氨酸的調(diào)配物在凝膠穩(wěn)定性方面所展現(xiàn)的 特性比含有精氨酸或絲氨酸的調(diào)配物有利。在一些實驗中，在體外和/或體內(nèi)測試單獨或各種組合形式的各種濃度的乙酸鈉 (NaCH3C00)、組氨酸和甘露醇的影響。組氨酸和甘露醇的濃度在10mM到50mM的范圍內(nèi)。一 般說來，觀察到，與由只含有存于水中的坎普他汀類似物的調(diào)配物形成的凝膠相比，含有任 一所述物質(zhì)的調(diào)配物產(chǎn)生的凝膠更易碎，并且在體內(nèi)尺寸減小得更快?？傊?，添加這些賦形 劑允許調(diào)節(jié)尺寸減小的速率，并由此調(diào)節(jié)沉積物中坎普他汀類似物的釋放速率。所述調(diào)節(jié) 可潛在地允許投予總劑量較高的坎普他汀類似物。例示性調(diào)配物包括下述
A. lOOmM乙酸鈉的注射用水溶液(pH = 5. 10)。B. lOOmM 乙酸鈉 +25mM 組氨酸(pH = 5. 2)C. lOOmM 乙酸鈉 +45mM 甘露醇(pH = 5. 05)pH值范圍為約(5到5. 50)。材料1.乙酸鈉儲備液3M制造商艾姆拜公司(Ambion)pH = 5. 5調(diào)配物中最終濃度lOOmM調(diào)配物的最終pH值5. 12.組氨酸DL-組氨酸鹽酸鹽，98% min分子量209.64制造商艾科斯科技公司(Acros Organics)3. D-甘露醇USP級粉末制造商菲舍爾科技公司(Fisher Scientific)調(diào)配方案對于制備10ml溶液1.用去離子水將乙酸鈉從3M稀釋到lOOmM。2.稱取精確量的組氨酸/甘露醇，以達到所需濃度。3.測定溶液的最終pH值和摩爾滲透壓濃度。對于制備所需的坎普他汀類似物調(diào)配物1.對空管稱重2.將所需量的坎普他汀類似物添加到這些管中。3.添加溶液(水/乙酸鈉/乙酸鈉+甘露醇/乙酸鈉+組氨酸)以達到所需的坎 普他汀類似物濃度4.利用0. 22微米無菌濾膜過濾溶液5.測量最終吸光度以驗證坎普他汀類似物的最終濃度6.測量最終溶液的pH值。在一些實驗中，將坎普他汀類似物添加到lOOmM乙酸鈉的注射用水溶液(pH = 5. 10)中。通過玻璃體內(nèi)注射，將調(diào)配物(1050 ii g坎普他汀類似物于50iU液體中)投予 3只非人類靈長類動物。在2周到6周中，所有3只動物都顯示出沉積物。到第9周，沒有 觀察到顯著沉積物。3只動物中有一只展現(xiàn)殘余物(remnant)。相比之下，在第9周時，接 收等量由坎普他汀類似物溶解于WFI中組成的坎普他汀類似物調(diào)配物的動物顯現(xiàn)沉積物。 由此，乙酸鈉的存在使沉積物的溶解速率明顯增加。-k -k -k -k -k -k -k所屬領(lǐng)域技術(shù)人員僅使用常規(guī)實驗就能認識到或能夠確定本文所述的本發(fā)明具體實施例的許多等效物。本發(fā)明的范圍不打算局限于上述實施方式，而是如隨附權(quán)利要求 書所述。應(yīng)理解，本發(fā)明不受任何具體實例中或利用任何具體實施例實現(xiàn)的特定結(jié)果所限 制。在權(quán)利要求書中，除非另作相反說明或另外由上下文顯而易見，否則例如“一”和“所 述”等詞可指一個或多于一個。除非另作相反說明或另外由上下文顯而易見，否則認為在一 組的一個或多個成員之間包括“或”的權(quán)利要求或?qū)嵤┓绞綕M足所述組的一個、多于一個或 所有成員存在于、用于給定產(chǎn)物或方法中，或另外與給定產(chǎn)物或方法相關(guān)。本發(fā)明包括所述 組的正好一個成員存在于、用于給定產(chǎn)物或方法中或者另外與給定產(chǎn)物或方法相關(guān)的實施 例。例如(但不限于)，應(yīng)了解，在權(quán)利要求或?qū)嵤┓绞街甘咎囟ㄎ恢玫臍埢蛇x自特定氨 基酸或氨基酸類似物群組的情況下，本發(fā)明包括所述位置的殘基是所列任何氨基酸或氨基 酸類似物的個別實施例。本發(fā)明還包括所述組的多于一個或所有成員都存在于、用于給定 產(chǎn)物或方法中或者另外與給定產(chǎn)物或方法相關(guān)的實施例。此外，應(yīng)了解，本發(fā)明涵蓋將所列 一個或多個權(quán)利要求中的一個或多個限定、要素、條款、說明性術(shù)語等引入另一權(quán)利要求中 的所有變更、組合和改變。具體說來，可對附屬于另一權(quán)利要求的任何權(quán)利要求進行修改， 以使其包括附屬于同一基本權(quán)利要求的任何其它權(quán)利要求中所見的一個或多個要素或限 定。此外，當權(quán)利要求敘述一種組合物時，除非另作指示，或除非所屬領(lǐng)域技術(shù)人員明顯發(fā) 現(xiàn)會引起抵觸或矛盾，否則應(yīng)了解，包括根據(jù)任何本文所述方法投予組合物的方法，和使用 組合物實現(xiàn)本文中所揭示的任何目的的方法，并且包括根據(jù)本文所揭示的任何制備方法制 備組合物的方法。在要素是以例如馬庫西群組(Markush group)格式以列表提供的情況下，應(yīng)了解， 也揭示出所述要素的各個亞組并且可從所述群組中去除任何要素。出于簡明的目的，本文 中只個別且具體地敘述這些實施例中的一些實施例，但本發(fā)明包括所所有此類實施例。還 應(yīng)了解，一般說來，在本發(fā)明或本發(fā)明各方面提及包含特定要素、特征等的情況下，本發(fā)明 某些實施例或本發(fā)明各方面由或基本上由此類要素、特征等組成。在本發(fā)明某些方法中包括“提供”的步驟是打算指示投予所述組合物以治療本方 法中所敘述的病癥。因此，個體將患有所述病癥或有患所述病癥的風險，并且通常在執(zhí)業(yè)醫(yī) 師或手術(shù)人員的建議下，投予組合物以治療病癥，所述執(zhí)業(yè)醫(yī)師或手術(shù)人員可以是或可不 是投予組合物的同一個體。本發(fā)明包括不明確包括提供步驟的實施例，和包括提供步驟的 實施例。本發(fā)明還包括包含將個體鑒別為有患補體介導的病癥的風險或患有所述病癥的步 驟的實施例。當給定范圍時，本發(fā)明包括包含終點的實施例、排除兩個終點的實施例，以及包括 一個終點但排除另一終點的實施例。除非另作說明，否則可假定兩個終點都包括在內(nèi)。此 外，應(yīng)了解，除非另作指示，或者另外從上下文和所屬領(lǐng)域技術(shù)人員的理解顯而易見，否則 以范圍表示的值在本發(fā)明不同實施例中可采用所述范圍內(nèi)的任何具體值或子范圍，除非上 下文中另作清楚指示，否則精確到所述范圍下限單位的十分之一。1個月的時間應(yīng)理解為指 30天。1年的時間應(yīng)理解為指365天。對于數(shù)字值前加“約”或“近似”的本發(fā)明任何實施 例，本發(fā)明包括敘述確切值的實施例。對于數(shù)字值前未加“約”或“近似”的本發(fā)明任何實 施例，本發(fā)明包括在所述值前加“約”或“近似”的實施例。應(yīng)了解，本發(fā)明的任何特定實施例、特征或方面可明確地從任一個或多個權(quán)利要 求中排除。例如，可從任一個或多個權(quán)利要求中排除任何特定組合物、化合物或化合物種類、投藥部位、投藥途徑或方法、劑量、調(diào)配物或補體介導的病癥。
權(quán)利要求
一種治療補體介導的病癥的方法，其包含以下步驟將包含有效量的坎普他汀(compstatin)類似物的液體組合物投予個體的血管外位置，其中所述有效量足以在所述血管外位置內(nèi)形成含有所述坎普他汀類似物的離散的宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述有效量足以形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)，其尺寸隨 時間而減小，但在至少2周內(nèi)仍易于檢測到。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述有效量足以形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)，其尺寸隨 時間而減小，并釋放出活性形式的坎普他汀類似物，持續(xù)至少2周。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述有效量足以形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)，其尺寸隨 時間而減小，但在至少3個月內(nèi)仍易于檢測到。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述有效量足以形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)，其尺寸隨 時間而減小，并釋放出活性形式的坎普他汀類似物，持續(xù)至少3個月。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述有效量足以形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)，其尺寸隨 時間而減小，并釋放出活性形式的所述坎普他汀類似物，以在所述血管外位置或鄰近組織 內(nèi)達到所述坎普他汀類似物的治療濃度，持續(xù)至少2周。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述有效量足以形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)，其尺寸隨 時間而減小，并釋放出活性形式的所述坎普他汀類似物，以在所述血管外位置或鄰近組織 內(nèi)達到所述坎普他汀類似物的治療濃度，持續(xù)至少3個月。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述坎普他汀類似物包含肽，所述肽的序列包含 選自由SEQ ID NO :3、4、5、6和7組成的群組的序列。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述坎普他汀類似物的活性是SEQID N0:8的至 少100倍。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述坎普他汀類似物的活性是SEQID N0:8的 至少200倍。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述坎普他汀類似物的序列選自SEQID NO 14, 21、28、29、30、31、32、33、34 和 36。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述坎普他汀類似物的序列選自SEQID N0:28、 32 禾口 34。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述液體組合物中所述坎普他汀類似物的量介 于 lmg/ml 與 50mg/ml 之間。
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述液體組合物中所述坎普他汀類似物的量介 于 2mg/ml 與 25mg/ml 之間。
15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中將介于50μ g與5000 μ g之間的坎普他汀類似物 投予玻璃體腔。
16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中將介于150μ g與2000 μ g之間的坎普他汀類似 物投予玻璃體腔。
17.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中將介于400μ g與1500 μ g之間的坎普他汀類似 物投予玻璃體腔。
18.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中以介于25μ1與125μ 1之間的體積將所述坎普 他汀類似物投予玻璃體腔。
19.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中以約50μ 1的體積將所述坎普他汀類似物投予玻璃體腔。
20.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述個體患有年齡相關(guān)性黃斑變性，并且所述液 體組合物是投予玻璃體腔。
21.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述液體組合物進一步包含有效量的第二治療劑。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述第二治療劑是補體抑制劑、血管生成抑制 齊U、類固醇、消炎劑、抗感染劑或鎮(zhèn)痛劑。
23.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物是經(jīng)玻璃體內(nèi)注射投予。
24.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物包含多個微米粒子或納米粒子。
25.一種凝膠狀結(jié)構(gòu)，其包含坎普他汀類似物和至少一種通常存在于個體的血管外位 置的內(nèi)源性多肽。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的凝膠狀結(jié)構(gòu)，其中所述血管外位置選自由以下組成的群 組玻璃體腔、結(jié)膜下腔、筋膜下腔(sub-Tenon' s space)、視網(wǎng)膜下腔、滑膜腔和腦脊髓腔。
27.一種包含坎普他汀類似物的液體組合物，其中所述組合物的特征在于，其當投予哺 乳動物個體的玻璃體腔內(nèi)時，形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述坎普他汀類似物是以足量存在，以 當通過玻璃體內(nèi)注射投予所述個體的玻璃體腔時，形成離散的宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)。
29.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述坎普他汀類似物是以足以形成宏觀 凝膠狀結(jié)構(gòu)的量存在，所述結(jié)構(gòu)的尺寸隨時間而減小，但在至少2周內(nèi)仍易于檢測到。
30.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述坎普他汀類似物是以足以形成宏觀 凝膠狀結(jié)構(gòu)的量存在，所述結(jié)構(gòu)的尺寸隨時間而減小，并釋放出活性形式的坎普他汀類似 物，持續(xù)至少2周。
31.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述坎普他汀類似物是以足以形成宏觀 凝膠狀結(jié)構(gòu)的量存在，所述結(jié)構(gòu)的尺寸隨時間而減小，但在至少3個月內(nèi)仍易于檢測到。
32.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述坎普他汀類似物是以足以形成宏觀 凝膠狀結(jié)構(gòu)的量存在，所述結(jié)構(gòu)的尺寸隨時間而減小，并釋放出活性形式的坎普他汀類似 物，持續(xù)至少3個月。
33.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述坎普他汀類似物是以足以形成宏觀 凝膠狀結(jié)構(gòu)的量存在，所述結(jié)構(gòu)的尺寸隨時間而減小，但在至少6個月內(nèi)仍易于檢測到。
34.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述坎普他汀類似物是以足以形成宏觀 凝膠狀結(jié)構(gòu)的量存在，所述結(jié)構(gòu)的尺寸隨時間而減小，并釋放出活性坎普他汀類似物，持續(xù) 至少6個月。
35.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述坎普他汀類似物是以足以形成宏觀 凝膠狀結(jié)構(gòu)的量存在，所述結(jié)構(gòu)的尺寸隨時間而減小，并釋放出活性形式的所述坎普他汀 類似物，以便在所述玻璃體腔或鄰近組織內(nèi)達到所述坎普他汀類似物的治療濃度，持續(xù)至 少2周。
36.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述坎普他汀類似物是以足以形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)的量存在，所述結(jié)構(gòu)的尺寸隨時間而減小，并釋放出活性形式的所述坎普他汀 類似物，以便在所述玻璃體腔或鄰近組織內(nèi)達到所述坎普他汀類似物的治療濃度，持續(xù)至 少3個月。
37.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述坎普他汀類似物包含肽，所述肽的 序列包含選自由SEQ ID NO :3、4、5、6和7組成的群組的序列。
38.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述坎普他汀類似物的活性是SEQ IDNO 8的至少100倍。
39.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述坎普他汀類似物的活性是SEQ IDNO 8的至少200倍。
40.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述坎普他汀類似物的序列包含選自 SEQ ID NO :14、21、28、29、30、31、32、33、34 和 36 的序列。
41.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述坎普他汀類似物的序列包含選自 SEQ ID NO :28、32 和 34 的序列。
42.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述坎普他汀類似物的序列包含SEQ IDNO :28ο
43.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述坎普他汀類似物的序列包含SEQ IDNO :32。
44.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述坎普他汀類似物的序列包含SEQ IDNO :34ο
45.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述液體組合物中所述坎普他汀類似物 的量介于lmg/ml與50mg/ml之間。
46.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述液體組合物中所述坎普他汀類似物 的量介于3mg/ml與25mg/ml之間。
47.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述組合物含有介于150μ g與5000 μ g 之間的坎普他汀類似物。
48.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述組合物含有介于250μ g與2000 μ g 之間的坎普他汀類似物。
49.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述組合物含有介于400μg與1500μ g 之間的坎普他汀類似物。
50.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述組合物的體積介于25μ 1與125 μ 1 之間。
51.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述組合物在介于50μ 1與100 μ 1之間 的體積中含有介于150 μ g與2000 μ g之間的坎普他汀類似物。
52.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述組合物基本上由存于水中的坎普他 汀類似物組成。
53.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述組合物實質(zhì)上無賦形劑。
54.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述組合物包含選自由以下組成的群組 的組分多元醇和氨基酸。
55.根據(jù)權(quán)利要求54所述的液體組合物，其中所述組分的存在調(diào)節(jié)所述沉積物在體內(nèi)消失的速率。
56.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述組合物包含組氨酸。
57.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述組合物包含緩沖劑。
58.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述組合物包含乙酸鈉。
59.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述組合物包含甘露醇。
60.根據(jù)權(quán)利要求27所述的液體組合物，其中所述液體組合物進一步包含有效量的第 二治療劑。
61.根據(jù)權(quán)利要求60所述的液體組合物，其中所述第二治療劑是補體抑制劑、血管生 成抑制劑、類固醇、消炎劑、抗感染劑或鎮(zhèn)痛劑。
62.根據(jù)權(quán)利要求60所述的液體組合物，其中所述第二治療劑是抗體或抗體片段。
63.一種制備用于在一段較長時間內(nèi)遞送治療劑的組合物的方法，其包含制備包含 所述治療劑和坎普他汀類似物的液體組合物，其中所述坎普他汀類似物是以足量存在，以 當將所述組合物投予哺乳動物個體的血管外位置時，形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)。
64.根據(jù)權(quán)利要求63所述的方法，其進一步包含將所述液體組合物投予哺乳動物個體 體內(nèi)的血管外位置。
65.根據(jù)權(quán)利要求63所述的方法，其中所述血管外位置是玻璃體腔。
66.根據(jù)權(quán)利要求63所述的方法，其中所述血管外位置是玻璃體腔，并且所述個體患 有年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)。
67.—種治療患有AMD或有患AMD風險的個體的方法，其包含將包含坎普他汀類似物的 液體組合物直接投予所述個體的玻璃體腔，其中所述液體組合物含有足量的所述坎普他汀 類似物，以在投藥后形成宏觀凝膠狀結(jié)構(gòu)。
68.根據(jù)權(quán)利要求67所述的方法，其中所述坎普他汀類似物包含肽，所述肽的序列包 含選自由SEQ ID NO :3、4、5、6和7組成的群組的序列。
69.根據(jù)權(quán)利要求67所述的方法，其中所述坎普他汀類似物的活性是SEQID NO :8的 至少100倍。
70.根據(jù)權(quán)利要求67所述的方法，其中所述坎普他汀類似物的活性是SEQID NO :8的 至少200倍。
71.根據(jù)權(quán)利要求67所述的方法，其中所述坎普他汀類似物的序列選自SEQID NO 14、21、28、29、30、31、32、33、34 和 36。
72.根據(jù)權(quán)利要求67所述的方法，其中所述坎普他汀類似物的序列選自SEQID NO 28,32 和 34。
73.根據(jù)權(quán)利要求67所述的方法，其中所述坎普他汀類似物的量介于2mg/ml與20mg/ ml之間。
74.根據(jù)權(quán)利要求67所述的方法，其中將介于100μ g與2，000 μ g之間的坎普他汀類 似物投予眼睛。
75.根據(jù)權(quán)利要求67所述的方法，其中將介于250μ g與1，500 μ g之間的坎普他汀類 似物投予眼睛。
76.根據(jù)權(quán)利要求67所述的方法，其中將介于400μ g與1，200 μ g之間的坎普他汀類 似物投予眼睛。
77.根據(jù)權(quán)利要求67所述的方法，其中所述液體組合物進一步包含血管生成抑制劑。
78.—種包含坎普他汀類似物和水的液體組合物，其中所述坎普他汀類似物的濃度介 于 3mg/ml 與 50mg/ml 之間。
79.根據(jù)權(quán)利要求78所述的液體組合物，其中所述坎普他汀類似物的濃度介于5mg/ml 與30mg/ml之間。
80.根據(jù)權(quán)利要求78所述的液體組合物，其中所述坎普他汀類似物的濃度介于8mg/ml 與25mg/ml之間。
81.根據(jù)權(quán)利要求78至80中任一權(quán)利要求所述的液體組合物，其中所述坎普他汀類似 物包含選自由SEQ ID NO :3、4、5、6和7組成的群組的肽。
82.根據(jù)權(quán)利要求78至80中任一權(quán)利要求所述的液體組合物，其中所述坎普他汀類似 物的活性是SEQ ID NO 8的至少100倍。
83.根據(jù)權(quán)利要求78至80中任一權(quán)利要求所述的液體組合物，其中所述坎普他汀類似 物的活性是SEQ ID NO 8的至少200倍。
84.根據(jù)權(quán)利要求78至80中任一權(quán)利要求所述的液體組合物，其中所述坎普他汀類似 物的序列選自 SEQ ID NO :14、21、28、29、30、31、32、33、34 和 36。
85.根據(jù)權(quán)利要求78至80中任一權(quán)利要求所述的液體組合物，其中所述坎普他汀類似 物的序列選自SEQ ID NO :28、32和34。
86.根據(jù)權(quán)利要求78至80中任一權(quán)利要求所述的液體組合物，其中所述組合物基本上 由所述坎普他汀類似物和水組成。
87.根據(jù)權(quán)利要求78至80中任一權(quán)利要求所述的液體組合物，其中所述組合物進一步 包含選自氨基酸和糖醇的賦形劑。
全文摘要
本發(fā)明提供坎普他汀(compstatin)類似物以及任選地另一活性劑的持續(xù)遞送，其是通過從將含有所述坎普他汀類似物的液體溶液投予哺乳動物個體體內(nèi)的血管外位置(例如玻璃體腔)所形成的宏觀凝膠狀沉積物釋放來進行。
文檔編號A61K9/52GK101854916SQ200880115155
公開日2010年10月6日 申請日期2008年10月2日 優(yōu)先權(quán)日2007年10月2日
發(fā)明者保羅·奧爾森, 塞德里克·弗朗索瓦, 帕斯卡爾·德沙特萊 申請人:博泰迪亞制藥公司