專利名稱：：用于在狗中治療淋巴瘤的伊達比星的制作方法用于在狗中治療淋巴瘤的伊達比星本發(fā)明涉及伊達比星(idarubicin)用于治療犬類癌癥的用途。具體地，本發(fā)明涉及伊達比星用于治療犬類淋巴瘤的用途。
背景技術(shù)：
：20%到25%的狗在其生命中會發(fā)生癌癥，存活10年或更久的狗有50%發(fā)生癌癥的可能性。即便如此，目前沒有批準用于治療犬癌癥的藥物。狗中最普遍的癌癥是淋巴瘤。針對犬淋巴瘤的化學(xué)療法包括蒽環(huán)類藥劑多柔比星的標(biāo)示外(off-label)使用。然而，多柔比星的使用通常受限于獸醫(yī)腫瘤醫(yī)師，因為其必須通過緩慢的靜脈輸注來施用。該施用伴隨著發(fā)生外滲導(dǎo)致嚴重組織毒性的風(fēng)險，和患者發(fā)生變應(yīng)性反應(yīng)導(dǎo)致休克的風(fēng)險。限制多柔比星劑量的副作用通常是中性白細胞減少。多柔比星的長期使用受限于其引起心臟毒性的傾向和藥物抗性的發(fā)生。因此，對用于治療犬類淋巴瘤的其他化學(xué)療法存在持續(xù)的需求。優(yōu)選地，這類療法應(yīng)當(dāng)允許更便利的施用途徑，使得施用可以由非專業(yè)人士進行。更不容易發(fā)生抗性的療法會是尤其有價值的，例如能夠在已經(jīng)對多柔比星發(fā)生抗性的動物中使用的療法。優(yōu)選的療法應(yīng)當(dāng)是不與其他化學(xué)治療藥劑具有不良相互作用的，尤其優(yōu)選的是與其他藥劑組合使用時提供協(xié)同效果的藥劑。伊達比星(I)是被批準用于人化學(xué)療法中的蒽環(huán)類藥劑，并且可以通過靜脈和口服兩種途徑施用給人類患者。注射用伊達比星可作為通用藥物獲得和以名稱Idamycin獲得?？诜渲莆镌跉W洲以名稱Zavedos出售。其(特別是在口服施用后)被代謝為伊達比星醇(II)，所述伊達比星醇也是有效的細胞毒性劑。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>伊達比星在貓中的效果已被簡要研究(Moore等，J.Am.Vet.Med.Assoc.1995，206(10),1550-1554)。尚未報道伊達比星在狗中的治療性用途或藥物代謝動力學(xué)。我們目前發(fā)現(xiàn)，伊達比星尤其適用于治療犬類淋巴瘤。其可以便利地口服施用，并且口服的生物利用度不受飼喂的不利影響。其對已發(fā)生多柔比星抗性的腫瘤也有活性。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明第一方面提供了在狗中治療淋巴瘤的方法，包括對需要這類治療的狗施用治療有效量的伊達比星或其藥學(xué)可接受的鹽。本發(fā)明在另一方面中提供了多柔比星或其藥學(xué)可接受的鹽用于制造用于在狗中治療淋巴瘤的藥物的用途。本發(fā)明的另一方面提供了用于在狗中治療淋巴瘤的藥物組合物，其包含伊達比星或其藥學(xué)可接受的鹽和藥學(xué)可接受的載體。發(fā)明詳述本發(fā)明一般涉及伊達比星⑴用于在狗中治療淋巴瘤的用途。伊達比星的這種用途允許可能等于或優(yōu)于目前使用的方案的治療效果?？诜┯玫目赡苄愿颖憷⑻峁└倪M的安全性。在本文中使用時·術(shù)語“治療”包括姑息治療(抑制疾病發(fā)展)、治愈治療(誘導(dǎo)平息)和預(yù)防治療(維持平息)，和在疾病復(fù)發(fā)的情況下的搶救治療；·術(shù)語“狗”包括馴養(yǎng)狗的所有品種和變種，以及屬于動物園收集或圈養(yǎng)繁殖程序部分的非馴養(yǎng)物種(例如狼和狐貍)。伊達比星可以以游離堿形式使用，或者以藥學(xué)可接受的鹽形式使用。在本文中使用時，“藥學(xué)可接受的”包括“獸醫(yī)可接受的”。藥學(xué)可接受的伊達比星鹽包括其酸加成鹽。合適的酸加成鹽由形成無毒鹽的酸形成。例如包括乙酸鹽、天冬酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、碳酸氫鹽/碳酸鹽、硫酸氫鹽/硫酸鹽、硼酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、乙二磺酸鹽、乙磺酸鹽、甲酸鹽、延胡索酸鹽、葡庚糖酸鹽(glue印tate)、葡糖酸鹽、葡萄糖醛酸鹽、六氟磷酸鹽、鹽酸鹽/氯化物、氫溴化物/溴化物、氫碘化物/碘化物、羥乙基磺酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、萘酸鹽(naphthylate)、2_萘磺酸鹽、煙酸鹽(nicotinate)、硝酸鹽、乳清酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、巴莫酸鹽(pamoate)、磷酸鹽/磷酸氫鹽/磷酸二氫鹽、糖二酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽和三氟乙酸鹽。一種尤其優(yōu)選的鹽是伊達比星鹽酸鹽。以固體形式使用伊達比星時，預(yù)期可使用任何合適的固體形式。因此，本發(fā)明不限于任何具體的溶劑化形式或未溶劑化形式，或者任何具體的多晶型形式。適用于本發(fā)明目的的伊達比星可得自TecolandCorporation,NervianoMedicalSciences(意大利)、PfizerCork(愛爾蘭)或TPMAntibioticosS.p.A(意大利)。或者可以根據(jù)EP337665及其中參考文獻中公開的方法制備伊達比星。適用于本發(fā)明目的的伊達比星鹽酸鹽可得自Transo-pharm。用于本發(fā)明的伊達比星一般應(yīng)以適合受試狗的期望施用途徑的方式配制。配制物可包含一種或多種藥學(xué)可接受的賦形劑，如本領(lǐng)域所公知。在一個優(yōu)選的實施方案中，口服施用伊達比星。適用于口服施用的配制物包括固體和液體配制物。固體配制物包括片劑、調(diào)味片劑、含微粒的膠囊、液體或粉末；錠劑(包括填充液體的錠劑)、咀嚼劑；多微粒劑和納米微粒劑；凝膠、固溶體、脂質(zhì)體、薄膜(包括粘膜-粘附性薄膜)、栓劑、噴霧和液體配制物。液體配制物包括懸浮液、溶液、糖漿和酏劑。這類配制物可以在軟膠囊或硬膠囊中用作填充劑，并典型地包含載體，例如水、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、甲基纖維素，或合適的油，和一種或多種乳化劑和/或懸浮劑。也可以通過將例如來自于囊劑的固體重建來制備液體配制物。對于片劑劑型而言，取決于劑量，藥物可占劑型的1重量％到80重量％，更典型地占劑型的5重量％到60重量％。除藥物之外，片劑一般還含有崩解劑。崩解劑的例子包括淀粉乙醇酸鈉、羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素鈣、交聯(lián)羧甲纖維素鈉、交聚維酮、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纖維素、微晶纖維素、低級烷基取代的羥丙基纖維素、淀粉、預(yù)膠化的淀粉和藻酸鈉。通常崩解劑會占劑型的1重量％到25重量％，優(yōu)選5重量％到20重量％。通常使用粘合劑賦予片劑配制物粘合特性。合適的粘合劑包括微晶纖維素、明膠、聚乙二醇、天然和合成的膠質(zhì)、聚乙烯吡咯烷酮、預(yù)膠化的淀粉、羥丙基纖維素和羥丙基甲基纖維素。片劑也可含有稀釋劑，例如乳糖(一水合物、噴霧干燥的一水合物、無水等等)、甘露醇、木糖醇、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、微晶纖維素、淀粉和磷酸氫鈣二水合物。片劑也可任選地包含表面活性劑例如十二烷基硫酸鈉和聚山梨酯80，和助流劑例如二氧化硅和滑石。存在時，表面活性劑可占片劑的0.2重量％到5重量％，助流劑可占片劑的0.2重量％到1重量％。片劑通常還含有潤滑劑例如硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸鋅、硬脂酰延胡索酸鈉、和硬脂酸鎂與十二烷基硫酸鈉的混合物。潤滑劑通常占片劑的0.25重量％到10重量％，優(yōu)選地0.5重量％到3重量％。其他可能的成分包括抗氧化劑、著色劑、調(diào)味劑、防腐劑和遮味劑?？梢杂美缬裁髂z或軟明膠制造膠囊。明膠可以與例如染料(例如氧化鐵紅)或遮光劑(例如二氧化鈦)混合?？梢杂美绶勰┨畛淠z囊，所述粉末包含活性劑和賦形劑，例如崩解劑、潤滑劑和結(jié)構(gòu)基質(zhì)。用于膠囊配制物的合適填充物的例子是粉末，所述粉末由伊達比星鹽酸鹽(5重量％)、微晶纖維素(93重量％)和棕櫚酰硬脂酸甘油脂(2重量％)組成。1kg該混合物足夠用于10，000粒膠囊，每粒膠囊含有5mg伊達比星鹽酸鹽。在一個替代性的實施方案中，腸胃外施用伊達比星，即直接進入血流中，直接進入腫瘤中(腫瘤內(nèi))，或進入內(nèi)部器官中。腸胃外施用的合適手段包括靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)和血管內(nèi)施用。腸胃外配制物典型地是水性溶液，其可含有賦形劑例如鹽、碳水化合物和緩沖劑(優(yōu)選地緩沖至3到9的pH)，但是對一些應(yīng)用而言，它們可能更適合被配制為無菌非水性溶液，或配制為要與合適載劑(例如無菌、無熱原的水)組合使用的干燥形式?？梢允褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員公知的標(biāo)準制藥技術(shù)，容易地實現(xiàn)(例如通過冷凍干燥)在無菌條件下制備腸胃外配制物?？梢愿鶕?jù)本發(fā)明使用伊達比星治療犬類淋巴瘤。要施用的伊達比星的劑量應(yīng)由獸醫(yī)考慮狗的大小、疾病的進展和任何其它相關(guān)因素來決定。典型地，伊達比星的劑量在口服給予體重少于15kg的狗時可在0.4和1.Omg/kg之間，口服給予體重大于或等于15kg的狗時在9和25mg/平方米之間。提供0.5mg、lmg、5mg、10mg和25mg劑量的單位劑型(片劑或膠囊)允許便利地治療大部分品種的狗。給藥可以以合適的間隔重復(fù)，例如每周一次、每兩周一次、每三周一次或每月一次，直至實現(xiàn)期望的結(jié)果?？赡苡泄?jié)律地進行伊達比星給藥，其中給予小的每日劑量，從而誘導(dǎo)抗血管生成效應(yīng)或限制疾病發(fā)展。對靜脈內(nèi)施用而言劑量會更低，例如0.03和3mg/kg之間、0.05和1.5mg/kg之間或0.1和lmg/kg之間。實施例1-在客戶擁有的患有淋巴瘤的狗(體重大于或等于15kg)中測定PF-00929868-01(伊達比星)的最大耐受口服劑量(MTD)和劑量限制性毒性(DLT)的研究用12.5mg/m2劑量的口服伊達比星的單次治療對患有淋巴瘤且體重大于或等于15kg的三只狗進行治療。該劑量在3周的時間段內(nèi)被良好耐受。實施例2-在犬淋巴瘤活檢和淋巴瘤細胞系中對淋巴組織增生進行伊達比星的體外評價比較應(yīng)答伊達比星和多柔比星的各自IC5tl的抗增殖數(shù)值。該研究使用體外測定法，所述體外測定法用使用標(biāo)準組織培養(yǎng)技術(shù)維持許多代的已建立的細胞系和離體衍生的犬淋巴瘤細胞進行。結(jié)節(jié)組織得自MSU獸醫(yī)診所的犬類淋巴瘤患者。在接收結(jié)節(jié)組織的24小時內(nèi)或從冷凍細胞系原種傳到第10代之前進行測定。使用的已建立的細胞系是3132和CI-I，其分別是B細胞和T細胞起源的犬淋巴細胞系。在具有5%CO2的潮濕培養(yǎng)箱中，于RPMI完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)這些細胞。材料和方法抗增殖測定(1)犬淋巴瘤細胞系。3132和CI-I分別是B細胞和T細胞起源的犬淋巴細胞系。在具有5%CO2的潮濕培養(yǎng)箱中于37°C下，在補充有10%FBS(3132)或20%FBS(CI-I)的RPMI完全培養(yǎng)基(改進的RPMI1640、10mMH印es、2mMGlutamax、100U/mL青霉素、lOOug/mL鏈霉素和0.25ug/mL兩性霉素B)中培養(yǎng)這些細胞。(2)離體犬淋巴瘤結(jié)節(jié)組織。由密歇根州立大學(xué)(MSU)獸醫(yī)學(xué)院的獸醫(yī)職員切下惡性淋巴結(jié)節(jié)，置于運輸培養(yǎng)基(補充有10%胎牛血清(FBS)、100U/mL青霉素、100ug/mL鏈霉素和0.25ug/mL兩性霉素B(Invitrogen/Gibco)的改進的RPMI1640完全培養(yǎng)基)中。通過切碎成小片并經(jīng)過組織篩網(wǎng)，在24小時內(nèi)加工結(jié)節(jié)。將細胞懸浮液在200xg離心，去除上清液，并在室溫下將細胞沉淀物在NH4Cl(0.15M)中重懸10分鐘。通過離心沉淀細胞懸浮液；去除NH4Cl并用Hanks平衡鹽溶液(HBSS)洗滌一次，之后重懸于增殖培養(yǎng)基(改進的RPMI完全培養(yǎng)基、FBS、50nM2-巰基乙醇、100U/mL青霉素、100ug/mL鏈霉素和0.25ug/mL兩性霉素B)中。然后使細胞懸浮液經(jīng)過100μm尼龍細胞過濾器(BD-Falcon)并使用血細胞計數(shù)器計數(shù)。在單獨的增殖培養(yǎng)基、補充有0.005%Pansorbin(熱失活的、福爾馬林固定的StaphylococcusAureus細胞(SAC)，Calbiochem)和10ng/mL犬IL-2(R&DSystems)的增殖培養(yǎng)基、或補充有125ng/mL刀豆素A(Sigma)和125ng/mL脂多糖(LPS；Calbiochem)的增殖培養(yǎng)基任二培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞。(3)體外抗增殖測定方法。將在上述培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細胞以IXIO3細胞/孔(淋巴瘤細胞系)或2X105細胞/孔(淋巴結(jié)細胞)的密度涂布于96-孔Costar平板(Corning)中，并在具有5%CO2的潮濕培養(yǎng)箱中于37°C下在不同濃度的測試化合物中暴露至多5天。根據(jù)制造商的說明，使用CellTiter96水性非放射性細胞增殖測定法(Promega)測定對增殖的影響。通常使用可溶的四唑鹽(MTS)和電子偶聯(lián)劑間接測量增殖。使用SoftmaxPro4.6軟件(MolecularDevices)，通過Spectramax平板讀數(shù)器上490nM處的吸光度監(jiān)測MTS生物還原成為組織培養(yǎng)基中可溶的甲臜(formazan)產(chǎn)物。使用GraphPadPrism4.0將數(shù)據(jù)圖示為百分比對照，并使用具有S形劑量應(yīng)答的非線性回歸模型擬合IC5Q曲線。(4)數(shù)據(jù)分析對結(jié)節(jié)組織而言，通過Prism4.0(GraphpadSoftware)以以下方式處理數(shù)據(jù)。針對未刺激的、刺激的和所有藥物治療(一式三份)計算來自原始光密度值(0D)的均值，并用于下式中(平均藥物治療0D-平均未刺激0D)X100=%對照增殖(平均刺激0D-平均未刺激0D)對細胞系而言(平均藥物治療0D-平均介質(zhì)空白0D)X100=%對照增殖(平均未處理0D-平均介質(zhì)空白0D)計算后針對每個藥物濃度(或標(biāo)準)對這些值做圖，并通過點對點分析計算IC5Q。對IC5(I值分析而言，百分比對照值不允許超過100%或低于0%。本文報道了每個淋巴結(jié)和細胞系的IC5(1值。多柔比星和伊達比星抗增殖IC5Q細胞系或淋巴結(jié)描述培養(yǎng)基中的刺激劑多柔比星IC50(nM)IoxorubicinIC50(nM)3132B-細胞LSA株系2.7CL-1T-細胞LSA株系4.31.97<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>權(quán)利要求在狗中治療淋巴瘤的方法，包括對需要這類治療的狗施用治療有效量的伊達比星或其藥學(xué)可接受的鹽。2.權(quán)利要求1的方法，其中口服施用所述伊達比星。3.權(quán)利要求2的方法，其中所述伊達比星作為藥學(xué)可接受的鹽施用。4.權(quán)利要求3的方法，其中所述伊達比星作為鹽酸鹽施用。5.權(quán)利要求1的方法，其中所述淋巴瘤是抗多柔比星的淋巴瘤。6.權(quán)利要求1的方法，其中所述狗顯示多柔比星誘導(dǎo)的心臟毒性。7.伊達比星或其藥學(xué)可接受的鹽用于制造用于在狗中治療淋巴瘤的藥物的用途。8.權(quán)利要求7的用途，其中所述伊達比星要口服施用。9.權(quán)利要求8的用途，其中所述伊達比星要作為藥學(xué)可接受的鹽施用。10.權(quán)利要求9的用途，其中所述伊達比星要作為鹽酸鹽施用。11.用于在狗中治療淋巴瘤的藥物組合物，其包含伊達比星或其藥學(xué)可接受的鹽和藥學(xué)可接受的載體。12.權(quán)利要求11的組合物，其適合口服施用。13.權(quán)利要求12的組合物，其中所述伊達比星作為藥學(xué)可接受的鹽存在。14.權(quán)利要求13的組合物，其中所述伊達比星作為鹽酸鹽存在。全文摘要本發(fā)明涉及在狗中治療淋巴瘤的方法，包括對需要這類治療的狗施用治療有效量的伊達比星或其藥學(xué)可接受的鹽。文檔編號A61K31/704GK101835474SQ200880113163公開日2010年9月15日申請日期2008年10月15日優(yōu)先權(quán)日2007年10月26日發(fā)明者史蒂文·格倫·凱夢玲,帕梅拉·喬·柏林斯基申請人:輝瑞產(chǎn)品公司