專利名稱：：腦信號蛋白6a促進髓鞘形成和少突膠質細胞分化的用途的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及神經(jīng)生物學、神經(jīng)學和藥理學。更具體的，其涉及通過施用腦信號蛋白6A("Sema6A")多肽而治療涉及中樞神經(jīng)系統(tǒng)fl鞘形成的疾病的方法。
背景技術：
：很多神經(jīng)系統(tǒng)疾病與脫髓鞘和髓鞘形成障礙有關，包括多發(fā)性硬化(MS)、進行性多灶性白質腦病(PML)、腦脊髓炎(EPL)、腦橋中央髓華肖溶解癥(centralpontinemyelolysis,CPM)、沃勒變性以及一些遺4專性疾病，如腎上A泉腦白質營養(yǎng)不良、亞歷山大病和^風-才每病(PelizaeusMerzbacherdisease,PMZ)。這些疾病當中，MS是分布最廣的，在世界范圍內影響到大約250萬人。MS通常以累及一中經(jīng)的復發(fā)-纟爰解才莫式(relapsing-remittingpattern)開始，其隨后隨著神經(jīng)損傷加重而發(fā)展到慢性期。MS與慢性病變局部的髓鞘、少突膠質細胞和軸突遭到破壞有關。MS中觀察到的脫髓鞘并不總是永久性的，并且有記載在該疾病早期出現(xiàn)有髓鞘再生。中樞神經(jīng)系統(tǒng)("CNS")神經(jīng)元的髓鞘再生需要少突膠質細胞。多種疾病-調節(jié)性治療可用于MS,包括-使用皮質類固醇和免疫調節(jié)劑(如干擾素P)。此外，由于少突膠質細胞和髓鞘形成在MS中的核心作用，已在努力開發(fā)增加少突月交質細月包數(shù)量或加強髓鞘形成的治療方法。參見，如，Cohen等，美國專利第5，574,009號；Chang等，iV.A"g/.乂MWW(5,165-73(2002)。然而，仍然迫切需要設計用于MS的其他治療方法。腦信號蛋白纟皮認為是控制軸突導向和細胞遷移的分泌型或膜結合蛋白。Kerjan等，Ato.A^^c/.8(11):1516-1524(2005)。很多跨膜腦信號蛋白在發(fā)育中的CNS中表達，但是對它們在體內的功能了解甚少。文獻同上。腦信號蛋白類型6(Class6semaphorin)包括四類蛋白質Sema6A-Sema6D,它們同無脊推動物跨膜腦信號蛋白密切相關。Fiore和Puschel.F腦A8:2484-2499(2003)。所有腦信號蛋白在細胞外部分的N-端都具有腦信號蛋白(Sema)結構域和叢蛋白-腦信號蛋白-整聯(lián)蛋白(PSI)結構域(發(fā)現(xiàn)于叢蛋白、腦信號蛋白和整聯(lián)蛋白)。叢蛋白是一個分布于多種動物物種中的分子的家族(叢蛋白家族)。Murakami等，Dev.D戸附.220:246-258(2001)。叢蛋白分為四個亞家族，即叢蛋白-A、-B、-C和-D。文獻同上。在小鼠和人類，已經(jīng)分離出叢蛋白-A亞家族的四個成員(叢蛋白-Al、-A2、-A3和-A4)。參見Kameyama等,WocAew.Wo//",Coww柳.226:396-402(1996);Kameyama等,所oc/z價.5/o//z>w.Cowwww.226:524-529(1996);Maestrini等，尸亂胸/.Sc/.C/W93:674-678(1996);Tamagnone等，Ce〃99:71-80(1999)以及Suto等，A/ec/z.Dev.120:385-396(2003)。叢蛋白-A亞家族的胞外域具有一段大約為500個的氨基酸(aa)殘基，其表現(xiàn)出與sema結構域(腦信號蛋白所共有)顯著的同源性。Murakami等，"eve/o/.Z^".220:246-258(2001)。已知A-型叢蛋白和腦信號蛋白類型6相互作用。Toyofuku等，Ge腦D，—.18:435-447(2004)。例如，Suto等表明叢蛋白-A4是Sema6A的直接受體。/A^/msc/,25(14):3628-3637(2005)。
發(fā)明內容發(fā)明概述本發(fā)明基于這樣一種發(fā)現(xiàn)，即腦信號蛋白6A(Sema6A)在少突膠質細胞中表達，并調節(jié)少突膠質細胞的分化、存活和/或軸突的髓鞘形成。此外，某些Sema6A多肽促進少突膠質細胞的存活、增殖和/或分化，以及促進神經(jīng)元的髓鞘形成?；谶@些發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明大致涉及通過施用Sema6A多肽來治療脫骨逸鞘和/或ft鞘形成障礙相關疾患(如，多發(fā)性硬化)的方法。在某些實施方式中，本發(fā)明包括促進少突膠質細胞的增殖、分化或存活的方法，其包括使用有效量的含有分離的Sema6A多肽的組合物接觸少突膠質細胞。在其它實施方式中，本發(fā)明包括促進少突膠質細胞-介導的神經(jīng)元髓鞘形成的方法，其包括使用有效量的含有Sema6A多肽的組合物4妾觸神經(jīng)元和少突月交質細胞的混合物。本發(fā)明涉及在哺乳動物中促進少突膠質細胞的增殖、分化或存活的方法，或在哺乳動物中促進神經(jīng)元髓鞘形成的方法，其包括向有此需求的哺乳動物施用有效量的含有Sema6A多肽的組合物。還包才舌在哺乳動物中治療骨逸鞘形成障石尋或脫髓鞘相關的、或少突月交質細胞死亡或缺少分化相關的疾病、病癥或損傷的方法，其包括向有此需求的哺乳動物施用治療有效量的含有Sema6A多肽的組合物。還包括在哺乳動物中治療涉及髓鞘,皮壞的疾病、病癥或損傷的方法，其包括施用治療有效量的含有Sema6A多肽的組合物。還包括本文描述的本發(fā)明的方法，其中所述Sema6A多肽與叢蛋白-A2多肽或叢蛋白-A4多肽結合。在其它實施方式中，所述Sema6A多月太是分離的。本發(fā)明的進一步實施方式包括通過體內基因治療方法來治療涉及少突膠質細胞或髓鞘破壞的疾病、病癥或損傷的方法，其包括在疾病、病癥或損傷^f立點或者在疾病、病癥或損傷〗立點附近，向哺乳動物施用含有編碼Sema6A多肽的核苷酸序列的載體，以使所述哺乳動物中所述Sema6A多肽由核苦酸序列表達，其表達的量足以促進損傷位點或損傷位點附近經(jīng)由神經(jīng)元的軸突延伸(extension)。在某些實施方式中，本發(fā)明包括在哺乳動物中促進少突膠質細胞增殖、分化或存活，或促進神經(jīng)元髓鞘形成的方法，其包括向有此需求的哺乳動物施用有效量的含有多聚核苷酸的組合物，所述多聚核苦酸編石馬Sema6A多月太。此外，本發(fā)明包括在哺乳動物中治療髓鞘形成障礙或脫髓鞘相關的、或少突力交質細力包死亡或在夾少分〗匕相關的疾病、病癥或損傷的方法，其包括向有此需求的哺乳動物施用治療有效量的含有多聚核苷酸的組合物，所述多聚核苷酸編碼Sema6A多肽。本發(fā)明還包括在哺乳動物中治療涉及髓鞘^皮壞的疾病、病癥或損傷的方法，其包括施用治療有效量的含有多聚核苷酸的組合物，所述多聚核苷酸編碼Sema6A多肽。在某些實施方式中，本發(fā)明的Sema6A多肽與叢蛋白-A2多肽或叢蛋白-A4多肽結合。本發(fā)明方法中所用的多聚核普酸可為分離的。在某些實施方式中，所述載體是病毒載體，其選自由腺病毒載體、甲病毒載體、腸道病毒載體、瘟病毒載體、慢病毒載體、桿狀病毒載體、皰滲病毒載體、Epstein-Barr病毒載體、乳多空病毒載體、痘病毒載體、痘苗病毒載體以及單純皰疹病毒載體組成的組。在一些實施方式中，所述疾病、病癥、損傷或疾患選自由以下組成的組多發(fā)性石更化(MS)、進4亍性多杜性白質腦病(PML)、腦脊髓炎(EPL)、腦橋中央髓鞘溶解癥(CPM)、腎上腺腦白質營養(yǎng)不良、亞歷山大病、佩4每病(PMZ)、^求樣細胞腦白質病(克4立伯氏病，Krabbe，sdisease)、沃勒變性、一見一申經(jīng)炎、4黃貫性脊fl炎、肌萎縮側索硬化(ALS)、亨廷頓病、阿爾茨海默病、帕金森病、脊髓損傷、創(chuàng)傷性腦損傷、輻射后損傷、化療后神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥、中風、急性缺血性視神經(jīng)病變、維生素E缺乏、？瓜立性維生素E缺乏纟宗合4正(isolatedvitaminEdeficiencysyndrome)、AR、巴畫考牛纟宗合4正(Bassen隱Kornzweigsyndrome)、胼月氐體脫骨逸鞘寸生月畝病纟宗合4正(Marchiafava-Bignamisyndrome)、異染性月鹵白質營養(yǎng)不良、三叉神經(jīng)痛和貝爾麻痹。在一些實施方式中，培養(yǎng)的宿主細胞來源于待治療的哺乳動物。某些Sema6A多肽包括但不限于缺少跨膜結構域和細胞質結構域的Sema6A多肽片>^、變體、或其衍生物。Sema6A多肽包括這樣的多肽，即所述多肽含有(i)信號序列、(ii)sema結構域、(iii)PSI結構域、(iv)細胞外結構域、(v)跨膜結構域、(vi)細胞質結構i或和(vii)所述結構i或中兩種或更多種的ia合。在一些實施方式中，Sema6A多肽缺少信號序列、sema結構域、PSI結構域、跨膜結構域、細胞質結構域、或所述結構域中兩種或更多種的組合。在一些實施方式中，所述Sema6A多肽包4舌Sema結構域，并且缺少信號序列、PSI序列、5爭膜結構域和細胞質結構域。在一些實施方式中，所述Sema6A多肽包括SEQIDNO:2的氨基酸殘基1-649。在一些實施方式中，通過'決速4,注(bolusinjection)或t曼速豐命注(chronicinfusion)施用所述Sema6A多肽。在一些實施方式中，將所述Sema6A多肽直接施用至中樞神經(jīng)系統(tǒng)中。在一些實施方式中，將所述Sema6A多肽直4妻施用至MS的慢性病變處。在一些實施方式中，所述Sema6A多肽是包含非Sema6A部分的融合多肽。在一些實施方式中，所述非Sema6A部分選自由抗體Ig部分、血清白蛋白部分、靶向部分、報道分子部分和便于純化的部分組成的組。在一些實施方式中，所述抗體Ig部分是鉸鏈和Fc部分。在一些實施方式中，本發(fā)明的所述多肽軛合至聚合物上。在一些實施方式中，所述聚合物選自由聚亞烷基二醇、糖聚合物和多肽組成的組。在一些實施方式中，所述聚亞烷基二醇是聚乙二醇(PEG)。在一些實施方式中，本發(fā)明的所述多肽軛合至1、2、3或4個聚合物。在一些實施方式中，所述聚合物的總分子量從5,000Da至100,000Da。圖1是人類Sema6A多肽亞型(isoform)(即亞型A-D)間圖2是小鼠Sema6A多肽亞型(即亞型1-3)間的序列比較。圖3:小鼠神經(jīng)系統(tǒng)中的Sema6A表達。通過原位雜交分析P15小鼠神經(jīng)系統(tǒng)中的Sema6A表達。大多數(shù)表達Sema6A的細胞發(fā)現(xiàn)于白質當中。白質中的Sema6A表達細胞是少突膠質細胞。圖4A-4C:在P16,于前連合(AC)中表達髓鞘蛋白脂質蛋白(PLP)的Sema6A+A(A)或Sema6A-A(B)少突月交質細月包的免疫染色分析。(C)-在不同階孚i(即P16、P30和P45),在AC中對PLP表達細胞的定量。圖5A-5D:(A)-Sema6A-A少突膠質細胞的體外成熟。48小時后測量少突膠質細胞的分形維數(shù)(FD)。左側棒是Sema6A-A少突月交質細i包的FD,右側棒是Sema6A+A少突膠質細胞的FD。(B)-在48小時處用抗—04抗體進行免疫染色并通過相差顯微鏡檢查觀察的Sema6A-A少突膠質細胞。(C):24小時和48小時處Sema6A-A少突膠質細胞的體外成熟。左側棒是24小時的，右側纟奉是48小時的。(D):在48小時處用抗-04抗體進行免疫染色并通過相差顯孩"竟^r查見察的Sema6A+/-少突月交質細胞。圖6A-6C:以各種劑量添加有Sema6A-Fc的背根神經(jīng)節(jié)細胞(DRG)和少突膠質細胞的共培養(yǎng)物中的髓鞘形成，(A)陰性對照；(B)0.1jug/ml和(C)0.3jug/ml。通過用抗MBP抗體的免疫染色來顯示髓鞘形成的程度。圖7:用雙環(huán)己酮草酰二腙(cuprizone)處理小鼠，并4全查脫髓鞘和髓鞘再生期間Sema6A的表達。測定不同階l殳(即3-6周)Sema6A表達細月包的凄t目。圖8:(A)-(B)以x1放大倍數(shù)(A)和xl放大倍數(shù)(B)在人類MS病變組織和非病變組織中使用Sema6A核糖核酸探針進行的原位雜交；(C)以x10力文大倍^:,使用人類Sema6A抗體進行的人類MS病變組織的免疫染色。圖9A-D:(A)在叢蛋白-八2+/+(野生型)、叢蛋白-A2蛋白無效敲除(叢蛋白-A2V-)小鼠以及在腦信號蛋白結構域中帶有單氨基酸取代(A396E)的叢蛋白-A2突變體(NMF454)中，叢蛋白-A2多肽表達的Western印記分析；(B)叢蛋白-A2、叢蛋白-A4、叢蛋白-Al和叢蛋白-A3的序列比對以鑒定丙氨酸(396);(C)Sema6A和COS細胞中表達的野生型叢蛋白-A2蛋白的結合分析；以及(D)Sema6A和COS細胞中表達的突變叢蛋白-A2A396E的結合分析。除非另有指明，否則本文所用的所有4支術術語和科技術語具有和本發(fā)明所屬領i或普通才支術人員所普遍理解的相同意義。當遇沖突時，以本申i青所包含的所述定義為準。除非上下文另有要求，否則單數(shù)術語應當包括復數(shù)，并且復數(shù)術語應當包括單數(shù)。出于任何目的，本文l是及的所有出版物、專利和其他參考文獻通過引用以其整體并入本文，就如同各個單獨的出版物或專利申請具體并且單獨的通過引用并入本文。盡管與本文所述的方法和材術牛相似或等同的方法和材津+可用于本發(fā)明的實踐或測試，^f旦合適的方法和材《+如下所述。所述材泮牛、方法和實例4又是it明性的，并非意圖限制本發(fā)明。才艮據(jù)詳述以及權利要求書，本發(fā)明的其他特征和優(yōu)勢將是明顯的。為了進一步解釋本發(fā)明，^是供如下術語和定義。應當注意，術語"一個(a)"或"一個(an)"實體，是指一個或多個這種實體；例如，"一個多肽"應理解為代表一個或多個多發(fā)明詳述定義肽。同樣地，術語"一個(a)"(或"一個(an)，，)、"一個或多個，，以及"至少一個，，本文中可以相互替換使用。貫穿本說明書和權利要求書，詞語"包括(comprise)"或其變4匕形式長口"包4舌(comprises)，，或"包4舌(comprising)，，表示包含所列舉的任何整體或整體的組，但是不排除4壬<可其他整體或整體的組。貫穿本說明書和權利要求書，術語"由...組成(consistsof)"及其變化形式如"由…纟且成(consistof)，，或"由…纟且成(consistingof)"表示包含所列舉的任何整體或整體的組，^f旦是沒有其它的整體或整體的組可加入到所述具體方法、結構或ia合物中。貫穿本說明書和權利要求書，術語"主要由...組成(consistsessentiallyof)，，及其變4匕形式i口"主要由…纟且成(consistessentiallyof)"或"主要由…纟且成(consistingessentiallyof)"表示包含戶斤歹'J舉的任何整體或整體的組，并且任選地包含不實質性改變具體方法、結構或組合物的基本或新型特征的4壬<可所列舉的整體或整體組。如本文所用，"抗體"是指完整的免疫球蛋白、或其抗原結合片段。本發(fā)明的抗體可以是任何同種型或類(如M、D、G、E和A)或4壬4可亞類(如Gl-l、Al-2)，并且可具有kappa(k)或lambdaa)輕鏈。如本文所用，；"FC"是指免疫球蛋白重鏈的部分，其包括一個或多個重《連恒定區(qū)結構域CH1、CH2和CH3。例如，通過木瓜蛋白酶消化可獲得的抗體重4連恒定區(qū)的部分。如本文所用，"人源化抗體，，是指在抗體中至少一部分非人類序列替換為人類的序列的抗體。如何制備人源化抗體的實例可見于美國專利第6,054,297號、第5,886,152號和第5,877,293號。如本丈所用，"嵌合抗體"是指包含一個或多個來自第一種抗體的區(qū)域，并且包含一個或多個來自至少一種其他抗體的區(qū)域的抗體。所述第一種抗體和所述其他抗體可以來自相同或不同的物種。如本文所用，"治療有效量"是指這樣一種量，即在必要的劑量和時間周期下，有效獲得期望的治療效果。治療效果可以是，如減輕癥狀、延長存活、改善運動性(mobility)等。治療效果不必是如本文所用，"預防有效量，，是指這樣一種量，即在必要的劑量和時間周期下，有效獲得期望的預防效果。典型情況下，由于預防劑量在受治療者中的使用先于疾病或者處于疾病早期，所以預防有效量將少于治療有效量。如本文所用，"多聚核苦酸"可以包含全長cDNA序列的核苷商臾序歹'J(包括5'和3'未翻譯序列、編碼序列)以及核酸序列的片段、表位、結構域和變體。多聚核苷酸可主要由任何多聚核糖核苷酸或多聚脫氧核糖核苷酸組成，其可以是未〗奮飾的RNA或DNA,或々務飾的RNA或DNA。例如，多聚核苷酸可以由單-和雙-鏈DNA、DNA(單-和雙—鏈區(qū)域的混合物)、單—和雙-《連RNA、RNA(單-和雙-鏈區(qū)域的混合物)、包括DNA和RNA的雜交分子(可以是單-鏈、或更具代表性地雙-鏈、或單-和雙-鏈區(qū)域的混合物)組成。此外，所述多聚核苦酸可主要由三-鏈區(qū)域組成，其包括RNA或DNA或既含有RNA也有DNA。多聚核苷酸也可以包含一個或多個修飾堿基、或出于穩(wěn)定性或其他目的而修~飾的DNA或RNA骨架。"修飾"堿基包括，例如，三苯甲基化堿基和罕見堿基(如肌苷)?？梢詫NA和RNA進行多種〈奮飾；因此，"多聚核苷酸"包括化學、酶、或代謝修飾的形式。本發(fā)明中，多肽可主要由彼此通過肽鍵或修飾的肽鍵(即肽電子等排體)連接的氨基酸組成，并且可以含有20個基因編碼的氨基酸以外的氨基酸(如非天然存在的氨基酸)?？梢酝ㄟ^天然過程(如翻i奪后加工)、或本領域^^知的〗匕學^"飾:技術來^f奮飾本發(fā)明的所迷多肽。這些修飾在基礎教科書和更具體的專著當中，以及大量研究文獻中均有詳細描述。可以在多肽中的4壬4可位置發(fā)生{奮飾，包括肽骨架、氨基酸側鏈以及氨基或羧基端。應當理解，在給定多肽的多個位點中以相同或不同程度可出現(xiàn)相同類型的修飾。而且，給定多肽可含有4艮多類型的》務飾。多肽可以是分支的(如泛素化造成的)，其可以是有或沒有分支的環(huán)形。環(huán)形、分支以及帶分支的環(huán)形多肽可是翻譯后天然加工的結果或由合成方法制備。修飾包括乙?；?、?；?、ADP-核壽唐化、酰胺化、黃素的共^f介連4妄、血紅素部分的共價連接、核苷酸或核苷酸衍生物的共價連4妄、脂質或脂質衍生物的共價連接、磷脂酰肌醇(phosphotidylinositol)的共價連接、交聯(lián)、環(huán)化、形成二橫u鍵、去甲基化、形成共價交聯(lián)、形成半胱氨酸、形成焦谷氨酸、曱?；?、Y-羧化、糖基化、形成GPI錨、羥基化、碘化、曱基化、豆蔻酰化、氧化、聚乙二醇化、蛋白水解加工、磷酸化、異戊烯化、消旋化、硒化(selenoylation)、硫酸化、轉移-RNA介導的蛋白質中氨基酸的添加(如精氨?；?和泛素化。(參見，^口,Proteins-StructureAndMolecularProperties(蛋白質-纟吉才勾禾口分子凈爭性)，第二》反，T.E.Creighton,W.H.FreemanandCompany，NewYork(1993);PosttranslationalCovalentModificationofProteins(蛋白質的翁^爭后共i"介4,^0，B.C.Johnson編l專，AcademicPress,NewYork,笫1-12頁(1983);Seifter等，她A￡"歸/182:626-646(1990);Rattan等，爿""A/TJcm/Sc/663:48-62(1992)。)當術語"片段"、"變體"、"衍生物"和"類似物"是指本發(fā)明的Sema6A多肽時，其包括如下任何多肽，所述多肽保留有至少部分免疫原性(即誘導抗sema6A免疫應答的能力)，或保留有任何Sema6A天然存在的功能(如結合任一叢蛋白-A亞家族多肽即叢蛋白-Al、叢蛋白-A2、叢蛋白-A3或叢蛋白-A4的能力)。天然存在的Sema6A功能的實例是其結合叢蛋白-A2或叢蛋白-A4多肽的能力。Sema6A多肽如本文所述可包括片段、變體或衍生分子，但不限于此，只要Sema6A多肽仍保留免疫原性或任何天然存在的功能。本發(fā)明的Sema6A多肽可包括Sema6A蛋白水解片段、缺失片段，以及尤其是當遞送至動物時更易到達作用位點的片段。多肽片段還包括任何包括天然多肽抗原性表位或免疫原性表位(包括線性以及三維表4立)的多肽部分。本發(fā)明的Sema6A多肽可包4舌變4匕的Sema6A區(qū)(包括上述片段)、以及具有因氨基酸取代、缺失或插入而改變的氨基酸序列的多肽。變體可以是天然存在的，如等位變體。通過"等位變體，，來表示占據(jù)有機體染色體上特定基因座的預期的基因變化形式。(^""http://(基因11)，Lewin,B.編輯，JohnWiley&Sons,NewYork(1985)?？墒褂帽绢I域公知的豫變技術生產(chǎn)非天然存在的變體。Sema6A多肽可包括保守的或不保守的氨基酸取代、缺失或添加。本發(fā)明的Sema6A多肽還可包括衍生分子。例如，本發(fā)明的Sema6A多肽可包括這種Sema6A區(qū)域，即已經(jīng)改變用來展現(xiàn)天然多肽中所未發(fā)現(xiàn)的額外特征。實例包括融合蛋白和蛋白質軛合物。本發(fā)明中，"多肽片段"或"蛋白質片段"是指Sema6A多肽的短氨基酸序列。蛋白質或多肽片4殳可以是"獨立的(free-standing)",或包含于更大的多肽中(在其中，所述片段形成區(qū)域的部分)。本發(fā)明多肽片段的代表性實例包括，例如，包含約5個氨基酸、約10個氨基酸、約15個氨基酸、約20個氨基酸、約30個氨基酸、約40個氨基酸、約50個氨基酸、約60個氨基酸、約70個氨基酸、約80個氨基酸、約90個氨基酸以及約100個氨基酸的片段。如本文所用，術語"連4妄的"、"融合的，，或"融合"可相互替換4吏用。這些術語是指通過無"i侖什么方式(包括:化學共軛或重組方式)將兩個或更多個(twomore)元件或組件連4妾起來。"框-內融合"是指以維持原始ORF的正確閱讀框的方式將兩個或更多個開》文閱讀框(ORF)連接起來形成連續(xù)的更長ORF。因此，獲得的重組融合蛋白是單個蛋白質，其包含兩個或更多個原始ORF編碼的多肽相對應的區(qū)段(其中在天然環(huán)境中，所述區(qū)革殳通常不是如此連接的)。盡管因此使得閱讀框貫穿于所述融合區(qū)段是連續(xù)的，但仍可通過例如框內連接體(linker)序列將區(qū)段物理地或空間地分開。當涉及多肽的情況下，"線性序列，，或"序列"是指氨基酸按照氨基端到羧基端的方向在多肽中的順序，其中序列中彼此毗鄰的殘基在多肽一級結構中是連續(xù)的。本文所用術語"表達，，是指基因生產(chǎn)生化物質(如，RNA或多肽)的過程。所述過程包括基因在細胞內功能存在的任何現(xiàn)象，包括但不限于基因敲除以及瞬時表達和穩(wěn)定表達。其包括但不限于所述基因轉錄成信使RNA(mRNA)、轉移RNA(tRNA)、小發(fā)夾RNA(shRNA)、小干擾RNA(siRNA)或任何其他RNA產(chǎn)物，以及將這些mRNA翻譯成多肽。如果最終期望的產(chǎn)物是生化物質，則表達包括創(chuàng)造所述生化物質和任何前體。"受治療者"或"個體"或"動物"或"患者"或"哺乳動物"是指期望對其進行-珍斷、預后或治療的任何受治療者，尤其是哺乳動物受治療者。哺乳動物受治療者包括但不僅限于人類、家畜、農場動4勿、動并勿園的動斗勿、運動用動凈勿(sportanimal)、寵4勿(i口《句、貓、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、馬、牛、奶牛)；靈長類動物(如猿、猴、猩猩和黑猩猩)；犬科動物(如狗和狼)；貓科動物(如貓、獅、虎)；馬科動物(如馬、驢和斑馬)；熊、食用動物(如牛、豬和羊)、有^t類動物(如鹿和長頸鹿)；嚙齒動物(如小鼠、大鼠、倉鼠和豚鼠)等。在某些實施方式中，所述哺乳動物是人類受治療者。Sema6A本發(fā)明基于這樣一種發(fā)現(xiàn)，即Sema6A多肽通過促進少突膠質細胞的存活、增殖和/或分化來增加少突力交質細"包的數(shù)目。此外，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)Sema6A多肽促進神經(jīng)元的髓鞘形成。已知天然存在的人類Sema6A多肽表達于發(fā)育中的腦、腎、肺和肝。在人類成體組織(如皮膚(樹突細胞))中以及高度再生性胎盤組織中也4全測到Sema6A。所述人類Sema6A基因由20個外顯子(包括2個未翻譯的外顯子)組成，覆蓋5號染色體上大約60kb的基因組序列。全長人類Sema6A多肽由信號序列、細胞外結構域、5爭膜結構域和細胞質結構域組成。所述細胞外結構i或包括S6ma結構域和叢蛋白-腦信號蛋白-整聯(lián)蛋白(PSI)結構域。取決于變體，全長人類Sema6A多肽的長度/人約971個氨基酸至1049個氨基酸不等。參見圖1。小鼠Sema6A存在相似的變體。參見圖2。有報道1030aa的多肽序列為人類Sema6A多肽序列，并且在Genbank中具有登錄號為NP-065847。本文將所述人類Sema6A多肽序列指定為亞型A和SEQIDNO:2。SEQIDNO:1是編碼SEQIDNO:2的核苷酸序列。有報道1047aa的多肽序列為人類Sema6A多肽變體的序列，并X在Genbank中具有登錄號為EAW48937。本文將所述1047aa的多肽指定為亞型B和SEQIDNO:4。SEQIDNO:3是編碼SEQIDNO:4的核普酸序列。才艮道了具有971個aa的人類Sema6A多肽的另一種變體，其在Genbank中登錄號為EAW48935。本文將所述971aa的多肽指定為亞型C和SEQIDNO:6。有報道975個aa的多肽序列為人類Sema6A多肽變體，并且在Genbank中具有登錄號為EAW48934。本文將所述975aa的多肽序列指定為亞型D和SEQIDNO:8。人類Sema6A變體包括^旦不限于亞型A的Sema6A多肽(其從氨基酸1001后缺失，獲得具有1000個氨基酸的多肽)。Nakayama爭，GWwme12(11):1773—1784(2002);Strausberg爭，Prac.A^/.Jcad5W."S.A99(26):16899-16903(2002)。也已知其它Sema6A變體，例如，Prislei爭,Afo/C"wcer77zer.7(1):233-241(2007)中。對于小鼠Sema6A多肽序列及其變體也有報道。1031aa的小鼠Sema6A多肽在UniProtKB/Swiss-Prot門戶具有登錄號為035464。本文將所述多肽指定為亞型1和SEQIDNO:10。編碼SEQIDNO:10的核苷酸序列指定為SEQIDNO:9。有才艮道另一種1005aa的多肽序列為小鼠Sema6A多肽序列，其在Genbank中具有登錄號為AF288666。將所述多肽序列指定為亞型2和SEQIDNO:12。本文將編碼SEQIDNO:12的核苷酸序列指定為SEQIDNO:11。有報道另一種小鼠Sema6A多肽變體的序列在UniProtKB/Swiss-Prot門戶的登錄號為035464。本文將所迷多肽序列指定為亞型3和SEQIDNO:14。將編碼SEQIDNO:14的核苦酸序列指定為SEQIDNO:13。小鼠Sema6A的變體包括:<旦不限于具有如下突變的多肽A172V、L201P、N337D、S585N、Q685R、TK703-704SE、P735S、Q766E、1856T、或KSPNHGVNLVENLDSLPPKVPQREAS863-888ESSPYVLKQFSEAFNRQGIILSVAVE。在其它動物中已知的Sema6A多肽包括〃f旦不限于黑猩猩、狗和斑馬魚。有黑《星猩Sema6A多肽的變體，如Genbank登錄號XP_001150634、XP—001150901、XP—001150706、XP一001151177、XP—001151109、XP—001151041、XP_001150971和XP—517889。狗Sema6A多肽變體的非限定性實例是Genbank登錄號XP一538552、XP—859002、XP—858964、XP—858921、XP—858886和XP—858843。在其它動物中也可以找到Sema6A多肽及其變體。將Sema6A功能結構域的指定定義如下表1.人類Sema6A結構i或的實例。<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>表2.小鼠Sema6A結構域的實例。<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>正如本領域纟支術人員理解的，上面所列的結構域的起始和終止殘基可以不同，這耳又決于所用的計算才幾建才莫程序或所用的確定結構i或的方法。同才羊，Sema6A的各種功能結構i或可能與前面所定義的不同。例如，人類Sema6A多肽亞型A(即SEQIDNO:2)的功能結構i或可以變〗L如下表3.SEQIDNO:2中功能結構域的序列變化。<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>基于SEQIDNO:2中的序列變化，本領域技術人員可以識別SEQIDNO:4、6和8中的序列變化。SEQIDNO:10(即小鼠Sema6A多肽序列的亞型1)中功能結構i或的序列可以變4匕力口下表4.SEQIDNO:10中功能結構域的序列變化。信號序歹ijSema結構域PSI結構域s罷如t細月包質結構域低復雜度區(qū)域SMART1-1856-487514-569648-670671-1031937-951PROSITEn/a24-512n/an/an/an/apFamn/a56-491514-569n/an/an/aUniProtKB/SwissProt1-1824-512n/a650-670671-1031n/aNCBICNP061214)n/a56-474514-547n/an/an/a此外，SEQIDNO:12或14中的序列變化、或小鼠或其他動物中的任何其他變體可以基于表2-4得以輕易識別。叢蛋白-A2已知叢蛋白-A2多肽和Sema6A多肽結合。Suto爭，A^ewraw53:535(2007)。全長人類叢蛋白-A2多肽(SEQIDNO:15)由信號序列、細胞外結構域、^爭膜結構域和細胞質結構域組成。所述細胞外結構域包括sema結構域和四個IPT/TIG結構域(即IPT/TIG1-4)。所述sema結構域是SEQIDNO:15的氨基酸50-523。IPT/TIG結構域1-4分別是SEQIDNO:15的氨基酸873-967、967-1053、1056-1155和1158-1251。本領域技術人員應當理解，上面所列的結構域的起始和終止殘基可以不同，這耳又決于所用的計算4幾建才莫程序或所用的確定結構i或的方法。全長人類叢蛋白-A2多肽的序列可以變化。叢蛋白-A2多肽變體的一個實例具有1894aa的序列，其在Genbank中具有登錄號為NP079455。并且，本領i或已知來自其他動物的叢蛋白-A2序列。例如，本領域已知并才艮道的小鼠叢蛋白-A2多肽為Genbank中的NP—032908、AAH68155、EDL12938、EDL12937和NP—786926。叢蛋白-A428叢蛋白-A4也被認為是Sema6A多肽的受體。Suto夢，7Vez/raw53:535(2007)。全長人類叢蛋白-A4多肽(SEQIDNO:16)由信號序列、細胞外結構域、跨膜結構域和細胞質結構域組成。所述細胞外結構i或包4舌sema結構i或和三個PSI結構域(即PSI1-3)和四個IPT/TIG結構域(即IPT/TIG1-4)。所述sema結構域是SEQIDNO:16的氨基酸24-507。PSI結構域1-3分別是SEQIDNO:16的氨基酸509-559、655-702和803-856。叢蛋白-A4多肽的IPT/TIG結構域1-4分別是SEQIDNO:16的氨基酸858-952、954-1037、i040-1139和1142-1230。本領域技術人員應當理解，上面所列的結構域的起始和終止殘基可以不同，這耳又決于所用的計算才幾建才莫程序或所用的確定結構i或的方法。全長人類叢蛋白-A4多肽的序列可以變化。例如，報道Genbank中的EAW83796、NP—001099013、EAW83795、AAH28744和EAL24077為叢蛋白-A4的多個變體。此外，還報道了來自其他動物的叢蛋白-A4序列。例如，已知小鼠叢蛋白-A4多肽是Genbank中的NP一786926、BAC56599、EDL13705和EDL13704。本發(fā)明的一些實施方式4是供全長或成熟的Sema6A多肽或可溶性Sema6A多肽。具體來說，本發(fā)明的可溶性Sema6A多肽包括全長或成熟Sema6A多肽的片段、變體或其衍生物。上述表1-4描述了Sema6A多肽的各種功能結構域。本發(fā)明的可溶性Sema6A多肽通常包括多肽的部分或全部細胞外結構域?？扇苄許ema6A多肽通常缺少跨膜結構域和/或細胞質結構域。本領域技術人員應當理解，所述Sema6A的整個細胞外結構域在細胞外結構域多肽的C-端或N-端可以包括額外的氨基酸或更少的氨基酸，并可以含有內部缺失。用于本發(fā)明方法的人類Sema6A多肽包括但不限于這樣一種Sema6A多肽，其包括、主要由或由和參考氨基酸序列至少60%、70%、80%、85%、90%、95%、99%或100%相同的氨基酸序列組成，其中所述參考氨基酸序列選自由以下組成的組SEQIDNO:2的氨基酸56至417;SEQIDNO:2的氨基酸a至417;SEQIDNO:2的氨基酸b至417;SEQIDNO:2的氨基酸1至417;SEQIDNO:2的氨基酸56至c;SEQIDNO:2的氨基酸a至c;SEQIDNO:2的氨基酸b至c;SEQIDNO:2的氨基酸1至c;SEQIDNO:6的氨基酸56至c';SEQIDNO:6的氨基酸a至c';SEQIDNO:6的氨基酸b至c';SEQIDNO:6的氨基酸1至c';SEQIDNO:2的氨基酸56至d;SEQIDNO:2的氨基酸a至d;SEQIDNO:2的氨基酸b至d;SEQIDNO:2的氨基酸1至d;SEQIDNO:6的氨基酸56至d';SEQIDNO:6的氨基酸a至d';SEQIDNO:6的氨基酸b至d';SEQIDNO:6的氨基酸1至d';SEQIDNO:2的氨基酸56至e;SEQIDNO:2的氨基酸a至e;SEQIDNO:2的氨基酸b至e;SEQIDNO:2的氨基酸1至e;SEQIDNO:6的氨基酸56至e';SEQIDNO:6的氨基酸a至e';SEQIDNO:6的氨基酸b至e';SEQIDNO:6的氨基酸1至e';SEQIDNO:8的氨基酸56至e";SEQIDNO:8的氨基酸a至e";SEQIDNO:8的氨基酸b至e";SEQIDNO:8的氨基酸l至e";SEQIDNO:4的氨基酸56至e"';SEQIDNO:4的氨基酸a至e'";SEQIDNO:6的氨基酸b至e'";SEQIDNO:8的氨基酸l至e'";SEQIDNO:2的氨基酸56至f;SEQIDNO:2的氨基酸a至f;SEQIDNO:2的氨基酸b至f;SEQIDNO:2的氨基酸1至f;SEQIDNO:6的氨基酸56至f;SEQIDNO:6的氨基酸a至f;SEQIDNO:6的氨基酸b至f;SEQIDNO:6的氨基酸l至f;SEQIDNO:8的氨基酸56至f';SEQIDNO:8的氨基酸a至f';SEQIDNO:8的氨基酸b至f';SEQIDNO:8的氨基酸1至f';SEQIDNO:4的氨基酸56至f";SEQIDNO:4的氨基酸a至f";SEQIDNO:4的氨基酸b至f";SEQIDNO:4的氨基酸1至f"以及所述氨基酸序列中兩種或更多種的組合；其中a是24至56之間的任意整數(shù)、b是19至21之間的任意整數(shù)、c是472至512之間的任意整數(shù)、c'是418至453之間的任意整數(shù)、d是514至569之間的任意整數(shù)、d'是455至510之間的任意整數(shù)、e是570至650之間的任意整數(shù)、e'是511至591之間的任意整數(shù)、e"是570至595之間的任意整數(shù)以及e'"是570至667之間的任意整數(shù)、f是647至671之間的任意整數(shù)、f是588至612之間的任意整數(shù)、f'是592至616之間的任意整數(shù)以及f"是664至688之間的任意整數(shù)。在某些實施方式中，用于本發(fā)明方法的所述Sema6A多肽與叢蛋白-A2或叢蛋白-A4多肽結合。在某些實施方式中，用于本發(fā)明方法的人類Sema6A多肽包括這樣一種Sema6A多肽，其包括、主要由或由和參考氨基酸序列至少60%、70%、80%、85%、90%、95%、99%或100%相同的氨基酸序列組成，其中所述參考氨基酸序列選自由以下《且成的組SEQIDNO:8的氨基酸1至975;SEQIDNO:2的氨基酸19至417;SEQIDNO:2的氨基酸19至472;SEQIDNO:2的氨基酸19至551;SEQIDNO:6的氨基酸19至492;SEQIDNO:2的氨基酸19至647;SEQIDNO:6的氨基酸19至588;SEQIDNO:8的氨基酸19至592;SEQIDNO:4的氨基酸19至664;SEQIDNO:2的氨基酸56至472;SEQIDNO:2的氨基酸56至551;SEQIDNO:6的氨基酸56至492;SEQIDNO:2的氨基酸56至647;SEQIDNO:6的氨基酸56至588;SEQIDNO:8的氨基酸56至592;SEQIDNO:4的氨基酸56至664;SEQIDNO:2的氨基酸1至649;[來自R&D的人類Sema6A-Fc]SEQIDNO:6的氨基酸1至590;SEQIDNO:8的氨基酸1至594;SEQIDNO:4的氨基酸1至666;SEQIDNO:2的氨基酸18至703;SEQIDNO:6的氨基酸18至644;SEQIDNO:8的氨基酸18至648;SEQIDNO:4的氨基酸18至720;SEQIDNO:2的氨基酸1至648;SEQIDNO:6的氨基酸1至589;SEQIDNO:8的氨基酸1至593;SEQIDNO:4的氨基酸1至665以及所述氨基酸序列中兩種或更多種的組合。在其它實施方式中，所述Sema6A多肽與叢蛋白-A2或叢蛋白-A4多肽結合。在另一個實施方式中，用于本發(fā)明方法的人類Sema6A多肽包括這樣一種Sema6A多肽，其包括、主要由或由和參考氨基酸序列31至少60%、70%、80%、85%、90%、95%、99%或100%相同的氨基酸序列組成，其中所述參考氨基酸序列選自由以下組成的組SEQIDNO:2的氨基酸56至417;SEQIDNO:2的氨基酸55至417;SEQIDNO:2的氨基酸54至417;SEQIDNO:2的氨基酸53至417;SEQIDNO:2的氨基酸52至417;SEQIDNO:2的氨基酸51至417;SEQIDNO:2的氨基酸50至417;SEQIDNO:2的氨基酸49至417;SEQIDNO:2的氨基酸48至417;SEQIDNO:2的氨基酸47至417;SEQIDNO:2的氨基酉吏46至417;SEQIDNO:2的氨基酉吏45至417;SEQIDNO:2的氨基酸44至417;SEQIDNO:2的氨基酸43至417;SEQIDNO:2的氨基酸42至417;SEQIDNO:2的氨基酸41至417;SEQIDNO:2的氨基酸40至417;SEQIDNO:2的氨基酸39至417;SEQIDNO:2的氨基酸38至417;SEQIDNO:2的氨基酸37至417;SEQIDNO:2的氨基酸36至417;SEQIDNO:2的氨基酸35至417;SEQIDNO:2的氨基酸34至417;SEQIDNO:2的氨基酸33至417;SEQIDNO:2的氨基酸32至417;SEQIDNO:2的氨基酸31至417;SEQIDNO:2的氨基酸30至417;SEQIDNO:2的氨基酸29至417;SEQIDNO:2的氨基酉臾28至417;SEQIDNO:2的氨基酸27至417;SEQIDNO:2的氨基酸26至417;SEQIDNO:2的氨基酸25至417;SEQIDNO:2的氨基酸24至417;SEQIDNO:2的氨基酸23至417;SEQIDNO:2的氨基酸22至417;SEQIDNO:2的氨基酸21至417;SEQIDNO:2的氨基酸20至417;SEQIDNO:2的氨基酸19至417;SEQIDNO:2的氨基酸18至417;SEQIDNO:2的氨基酸17至417;SEQIDNO:2的氨基酸16至417;SEQIDNO:2的氨基酸15至417;SEQIDNO:2的氨基酸14至417;SEQIDNO:2的氨基酸13至417;SEQIDNO:2的氨基酸12至417;SEQIDNO:2的氨基酸11至417;SEQIDNO:2的氨基酸10至417;SEQIDNO:2的氨基酸9至417;SEQIDNO:2的氨基酸8至417;SEQIDNO:2的氨基酸7至417;SEQIDNO:2的氨基酸6至417;SEQIDNO:2的氨基酸5至417;SEQIDNO:2的氨基酸4至417;SEQIDNO:2的氨基酸3至417;SEQIDNO:2的氨基酸2至417;SEQIDNO:2的氨基酸1至417;以及所述氨基酸序列中兩種或更多種的組合，其中所述Sema6A多肽與叢蛋白-A2多肽結合。進一步的實施方式包括用于本發(fā)明方法的人類Sema6A多肽，該人類Sema6A多肽包括這樣一種Sema6A多肽，其包括、主要由或由和參考氨基酸序列至少60%、70%、80%、85%、90°/。、95%、99%或100%相同的氨基酸序列組成，其中所述參考氨基酸序列選自由以下組成的組SEQIDNO:2的氨基酸40至472;SEQIDNO:2的氨基酸41至472;SEQIDNO:2的氨基酸42至472;SEQIDNO:2的氨基酸43至472;SEQIDNO:2的氨基酸44至472;SEQIDNO:2的氨基酸45至472;SEQIDNO:2的氨基酸46至472;SEQIDNO:2的氨基酉交47至472;SEQIDNO:2的氨基臥炎48至472;SEQIDNO:2的氨基酸49至472;SEQIDNO:2的氨基酸50至472;SEQIDNO:2的氨基酸51至472;SEQIDNO:2的氨基酸52至472;SEQIDNO:2的氨基酸53至472;SEQIDNO:2的氨基酸54至472;SEQIDNO:2的氨基酸55至472;SEQIDNO:2的氨基酸56至472;SEQIDNO:2的氨基酸57至472;SEQIDNO:2的氨基酸58至472;SEQIDNO:2的氨基酸59至472;SEQIDNO:2的氨基酸60至472;SEQIDNO:2的氨基酸56至465;SEQIDNO:2的氨基酸56至466;SEQIDNO:2的氨基酸56至467;SEQIDNO:2的氨基酸56至468;SEQIDNO:2的氨基酸56至469;SEQIDNO:2的氨基酸56至470;SEQIDNO:2的氨基酸56至471;SEQIDNO:2的氨基酸56至472;SEQIDNO:2的氨基酸56至473;SEQIDNO:2的氨基酸56至474;SEQIDNO:2的氨基酸56至475;SEQIDNO:2的氨基酸56至476;SEQIDNO:2的氨基酸56至477;SEQIDNO.'2的氨基酸56至478;SEQIDNO:2的氨基酸56至479;SEQIDNO:2的氨基酸56至480;以及所述氨基酸序列中兩種或更多種的組合。進一步的實施方式包4舌用于本發(fā)明方法的人類Sema6A多肽，該人類Sema6A多肽包括這樣一種Sema6A多肽，其包括、主要由或由和參考氨基酸序列至少60%、70%、80%、85%、90%、95%、99%或100。/。相同的氨基酸序列組成，其中所述參考氨基酸序列選自由以下組成的組SEQIDNO:2的氨基酸1至551;SEQIDNO:2的氨基酸1至552;SEQIDNO:2的氨基酸1至553;SEQIDNO:2的氨基酸1至554;SEQIDNO:2的氨基酸l至555;SEQIDNO:2的氨基酸1至556;SEQIDNO:2的氨基酸1至557;SEQIDNO:2的氨基酸1至558;SEQIDNO:2的氨基酸1至559;SEQIDNO:2的氨基酸1至560;SEQIDNO:2的氨基酸1至561;SEQIDNO:2的氨基酸1至562;SEQIDNO:2的氨基酸1至563;SEQIDNO:2的氨基酸1至564;SEQIDNO:2的氨基酸1至565;SEQIDNO:2的氨基酸1至566;SEQIDNO:2的氨基酸1至567;SEQIDNO:2的氨基酸1至568;SEQIDNO:2的氨基酸1至569;SEQIDNO:2的氨基酸1至570;SEQIDNO:2的氨基酸1至571;SEQIDNO:2的氨基酸1至571;SEQIDNO:2的氨基酸1至572;SEQIDNO:2的氨基酸1至573;SEQIDNO:2的氨基酸1至574;SEQIDNO:2的氨基酸1至575;SEQIDNO:2的氨基酸1至576;SEQIDNO:2的氨基酸1至577;SEQIDNO:2的氨基酸1至578;SEQIDNO:2的氨基酸1至579;SEQIDNO:2的氨基酸1至580;SEQIDNO:2的氨基酸1至581;SEQIDNO:2的氨基酸1至582;SEQIDNO:2的氨基酸1至583;SEQIDNO:2的氨基酸1至584;SEQIDNO:2的氨基酸1至585;SEQIDNO:2的氨基酸1至586;SEQIDNO:2的氨基酸1至587;SEQIDNO:2的氨基酸1至588;SEQIDNO:2的氨基酸1至589;SEQIDNO:2的氨基酸1至590;SEQIDNO:2的氨基酸1至591;SEQIDNO:2的氨基酸1至592;SEQIDNO:2的氨基酸1至593;SEQIDNO:2的氨基酸1至594;SEQIDNO:2的氨基酸1至596;SEQIDNO:2的氨基酸1至597;SEQIDNO:2的氨基酸1至598;SEQIDNO:2的氨基酸1至599;SEQIDNO:2的氨基酸1至600;以及所述氨基酸序列中兩種或更多種的組合。在其他實施方式中，用于本發(fā)明方法的人類Sema6A多肽包括這樣一種Sema6A多肽，其包括、主要由或由和參考氨基酸序列至少60%、70%、80%、85%、90%、95%、99%或100%相同的氨基酸序列組成，其中所述參考氨基酸序列選自由以下組成的組SEQIDNO:2的氨基酸1至649;SEQIDNO:2的氨基酸2至649;SEQIDNO:2的-649的氨基酸3至649;SEQIDNO:2的氨基酸4至649;SEQIDNO:2的氨基酸5至649;SEQIDNO:2的氨基酸6至649;SEQIDNO:2的氨基酸7至649;SEQIDNO:2的氨基酸8至649;SEQIDNO:2的氨基酸9至649;SEQIDNO:2的氨基酸10至649;SEQIDNO:2的氨基酸11至649;SEQIDNO:2的氨基酸12至649;SEQIDNO:2的氨基酸13至649;SEQIDNO:2的氨基酸14至649;SEQIDNO:2的氨基酸15至649;SEQIDNO:2的氨基酸16至649;SEQIDNO:2的氨基酸17至649;SEQIDNO:2的氨基酸18至649;SEQIDNO:2的氨基酸19至649;SEQIDNO:2的氨基酸20至649;SEQIDNO:2的氨基酸21至649;SEQIDNO:2的氨基酸22至649;SEQIDNO:2的氨基酸23至649;SEQIDNO:2的氨基酸24至649;SEQIDNO:2的氨基酸25至649;SEQIDNO:2的氨基酸26至649;以及所述氨基酸序列中兩種或更多種的組合。本發(fā)明的方法還包括這樣一種Sema6A多肽，其包括、主要由或由和參考氛基酉交序列至少60%、70%、80%、85%、90%、95%、99%或100%相同的氨基酸序列組成，其中所述參考氨基酸序列選自由以下組成的組SEQIDNO:2的氨基酸1至640;SEQIDNO:2的氨基酸1至641;SEQIDNO:2的氨基酸1至642;SEQIDNO:2的氨基酸1至643;SEQIDNO:2的氨基酸1至644;SEQIDNO:2的氨基酸1至645;SEQIDNO:2的氨基酸1至646;SEQIDNO:2的氨基酸1至647;SEQIDNO:2的氨基酸1至648;SEQIDNO:2的氨基酸1至649;SEQIDNO:2的氨基酸1至650;SEQIDNO:2的氨基酸1至651;SEQIDNO:2的氨基酸1至652;SEQIDNO:2的氨基酸1至653;SEQIDNO:2的氨基酸1至654;SEQIDNO:2的氨基酸1至655;SEQIDNO:2的氨基酸1至656;SEQIDNO:2的氨基酸1至657;SEQIDNO:2的氨基酸1至658;SEQIDNO:2的氨基酸1至659;SEQIDNO:2的氨基酸1至660;SEQIDNO:2的氨基酸1至661;SEQIDNO:2的氨基酸1至662;SEQIDNO:2的氨基酸1至663;SEQIDNO:2的氨基酸1至664;SEQIDNO:2的氨基酸1至665;SEQIDNO:2的氨基酸1至666;SEQIDNO:2的氨基酸1至667;SEQIDNO:2的氨基酸1至668;SEQIDNO:2的氨基酸1至669;SEQIDNO:2的氨基酸1至670;以及所述氨基酸序列中兩種或更多種的組合。本發(fā)明的方法還包括這樣一種Sema6A多肽，其包括、主要由或由和參考氛基酸序列至少60%、70%、80。/。、85%、90%、95%、99%或100%相同的氨基酸序列組成，其中所述參考氨基酸序列選自由以下組成的組SEQIDNO:4的氨基酸1至570;SEQIDNO:4的氨基酸1至571;SEQIDNO:4的氨基酸1至572;SEQIDNO:4的氨基酸1至573;SEQIDNO:4的氨基酸1至574;SEQIDNO:4的氨基酸1至575;SEQIDNO:4的氨基酸1至576;SEQIDNO:4的氨基酸1至577;SEQIDNO:4的氨基酸1至578;SEQIDNO:4的氨基酸1至579;SEQIDNO:4的氨基酸1至580;SEQIDNO:4的氨基酸1至581;SEQIDNO:4的氨基酸1至582;SEQIDNO:4的氨基酸1至583;SEQIDNO:4的氨基酸1至584;SEQIDNO:4的氨基酸1至585;SEQIDNO:4的氨基酸1至586;SEQIDNO:4的氨基酸1至587;SEQIDNO:4的氨基酸1至588;SEQIDNO:4的氨基酸1至589;SEQIDNO:4的氨基酸1至590;以及所述氨基酸序列中兩種或更多種的組合。本發(fā)明的方法還包括這樣一種Sema6A多肽，其包括、主要由或由和參考氨基酸序列至少60%、70%、80%、85%、90%、95%、99%或100%相同的氨基酸序列組成，其中所述參考氨基酸序列選自由以下組成的組SEQIDNO:4的氨基酸1至630;SEQIDNO:4的氨基酸1至631;SEQIDNO:4的氨基酸1至632;SEQIDNO:4的氨基酸l至633;SEQIDNO:4的氨基酸1至634;SEQIDNO:4的氨基酸l至635;SEQIDNO:4的氨基酸1至636;SEQIDNO:4的氨基酸—L至637;SEQIDNO:4的氨基酸1至638;SEQIDNO:4的氨基酸l至639;SEQIDNO:4的氨基酸1至640;SEQIDNO:4的氨基酸]L至641;SEQIDNO:4的氨基酸1至642;SEQIDNO:4的氨基酸]L至643;SEQIDNO:4的氨基酸1至644;SEQIDNO:4的氨基酸][至645;SEQIDNO:4的氨基酸1至646;SEqIDNO:4的氨基酸]L至647;SEQIDNO:4的氨基酸1至648;SEQIDNO:4的氨基酸][至649;SEQIDNO:4的氨基酸1至650;SEQIDNO:4的氨基酸]至651;SEQIDNO:4的氨基酸1至652;S￡QIDNO:4的氨基酸]至653;SEQIDNO:4的氨基酸1至654;SEQIDNO:4的氨基酸1至655;SEQIDNO:4的氨基酸1至656;SEQIDNO:4的氨基酸]至657;SEQIDNO:4的氨基酸1至658;SEQIDNO:4的氨基酸1至659;SEQIDNO:4的氨基酸1至660;SEQIDNO:斗的氨基酸]至661;SEQIDNO:4的氨基酸1至662;SEQIDNO:4的氨基酸1至663;SEQIDNO:4的氨基酸1至664;SEQIDNO:4的氨基酸1至665;SEQIDNO:4的氨基酸1至666;以及所述氨基酸序列中兩種或更多種的組合。本發(fā)明的方法還包括這樣一種Sema6A多肽，其包括、主要由或由和參考氛基酉臾序列至少60%、70%、80%、85%、90%、95%、99%或100%相同的氨基酸序列組成，其中所述參考氨基酸序列選自由以下組成的組選自SEQIDNO:6的氨基酸45至492;SEQIDNO:6的氨基酸46至492;SEQIDNO:6的氨基酸47至492;SEQIDNO:6的氛基酉臾48至492;SEQIDNO:6的氛基酉臾49至492;SEQIDNO:6的氨基酸50至492;SEQIDNO:6的氨基酸51至492;SEQIDNO:6的氨基酸52至492;SEQIDNO:6的氨基酸53至492;SEQIDNO:6的氨基酸54至492;SEQIDNO:6的氨基酸55至492;SEQIDNO:6的氨基酸56至492;SEQIDNO:6的氨基酸57至492;SEQIDNO:6的氨基酸58至492;SEQIDNO:6的氨基酸59至492;SEQIDNO:6的氨基酸60至492SEQIDNO:6的氨基酸56至485SEQIDNO:6的氨基酸56至487SEQIDNO:6的氨基酸56至489SEQIDNO:6的氨基酸56至491SEQIDNO:6的氨基酸56至493SEQIDNO:6的氛基臥復56至495SEQIDNO:6的氨基酸56至497;SEQIDNO:6的氨基酸61至492SEQIDNO:6的氨基酸56至486SEQIDNO:6的氨基酸56至488SEQIDNO:6的氨基酸56至490SEQIDNO:6的氨基酸56至492SEQIDNO:6的氨基酸56至494SEQIDNO:6的氨基酸56至496SEQIDNO:6的氨基酸56至498SEQIDNO:6的氨基酸56至599;以及所述氨基酸序列中兩種或更多種的ia合。本發(fā)明的方法還包括這樣一種Sema6A多肽，其包括、主要由或由和參考氨基酉交序列至少60%、70%、80%、85%、90%、95%、99%或100%相同的氨基酸序列組成，其中所述參考氨基酸序列選自由以下組成的組SEQIDNO:6的氨基酸1至580;SEQIDNO6的氨基酸1至581;SEQIDNO:6的氨基酸1至5836的氨基酸1至584;SEQIDNO:6的氨基酸1至586;SEQIDNO:6的氨基酸1至588;SEQIDNO:6的氨基酸1至590;SEQIDNO:6的氨基酸1至592;SEQIDNO:6的氨基酸1至594;SEQIDNO:6的氨基酸1至596;SEQIDNO:6的氨基酸1至598;SEQIDNO:6的氨基酸1至600;SEQIDNO:6的氨基酸3至590;SEQIDNO:6的氨基酸5至590;SEQIDNO:6的氨基酸7至590;SEQIDNO:6的氛基f復1至585;6的氨基酸1至587;6的氨基酸1至589;6的氨基酸1至591;6的氛基酉臾1至593;6的H酉臾1至595;6的氛基酉臾1至597;6的氨基酸1至599;6的氨基酉臾2至590;6的氨基酸4至590;6的氨基酸6至590;6的氨基酸8至590;6的氨基酸9至590;SEQIDNO:6的氨基酸10至590;SEQIDNOSEQIDNOSEQIDNOSEQIDNOSEQIDNOSEQIDNOSEQIDNOSEQIDNOSEQIDNOSEQIDNOSEQIDNOSEQIDNOSEQIDNOSEQIDNO6的氨基酸11至590;SEQIDNO:6的氨基酸12至590;SEQIDNO386的氨基酸13至590;SEQIDNO:6的氨基酸14至590;SEQIDNO:6的氨基酸15至590;SEQIDNO:6的氨基酸16至590;SEQIDNO:6的氨基酸17至590;SEQIDNO:6的氨基酸18至590;SEQIDNO:6的氨基酸19至59,0;以及所述氨基酸序列中兩種或更多種的組合。本發(fā)明的方法還包括這樣一種Sema6A多肽，其包括、主要由或由和參考氨基酸序列至少60%、70%、80%、85%、90%、95%、99%或100%相同的氨基酸序列組成，其中所述參考氨基酸序列選自由以下組成的組SEQIDNO:8的氨基酸56至580;SEQIDNO:8的氨基酸56至581;SEQIDNO:8的氨基酸56至583;SEQIDNO:8的氨基酸56至584;SEQIDNO:8的氨基酸56至585;SEQIDNO:8的氨基酸56至586;SEQIDNO:8的氨基酸56至587;SEQIDNO:8的氨基酸56至588;SEQIDNO:8的氨基酸56至589;SEQIDNO:8的氨基酸56至590;SEQIDNO:8的氨基酸56至591;SEQIDNO:8的氨基酸56至592;SEQIDNO:8的氨基酸56至593;SEQIDNO:8的氨基酸56至594;SEQIDNO:8的氨基酸56至595;SEQIDNO:8的氨基酸56至596;SEQIDNO:8的氨基酸56至597;SEQIDNO:8的氨基酸56至598;SEQIDNO:8的氨基酸56至599;SEQIDNO:8的氨基酸56至600;SEQIDNO:8的氨基酸56至601;SEQIDNO:8的氨基酸56至602;SEQIDNO:8的氨基酸56至603;SEQIDNO:8的氨基酸56至604;SEQIDNO:8的氨基酸56至605;SEQIDNO:8的氨基酉臾45至595;SEQIDNO:8的氨基f復46至595;SEQIDNO:8的氨基酉臾47至595;SEQIDNO:8的氨基酉復48至595;SEQIDNO:8的氨基酸49至595;SEQIDNO:8的氨基酸50至595;SEQIDNO:8的氨基酸51至595;SEQIDNO:8的氨基酸52至595;SEQIDNO:8的氨基酸53至595;SEQIDNO:8的氨基酸54至595;SEQIDNO:8的氨基酸55至595;以及所述氨基酸序列中兩種或更多種的組合。本發(fā)明的方法還包括這樣一種Sema6A多肽，其包括、主要由或由和參考氨基酸序列至少60%、70%、80%、85%、卯％、95%、99%或100%相同的氨基酸序列組成，其中所述參考氨基酸序列選自由以下組成的組SEQIDNO:8的氨基酸1至580;SEQIDNO8的氨基酸1至581;SEQIDNO:8的氨基酸1至583;SEQIDNO:8的氨基酸1至584;SEQIDNO:8的氨基酸1至585;SEQIDNO:8的氨基酸1至586;SEQIDNO:8的氨基酸1至587;SEQIDNO:8的氨基酸1至588;SEQIDNO:8的氨基酸1至589;SEQIDNO:8的氨基酸1至590;SEQIDNO:8的氨基酸1至591;SEQIDNO:8的氨基酸1至592;SEQIDNO:8的氨基酸1至593;SEQIDNO:8的氨基酸1至594;SEQIDNO:8的氨基酸1至595;SEQIDNO:8的氨基酸1至596;SEQIDNO:8的氨基酸1至597;SEQIDNO:8的氨基酸1至598;SEQIDNO:8的氨基酸1至599;SEQIDNO:8的氨基酸1至600;SEQIDNO:8的氨基酸1至601;SEQIDNO:8的氨基酸1至602;SEQIDNO:8的氨基酸1至603;SEQIDNO:8的氨基酸1至604;SEQIDNO:8的氨基酸1至605;SEQIDNO:8的l基酉臾2至595;SEQIDNO:8的氨基酸3至595;SEQIDNO:8的^基酉臾4至595;SEQIDNO:8的氨基酸5至595;SEQIDNO:8的H酉臾6至595;SEQIDNO:8的氨基酸7至595;SEQIDNO:8的^基酉交8至595;SEQIDNO:8的氨基酸9至595;SEQIDNO:8的氨基酸10至595;SEQIDNO:8的氨基酸11至595;SEQIDNO:8的氨基酸12至595;SEQIDNO:8的氨基酸13至595;SEQIDNO:8的氨基酸14至595;SEQIDNO:8的氨基酸15至595;SEQIDNO:8的氨基酸16至595;SEQIDNO:8的氨基酸17至595;SEQIDNO:8的氨基酸18至595;SEQIDNO:8的氨基酸19至595;以及所述氨基S菱序列中兩種或更多種的ia合。在某些實施方式中，本發(fā)明的所述Sema6A多肽結合至叢蛋白-A亞家族多肽。例如，所述Sema6A多肽和叢蛋白-Al多肽、叢蛋白-A2多肽、叢蛋白-A3多肽或叢蛋白-A4多肽結合。在其它實施方式中，所述Sema6A多肽可為分離的。通過"參考氨基酸序列"來表示，所述的具體序列沒有引入任何氨基酸取代。本領域技術人員應當理解，如果沒有取代，本發(fā)明的所述"分離的多肽"包括和參考氨基酸序列相同的氨基酸序列。本文描述的Sema6A多肽可以具有各種變化，如耳又代、插入或缺失。在所述多肽中可以被取代的示例性氨基酸包括具有堿性側鏈(如賴氨酸、精氨酸、組氨酸)、酸性側鏈(如天冬氨酸、谷氨酸)、不帶電荷的極性側鏈(如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非極性側鏈(如，丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、-分支側鏈(例如，蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸)和芳香側鏈(如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸)的氨基酸。也可以預期和本文所述的多肽和參考多肽有至少70%、75%、80%、85%、90%或95%相同的相應Sema6A多肽片,殳。如本領域所/>知的，通過將一條多肽的氨基酸序列和第二條多肽的序列進行比較來確定兩條多肽之間的"序列同一性"。當本文討論時，任何具體多肽和另一條多肽是否至少有約70%、75%、80%、85%、90%、95%、99Q/o或100%相同，都可以<吏用本領域^>知的方法和計算機程序/軟件來確定，例如但不限于BESTFIT程序(Wisconsin序列分析l欠件包，4十對Unix的版本8，GeneticsComputerGroup(遺^f專學計算才幾集團)，UniversityResearchPark(大學研究園)，575ScienceDrive,Madison,WI53711)。BESTFIT采用Smith禾口Waterman的局4卩同源算'法，參見AdvancesinAppliedMathematics2:482-489(1981)，來尋找兩條序列間的最佳同源區(qū)段。當l吏用BESTFIT或任何其他序列比對程序來確定特定序列是否和根據(jù)本發(fā)明的參考序列例如，有95%相同時，自然地設定參數(shù)從而計算出相對于參考多肽序列全長的同一性百分比，并且允許同源性缺口達參考序列中氨基酸總數(shù)的5%。在本發(fā)明的方法中，可以將本發(fā)明的Sema6A多肽或多肽片段以預先形成的多肽直4姿施用。如本文別處討i侖的，Sema6A多肽也41可以作為被細胞吸收并在細胞中表達的多聚核苷酸來施用。例如，Sema6A編石馬多聚4亥香酸可以作為病毒載體來施用。<吏用Sema6A多肽的治療方法
技術領域：
：本發(fā)明的一個實施方式才是供用于在患有髓鞘形成障礙或脫髓鞘相關的疾病、病癥或損傷(如多發(fā)性石更4匕)的動物中治療這種疾病的方法，所述方法包括、主要由、或由向所述動物施用有效量的Sema6A多肽或其片段、可溶性Sema6A多肽或其變體、彩f生物或類似物組成。此外，本發(fā)明涉及一種在哺乳動物中促進神經(jīng)元髓鞘形成的方法，其包括、主要由或由施用治療有效量的Sema6A多肽或其片段、可;容性Sema6A多肽或其變體、4汙生物或類似、物組成。本發(fā)明的另外實施方式提供在患有少突膠質細胞死亡或缺少分化相關的疾病、病癥或損傷(如多發(fā)性硬化、佩-一條病或球樣細胞腦白質病(克4i伯氏病))的動物中治療這種疾病的方法，所述方法包括、主要由、或由向所述動物施用有效量的Sema6A多肽或其片段、可溶性Sema6A多肽和其變體、衍生物或類似物組成。本發(fā)明的另一方面包括在哺乳動物中促進少突膠質細胞增殖、分化和存活的方法，其包4舌、主要由、或由施用治療有效量的Sema6A多肽或其片^:、可溶性Sema6A多肽和其變體、衍生物或類似物組成。本發(fā)明涉及用于促進少突膠質細胞增殖、分化或存活的方法，其包括用有效量的含有Sema6A多肽的組合物接觸少突膠質細胞。本發(fā)明還涉及用于促進少突膠質細胞-介導的神經(jīng)元髓鞘形成的方法，其包括用有效量的含有分離的Sema6A多肽的組合物接觸神經(jīng)元和少突膠質細胞的混合物。本文7>開的治療方法中4寺用的Sema6A多月太可以經(jīng)制備并用作誘導、促進、激活或刺激Sema6A通過少突膠質細胞調節(jié)神經(jīng)元髓鞘形成的能力的治療劑。此外，本文^^開的治療方法中^^寺用的所述Sema6A多肽可以經(jīng)制備并用作誘導、促進、激活或刺激Sema6A調節(jié)少突膠質細胞分化、增殖和存活的能力的治療劑。本發(fā)明的其他實施方式包括誘導少突力交質細胞增殖或存活來治療涉及少突"交質細月包或髓鞘;皮壞的疾病、病癥或損傷的方法，其包括以足以降低軸突延伸抑制并促進髓鞘形成的量在疾病、病癥或損傷位點或附近向哺乳動物施用。在另一個實施方式中，本發(fā)明涉及用于在哺乳動物中促進少突膠質細胞增殖、分化或存活的方法，其包括向有此需求的哺乳動物施用有效量的含有分離的多聚核苷酸的組合物，所述的多聚核普酸編碼本文公開的Sema6A多肽；或涉及用于在哺乳動物中促進神經(jīng)元髓鞘形成的方法，其包括向有此需求的哺乳動物施用有效量的含有分離的多聚核苷酸的組合物，其中所述的多聚核苷酸編碼本文公開的Sema6A多肽。本發(fā)明還包括用于在哺乳動物中治療髓鞘破壞或髓鞘形成障礙或脫骨i鞘相關的疾病、病癥或損傷、或少突l交質細力包死亡或在夾少分4匕相關的疾病、病癥或損傷的方法，其包4舌向有》匕需求的哺乳動物施用治療有效量的含有分離的多聚核苷酸的組合物，所述的多聚核香酸編碼Sema6A多肽。在本發(fā)明的方法中，可以通過向患者直4妄施用Sema6A多肽來施用Sema6A多肽?？蛇x4奪地，可以通過產(chǎn)生特定Sema6A多肽的表達載體來施用所述Sema6A多肽。在本發(fā)明某些實施方式中，Sema6A多月太施用于包4舌:^下的治療方法中(1)用表達Sema6A多肽的核酸(如載體)轉化或轉染可植入的宿主細胞；和(2)在疾病、病癥或損傷位點將所轉化的宿主細J包才直入哺乳動物。例如，所轉化的宿主細胞可植入于MS慢性病變位點處。在本發(fā)明的一些實施方式中，所述可植入的宿主細胞從哺乳動物中取出，經(jīng)過用編碼Sema6A多肽的分離的核酸短時培養(yǎng)、轉化或轉染，并植回其所取自的同一哺乳動物中。所述細胞可以，^旦并不需要從其植入的相同位點處取出。這種實施方式有時被稱為離體(exv/vo)基因治療，其可以在有限的一段時間內提供定位在作用位點的所述Sema6A多肽的持續(xù)供應?？梢酝ㄟ^本發(fā)明的方法得到治療或改善的疾病或病癥包括涉及哺乳動物神經(jīng)元ft鞘形成障〉礙或脫ft鞘的疾病、病癥或損傷。尤其是，其中神經(jīng)元周圍的髓鞘缺失、不完整、未正確形成或惡化的疾病和病癥。這種疾病包括但不限于多發(fā)性硬化(MS)(包括復發(fā)-緩解型、繼發(fā)進展型和原發(fā)進展型MS);進行性多灶性白質腦病(PML)、腦脊髓炎(EPL)、腦橋中央髓鞘溶解癥(CPM)、腎上腺腦白質營養(yǎng)不良、亞歷山大病、佩^每病(PMZ)、球樣細胞腦白質病(克拉伯氏病)、沃勒變性、視神經(jīng)炎、橫貫性脊髓炎?？梢酝ㄟ^本發(fā)明的方法-彈到治療或改善的疾病或病癥包纟舌-申經(jīng)退行性疾病或病癥。這種疾病包括但不限于肌萎縮側索硬化、亨廷頓病、阿爾茨海,默病和帕金^糴病?？梢酝ㄟ^本發(fā)明的方法得到治療或改善的其他疾病、病癥或損傷的實例包括但不限于脊髓損傷、'f曼性脊髓病或神經(jīng)4艮病(rediculopathy)、創(chuàng)傷性腦損傷、運動碎中經(jīng)元疾病、4由突剪切(axonalshearing)、挫傷、癱瘓、輻射后損傷或化療的其他神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥、中風、大的腔隙、中度至大的血管閉塞、腦白質疏水〉癥(leukoariaosis)、急性缺血性視神經(jīng)病變、維生素E缺乏(孤立性維生素E缺乏綜合^正、AR、巴-科綜合;f正)、維生素B12、B6(吡哆醇4造皮病)、維生素B1、葉酸、煙酸缺乏、胼胝體脫髓鞘性腦病綜合征、異染性腦白質營養(yǎng)不良、三叉神經(jīng)痛、貝爾麻痹或需要軸突再生、髓鞘再生(remylination)或少突月交質細月包存活或分化/增殖的4壬何神經(jīng)損傷。融合蛋白和軛合多肽本發(fā)明的一些實施方式涉及使用融合至異源多肽部分的Sema6A多肽來形成融合蛋白。這種融合蛋白可用于實現(xiàn)多種目的，如延長血清半衰期、改善生物利用度、體內靶向特定器官或組織類型、改善重組表達效率、改善宿主細胞分泌、簡化純化以及更高的親和力。所述異源部分可以是惰性的或生物活性的，這耳又決于要達到的目的。并且，可以選4奪將其穩(wěn)定融合至本發(fā)明所述的Sema6A多肽部分或者是在體外或體內可切除的。實現(xiàn)這些其他目的的異源部分在本領^或是7>知的。作為表達融合蛋白的可選方法，所選擇的異源部分可以預先形成并化學軛合至本發(fā)明的Sema6A多肽部分。在大多凄t情況下，無論是融合還是軛合至所述Sema6A多肽部分，所選擇的異源部分作用相似。因此，在如下異源氨基酸序列的討論中，除非另有指明，應當理解，所述異源序列可以以融合蛋白的形式或者作為4厄合至多肽或其他組合物的化學輒合物(包括共價或非共價輒合)而連接所述Sema6A多肽部分。例如，可以將Sema6A多肽重組融合或軛合至檢測分析中用作標記物的分子和效應分子(如異源多肽、藥物、放射性核素或毒素)。參見，如PCT公布WO92/08495;WO91/14438;WO89/12624;美國專利第5,314,995號；以及EP396,387。用于本文公開的治療方法中的Sema6A多肽包括修飾的衍生物，即通過共價連4妻任何類型的分子，以4吏共價連4妾不阻止所述Sema6A多肽抑制Sema6A的生物功能。例如，但不限于，本發(fā)明的所述Sema6A多肽可以通過進行例如糖基化、乙?；⒕垡叶蓟?、phosphylation、磷酸化、酰胺化、以^^知的保護/封閉基團衍生化、蛋白水解切割、連接至細胞配體或其他蛋白質等而得以修飾?？梢酝ㄟ^公知技術(包括但不限于特定的化學切割、乙?；貂；?、衣霉素的代謝合成等)進行任何多種化學修飾。此外，衍生物可包含一個或多個非經(jīng)典氨基酸。用于本文乂/^開的治療方法中的Sema6A多肽可以主要由4皮此通過肽鍵或修飾肽鍵(即肽電子等排體)連接的氨基酸組成，并且可以含有除了20個基因編碼的氨基酸以外的氨基酸。可以通過天然過程(如翻譯后加工)、或通過本領域公知的化學修飾技術來修飾Sema6A多肽。這些修飾在基礎教科書和更具體的專著當中，以及大量研究丈獻中均有詳細描述?？梢栽赟ema6A多肽中的任何位置發(fā)生修飾，包括肽骨架、氨基酸側鏈以及氨基或羧基端、或在例如碳水化合物的部分。應當理解，在給定Sema6A多肽的多個位點中以相同或不同程度可出現(xiàn)相同類型的修飾。而且，給定Sema6A多肽可含有很多類型的修飾。Sema6A多肽可以是分支的(如泛素化造成的)，其可以是有或沒有分支的環(huán)形。環(huán)形、分支以及帶分支的環(huán)形Sema6A多肽可是翻譯后天然加工的結果或合成方法造成。修飾包括乙?；Ⅴ；DP-核糖化、酰胺化、黃素的共價連接、血紅素部分的共價連接、核苷酸或核苷酸衍生物的共價連接、脂質或脂質衍生物的共價連接、磷脂酰肌醇的共價連接、交聯(lián)、環(huán)化、形成二硫鍵、去曱基化、形成共價交聯(lián)、形成半胱氨酸、形成焦谷氨酸、曱?；-羧化、糖基化、形成GPI錨、羥基化、碘化、甲基化、豆蔻?；⒀趸?、聚乙二醇化、蛋白水解加工、磷酸化、異戊二烯化、消旋化、硒化、硫酸化、轉移-RNA介導的蛋白質中氨基酸的添力口(如4青氨酰4b)和;乏素4乜。(參JS,i口，尸ra/e/m"-5^w"w/Jwt/7kfo/ecw/ar尸raj^Wes("蛋冷l潛^^口為、子^一嫂義T.E.Creighton,W.H.FreemanandCompany,NewYork第二版(1993);共/介修#，，B.C.Johnson編輯，AcademicPress,NewYork,第1-12頁(1983);Seifter爭，她A五，歸/7S2:626-646(1990);Rattan爭，^m7A^c^/SW-62(1992)。)本發(fā)明還提供融合蛋白，其包括、主要由、或由Sema6A多肽融合蛋白組成。在某些實施方式中，所述Sema6A融合多肽結合叢蛋白-A2或叢蛋白-A4。在本發(fā)明某些實施方式中，Sema6A多肽，如包括Sema結構域和PSI結構域或整個細胞外結構域(對應于SEDIDNO:2的氨基酸1至649)的Sema6A多肽融合至異源多肽部分從而形成Sema6A融合多肽。藥理活性多肽可表現(xiàn)出快速的體內清除，必需在體內使用大劑量來達到治療有效濃度。此外，小于約60kDa的多肽有經(jīng)受腎小46球過濾的潛在可能，有時會導致腎毒性。多肽片段的融合或軛合可以用來減少或避免這種腎毒性風險。用于增加治療性多肽的體內穩(wěn)定性(即血清半衰期)的各種異源氨基酸序列(即多肽部分或"載體")是7>知的。由于其半衰期長、體內分布廣泛、缺少酶或免疫功能，本質上全長人類血清白蛋白(HSA)或HSA片段通常用作異源部分。通過應用方法和材津+,如在Yeh爭，尸roc.7V^/.爿c"d5W.t/5^卵:1904-08(1992)和Syed爭，S/ood59:3243-52(1997)中教導的那些，HSA可用于形成Sema6A融合多肽，其中所述Sema6A融合多肽通過Sema6A部分表現(xiàn)藥理活性并表現(xiàn)出顯著增強的體內穩(wěn)定性，如提高10-倍至100-倍。HSA的C-端可以融合至Sema6A部分的N-端。由于HSA是天然分泌的蛋白質，因此當所述融合蛋白在真核(如哺乳動物)表達系統(tǒng)中產(chǎn)生時，可以利用HSA信號序列以獲得使Sema6A融合蛋白分泌到細胞培養(yǎng)基中。信號序列是編碼氨基酸序列的多聚核苷酸，其中所述氨基酸序列啟動蛋白質穿過內質網(wǎng)膜的運輸。用于構建免疫融合蛋白(immunofusion)的信號序列包括抗體輕鏈信號序列(如抗體14.18)(Gillies爭，//附wwwo/.Me仇7Z5:191-202(1989))、以及抗體重《連信號序歹'J(如MOPC141抗體重《連信號序列)(Sakano爭，A^&m2S6:5774(1980))?？蛇x褲:地，可以4吏用其他信號序列。參！，如Watson，iV/.Jc,'Ai^y.":5145(1984)。信號肽通常在內質網(wǎng)腔中被信號肽酶所裂解。這導致含有Fc區(qū)和Sema6A部分的免疫融合蛋白(immunofusin)的分;必。在一些實施方式中，DNA序列可編碼在分泌盒和Sema6A多肽之間的蛋白水解切割位點。這種切割位點可以提供例如編碼的融合蛋白的蛋白水解切割，從而分離Fc結構域和乾蛋白?？捎玫牡鞍姿馇懈钗稽c包4舌蛋白水解酶(如月夷蛋白酶、血纖維蛋白溶酶、凝血酶、Xa因子或腸激酶K)所識別的氨基酸序列。分泌盒可以并入可復制的表達載體?？捎玫妮d體包括線性核酸、質粒、噬菌粒、粘粒及類似物。一種示例性的表達載體是pdC,其中免疫融合蛋白DNA的轉錄置于人類巨細胞病毒增強子和啟動子的控制下。參^,如Lo爭，5/oc/h'附.S/op/y^.7朋&712(1991)和Lo爭，Prate/w五"g/wee〃'"g:495-500(1998)。合適的宿主細月包可用編碼Sema6A多肽的DNA轉化或轉染，并用于表達和分泌所述Sema6A多肽。通常所用的宿主細月包包括^:K生雜交瘤細力包、骨ft瘤細胞、293細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、Hela細胞和COS細胞。在一個實施方式中，將Sema6A多肽融合至鉸鏈和Fc區(qū)，即Ig重鏈恒定區(qū)的C-端部分。Sema6A-Fc融合蛋白的潛在優(yōu)勢包括可溶性、體內穩(wěn)定性和多價性(如，二聚化)。所用的Fc區(qū)可以是IgA、IgD或IgG的Fc區(qū)(鉸鏈-CH2-CH3)?？蛇x擇地，其可以是IgE或IgM的Fc區(qū)(鉸鏈-CH2-CH3-CH4)。通常使用IgG的Fc區(qū)，如IgG!的Fc區(qū)或IgG4的Fc區(qū)。在一個實施方式中，將起始于木瓜蛋白酶切割位點(化學上界定了IgG的Fc，即殘基216,根據(jù)Kabat系統(tǒng)將重4連恒定區(qū)的第一個殘基作為114)正上游的4交鏈區(qū)、或其他免疫球蛋白的類似位點的序列用于融合。融合所發(fā)生的精確位點并不重要；為了優(yōu)化分子的生物活性、分泌或結合特征，具體的位點是/^知的并且是可以選4奪的。用于構建和表達Fc融合蛋白編碼DNA的材料和方法在本領域是7>知的并且可以用于獲得Sema6A融合蛋白而不需要過度的實驗。本發(fā)明的一些實施方式中采用了如在Capon爭，美國專利第5,428,130和5,565,335號中所描述的那些融合蛋白。十分完整的、野生型Fc區(qū)將顯示效應子功能，這在本發(fā)明方法所用的Fc融合蛋白中可能是不必要且不希望的。因此，在構建分泌盒時通常會,人Fc區(qū)缺失某些結合位點。例如，由于和輕《連的共表達是不必要的，因此從IgE的Fc區(qū)CH2結構域中缺失重鏈結合蛋白Bip的結合^立點(Hendershot爭，/mww"o/.7b(i"y8:111-14(1987)),從而該位點不千擾免疫融合蛋白的有效分泌?？缒そY構域序列，如IgM中存在的那些，通常也^皮缺失。最常用的是IgGt的Fc區(qū)?？蛇x4奪地，在分泌盒中可以使用免疫球蛋白y其他亞類(y-2、y-3和y-4)的Fc區(qū)。免疫球蛋白y-l的IgG,Fc區(qū)通常用于分泌盒中，并包括至少部分4交^^區(qū)、CH2區(qū)和cH3區(qū)。在一些實施方式中，免疫球蛋白y-1的Fc區(qū)是缺失了CH2的Fc,其包括部分鉸鏈區(qū)和CH3區(qū)，但沒有CH2區(qū)。Gillies等，//ww.^""6oc/.//y6W^way1:47(1990)已描述了缺失了CH2的Fc。在一些實施方式中，4吏用了IgA、IgD、IgE或IgM之一的Fc區(qū)?？梢砸匀舾刹煌瑯嬓蛠順嫿⊿ema6A-Fc融合蛋白。在一個構型中，Sema6A部分的C-端直4妾融合至Fc4交《連部分的N-端。在一個稍有不同的構型中，4豆的多肽(如2-10個氨基酸)在Sema6A部分的N-端和Fc部分的C-端之間并入到融合蛋白中。這種連接體提供了構象柔性，在一些環(huán)境下其可改善生物活性。如果鉸鏈區(qū)的充足部分保留在Fc部分中，則Sema6A-Fc的融合將二聚化，從而形成二價分子。單體Fc融合蛋白的同源群將產(chǎn)生單特異性的二價二聚體。各自具有不同特異性的兩種單體Fc融合蛋白的混合物將產(chǎn)生雙特異性二價二聚體。含有相應氨基-反應基團和；危醇-反應基團的多種交聯(lián)劑(cross-linker)中的任意一種，可用來將Sema6A多肽連接至血清白蛋白或其他異源多肽。合適的交聯(lián)劑的實例包括插入硫醇-反應性馬來酰亞胺的胺反應交4關劑，如SMCC、AMAS、BMPS、MBS、EMCS、SMPB、SMPH、KMUS和GMBS。其他合適的交聯(lián)劑如SBAP、SIA、SIAB插入發(fā)u醇-反應性卣乙酸酯基團。為4吏用氫石克基的反應提供保護的或未保護的硫醇以產(chǎn)生可還原的鍵合的交聯(lián)劑包括SPDP、SMPT、SATA和SATP。這種試劑可商業(yè)獲得(如PierceChemicals)。49軛合并非必須涉及Sema6A多肽的N-端或血清白蛋白上的硫醇部分。例如，可以使用遺傳工程技術來獲得Sema6A-白蛋白融合蛋白，其中所述Sema6A部分在其N-端、C-端或兩端融合至血清白蛋白的基因。Sema6A多肽可以融合至異源肽乂人而<更于所述Sema6A部分的純化或鑒定。例如，可以將組氨酸標簽融合至Sema6A多肽，從而便于使用商業(yè)上可獲得的色譜介質進行純化。在本發(fā)明的一些實施方式中，使用Sema6A融合構建體在細菌中增強Sema6A部分的產(chǎn)生。在這種構建體中，使用高水平正常表達和/或分泌的細菌蛋白作為Sema6A多肽N-端的融合配偶體。參見，如Smith等，67:31(1988);Hopp等，S/otec/wo/ogy6:1204(1988);LaVallie等，S/ofec/mo/ogv187(1993)。通過在合適的融合配偶體的氨基和羧基端融合Sema6A部分，可以獲得Sema6A,多肽的二i"介或四Y介形式。例如，Sema6A部分可以融合至Ig部分的氨基和羧基端來產(chǎn)生含有兩個Sema6A部分的二價單體多肽。兩個這種單體通過Ig部分二聚化時，獲得Sema6A蛋白的四價形式。這種多價形式可以用于實現(xiàn)增強對靶的結合親和力。也可以通過串聯(lián):》文置Sema6A部分形成多耳關體(concatamer)來獲得Sema6A的多價形式，其可單獨使用或融合至融合配偶體(如Ig或HSA)來使用。在某些實施方式中，用于本發(fā)明方法的Sema6A多肽還包括靶向部分。靶向部分包括蛋白質或肽，其指導向身體特定部分的定位，例如，定^立至腦或其區(qū)室。在某些實施方式中，用于本發(fā)明方法的Sema6A多肽連接至或融合至腦革巴向部分。所述腦耙向部分是共價連接的(如，直接地、翻譯融合或通過直接的或通過間隔區(qū)分子的化學鍵合(可為任選地可裂解的))或非共價連接的(如，通過可逆的相互作用，如抗生物素蛋白、生物素、蛋白A、IgG等)。在其4也實施方式中，用于本發(fā)明方法的所述Sema6A多肽連4妾至一個或多個腦靶向部分。在其它實施方式中，所述腦靼向部分連《^妻至多個用于本發(fā)明方法的Sema6A多肽。和Sema6A多肽相締合的腦乾向部分增強這種Sema6A多肽的腦遞送。已經(jīng)描述了多種當融合至蛋白質或治療劑時，遞送所述蛋白質或治療劑通過血腦屏障(BBB)的多肽。非限定性實例包括單結構i或4元體FC5(Abulrob等，乂AAewroc/^m.95，1201-1214(2005));mAB83-14,—種針對人類胰島素受體的單克隆抗體(Pardridge等，尸A",附aco/.12，807-816(1995));結合人類轉4失蛋白受體(hTfR)的B2、B6和B8肽(Xia等，/Wra/.74,11359-11366(2000));針對轉鐵蛋白受體的OX26單克隆抗體(Pardridge等，丄尸/測,/.五xp.T7zeK259，66-70(1991))和美國專利第6,306,365號的SEQIDNO:1-18。上述參考文獻的內容通過引用將其整體并入本文。通過本領域已完善建立的多種方法，來確定增強的Sema6A組合物的腦遞送。例如，向動物施用連接至腦乾向部分的放射活性標記的Sema6A多肽；確定腦定位；和同等放射活性標記的但沒有與腦輩巴向部分締合的Sema6A多肽的定位相比4支。上述參考文獻中描述有確定增強l巴向的其<也方法。軛合的聚合物(除了多肽)本發(fā)明的一些實施方式涉及Sema6A多肽，其中一個或多個聚合物軛合(共價連接)至所述Sema6A多肽。適于這種軛合的聚合物的實例包括多肽(之前討論的)、糖聚合物和聚亞烷基二醇鏈。典型地，但不必需地，出于一個或多個如下目的改善溶解度、穩(wěn)定性或生物利用度，將聚合物專厄合至所述Sema6A多肽。通常用于軛合至Sema6A多肽的聚合物類型是聚亞烷基二醇。聚乙二醇(PEG)是最常用的。和單獨的Sema6A多肽相比，可以^!奪PEG4卩分(^口1、2、3、4或5個PEG聚合4勿)專厄合至各Sema6A多肽來延長血清半衰期。PEG部分是非-抗原性的且基本上生物惰性的。用于實踐本發(fā)明的PEG部分可以是分支的或不分支的。連4妄至所述Sema6A多肽的PEG部分的數(shù)目，以及各PEG鏈的分子量可以不同。通常，聚合物的分子量越高，連接至多肽的聚合物鏈越少。通常，連接至所述Sema6A多肽的總聚合物質量從20kDa至40kDa。因此，如果連4妄了一條聚合物鏈，該鏈的分子量通常是20-40kDa。如果連接了兩條鏈，各鏈的分子量通常是10-20kDa。如果連接了三條鏈，分子量通常是7-14kDa。聚合物，如PEG,可以通過多肽上任何合適的暴露的反應基團連接至所述Sema6A多肽。所述暴露的反應基團可以是，如內部賴氨酸殘基的N-端氨基或~氨基、或兩者都是。活化的聚合物可以在所述Sema6A多肽上任意自由氨基處發(fā)生反應和共價連4妻。所述Sema6A多肽的自由羧基、適當活化的羰基、羥基、胍基、咪唑、氧化的^友水化合物部分和巰基(如果可用的話)也可用作聚合物連接的反應基團。在軛合反應中，典型情況下使用約1.0至約IO摩爾活化的聚合物每摩爾多肽，這取決于多肽的濃度。通常，所選的比例代表了將反應最大化并將副反應(通常是非特異性的)最小化間的平衡，所述副反應可以削弱所述Sema6A多肽的期望藥理學活性。優(yōu)選地，保留Sema6A多肽生物活性的至少50%(正如本文描述的或本領域公知的任何分析中所證明的)，最優(yōu)選保留幾乎100%?？梢?使用常失見4匕學將聚合物專厄合至所述Sema6A多肽。例如，聚亞烷基二醇部分可以偶聯(lián)至所述Sema6A多肽的賴氨酸~氨基。可以用N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活性酯(如PEG琥珀酰亞胺基琥珀酸酯(SS-PEG)和琥珀酖亞胺基丙酸酯(SPA-PEG))進行對賴氨酸側鏈的連接。合適的聚亞烷基二醇部分包括，如羧曱基-NHS和正亮氨酸-NHS、SC。這些試劑可商業(yè)獲得。其他的胺-反應PEG連才妄體可以耳又^^虎珀酰亞胺基部分。這些包4舌，如異碌L氰酸酯、硝基苯碳酸酯(PNP)、環(huán)氧化合物、苯并三唑石灰酸酯、SC-PEG、三氟乙基^黃酸酯(tresylate)、醛、環(huán)氧化物、羰基咪唑和PNP碳酸酯。通常優(yōu)化條件使反應選擇性和程度最大化。這種反應條件的優(yōu)化在本領域普通技術人員能力范圍內?？梢酝ㄟ^本領域/>知的任何PEG化反應進4亍PEG化。參見，^口Foc^owGrawAFactor3:4-10(1992)以及區(qū)欠洲專利申"i青EP0154316和EP0401384?？梢証:用反應性聚乙二醇分子(或類似的反應性水;容性聚合物)通過?；磻蛲榛磻M4于PEG化。通過?；腜EG化通常涉及與聚乙二醇活性酯杏f生物反應。任何反應性PEG分子可以用于PEG化。常常使用的活化的PEG酯是酯化至N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)的PEG。如本文所用，"?；?包括但不限于如下治療性蛋白質和水溶性聚合物(如PEG)間鍵合的類型酰胺、氨基甲酸酯、聚氨酯及類似類型。參見，如C/zew.5:133-140，1994。通常選4奪避免溫度、；容劑和pH條件破壞或使Sema6A多肽失活的反應參數(shù)。通常，連接的鍵合是酰胺，并且典型地所得產(chǎn)物中至少95%是單-、二-或三-PEG化的。然而，可以形成具有更高程度PEG化的一些種類，其量取決于所用的特定反應條件。任選地，通過常規(guī)純化方法/人混合物中分離純化的PEG化種類，尤其是未反應的種類，所述純化方法包括，如透析、鹽析、超濾、離子交換色譜、凝膠過濾色語、疏水交換層析和電泳)。通過烷基化的PEG化通常涉及在還原劑存在條件下使PEG末端的醛衍生物和Sema6A多肽反應。此外，可以操縱反應條件，使得有利于PEG化基本上只發(fā)生在Sema6A多肽的N-端氨基，即單-PEG化蛋白質。無論在單-PEG化還是多-PEG化的情況下，所述PEG基團典型地通過-CH2-NH-基團連接至蛋白質。尤其要提及-Ch2-基團，該鍵合類型稱為"烷基"鍵合。通過還原性烷基化的衍生化來產(chǎn)生N-端靶向的單-PEG化產(chǎn)物，其利用了可用于衍生化的不同類型伯氨基(賴氨酸相對于N-端)的差別反應性。反應在這樣一種pH下進行，即所述pH允許53利用賴氨酸殘基-氨基和蛋白質N-端氨基之間的pKa差異。通過這種選擇性衍生化，使含有反應基團(如醛)的水溶性聚合物對蛋白質的連接得到控制和聚合物的軛合主要發(fā)生在蛋白質的N-端，并且沒有發(fā)生顯著的其他反應基團(如賴氨酸側鏈氨基)的修飾。用于?；屯榛椒ǖ木酆衔锓肿舆x自水溶性聚合物。選定的聚合物典型地經(jīng)》f飾而具有單個反應基團，如用于?；幕钚怎セ蛴糜谕榛娜瑥亩?，如為本發(fā)明方法所提供的，聚合程度可得到控制。示例性的反應性PEG醛是聚乙二醇丙醛(其是水穩(wěn)定性的)或其單C1-C10的烷氧基或芳氧基4汙生物(參見，如Harris等，美國專利第5,252,714號)。聚合物可以是分支的或不分支的。對于?；磻?，選定的所述聚合物典型地具有單個反應性酯基。對于還原性烷基化，選定的所述聚合物典型地具有單個反應性醛基。通常，水溶性聚合物將不選自天然存在的糖基殘基，因為哺乳動物重組表達系統(tǒng)通常更加方便地產(chǎn)生這些糖基殘基。制備PEG化Sema6A多肽的方法通常包括步驟(a)在分子變成連接至一個或多個PEG基團的條件下，將Sema6A多肽和聚乙二醇(如PEG的反應性酯或醛衍生物)反應，和(b)獲得反應產(chǎn)物。通常，?；磻淖顑?yōu)反應條件將基于公知參數(shù)和期望的結果來確定，具體情況具體分析。例如，更高的PEG對蛋白質的比例，通常導致更高的聚-PEG化產(chǎn)物百分比。還原性烷基化來生產(chǎn)基本同源的單-聚合物/Sema6A多肽的群體，通常包括步驟(a)在還原性烷基化條件下，在適于多肽N-端氨基的pen-nit選擇性修飾的pH下，將Sema6A蛋白或多肽和反應性PEG分子反應；和(b)獲得反應產(chǎn)物。對于基本同源的單-聚合物/Sema6A多肽的群體，還原性烷基化反應條件是那些允許水溶性聚合物部分選纟奪性連^妄至多肽N-端的條件。這種反應條件通常提供賴氨酸側鏈氨基和N-端氨基之間的pKa差異。對于本發(fā)明的目的，pH通常在3-9范圍內，典型地3-6。Sema6A多肽可以包括標簽，如蛋白水解后可隨即釋放的部分。因此，賴氨酸部分可以通過首先和His-標簽反應，然后再釋放His標簽得以選擇性修飾，其中所述His-標簽使用低分子量連接體(如Traut試劑(Pierce),其既和賴氨酸反應也和N-端反應)進行^修飾。然后多肽爿尋含有自由的SH基團，其中SH基團可以用含石危醇-反應首基(如馬來酰亞胺基團、乙烯石風基團、鹵乙酸酯基團、或自由或保護的SH)的PEG得以選4奪性-修飾?？梢杂脅壬4可建立PEG連4^特異性4立點的連4妄體4#:換Traut試劑。例如，可以用SPDP、SMPT、SATA或SATP(Pierce)替換Tmut試劑。相似的可以使蛋白質和胺-反應連接體反應，并且使所得產(chǎn)物和含有自由SH的PEG反應，其中所述胺-反應連接體插入馬來酰亞胺(例如SMCC、AMAS、BMPS、MBS、EMCS、SMPB、SMPH、KMUS或GMBS)、囟乙酸酯基團(SBAP、SIA、SIAB)或乙烯砜基團。在一些實施方式中，所述聚亞烷基二醇部分偶耳關至所述Sema6A多肽的半胱氨酸基團。可以4吏用如馬來酰亞胺基團、乙烯砜基團、卣乙酸酯基團或硫醇基團實現(xiàn)偶聯(lián)。任選地，所述Sema6A多肽通過不穩(wěn)定4定輒合至聚乙二醇部分。所述不穩(wěn)定4建可以在如生化水解、蛋白水解或氫石?；懈钪袃羝で懈睢＠?，所述鍵可以在體內(生理)條件被切割。反應的方法發(fā)生，如果反應基團在N-端的氨基的話，通常在約pH5-8,如pH5、6、7或8。通常過程涉及制備活化的聚合物，隨后使蛋白質和活化的聚合物反應以生產(chǎn)適于制劑的蛋白質。載體含有Sema6A多肽編碼核酸的載體也可用于本發(fā)明的方法。載體和表達控制序列(可操作連接至這種核酸)的選擇取決于期望的功能特性(如，蛋白質表達)和待轉化的宿主細胞。用于調節(jié)可搡作連接的編碼序列的表達的表達控制元件在本領域是公知的。實例包括但不限于誘導型啟動子、組成型啟動子、分泌信號和其他調節(jié)元件。當使用誘導型啟動子時，它是可控的，例如，通過宿主細胞基質中的營養(yǎng)狀況變化、或溫度變化來控制。載體可以包括原核復制子，即具有在細菌宿主細胞中指導自主復制和維持染色體外重組DNA分子的能力的DNA序列。這種復制子在本領域是^^知的。此外，包括原核復制子的載體也可包括這樣的基因，其表達賦予可檢測的標志物(如藥物抗性)。細菌藥物抗性基因的實例是那些賦予氨千青霉素或四環(huán)素抗性的基因。包括原核復制子的載體也可包括在細菌宿主細胞中指導編碼基因序列表達的原核或噬菌體啟動子。典型情況下在質粒載體中提供和細菌宿主相容的啟動子序列，其中所述質粒載體含有用于插入待表達的DNA區(qū)段的方便限制性位點。這種質粒載體的實例是pUC8、pUC9、pBR322和pBR329(BioRad)、pPL和pKK223(Pharmacia)。4壬4可合適的原核宿主可用來表達編^馬本發(fā)明方法中所用的蛋白質的重組DNA分子。出于本發(fā)明的目的，可以使用多種表達載體系統(tǒng)。例如，一類是利用了來源于動物病毒的DNA元件的載體，所述動物病毒如牛乳頭瘤病毒、多瘤病毒、&泉病毒、痘苗病毒、^N犬病毒、逆專爭錄病毒(RSV、MMTV或MOMLV)或SV40病毒。其他載體涉及具有內部核糖體結合位點多順反子系統(tǒng)的使用。此外，可通過引入允許選擇轉染的宿主細胞的一個或多個標志物來選擇在其染色體中具有整合DNA的細胞。所述標志物可向營養(yǎng)缺陷型宿主提供原養(yǎng)、殺生物劑(如抗生素)抗性或重金屬(如銅)抗性。所述可選4奪的標志物基因既可以直4妾連4妾至4寺表達的DNA序列、也可以通過共轉化引入至同一細胞。新霉素^l酸轉移酶(neo)基因是可選4奪的標志物基因的一個實例(Southern等，乂A/o/.^""/.Ge""7:327-341(1982))。也可能需要其他元件用于mRNA的最優(yōu)合成。這些元件可包括信號序列、剪接信號以及轉錄啟動子、增強子和終止信號。在一個實施方式中，可以z使用BiogenIDEC，Inc.—個具有專利4又的表達載體，其稱為NEOSPLA(美國專利6,159,730)。該載體包含巨細胞病毒的啟動子/增強子、小鼠珠蛋白的主要啟動子、SV40復制起點、牛生長激素的聚腺普酸化序列、新霉素磷酸轉移酶的外顯子1和外顯子2、二氫葉酸還原酶基因和前導序列。已發(fā)現(xiàn)該載體在CHO細胞中轉染后導致非常高水平的表達，隨后在含有G418的培養(yǎng)基中進行選擇和氨甲蝶呤擴增。當然，任何能夠在真核細胞中？1發(fā)表達的表達載體可用于本發(fā)明。合適的載體的實例包括，^旦不限于，質粒pcDNA3、pHCMV/Zeo、pCR3.1、pEFl/His、pIND/GS、pRc/HCMV2、pSV40/Zeo2、pTRACER-HCMV、pUB6/V5-His、pVAXl和pZeoSV2(來自Invitrogen,SanDiego，CA)以及質粒pCI(來自Promega，Madison，WI)。其他真核細胞表達載體在本領域是公知的并且可商業(yè)獲得。典型地，這種載體包含方便的限制性位點用于插入期望的DNA區(qū)段。示例性載體包括pSVL和pKSV-10(Pharmacia)、pBPV-l、pml2d(InternationalBiotechnologies)、pTDTl(ATCC31255)、逆轉錄病毒表達載體pMIG和pLL3.7、腺病毒穿梭載體pDC315和AAV載體。其他示例性載體系統(tǒng)在如美國專利6,413,777中有7>開。通常，篩選表達適當高水平多肽的大量轉化細胞是常規(guī)實驗，可通過例如機器人系統(tǒng)進行。用于哺乳動物宿主細月包表達的常用調節(jié)序列包4舌在哺乳動物細胞中指導蛋白高水平表達的病毒元件，如衍生自逆轉錄病毒LTR、巨細胞病毒(CMV)(如CMV啟動子/增強子)、猿猴病毒40(SV40)(如SV40啟動子/增強子)、腺病毒(如腺病毒主要晚期啟動子(AdmlP))、多瘤病毒的啟動子和增強子以及強哺乳動物啟動子(如天然免疫J求蛋白和肌動蛋白啟動子)。病毒調節(jié)元件的其他描述及其序列參見，如Stinski，美國專利第5,168,062號；Bell，美國專利第4，510,245號以及Schaffner,美國專利第4,968,615號。57重組表達載體可攜帶在宿主細胞中調節(jié)載體復制(如復制起點)的序列以及可選擇的標志物基因。所述可選擇的標志物基因便于選4奪引入了載體的宿主細胞(參見，如Axel,美國專利第4,399,216;4,634,665和5,179,017號)。例如，典型地，可選4奪的標志物基因在載體所引入的宿主細胞中賦予藥物如G418、潮霉素和氨曱蝶呤的抗性。常用的可選才奪的標志物基因包括二氯葉酸還原酶(DHFR)基因(用于氨曱蝶呤選擇/擴增的dhfr-宿主細胞)和neo基因(用于G418選4奪)。編碼Sema6A多肽的載體可以用于轉化合適的宿主細胞。轉化可以通過<壬<可合適的方法。向哺乳動物細月包引入外源DNA的方法是本領域公知的，其包括葡聚糖-介導的轉染、磷酸4丐沉淀、聚凝胺(polybreiie)-介導的轉染、原生質體融合、電穿孔、脂質體中包裹多聚核苷酸以及向細胞核中直接顯微注射DNA。此外，核酸分子可通過病毒載體引入哺乳動物細月包。宿主細萬包的轉〗匕可以通過適于所用載體和宿主細1包的常*見方法來實現(xiàn)。對于原核宿主細胞的轉化，可以4吏用電穿孔和鹽處理方法(Cohen等，vVa".^c"c/.Sc,'.OS^6化2110-14(1972))。對于脊推動物細胞的轉化，可以-使用電穿孔、陽離子脂質或鹽處理方法。參見，如Graham等，Wra/ogy52:456-467(1973);Wigler等，iV^/.Sc/.7(5:1373-76(1979)。用于蛋白質表達的宿主細胞系可以是哺乳動物來源的；相信本領域技術人員有能力優(yōu)先確定最適合期望基因產(chǎn)物在其中表達的具體宿主細胞系。示例性宿主細胞系包括但不限于NSO、SP2細胞、幼倉鼠腎(BHK)細胞、猴腎細胞(COS)、人類肝細胞癌細胞(如HepG2)、A549細胞DG44和DUXB11(中國倉鼠卵巢細胞系，DHFR-)、HELA(人類宮頸癌)、CVI(猴腎細胞系)、COS(帶有SV40T抗原的CVI衍生物)、R1610(中國倉鼠成纖維細胞)、BALBC/3T3(小鼠成纖維細胞)、HAK(倉鼠腎細胞系)、SP2/0(小鼠骨髓瘤)、P3x63-Ag3.653(小鼠骨髓瘤)、BFA-lclBPT(牛內皮細胞)、RAJI(人類淋巴細胞)和293(人類腎)。宿主細胞系通常可以從商業(yè)服務、美國組織培養(yǎng)物保藏中心或公開文獻獲得?？梢允褂霉夹g增強來自生產(chǎn)細胞系的多肽的表達。例如，谷氨酰胺合成酶(GS)系統(tǒng)通常用于在特定條件下增強表達。參見，^口，區(qū)欠洲專利第0216846、0256055,口0323997號以及區(qū)欠洲專利申請第89303964.4號。宿主細月包用于表達本發(fā)明方法中使用的Sema6A多肽的宿主細胞可以是原核的或真核的。示例性真核宿主細胞包括，^旦不限于，酵母和哺乳動物細胞，如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞(ATCC登錄號CCL61)、NIH瑞士小鼠胚胎細胞NIH-3T3(ATCC登錄號CRL1658)和幼倉鼠腎細胞(BHK)。其他有用的真核宿主細胞包括昆蟲細胞和植物細月包。示例性原核宿主細胞是大腸桿菌co//)和鏈霉菌屬(iS^epto柳yce51)。基因治療可在哺乳動物(如人類患者)體內產(chǎn)生Sema6A多肽，使用基因治療方法來治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病、病癥或損傷，其中促進少突月交質細胞的存活、增殖和/或分化、或促進神經(jīng)元的髓鞘形成將是有治療益處的。這涉及施用可操作連接至合適表達控制序列的合適的Sema6A多肽-編碼核酸。通常，這些序列并入到病毒載體中。用于這種基因治療的合適病毒載體包括腺病毒載體、甲病毒載體、腸道病毒載體、瘋病毒載體、慢病毒載體、桿狀病毒載體、皰滲病毒載體、Epstein-Barr病毒載體、乳多空病毒載體、痘病毒載體、痘苗病毒載體、腺相關病毒載體以及單純皰疹病毒載體。所述病毒載體可以是復制-缺陷型病毒載體。通常使用在El基因或E3基因中有缺失的腺病毒載體。當Y吏用腺病毒載體時，所述載體通常沒有可選4奪的標志物基因。藥物組合物本發(fā)明方法中所用的Sema6A多肽可以配制成用于施用至哺乳動物(包括人類)的藥物組合物。本發(fā)明方法中所用的藥物組合物包括藥物可接受載體，包括如離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、血清蛋白(如人類血清白蛋白)、緩沖物質(如磷酸鹽)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、鹽或電解質(如魚精蛋白碌L酸鹽、磷酸氳二鈉、^粦酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽)、膠態(tài)二氧化硅、三硅酸鎂、聚乙烯吡咯烷酮、基于纖維素的物質、聚乙二醇、羧曱基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、蠟、聚乙烯-聚氧丙烯—嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。胃外、心室內、口服、通過吸入噴霧、局部、直腸、鼻、口腔、陰道或通過植入的貯庫(reservoir)。如本文所用術語"腸胃外，，包括皮下、靜脈內、肌肉內、關節(jié)內、滑膜內、胸骨內、鞘內、肝內、病變內和顱內注射或lt注4支術。4口前面所述，用于本發(fā)明方法的Sema6A多肽在神經(jīng)系統(tǒng)內發(fā)揮作用來促進少突膠質細胞的存活、增殖和分4匕以及一申經(jīng)元的髓鞘形成。因此，在本發(fā)明的方法中，所述Sema6A多肽以這樣一種方式施用，即它們穿過血腦屏障。這種穿過可以是Sema6A多肽分子本身固有的物理化學性質、藥物制劑中的其他組分、或使用機械裝置(如針、插管或手術器械)突破血腦屏障而導致的。當Sema6A多肽是一種天生不穿過血腦屏障的分子時，如通過融合至有利于穿過的部分、合適的施用途徑如鞘內或顱內，來直接用于MS的慢性病變中。當Sema6A多肽是一種天生可以穿過血腦屏障的分子時，施用途徑可以通過下述各種途徑中的一種或多種。用于本發(fā)明方法的無菌的可注射形式組合物可以是水性或油性懸浮液?？梢愿鶕?jù)本領域公知的技術，使用合適的分散劑或潤濕劑以及懸浮劑來配制這種懸浮液。無菌的可注射制劑也可以是腸胃外可接受的無毒稀釋劑或溶劑中無菌可注射的溶液或懸浮液，例如，作為1,3-丁二醇中的懸浮液。在可接受的媒介物和溶劑當中可用的是水、林格溶液和等滲氯化鈉溶液。此外，無菌的、不揮發(fā)性油常失見用作溶劑或懸浮介質。為此目的，任何可用的溫和的不揮發(fā)性油包括合成的單-或雙-甘油酯。脂肪酸(如油酸)及其甘油酯衍生物可用于可注射的制劑，因為它們是天然的藥物可接受的油，如橄欖油或蓖麻油，尤其是它們的聚氧乙基化的形式。這些油溶液或懸浮液也可包含長鏈醇類稀釋劑或分散劑，如羧甲基纖維素或類似的分散劑，其常用于配制藥物可接受的劑型(包括乳劑和懸浮液)。其他常用表面活性劑，如吐溫、司盤和其他乳化劑或生物利用度增強劑(其常用于藥物可接受固體、液體或其他劑型的生產(chǎn))，也可以用于配制目的。腸胃外的制劑可以是單次快速推注劑量、輸注或負荷快速推注劑量，隨后是維持劑量。這些組合物可以特定的固定或可變間隔來施用，如一天一次、或基于"根據(jù)需要"來施用。用于本發(fā)明方法的某些藥物組合物可以以可^妾受的劑型口月良施用，其包括，如月交嚢、片劑、水懸浮液或溶液。某些藥物組合物也可通過鼻氣溶月交或吸入劑施用。這種組合物可以制備成鹽水中的溶液，通過使用苯甲醇或其他合適的防腐劑、促吸收劑來提高生物利用度，和/或使用其他常*見增溶或分散劑。結合載體材料來生產(chǎn)單個劑型的Sema6A多肽的量可以變化，這耳又決于所治療的宿主、所用多肽的類型以及具體施用方式。所述組合物可以作為單劑量、多劑量或在規(guī)定時間段內以輸注來施用。也可以調整劑量方案來提供最優(yōu)的期望響應(如治療或預防響應)。本發(fā)明的方法使用"治療有效量，，或"預防有效量"的Sema6A多肽。這種治療或預防有效量可以才艮據(jù)因素(如個體的疾病狀態(tài)、年齡、性別和體重)而變化。治療或預防有效量也是這樣一種量，即治療有益作用超過任何毒性或有害作用。針對任何具體患者的特定劑量和治療方案將取決于多種因素，包括所用的特定Sema6A多肽、患者年齡、體重、一般健康狀況、61性別和飲食、以及施用時間、排泄速率、藥物聯(lián)合、以及治療的特定疾病嚴重程度。醫(yī)護人員對這些因素的判斷在本領域技術人員能力范圍內。所述量也取決于待治療的個體患者、施用途徑、制劑類型、所用化合物的特性、疾病嚴重程度以及期望的效果。所用的量可以通過本4頁纟或/>知的藥理和藥f^動力學原理來確定。在本發(fā)明方法中，所述Sema6A多肽通常直接施用至神經(jīng)系統(tǒng)、腦室內或鞘內，如MS的慢性病變中。根據(jù)本發(fā)明方法施用的組合物可以這樣配制，從而每天施用的劑量為0.001-10mgSema6A多肽/kg體重。在本發(fā)明的一些實施方式中，劑量是每天0.01-1.0mg/kg體重。在一些實施方式中，劑量是每天0.001-0.5mg/kg體重。在某些實施方式中，劑量是每天5mg/kg-100mg/kg體重。在本發(fā)明的其他實施方式中，劑量是每天50mg/kg-500mg/kg體重。本發(fā)明還包括每天100mg/kg-1g/kg體重的劑量。本發(fā)明方法中所用劑量的非限定性實例選自由以下劑量組成的組每天0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、400、500、600、700、800、900或1000mg/kg體重。用于本發(fā)明的劑量可以是每天1g/kg-5g/kg體重。上述范圍中的中間劑量也意為在本發(fā)明的范圍內?？梢韵蚴苤委熣呙刻?、隔天、每周或根據(jù)經(jīng)驗分析確定的任何其他時間表施用這種劑量。示例性治療需要在長時期內多劑量施用，例如，至少6個月。其他示例性治療方案需要每隔一周一次或每月一次或每3至6個月一次施用。示例'l"生劑量時間表包4舌，4旦不限于，連續(xù)凄t天1-10mg/kg或15mg/kg、隔天30mg/kg或每周60mg/kg。在某些實施方式中，可以用編石馬Sema6A多月太的一亥酸分子治療受治療者。核酸劑量范圍為每位患者約10ng至lg、100ng至100mg、1g至10mg、或30-300gDNA。用于傳染性病毒載體的劑量范圍為每劑量10-100或更多個病毒粒子不等。補充活性化合物也可并入用于本發(fā)明方法的組合物中。例如，Sema6A多肽或融合蛋白可以和一種或多種其他治療劑共配制和/或共施用。本發(fā)明包括任何合適的將Sema6A多肽遞送至選定把組織的方法，包括水溶液的快速推注或控-釋系統(tǒng)的才直入?！嚼粲每?釋才直入物可減少對重復注射的需求。用于本發(fā)明方法的Sema6A多肽可以直4妄llr注至腦中。用于化合物直接腦輸注的各種植入物是公知的，并且向患有神經(jīng)病癥的人類患者遞送治療性化合物時是有效的。這些包括用泵向腦中慢速輸注、立體定向地才直入、臨時性間質導管、永久性顱內導管才直入物和手術植入可生物降解的植入物。#^，如Gill爭，如J:;Scharfen爭，"HighActivityIodine-125InterstitialImplantForGliomas(高活性石典-125間質才直入一申經(jīng)月交質瘤)，"/脫/W"W""'o"6>"co/ogyS,》/.2《4):583-591(1992);Gaspar爭，"Permanent1251ImplantsforRecurrentMalignantGliomas(只于復發(fā)'f生惡'l"生一申經(jīng)月交質瘤的7:fc久性1251植入物),"紋乂i^/加bw腸/.尸—.W(5):977-982(1999);第66章，第577-580頁，Bellezza爭，"StereotacticInterstitialBmchytherapy(立體定向間質近距離方丈射療法)，"在Gildenberg爭，TextbookofStereotacticandFunctionalNeurosurgery(立體定向和功能性神經(jīng)外科教科書)，McGraw-Hill(1998);以及Brem爭，"TheSafetyofInterstitialChemotherapywithBCNU-LoadedPolymerFollowedbyRadiationTherapyintheTreatmentofNewlyDiagnosedMalignantGliomas:PhaseITrial(負載BCNU的聚合物化療和隨后放療在治療新近診斷的惡性神經(jīng)膠質瘤中的安全性I期試驗),"/臉訓-6>腳/，26:111-23(1995)。所述組合物也可包括分散于可生物相容的載體材料(作為所述化合物合適的遞送或支持系統(tǒng))中的Sema6A多肽。持續(xù)釋放載體合適的實例包括有形制品形式的半透性聚合物基質(如4全劑或月交嚢)?？芍踩牖蛭⒛z嚢持續(xù)釋放基質包括聚乳酸(美國專利第3,773,319號；EP58,481)、L-谷氨酸和y-乙基-L-谷氨酸的共聚物(Sidman爭，5,》/o/少附^s22:547-56(1985》；聚(2-羥乙基-曱基丙烯酸酯)、乙烯-乙酸乙烯酯(Langer爭，乂B/owec/.Af"ter。/5:167-277(1981);Langer,C/z綴":98-105(1982))或聚-D-(-)-3羥基丁酸(EP133,988)。在本發(fā)明的一些實施方式中，通過直4妄輸注至腦的合適區(qū)域內施用Sema6A多肽。參^，如Gill爭，"Directbraininfusionofglialcellline-derivedneurotrophicfactorinParkinsondisease(帕金森病中直4妄腦豐命注月交質細胞系書亍生的神經(jīng)營養(yǎng)因子),"Wa/wreTkfe/.9:589-95(2003)?？蛇x技術是可用的，并用于施用才艮據(jù)本發(fā)明的Sema6A多月太。1"列^口，"f吏用Riechert—Mundinger單元,口ZD(Zamorano—Dujovny)多用途定位單元實現(xiàn)導管或植入物的立體定位安置。造影-增強計算機斷層(CT)掃描、注射120ml歐乃派克、350mg石典/ml、2mm層面厚度可以允i午三維多平面治療計劃(three-dimensionalmultiplanartreatmentplanning)(STP,Fischer,Freiburg,Germany)。為了達到清晰的目標確i人，該"i殳備允許在不茲共振成^f象研究、合并CT以及MRI目標信息的基礎上進4亍計劃。出于此目的可以使用經(jīng)改進的用于配合GECT掃描儀(通用電氣々V司，Milwaukee,WI)1吏用的Leksell立體定4立系統(tǒng)(DownsSurgical,Inc.,Decatur,GA)以及Brown-Roberts-Wells(BRW)立體定位系統(tǒng)(Radionics,Burlingto,MA)。因此，在才直入的當天早上，可以4夸BRW立體定位才匡的環(huán)狀基座圈(annularbasering)連接至患者的頭顱。用夾固至基板上的石墨棒定位器框貫穿(though)所述區(qū)域(把組織)，以3mm間隔可以獲得連續(xù)的CT截面?？梢栽赩AX11/780型i十算才幾(DigitalEquipmentCo卬omtion,Maynard，Mass)上運行計算機化處理計劃程序，利用石墨棒圖像的CT坐標來纟會制CT空間和BRW空間之間的圖。治療本文所述脫ft鞘或骨逸鞘形成病癥的方法，在用于人類之前，為了期望的治療或預防活性，通常在體外進4于測試，然后在可合適的動物模型，包括轉基因動物，是本領域普通技術人員公知的。例如，本文描述了說明Sema6A多肽分化和存活作用的體外分析。如實施例中所描述的，可以在體外測試Sema6A多肽對軸突髓鞘形成或少突膠質細胞分化的作用。最終，可以通過創(chuàng)造表達所述Sema6A多肽的轉基因小鼠、或通過在模型中向小鼠或大鼠施用所述Sema6A多肽進行體內測試。神經(jīng)退行性疾病的診斷或監(jiān)測本發(fā)明的一些實施方式涉及用于在受治療者中it斷或監(jiān)測神經(jīng)疾病或疾患的方法，其通過(a)/人纟寺i貪斷或監(jiān)測的受治療者中獲4尋試才羊，如組織或生物'液體纟羊品(如血'液或CSF)、(b)測量Sema6A多肽在試樣中的水平以及(c)將Sema6A多肽的水平與參考試樣比壽交。通過術語"it斷"來表示鑒定個體患有特定的疾病或疾患。通過術語"監(jiān)測"來表示對給定條件或現(xiàn)象進行持久和/或定期4企查。在一個實施方式中，用于監(jiān)測神經(jīng)退行性疾病的方法包括在神經(jīng)退行性疾病的治療期間，以一定間隔在若干時間點處獲得生物液體樣品作為患者監(jiān)測的部分。在另一個實施方式中，用于監(jiān)測神經(jīng)退行性疾病的方法包括在MS治療期間，以一定間隔在若干時間點處獲得生物液體樣品作為患者監(jiān)測的部分。在一個實施方式中，待診斷或監(jiān)測的疾病或疾患是多發(fā)性硬化(MS)。在其^f也實施方式中，疾病或疾患可選自由以下組成的纟且進4亍性多灶性白質腦病(PML)、腦脊髓炎(EPL)、腦橋中央髓鞘溶解癥(CPM)、腎上腺腦白質營養(yǎng)不良、亞歷山大病、佩-梅病(PMZ)、球樣細胞腦白質病(克拉伯氏病)、沃勒變性、視神經(jīng)炎、橫貫性脊髓炎、肌萎縮側索硬化(ALS)、亨廷頓病、阿爾茨海默病、帕金森病、脊髓損傷、創(chuàng)傷性腦損傷、輻射后損傷、化療的神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥、中風、急性缺血性視神經(jīng)病變、維生素E缺乏、孤立性維生素E缺乏綜合征、AR、巴-科綜合征、胼胝體脫髓鞘性腦病綜合征、異染性腦白質營養(yǎng)不良、三叉神經(jīng)痛和貝爾麻痹。生物液體樣品包括，但不限于，血液、尿和腦脊液(CSF)。獲得生物液體樣品的方法包括，但不限于，組織活4企、靜脈穿刺、尿收集和脊推穿刺。在一個實施方式中，所述生物液體樣品是CSF或血液。纟且織包4舌，^f旦不限于，上皮《且織、肌肉^a織、結締ia織或碎申經(jīng)組織。在一個實施方式中，所述組織是上皮組織，如皮膚組織的一部分。在另一個實施方式中，將從組織或生物液體(如CSF或血液)中收集的樹突細胞用于檢測Sema6A的表達。所述生物液體樣品從受治療者獲得。在一些實施方式中，所述受治療者是脊推動物。脊推動物包括但不限于人類、小鼠、大鼠、綿羊、山羊、豬、牛、馬、爬行動物、魚、兩棲動物以及禽類、爬《亍動物和魚的卵。在一個實施方式中，所述受治療者是人類。在另一個實施方式中，所述受治療者是患有或懷疑患有神經(jīng)疾病的人類，其中所述神經(jīng)疾病選自由以下《且成的列表MS、—進4亍性多灶性白質腦病(PML)、腦脊髓炎(EPL)、腦橋中央髓鞘溶解癥(CPM)、腎上腺腦白質營養(yǎng)不良、亞歷山大病、佩-梅病(PMZ)、J求樣細月包腦白質病(克拉伯氏病)、沃勒變性、視神經(jīng)炎、橫貫性脊髓炎、肌萎縮側索硬化(ALS)、亨廷頓病、阿爾茨海默病、帕金森病、脊髓損傷、創(chuàng)傷性腦損傷、輻射后損傷、化療的神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥、中風、急性缺血性一見神經(jīng)病變、維生素E缺乏、？瓜立性維生素E缺乏綜合征、AR、巴-科綜合征、胼胝體脫髓鞘性腦病綜合征、異染性腦白質營養(yǎng)不良、三叉神經(jīng)痛和貝爾麻痹。在一個具體的實施方式中，所述受治療者是MS患者，其近期患至少一種選自由以下組成的組的疾患麻木、無力、視力缺損、失去平纟軒、眩暈、尿急(urinarybladderurgency)、疲勞和抑郁。如本文所用，"近期，，可以是3、5、7、10、14或21天內。試樣中Sema6A表達的水平可以指示疾病的狀態(tài)，如疾病或疾患的嚴重程度、受治療者患所述疾病的傾向、受治療者的預后、或治療》于疾病的療^^本發(fā)明還提供在從受治療者獲得的試樣中檢測Sema6A多肽存在的方法?？梢?lt;吏用任何用于4企測蛋白質或mRNA的本領域7>知方法。這種方法包括，但不限于，考馬斯亮藍染色、免疫擴散、免疫電泳、免疫化學方法、結合劑-配體(binder-ligand)分析、免疫組織4匕學l支術、)疑集和補體分一斤。[BasicandClinicalImmunology(基礎和臨床免疫學)，217-262，Sites和Terr編砵尋，Appleton&Lange，Norwalk，CT(1991)，其通過引用并入本文]。4全測Sema6AmRNA的方》去是本4頁i或公^口的。TuanRocky,RecombinantProteinProtocols:DetectionandIsolation(MethodsinMolecularBiology)(MthodsinMolecularBiology)(重組蛋白的實驗方案檢測和分離(分子生物學方法))(第1X反.HumanaPress,PA1997)。這種方法的非限定性實例是Northem印記、核酸酶保護分析、原位雜交或RT-PCR。多種竟爭性和非竟爭性蛋白質結合免疫分析是本領域公知的。用于這種分析的抗體可以是未標記的，例如用于凝集測試，或是標記的，廣泛用于各種類型分析方法?？捎脴擞浳锇η飞湫院怂亍⒚?、熒光劑、化學發(fā)光劑、酶底物或輔因子、酶抑制劑、顆粒、染料及類似物，用于》文射免疫分析(RIA)、酶免疫分析(如酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA))、熒光免疫分析、Western印記分析及類似分析。在受治療者中"i貪斷或監(jiān)測神經(jīng)疾病時，Sema6A多肽在試才羊中的水平可以和Sema6A多肽在參考試樣中的水平比較。合適的參考試樣可以包括，j旦不限于，來自于神經(jīng)正常的個體的組織或生物液體樣品。在一個實施方式中，所述參考試才羊來自未患有神經(jīng)退4亍性疾病的受治療者。在另一個實施方式中，所述參考試樣來自于未患有MS的受治療者。此外，受治療者產(chǎn)生的已知蛋白質可以作為內部標準或對照，如白蛋白(如果/人血清或總蛋白進4亍測量的話)。診斷試劑盒本發(fā)明還考慮了診斷試劑盒。這些試劑盒允許檢測、診斷或監(jiān)測神經(jīng)退4于性疾病。當個體(他/她)4妄受疾病進展和/或疾病治療-珍斷神經(jīng)退4亍性疾病所需的時間，和/或減少在患者生物液體樣品中檢測差異表達蛋白質所需的時間。本發(fā)明的一個實施方式涉及，使用特異性結合本文所述中斗企測、i貪斷或監(jiān)測神經(jīng)退^f亍性疾病的i貪斷試劑盒。在另一個實施方式中，本發(fā)明涉及，使用特異性結合Sema6A多肽的抗體或抗原結合片段以及可才企測的標記物，在患者中才全測、診斷或監(jiān)測MS的診斷試劑盒。在一些實施方式中，用對檢測有用的酶對抗體進行標記，如辣根過氧化物酶、-半乳糖苷酶、熒光素酶、石威性磷酸酶、葡萄糖氧化酶及類似物。在經(jīng)可檢測的酶標記的實施方式中，通過加入其他試劑來檢測抗體，其中酶利用所述試劑產(chǎn)生可檢測的反應產(chǎn)物。例如，辣根過氧化物酶與過氧化氫和二氨基聯(lián)苯胺。也可用生物素來標記抗體，并通過間接測量抗生物素蛋白或鏈霉親和素的結合來檢測。也可用預定的多肽表位來標記抗體，所述表位被第二報道分子識別(如，亮氨酸4立鏈對序列、第二抗體結合位點、金屬結合結構域、表位標簽)。本發(fā)明所考慮的試劑盒意圖在脊推動物中檢測、診斷或監(jiān)測神經(jīng)退行性疾病，所述脊推動物包括但不限于，人類、小鼠、大鼠、綿羊、山羊、豬、牛、馬、爬行動物、魚、兩棲動物以及禽類、爬4亍動物禾n魚的卵。本發(fā)明的診斷試劑盒包括進4亍期望的4艮據(jù)本發(fā)明的免疫分析所需的必要試劑中的一些或全部。所述i貪斷試劑盒可以以商業(yè)包裝形式出現(xiàn)，作為一個或多個容納必要試劑的容器的組合。這種試劑盒可包括本發(fā)明的抗體，并聯(lián)合一些常規(guī)試劑盒組分。常規(guī)試劑盒68組分對于本領域技術人員是很明顯的，并且在很多出版物中公開，包4舌,1"列^口Harlow禾口Lane;AntibodiesALaboratoryManual〖抗體的實驗室手冊)，ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.1988)，通過引用將其整體并入本文。常規(guī)試劑盒組分可包括這種項目，例如樣t量滴定板、維持分析混合物pH的緩沖劑(如，但不限于，Tris、HEPES、磷酸鹽、碳酸鹽等)、軛合的第二抗體(如過氧化物酶軛合的抗-小鼠IgG(或任何抗-第一抗體所來自的動物的IgG))、穩(wěn)定劑、殺生物劑、惰性蛋白質(如牛血清白蛋白或類似物)以及其他標準試劑。本發(fā)明的診斷試劑盒也可包括適于家用以及診所、醫(yī)生診室或實-驗室用的試劑盒。家庭測試試劑盒的實例可以在例如US5,602,040中找到，其通過引用并入本文。如本文所用術語"檢測"，當涉及在患者中檢測蛋白質存在時，意圖包括確定蛋白質的量或在患者中表達一定量蛋白質的能力、根據(jù)疾病的可能后果以及疾愈前景方面對預后評價、一段時間內監(jiān)測蛋白質水平作為疾患狀態(tài)的量度以及監(jiān)測蛋白質水平來為患者(如，患有神經(jīng)退4于性疾病的患者)確定優(yōu)選治療方案。實施例實施例1Sema6A參與少突力交質細力包的生物學少突膠質細胞的成熟通過幾個發(fā)育階段，由少突膠質細胞祖細胞(其表達NG2)，分化成前-成髓鞘(pre-myelinating)少突月交質細月包(其表達Ol和04)并最纟冬分化成為成熟的成髓鞘少突月交質細胞(其表達Ol、04、髓鞘石咸性蛋白(MBP)和抗-蛋白脂質蛋白(PLP))。因此，通過監(jiān)測NG2、Ol、04、MBP和PLP標志物的存在與否，有可能確定給定細胞的發(fā)育階段并評價Sema6A多肽在少突膠質細胞生物學中的作用。少突膠質細胞轉錄因子-2(Olig-2)也被認為表達于少突月交質細胞譜系中，因此用作才全測少突膠質細胞的才示志4勿。參見Yokoo等，/oy尸aA.164:1717-1725(2004)(少突月交質細J包生物學的綜述參見，如Baumann和Pham-Dinh，尸/z—/尺ev81:871-927(2001);Bras等，/脫乂Dev.腸/.49:209-220(2005)?？?4和MBP的單克隆抗體來自Chemicon?？筆LP)的單克隆抗體(克隆AA3，1:10)由Pr.C.Luberzki惠贈。Yamamura等，/iVeMWc/2em.57(5):1671-80(1991)?？剐切卧陆毁|細月包前體細月包(APC)的單克隆3元體來自VWR國際(FontenaySousBois，F(xiàn)rance)。#元CNPase(環(huán)核普酸-3，-磷酸水解酶)抗體來自Sigma?？筃G2(AB5320)的抗體來自Chemicon?？谷祟怱ema6A的抗體來自R&DSystems(Minneapolis,MN)?？过X2+和paranodine的抗體來自Sigma?？?myc抗體(9E10,1:100)來自SantaCruzBiotechnology(SC-40)。Sema6AmRNA在少突月交質細胞中表達在PI和P15小鼠的新鮮冷凍腦(矢狀切面)或脊髓(冠狀面)中通過原位雜交分析Sema6AmRNA的表達。通過吸入異氟烷foren(Abbott)麻醉瑞士小鼠((Janvier,LeGenestSaintIsle，F(xiàn)rance),并去頭。立即在異戊烷(-50。C)中冷凍腦和視神經(jīng)，雜交前在-80。C中保存。組織切片在4。/。PFA中后固定10分鐘，在PBSpH7.4中沖洗，用蛋白酶K處玉里3-5分4f(10jig/ml;Invitrogen，Carlsbad，CA),在4。/。PFA中后固定5分鐘，在PBS中沖洗，乙?；?，用1%TritonX-100的PBS洗滌。在雜交緩沖液(50%甲酰胺、5xSSC、lxDenhardt's、250jug/ml酵母tRNA和500pg/ml鯡魚精子，pH7.4)中，室溫下將切片孵育2小時，然后將組織切片和洋地黃毒苷(digoxigenin)-標記的Sema6A核糖核S^笨針(0.5ng/pl)在72°C下雜交過4艾。雜交后，切片在2xSSC中72。C下漂洗2小時，并在室溫下在含有10。/。正常山羊血清(NGS)的0.1MTris,pH7.5,0.15MNaCl(Bl)中封閉1小時。封閉后，在室溫下，將切片和石威性石粦酸酶(1:5000;RocheDiagnostics)專厄合的抗-洋i也黃毒苷抗體在舍有P/。NGS的B1中孵育過夜。再次沖洗后，用氯化硝基四氮唑藍(NBT)(337.5jng/ml)和5-溴-4-氯畫3-吲咪基磷酸酯(BCIP)(175^g/ml)(RocheDiagnostics)寸全測;咸性磷酸酶活性。將切片裝載到Mowiol(Calbiochem/Merck,Carlstadt,Germany)中。^口圖3所示，出生后發(fā)育期間Sema6AmRNA通過少突膠質細胞在P15小鼠的CNS白質中廣泛表達。Sema6A蛋白在少突月交質細胞中表達通過Sema6A和PLP、Sema6A和APC(少突月交質細月包標志物)以及Sema6A和CNPase(少突月交質細月包和施旺細月包沖示志物)的乂又重免疫染色證實，Sema6A蛋白在P15小鼠腦切片(來自4%PFA固定的腦)的少突膠質細胞中表達。在室溫(RT)下在含有0.2%明膠(Prolabo，F(xiàn)ontenay-sous-Bois，F(xiàn)rance)和0.25%TritonX-100(PBS-G-T)的PBS中封閉切片1小時，然后在RT下用第一抗體(即抗-小鼠Sema6A抗體、抗-PLP抗體、抗-APC抗體和抗-CNPase抗體)醉育過夜。然后在室溫下用4。/。PFA將培養(yǎng)物固定IO分鐘，漂洗，然后在含有10%NGS和0.2%Triton-X100的PBS纟爰沖液中飽和并透化30分鐘。在含有10%NGS和0.1%TritonX-100的PBS中將第二抗體(即針對Sema6A的CY3-軛合的抗體，以及針對PLP、APC和CNPase的FITC-軛合的抗體)稀釋1小時，沖洗后，在RT下和第二抗體孵育1小時。漂洗后，將培養(yǎng)物裝載在Mowiol(Calbiochem/Merck,Carlstadt,Germany)中。雙重免疫染色顯示所有Sema6A表達細胞也在白質中表達APC、CNPase或PLP(數(shù)據(jù)未顯示)。然而，有些表達PLP、APC和CNPase的細月包不表達Sema6A。因jt匕Sema6A蛋白似、乎在少突月交質細胞語系的細胞亞群或者處于成熟特定精確階段的少突膠質細胞中表達。所以，Sema6A聯(lián)合少突膠質細胞標志物PLP、APC或CNPase而獲得的共-免疫標記證實了在體內通過少突膠質細胞的Sema6A表達。在相同的P15腦切片(小腦、皮層)上，少突膠質細胞特異性蛋白(如PLP)的免疫染色，結合Sema6A原位雜交。除了將蛋白酶K消4匕(10jug/ml)縮殺豆至2分4中以外，如上所示進4亍標準的原位雜交。用Sema6A核糖核酸探針進行原位雜交后，在PBS-T中漂洗切片，RT下在PBS-G-T中封閉1小時，在RT下用抗-PLP抗體(克隆AA3)孵育過夜，然后在生物素化的兔抗-大鼠抗體(1:200;Dako,Glostrup,Denmark)和HRP-專厄合的《連霉親和素(1:400;Amersham)中醉育。用二氨基聯(lián)苯胺反應(棕色沉淀)對切片進行顯影。所有表達Sema6A轉錄物的細胞呈現(xiàn)紫色，并且也包圍有棕色沉淀，這表明PLP的表達(數(shù)據(jù)未顯示)。Sema6A蛋白的表達是發(fā)育調節(jié)的還利用上述抗-小鼠Sema6A和抗-APC抗體通過雙重免疫染色分析Sema6A和APC在P15、P30和P45小鼠前腦冠狀面上的表達。在不同年齡中均觀察到強烈的APC表達，但是在P15觀察到APC/Sema6A共-標記最大的細胞，其中65%的少突膠質細胞(APC+細胞)表達Sema6A(數(shù)據(jù)未顯示)。在P30中，在白質中也表達Sema6A的APC陽性細胞的比例降低至14%，在P45中P條^氐至8%(數(shù)據(jù)未顯示)。這顯示Sema6A的表達在髓鞘形成峰期間是發(fā)育調節(jié)的，于P15處達到最大^f直。實施例2少突膠質細胞分化各階段的Sema6A表達在純化的少突膠質細胞培養(yǎng)物中也顯示體外Sema6A的表達。切除PO至P5小鼠的皮層半5求，并轉移至由添加有10%小牛血清的DMEM組成的培養(yǎng)基中。在培養(yǎng)基中，通過穿過70jam目的尼龍篩來分離組織。將細胞懸浮液涂布(dispensed)到包被有聚鳥氨酸的直^圣100mm的塑津牛纟且織i咅養(yǎng)皿上。通過豐5豐5吹吸(syringing)纟田胞層上方的培養(yǎng)基而使少突膠質細胞前體細胞選擇性分離。隨后將取出的細胞在12個小時期間內在未包被的塑料培養(yǎng)亞上經(jīng)受兩次連續(xù)的預涂板(preplating),以使余留的星形細胞和小神經(jīng)膠質細胞附著。將未附著以及松弛附著的細胞(少突月交質細胞)在60mm塑料培養(yǎng)皿上傳代培養(yǎng)。用抗-小鼠Sema6A抗體和抗-NG2(少突膠質細胞祖細胞的標志物)或抗-04(從前-少突膠質細胞階段表達的少突膠質細胞譜系的標志物)以及抗-MBP抗體(成熟少突膠質細胞的標志物)對培養(yǎng)物染色。將CY3軛合的抗體用作第二抗體來顯示Sema6A的表達，以及FITC-軛合的抗體用于顯示NG2、04和MBP的表達。體外24小時后，不同類型的細胞表達NG2:具有顯著未分化形態(tài)學的一些細胞僅僅是FITC-標記的(NG2+),因此對于Sema6A是陰性的，其他更加分化的細胞(更多的突起(process))在細胞體中表達NG2和^f氐水平Sema6A，{旦在細月包突起中不表達(數(shù)據(jù)未顯示)。體外48小時后，04-陽性細胞高度表達Sema6A(數(shù)據(jù)未顯示)。體外72小時后，MBP-陽性細胞高度表達Sema6A(數(shù)據(jù)未顯示)。這顯示在分化的(04和MBP+)少突膠質細胞中更加高度表達Sema6A(如在體內觀察到的)。實施例3Sema6A-敲除'J、鼠表現(xiàn)出髓鞘化的軸突減少為了產(chǎn)生Sema6A-敲除小鼠，將由內部核糖體進入位點(IRES)所間隔的、編碼CD4跨膜結構域--半乳糖苷酶-新霉素磷酸轉移酶(TM--geo)和人類胎盤義威性磷酸酶(PLAP)的盒插入至Sema6A的第17個內含子中，如Leighton等，7V"fwre,410:174-179中所述。將Sema6A蛋白余留的N-端部分直至氨基酸623(因此缺少跨膜和細胞質結構域)融合至-半乳糖苷酶，并保留在內質網(wǎng)中。為了分析髓鞘形成的延遲，研究了Sema6A-缺陷型小鼠的郎飛氏結。郎飛氏結表達多種已經(jīng)-〖正明的在該結具有特4正性表達和功能的蛋白質。將針對參與郎飛氏結形成的蛋白質(如paranodin)產(chǎn)生的抗體用于檢測蛋白質的表達。結是高度組織化的結構，在待髓鞘化的軸突和少突膠質細胞間緊密相互作用。由于蛋白質在結上的特征性表達，可以觀察不同區(qū)域通過Na"電壓門控通道來觀察結的中央?yún)^(qū)，以及paranodin來觀察結的中央?yún)^(qū)周圍的兩個結構域，稱為paranodin/Na"通道簇。在P16小鼠^L神經(jīng)中，〃使用抗-Na"通道和paranodin的抗體通過免疫纟且織4匕學，見察Na2+通道和paranodin的表達(數(shù)據(jù)未顯示)。免疫組織化學顯示Sema6A-缺陷型小鼠中paranodin/Na2+通道簇的數(shù)目顯著降低(-40.54%;n=3)(數(shù)據(jù)未顯示)。該結果表明P16Sema6A-缺陷型小鼠具有比野生型更少的髓鞘化的軸突。Sema6A-敲除小鼠在少突膠質細胞中表現(xiàn)出降低的PLP表達為了確定少突膠質細胞的分化或增殖在Sema6A-缺陷型小鼠中是否正常，通過非放射性原位雜交標記三種主要軸突束——前連合(AC)、胼胝體(CC)和視神經(jīng)(ON)，并對PLP表達細胞的數(shù)目定量。分析了三個年齡組P16、P30和P45(每組3只動物)的AC和CC，以及P16組的ON。沒有在4壬何年齡組的CC中觀察到PLP表達的顯著變化(^:據(jù)未顯示)。然而，和野生型同窩出生的^f子畜相比，在Sema-A小鼠的AC中P16組的PLP表達細胞的數(shù)目降低(-43%)(圖4)。在P16中的這種降低用PLP表達細胞數(shù)目的較大降低(-60%)來解釋，但是還伴有AC表面30%的降低。這種降低在P30組的AC中l(wèi)交不顯著(-20%)，并且如圖4所示在成體中回到正常水平。同樣地，PLP在P16視神經(jīng)中表達也顯示相似的降低(-26%)(數(shù)據(jù)未顯示)。然而，在AC中，在屬于少突膠質細胞譜系的少突月交質細胞轉錄因子2(01ig2)表達細胞的數(shù)目上沒有^見察到顯著變化(數(shù)據(jù)未顯示)。這些結果表明Sema6A在體內少突膠質細胞分化、或其遷移和移至(colonize)軸突束的能力方面的可能作用。Sema6A-缺陷型少突膠質細胞表現(xiàn)出延遲的分化從Sema6A-Z-新生小鼠中純化少突膠質細胞，并通過Bernard等，《/7Vewmsc.65:439-445，2001中所述方法分析其分化的能力。簡要而言，在磷酸鹽緩沖鹽水中解剖PO-P10小鼠或大鼠的完整腦半i^，并轉移至主要由補充有青霉素(50個單位/ml)、^隨霉素(50jug/ml)(Invitrogen15140)、小牛血清(10%)(Gibco16030074)、5ng/mlPDGFBB(SigmaP3201)和5ng/mlbFGF(SigmaF0291)的DMEM(Invitrogen31966047)組成的培養(yǎng)基中。在i告養(yǎng)基中，通過將組織穿過70jLim目的尼龍(BDBiosciences)篩來進4亍分離。S夸細月包懸浮、液涂布到包凈皮有聚鳥氨酸(SigmaP3655)的直徑100mm的塑料組織培養(yǎng)皿上。在7K飽和的培養(yǎng)箱(平衡有95%空氣-5%C02)中37。C下孵育培養(yǎng)物。4妄種4天后更換培養(yǎng)基，此后每周更換兩次。8-IO天后，通過輕輕吹吸細胞層上方的培養(yǎng)基使少突膠質細胞前體細胞選擇性分離。隨后將取出的細胞在12個小時期間內在未包被的塑料培養(yǎng)i上經(jīng)受兩次連續(xù)的預涂板，以使余留的星形細胞和d、神經(jīng)膠質細胞附著。將未附著以及松弛附著的細胞在包一皮有聚鳥苷酸的60mm塑料培養(yǎng)皿上、在化學成分明確的培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)，其中化學成分明確的培養(yǎng)基含有0.5%胎牛血清(FCS)、10pM月夷島素、100jug/ml4爭4失蛋白、0.5pig/ml白蛋白、2(iM孕酉同、100jiM腐胺、40ng/ml三石典甲&泉^^氛酉臾、40ng/mlL-甲a犬月泉素、40nMd-生物素和100nM氫4匕可的+>。不存在添力口的有絲分裂原時，10天之后這些傳代培養(yǎng)物產(chǎn)生含有超過90%Gal-C陽性細月包的幾乎同源的細月包群。參見Besnard等，/抓J.Dev.A^wmsc/.7(4):401-409,1989。為了將這些細胞維持在少突膠質細胞祖細胞(OPC)階段，并防止在產(chǎn)生突起前成熟前分化，將PDGFAA(10ng/ml)(大鼠)或PDGFBB(10ng/ml)和bFGF(對于大鼠10ng/ml，而對于小鼠20ng/ml)添加到i咅養(yǎng)基中。回收(withdrawal)有絲分裂原后，在24-72小時內發(fā)生OPC分化。Bogler等，Prac.A^"爿c"J.Sc/.87(16):6368-6372,1990;Durand等，五ikffi(9丄16(2):306-317,1997。將購自R&Dsystem的Sema6A-Fc蛋白也加入到化學成分明確的培養(yǎng)基中?？梢酝ㄟ^培養(yǎng)的少突膠質細胞的形態(tài)學復雜度測量少突膠質細萬包的成熟階4爻，如測量細"包的分形維凄t(FD)。文獻同上。圖5顯示，體外24小時和48小時后，來自S隱6A+A和Sema6AV-小鼠的純化的少突膠質細胞(通過相差觀察的或用抗-04抗體標記的)的FD定量。這顯示盡管絕大多數(shù)Sema6A+A少突膠質細胞在48小時后具有1.25的FD，但是大多數(shù)Sema6A-A少突膠質細胞僅具有1.05-1.15的FD(n=3)(圖5A)。體夕卜24小時后Sema6A+A和Sema6A-A少突月交質細月包的FD和48小時后Sema6A-A少突月交質細月包的FD相似(數(shù)據(jù)未顯示)。這些結果說明少突月交質細胞的分化在Sema6A-A小鼠中延遲了。培養(yǎng)72小時后，用抗-04抗體(分化中的少突膠質細胞的標志物)和抗-MBP抗體(已分化的少突膠質細胞的標志物)對少突膠質細胞免疫染色來測量少突膠質細胞的分化。作為第二抗體，使用針對04的FITC-扼合的抗體和針對MBP的CY3-輒合的抗體。在顯孩t鏡下，隨才幾選耳又視野來分析。72小時后，和野生型的相比，04十/MBP+細胞在Sema6AV-中的凄史目降{氐40.09%(凝:據(jù)未顯示)。體外凄t據(jù)支持這才羊一種結i侖，即少突力交質細力包的分化在缺少Sema6A的少突月交質細胞中延遲了。實施例4Sema6A-Fc促進體外髓鞘形成Sema6A在髓鞘形成中的作用通過使用Sema6A-Fc處理背根神經(jīng)節(jié)(DRG)神經(jīng)元和少突膠質細胞的共培養(yǎng)物，以及通過免疫組織化學和western印記測試髓鞘形成而在體外得以才金查。對于這些研究，有必要首先產(chǎn)生DRG神經(jīng)元和少突膠質細胞的原代培養(yǎng)物。將SpragueDawley大鼠E14-E17胚胎的背4艮神經(jīng)節(jié)涂布在包被有聚-L-賴氨酸(100jug/ml)的蓋4!t片上。它們在補充有B27(Invitrogen17504)的Neurobasal(對申纟至基石出)i咅養(yǎng)基(Invitrogen21103049)中生長2周。為了除去增殖中的神經(jīng)膠質細胞，用氟脫氧尿芬(20juM)沖擊(pulse)培養(yǎng)物兩次，持續(xù)1周。按實施例3中所述的制備少突月交質細胞。對于共培養(yǎng)研究，在有或沒有100-300ng/mlSema6A-Fc(R&Dsystems,1146-S6-025)時，將少突月交質纟田i包力口入到DRG3中經(jīng)元的懸滴培養(yǎng)物中。每3天更換培養(yǎng)基(補充有B27和100ng/mlNGF的Neurobasali咅養(yǎng)基)，并一尋tf鮮Sema6A畫Fc力口入到細月包中。為了鑒定髓鞘形成中的變化，用抗-MBP抗體標記3周齡的培養(yǎng)物，并進行SDS-PAGE,隨后進，western印記分沖斤。圖6顯示Sema6A-Fc蛋白的添加以劑量依賴性的形式增加髓鞘形成，從陰性對照至0.1(ig/ml以及乂人O.ljug/ml至0.3pg/mi。Western印記還顯示通過加入Sema6A-Fc(即0.1jag/ml至0.3^g/ml)，MBP的表達得以增加(數(shù)據(jù)未顯示)。因此，這些數(shù)據(jù)表明Sema6A多肽可以4足進或誘導髓鞘形成。實施例5Sema6A-Fc參與體內髓鞘再生暴露于雙環(huán)己酮草酰二腙(一種銅螯合劑)用作一種實驗模型，其中在小鼠腦大面積區(qū)域內可以可重復地i秀導嚴重的脫髓鞘。參見Matsushima等，5ra/"戶W/w/.11(1),107—116，2001。在々大食中用0.2%雙環(huán)己酮草酰二腙喂八周齡的小鼠，持續(xù)6周，這導致成熟的少突膠質細胞通過凋亡而死亡。細胞死亡后緊隨著小神經(jīng)力交質細力包募集和髓鞘吞噬。在雙環(huán)己酮草酰二腙處理終點，或甚至在持續(xù)的雙環(huán)己酮草酰二腙暴露之后，少突膠質細胞前體細胞開始增殖并侵入脫髓鞘化區(qū)域。如果結束雙環(huán)己酮草酰二腙處理，數(shù)周后發(fā)生幾乎完全的髓鞘再生。使用雙環(huán)己酮草酰二腙模型，可以分析脫髓鞘和髓鞘再生期間的Sema6A表達。雙環(huán)己酮草酰二腙暴露和隨后的終止之后，在雙環(huán)己酮草酰二腙-處理的小鼠胼胝體中觀察到Sema6A-表達少突"交質細力包的凄t目顯著增加，其始于施用雙環(huán)己酮草酰二腙3周后，在第4周時達到頂峰(+310%，n=3)，隨后在第6周時回到表達的基礎水平(圖7)。病變處的這些Sema6A表達細月包都呈olig-2P曰性。為了表征該Sema6A-表達上調，在處死動物一周前，將BrdU注射到雙環(huán)己酮草酰二腙-處理的動物中。一些Sema6A-表達少突膠質細胞是BrdU陽性的，這表明它們募集自在雙環(huán)己酮草酰二腙誘導的脫髓鞘期間分化的祖細胞。實施例6Sema6A可能在實驗性變態(tài)反應性腦脊髓炎(EAE)中發(fā)揮作用為了誘導EAE,使用了基于小鼠髓鞘少突膠質細胞糖蛋白(MOG)序列35-55的20個氨基酸的肽。將開始EAE的當天作為實驗的第一天，從第七天開始每日進行EAE的臨床評價，根據(jù)如下原則4十只于疾病《會小鼠^平分無疾病(0分)；尾部張力(tailtone)降^f氐(l分)；后"支無力或部分癱瘓(2分)；后"支完全癱瘓(3分)；前禾口后月支癱瘓(4分)；以及瀕臨死亡^)犬態(tài)(5分)。這些;平分反映脫髓鞘化疾病的進展。20個氨基酸的肽誘導EAE之后，Sema6A-A小鼠比對照動物顯現(xiàn)較少的行為缺陷。8611^6八-/-小鼠的平均分最大僅達到0.5分，而對照動物的平均分達到3.5分(數(shù)據(jù)未顯示)。只有25%的Sema6A-A小鼠顯現(xiàn)出疾病的任何跡象(數(shù)據(jù)未顯示)。這些實一驗表明Sema6A可在EAEi秀導中以及或i午更廣泛地自身-免疫病理學(如多發(fā)性硬化)中發(fā)揮作用。此外，對叢蛋白A4V-小鼠測試EAE誘導。參見Yamamoto等，/脫/畫畫/.DOI:10.1093/intimm/dxn006(2008年1月)。盡管861^6八-/-小鼠如上所述表現(xiàn)出EAE抗性，但叢蛋白A4-A小鼠表現(xiàn)出對EAE誘導增強的壽文感性。參見，~丄。此外，在Sema6AV-和叢蛋白A4-/-小鼠中均進行體外T細胞增殖分析。參見，同上。盡管叢蛋白A4-/-小鼠顯示出顯著增強的T細胞增殖，但Sema6A-A小鼠在T細胞增殖上未顯示出差異。參見，同上。這一信息表明Sema6A-/-小鼠中的EAE抗性可能不是由于Sema6AV-小鼠中的免疫應答異常。實施例7Sema6A多肽在人類多發(fā)性石更化病變組織中表達為了確定Sema6A的表達在人類MS病變組織和非病變組織中是否有差異，在人類MS組織(新皮層樣品)中通過標準原位雜交和免疫染色測量Sema6A的表達。MS組織獲自SalpStridre醫(yī)院的F6d6rationdeNeurologie(神經(jīng)病學耳關合會)，75013巴黎。進4亍標準原位雜交。組織通過浸在4。/。多聚甲醛中固定，并包埋入石蠟中。對于原位雜交，組織切片首先在二甲苯(3x5分鐘)中脫蠟，然后使切片連續(xù)通過遞減梯度的乙醇(100%、80%、70%、50%)以及最終水和PBS來進4亍重新水4匕。組織切片在4%PFA中后固定10分鐘，PBSpH7.4沖洗，在37°C下用蛋白酶K處理15分鐘(50jug/ml;Invitrogen,Carlsbad，CA)，在4%PFA中后固定5分鐘，PBS中沖洗，乙?；?，然后通過連續(xù)的乙醇浴(50%、70%、80%、100%)脫水。切片在68。c下于雜交緩沖液中孵育2小時，如實施例1所示的處理。切片在室溫下于雜交緩沖液(50。/。甲酰胺、5xSSC、lxDenhardt's、250jig/ml酵母t固A和500pg/ml鯡魚精子，pH7.4)中孵育2小時，然后將組織切片和洋地黃毒苷-標記的Sema6A核糖核酸探針(0.5ng/jil)在72。C下雜交過夜。雜交后，切片在2xSSC中72。c下漂洗2小時，并在室溫下在含有10。/q正常山羊血清(NGS)的0.1MTris，pH7.5,0.15MNaCl(Bl)中去于閉1小時。去于閉后，在室溫下，將切片和石咸性石壽酸酶(1:5000;RocheDiagnostics)舉厄合的抗-洋地黃毒苷抗體在含有1%NGS的Bl中孵育過夜。再次沖洗后，用氯化硝基四氮唑藍(NBT)(337.5pg/ml)和5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸酯(BCIP)(175嗎/ml)(RocheDiagnostics)檢測堿性磷酸酶活性。如圖8A和8B所示，Sema6AmRNA廣泛表達于人類MS病變組織中，^旦不在非病變組織中表達。還進行MS病變組織和非病變組織的免疫染色來顯示人類MS病變組織高度表達Sema6A。在室溫(RT)下在含有0.2%明月交(Prolabo，F(xiàn)ontenay-sous-Bois,France)禾口0.25%TritonX-100的PBS(PBS-G-T)中封閉組織切片1小時，然后在RT下用來自R&Dsystems(Minneapolis,MN)的抗-人類Sema6A抗體卵孚育過夜。然后在室溫下用稀釋于PBS-G-T中的CY3-軛合的抗體(JacksonImmimoresearch)將切片孵育1小時。在PBS-G國T(3xl0分4中)中漂洗后，^!尋切片裝載在Mowiol(Calbiochem/Merck,Carlstadt，Germany)中。如圖8C所示，MS病變組織顯示高水平的Sema6A表達，而非病變組織表現(xiàn)4艮少或沒有Sema6A表達(圖8A和8B)。為了確定Sema6A表達作為生物標志物的可能用途，也在非MS患者的組織當中測量了Sema6A表達，Sema6A在非-MS患者中不表達(數(shù)據(jù)未顯示)。眾所周知血液細胞(如樹突細胞)表達Sema6A。參見,Gautier等,/附wwwo/7"仇Dz's.168(2):453-465(2006)。樹突細胞也被認為出現(xiàn)在腦脊液(CSF)中。參見Pashenkov等，5ra/"124(3):480-492(2001)?？紤]到Sema6A在樹突細胞上的表達以及MS病變組織和非病變組織間的差異Sema6A表達，從待測試MS疾病狀態(tài)的人收集試樣如組織(如皮膚組織)、或體液(如血液或CSF)。通過如ELISA測試試樣的Sema6A表達。液體中存在特定水平時可指示可能的MS或患MS的可能性。在其他實施方式中，這種分析可用于測量具體的MS治療的有效性。如果血清或CSF呈現(xiàn)Sema6A表達，則被抽取血清的人疑似有MS?？蛇x擇地，可以濃縮來自收集試樣的樹突細胞，然后試樣中的Sema6A可以使用如ELISA測量。根據(jù)這種方法，Sema6A4全測可用作事實上的或:;替在的MS疾病的標志物。80實施例8Sema6A多月太和叢蛋白-A2多月太才目互作用為了確定Sema6A多肽和叢蛋白-A2多肽間的相互作用，將重組Fc-二聚化的AP-標簽Sema6A胞外結構域(細胞外結構域)(AP-Sema6Aect-Fc)加入到表達全長小鼠叢蛋白-A2多肽的小鼠成纖維細胞系細胞(L細胞)中，如Suto等，/iV^msc/.25:3628-3637(2005)中所述。為了制備重組Sema6A胞外結構域，將小鼠Sema6A的月包外結構域的相應序列(Sema6Aect;氨基酸18-648)進4亍擴增并插入到Aptag-4載體(由p合佛醫(yī)學院的Dr.J.Flanagan惠贈，Boston,MA)(AP-Sema6Aect)中。參見Flanagan等，E"矽mo/327:17-35(2000)。為了將重組蛋白二聚化，將編碼AP-Sema6Aect的片|殳插入到pEF畫Fc(AP-Sema6Aect-Fc;AP-Sema6Bect-Fc;pEF-Fc表達載體由大卩反大學的Dr.S.Nagata惠贈)中。利用LipofectaminePlus(Invitrogen,Carlsbad,CA)用pEF-AP-Sema6Aect-Fc(pCAGGS表達載體由大阪大學的Dr,J。Miyazaki惠贈)轉染人類胚胎腎293T(HEK293T)細胞，并在含有10%胎牛血清(FBS)的DMEM中，在5%C02中37°C下培養(yǎng)5-7天。收集i咅養(yǎng)物上清液并用0.22(am濾器過濾。為了產(chǎn)生叢蛋白-A2表達L細胞，使編碼全長小鼠叢蛋白-A2蛋白的cDNA側翼帶有小鼠Sema3A的信號序列，在N-端加入myc-標簽(GGEQKLISEEDL:SEQIDNO:17)，然后連4妄至表達載體pCAGGS中。才艮才居石粦酉臾4丐法(Chen,口Okayama，Tkfo/.Ce〃7:2745-2752,1987)用叢蛋白-A2表達載體和pST-neoB對L纟田胞共壽爭染(Katoh等，CW/12:575-580，1987)，并用GENETICIN(GIBCO)篩選。用DH10培養(yǎng)基培養(yǎng)L細胞。使用抗-myc抗體9E10通過免疫染色分離穩(wěn)定表達叢蛋白-A2蛋白的細胞系。參見Evan等，她/.Ce〃腸/.5:3610-3616,1985。為了顯示Sema6A對叢蛋白-A2的結合，用含有1%FBS和AP-Sema6Aect-Fc重組蛋白(培養(yǎng)上清液)、具有0.5mg/mlBSA、0.1%NaN3和20mMHEPES，pH7.0(HBHA溶液)的250jilHBSS在冰上將穩(wěn)定表達全長小鼠叢蛋白-A2蛋白的L-細胞孵育1小時，如Flanagan和Leder,Ce〃63:185-194(1990)中所述。除去HBHA溶液之后，用補充有0.1%TritonX-100的250jal10mMTris-HC1,pH8.0處理細胞，從而溶解結合至細胞表面的重組蛋白。將細胞裂解物進行比色分析來測量AP活性，如Flanagan和Leder，CW/63:185-194(1990)以及Flanagan等，Mef/zoA327:17-35(2000)中所述。顯示Fc-二聚化的重組AP-標簽Sema6A胞外結構域和叢蛋白-A2表達L細胞以高親和力結合。Sema6A和叢蛋白-A2間相互作用的解離常數(shù)(Kd)值是3.21nM(數(shù)據(jù)未顯示)。該Kd值同Sema6A和叢蛋白-A4間相互作用的Kd值具有可比性，即3.56nM)，如Suto等，J.7VeMmsc/.25:3628-3637(2005)中所述。實施例9叢蛋白-A2中的單突變可除去對Sema6A的結合為了確定叢蛋白-A2/叢蛋白-A4對Sema6A的結合位點，對C57BL6/J突變小鼠(即NMF454)進4亍沖全測。NMF454小鼠(由DrS.Ackerman惠贈，JacksonLabs,BarHarbor,USA)是在C57BL6/J小鼠的隱性、基因組-范圍N-乙基N-亞硝基脲(ENU)的誘變篩選中鑒別的。NML454突變小鼠的組織學分析揭示小腦細胞過多的分子層顯現(xiàn)出同叢蛋白-A2和Sema6A無效小鼠的驚人相似，Renaud等，胸,7VeMmc/ewce,出版中(2008)。為了確定NMF454突變是否發(fā)生在叢蛋白-A2或Sema6A基因中，進行了使用微衛(wèi)星標志物的基因定位(genemapping)。顯示NMF454表型的F2后代(n=ll)是從譜圖交叉(C57BL6/JxBALB/cBy)通過Fl子代互交產(chǎn)生的，然后對受影響的F2后代進行組織學鑒定。然后用分別同叢蛋白-A2和Sema6A基因緊密連鎖的多態(tài)孩i衛(wèi)星標志物DlMitl55和D18Mitl78對F2后代確定基因型。沒有發(fā)現(xiàn)同D18Mitl78的連鎖(Z2=1.2;P>0.5)。然而，觀察到了和DlMit155的緊密連鎖(Z2=33.0;PO.0001)。這一結果，結合表型分析，表明NMF454突變位于叢蛋白-A2基因(Plxna2)中。為了確定突變的確切位置，在小腦和新皮層中進行叢蛋白-A2表達的western印^己分計斤。western印i己分并斤揭示一條約250kDa的帶出現(xiàn)在NMF454純合突變小鼠(n-2)、野生型和NMF454雜合對照(n=2)中，但是沒有出現(xiàn)在規(guī)則叢蛋白-A2敲除系中，如圖9A所示。這一H據(jù)表明ENU突變不造成無效等位基因或截短的叢蛋白-A2蛋白。為了進一步定位突變，從NMF454純合突變體(n=3)以及野生型對照(n=2)的基因組DNA中對叢蛋白-A2基因(Plxna2)的所有外顯子完全測序。這揭示1187位置的胞嘧啶被腺嘌呤的單核苷酸取代導致丙氨酸(396)被谷氨酸殘基替換。此外，脊推動物叢蛋白-A序列的比對揭示位于腦信號蛋白結構域的丙氨酸在Sema6A受體(即叢蛋白-A2和叢蛋白-A4蛋白)中是進化保守的(圖9B)。然而，該比對顯示丙氨酸(396)在叢蛋白-Al和叢蛋白-A3中是不存在的，不認為叢蛋白-Al和叢蛋白-A3結合Sema6A(圖9B)。參見Suto等，J.A^wra"/.25:3628(2005);還參見Suto等，7V",廳53:535(2007)。為了確定在NMF454純合突變體中的丙氨酸(396)突變是否干擾叢蛋白-A2對Sema6A的結合，使用QuikChangeIIXL定位誘變試劑盒(Stratagene)進行定向誘變，將相同的胞嘧啶1187點突變(GCG變成GAG)引入?yún)驳鞍?A2cDNA中。用于i秀變的引物如下正向引物(SEQIDNO:18):5'-GCAGTGCACCAAGGAGCCTGTCCCAATCG-3'反向引物(SEQIDNO:19):5，-CGATTGGGACAGGCTCCTTGGTGCACTGC-3'對突變構建體(叢蛋白-A2A396E)進行完全測序，從而確認只有胞嘧，定1187被腺嘌呤替換。然后在COS7細胞中表達這種叢蛋白-A2A396EcDNA，并使用和實施例8中所示的相同方法測試其結合Sema6A-AP的能力。參見Suto等，A^wra"53:5354(2007)。結合分4斤的結果顯示Sema6A-AP和表達野生型叢蛋白-A2的COS7細胞結合非常強烈(圖9C)。然而，Sema6A-AP根本不結合表達叢蛋白-A2A396E的細胞(圖9D),盡管野生型和突變蛋白兩者看上去表達水平相似。權利要求1.一種用于促進少突膠質細胞增殖、分化或存活的方法，所述方法包括用有效量的含有分離的腦信號蛋白6A(“Sema6A”)多肽的組合物接觸所述少突膠質細胞。2.—種用于促進少突膠質細胞-介導的神經(jīng)元髓鞘形成的方法，所述方法包括用有效量的含有分離的Sema6A多肽的組合物4妾觸神經(jīng)元和少突月交質細月包的混合物。3.—種用于在哺乳動物中促進少突力交質細胞增殖、分化或存活的方法，所述方法包纟舌向有此需求的哺乳動物施用有效量的含有分離的Sema6A多肽的組合物。4.一種用于在哺乳動物中促進一申經(jīng)元髓鞘形成的方法，所述方法包括向有此需求的哺乳動物施用有效量的含有分離的Sema6A多月太的鄉(xiāng)且合物。5.—種用于在哺乳動物中治療髓鞘形成障石竽或脫髓鞘相關的疾病、病癥或損傷的方法，所述方法包i舌向有jt匕需求的哺乳動物施用治療有效量的含有分離的Sema6A多肽的組合物。6.—種用于在哺乳動物中治療少突月交質細月包死亡或在夾乏分4匕相關的疾病、病癥或損傷的方法，所述方法包纟舌向有》b需求的哺乳動物施用治療有步文量的含有分離的Sema6A多肽的組合物。7.—種用于在哺乳動物中治療涉及骨逸鞘A皮壞的疾病、病癥或損傷的方法，所述方法包括施用治療有效量的含有分離的Sema6A多肽的組合物。8.—種用于在哺乳動物中促進少突膠質細胞增殖、分化或存活的方法，所述方法包括向有此需求的哺乳動物施用有效量的含有分離的多聚核普酸的組合物，所述多聚核香酸編碼Sema6A多肽。9.一種用于在哺乳動物中促進神經(jīng)元髓鞘形成的方法，所迷方法包括向有此需求的哺乳動物施用有效量的含有分離的多聚核香酸的組合物，所述多聚核苷酸編碼Sema6A多肽。10.—種用于在哺乳動物中治療髓鞘形成障」礙或脫髓鞘相關的疾病、病癥或損傷的方法，所述方法包4舌向有此需求的哺乳動物施用治療有效量的含有分離的多聚核苷酸的組合物，所述多聚核苗-酸編碼Sema6A多肽。11.一種用于在哺乳動物中治療少突膠質細胞死亡或缺乏分化相關的疾病、病癥或損傷的方法，所述方法包4舌向有oH:需求的哺乳動物施用治療有效量的含有分離的多聚核苷酸的組合物，所述多聚核苷酸編碼Sema6A多肽。12.—種用于在哺乳動物中治療涉及ft鞘-皮壞的疾病、病癥或損傷的方法，所述方法包括施用治療有效量的含有分離的多聚核苦酸的組合物，所述多聚核苷酸編碼Sema6A多肽。13.沖艮據(jù)—又利要求1-12中4壬一項所述的方法，其中所述Sema6A多肽和叢蛋白-A2多肽結合。14.根據(jù)權利要求1-13中任一項所述的方法，其中所述Sema6A多肽包括與參考氨基酸序列至少80%相同的氨基酸序列，所述參考氨基酸序列選自由以下組成的組i.SEQIDNO:2的56至417;ii.SEQIDNO:2的a至417;iii.SEQIDNO:2的b至417;iv.SEQIDNO:2的1至417;v.SEQIDNO:2的56至c;vi.SEQIDNO:2的a至c;vii.SEQIDNO:2的b至c;viii.SEQIDNO:2的1至c;ix.SEQIDNO:6的56至c';X.SEQIDNO:6的a至c';xi.SEQIDNO:6的b至c';xii.SEQIDNO:6的1至c';xiii.SEQIDNO:2的56至d;xiv.SEQIDNO:2的a至d;XV.SEQIDNO:2的b至d;xvi.SEQIDNO:2的1至d;xvii.SEQIDNO:6的56至d';xviii.SEQIDNO:6的a至d';xix.SEQIDNO:6的b至d';XX.SEQIDNO:6的1至d';xxi,SEQIDNO:2的56至e;xxii.SEQIDNO:2的a至e;xxiii.SEQIDNO:2的b至e;xxiv.SEQIDNO:2的1至e;XXV.SEQIDNO:6的56至e';xxvi.SEQIDNO:6的a至e';xxvii.SEQIDNO:6的b至e';xxviii.SEQIDNO:6的1至e';xxix.SEQIDNO:8的56至e";XXX.SEQIDNO:8的a至e";xxxi.SEQIDNO:8的b至e";xxxii.SEQIDNO:8的1至e";xxxiii.SEQIDNO:4的56至e"';xxxiv.SEQIDNO:4的a至e"';XXXV.SEQIDNO:6的b至e"';xxxvi.SEQIDNO:8的1至e"';xxxvii.SEQIDNO:2的56至f;xxxviii.SEQIDNO:2的a至f;xxxix.SEQIDNO:2的b至f;xl.SEQIDNO:2的1至f;xli.SEQIDNO:6的56至f;xlii.SEQIDNO:6的a至f;xliii.SEQIDNO:6的b至f;xliv.SEQIDNO:6的1至f;xlv。SEQIDNO:8的56至f';xlvi.SEQIDNO:8的a至f';xlvii.SEQIDNO:8的b至f';xlviii.SEQIDNO:8的1至f';xlix.SEQIDNO:4的56至f";SEQIDNO:4的a至f";li.SEQIDNO:4的b至f";m.SEQIDNO:4的1至f";liii.SEQIDNO:2的56至1000;liv.SEQIDNO:2的a至1000;Iv.SEQIDNO:2的b至1000;lvi.SEQIDNO:2的1至1000;lvii.SEQIDNO:4的56至1047;lviii.SEQIDNO:4的a至1047;lix.SEQIDNO:4的b至1047;lx.SEQIDNO:4的1至1047;bd.SEQIDNO:6的56至971;lxii.SEQIDNO:6的a至971;lxiii.SEQIDNO:6的b至97"lxiv.SEQIDNO:6的1至971;lxv.SEQIDNO:8的56至975;lxvi.SEQIDNO:8的a至975;lxvii.SEQIDNO:8的b至975;lxviii,SEQIDNO:8的1至975;lxix.SEQIDNO:2的19至417;lxx.SEQIDNO:2的19至472;bod.SEQIDNO:2的19至551;lxxii.SEQIDNO:6的19至492;lxxiii.SEQIDNO:2的19至647;lxxiv.SEQIDNO:6的19至588;lxxv.SEQIDNO:8的19至592;lxxvi-SEQIDNO:4的19至664;lxxvii.SEQIDNO:2的56至472;lxxviii.SEQIDNO:2的56至551;lxxix.SEQIDNO:6的56至492;lxxx.SEQIDNO:2的56至647;lxxxi.SEQIDNO:6的56至588;lxxxii.SEQIDNO:8的56至592;lxxxiii.SEQIDNO:4的56至664;lxxxiv.SEQIDNO:2的1至649;lxxxv.SEQIDNO:6的1至590;lxxxvi.SEQIDNO:8的1至594;lxxxvii.SEQIDNO:4的1至666;lxxxviii.SEQIDNO:2的18至703;lxxxix.SEQIDNO:6的18至644;xc.SEQIDNO:8的18至648;xci.SEQIDNO:4的18至720;xcii.SEQIDNO:2的1至648;xciii.SEQIDNO:6的1至589;xdv.SEQIDNO:8的1至593;xcv.SEQIDNO:4的1至665;以及xcvi.所述氨基酸序列中兩種或更多種的組合；其中a是24至56之間的任意整數(shù)、b是19至21之間的任意整數(shù)、c是472至512之間的任意整數(shù)、c'是418至453之間的任意整數(shù)、d是514至569之間的任意整數(shù)、d'是455至510之間的任意整數(shù)、e是570至650之間的任意整數(shù)、e'是511至591之間的任意整數(shù)、e"是570至595之間的任意整數(shù)以及e'"是570至667之間的任意整數(shù)、f是647至671之間的任意整數(shù)、f是588至612之間的任意整數(shù)、f'是592至616之間的任意整數(shù)以及f"是664至688之間的任意整數(shù)。15.根據(jù)權利要求14所述的方法，其中所述氨基酸序列和所述參考氨基酸序列至少90°/。相同。16.根據(jù)權利要求14或15所述的方法，其中所述氨基酸序列和所述參考氨基酸序列相同。17.根據(jù)權利要求1-16中任一項所述的方法，其中所述Sema6A多肽是環(huán)肽。18.根據(jù)權利要求17所述的方法，其中所述環(huán)肽包括連接至所述殘基。19.根據(jù)權利要求17所述的方法，其中所述環(huán)肽包括連接至所述環(huán)肽N-端和C-端的半胱氨酸殘基，其中所述N-端半胱氨酸殘基是乙酰化的。20.根據(jù)權利要求18或19所述的方法，其中所述C-端的半胱氨酸連4妄有NH2部分。21.根據(jù)權利要求1-0中任一項所述的方法，其中所述多肽連接至非Sema6A部分。22.根據(jù)權利要求21所述的方法，其中所述非Sema6A部分是融合至所述Sema6A多月太的異源多肽。23.根據(jù)權利要求22所述的方法，其中所述異源多肽選自由免疫球蛋白多肽或其片段、血清白蛋白多肽或其片段、靶向多肽、沖艮道分子多肽和《更于純化的多肽以及所述異源多肽中兩種或更多種的《且合《且成的組。24.根據(jù)權利要求23所述的方法，其中所述異源多肽選自由c-myc、人類胎盤堿性磷酸酶、免疫球蛋白鉸鏈和Fc區(qū)以及所述異源多肽中兩種或更多種的組合組成的組。25.根據(jù)權利要求21所述的方法，其中所述非Sema6A部分是軛合至Sema6A多肽的聚合物。26.根據(jù)權利要求25所述的方法，其中所述聚合物選自由聚亞烷基二醇、糖聚合物和多肽組成的組。27.根據(jù)權利要求26所述的方法，其中所述聚合物是聚亞烷基二醇。28.根據(jù)權利要求27所述的方法，其中所述聚亞烷基二醇是聚乙二醇(PEG)。29.根據(jù)權利要求25所迷的方法，其中所述Sema6A多肽軛合至1、2、3或4個聚合物。30.根據(jù)權利要求25-29中任一項所述的方法，其中所述聚合物的總分子量從5,000Da至100,000Da。31.根據(jù)權利要求3-13中任一項所述的方法，其中所述哺乳動物已一皮it斷患有涉及脫ft鞘、骨逸鞘形成障」礙或神經(jīng)退4于性的疾病、病癥或損傷。32.根據(jù)權利要求31所述的方法，其中所述疾病、病癥或損傷選自由以下組成的組多發(fā)性硬化(MS)、進行性多灶性白質腦病(PML)、腦脊髓炎(EPL)、腦橋中央骨逸鞘卩容解癥(CPM)、腎上腺腦白質營養(yǎng)不良、亞歷山大病、佩-梅病(PMZ)、沃勒變性、視神經(jīng)炎、橫貫性脊髓炎、肌萎縮側索硬化(ALS)、亨廷頓病、阿爾茨海默病、帕金森病、脊髓損傷、創(chuàng)傷性腦損傷、輻射后損傷、化療的神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥、中風、急性缺血性視神經(jīng)病變、維生素E缺乏、？瓜立性維生素E缺乏綜合征、AR、巴_科綜合征、胼胝體脫髓鞘性腦病綜合征、異染性腦白質營養(yǎng)不良、三叉碎申經(jīng)痛和貝爾麻痹。33.根據(jù)權利要求31所述的方法，其中所述疾病、病癥或損傷是多發(fā)性硬化(MS)。34.根據(jù)權利要求3-33中任一項所述的方法，其中所述組合物是通過快速推注或慢速輸注施用的。35.才艮據(jù)4又利要求34所述的方法，其中所述組合物直4妻施用至中樞神經(jīng)系統(tǒng)。36.根據(jù)權利要求35所述的方法，其中所述組合物直接施用至MS的'隄性病變處。37.根據(jù)權利要求1或2中任一項所述的方法，其中所述接觸包括(a)用多聚核苷酸轉染所述少突膠質細胞，其中所述多聚核苷酸通過可才喿作的連4妄至表達控制序列來編碼所述Sema6A多肽，以及(b)允許所述Sema6A多肽的表達。38.根據(jù)權利要求8-13中任一項所述的方法，其中所述多聚核苦酸通過可才乘作的連^妾至表達4空制序列來編石馬所述Sema6A多肽。39.根據(jù)權利要求38所述的方法，其中所述多聚核苷酸是作為表達載體來施用的。40.根據(jù)權利要求39所述的方法，其中所述表達載體是病毒載體。41.根據(jù)權利要求8-13中任一項所述的方法，其中所述施用包括(a)提供包含所述多聚核苷酸的培養(yǎng)的宿主細胞，其中所述培養(yǎng)的宿主細胞表達所述Sema6A多肽；以及(b)將所述培養(yǎng)的宿主細胞引入所述哺乳動物中，以z使所述Sema6A多肽在所述p甫乳動物中表達。42.根據(jù)權利要求41所述的方法，其中將所述培養(yǎng)的宿主細胞引入所述哺乳動物的神經(jīng)系統(tǒng)疾病、病癥或損傷^立點或其附近。43.根據(jù)權利要求41或42所述的方法，其中所述培養(yǎng)的宿主細胞是通過這樣的方法制備的，所述方法包括(a)用權利要求37或38的多聚核苷酸或纟又利要求39或40的載體轉化或轉染受者宿主細胞，以及(b)培養(yǎng)所述轉化的或轉染的宿主細胞。44.根據(jù)權利要求41-43中任一項所述的方法，其中所述培養(yǎng)的宿主細胞來自4寺治療的p甫乳動物。45.根據(jù)權利要求3-44中任一項所述的方法，其中所述Sema6A多月太以這才羊一種量表達，所述量足以在4申經(jīng)系統(tǒng)疾病、病癥或損傷位點或其附近降低對少突膠質細胞增殖、分化或存活的抑制。46.根據(jù)權利要求3-45中任一項所述的方法，其中所述Sema6A多肽以這樣一種量表達，所述量足以在神經(jīng)系統(tǒng)疾病、病癥或損傷位點或其附近降^^對神經(jīng)元髓鞘形成的抑制。47.根據(jù)權利要求40所述的方法，其中所述病毒載體選自由腺病毒載體、曱病毒載體、腸道病毒載體、瘟病毒載體、慢病毒載體、桿狀病毒載體、皰滲病毒載體、乳多空病毒載體以及痘病毒載體組成的組。48.根據(jù)權利要求47所述的方法，其中所述皰滲病毒載體選自由單純皰滲病毒載體禾口Epstein-Barr病毒載體纟且成的纟且。49.根據(jù)權利要求47所述的方法，其中所述痘病毒栽體是痘苗病毒載體。50.根據(jù)權利要求39、40或47-49中任一項所述的方法，其中所述載體是通過選自由以下組成的組的途徑來施用的局部施用、目艮內施用、腸胃外施用、鞘內施用、硬膜下施用和皮下施用。全文摘要本發(fā)明提供了通過施用Sema6A多肽而治療涉及脫髓鞘和髓鞘形成障礙的疾病、病癥或損傷(包括多發(fā)性硬化)的方法。文檔編號A61K38/17GK101631559SQ200880003680公開日2010年1月20日申請日期2008年2月4日優(yōu)先權日2007年2月2日發(fā)明者弗雷德里克·伯納德,沙·米,阿萊恩·舍多塔爾申請人:比奧根艾迪克Ma公司;國家科學研究院;皮埃爾與瑪麗居里大學