專利名稱：：以il-6拮抗劑作為有效成分治療慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的制作方法以IL-6拮抗劑作為有效成分治療慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎本申請是申請曰1995年6月7曰，申請?zhí)?5196077.6的同名專利申請的分案申請。本發(fā)明涉及慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療，或含有白介素-6拮抗劑作為有效成分的滑膜細(xì)胞生長抑制劑。
背景技術(shù)：
：慢性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎為一系統(tǒng)性的慢性炎性疾病，該疾病主要是由于結(jié)締組織包括滑膜組織在關(guān)節(jié)內(nèi)異常生長所致(Melnyketal,，ArthritisRheum.33:493-500，1990)。在慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人的關(guān)節(jié)可以看到明顯的滑膜細(xì)胞增殖，如由于滑膜細(xì)胞異常生長所致的多層結(jié)構(gòu)形成(血管蓊形成)，滑膜細(xì)胞浸入軟骨及骨組織，滑膜內(nèi)血管形成，炎癥細(xì)胞如淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞的浸潤。已有報道認(rèn)為慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)理與遺傳，細(xì)菌感染及各種細(xì)胞因子和生長因子有關(guān)，但其確切的發(fā)病機(jī)理仍未闡明。近年來，在慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人的滑膜及滑膜液中已檢測出若干細(xì)胞因子及生長因子，其中包括有白介素-1(IL-1)，白介素-8(IL-8)，腫瘤壞死因子a(TNFa)，轉(zhuǎn)化生長因子p(TGFp)，成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)及血小板衍化生長因子(PDGF)、(Nourietal.,Clin.Exp.Immunol.55:295-302，1984;Thorntonetal.,Clin.Exp.Immunol86:79-86,1991;Saxne，etal.，ArthritisRheum，31:1041-1045，1988;Seitzetal.，J,Clin.Invest.87:463-469，1991;Ufyatisetal.，J".Immunol.143:1142-1148，1989;Melnyketal.，ArthritisRheum.33:493-500，1990)?，F(xiàn)認(rèn)為IL-l，TNFa及PDGF為非常強(qiáng)的滑膜細(xì)胞生長因子(Thorntonetal.，Clin.Exp.Immunol.86:79-86,1991;Ufyatisetal.，JImmunol.143:1142-1148，蘭；Gitteretal.，Immunology66:196—200，1989)。另夕KA^通過IL-1及TNF刺激可^Hfc^膜細(xì)胞白^t-6(IL-6)的生成(ItoelaI"ArthmitisRheum.35:1197-1201，1992)。IL_6為一細(xì)胞因子，又被稱為B細(xì)胞刺激因子2或干擾素P2。起初由于IL-6激活B淋巴細(xì)胞所以認(rèn)為其是一種分化因子(Hirano，T.etal.，Nature324，73-76;1986),以后發(fā)現(xiàn)IL-6為一多功能細(xì)胞因子，其可以影響多種細(xì)胞的功能(Akira，S.etal，Adv，inImmunology54，1-78，1993)。IL_6活性的發(fā)揮需要有兩種功能不同的細(xì)胞膜分子。其中之一為IL-6受體(IL-6R)，分了子量約為80KD,其可特異性地與IL_6結(jié)合。IL-6R主要是以與細(xì)胞膜結(jié)合的形式存在，其在細(xì)胞膜上表達(dá)并且滲透到細(xì)胞膜，但也能以溶解的IL-6R形式存在(SIL_6R),其主要是由細(xì)胞外的部分組成。另一個蛋白質(zhì)是gp130，分子量約為130KD,該蛋白質(zhì)不與配體結(jié)合，其功能主要是介導(dǎo)信號傳導(dǎo)。IL-6與IL-6R形成復(fù)合物IL-6/IL-6R,該復(fù)合物再與另一個膜蛋白gp130結(jié)合從而引發(fā)IL-6對細(xì)胞的生物學(xué)活性(Tegaetal.，J.Exp.Med.196:967，1987)。已有報道發(fā)現(xiàn)慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人的血清及滑膜液中含有過量的白介素-6(IL_6)及可溶性的IL-6受體(SIL-6R)(Houssiauetal"ArthritisRhe亂31:784-788，1988;Hiranoetal"Eur.J,Iin咖iiol，18:1797-1801,1988;Yoshiokaetal"Jap仏J.Rheumatol,inpress),而且在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動物模型的實(shí)驗(yàn)中也得到類似結(jié)果(TaKaietal"ArthritisRheum.32:594-600，1989;Leistenetal.，Clin.Immunol.Imimmopathol.56:108-115,1990)，這些結(jié)果表明IL-6與慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有關(guān).然而，日本未審查的專利公開號為4-89433披露了可強(qiáng)烈促進(jìn)IL-6生成的肽類可以有效的治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。扭gaki等射認(rèn)為IL-6可減慢慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人滑膜細(xì)胞的生長，所以IL-6有抑制滑膜細(xì)胞生長的功能(ClinicalImmunology,22:880-887，19卯)。這樣，有關(guān)IL-6與慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎關(guān)系上存在相互矛盾的報道，并且該關(guān)系目前還不清楚.最近，Wendling等人報道對慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人服用抗-IL-6抗體可暫時緩解臨床及生物學(xué)癥狀，同時血清中IL-6的水平也升高(J.Rheu鵬atol.20;259-262,1993)。這些報告對于IL-6對慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞的生長是有促進(jìn)作用還是有抑制作用，有關(guān)這方面沒有任何數(shù)據(jù)，所以現(xiàn)在還不清楚IL-6對慢性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的病人的滑膜細(xì)胞是否有直接作用。本發(fā)明披露抗炎癥的甾體類制劑如皮質(zhì)類固醇已被用來治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，但由于持續(xù)使用該類藥物可引發(fā)如皮膚損害及抑制腎上腺皮質(zhì)功能等所不希望的副作用，所以一直在尋找副作用較小的藥物。本發(fā)明的目的是提供一種沒有上述缺點(diǎn)的新的治療慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法。更進(jìn)一步地講本發(fā)明提供了一種藥物組合物，該組合物可以抑辨慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞的異常增殖，其有效成分為白介素-6的拮抗刻。本發(fā)明者就IL-6對于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞的作用進(jìn)行了細(xì)致的研究，研究中發(fā)現(xiàn)WL-6本身對慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞的生長并無寐逸作根，而對IL-6以外的另一個因子的研究表明雖然IL-6本身減滑騰細(xì)胞生長無促進(jìn)作用，但在IL-6與可溶性的IL-6R同時存在時可見到其強(qiáng)烈的促進(jìn)滑膜細(xì)胞增殖作用，而且該滑膜細(xì)胞的增殖作用可被加入抑制IL-6活性的拮抗劑如IL-6抗體或IL-6R抗體所抑制.本發(fā)明正是基于上述的發(fā)現(xiàn)而完成的。換句話講，本發(fā)明涉及一種治療慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物組合物，該組合物也括以一種1L_6拮抗劑作為有效成分。更具體地講本發(fā)明涉尿治療慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物組合物，該組合物的有效成分為IL-6拮抗刺并可抑制滑膜細(xì)胞的異常增殖。本發(fā)明還涉及其有效成分為iL-6拮抗劑的滑膜細(xì)胞生長抑制劑。附圖的筒要說明圖1所示的為在HL-6或SIL-6R單獨(dú)及IL-6與SIL-6R同時存在的條件下滑膜細(xì)胞攝入胸腺嘧啶3H的情況。恩2所示為在IL_lp和SIL-6R同時存在的條件下IL-6抗體或IL-6R抗體對滑膜細(xì)胞攝入胸腺嘧啶SH的影響，圖3所示為在IL-6及IL-6R同時存在的情況下IL-6抗體或IL-6R抗體對滑膜細(xì)胞攝入胸腺嘧啶SH的影響。圖4所示為IL-6R抗體對小鼠膠原所致關(guān)節(jié)炎模型發(fā)生的抑制作用。圖5所示為關(guān)節(jié)炎小鼠血清中抗膠原抗體的水平。圖6所示為一膠原所致關(guān)節(jié)炎小鼠后爪關(guān)節(jié)的組織病理學(xué)檢查的照片，(勁)為服用IL-6受體抗體組小鼠的照片，(b)為服用對照抗體組小鼠的照片。在服用IL-6受體抗體組中，肉芽組織對軟骨及骨的浸潤(慢性增殖性滑膜炎)受到明顯的抑制。本發(fā)明的詳細(xì)說明根據(jù)本發(fā)明，治療慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物組合物是當(dāng)將治療慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物組合物給病人服用后，可抑制關(guān)節(jié)內(nèi)滑膜細(xì)胞的生長，并且對癥狀有緩解及治療作用的藥物。根據(jù)本發(fā)明，所使用的IL-6拮抗劑可為任何一種物質(zhì)，只要其能阻斷IL-6的信號傳導(dǎo)并抑制IL-6的生物學(xué)活性。IL-6拮抗劑包括IL-6抗體，IL-6R抗體，gp130抗體，修飾過的IL-6,反義IL-6R及IL_6或IL-6R的部分肽類.根據(jù)本發(fā)明，用作拮抗劑的抗體，如IL-6抗體，IL-6R抗體或gp130抗體可以是任何一種衍生物或類型(單克隆，多克隆)，但是以由嗜乳類動物所制得的單克隆抗體為最佳。這些抗體可與1L-6，IL-6R或gp130結(jié)合從而抑制IL-6與IL-6R或IL-6R與gp130之何的結(jié)合，并阻斷IL-6的信號傳導(dǎo)，抑制IL-6的生物學(xué)活性，對于產(chǎn)生單克隆抗體細(xì)胞的動物種類并無特殊的限制，只要是哺乳類動物，人類抗體或者人類以外其它哺乳類動物所產(chǎn)生的抗體都可以使用.對于除了人類以外的哺乳類動物所產(chǎn)生的單克隆抗體最好是用家兔或鼠來制備，罔為上迷的單克隆抗體容易制備，對于鼠類沒有特殊的限制，但最好是小鼠，大鼠及豚鼠。IL-6抗體的實(shí)例包括有MH166(Matsudaetal.，Eur.J.Im則nol.18:951-956，l卿)及SK2抗體(Satoetal"Journalforthe21STGeneralMeetingofthe擬panImmunologyAssociation,21:116，1991)。IL—6R抗體的實(shí)例有PM-l抗體(Hirataetal"J.Immunol.143:2卯0-2卯6，1989)，AUK12-20抗體，AUK64-7抗體及AUK146—15抗體(Intl.UnexaminedPatentApplicationNo.WO92-19759)。gp130抗體的實(shí)例有AM64抗體(JapaneseUnexaminedPatentPublicationNo.3-219894)。在上述抗體中，以PM-l抗體為最佳。單克隆抗體可通過已知技術(shù)的方法來制備。即按常規(guī)免疫方法以IL-6,IL-6R或gpl30作為免疫的致敏抗原，然后將所得的免疫細(xì)胞用常規(guī)的細(xì)胞融合方法與已知的父輩細(xì)胞融合，并通過常規(guī)的篩選方法篩選產(chǎn)生單克隆抗體的細(xì)胞用來制備抗體。更具體地講，可用下迷方法制備單克隆抗體。例如，如果致敏抗原為人IL-6，可使用由Hirano等人Nature324:73，1986,披露的人類IL-6基因序列來得到抗體。將人類IL-6基因序列插入到一個可以公開表達(dá)的載體系統(tǒng)內(nèi)，并且用其轉(zhuǎn)化合適的宿主細(xì)胞，之后從宿主細(xì)胞或培養(yǎng)上清液純化所需的IL-6蛋白質(zhì)，然后用純化的IL-6蛋白質(zhì)作為致敏抗原。有關(guān)人類IL-6R，也可通過上述的人類IL-6的同樣方法得到IL-6R蛋白質(zhì)，即使用歐洲專利申請?zhí)枮镋P325474所介紹的基因序列來制備。有兩種類型的IL-6R，一種在細(xì)胞膜上表達(dá)，而另一種為可溶形式(SIL-6R),其與細(xì)胞膜分離。SIL-6R主要是由結(jié)合在細(xì)胞膜上的IL-6R的細(xì)胞外域組成，它與結(jié)合在細(xì)胞膜上的IL-6R不兩在于其沒有跨膜域，或跨膜結(jié)構(gòu)及細(xì)胞內(nèi)域。有關(guān)人類gp130，可通過上述的制備人類IL-6同樣的方法得到gp130蛋白質(zhì)，即使用歐洲專利申請?zhí)朎P411946所介紹的基團(tuán)序列來制備。以致敏抗原免疫的哺乳類動物并無特殊的限制，但是在選擇時最好考慮到這些細(xì)胞與用來融合的母細(xì)胞兼容性，通常使用小鼠，大鼠，豚鼠及家兔.以致敏抗原免疫動物可采用發(fā)表的已知方法來完成.例如，常規(guī)的方法包括經(jīng)腹腔或皮下給哺乳類動物注射致敏抗原。具體地講，最好用等量的PBS(磷酸緩沖鹽溶液)或生理鹽水稀釋并混懸致敏抗原，并且如需要與一定量的常規(guī)佐劑如弗氏完全佐劑一起使用，然后每4_21天給哺乳類動物注射幾次。在致敏抗原免疫時也可使用適當(dāng)?shù)妮d體。經(jīng)上述免疫后，確定血清中所要的抗體升高濃度，然后取出哺乳類動物的免疫細(xì)胞，最好為脾細(xì)胞做細(xì)胞融合-用于與上述免疫細(xì)胞融合的母細(xì)胞可以是哺乳類動物的骨髓瘤細(xì)胞，可以選用已知的若干種細(xì)胞抹，包括有P3(P3x63Ag8.653)(丄Immunology123:1548，1978)，P3-Ul(CurrentTopicsinMicrobiologyandImmunology81:1-7，1978),NS-1(Eur.J.Immunol.6:511-519，1976)，MPC-ll(Cell，8:405-415，1976)，SP2/o(N錄加re，276:269-270，1978)，Of(丄ImrtiunoI:Meth.35:1-21,1980)，S194《辱E鄧.Me丄148:3J3國323，1978)，R210(Nature，277:131-133，1979)?？刹捎靡阎姆椒▽⒚庖呒?xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，例如采用MU&扭in等人的方法(Milsteinetal"MethodsEnzymol.73:3-46，1981)。更具體地講，上迷的細(xì)胞融合可采用加有細(xì)胞融合促進(jìn)劑的常規(guī)營養(yǎng)埃養(yǎng)液來速行.融合促進(jìn)辦可以是如聚乙二醇(PEG)或Sendai病毒(HVJ)，如需要加強(qiáng)融合作用也可加入如二甲基亞鞏以提高融合效率'免疫細(xì)胞與骨髓細(xì)胞之間的比例最好是免疫細(xì)胞的數(shù)量為骨髓瘤細(xì)胞的1_10倍.用于細(xì)胞融合的培養(yǎng)介質(zhì)可以是如RPMI1640培養(yǎng)介質(zhì)或MEM培養(yǎng)介質(zhì)，這些培養(yǎng)介質(zhì)都適合骨髓瘤細(xì)胞的生長，也可使用其《常用的培養(yǎng)介質(zhì)，^可在培養(yǎng)介質(zhì)中補(bǔ)充血清溶液如小牛血清(F€$)。麵胞融合是以下迷的方法來進(jìn)行的，即在上述的培養(yǎng)介質(zhì)中加入預(yù)先熱至37t:的PEG溶液，然后將一定數(shù)量的免疫細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞充分混勻，如用平均分子量約1000至6000的PEG加入到培養(yǎng)介質(zhì)中，通常濃度為30到60%(w/v)，然后將細(xì)胞混合以形成所需要的融合細(xì)胞(,交瘤).下一步樣是通過重復(fù)地逐漸加入適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)介質(zhì)并離心以去^上清波，通過這一步樣去除細(xì)胞融合劑等，這些制劑對雜交瘤的生長不利、通過一正常的選擇培養(yǎng)介質(zhì)培養(yǎng)雜交瘤以選出適當(dāng)?shù)碾s交瘤細(xì)胞，選擇培養(yǎng)介質(zhì)如HAT培養(yǎng)介質(zhì)(含有次黃嘌呤，氨基喋呤及胸腺嘧啶)。將雜交瘤細(xì)胞在HAT培養(yǎng)介質(zhì)中培養(yǎng)一定的時間，通常為幾天到幾周，以使雜交瘤以外的細(xì)胞(非融合細(xì)胞)死亡。下一步是對培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行有限的稀釋，使得產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞易于進(jìn)行標(biāo)記并單克隆。通過上述方法制備出的產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞可以在普通的培養(yǎng)介質(zhì)內(nèi)傳代培養(yǎng)，也可將其置于液氮內(nèi)長期保存。為了得到雜交瘤所產(chǎn)生的單克隆抗體，可以按照常規(guī)的方法培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞，然后回收培養(yǎng)上清液，或者也可采用另一種方法即將雜交瘤細(xì)胞注入一適當(dāng)哺乳類動物內(nèi)，讓其生長，然后再回收腹水。前者用來得到為純度的抗體，后者則用來制備大量的抗體。春用上述方法所得的單克隆批體然后可以通過常規(guī)的純化方法加以純^.逸些方法包括有如鹽折，凝膠過濾，親和層析等。,過上述方法制備的單克隆抗體可以采用通常的免疫方法如放射免疫分薪(RIA)，酶連免疫分析(EIA,ELISA),熒光抗體技術(shù)(免疫熒光分析)等來檢測其高度的敏感性及高純度的抗原識別能力.冬發(fā)明中使用的單克隆抗體并不局限于雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體，也有辯過人工修飾后的單鳥除抗體，如為了降低單克隆抗體抗人的異種杭靡蝶:，而對單克隆抗體進(jìn)行人工修飾。例如所使用的嵌合抗體，它的可變區(qū)是由除人類以外的哺乳類動物如小鼠的可變區(qū)組成，而其恒定區(qū)則為人類抗體，這種嵌合抗體可通過一種已知的產(chǎn)生嵌合抗體的方法來制備，具體地講是采用一種基團(tuán)重組技術(shù)。,照本發(fā)明也可使用重構(gòu)人類抗體，這些抗體可通過使用小鼠或非人類,泉類動物翁至補(bǔ)決定簇區(qū)域替換人類抗體的互補(bǔ)決定簇區(qū)域來制備，命所推的拔術(shù)為A知的常規(guī)基因重組方法.依據(jù)本發(fā)明，可采用已知鈞一種方法得到有用的重構(gòu)人類抗體.較好的這種重構(gòu)人類抗體為hPM-l(見Intl.UnexaminedParentApHcationNo.WO92-19759).霉要肘可改換抗體可變區(qū)的結(jié)構(gòu)區(qū)域(FR)的氮基酸，這樣重構(gòu)人類抗體互補(bǔ)決定簇區(qū)域可形成一個適當(dāng)?shù)目贵w結(jié)合位點(diǎn)(Satoetal.，CancerRes.53:851-856，1993)。另外，為了達(dá)到上述目的也可構(gòu)建用于結(jié)合抗原的抗體片段的基因密碼，以抑制IL-6的活性，例如抗體的Fab或Fv片段，或者單鏈Fv(scFv)，其中Fv的L和H鏈可通過一個適當(dāng)?shù)倪B結(jié)物連結(jié)起來，并使其在適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞內(nèi)表達(dá)(見例如，Birdetal.，TIBTECH，9:132-137，1991;Hustonetal"Proc.Natl.Sci.USA,85:5879-5883，1988)。依照本發(fā)明，可使用已有報道過的修飾IL-6，見Brakenhoffeta1.丄Biol.chem.269:86-93，1994或Savinoetal"EMBOJ.13:1357-1367，1994。可通過對IL-6氨基酸序列引入突變，如替換，去除或插入氨基酸，使所用的修飾過的IL-6保持有與IL-6R結(jié)合的活性而又去除了IL-6信號傳遞的功能。只要具備上述的特性，可通過任何一種動物種類制備IL-6，但從抗原性方面考慮，最好采用從人類細(xì)胞制備出的IL-6。另外，IL-6氨基酸序列的二級結(jié)構(gòu)可通過已知的分子模型設(shè)計方法來預(yù)棟J，如WHATIF(Vriendetal"J.Mol.Graphics.8:52-56，199D)，這樣可以估計突變化的氨基酸序列對整個結(jié)構(gòu)帶來的影響。在決定了要進(jìn)行適當(dāng)突變的氨基酸后，可使用一含有編碼人類IL_6基因的核苷酸序列的栽體做為模板，并用常規(guī)的PCR方法(多聚酶鏈反應(yīng))對其進(jìn)行突變，以得到修飾的IL-6基因編碼。如需要可將該模板插入到一個合適的表達(dá)載體內(nèi)，并在大腸桿菌或哺乳類細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，然后使用任何一種培養(yǎng)介質(zhì)的上清，以常規(guī)的方法經(jīng)過分離及純化后，估價其與-6R結(jié)合的活性及中和IL-6信號傳遞的活性。本發(fā)明使用的IL-6防肽或IL-6R部分肽只要可分別與IL-6R或IL-6結(jié)合，并無IL-6信號傳導(dǎo)活性，就可以為任何序列。在U,S.P碟tentPubicationNo.US5210075中記載了IL-6部分肽及IL-6R部分肽.在JapanesePatentPublicationNo.5-300338中記載了IL-6反義寡核苷酸。由于IL-6與慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有關(guān)，所以如果藥物組合物能阻斷IL-6所致的IL-6信虧傳導(dǎo)并抑制滑膜細(xì)胞的異常生長，依照本發(fā)明，其有效成分為IL-6拮抗劑的該藥物組合物可治療慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。例1證實(shí)了在體外對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人滑膜細(xì)胞生長的抑制作用。在例2中，給用二型膠原免疫的小鼠關(guān)節(jié)炎模型服用IL-6受體抗體，有關(guān)結(jié)果表明(1)以一關(guān)節(jié)炎的指標(biāo)為基礎(chǔ)來判定對關(guān)節(jié)炎的發(fā)生有抑制作用(圖4),(2)抑制了在膠原免疫的小鼠血液中抗二型膠原抗體的產(chǎn)生(圖5)，(3)檢查服用IL-6R抗體的小鼠關(guān)節(jié)炎模型的后爪關(guān)節(jié)，表明對肉芽組織對軟骨及骨的浸潤有抑制作用(慢性增殖性滑膜炎)(圖6)。在上述的(1)和(2)中，結(jié)果證實(shí)IL-6受體抗體對關(guān)節(jié)炎有抑制作用，尤其在小鼠關(guān)節(jié)炎發(fā)病的起始階段，該抑制作用更明顯。(3)的結(jié)果證明對肉芽組織對軟骨及骨的浸潤有抑制作用，由例1中所得的結(jié)果也支持這一點(diǎn)(體外對滑膜細(xì)胞生長的抑制)。(1)及(2)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明治療慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物組合物對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有很好的初始階段治療效果。本發(fā)明用于治療慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物組合物最好經(jīng)非胃腸途徑給藥，例如經(jīng)靜脈，肌肉，腹腔或皮下注射給藥，可全身也可局部給藥。該組合物也可以醫(yī)用制劑試劑盒的形式與至少一種醫(yī)用栽體或稀釋劑一起給藥.本發(fā)切用于治療慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物組合物在給人服用時，其劑量可依振病理情況，病人的年齡及給藥方式有所不同，并依照上述的情況選擇不同的劑量.例如在1到1000mg/病人這樣一個范圍內(nèi)，有4個不同的最大劑量可以選擇.當(dāng)然，用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的本發(fā)明藥物組合物并不局限于這些藥物劑量。本發(fā)明用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物組合物可按照常規(guī)的方法配制而成.例如，注射制劑可通過溶劑如生理鹽水或一種緩沖鹽溶液溶解提純的,IL-6拮抗劑，然后再加入吸附抑制劑如吐溫80，凝膠或人血清白蛋白(HSA)等配制而成，該混合物在溶液重組使用前可以凍干保存.用于凍干保存的賦形劑可以為一種糖醇，如甘露糖醇，葡葡糖或者庶糖。實(shí)例本發(fā)明將通過下面的實(shí)例，文獻(xiàn)實(shí)例及實(shí)驗(yàn)實(shí)例做進(jìn)一步更詳細(xì)的說明，但應(yīng)知道本發(fā)明并不局限于這些實(shí)例。參考實(shí)例l.人類可溶性IL-6受體的制備可溶性IL-6R可通過PCR(多聚酶鏈反應(yīng))的方法使用含有編碼人^-6受體CDNA的質(zhì)粒pBSF2R,236制備而成(Yasukawaeta1.，J.Biochem.108:673-676，1990)，該質(zhì)?？梢罁?jù)Yamasaki等人提供的方法來得到(Science,241:825-828，1988)。上述的質(zhì)粒BSF2R.236可以使用限制性內(nèi)切酶Sphl來消化以得到IL-6R的CDNA片段，然后將該片段插入到mpl8中(AmershamCo.，).通過采用一體外致突變系統(tǒng)(AmershamCo.，)以PCR方法以一設(shè)計好的合成的寡核苷酸ATATTCTCTAGAGAGATTCT對IL-6RcfiNA引入一個終止密碼，從而導(dǎo)致IL_6RcDNA突變。上迷實(shí)驗(yàn)步驟其結(jié)果是在氨基酸345的位置上引入一個終止密碼，這樣就可以得到可溶性《1-(SH-6錄)的cDNA編碼。為了使SiL-6妖cIWVA在CHO細(xì)胞中表達(dá)，將上述經(jīng)HindIII-Sall內(nèi)切鰷切下的SIL-6RcDNA插入到質(zhì)粒pECEdhfr中去(Claiiseretal.，Cell，45:721-735，1986)，該質(zhì)粒中有一編碼二氫葉酸還原酶(dhfr)的cDNA,該dhfr插入在限制性內(nèi)切酶Pval的酶切位點(diǎn)上，這樣即得到了CHO細(xì)胞的表達(dá)質(zhì)粒pECEdhfr344。通過使用磷酸鈣沉淀的方法(Chenetal.，Mol.Cell，Biol，7:2745-2751,t雜7),使用l稱g的質(zhì)粒pECEdhfr344轉(zhuǎn)染dhfr—CHO細(xì)胞系DX衫—11(Uriaudetal"Proc.Natl.Acad.Sci.USA77，4216-參，柳0)'將轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞在含有l(wèi)mM谷氨酸，10%透射過的小牛血清(FCS)，10QU/in，青霉素及100ng/ml鏈霉素的不含核苷酸的aMEM逸擇培養(yǎng)介質(zhì)中培養(yǎng)3周。通過限制稀釋的方法篩選已轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞，并每到一個單克隆的C枉O細(xì)胞抹.將CHO細(xì)胞克隆在濃度為20nM至數(shù)iteM氨甲嚷吟溶液中擴(kuò)增，以得到產(chǎn)生人類SIL-6R的CHO細(xì)胞系$E27.像用含5%FCS的Iscove改進(jìn)的Dulbecco培養(yǎng)介質(zhì)(IMDM，GibcoCo.的產(chǎn)品)，培養(yǎng)CHO細(xì)胞系5E27，回收培養(yǎng)液上清，并按照通常的ELISA方法(酶連免疫吸附分析法)測定培養(yǎng)液上清中的SIL_6R濃度，參考實(shí)例Z.人類IL-6抗體的制備可以按照Matsuda等人的方法來制備人類IL-6抗體(Eur.J.Im四卿l.18:951-956，1988)。以10|ag重纟且的IL—6(Hisanoetal"Immunol.Lett,17:41,1988)與弗氏完全佐劑一起免疫BALB/C小鼠，每周進(jìn)行一次直到血清中可以檢測到抗IL-6抗體。取出局部淋巴結(jié)的淋巴細(xì)胞，使用聚乙二醇使之與骨髓瘤細(xì)胞系P3U1融合.按照D:等人的方法(SelectiveMethodsinCellularI孤鵬一l0gy，W.H.Fre柳糾andCo.,SanFrancisco,351，1980)使用HAT爭養(yǎng)液選出雜交瘤，通過上述步驟建立起一個產(chǎn)生人類IL-6抗體的條交瘤細(xì)胞系.產(chǎn)生人類IL-6抗體的雜交瘤可通過下面的方法進(jìn)行OL-6結(jié)合情況的分析。縣體地講，在4r;的承度下，在0.1M的碳酸氫鹽緩沖溶液(pH9.6)l砂0gl中用山羊抗小鼠Ig抗體(10pg/ml，CooperBiomedical,Inc.的產(chǎn)高，MaJvern，PA)涂覆一柔軟的聚乙烯96孔徵板(DynatechLatmi^tttr&s，lne.的產(chǎn)品，Alexandria,VA)并且過夜。然后在室溫下用l咖jd含有l(wèi)%牛血清白蛋白的PBS處理該板2小時。經(jīng)過PBS沖洗后，向每個孔中加入100nl的雜交瘤培養(yǎng)上清液，并在4"的溫度下過夜錄育。沖洗該板并向每個小孔內(nèi)加入125I標(biāo)記的重組IL_6直至之Q(lQci^l/Q.5ttg/孔，再經(jīng)沖逸后以伽馬計數(shù)器(PeckmanGamma9000，錄ecKn^nUtstru微eiits，F(xiàn)uUerton，CA)測定每個孔的放射活性.在216個雜交續(xù):克隆中，有32個雜交瘤克隆經(jīng)過IL-6結(jié)合分析測定為陽性.從這些:克隆中最后得到穩(wěn)定的克隆MH166.BSF2。由該雜交瘤產(chǎn)生的IL-6抗體MH166為IgGlK亞型.辟后采用依賴仏-6生長的小鼠雜交瘤細(xì)胞系MH60.BSF2(Matsudaetal.，Eur.J.Immunol.1&951-956，1988)，通過對該雜交瘤生長的影響來測定MH166抗體的中和活性。將數(shù)量為1x104/200mu/孔的MH6Q.BSF2細(xì)胞懸浮，然再向孔內(nèi)加入含MH166抗體的樣品，培養(yǎng)48小時后再加入15.1Ci/mmol的3H胸腺嘧咬(NewEnglandNuclear,Boston,MA)，之后再繼續(xù)培養(yǎng)6小時。將細(xì)胞置玻璃濾紙上并用自動收集器處理(LaboMashScienceCo.，Tokyo,Japan)。使用家兔的抗IL-6抗體做為對照。結(jié)果顯示，MH166抗體對MH60.BSF2細(xì)胞攝取3H胸腺嘧啶的抑制呈劑量-依賴方式。這證明MH166抗體有中和IL-6的活性。參考實(shí)例3.人類IL-6受體抗體的制備按照其說明，通過Hirata等人方法(J.Immunol.，143:2900-2906，1989)構(gòu)建的抗IL-6R抗體與用CNBr激活的Sepharose4B結(jié)合(PharmaciaFi錢eChemicals的產(chǎn)品，Piscataway，NJ)，結(jié)合的復(fù)合物爲(wèi)來純化IL-6Ji,(Yama幼kietal.，Science,241:825-828，1988),以含有1%毛地黃皂苷(WakoChemicals的產(chǎn)品)，10mM三乙醇胺<細(xì)7.8)及0.15MNaCl的lmMp-對氨基苯基甲烷磺酰氟鹽酸鹽(WakoCtoemicals的產(chǎn)品)(毛地黃皂苷緩沖液)溶解人類骨髓瘤細(xì)胞系U266，并與結(jié)合在Sepharose4B抹上的MT18抗體混合。用毛地黃皂苷緩沖液沖洗珠子6次，這樣即得到用來免疫的部分純化的IL-6R。以從3x109U266細(xì)胞得到的部分純化的IL-6R免疫BALB/C小鼠，每tG天4次，然后采用常規(guī)的方法制備雜交瘤，使用下面的方法測定照性生長孔內(nèi)雜交瘤培養(yǎng)液上清對IL-6結(jié)合的活性。在用站S蛋氨酸(2.5mCi)標(biāo)記5x107U266細(xì)胞后，以上述的毛地黃皂苷緩沖液溶解這些細(xì)胞.將溶解的U266細(xì)胞與結(jié)合在瓊脂糖凝膠4B珠上的0.04mlMT18抗體混合，之后用毛地黃皂普緩沖液沖洗6次，用0.25ml的毛堆黃皂苷緩沖泉(pH3.4)沖掉35S蛋氨酸標(biāo)記的IL-6R，并用0.025ml的lMTris(pH7.4)中和.將0.05ml的雜交瘤培養(yǎng)液上清與0.01ml的蛋白G瓊脂糖凝膠混合(Pharmacia的產(chǎn)品).沖洗后，將瓊脂糖凝膠與預(yù)先制備的35S標(biāo)記的IL-6R溶液培養(yǎng).使用SDS-PAGE的方法測定免疫沉淀物，并檢測雜交瘤培養(yǎng)上清液與IL-6R的反應(yīng)情況。通過上述方法，建立了反應(yīng)陽'汰的雜交瘤克隆PM_1。由雜交瘤PM-1產(chǎn)生的IL-6R抗體PM-1為IglK亞型。使用人類骨髓瘤細(xì)胞系U266來檢測由雜交瘤PM-1生產(chǎn)的抗體對IL-6與人類IL_6R結(jié)合的抑制活性。人類重組IL-6是采用大腸桿菌(Hiranoetal"Immunol.Lett"17:41,1988)和12SI標(biāo)記的Bolton-Hunter試劑(NewEnglandNudcer，Boston，MA)制備而成的(Tagaetal.，丄Exp.Med.166:967,1987)。在過量IOO倍的非標(biāo)記的IL-6存在的條件下，將4x105U266的細(xì)胞與70%(v/v)的雜交瘤PM-1培養(yǎng)上清及14000cpm的125I標(biāo)記的IL-6—起在室溫下培養(yǎng)1小時。將7(Hil樣本加入裝有300nlFCS的400Mi微量聚乙烯離心管內(nèi)，離心后測定細(xì)胞的放射活性。結(jié)果證明雜交瘤PM-1產(chǎn)生的抗體可抑制IL-6與IL-6R的結(jié)合。參考實(shí)例4.小鼠IL-6受體抗體的制備在曰本專利申請?zhí)?-134617中記栽了抗小鼠IL-6受體的單克隆抗體的制備方法。按照Saito等人的方法(J.Immunol.，147:168-173，1993),產(chǎn)生小鼠可溶性IL-6受體的CHO細(xì)胞在含有10%FCS的IMDM培養(yǎng)液中培養(yǎng)，通過采用小鼠可溶性IL-6受體抗體RS12(Seeibid.Saitoetal.，)及一個閨定親和凝膠IO(好iorad)的親和柱從培養(yǎng)液上清中純化小鼠可溶性IL-6受體.,所得的鄰將小鼠可溶性IL-6受體與弗氏完全佐劑混合，并經(jīng)腹嫁^入Wist抑大鼠(NibonCharlesRiverCo.)。2周后以弗氏不完全佐剤強(qiáng)化免疫.第45天處死大鼠，取大約2x108個脾細(xì)胞按常規(guī)的方法使用50%的PEG1500(BerlingerMannheim)與1x107個小鼠P3U1骨酸瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，之后使用HAT培養(yǎng)液篩選雜交瘤細(xì)胞。在將雜交瘤培養(yǎng)上清加在表面涂有兔抗大鼠IgG抗體(CappelCo,)辨免疫板上之后，小鼠可溶性的IL_6受體與乏反應(yīng)，并以ELISA方法使用兔抗小鼠IL_6秉體抗體及堿性磷酸酶標(biāo)記的綿羊抗兔IgG，篩選雜交瘤產(chǎn)生的抗小鼠可溶性IL-6受體的抗體。還要進(jìn)行兩次更進(jìn)一步的篩選以確定產(chǎn)生抗體的雜交瘤克隆，從而最后得到單一的雜交瘤克隆。該克隆命名為MR16-1。通過檢測MH60.BSF2細(xì)胞攝入3H胸腺嘧啶的情況可了解該雜交瘤產(chǎn)生的抗體拮抗小鼠IL-6信號傳導(dǎo)的中和活性(Matsudaetal.，J.Im鵬nnol，18，951-956，1988),向96孔板內(nèi)加入MH60.BSF2細(xì)胞，最后濃度為1x104個細(xì)胞/200ni/孔，然后加入小鼠1L-6(10pg/ml)及MR16-1抗體或RS12抗體，濃度為12.3-1000ng/ml,在37X:,C02濃度為5%的條件下培養(yǎng)44小時，之后加入3H胸腺嘧啶(ljxCi/孔)，4小時后測定其攝入情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)MR16-1抗體可抑制MH6Q.BSF2細(xì)胞攝取3H胸腺嗜啶，實(shí)驗(yàn)l.建立慢性類風(fēng)溪性關(guān)節(jié)炎的滑膜細(xì)胞系(1)滑膜細(xì)胞的制備蜂過對慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人的關(guān)節(jié)手術(shù)取得滑膜組織。所得滑膜組嫁先以剪刀切碎，然后用5mg/ml的I型膠原酶(SigmaChemicalCo.的產(chǎn)品)及溶于IMDM(Igcove修改過的Dulbecco培養(yǎng)液)的濃度為培斧酶消化0.15mg/ml的牛胰腺DNA酶在溫度為37C的條件下1小時逸行酶解離，然后通過濾兩過濾-得到單一的細(xì)胞。然后將所得的細(xì)胞使用貪5%FCS的iMO錄在培養(yǎng)瓶內(nèi)過夜培養(yǎng).之后通過去除非粘附細(xì)胞揭姨滑腺細(xì)胞.將滑膜細(xì)胞傳代培養(yǎng)3至6次后使用這些細(xì)胞進(jìn)行下面的實(shí)驗(yàn).(2)由滑膜細(xì)胞產(chǎn)生的IL-6,上述所得的滑膜細(xì)胞混懸于含有5%FCS(HycloneLa扭or一oHesInc.的產(chǎn)品)，lMJ/ml的青霉素G及100將/ml的鏈霉素IMl>5f培養(yǎng)^t內(nèi)，并^3x103細(xì)胞/孔的數(shù)量加入到96孔徵滴板上(f^^0i抜O).的產(chǎn)品)并培養(yǎng)，另外還向小孔內(nèi)加入人類白介素-IP(IL-IP)，人類腫瘤壞死西子a(TNFa)，人類血小板衍化生長因子(P婦PF)AB及人類堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)，濃度分別為化01或O.l，O.l或1，1或10及1或10ng/ml，在37X:的條件下培養(yǎng)72小時后收集培養(yǎng)液上清，將lOOpl抗人IL-6抗休MH166(l嗎/ml)加到96孔ELISA板上(免疫板NimcCo.的產(chǎn)品)。在4"的條件下孵育24小時。隨后用含有0.05%吐溫20的PBS沖洗每個孔，并用含有1%BSA的PBS在4"C的條件下過夜封閉.用含有l(wèi)%BSA的PBS稀釋前面得到的培養(yǎng)液上清，并將其加到每個孔內(nèi)，然后在室溫下孵育2小時。用含有0.05%吐溫20的PBS沖洗后，再加入2.5ng/ml的經(jīng)100^1蛋白A柱(Pharmacia的產(chǎn)品)純化過的兔多克隆抗人IL-6抗體。室溫下粹育2小時，在培養(yǎng)液上清中與IL-6結(jié)合的兔多克隆抗IL-6抗體與堿性磷酸酶結(jié)合的抗兔IgG抗體反應(yīng)(TagoCo.的產(chǎn)品)。然后按照附帶的說明加入lmg/mlSigma104堿性磷酸酶底物(SigipaCo.的產(chǎn)品)并在405~600nm的范圍內(nèi)用MPRA4微板讀數(shù)器(TosobCo.的產(chǎn)品)測量吸光度。每次測試都制做重組IL-6的標(biāo)準(zhǔn)曲線，以將吸光度OD值轉(zhuǎn)化成人IL-6的濃度。其結(jié)果見表l。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>注用IL-1P，TNFa，PDGF_AB或bFGF將滑膜細(xì)胞培養(yǎng)3天。培養(yǎng)之后，采用ELISA方法測定上清的IL-6濃度。結(jié)果證明IL-IP可強(qiáng)烈的增加滑膜細(xì)胞產(chǎn)生IL-6。實(shí)施例1(1)實(shí)驗(yàn)l中所得的滑膜細(xì)胞(3x103/孔)混懸于含5%FCS(HycloneLaboratories,Inc.的產(chǎn)品)，10U/ml青霉素G和100ng/ml鏈霉素的IMDM培養(yǎng)液中，然后將其加入96孔微滴板的孔內(nèi)(#3Q72，F(xiàn)alconCo.的產(chǎn)品)，在各種濃度的IL-6或SIL-6單獨(dú)存在的情況下，或IL-6與SIL-6R同時存在的情況下培養(yǎng)5天。培養(yǎng)72小時時，向每個孔內(nèi)加入濃度為lpCi/孔3H胸腺嘧啶(AmershamInternationalpic的產(chǎn)品)，培養(yǎng)結(jié)束后，以閃爍計數(shù)儀測定細(xì)胞的放射活性。結(jié)果見圖l所示。其結(jié)果單獨(dú)與IL-6或SIL-6R培養(yǎng)的細(xì)胞對SH胸腺嘧咬的攝取很少，并且沒有觀察到滑膜細(xì)胞的生長。相反在至少濃度為10ng/ml的IL-6及HJOtig/nU的SIL_R存在的情況下，與對照組比較可觀察到有明:顯的SH胸腺嘧啶攝取。這樣，實(shí)際上在IL-6單獨(dú)存在情況下沒有賴激滑膜細(xì)胞生長的作用，而在IL-6與SIL-6R同時存在的情況下可見到其對滑膜細(xì)胞強(qiáng)烈的刺激生長作用。(2)在產(chǎn)生IL-6(0.1mg/ml)，100ng/mlSIL-6R及25pg/mlIL-6抗體或25ng/孤lIL-6R抗體的足量IL-p存在條件下培養(yǎng)滑膜細(xì)胞(3x103/孔)培養(yǎng)72小時后向每個孔內(nèi)加入濃度為lpCi/孔的311胸1|嘧豫，培養(yǎng)結(jié)束后，采用閃爍計數(shù)儀測定細(xì)胞的放射活性。結(jié)果見圖2。加入IL-6抗體或IL-6R抗體可完全抑制由SIL-6R所引起的滑膜細(xì)胞生長.(3)在100ng/mlIL-6(GenzymeCo.產(chǎn)品)，100ng/mlSIL-《R及25ixg/mlIL_6抗體或IL-6R抗體(皆由上述參考實(shí)例得到)存在的條件下培養(yǎng)滑膜細(xì)胞(3xIOV孔).培養(yǎng)72小時后，將濃度為:UiCi/務(wù)SH胸腺嘧啶加到每個孔內(nèi)，培養(yǎng)結(jié)束后，用閃爍計數(shù)儀測量細(xì)胞的放射活性。其結(jié)果可見圖3.加入IL_6抗體或IL-6R抗體可完余抑制由SIL-6R所致的滑膜細(xì)胞生長.實(shí)施例2用小鼠關(guān)節(jié)炎模型來研究IL_6受體抗體對關(guān)節(jié)炎發(fā)生的抑制作用.通過將溶解于0.1N,乙酸水溶液的牛II型膠原溶液(CollagenTedinok)gyGroup)(4mg/ml)和完全佐劑H37Ra(DIFCO)等量混合來制務(wù)佐劑。給8至9周齡的雌性DBA/1J小鼠(CharlesRiverJapan)尾的根部皮下注射lO(Hxl的佐劑。20天后在小鼠背部皮下再注射100|il的佐刺以引發(fā)關(guān)節(jié)炎。在第1次膠原致敏后按每只小鼠2mg的劑量靜脈注射小鼠IL-6受體抗體MR16-1，此后的7周里每周再給小鼠皮下注射0.5mg(n二5)的抗體。對于對照組使用同型的抗DNP抗體KH-5(ChugaiSeiyaku)以關(guān)節(jié)炎指數(shù)來評價關(guān)節(jié)炎的嚴(yán)重程度。以每個肢體4分，每個個體共W分來進(jìn)行評估。評估的標(biāo)準(zhǔn)如下。O.S:在關(guān)節(jié)的一側(cè)可見紅斑。1:在關(guān)節(jié)兩側(cè)觀察到紅斑或充血但大肺脹隆起。2:觀察到中等程序腫脈隆起。3.足背部有嚴(yán)重的胂膝隆起，但未及整個足趾。4:足背及足趾嚴(yán)重的胂脹隆起。每結(jié)果見圖4。與對照抗體給藥組比較，IL-6受體抗體給藥組可觀察到其對早期階段關(guān)節(jié)炎的發(fā)生有明顯的抑制作用。另一方面與對照抗體給藥組比較，在IL-6受體抗體給藥組通過測定早期〖階段關(guān)節(jié)炎小鼠血中釣抗II型膠原抗體的滴度發(fā)現(xiàn)其抗體顯著減少(裙5),專以艨原免疫后第35天處死小鼠，其后腿以20%的福爾馬林固定.然后標(biāo)本以EDTA溶液(pH7.6)脫礦質(zhì)并用酒精脫水。隨后用石蠟包輝標(biāo)本并切成2pm厚的切片.用蘇木精及伊紅對切片進(jìn)行染色并放大125倍在鏡下觀察(圖6).其結(jié)果，與對照抗體給藥組比較，在IL-6受.體抗體繪藥組其對肉芽組織對軟骨及骨的浸潤，即慢性增殖性滑樣炎^#俲作甩。1$-6為一細(xì)胞西子，它可使B細(xì)胞分化成產(chǎn)生抗體的細(xì)胞.在a-6受體存在的情況下，IL-6也可促進(jìn)滑膜細(xì)胞的增殖。在小鼠膠原性關(guān)節(jié)炎模型的實(shí)驗(yàn)中，與對照抗體給藥組比較，在膠原致敏后的第21天及35天由于抗IL-6受體抗體可顯著地抑制抗II型膠原抗體的滴度，所以認(rèn)為抗IL-6受體抗體對抗體產(chǎn)生的抑制也是其對關(guān)節(jié)炎有抑制作用的一個原因。另外，在膠原致敏后的第49天，雖然此時未見到對抗體產(chǎn)生的抑制作用，但在這期間仍可觀察到其對關(guān)節(jié)炎發(fā)生有一定的抑制作用，對跗骨周圍組織進(jìn)行HE染色可觀察到與對照組比較，在抗IL-6受體抗體給藥組其對肉芽組織對軟骨及骨的浸潤有抑制作用，基于上述事實(shí)說明抑制滑膜細(xì)胞生長也是其抑制關(guān)節(jié)炎作用的一個原因。工業(yè)方面的應(yīng)用性脊負(fù)慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人的滑膜細(xì)胞在IL-6及SIL-6R同酵^在的情況下可以促進(jìn)其增長。基于慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人滑膜液體，含有大量的IL-6及SIL-6R引起滑膜細(xì)胞增殖這樣一個事實(shí)，現(xiàn)認(rèn)為IL-6引發(fā)的信號傳導(dǎo)與慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞的異常增殖有關(guān)。傣照本發(fā)明，現(xiàn)已證實(shí)有效成分為IL_6拮抗剤的藥物組合物可治療慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，其可在IL-6及SIL-6R存在的情況下抑制慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人滑膜細(xì)胞的生長，所以對慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有治療作角.總之，本發(fā)明所述的IL-6拮抗劑對有滑膜細(xì)胞異常增殖的慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是一種有益的治療制劑。權(quán)利要求1.白介素-6拮抗劑作為有效成分在制備用于治療慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物組合物中的用途。2.權(quán)利要求1的用途，其特征在于所述白介素-6拮抗劑是白介素-6的抗體。3.權(quán)利要求2的用途，其特征在于所述白介素-6是人白介素-6。4.權(quán)利要求2的用途，其特征在于所述白介素-6拮抗劑是白介素-6受體的抗體。5.權(quán)利要求4的用途，其特征在于所述白介素-6受體的抗體是人白介素一6受體的抗體。6.權(quán)利要求5的用途，其特征在于所述人白介素-6受體的抗體是PM-1抗體。7.權(quán)利要求6的用途，其特征在于所述PM-1抗體是人源化PM-l抗體。全文摘要本發(fā)明涉及白介素-6拮抗劑在制備用于治療慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物組合物中的用途。其中的白介素-6拮抗劑是白介素-6的抗體。文檔編號A61P37/00GK101361972SQ20081021000公開日2009年2月11日申請日期1995年6月7日優(yōu)先權(quán)日1994年10月7日發(fā)明者三原昌彥,大杉義征,守屋陽一郎,岸本忠三申請人:中外制藥株式會社;岸本忠三