專利名稱：：治療濕疹皮炎的消炎抗菌涂劑及其檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域治療皮膚疾病的外用制劑，及其檢測(cè)方法。該制劑是一種治療濕疹皮炎炎菌清涂劑及其檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
：濕疹類皮膚病是由內(nèi)外多種復(fù)雜因素引起的一種常見的過(guò)敏性、炎癥性皮膚病。本類疾病的發(fā)病原因和病理機(jī)制比較復(fù)雜，目前有些機(jī)制仍不十分明了。濕疹患者具有一定的過(guò)敏素質(zhì),可能受遺傳因素支配。如異位性皮炎為一種慢性、難治性、炎癥性、瘙癢性皮膚病，具有遺傳性和明顯的年齡階段性。據(jù)統(tǒng)計(jì)，大約70%80%的患者有家族遺傳過(guò)敏史，但家族成員所表現(xiàn)出的過(guò)敏性疾病卻不一定與患者相同。逾疹的分子遺傳學(xué)研究主要集中在參與免疫反應(yīng)的基因方面,包括人類白細(xì)胞抗原基因(位于6p)、T細(xì)胞受體(T2cel1rec印tor，TCR)a/S鏈基因(14q11.2)、細(xì)胞因子基因簇(5q3133)及IgE高親合力受體P亞單位基因(llql3),這些基因的多態(tài)性、突變或異常表達(dá)可能與濕疹有一定相關(guān)性。種差別。濕疹的病因復(fù)雜，是內(nèi)外因素相互作用的結(jié)果，常是多方面的。外在因素如生活壞境、氣候條件等均可導(dǎo)致濕疹的發(fā)生。外界物理化學(xué)性刺激如日光、紫外線、寒冷、炎熱、干燥、多汗、搔抓、摩擦以及各種動(dòng)物皮毛、植物、化學(xué)物質(zhì)等均可誘發(fā)濕瘆，R常用品如香脂類化妝品、肥皂、人造纖維也可誘發(fā)濕疹，某些食物致敏原同樣可使?jié)裾罴又?。近年?lái)許多研究證明感染性變應(yīng)原在濕疹的發(fā)病過(guò)程中起著極為重要的作用，尤其是金黃色葡萄球菌分泌的超抗原是誘發(fā)或加重濕疹的原因之一。超抗原是一類有細(xì)菌外毒素或逆轉(zhuǎn)錄蛋白所構(gòu)成的新的抗原物質(zhì)。此類物質(zhì)可直接與抗原遞呈細(xì)胞表面的主要組織相容性抗原211(MHC2II)分子結(jié)合，并為多數(shù)T細(xì)胞活化提供信號(hào)，致其活化。這種能使多數(shù)T淋巴細(xì)胞活化的抗原被稱為超抗原。超抗原引起濕疹的機(jī)制主要是:直接與專職抗原遞呈細(xì)胞(APC)如巨噬細(xì)胞或樹枝狀細(xì)胞上的分子結(jié)合,也可與細(xì)胞因子誘導(dǎo)的非專職APC如角質(zhì)形成細(xì)胞上的HLA2DR分子結(jié)合,這些HLA2DR細(xì)胞和此后激活的T淋巴細(xì)胞，局部或系統(tǒng)性的大量釋放細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)，從而產(chǎn)生病理效應(yīng)。超抗原也可以激活B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞而影響炎癥和自身免疫。根據(jù)超抗原引起濕疹的學(xué)說(shuō)，我們研究發(fā)現(xiàn)，在治療濕疹的外用藥劑中加入對(duì)分泌的超抗原金黃色葡萄球菌有抑制作用的抗生素利福平，可以明顯提高這些藥物的療效'在加入利福平的同時(shí)，添加具有促進(jìn)藥物透皮吸收的薄荷腦'緝成一組具有對(duì)皮膚產(chǎn)生免疫抑制'抗炎，抗菌作用的治療濕疹皮炎炎菌清涂劑'該炎菌清涂劑在臨床應(yīng)用'取得十分理想的療效。研究表明具有消炎、止痛、止癢、抗菌、抗真菌、抗過(guò)敏五大功效'對(duì)各類皮膚炎癥、搔癢、過(guò)敏及細(xì)菌、真菌感染均有獨(dú)到的療效?？捎糜跐裾?亞急性期/慢性期)、皮炎(脂溢性皮炎、神經(jīng)性皮炎、接觸性皮炎、過(guò)敏性皮炎、蟲咬皮炎等)，癢疹、搔癢癥、藥疹、汗皰疹、手足癬、銀屑病、指掌角化癥、白癜風(fēng)、玫瑰糠疹等。在研究的同時(shí)，我們也建立了一種方法簡(jiǎn)單可靠的藥品檢測(cè)方法
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提到的炎菌清涂劑是由腎上腺皮質(zhì)激素、廣譜抗生素、消炎止痛藥及藥物透皮吸收促進(jìn)劑組成。糖皮質(zhì)激素本方中采用地塞米松，也可采用醋酸潑尼松，醋酸潑尼松龍，醋酸氫化可的松，醋酸可的松，甲潑尼松，曲安西龍，，倍他米松，氟氫可的松，氯潑尼醇，地夫可特，氟米龍，曲安奈德，布丁奈德，莫米松，氯倍他索，氟氫松，丁氯倍他松，倍氯米松，氯氟輕松，阿氯米松，鹵米松，甲羥松，去羥米松，氟氫縮松，二氟可龍；廣譜抗生素本方中采用利福平，也可采用氯霉素，四環(huán)素，喹諾酮類等廣譜抗生素，消炎止痛藥本方中采用水楊酸，也可采用阿司匹林，吲哚美辛，布洛芬，非諾洛芬等消炎止痛藥，藥物透皮吸收促進(jìn)劑本方中采用薄荷腦和丙二醇。具體實(shí)施例方式一、炎菌清涂劑的配方及生產(chǎn)方法如下配方一醋酸曲安奈德l.Og,利福平l.Og，水楊酸20g，薄荷腦20g，95%乙醇400ml，丙二醇300ml'蒸餾水300ml，共配制1000ml。生產(chǎn)方法取醋酸曲安奈德l.Og、利福平1.0g、水楊酸20g、薄荷腦20g分別按次溶于95W乙醇400ml中，攪勻至全溶解，即加進(jìn)丙二醇300ml,、蒸餾水300ml，混合均勻，即得炎菌清涂劑產(chǎn)品。該產(chǎn)品可以分裝為10ml/瓶，15ml/瓶，20ml/瓶或25ml/瓶.配方二醋酸地塞米松250mg，利福平l.Og,水楊酸20g，薄荷腦20g，95%乙醇，400ml,丙二醇300ml，蒸餾水300ml,，共配制lOOOml。生產(chǎn)方法取醋酸地塞米松、利福平、水楊酸、薄荷腦分別按次溶于95%乙醇中，攪勻至全溶解，即加進(jìn)丙二醇、蒸餾水300ml，混合均勻，即得炎菌清涂劑產(chǎn)品。該產(chǎn)品可以分裝為10ml/瓶，15ml/瓶，20ml/瓶或25ml/瓶。配方三醋酸曲安奈德1.0g,利福平l.Og，阿司匹林20g，薄荷腦20g，95%乙醇，400ml,丙二醇300ml，蒸餾水300ml，共配制1000ml。生產(chǎn)方法取配方三醋酸曲安奈德、利福平、阿司匹林、薄荷腦分別按次溶于95%乙醇中，攪勻至全溶解，即加進(jìn)丙二醇、蒸餾水300ml，混合均勻'即得炎菌清涂劑產(chǎn)品。該產(chǎn)品可以分裝為10ml/瓶，15ml/瓶'20ml/瓶或25ml/瓶。5配方四醋酸曲安奈德l.Og，氯霉素l.Og,水楊酸20g，薄荷腦20g，95%乙醇400ml，丙二醇300ml，蒸餾水300ml，共配制畫ml。生產(chǎn)方法取醋酸曲安奈德1.0g、氯霉素1.0g、水楊酸20g、薄荷腦20g分別按次溶于95%乙醇400ml中，攪勻至全溶解，即加進(jìn)丙二醇300m1，、蒸餾水300ml，混合均勻，即得炎菌清涂劑產(chǎn)品。該產(chǎn)品可以分裝為10ml/瓶，15ml/瓶，20ml/瓶或25ml/瓶在上述配方中，腎上腺皮質(zhì)激素類藥物曲安奈德或地塞米松，也可采用醋酸潑尼松，醋酸潑尼松龍，醋酸氫化可的松，醋酸可的松，甲潑尼松，曲安西龍，倍他米松，氟氫可的松，氯潑尼醇，地夫可特，氟米龍，曲安奈德，布丁奈德，莫米松，氯倍他索，氟氫松，丁氯倍他松，倍氯米松，氯氟輕松，阿氯米松，鹵米松，甲羥松，去羥米松，氟氫縮松，二氟可龍來(lái)代替；在上述配方中，廣譜抗生素利福平，也可采用氯霉素，四環(huán)素，喹諾酮類等廣譜抗生素替代。在上述配方中，消炎止痛藥水楊酸，也可采用阿司匹林，吲哚美辛，布洛芬，非諾洛芬等消炎止痛藥替代。二炎菌清搽劑的三種主要成分的高效液相色譜法檢測(cè)方法為了完成對(duì)炎菌清搽劑中水楊酸、醋酸曲安奈德和利福平三種主要成分的含量測(cè)定，建立高效液相色譜法。具體方法如下-1儀器和試藥LC1200型高效液相色譜，包括四元泵、DAD檢測(cè)器、在線脫氣機(jī)、LC1200中文工作站(美國(guó)，安捷倫科技有限公司)；AE204型十萬(wàn)分之一分析天平(瑞士，梅特勒托利多公司)；MILLI-Q超純水制備儀(美國(guó)，密理博科技公司)；對(duì)照品水楊酸(批號(hào)100106-200303)、醋酸曲安奈德(批號(hào)100125-200404)、利福平(批號(hào)130496-200001)均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；炎菌清搽劑由廣東醫(yī)學(xué)院海濱醫(yī)院提供；甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。2方法和結(jié)果2.1溶液制備對(duì)照品儲(chǔ)備液精密稱取水楊酸對(duì)照品0.50g，醋酸曲安奈德0.0125g，利福平0.050g'加適量甲醇溶解，轉(zhuǎn)入50mL棕色量瓶，加甲醇定容到刻度，即為混合對(duì)照品儲(chǔ)備液。供試品溶液精密量取炎菌清搽劑3mL，轉(zhuǎn)入25mL棕色量瓶中'加甲醇稀釋到刻度'搖勻即可。陰性對(duì)照品溶液按照處方配制不加3種藥物成分的空白溶劑即成。2.2色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性色譜條件為HypersilC8(4.6mmX250mm，5nm)色譜柱；流動(dòng)相為甲醇-乙腈-0.075mol'L-l磷酸二氫鉀溶液-1.0mol.L-l枸櫞酸溶液(30:30:26:4)，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm，流速0.8mL'min-l，柱溫30'C。在上述色譜條件下，取對(duì)照品、供試品和陰性對(duì)照品溶液各20pL,分別進(jìn)樣HPLC分析，記錄色譜圖如附圖1。附圖(A)為對(duì)照品，(B)為供試品，(C)為空白對(duì)照品；色譜圖中，1.為水楊酸2.為醋酸曲安奈德3.為利福平。制劑中3種藥物成分能有效分離，水楊酸、酸醋酸曲安奈德和利福平的理論塔板數(shù)分別為9072,8571,5070,分離度分別為10.37,9.33，試驗(yàn)結(jié)果表明色譜峰分離度高，系統(tǒng)適應(yīng)性良好。陰性對(duì)照品無(wú)顯著色譜峰，表明空白溶劑不干擾供試品的檢測(cè)。2.3線性關(guān)系考察精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5,1.Q,2.0,3.0，4.0,5.0mL，分別放入25mL量瓶中，加甲醇定容到刻度，搖勻即得系列濃度的對(duì)照品溶液。分別取配制好的各濃度對(duì)照品溶液20pL，進(jìn)樣高效液相色譜，記錄峰面積積分值。分別以對(duì)照品含量X(jigTiiL-l)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值Y為縱坐標(biāo)計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線，水楊酸、醋酸曲安奈德及利福平的線性方程分別為Y=4.347X+147.835r=0.9991Y=27.402X-7.291r=0.9994Y=33.85X-89.334r=0.9996線性范圍分別為202.242022.4，5,252,20.23202.3嗎'mL-l。2.4精密度試驗(yàn)精密吸取供試品溶液，按照上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣量20nL,以各藥物成分峰面積計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD。計(jì)算得水楊酸、醋酸曲安奈德和利福平的日內(nèi)精密度RSD分別為1.4%,1.2%,0.89%,表明試驗(yàn)方法精密度良好。2.5重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)的樣品，按照"2.1"項(xiàng)下供試品溶液配制方法，制備6份供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣分析，計(jì)算含量，水楊酸、醋酸曲安奈德、利福平的RSD分別為1.2%、1.6%和0.92%。表明該試驗(yàn)方法的重復(fù)性良好。2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取相同供試樣品溶液，分別在O，1，2，4h進(jìn)樣HPLC測(cè)定水楊酸、醋酸曲安奈德、利福平的峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD。計(jì)算3種藥物成分的RSD分別為1.3%、1.5%和1.7%，表明樣品溶液在4h內(nèi)穩(wěn)定。2.7回收率試驗(yàn)取同一批空白樣品9份，按處方量的110%,100%，85%分別精密加入對(duì)照品溶液，配制成低、中、高3種濃度的溶液各3份。按照樣品測(cè)定方法測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表l。水楊酸，醋酸曲安奈德，利福平的平均回收率(n=9)分別為100.6%,97.8%禾Q100.5%。表l3種化合物成分的回收率試驗(yàn)結(jié)果(/7=3)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>2.8樣品含量測(cè)定取3個(gè)批號(hào)的炎菌清樣品，按照供試品溶液配制方法制樣，進(jìn)樣20pL高效液相色譜分析，按色譜條件測(cè)定峰面積，外標(biāo)法測(cè)定含量，計(jì)算各批號(hào)樣品標(biāo)示量的百分含量。結(jié)果見表2。表2樣品含量測(cè)定結(jié)果(％，<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>3討論3.1本試驗(yàn)將2005版《中國(guó)藥典》中檢測(cè)利福平的色譜條件略作調(diào)整'將流動(dòng)相中磷酸鹽的比例調(diào)低，將流速調(diào)整為0.8mL.min-l避免泵壓力過(guò)高，保持柱溫箱溫度控制在30'C。在該條件下搽劑中水楊酸、醋酸曲安奈德和利福平3種藥物成分能有效分離'且分離度高、色譜峰形好、分離時(shí)間短，能同時(shí)完成制劑中3種藥物成分的含量檢測(cè)。3.2對(duì)本制劑藥物成分作紫外波長(zhǎng)掃描檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，水楊酸、醋酸曲安奈德和利福平的最大吸收波長(zhǎng)分別是233，240,254nm。制劑中醋酸曲安奈德含量最低，水楊酸含量最高，為提高檢測(cè)靈敏度，應(yīng)選擇240nm作檢測(cè)波長(zhǎng)，由于水楊酸質(zhì)量濃度遠(yuǎn)大于激素的濃度，而且水楊酸的最大吸收波長(zhǎng)與240nm很接近，為避免水楊酸峰高過(guò)大而影響含量最低的醋酸曲安奈德檢測(cè)，最終選擇254nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。結(jié)果表明在該波長(zhǎng)條件下各成分峰高比例合適，線性關(guān)系良好。3.3在HPLC檢測(cè)過(guò)程中，采用四元泵在線混合流動(dòng)相時(shí)發(fā)現(xiàn)泵壓力不穩(wěn)定，有較大程度的瞬間波動(dòng)，泵壓力從160bar瞬間降落到10bar然后迅速回復(fù)到160bar，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道可能和流動(dòng)相混合過(guò)程中產(chǎn)生瞬時(shí)結(jié)晶有關(guān)。將流動(dòng)相按比例預(yù)先混合均勻，保持室溫27'C左右存放，檢測(cè)時(shí)未再出現(xiàn)泵壓力波動(dòng)情況，檢測(cè)基線平穩(wěn)，泵壓力保持恒定。3.4考察制劑的穩(wěn)定性時(shí)發(fā)現(xiàn)，水楊酸和醋酸曲安奈德穩(wěn)定性良好，在搽劑溶液中含量基本保持不變。利福平穩(wěn)定性差，隨著放置時(shí)間增長(zhǎng)，利福平在搽劑溶液中的含量降低，其氧化產(chǎn)物醌式利福平的含量增加，光照能加速這種轉(zhuǎn)化。因此在制劑生產(chǎn)過(guò)程中可采取措施延緩利福平的轉(zhuǎn)化，如將利福平單獨(dú)壓制成小片，臨用前投入藥液中混勻使用；小體積分裝確保制劑在幾天內(nèi)用完；采用不透光容器分裝；加入適當(dāng)?shù)目寡趸瘎┑却胧┛裳泳徖Ｆ降难趸?。圖1是對(duì)照品、供試品和陰性對(duì)照品HPLC色譜圖附圖中A:對(duì)照品，B:為供試品，C:為空白對(duì)照品色譜圖中，1:水楊酸；2:醋酸曲安奈德；3:利福平。9權(quán)利要求1、一種治療濕疹皮炎的炎菌清涂劑，其特征是該涂劑的配方與生產(chǎn)方法是取醋酸曲安奈德1.0g，、利福平1.0g、水楊酸20g、薄荷腦20g分別按次溶于95％乙醇400ml中，攪勻至全溶解，即加進(jìn)丙二醇300ml，、蒸餾水300ml，混合均勻，即得炎菌清涂劑產(chǎn)品。2、如權(quán)利要求1所述的一種治療濕疹皮炎的炎菌清涂劑，其特征是該涂劑的檢測(cè)方法是用高效液相色譜法，色譜條件為HypersilC8(4.6mmX250mm，5jxm)色譜柱；流動(dòng)相為甲醇-乙腈-0.075mol-L"磷酸二氫鉀溶液-1.0moH/1枸櫞酸溶液(30:30:26:4),檢測(cè)波長(zhǎng)254nm,流速0.8mL'min-l，柱溫30。C。3、如權(quán)利要求1所述的一種治療濕疹皮炎的炎菌清涂劑，其特征是該涂劑的配方醋酸曲安奈德可用醋酸地塞米松250mg代替。4、如權(quán)利要求1所述的一種治療濕疹皮炎的炎菌清涂劑，其特征是，其特征是該涂劑的配方水楊酸可用阿司匹林代替。5、如權(quán)利要求1所述的一種治療濕疹皮炎的炎菌清涂劑，其特征是該涂劑的配方中利福平可用氯霉素來(lái)替代。6、如權(quán)利要求1所述的一種治療濕疹皮炎的炎菌清涂劑，其特征是該涂劑的配方腎上腺皮質(zhì)激素類藥物曲安奈德，可采用醋酸潑尼松，醋酸潑尼松龍，醋酸氫化可的松，醋酸可的松，甲潑尼松，曲安西龍，倍他米松，氟氫可的松，氯潑尼醇，地夫可特，氟米龍，布丁奈德，莫米松，氯倍他索，氟氫松，丁氯倍他松，倍氯米松，氯氟輕松，阿氯米松，鹵米松，甲羥松，去羥米松，氟氫縮松，二氟可龍來(lái)代替。7、如權(quán)利要求1所述的一種治療濕疹皮炎的炎菌清涂劑，其特征是該涂劑的配方中廣譜抗生素利福平，也可采用氯霉素，四環(huán)素，喹諾酮類等廣譜抗生素來(lái)替代。8、如權(quán)利要求1所述的一種治療濕疹皮炎的炎菌清涂劑，其特征是該涂劑的配方消炎止痛藥水楊酸，也可采用吲哚美辛，布洛芬，非諾洛芬等消炎止痛藥來(lái)替代。全文摘要本發(fā)明公開了治療濕疹皮炎的消炎抗菌涂劑及其檢測(cè)方法，該涂劑是由腎上腺皮質(zhì)激素、廣譜抗生素、消炎止痛藥及藥物透皮吸收促進(jìn)劑組成。該制劑具有消炎、止痛、止癢、抗菌、抗真菌、抗過(guò)敏五大功效，對(duì)各類皮膚炎癥、搔癢、過(guò)敏及細(xì)菌、真菌感染均有獨(dú)到的療效?？捎糜跐裾?亞急性期/慢性期)、皮炎(脂溢性皮炎、神經(jīng)性皮炎、接觸性皮炎、過(guò)敏性皮炎、蟲咬皮炎等)，癢疹、搔癢癥、藥疹、汗皰疹、手足癬、銀屑病、指掌角化癥、白癜風(fēng)、玫瑰糠疹等。在研究炎菌清涂劑的同時(shí)，我們也建立了一種方法簡(jiǎn)單可靠的炎菌清涂劑藥品檢測(cè)方法，采用高效液相色譜法，在檢測(cè)波長(zhǎng)254nm等條件下可以同時(shí)準(zhǔn)確地檢測(cè)3種主要藥物的含量。文檔編號(hào)A61K31/045GK101574353SQ200810182060公開日2009年11月11日申請(qǐng)日期2008年11月24日優(yōu)先權(quán)日2008年11月24日發(fā)明者呂應(yīng)年,怡吳,鐵吳,燎崔申請(qǐng)人:廣東醫(yī)學(xué)院