專利名稱：藻酸雙酯鈉在制備改善心臟功能藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥的醫(yī)藥用途，主要涉及中藥藻酸雙酯鈉在制備改善心臟功能 藥物中的應(yīng)用，適合制備心臟缺血再灌注后預(yù)防心臟功能損傷藥物的場(chǎng)合。
技術(shù)背景心臟功能不全是冠心病的嚴(yán)重并發(fā)癥，臨床上冠心病除以心絞痛和急性心 肌梗死表現(xiàn)外，相當(dāng)一部分病人逐漸出現(xiàn)不同程度的心臟功能不全,且有較多病 人以頑固性心力衰竭居多。諸多抗心力衰竭藥物療效不甚理想，特別是對(duì)由急 性冠狀動(dòng)脈綜合征引起的心臟損傷和死亡。臨床上很多情況如冠脈成形術(shù)、溶 栓療法、冠狀動(dòng)脈旁路手術(shù)等，都面臨著缺血再灌注后心臟功能損傷的問(wèn)題。 為此，怎么防止局部缺血再灌注損傷是相當(dāng)受關(guān)注的問(wèn)題。目前這方面的治療 主要依賴西藥，而在利用中藥保護(hù)心臟功能方面的研究未有突破性進(jìn)展。因此， 如何發(fā)展祖國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)，利用我國(guó)特有資源，發(fā)揮中醫(yī)藥在保護(hù)冠心病并發(fā)心 臟功能不全方面的治療特色，具有重要的臨床意義和社會(huì)效益。鑒于這樣的背 景進(jìn)行了本發(fā)明，其目的是提供用于由局部缺血再灌注引起的心臟功能障礙或 心肌損傷的預(yù)防或治療劑，其通過(guò)不同于現(xiàn)有療法的機(jī)理呈現(xiàn)出有效性。藻酸雙酯鈉是以海藻酸為基礎(chǔ)原料，用化學(xué)方法引入有效基團(tuán)合成而得的 一種硫酸多糖，為半合成海洋藥物，屬酸性多糖類物質(zhì)，藻酸雙酯鈉的平均分子量在12000—17000，它是一種線型陰離子聚電介質(zhì)，具有類肝素樣的生 理活性，但無(wú)肝素樣的毒副作用，乃新型類肝素海洋藥物[1]。既往臨床實(shí)踐及 實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，藻酸雙酯鈉具有陰離子聚電介質(zhì)的線型結(jié)構(gòu)，可增加紅細(xì)胞表 面的陰性電荷，增強(qiáng)相互間的排斥力、故能阻抗紅細(xì)胞之間或紅細(xì)胞與血管壁 之間的粘附，因而具有明顯的降低血液粘度的作用，同時(shí)具有抗凝血作用，其 效力相當(dāng)于肝素的1/3 1/2，有明顯的降血脂、擴(kuò)張血管、降血壓及降血糖等 功能[2，3'4]。藻酸雙酯鈉臨床主要用于缺血性腦血管病如腦血栓、腦栓塞、短暫 性腦缺血發(fā)作及心血管疾病如高血壓病、高脂血癥、冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟 病、心絞痛等疾病的防治。此外，也可用于治療慢性阻塞性肺疾病、肺源性心 臟病、腎病綜合征、皮膚病、糖尿病周圍神經(jīng)病、播散性血管內(nèi)凝血、慢性腎 小球腎炎及出血熱等[5]。但是，迄今為止，并不清楚藻酸雙酯鈉是否可以作為 一種直接保護(hù)缺血再灌注后心臟功能損傷的治療藥物，因此，有待在此基礎(chǔ)上對(duì)藻酸雙酯鈉進(jìn)行二次開發(fā)。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供中藥藻酸雙酯鈉在制備改善心臟功能藥物中的應(yīng)用。 所述藻酸雙酯鈉的應(yīng)用主要是在制備心臟缺血再灌注后預(yù)防心臟功能損 傷藥物中的應(yīng)用。為觀察藻酸雙酯鈉對(duì)缺血再灌注后心臟心臟功能的直接保護(hù)作用，本發(fā)明采用離體心臟灌流技術(shù)(Langendorff模型)，以排除活體實(shí)驗(yàn)中各種神經(jīng)、體 液因素對(duì)心臟功能的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，藻酸雙酯鈉能夠直接改善缺血再灌注后 的心臟功能不全，且該作用與藻酸雙酯鈉拮抗炎癥因子TNF-a的表達(dá)，抑制與 炎癥有關(guān)的通路p38和JNK通路的激活有關(guān)。本發(fā)明所述的藻酸雙酯鈉可與藥效學(xué)允許的藥用賦形劑組合制備成制劑。本發(fā)明所述的藻酸雙酯鈉與藥用賦形劑制備的制劑形式主要包括液體制 劑和固體制劑。固體制劑主要包括顆粒劑、片劑、膠囊劑(含軟膠囊)、滴丸 劑。液體制劑主要包括口服液體制劑和注射液體制劑。所述制劑的給藥形式主要包括口服給藥和靜脈給藥。本發(fā)明的有益效果是1)對(duì)中藥藻酸雙酯鈉的藥理作用進(jìn)行二次開放， 拓展了藻酸雙酯鈉的藥用范圍；2)利用藻酸雙酯鈉的改善心臟功能作用，將 藻酸雙酯鈉應(yīng)用于各種心臟缺血再灌注后心臟功能不全情況的治療。


圖1是實(shí)驗(yàn)步驟的具體圖解。圖2是藻酸雙酯鈉對(duì)離體心臟功能各指標(biāo)的影響。圖3是藻酸雙酯鈉對(duì)離體缺血再灌注后心臟冠脈流出液中心臟損傷標(biāo)志物 CK和LDH釋放的影響。圖4是藻酸雙酯鈉對(duì)離體心臟組織和心臟灌流液中TNF-a量的影響。圖5是藻酸雙酯鈉對(duì)炎癥相關(guān)通路p38， JNK和ERK通路表達(dá)的影響。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明結(jié)合實(shí)施例和附圖作進(jìn)一 步的說(shuō)明。實(shí)施例1大鼠離體心臟全心缺血/再灌注模型 (1)實(shí)驗(yàn)藥物藻酸雙酯鈉注射液為青島海爾藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，原藥(50 g丄—1)以純水 為溶劑，臨用前以Krebs-Henseleit (KH, mmol'L": NaCl 118.3，KC1 4.74，K2HP04 1.18， MgS04 1.2， NaHC03 24.9， CaCl2 1.25，葡萄糖ll.l)液稀釋至所需濃度的藻酸雙酯鈉溶液備用。(2)實(shí)驗(yàn)步驟 清潔級(jí)雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，體重250 300g。 大鼠擊昏脫頸髓后仰臥固定于鼠板上，開胸暴露心臟，快速取出心臟置于 盛4'CKH液的培養(yǎng)皿中使其暫時(shí)冷停跳。充分暴露其主動(dòng)脈根部，將離體心臟 懸掛于Langendor璃體心臟灌流裝置上行主動(dòng)脈逆行恒壓[100cmH20(1 cmH20=0.098 kPa)]灌注KH液。37°〇恒溫并以95%02和5%(202混合氣體持續(xù)充 氣。心臟剪去左心耳，經(jīng)左房插入尖端帶有水囊的導(dǎo)管至左室，然后通過(guò)壓力 傳感器，接MEDLAB系統(tǒng)，通過(guò)微調(diào)注水器調(diào)節(jié)左心室舒張末壓(left ventricular end diastolic pressure, LVEDP)維持在4 8 mmHg范圍。記錄左心室發(fā)展峰壓 (left ventricular developed pressure, LVDP)、 LVEDP、左室內(nèi)壓等容相最大上 升及下降速率(+dp/dtmax， -dp/dtmax)和心率(heart rate, HR)。記錄冠脈流量 (coronary flow, CF)。實(shí)驗(yàn)大鼠分組如下所有心臟在干預(yù)前先給予20 min的KH液灌注平衡期，然后做以下分組 (1)，正常對(duì)照組，給予KH液灌注60min (Al組)；(2)缺血對(duì)照組，20 min 全心缺血期后再給予60min的KH液復(fù)灌期(A2組)；(3)藻酸雙酯鈉組，20 min 全心缺血期后再給予含藻酸雙酯鈉0.3 mg/L (A3組)，1 mg/L (A4組)，3 mg/L (A5 組)，10mg/L(A6組)，30mg/L(A7組)，或100mg/L(A8組)的KH液復(fù)灌60 min。連續(xù)記錄各項(xiàng)心臟功能指標(biāo)，參見圖l，圖中a:平衡期；b: KH液灌注期； C:全心缺血期；d: KH液復(fù)灌期；e:含各濃度藻酸雙酯鈉的KH液復(fù)灌期。實(shí)施例2藻酸雙酯鈉對(duì)大鼠離體心臟缺血再灌注后心臟功能的影響(1) 記錄平衡20min時(shí)的心臟功能各項(xiàng)指標(biāo)。對(duì)正常對(duì)照組大鼠，平衡 后再灌注60 min期間每10 min記錄一次心臟功能指標(biāo)。對(duì)缺血對(duì)照組和藻酸雙 酯鈉組缺血后再灌注的60 min期間每10 min記錄一次心臟功能指標(biāo)。同時(shí)收集 冠脈流出液測(cè)定其中的CK和LDH的含量。(2) 結(jié)果參見圖2、圖3，全心缺血再灌注后和正常對(duì)照組相比，LVDP， +dp/dtmax， -(1 他11^乂降低，LVEDP升高，CF減少，HR無(wú)明顯改變，CK、 LDH釋放進(jìn) 入冠脈流出液的量顯著增多。在藻酸雙酯鈉治療組觀察到，和缺血對(duì)照組相比， 1 30mg/L的藻酸雙酯鈉再灌注60min使得LVDP， +dp/dtmax， -dp/dtmax升高，LVEDP降低，CF增加，HR無(wú)明顯改變，，CK、 LDH釋放進(jìn)入冠脈流出 液的量減少。0.3 mg/L的藻酸雙酯鈉對(duì)上述各項(xiàng)心臟功能無(wú)明顯改善作用。100 mg/L的藻酸雙酯鈉對(duì)心臟功能有抑制作用，應(yīng)避免使用。實(shí)施例3藻酸雙酯鈉對(duì)大鼠心臟組織和冠脈流出液中TNF-a含量的影響(1) 取正常對(duì)照組平衡后KH液灌流30 min和60 min時(shí)的冠脈流出液， 以及缺血組再灌注后30 min和60 min的冠脈流出液，一20 'C保存。實(shí)驗(yàn)結(jié)束 后將心臟迅速標(biāo)記稱重，一70"C凍存。取新鮮標(biāo)本每個(gè)樣本各100mg，抽提 全蛋白，測(cè)濃度后一7(KC凍存?zhèn)溆谩y(cè)定收集的冠脈流出液和心臟組織中的 TNF-a含量。(2) 結(jié)果參見圖4，缺血再灌注后心臟組織和冠脈流出液中的TNF-a含量均明顯上 升，1 30 mg/L的藻酸雙酯鈉治療降低了 TNF-a的表達(dá)。0.3 mg/L和100 mg/L 的藻酸雙酯鈉對(duì)TNF-a的表達(dá)無(wú)明顯影響。實(shí)施例4藻酸雙酯鈉對(duì)大鼠心臟p38， JNK和ERK通路的影響(1) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將心臟迅速標(biāo)記稱重，一70。C凍存。取新鮮標(biāo)本每個(gè) 樣本各100mg，抽提全蛋白，測(cè)濃度后一7(TC凍存?zhèn)溆?。?0嗎蛋白于8 % SDS-PAGE電泳后，轉(zhuǎn)至PVDF膜。用5%脫脂牛奶室溫封閉1 h，然后與 磷酸化p38單抗(l: 1000)，磷酸化JNK單抗(1: lOOO)或磷酸化ERK單抗(h 1000)4'C孵育過(guò)夜，之后與羊抗兔二抗(h 2500)和GAPDH(1: IOOOO)室溫孵 育lh， ECL試劑顯影檢測(cè)陽(yáng)性信號(hào)。以GAPDH表達(dá)水平作為內(nèi)參。(2) 結(jié)果參見圖5，全心缺血再灌注后和正常對(duì)照組相比，磷酸化p38和磷酸化JNK 的表達(dá)都增強(qiáng)。1 30 mg/L的藻酸雙酯鈉再灌注60 min后，磷酸化p38和磷 酸化JNK的表達(dá)均有減弱，但和正常對(duì)照組相比未降至正常水平。0.3 mg/L 和100 mg/L的藻酸雙酯鈉對(duì)磷酸化p38和磷酸化JNK的表達(dá)無(wú)影響。磷酸化 ERK在各組的表達(dá)均無(wú)差異。上述這些結(jié)果顯示出藻酸雙酯鈉對(duì)心臟缺血再灌注損傷引起的心臟功能 惡化和心肌損傷有保護(hù)作用。此外，藻酸雙酯鈉發(fā)揮該保護(hù)作用的有效濃度范 圍為1 30 mg/L。低于1 mg/L的劑量無(wú)明顯保護(hù)作用。100 mg/L的劑量對(duì)心 臟功能有抑制作用。
權(quán)利要求
1. 一種藻酸雙酯鈉在制備改善心臟功能藥物中的應(yīng)用，其特征是在制備心臟缺血再灌注后預(yù)防心功能損傷藥物中的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藻酸雙酯鈉的應(yīng)用，其特征是所述藥物的制 劑形式主要包括液體制劑和固體制劑。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藻酸雙酯鈉的應(yīng)用，其特征是固體制劑主要 包括顆粒劑、片劑、膠囊劑、滴丸劑。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藻酸雙酯鈉的應(yīng)用，其特征是液體制劑主要 包括口服液體制劑和注射液體制劑。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藻酸雙酯鈉的應(yīng)用，其特征是所述藥物的給 藥方式包括口服給藥和注射給藥。
全文摘要
本發(fā)明提供中藥藻酸雙酯鈉在制備改善心臟功能藥物中的應(yīng)用。主要是在制備心臟缺血再灌注后預(yù)防心臟功能損傷藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的藻酸雙酯鈉能夠直接改善缺血再灌注后的心臟功能不全，且該作用與藻酸雙酯鈉拮抗炎癥因子TNF-α的表達(dá)，抑制與炎癥有關(guān)的通路p38和JNK通路的激活有關(guān)。本發(fā)明制備的藥物制劑形式主要包括液體制劑和固體制劑。本發(fā)明對(duì)中藥藻酸雙酯鈉的藥理作用進(jìn)行二次開放，拓展了藻酸雙酯鈉的藥用范圍；并利用藻酸雙酯鈉的改善心臟功能作用，將藻酸雙酯鈉應(yīng)用于制備治療各種心臟缺血再灌注后心臟功能不全情況的藥物。
文檔編號(hào)A61P9/10GK101284013SQ200810061910
公開日2008年10月15日 申請(qǐng)日期2008年5月12日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月12日
發(fā)明者瑩 楊, 胡申江 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)