專利名稱：三七皂苷r1對微循環(huán)障礙引發(fā)的疾病的預防和治療的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及中藥產品三七皂苷Rl的新用途，特別涉及三七皂苷Rl對微循環(huán)
障礙引發(fā)的疾病的預防和治療作用。
背景技術：
缺血再灌注損傷是介入療法、外科手術、溶栓后出現損傷的主要病理基礎。 缺血再灌注后白細胞與血管內皮細胞黏附、肥大細胞脫顆粒是血管損傷的主要病 理環(huán)節(jié)。
微循環(huán)是包括細動脈、毛細血管、細靜脈在內的血管床，占體內血管的90%， 是維持新陳代謝的重要部分。高脂血癥、高血壓、感染、精神刺激、跌打損傷、 手 術、介入治療等都可以引起微循環(huán)障礙。微循環(huán)障礙包括血管徑變化、過氧化 物產生、血管內皮粘附因子ICAM-1、白細胞粘附因子CDllb/CD18表達、白細胞 與血管內皮細胞粘附、血漿白蛋白外漏、血管外肥大細胞脫顆粒釋放TNF-a、組 織胺、5羥色胺、炎性因子等血管活性物質、以及形成血拴、出血等多環(huán)節(jié)變化 的復雜過程。
中藥三七為五加科植物三七(Araliaceae，三七)的干燥根，在中國、韓國、 日本及其它亞洲國家廣泛用于治療微循環(huán)障礙相關疾病，如心血管疾病、腦血管 疾病和肝功能障礙等。三七含有30多種不同類型的皂苷類化合物，其中人參皂 苷Rgl (Rgl)，人參皂苷Rbl (Rbl)和三七皂苷R1 (Rl)較為常見。研究已經 證實，三七中的皂苷類化合物(PNS)可以改善缺血-再灌注誘導的肝臟微循環(huán)障 礙，抑制血小板凝集和血小板粘附分子表達，以及改善血管上皮功能。另有研究 報道，三七中的皂苷類化合物可以抑制大鼠白細胞與腸系膜微靜脈的粘附，脂多 糖(LPS)誘導的嗜中性粒細胞粘附分子CDllb和CD18表達。Rl可以抑制抑制 蛋白kB (I-kB)降解，從而抑制脂多糖誘導的血管上皮細胞腫瘤壞死因子-a 表達。三七皂苷R1是三七主要活性成份，三七皂苷R1的結構如下<formula>formula see original document page 4</formula>
肥大細胞脫顆粒是一型變態(tài)反應的主要病理環(huán)節(jié)，是花粉病，皮膚病，哮喘， 腹瀉的主要病理基礎。
目前，尚不清楚三七皂苷Rl對心腦血管疾病的主要病理變化一缺血再灌注 引起的微循環(huán)障礙是否有預防和治療作用。本發(fā)明經過實驗發(fā)現三七皂甙Rl可 以改善缺血再灌注引起的腸系膜微循環(huán)障礙，從而達到治療和/或預防微循環(huán)障 礙引發(fā)的疾病的作用，并提供一種中藥藥物制劑。

發(fā)明內容
本發(fā)明發(fā)現中藥產品三七皂苷Rl的新用途，特別涉及三七皂苷Rl對缺血再 灌注引起的腸系膜微循環(huán)障礙的預防和治療改善作用。從而將其應用于治療和/
或預防微循環(huán)障礙引發(fā)的疾病，如、高脂血癥、高血壓、感染、精神刺激、跌 打損傷、花粉病，皮膚病，哮喘，腹瀉、手術或介入治療等引發(fā)的微循環(huán)障礙。
本發(fā)明發(fā)現，三七皂苷Rl預給藥和后給藥可以抑制再灌注后腸系膜細靜脈
內白細胞的滾動和粘附，抑制肥大細胞脫顆粒。
本發(fā)明所述三七皂甙Rl，是中藥三七中的一種成分，可以從市場上買到，
(如南京青澤醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司，上?？稻呕び邢薰居猩a)，也可以根據現有技術制備(如中國專利01136697. 4從三七生粉提取分離三七皂甙Rl 、 人參皂甙Re、三七素的方法)，符合藥用標準即可，優(yōu)選純度>50%，更優(yōu)選純度 >90%，最優(yōu)選純度〉98%。
本發(fā)明所述的藥物，是用上述三七皂甙Rl作為藥物活性成分制備成的藥物 組合物。
本發(fā)明的藥物組合物，根據需要可以含有藥物可接受的載體，其中三七皂甙 Rl作為藥物活性成分，其在制劑中所占重量百分比可以是O. 1-99.9%，其余為藥 物可接受的載體。本發(fā)明的藥物組合物，以單位劑量形式存在，所述單位劑量形 式是指制劑的單位，如片劑的每片，膠囊的每粒膠囊，口服液的每瓶，顆粒劑每 袋，注射劑的每支等。
本發(fā)明的藥物組合物可以是任何可藥用的劑型，這些劑型包括片劑、糖衣 片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含 劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、 栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜劑、噴霧劑、滴劑、貼劑。
本發(fā)明的藥物組合物，其口服給藥的制劑可含有常用的賦形劑，諸如粘合劑、 填充劑、稀釋劑、壓片劑、潤滑劑、崩解劑、著色劑、調味劑和濕潤劑，必要時 可對片劑進行包衣。
適用的填充劑包括纖維素、甘露糖醇、乳糖和其它類似的填充劑。適宜的崩 解劑包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羥基乙酸淀粉鈉。適宜的潤 滑劑包括，例如硬脂酸鎂。適宜的藥物可接受的濕潤劑包括十二烷基硫酸鈉。 可通過混合，填充，壓片等常用的方法制備固體口服組合物。進行反復混合可使 活性物質分布在整個使用大量填充劑的那些組合物中。
口服液體制劑的形式例如可以是水性或油性懸浮液、溶液、乳劑、糖槳劑或 酏劑，或者可以是一種在使用前可用水或其它適宜的載體復配的干燥產品。這種 液體制劑可含有常規(guī)的添加劑，諸如懸浮劑，例如山梨醇、糖漿、甲基纖維素、 明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠或氫化食用脂肪，乳化劑， 例如卵磷脂、脫水山梨醇一油酸酯或阿拉伯膠；非水性載體(它們可以包括食用 油)，例如杏仁油、分餾椰子油、諸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐 劑，例如對羥基苯甲酯或對羥基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常規(guī)的香味劑或著色劑。
對于注射劑，制備的液體單位劑型含有本發(fā)明的活性物質和無菌載體。根據 載體和濃度，可以將此化合物懸浮或者溶解。溶液的制備通常是通過將活性物質 溶解在一種載體中，在將其裝入一種適宜的小瓶或安瓿前過濾消毒，然后密封。 輔料例如一種局部麻醉劑、防腐劑和緩沖劑也可以溶解在這種載體中。為了提高 其穩(wěn)定性，可在裝入小瓶以后將這種組合物冰凍，并在真空下將水除去。
本發(fā)明的藥物組合物，在制備成藥劑時可選擇性的加入適合的藥物可接受的 載體，所述藥物可接受的載體選自甘露醇、山梨醇、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、 硫代硫酸鈉、鹽酸半胱氨酸、巰基乙酸、蛋氨酸、維生素C、 EDTA二鈉、EDTA 鈣鈉， 一價堿金屬的碳酸鹽、醋酸鹽、磷酸鹽或其水溶液、鹽酸、醋酸、硫酸、 磷酸、氨基酸、氯化鈉、氯化鉀、乳酸鈉、木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右 旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纖維素及其衍生物、 藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯垸酮、甘油、土溫80、瓊脂、碳酸鈣、碳酸氫鈣、
表面活性劑、聚乙二醇、環(huán)糊精、e —環(huán)糊精、磷脂類材料、高嶺土、滑石粉、
硬脂酸鈣、硬脂酸鎂等。
本發(fā)明的藥物制劑組合物在使用時根據病人的情況確定用法用量。
本發(fā)明所述的治療用途是通過以下實驗證明的 材料和方法
三七皂甙R1 (簡稱R1，純度>98%)由天津天士力集團(天津，中國)提供。 實驗動物
200 250g的Wister雄性大鼠由北京大學醫(yī)學部動物中心提供，試驗前禁 食12小時，可以自由飲水，動物合格證號SCXK(京)2002- 0001。動物被置于 常規(guī)詞養(yǎng)環(huán)境，動物的處理按照北京大學醫(yī)學部規(guī)定的動物處理和倫理方針進 行。
缺血-再灌注模型的建立及給藥。
缺血-再灌注組(I/R):按30mg/kg體重的用量，取sodium pentobarbital, 施腹腔注射進行麻醉。在大鼠的右側頸靜脈插入3號聚乙烯靜脈注射管，并留置。 沿腹正中線切開20-30mm，輕柔地將近回盲部的回腸取出腹外，展開至有載玻片 的觀察臺上。用37r的Krebs-Ringer緩沖液連續(xù)地在展開的腸系膜上滴加。腸系膜微循環(huán)動態(tài)用置于37。C恒溫箱的倒立生物顯微鏡(Diaphot TMD-2S, Nikon， 東京)，在12V, 100W的白光條件下觀察。在20倍物鏡頭下選擇觀察部位，用有時 間顯示的錄像系統(tǒng)，將觀察內容用S-VHS錄像帶紀錄保存。選擇的觀察部位為直 徑在25-35um之間的細靜脈非分枝部(長度在200 y m以上)的微循環(huán)血管床。經 過10分鐘的基礎觀察之后，用聚乙烯管結扎觀察部環(huán)流的前腸系膜動靜脈10分 鐘，再解除結扎,將時間調至0處，連續(xù)觀察同一視野的微循環(huán)動態(tài)30分鐘。
假手術組(Sham):將大鼠麻醉開腹，不作缺血-再灌注處理。
三七皂苷Rl預給藥組(R1+I/R):在缺血20分鐘前經頸靜脈按5 mg/kg/h的 給藥量連續(xù)靜滴入Rl至觀察結束。
三七皂苷Rl后給藥組(I/R+R1):在缺血再灌注10分鐘后經頸靜脈按5 mg/kg/h的給藥量連續(xù)靜滴入R1至觀察結束。
每組6只大鼠。 微循環(huán)動態(tài)的觀察
微循環(huán)動態(tài)用連接于倒立生物顯微鏡的CCD攝像系統(tǒng)(CC-090, Flovel,東京) 和SIT螢光攝影機(C-2400-08、濱松7才卜二夕^、濱松)連續(xù)紀錄。 血管徑的測定用video measuring gauge(IV-560, *々二 4 、東京)經時地測血 管徑。
沿細靜脈滾動白細胞數經時地計數所選細靜脈10秒鐘內滾動的白細胞 數，為滾動白細胞。
粘附于細靜脈管壁的白細胞數計數:在紀錄的圖像上，經時地計數在細靜脈 管壁的同一部位停留30秒以上的白細胞(粘附白細胞)，計算100u m長細靜脈上 粘附的白細胞數。
肥大細胞脫顆粒率在缺血-再灌注30分后，將0. 1 % toluidine blue滴加 在觀察部位，用CCD攝像機紀錄。用20倍的對物鏡計數5個視野的脫顆粒和未 脫顆粒的肥大細胞數，計算脫顆粒的肥大細胞占計數的整個肥大細胞數的百分比， 為肥大細胞脫顆粒率。 統(tǒng)計處理
各測定值用one—way analysis of variance (A,A)處理，各組經時變化 用T檢驗，各組間比較用F檢驗。各測定值用均值土標準誤表示，P 〈 0. 05為有顯著意義。 結果
1、 三七皂苷Rl預給藥和后給藥對再灌注后大鼠腸系膜細動脈和細靜脈血管 經的影響。
在本觀察時間內，缺血再灌注組大鼠細動脈和細靜脈血管徑沒有發(fā)生顯著的 變化。Rl的預給藥和后給藥都沒有引起再灌注后大鼠腸系膜細動脈和細靜脈血 管徑的顯著變化。
2、 三七皂苷Rl預給藥和后給藥對再灌注后大鼠腸系膜細靜脈內滾動白細胞
的抑制作用。
如圖1所示，Sham組在本觀察結束時僅有少量的白細胞沿細靜脈滾動。I/R 組大鼠在再灌注早期就有白細胞沿細靜脈滾動，20分時達到高峰，以后滾動的 白細胞數量逐漸減少。Rl預給藥在再灌注10-20分期間內顯著地抑制了白細胞 沿細靜脈的滾動。在再灌注10分，己經有白細胞沿細靜脈滾動時，再投入R1， 在給藥10分(再灌注20分)后，滾動顯著地減少。該結果提示Rl可以抑制和 改善再灌注引起的白細胞沿細靜脈滾動。
3、 三七皂苷Rl預給藥和后給藥對再灌注后大鼠腸系膜細靜脈粘附白細胞的 抑制作用。
如圖2所示，Sham組在本觀察結束時僅有少量的白細胞粘附于細靜脈。I/R 組大鼠在再灌注早期就有大量的白細胞粘附于細靜脈管壁，隨著再灌注的進行， 黏附白細胞逐漸增多。Rl預給藥在再灌注開始時就顯著地抑制了白細胞的粘附。 在再灌注10分，已經有白細胞黏附于細靜脈壁時，再投入R1，在給藥10分(再 灌注20分)后，黏附白細胞顯著地減少。該結果提示R1不但可以抑制再灌注 引起的白細胞與血管內皮細胞的黏附，還可以解離已經黏附于血管壁上的白細 胞。
4、 三七皂苷Rl預給藥和后給藥對再灌注后大鼠腸系膜間質肥大細胞脫顆 粒的抑制作用。
圖3示Rl預給藥和后給藥對再灌注后腸系膜間質肥大細胞脫顆粒的影響。 在再灌注30分后、與假手術組比、1/R組的肥大細胞脫顆粒率顯著增加。Rl預 給藥和后給藥都可以顯著地抑制肥大細胞脫顆粒。該結果提示R1具有抑制肥大細胞脫顆粒的作用。
缺血再灌注后大鼠腸細膜細動靜脈血管徑沒有顯著變化，而滾動和粘附在細 靜脈管壁上的白細胞數、血管外間質組織中的肥大細胞脫顆粒率顯著增加。三七 皂苷Rl的預給藥和后給藥都可以抑制白細胞的滾動和粘附，抑制肥大細胞脫顆 粒。
總之，本發(fā)明證明，三七皂苷R1可以預防和治療缺血再灌注引起的微循環(huán) 障礙。從而將其應用于治療和/或預防微循環(huán)障礙引發(fā)的疾病，如過敏性疾病、 高脂血癥、高血壓、感染等以及因精神刺激、跌打損傷、花粉病，皮膚病，哮喘， 腹瀉、手術或介入治療等引發(fā)的微循環(huán)障礙。


圖1表示Sham組在本觀察結束時僅有少量的白細胞沿細靜脈滾動。 圖2表示Sham組在本觀察結束時僅有少量的白細胞粘附于細靜脈。 圖3表示Rl預給藥和后給藥對再灌注后腸系膜間質肥大細胞脫顆粒的影響。
具體實施例方式
以下通過實施例進一步說明本發(fā)明，但不作為對本發(fā)明的限制。
實施例1
片劑
處方三七皂苷Rl 105g 微晶纖維素55g 微粉硅膠3g
硬脂酸鎂1.5g
制法取原、輔料分別過100目篩；取三七皂苷R1、硫酸鈣、微晶纖維 素，混勻，用60%乙醇適量作為粘合劑制軟材，過20目篩制顆粒，60°C 干燥，取出，過30目篩整粒，加入微粉硅膠及硬脂酸鎂，混勻，壓片， 制成1000片，即得。 實施例處方三七皂苷Rl 85g 硫酸鈣118g 微晶纖維素37g 微粉硅膠2.4g 硬脂酸鎂1.2g
制法取原、輔料分別過100目篩；取三七皂苷R1、硫酸鈣、微晶纖維 素，混勻，用60%乙醇適量作為粘合劑制軟材，過20目篩制顆粒，60°C 干燥，取出，過30目篩整粒，加入適量微粉硅膠及硬脂酸鎂，混勻，壓片，制成1000片，即得。 實施例處方三七皂苷Rl 133g 硫酸鈣208g 微晶纖維素68g 微粉硅膠5g 硬脂酸鎂2.5g
制法取原、輔料分別過100目篩；取三七皂苷R1、硫酸鈣、微晶纖維 素，混勻，用60%乙醇適量作為粘合劑制軟材，過20目篩制顆粒，60°C 干燥，取出，過30目篩整粒，加入適量微粉硅膠及硬脂酸鎂，混勻，壓 片，制成1000片，即得。 實施例4 膠囊
取三七皂甙Rl 60g，加入適量淀粉，硬脂酸鎂等輔料，制粒，整粒，裝入1號 膠囊，即得。 實施例5 口服液
取三七皂甙Rl 8g，加入適量蔗糖，防腐劑，加水到1000ml，分裝成10ml —支，
即得口服液。
實施例6
顆粒劑
取三七皂甙R1 80g，加入適量糊精、甜菊素，干式制粒，整粒，分裝，即得。
實施例7
注射劑
三七皂甙R1 7g加水溶解，另氯化鈉、對羥基苯甲酸乙酯加熱水溶解，混勻， 調pH值。注射用水稀釋至1000ml，用中空纖維膜濾過，灌裝，滅菌，即得。 實施例8 注射劑
三七皂甙R1 2g加水溶解，另氯化鈉、對羥基苯甲酸乙酯加熱水溶解，混勻， 調pH值。注射用水稀釋至1000ml，用中空纖維膜濾過，灌裝，滅菌，即得。
權利要求
1、三七皂苷R1或其藥物組合物在制備一種治療和/或預防微循環(huán)障礙引發(fā)的疾病的藥物中的應用。
2、 權利要求1的應用，其特征在于，三七皂苷R1預給藥和后給藥對再灌注后腸 系膜細靜脈內滾動白細胞有抑制作用。
3、 權利要求1的應用，其特征在于，三七皂苷R1預給藥和后給藥對再灌注后腸 系膜細靜脈粘附白細胞有抑制作用。
4、 權利要求l的應用，其特征在于，三七皂苷R1預給藥和后給藥對再灌注后腸 系膜間質肥大細胞脫顆粒有抑制作用。
5、 權利要求1的應用，所述三七皂苷R1是從中藥三七中提取獲得的，純度〉50%。
6、 權利要求1的應用，所述三七皂苷R1是從中藥三七中提取獲得的，純度〉90%。
7、 權利要求l的應用，所述應用是對高脂血癥、高血壓、感染、精神刺激、跌 打損傷、花粉病，皮膚病，哮喘，腹瀉、手術或介入治療引發(fā)的微循環(huán)障礙 的應用。
8、 權利要求l的應用，其特征在于，所述藥物組合物，以三七皂甙R1作為藥 物活性成分，同時含有藥物可接受的載體。
9、 權利要求8的應用，其特征在于，所述藥物組合物可作為任何可藥用的劑型。
10、 權利要求9的應用，其特征在于，所述劑型包括片劑、糖衣片劑、薄 膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、 顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、 栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及中藥產品三七皂苷R1的新用途，特別涉及三七皂苷R1對微循環(huán)障礙引發(fā)的疾病的預防和治療作用。
文檔編號A61K31/7028GK101574357SQ20081005299
公開日2009年11月11日 申請日期2008年5月5日 優(yōu)先權日2008年5月5日
發(fā)明者劉育英, 芳 王, 陳衛(wèi)星, 韓晶巖 申請人:天津天士力制藥股份有限公司