專利名稱：：燈盞乙素苷元氨基甲酸酯類衍生物、其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬藥物化學(xué)領(lǐng)域，涉及一類新型的燈盞乙素苷元衍生物，具體涉及燈盞乙素苷元4，-位氨基甲酸酯類衍生物、其制備方法和在制備治療血管性癡呆、阿爾茨海默氏病(早老性癡呆)等神經(jīng)退行性疾病藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：血管性癡呆(VascularDementia,VD)是由各種類型的腦血管疾病(包括缺血性腦血管病、出血性腦血管疾病、急性和慢性缺氧性腦血管疾病等)所致的智能及認(rèn)知功能障礙的臨床綜合征，其主要臨床表現(xiàn)包括認(rèn)知能力、記憶力和社會(huì)生活能力的減退以及情感、性格的改變，是一種慢性進(jìn)行性疾病。在中國、日本等亞洲國家血管性癡呆是老年期癡呆的第一位原因；隨著世界人口向老齡化的不斷推進(jìn)，腦血管病日益增多，血管性癡呆發(fā)病率有逐漸上升的趨勢，嚴(yán)重影響老年人的工作和生活質(zhì)量，并給社會(huì)和家庭帶來沉重的經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)。因此，VD已成為當(dāng)今老年醫(yī)學(xué)與精神醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中一個(gè)重要的研究熱點(diǎn)。血管性癡呆由于發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，尚無能夠阻斷疾病發(fā)展的藥物，目前臨床治療以改善腦部血液循環(huán)和腦代謝，加強(qiáng)腦部營養(yǎng)為主。近年來，國內(nèi)外研究表明，在VD患者表現(xiàn)認(rèn)知功能損傷的同時(shí)也經(jīng)常伴有膽堿能系統(tǒng)的異常。VD患者海馬區(qū)ChAT陽性神經(jīng)元及纖維密度減低，腦內(nèi)不同部位的ChAT活性下降，在VD患者腦脊液中的ACh濃度明顯低于正常水平，并且其濃度降低的程度與癡呆的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)；而腦缺血可以導(dǎo)致腦內(nèi)乙酰膽堿酯酶活性上升；同時(shí)，也發(fā)現(xiàn)一些乙酰膽堿酯酶抑制劑如HuperzineA和Revastigmine，可以保護(hù)缺血造成的神經(jīng)元損傷，且可以促進(jìn)腦缺血后神經(jīng)損傷和腦功能的恢復(fù)。這表明乙酰膽堿酯酶抑制劑也可用于血管性癡呆的治療。燈盞花是菊科飛蓬屬植物短葶飛蓬5"w'sca;^e(V朋d//aMMa^的全草，又名燈盞細(xì)辛、燈盞菊等，主要分布于我國南方各地。二十世紀(jì)70年代經(jīng)臨床驗(yàn)證，證明燈盞花粗提物對高血壓、腦溢血、腦血栓形成、腦栓塞多發(fā)性神經(jīng)炎、慢性珠網(wǎng)膜炎及其后遺癥具有明顯療效，由此引起人們對燈盞花粗提物有效成分研究的廣泛興趣。經(jīng)過多年研究，從燈盞花中分離鑒定了多種化學(xué)成分，如吡喃酮類、黃酮類、內(nèi)酯類、氨基酸類、多糖類等，并發(fā)現(xiàn)燈盞乙素(又名野黃芩苷)是燈盞花提取物的主要活性成分，其粗提物作為心腦血管治療藥物已用于臨床；研究表明，燈盞乙素還具有抗腫瘤、抗HIV病毒、抗肝纖維化、抗老年癡呆、神經(jīng)保護(hù)等廣泛藥理活性。研究發(fā)現(xiàn)，采用燈盞花素治療VD20天后，簡易智能狀態(tài)檢查表(MMSE)，生活功能量表(ADL)，長谷川癡呆量表(HDS)，癡呆嚴(yán)重程度臨床評定量表(WMS)評分均有顯著改善，且全血粘度、血漿粘度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、纖維蛋白原等血液流變學(xué)指標(biāo)均下降，與對照組比較有顯著性差異，同時(shí)，過氧化物歧化酶(SOD)明顯上升，丙二酸(MDA)明顯下降。表明燈盞花素對VD的治療可能通過改善腦循環(huán)，增加血供，抑制再灌注蛋白激酶的激活及抑制C^+超載、減少自由基、減少興奮性氨基酸的釋放等途徑阻止細(xì)胞凋亡，減輕腦缺血再灌注損傷而起作用；同時(shí)組織學(xué)染色發(fā)現(xiàn)燈盞花素減少了海馬CA1區(qū)細(xì)胞病理改變，如細(xì)胞核固縮、細(xì)胞內(nèi)水腫及椎體細(xì)胞層排列混亂等，證明了燈盞花素使血管性癡呆大鼠的癥狀得到改善，防止了由自由基引起的神經(jīng)元損傷和鈣離子增多，對于腦血管和血管性癡呆具有神經(jīng)保護(hù)作用。此外，燈盞花素還可用于治療老年癡呆。用燈盞花素片治療老年癡呆，治療組總有效率62.85%，對照組(喜得鎮(zhèn))總有效率36%，兩組對比有顯著差異；并且還發(fā)現(xiàn)，燈盞花素能明顯改善東莨菪堿所致的小鼠學(xué)習(xí)、記憶障礙，明顯改善乙醇所致的大、小鼠記憶再現(xiàn)障礙，并使二者的學(xué)習(xí)能力明顯加強(qiáng)，與腦復(fù)素(腦活素，腦蛋白水解物)比較，作用相近或稍強(qiáng)。由于燈盞乙素存在溶解性差、生物利用度低、體內(nèi)半衰期短、且毒副作用嚴(yán)重等問題，以燈盞乙素為先導(dǎo)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，以期發(fā)現(xiàn)藥理活性及療效更理想的治療藥物將具有重要意義。對燈盞乙素的體內(nèi)代謝研究發(fā)現(xiàn)，燈盞乙素苷元為其活性代謝物，具有較強(qiáng)生物活性，因此，以燈盞乙素苷元為先導(dǎo)物，通過化學(xué)結(jié)構(gòu)修飾，在其4，-位引入乙酰膽堿酯酶抑制活性藥效基團(tuán)——氨基甲酸酯，設(shè)計(jì)了一系列燈盞乙素苷元4'-位氨基甲酸酯衍生物，希望能從抗血栓、擴(kuò)張腦血管、抗自由基、神經(jīng)保護(hù)和增強(qiáng)中樞乙酰膽堿能神經(jīng)功能等多作用靶點(diǎn)達(dá)到協(xié)同治療血管性癡呆、阿爾茨海默氏病(早老性癡呆)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一類新型的燈盞乙素苷元衍生物(燈盞乙素苷元4，-位氮基甲酸酯衍生物)；本發(fā)明的另一目的是公開該類化合物的制備方法；本發(fā)明的第三個(gè)目的是公開該類化合物在治療血管性癡呆、阿爾茨海默氏病(早老性癡呆)等神經(jīng)退行性疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所提供的燈盞乙素苷元4'-位氨基甲酸酯衍生物的化學(xué)結(jié)構(gòu)通式為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>式中R,、R2可以相同或不同，R,、R2代表H、C，C,2脂肪烷烴、C~C7脂肪環(huán)垸烴、取代的C3C7脂肪環(huán)烷烴、芳基、供電子或吸電子取代的芳基、C廣C6脂肪醇及其酯、C廣C6羧酸及其酯，或R,、R2分別與C、O及N原子環(huán)合形成四元環(huán)、五元環(huán)、六元環(huán)或七元環(huán)。本發(fā)明所提出的燈盞乙素苷元衍生物可通過以下方法制備得到<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>上述化學(xué)反應(yīng)式給出了燈盞乙素苷元4'-位氨基甲酸酯衍生物的合成方法。以燈盞乙素苷元(1)為起始原料，將其與二苯基二氯甲烷(2)反應(yīng)，得6,7-(二苯基亞甲基二氧)-5,4'-二羥基黃酮(3)，6，7-位羥基被保護(hù)的苷元分別與氨基甲酰氯或異氰酸酯(R「H時(shí))衍生物(4)縮合，得6,7-位羥基被保護(hù)的燈盞乙素苷元4，-位氨基甲酸酯衍生物(5)，所得中間體再經(jīng)催化氫解除保護(hù)基，得燈盞乙素苷元4'-位氨基甲酸酯衍生物(I)。其具體制備方法描述如下燈盞乙素苷元(1)與二苯基二氯甲烷(2)經(jīng)縮合反應(yīng)得中間體(3)，反應(yīng)中無需加入有機(jī)溶劑，其中，(1)與(2)反應(yīng)時(shí)的摩爾投料比為1.0丄0~3.0，優(yōu)選摩爾投料比為1.0:1.2~2.0;反應(yīng)溫度為100~230°C，優(yōu)選反應(yīng)溫度為150°C200°C;反應(yīng)時(shí)間為10分鐘120分鐘，優(yōu)選反應(yīng)時(shí)間為10分鐘~1小時(shí)；中間體(3)在堿性和惰性溶劑條件下分別與氨基甲酰氯或異氰酸酯(R,=H時(shí))衍生物(4)縮合，得6,7-(二苯基亞甲基二氧)-5-羥基-4'-氨基甲酸酯-黃酮衍生物(5)，其中，中間體(3)與(4)的摩爾投料比為1.0:1.0~3.0，優(yōu)選摩爾投料比為1.0:1.2~1.5;反應(yīng)所用堿為堿金屬或堿土金屬氫氧化物、堿金屬或堿土金屬碳酸鹽、堿金屬或堿土金屬碳酸氫鹽、有機(jī)叔胺類或季銨堿類(如三乙胺、三丁胺、三辛胺、吡啶、N，N-二甲基-a-苯乙胺、4-甲基嗎啉、四丁基氫氧化銨)，優(yōu)選堿為碳酸氫鈉、碳酸鉀、三乙胺、吡啶；堿用量與原料(4)的摩爾投料比為1.0~4.5:1.0，優(yōu)選摩爾投料比為1.02.0:1.0;反應(yīng)所用惰性溶劑為乙醚、四氫呋喃、ATJV-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、二氯甲烷、氯仿、C廣C8脂肪酮、苯、正庚烷、甲苯、吡啶，優(yōu)選溶劑為WiV-二甲基甲酰胺、丙酮、吡啶、四氫呋喃；反應(yīng)溫度為013(TC，優(yōu)選反應(yīng)溫度為室溫8(TC;縮合反應(yīng)時(shí)間為2小時(shí)7天，優(yōu)選反應(yīng)時(shí)間為24~48小時(shí)；中間體(5)在催化劑和溶劑作用下得燈盞乙素苷元4，-位氨基甲酸酯衍生物(I)，其中，所用催化劑為5%Pd/C、10%Pd/C、10%Pd(OH)2/C，優(yōu)選催化劑為10%Pd(OH)2/C;所用溶劑為C廣C6脂肪醇、iV,-二甲基甲酰胺、四氫呋喃，優(yōu)選溶劑為乙醇；反應(yīng)溫度為室溫10(TC，優(yōu)選反應(yīng)溫度為室溫。本發(fā)明提供的燈盞乙素苷元4'-位氨基甲酸酯衍生物(I)可與合適的無機(jī)堿通過藥學(xué)上常規(guī)成鹽方法得到其藥學(xué)上可接受的鹽，所述無機(jī)堿為堿金屬或堿土金屬氫氧化物、堿金屬或堿土金屬碳酸鹽、堿金屬或堿土金屬碳酸氫鹽均可使用。本發(fā)明的燈盞乙素苷元4'-位氨基甲酸酯衍生物進(jìn)行了如下的生物活性篩選1、乙酰膽堿酯酶抑制活性乙酰膽堿酯酶(AChE)酶源采用大鼠皮層5%勻漿(用75mmol，pH7.4，4'C磷酸緩沖液作勻漿介質(zhì))，實(shí)驗(yàn)前按10:1加4mmol丁酰膽堿酯酶(BuChE)的選擇性抑制劑四異丙基焦磷酰胺(&o-OMPA)，37。C保溫5分鐘，用比色法測定AChE活力。在梨形管中加入碘化硫代乙酰膽堿0.3mmol，0.1mol/LpH7.4磷酸鈉緩沖液1.0ml和濃度為10—4mol/L的目標(biāo)化合物DMSO溶液0.1ml，加水補(bǔ)至4ml(包括后加酶液量，每個(gè)化合物的反應(yīng)終濃度為2.5xl0—6mol/L)，于37'C保溫5分鐘后加入酶液0.1ml，再保溫8分鐘后加入3%的十二垸基磺酸鈉(SDS)溶液1.0ml終止反應(yīng)，最后加0.2%的5,5'-聯(lián)硫-2，2'-硝基-苯甲酸(DTNB,Ellman's試劑)溶液1.0ml顯色，產(chǎn)生黃色5-硫-2-硝基苯甲酸陰離子，用752C型紫外可見分光光度計(jì)于440nm測定光密度(An)，所有樣品均測雙管并測定三遍，以未加化合物的測定管光密度作為100%(Ae。ntrol)，化合物測定管光密度與之比較，降低的百分率即為酶抑制率(An/Ac。rtrolxl00%);試驗(yàn)中以10%和20%DMSO0.1ml作為溶劑對照，同時(shí)做了相對應(yīng)的藥物顏色對照，測定結(jié)果均已扣除溶劑對照及顏色對照的影響。部分目標(biāo)化合物對乙酰膽堿酯酶抑制活性如表一所示2、化合物對H202誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用篩選PC12細(xì)胞用含10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)液，以lxl()S個(gè)/mL密度接種于96孔培養(yǎng)板上，接種體積為100pL/孔，隨后放入含5%C02的37t:恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。培養(yǎng)24小時(shí)后，給藥組中加相應(yīng)濃度的化合物10nL/孔，終濃度為10—5mol/L，10—6mol/L，預(yù)孵育2小時(shí)(對照組與損傷組分別加10pL/LPBS，使其體積保持相等)。PC12細(xì)胞孵育2小時(shí)后，在給藥組與損傷組中分別加入100pM&02損傷劑10^L/孔(對照組加10pL/孔PBS)，30分鐘后，將各組的培養(yǎng)液均換成無小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液繼續(xù)放入恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24小時(shí)，培養(yǎng)液體積仍為100^L/L。繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)后，各組中加入5mg/mLMTT100nL/孔，進(jìn)行活細(xì)胞染色。待3小時(shí)后，各組中加入100。/。DMSO終止液100nL/孔，充分溶解混勻。在490nm的波長下測定各組的OD值。測試結(jié)果重復(fù)3次，用Duncan'stest方法統(tǒng)計(jì)，各組數(shù)值表示為均數(shù)土S.E.M.，以對照組為100%，給藥組及損傷組值以對照組的百分比表示，測試結(jié)果如表二所示具體實(shí)施例方式通過下面的實(shí)施例可對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的描述，然而，本發(fā)明的范圍并不限于下述實(shí)施例。本領(lǐng)域的專業(yè)人員能夠理解，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的前提下，可以對本發(fā)明進(jìn)行各種變化和修飾。實(shí)施例l6，7-(二苯基亞甲基二氧)-5，4'-二羥基黃酮(3)的制備在反應(yīng)瓶中依次加入燈盞乙素苷元13.3g(0.047mol)和二苯基二氯甲垸16.7g(0.070mol)，混合均勻，在惰氣保護(hù)下升溫至170。C反應(yīng)1小時(shí)，冷卻至室溫后，加入適量氯仿，趁熱抽濾，濾液減壓蒸除溶劑，殘余物用氯仿重結(jié)晶，得淺棕色針狀結(jié)晶13.83g，mp:250~252°C，收率65.9%。NMR(DMSO陽^，400MHz)《13.18(brs,1H,5-OH)，10.41(brs，1H，4'-OH)，7.95(d,J=8.8Hz，2H,Ar，-H3,5),7.61(s,1H,Ar-H8),7.59~7.56(m,4H，Ph-H),7.51~7.47(m,6H,Ph-H),6.94(d，J=8.8Hz,2H,Ar，-H2，6),6.88(s,1H，Ar-H3);HR-TOFMSw/z:449.1036([C28H1806-H]+計(jì)算值449.1025)。實(shí)施例26，7-(二苯基亞甲基二氧)-5-羥基-4'-(7V-四氫吡咯甲酰氧基)-黃酮(5a)的制備將1.0g(2.21mmo1)中間體3、0.35mmol四氫吡咯甲酰氯、30mlWW-二甲基甲酰胺和5ml無水吡啶加入反應(yīng)瓶中，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)15小時(shí)(反應(yīng)進(jìn)程用TLC跟蹤)；反應(yīng)結(jié)束后，加入適量冰水，抽濾，少量冰水洗滌濾餅，所得粗品經(jīng)柱層析純化(洗脫液氯仿-乙酸乙酯)，得淡黃色粉末固體0.593g，mp:226~228°C，收率49.0%。NMR(CDC13,400MHz)<S7.86(d,J=8.8Hz,2H,Ar，-H3,5),7.64~7.61(m，4H,Ph-H),7.41~7.37(m,6H，Ph-H),7.31(d，/=8.8Hz,2H，Ar，-H2,6)，6.65(s,1H，Ar-H8)，6.62(s,1H,Ar-H3),3.56(t,/=6.8Hz，2H,NCH2-Ha),3.53(t,/=6.8Hz，2H,NCHrHp),1.92(t,/=6.8Hz，2H,p-CH2-Ha)，1.87(t，■/=6.8Hz，2H，P-CH2-HP)。實(shí)施例36，7-(二苯基亞甲基二氧)-5-羥基-4'-(AVV-二甲基氨基甲酰氧基)-黃酮(5b)的制備操作過程同實(shí)施例2，只是將四氫吡咯甲酰氯用W7V-二甲基氨基甲酰氯替代，得6，7-(二苯基亞甲基二氧)-5-羥基-4'-(7V，7V-二甲基氨基甲酰氧基)-黃酮的淡黃色粉末固體，mp:230~232°C，收率71.2%。&NMR(CDC13,400MHz)&7.86(d,/=8.8Hz,2H,Ar，-H3,5),7.64~7.61(m，4H,Ph-H)，7.41~7.37(m,6H，Ph-H),7.28(d，《/=8.8Hz，2H,Ar，-H2,6),6.65(s,IH,Ar-H8),6.62(s,IH,Ar-H3),3.13(s,3H,CH3),3.04(s，3H,CH3)。實(shí)施例46，7-(二苯基亞甲基二氧)-5-羥基-4'-(iVV-二乙基氨基甲酰氧基)-黃酮(5c)的制備操作過程同實(shí)施例2，只是將四氫吡咯甲酰氯用AUV-二乙基氨基甲酰氯替代，得6,7-(二苯基亞甲基二氧)-5-羥基-4'-(WiV-二乙基氨基甲酰氧基)-黃酮的淡黃色粉末固體，mp:216~218°C，收率67.9%。'HNMR(CDC13,400MHz)《:7.86(d,J=8.8Hz,2H,Ar，-H3,5),7.64~7.60(m,4H,Ph-H),7.43~7.37(m，6H，Ph-H),7.29(d,/=8.8Hz,2H，Ar，-H2,6),6.66(s,IH,Ar-H8),6.63(s,IH,Ar-H3),3.46(q,/=6.8Hz,2H,NCH2)，3.41(q,/=6.8Hz,2H,NCH2),1.27(t,6.8Hz,3H,CH3),1.22(t,/=6.8Hz,3H,CH3)。實(shí)施例56，7-(二苯基亞甲基二氧)-5-羥基-4'-(AyV-二異丙基氨基甲酰氧基)-黃酮(5d)的制備操作過程同實(shí)施例2，只是將四氫吡咯甲酰氯用A^V-二異丙基氨基甲酰氯替代，得6,7-(二苯基亞甲基二氧)-5-羥基-4'-(iV，iV-二異丙基氨基甲酰氧基)-黃酮的淡黃色粉末固體，mp:239241。C，收率50.4%。^NMR(CDC13,400MHz)《7.86(d，/=8.8Hz，2H,Ar，-H3,5),7.64~7.61(m,4H,Ph-H),7.42~7.38(m,6H,Ph-H),7.29(d,/=8.8Hz，2H,Ar，-H2,6)，6.66(s,1H，Ar-H8),6.63(s，1H，Ar-H3)，4.11(q,/=6.8Hz,1H,NCH)，3.99(q,J=6.8Hz,1H,NCH)，1.35(d,/=6.8Hz,6H,2xCH3),1.32(d，J=6.8Hz,6H，2xCH3)。實(shí)施例66，7-(二苯基亞甲基二氧)-5-羥基-4'-(;V-嗎啉甲酰氧基)-黃酮(5e)的制備操作過程同實(shí)施例2，只是將四氫吡咯甲酰氯用iV-嗎啉甲酰氯替代，得6，7-(二苯基亞甲基二氧)-5-羥基-4'-(iV-嗎啉甲酰氧基)-黃酮的淡黃色粉末固體，mp:>242。C，收率52.5%。&應(yīng)R(CDC13，400MHz)&7.87(d,/=8.8Hz,2H,Ar，-H3,5),7.63~7.61(m,4H,Ph-H)，7.42~7.38(m，6H，Ph-H),7.28(d,/=8.8Hz，2H，Ar，-H2,6),6.65(s,1H，Ar-H8),6.63(s，1H,Ar-H3)，3'70(t，/=4.8Hz，2H,NCH2),3.60(t,/=4.8Hz,2H,NCH2),3.77(t,■/=4.8Hz,4H，2xOCH2)。實(shí)施例76，7-(二苯基亞甲基二氧)-5-羥基-4'-(W-甲基-7V-乙基氨基甲酰氧基)-黃酮(5f)的制備操作過程同實(shí)施例2，只是將四氫吡咯甲酰氯用iV-甲基-iV-乙基氨基甲酰氯替代，得6，7-(二苯基亞甲基二氧)-5-羥基-4'-(7V-甲基-iV-乙基氨基甲酰氧基)-黃酮的淡黃色粉末固體，mp:192~194。C，收率80.8%。&NMR(CDC13,400MHz)&7.86(d，/=8.8Hz,2H,Ar，-H3，5),7.64~7.60(m,4H,Ph-H)，7.42~7.36(m,6H,Ph-H),7.28(d,/=8.8Hz，2H,Ar，-H2，6),6.65(s,1H,Ar-H8)，6.62(s,1H，Ar-H3),3.50(q,/=7.2Hz,1H,NCH2)，3.43(q,■/=7.2Hz,1H,NCH2),3.09(s，1.5H，NCH3),3.01(s,1.5H,NCH3)，1.26(t,/=7.2Hz,1.5H,CH3),1.21(t,J二7.2Hz，1.5H,CH3)。實(shí)施例86，7-(二苯基亞甲基二氧)-5-羥基-4'-(iV-哌啶甲酰氧萄-黃酮(5g)的制備操作過程同實(shí)施例2，只是將四氫吡咯甲酰氯用W-哌啶甲酰氯替代，得6,7-(二苯基亞甲基二氧)-5-羥基-4'-(iV-哌啶甲酰氧基)-黃酮的淡黃色粉末固體，mp:220-222°C，收率86.7%。'HNMR(CDC13,400MHz)&7.88(d，《/=8.8Hz，2H，Ar，-H3,5)，7.66~7.62(m,4H,Ph-H),7.437.40(m，6H,Ph-H),7.29(d,J=8.8Hz,2H，Ar，-H2,6),6.67(s，1H，Ar-H8),6.64(s，1H,Ar-H3)，3.64(m，2H,NCH2),3.55(m,2H，NCH2)，L68(m,6H,3xCH2)。實(shí)施例96，7-(二苯基亞甲基二氧)-5-羥基-4'-[iV-(4-芐基)哌啶甲酰氧基l-黃酮(5h)的制備操作過程同實(shí)施例2，只是將四氫吡咯甲酰氯用iV-(4-芐基)哌啶甲酰氯替代，得6，7-(二苯基亞甲基二氧)-5-羥基-4'-[AK4-芐基)哌啶甲酰氧基]-黃酮的淡黃色粉末固體，mp:98~100。C，收率71.5%。NMR(CDC13,400MHz)《7.92(d,J=8.8Hz,1H，Ar，-H3,5)，7.85(d,/=8.8Hz，1H，Ar，-H3，5),7.64~7.59(m，4H，Ph-H),7.43~7.38(m，6H，Ph-H)，7.33~7.19(m，5H,Ph-H),7.17(d，/=8.8Hz,1H,Ar'-H2，6)，7.14(d,J=8.8Hz，1H,Ar，-H2,6),6.65(s,0.5H,Ar-H8),6.62(s,0.5H，Ar-H3),6.58(s,0.5H,Ar-H8),6.50(s,0.5H,Ar-H3),4.27(t,/=15.2Hz,2H，PhCH2),2.95(m，1H，NCH2),2.74(m，1H,NCH2),2.61(m,1H,NCH2),2.59(m,1H,NCH2)，1.76(m,1.5H,CHCH2),1.73(m,1.5H,CHCH2),1.33(m,1H,CH2),L27(m，1H，CH2)。實(shí)施例106，7-(二苯基亞甲基二氧)-5-羥基-4'-[7V-(4-甲基)哌嗪甲酰氧基-黃酮(5i)的制備操作過程同實(shí)施例2，只是將四氫吡咯甲酰氯用4-甲基-l-哌嗪甲酰氯鹽酸鹽替代，得6,7-(二苯基亞甲基二氧)-5-羥基-4'-[AH4-甲基)哌嗪甲酰氧基]-黃酮的淡黃色粉末固體，收率67.5%。實(shí)施例116/7-(二苯基亞甲基二氧)-5-羥基-4'-(丙氨基甲酰氧萄-黃酮(5j)的制備在反應(yīng)瓶中加入1.0g(2.21mmol)中間體3、無水四氫呋喃30ml和無水三乙胺0.46ml(3.31mmol)，室溫?cái)嚢?分鐘后，滴加丙氨基異氰酸酯0.225g(2.65mmol)溶于5ml四氫呋喃的溶液，4050"C保溫?cái)嚢璺磻?yīng)6小時(shí)(反應(yīng)進(jìn)程用TLC監(jiān)測)；反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸除溶劑，所得粗品經(jīng)柱層析純化(洗脫液二氯甲烷-乙酸乙酯)，得淡黃色粉末固體1.053g，收率89.0%。實(shí)施例125，6，7-三羥基-4'-(iV-四氫吡咯甲酰氧基)-黃酮(Ia)的制備在反應(yīng)瓶中加入中間體5a0.547g(l.OOmmol)和乙醇25ml，攪拌均勻后加入10%Pd(OH)2/C40mg，然后通氫氣室溫?cái)嚢璺磻?yīng)48小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，過濾，少量乙醇洗滌濾餅，濾液減壓蒸除溶劑，殘余物經(jīng)丙酮重結(jié)晶，得淡黃色粉末固體0.268g，mp:212~24°C，收率70.0%。^NMR(DMSO-A,400MHz)《12.68(brs,1H5-0H)，10.59(brs,1H，7-OH)，8.63(brs,1H,6-OH),S.O^d,/-8.8Hz，2H,Ar，-H3,5),7.34(d，J=8.8Hz，2H，Ar，-H2,6)，6.93(s,1H,Ar-H8),6.63(s,1H，Ar-H3),3.53(t,/=6.8Hz，2H,NCH2-Ha),3.36(t，</=6.8Hz,2H，NCH2-HP)，1.92(t,^6.8Hz,2H,p-CH2-Ha),1.87(t，>/=6.8Hz,2H，p-CH2-Hp);HR-TOFMS(+Q)m/z:384.1080([C20H17NO7+H]+計(jì)算值384.1083)。實(shí)施例135，6，7-三羥基-4'-(iY，W-二甲基氨基甲酰氧基)-黃酮(Ib)的制備操作過程同實(shí)施例12，只是將中間體5a用中間體5b替代，得5,6，7-三羥基-4'-(AUV-二甲基氨基甲酰氧基)-黃酮的淡黃色粉末固體，mp:>242°C，收率62.5%。&畫R(DMS0-4400MHz)3:12.68(brs，1H,5-OH),10.61(brs，1H,7-OH),8.85(brs,1H,6-OH),8.10(d,/=8.8Hz,2H,Ar，-H3,5),7.33(d，《/=8.8Hz,2H，Ar，-H2,6)，6.94(s,1H，Ar-H8),6.63(s,1H,Ar-H3),3.07(s,3H,CH3),2.94(s,3H，CH3);HR-TOFMS(+Q)附/z:358.0卯0([d8H!5N07+H]+計(jì)算值358.0927)。實(shí)施例145，6，7-三羥基-4'-(AyV-二乙基氨基甲酰氧基)-黃酮(Ic)的制備操作過程同實(shí)施例12，只是將中間體5a用中間體5c替代，得5,6，7-三羥基-4'-(7V,iV-二乙基氨基甲酰氧基)-黃酮的淡黃色粉末固體，mp:182~184'C，收率47.7%。'HNMR(DMSO-A,400MHz)&12.68(brs,1H,5-OH),10.60(brs,1H,7-OH),8.85(brs，1H，6國OH),8.10(d,/=8.8Hz,2H,Ar，-H3,5),7.33(d，J=8.8Hz,2H,Ar，-H2,6)，6.94(s,1H,Ar-H8),6.63(s,IH,Ar-H3)，3.43(q,J=6.8Hz，2H,NCH2)，3.13(q,/=6.8Hz,2H，NCH2)，1.22("/=6.8Hz,3H,CH3)，1.13(t，《/=6.8Hz,3H,CH3);HR-TOFMS(+Q)w/z:386.1231([C2oHwN07+H〗+計(jì)算值386.1240)。實(shí)施例155，6，7-三羥基-4'-(7V,7V-二異丙基氨基甲酰氧基)-黃酮(Id)的制備操作過程同實(shí)施例12，只是將中間體5a用中間體5d替代，得5,6,7-三羥基-4'-(A^V-二異丙基氨基甲酰氧基)-黃酮的淡黃色粉末固體，inp:206208°C，收率63.0%。^NMR(DMSO-A,400MHz)&12.67(brs,1H,5-OH),10.56(brs，IH,7-OH),8.81(brs，IH,6-OH),8.09(d，/=8.8Hz,2H,Ar，-H3，5),7.30(d,/=8.8Hz，2H，Ar，-H2,6),6.92(s,1H，Ar-H8)，6.63(s,1H，Ar-H3),4.01(q,/=6.8Hz，2H,2xNCH),1.27(d，/=6.8Hz，12H,4xCH3);HR國TOFMS(+Q)w/z:414.1507([(:221123]^07+司+計(jì)算值414.1553)。實(shí)施例165，6，7-三羥基-4'-(JV-嗎啉甲酰氧基)-黃酮(Ie)的制備操作過程同實(shí)施例12，只是將中間體5a用中間體5e替代，得5,6,7-三羥基-4'-(W-嗎啉甲酰氧基)-黃酮的淡黃色粉末固體，mp:>242°C，收率47.2%。1HNMR(DMSO-4,400MHz)&12.66(brs，IH,5-OH),10.57(brs，1H，7-OH),8.81(brs，IH,6-OH)，8.10(d，/=8.8Hz，2H,Ar，-H3，5)，7.36(d，J=8.8Hz,2H,Ar，-H2,6)，6.93(s,IH,Ar-H8),6.63(s,IH,Ar-H3),3.67(t,/=4.8Hz,4H,2xNCH2),3.61(m,2H,OCH2),3.44(m,2H，OCH2);HR-TOFMS(+Q)附/z:400.1002([C2。HnN08+H]+計(jì)算值400.1032)。實(shí)施例175，6，7-三羥基-4'-(7V-甲基-7V-乙基氨基甲酰氧基)-黃酮(If)的制備操作過程同實(shí)施例12，只是將中間體5a用中間體5f替代，得5，6，7-三羥基-4'-(iV-甲基-7V-乙基氨基甲酰氧基)-黃酮的淡黃色粉末固體，mp:200~202°C，收率50.0%。NMR(DMSO-flf(5,400MHz)&12.67(brs,1H,5-OH),10.56(brs,1H,7隱OH),8.81(brs，1H,6-OH)，8.09(d,/=8.8Hz,2H，Ar，-H3,5),7.32(d,J=8.8Hz,2H，Ar，-H2,6),6.92(s,1H，Ar-H8),6.63(s，1H,Ar-H3)，3.45(q，7=7.2Hz，IH,NCH2)，3.38(q,/=7.2Hz,1H，NCH2)，3.05(s，1.5H，NCH3)，2.92(s,1.5H,NCH3),1.20(t,/=7.2Hz，1.5H,CH3),1.12(t,7.2Hz,1.5H,CH3);HR-TOFMS(+Q)w/z:372.1049([Ci9HnN07+H]+計(jì)算值372.1083)。實(shí)施例185，6，7-三羥基-4'-(7V-哌啶甲酰氧基)-黃酮(Ig)的制備操作過程同實(shí)施例12，只是將中間體5a用中間體5g替代，得5，6,7-三羥基-4'-(7V-哌啶甲酰氧基)-黃酮的淡黃色粉末固體，mp:196~198°C，收率55.4%。&NMR(DMSO-c4,400MHz)&12.69(brs，1H，5-OH)，10.60(brs，1H,7-OH),8.86(brs,1H,6-OH),8.09(d,J=8.8Hz，2H，Ar，-H3,5),7.33(d，/=8.8Hz,2H,Ar，-H2,6),6.94(s,1H，Ar-H8),6.63(s，1H,Ar-H3)，3.58(m，2H,NCH2),3.42(m,2H,NCH2)，1.60(m，6H，3xCH2);HR-TOFMS(+Q)w々398.1204([C2H,9N07+H]+計(jì)算值398.1240)。實(shí)施例195，6，7-三羥基-4'-[7V-(4-芐基)哌啶甲酰氧基]-黃酮(Ih)的制備操作過程同實(shí)施例12，只是將中間體5a用中間體5h替代，得5,6，7-三羥基-4'-[iV-(4-芐基)哌啶甲酰氧基]-黃酮的淡黃色粉末固體，mp:176~178°C，收率44.3%。!HNMR(CDC13，400MHz)&7.72(d,J=8.8Hz，1H，Ar，-H3,5)，7.68(d,J=8.8Hz，IH,Ar，-H3,5),7.34~7.17(m,5H，Ph-H)，7.19(d,/=8.8Hz，IH,Ar，-H2，6),7.13(d,8.8Hz,IHAr，-H2,6),6.51(s,0.5H,Ar-H8),6.50(s,0.5H,Ar-H3),6.42(s，0.5H,Ar-H8),6.13(s,0.5H,Ar-H3),4.29(t,/=15.2Hz,2H,PhCH2),2,97(m，IH,NCH2),2.85(m，IH,NCH2)，2.63(m,IH,NCH2),2.61(m,IH,NCH2),1.78(m,1.5H,CHCH2),1.75(m,1.5H,CHCH2),1.32(m,1H,CH2)，1.29(m,1H，CH2);HR-TOFMS(+Q)附/z:488.1687([(:281125>^07+司+計(jì)算值488.1709)。實(shí)施例205，6，7-三羥基-4'-7V-(4-甲基)哌嗪甲酰氧基]-黃酮(Ii)的制備操作過程同實(shí)施例12，只是將中間體5a用中間體5i替代，得5，6，7-三羥基-4'-[AK4-甲基)哌嗪甲酰氧基]-黃酮的淡黃色粉末固體，收率48.7%。HR-TOFMS(+Q)w/z:413.1340([(:211120]^207+11]+計(jì)算值413.1349)。實(shí)施例215,6，7-三羥基-4'-(丙氨基甲酰氧基)-黃酮(Ij)的制備操作過程同實(shí)施例12,只是將中間體5a用中間體5j替代，得5，6,7-三羥基-4'-(丙氨基甲酰氧基)-黃酮的淡黃色粉末固體，收率72.8%。HR-TOFMS(+Q)w/z:372.1068([C,9HnN07+H]+計(jì)算值372.1083)。實(shí)施例22生物活性測試結(jié)果表一部分目標(biāo)物對乙酰膽堿酯酶抑制百分率<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>結(jié)論部分目標(biāo)化合物對乙酰膽堿酯酶具有顯著的抑制作用，且抑制活性較陽性對照藥物-Rivastigmine強(qiáng)。表二部分目標(biāo)物對抗H20z誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷測定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>結(jié)論目標(biāo)化合物對過氧化氫誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷均有不同程度的保護(hù)作用。本發(fā)明不限于上述實(shí)施例權(quán)利要求1.一類具有如下通式(I)的燈盞乙素苷元衍生物，及其藥學(xué)上可接受的鹽其特征在于R1、R2可以相同或不同，R1、R2代表H、C1～C12脂肪烷烴、C3～C7脂肪環(huán)烷烴、取代的C3～C7脂肪環(huán)烷烴、芳基、供電子或吸電子取代的芳基、C1～C6脂肪醇及其酯、C1～C6羧酸及其酯，或R1、R2分別與C、O及N原子環(huán)合形成四元環(huán)、五元環(huán)、六元環(huán)或七元環(huán)。2.如權(quán)利要求1所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其特征在于化合物的制備包括如下步驟<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>以燈盞乙素苷元(1)為起始原料，將其與二苯基二氯甲烷(2)反應(yīng)，得6，7-(二苯基亞甲基二氧)-5,4'-二羥基黃酮(3)，6,7-位羥基被保護(hù)的苷元分別與氨基甲酰氯或異氰酸酯(R產(chǎn)H時(shí))衍生物(4)縮合，得6,7-位羥基被保護(hù)的燈盞乙素苷元4，-位氨基甲酸酯衍生物(5)，所得中間體再經(jīng)催化氫解除保護(hù)基，得燈盞乙素苷元4'-位氨基甲酸酯衍生物(I)。3.如權(quán)利要求1所述化合物的制備方法，其特征在于燈盞乙素苷元(1)與二苯基二氯甲烷(2)經(jīng)縮合反應(yīng)得中間體(3)，反應(yīng)中無需加入有機(jī)溶劑，其中，(1)與(2)反應(yīng)時(shí)的摩爾投料比為1.0:1.03.0;反應(yīng)溫度為100~230°C;反應(yīng)時(shí)間為10分鐘120分鐘。4.如權(quán)利要求1所述化合物的制備方法，其特征在于，中間體(3)在堿性和惰性溶劑條件下分別與氨基甲酰氯或異氰酸酯(R產(chǎn)H時(shí))衍生物(4)縮合，得6,7-(二苯基亞甲基二氧)-5-羥基-4'-氨基甲酸酯-黃酮衍生物(5)，其中，中間體(3)與(4)的摩爾投料比為1.0丄03.0;反應(yīng)所用堿為堿金屬或堿土金屬氫氧化物、堿金屬或堿土金屬碳酸鹽、堿金屬或堿土金屬碳酸氫鹽、有機(jī)叔胺類或季銨堿類(如三乙胺、三丁胺、三辛胺、吡啶、N,N-二甲基-oc-苯乙胺、4-甲基嗎啉、四丁基氫氧化銨)；堿用量與原料(4)的摩爾投料比為1.04.5:1.0;反應(yīng)所用惰性溶劑為乙醚、四氫呋喃、A^V-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、二氯甲烷、氯仿、C3Cs脂肪酮、苯、正庚垸、甲苯、吡啶；反應(yīng)溫度為0~130°C;縮合反應(yīng)時(shí)間為2小時(shí)7天。5.如權(quán)利要求1所述化合物的制備方法，其特征在于，中間體(5)在催化劑和溶劑作用下得燈盞乙素苷元4，-位氨基甲酸酯衍生物(I)，其中，所用催化劑為5%Pd/C、10°/。Pd/C、10%Pd(OH)2/C;所用溶劑為C廣C6脂肪醇、AUV-二甲基甲酰胺、四氫呋喃；反應(yīng)溫度為室溫10(TC。6.如權(quán)利要求1所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其特征在于，所述的藥學(xué)上可接受的鹽是(I)與堿金屬或堿土金屬氫氧化物、堿金屬或堿土金屬碳酸鹽、堿金屬或堿土金屬碳酸氫鹽所形成的鹽。7.如權(quán)利要求1所述的燈盞乙素苷元衍生物，在治療血管性癡呆、阿爾茨海默氏病(早老性癡呆)等神經(jīng)退行性疾病藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及一類新型的燈盞乙素苷元4’-位氨基甲酸酯衍生物(I)，以及它的制備方法和用途。藥理實(shí)驗(yàn)證明，這類化合物具有明顯的乙酰膽堿酯酶抑制活性和對H₂O₂誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷均有不同程度的保護(hù)作用，因而可用于制備在治療血管性癡呆、阿爾茨海默氏病(早老性癡呆)等神經(jīng)退行性疾病藥物中的應(yīng)用。文檔編號A61P25/00GK101337956SQ200810045869公開日2009年1月7日申請日期2008年8月22日優(yōu)先權(quán)日2008年8月22日發(fā)明者貝吳,怡沈,勇鄧,鐘裕國申請人:四川大學(xué)