專利名稱：：規(guī)?；嘤倍x夏草的培養(yǎng)基的熟化及滅菌方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種培養(yǎng)基的熟化及滅菌方法，特別涉及一種北冬蟲夏草(Co^^ce/^M////aWs)培養(yǎng)基的熟化及滅菌方法。
背景技術(shù)：
：工廠化大規(guī)模生產(chǎn)北冬蟲夏草需要大量的培養(yǎng)基。組織培養(yǎng)北冬蟲夏草的培養(yǎng)基主要由大米、黃豆粉、各類蛋白質(zhì)和有機(jī)物質(zhì)所配伍組成。組織培養(yǎng)北冬蟲夏草的培養(yǎng)基極易變質(zhì)和發(fā)霉發(fā)酵，因此其必須經(jīng)過熟化處理和高溫加壓滅菌后，在無菌的狀態(tài)下，才能進(jìn)入到接種的工序。培養(yǎng)基的熟化和滅菌成了大規(guī)模工廠化培育北冬蟲夏草的關(guān)鍵技術(shù)。目前在國內(nèi)外培育北冬蟲夏草，由于普遍是小規(guī)模的試產(chǎn)，且無質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，更無大規(guī)模工廠化生產(chǎn)(即年產(chǎn)20噸以上北冬蟲夏草)的成熟經(jīng)驗(yàn)，所以生產(chǎn)過程中較多采用臥式圓形蒸汽滅菌鍋進(jìn)行熟化與滅菌。這種生產(chǎn)方式完全不能滿足大規(guī)模工廠化生產(chǎn)北冬蟲夏草的要求，年產(chǎn)量至多只能達(dá)到5噸左右。有些科研院所和生產(chǎn)單位，無大規(guī)模生產(chǎn)技術(shù)和生產(chǎn)條件，采用了蒸汽熟化和高壓滅菌分歩的生產(chǎn)方法，達(dá)不到培養(yǎng)基徹底熟化和滅菌的要求，在物料轉(zhuǎn)送和接種過程中更易染菌，往往會(huì)造成大批量的霉變。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提出一種規(guī)?；嘤倍x夏草的培養(yǎng)基的熟化及滅菌方法，以解決現(xiàn)在的熟化和滅菌方法無法大容量處理培養(yǎng)基的問題，以及培養(yǎng)基在熟化和滅菌過程中容易染菌，造成大批量的霉變的問題。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案規(guī)模化培育北冬蟲夏草的培養(yǎng)基的熟化及滅菌方法，其特征在于4熟化步驟和滅菌步驟合并進(jìn)行，熟化和滅菌的溫度為100°C135°C，熟化和滅菌的保溫時(shí)間為40min50min。進(jìn)一步，所述熟化和滅菌在有前后兩門的雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器中同步進(jìn)行；所述雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器是前門進(jìn)料時(shí)后門自行鎖閉、后門出料時(shí)前門自行鎖閉的雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器。本發(fā)明所述方法中的雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器，最大的特點(diǎn)是前門進(jìn)料時(shí)后門自行鎖閉，后門出料時(shí)前門自行鎖閉，避免了物料熟化滅菌后，二門同時(shí)開啟，形成空氣流通，造成交叉污染。滅菌器是由上海華線醫(yī)用核子儀器有限公司提供的SVW105型臥式壓力蒸汽滅菌器，可在其內(nèi)部運(yùn)用現(xiàn)有技術(shù)中的機(jī)械聯(lián)鎖原理，使其達(dá)到一門開啟，另一門自行鎖閉的結(jié)果。進(jìn)一步，熟化和滅菌后，將培養(yǎng)基送進(jìn)與所述雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的后門緊接的、具有io萬級(jí)凈化潔凈控制標(biāo)準(zhǔn)的緩沖區(qū)。本發(fā)明所述的雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器進(jìn)行出料的后門緊接具有IO萬級(jí)凈化潔凈控制標(biāo)準(zhǔn)(具體標(biāo)準(zhǔn)見下表)的緩沖區(qū)，這樣能嚴(yán)格保證經(jīng)熟化滅菌后的物料在出料后，能在潔凈控制級(jí)別標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)進(jìn)入到強(qiáng)冷室和無菌接種室。本發(fā)明所述的雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的溫度和壓力調(diào)控，全部由電腦設(shè)定的操作程序鄰控制標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行，靈敏度高，計(jì)時(shí)計(jì)壓精確，自動(dòng)化程度高，且滅菌器的容量完全可以依照工廠化的規(guī)模來設(shè)定。而現(xiàn)有的雙開門壓力滅菌器，雙門可同時(shí)開啟，出料門無凈化標(biāo)準(zhǔn)控制，容量小，能耗高，易污染。<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>又進(jìn)一步，所述的規(guī)?；嘤倍x夏草的培養(yǎng)基的熟化及滅菌方法，其特征在于，包括以下步驟a)、加水步驟——向所述雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器內(nèi)加入熟化和滅菌所需量的水；b)、預(yù)熱步驟——將步驟a)中所加的水預(yù)熱至10(TC135。C;c)、產(chǎn)品擺放步驟——將裝有需熟化和滅菌的培養(yǎng)基的培養(yǎng)盒，擺放在搬運(yùn)車上后，從前門推進(jìn)所述雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的滅菌室內(nèi)并關(guān)門密閉；d)、加熱步驟一待所述雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的套層壓力升至0.10Mpa后，使所述雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的滅菌室升溫且增壓，直至套層壓力和滅菌室壓力相當(dāng)，穩(wěn)定于0.11Mpa;e)、熟化和滅菌步驟——待所述雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的滅菌室的溫度升至10(TC135'C以后，進(jìn)入熟化和滅菌保溫狀態(tài)，進(jìn)行熟化和滅菌，熟化和滅菌保溫時(shí)間為40min50min分鐘；f)、排氣步驟一一排除滅菌室內(nèi)的氣體，待滅菌室溫度自然降低到9(TC以下、壓力降為零后，在環(huán)境凈化控制在IO萬級(jí)的緩沖間內(nèi)開啟所述雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的后門，從所述雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的后門送出搬運(yùn)車。與現(xiàn)有技術(shù)相比較，本發(fā)明所述的規(guī)模化培育北冬蟲夏草的培養(yǎng)基的熟化及滅菌方法具有以下有益效果1、本發(fā)明的規(guī)?；嘤倍x夏草的培養(yǎng)基的熟化及滅菌方法，使用的雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器，其單位容積產(chǎn)量較普通臥式圓形蒸汽滅菌鍋高12.5倍?？扇仗幚硎旎蜏缇鍑嵰陨吓囵B(yǎng)基；同樣單位面積的普通臥式圓形蒸汽滅菌鍋，原來一批只能放400只玻璃培養(yǎng)瓶，現(xiàn)在能批投入250個(gè)培養(yǎng)盒，相當(dāng)于5000個(gè)玻璃培養(yǎng)瓶。而且每批熟化和滅菌工效提高了一倍。2、可配合環(huán)境凈化級(jí)別控制要求，保證產(chǎn)品質(zhì)量，不易染菌；3、操作過程中自動(dòng)化程度較高；4、操作過程中熱效率高，物料熟化徹底。在本發(fā)明的方法和設(shè)備條件下，升溫快，保溫滅菌時(shí)間長(zhǎng)，在12rC，壓力為0.11mpa的穩(wěn)定條件下，保溫時(shí)間長(zhǎng)達(dá)40min，物料100%熟化；5、本發(fā)明的規(guī)?；嘤倍x夏草的培養(yǎng)基的熟化及滅菌方法，使用的雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器，可以實(shí)現(xiàn)前門進(jìn)料、后門出料，這樣可以將熟化、滅菌的生產(chǎn)條件與強(qiáng)冷、接種工作區(qū)域聯(lián)為統(tǒng)一的潔凈控制區(qū)。6、熟化與滅菌同步進(jìn)行較現(xiàn)有很多企業(yè)將熟化與滅菌分步實(shí)施，在生產(chǎn)工藝改進(jìn)上發(fā)展了一大步。首先減少了一次裝料和卸料的過程，降低了勞動(dòng)強(qiáng)度；其次減少了固定資產(chǎn)的投入與節(jié)約了生產(chǎn)場(chǎng)地；其三，將熟化、滅菌兩步驟合并，相應(yīng)減少了一步驟，降低了能耗近40%;其四，每批培養(yǎng)基的熟化和滅菌過程中，在穩(wěn)定的高溫、壓力和保溫條件下，確保了物料100%的熟化和滅菌。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案。作為本發(fā)明的規(guī)?；嘤倍x夏草的培養(yǎng)基的熟化及滅菌方法，其熟化步驟和滅菌步驟合并進(jìn)行，也就是說本發(fā)明將熟化步驟和滅菌步驟合二為一。本發(fā)明通過控制熟化和滅菌的溫度和時(shí)間，達(dá)到了實(shí)現(xiàn)同時(shí)熟化和滅菌的目的。具體來說，本發(fā)明的規(guī)?；嘤倍x夏草的培養(yǎng)基的熟化及滅菌方法，是在雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器中進(jìn)行的。這種滅菌器，有前門和后門，前門是用于進(jìn)料的門，后門是用于出料的門。滅菌器是由上海華線醫(yī)用核子儀器有限公司提供的SVW105型臥式壓力蒸汽滅菌器，可在其內(nèi)部運(yùn)用現(xiàn)有技術(shù)中的機(jī)械聯(lián)鎖原理，使其達(dá)到一門開啟，另一門自行鎖閉的結(jié)果，這樣就成了本發(fā)明所述的雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器。本具體實(shí)施方式中的雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器容量為0.48立方至3.6立方，具有在0.22MPA和135。C條件下工作的能力。雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器自動(dòng)化程度高，可以自動(dòng)加水。本發(fā)明的規(guī)?；嘤倍x夏草的培養(yǎng)基的熟化及滅菌方法，包括加水、預(yù)熱、產(chǎn)品擺放、加熱、熟化和滅菌、排氣等步驟。7實(shí)施本發(fā)明的規(guī)模化培育北冬蟲夏草的培養(yǎng)基的熟化及滅菌方法，首先進(jìn)行加水步驟。在這個(gè)步驟中，先接通雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的電源，這時(shí)雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的儀表板上的各儀表指示燈全亮，按鍵選擇雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器自動(dòng)加水，雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的蜂鳴器開始蜂鳴，加滿水后斷水，雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的蜂鳴器停止蜂鳴。在雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器加水完畢，蜂鳴器停止蜂鳴后進(jìn)行預(yù)熱步驟。預(yù)熱步驟即操作溫度設(shè)置鍵，將溫度調(diào)節(jié)為12TC。雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器自動(dòng)對(duì)水預(yù)熱。然后進(jìn)行產(chǎn)品擺放步驟。產(chǎn)品擺放步驟是將裝有需熟化滅菌的培養(yǎng)基的培養(yǎng)盒，按順序擺放在搬運(yùn)車上后，從雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的前門推進(jìn)雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的滅菌室內(nèi)，然后關(guān)起前門密閉。搬運(yùn)車是采用不銹鋼作為材料制造的搬運(yùn)車。接著進(jìn)行加熱步驟。按下雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器上的滅菌鍵，設(shè)定滅菌溫度為12TC，熟化和滅菌保溫時(shí)間為45分鐘，待雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的套層壓力升至0.10Mpa后，按下啟動(dòng)鍵，蜂鳴器停止蜂鳴后雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的滅菌室升溫，滅菌室升溫過程伴隨套層壓力進(jìn)入滅菌室內(nèi)，此時(shí)滅菌室壓力指數(shù)逐漸上升而套層壓力指數(shù)逐漸降低直至最后兩者壓力相當(dāng)，穩(wěn)定于0.11Mpa左右。接下來進(jìn)行熟化和滅菌步驟。待雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的滅菌室溫度升至12TC以后，進(jìn)入熟化和滅菌保溫狀態(tài)，滅菌指示燈亮，滅菌參數(shù)顯示區(qū)顯示剩余滅菌時(shí)間。最后進(jìn)行排氣歩驟。在熟化和滅菌步驟結(jié)束后進(jìn)行排氣歩驟，排除滅菌室內(nèi)的氣體，使雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的滅菌室的溫度自然降低到9(TC以下、壓力降為零后，在環(huán)境凈化控制在IO萬級(jí)的緩沖間內(nèi)開啟雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的后門，從雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的后門出料。熟化、滅菌后的裝有需熟化滅菌的培養(yǎng)基的培養(yǎng)盒從雙開門隧道8式壓力蒸汽滅菌器后門出料，雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器后門連接具有10萬級(jí)凈化潔凈控制標(biāo)準(zhǔn)的緩沖區(qū)，IO萬級(jí)凈化潔凈控制標(biāo)準(zhǔn)的緩沖區(qū)后面連接具有io萬級(jí)凈化潔凈控制標(biāo)準(zhǔn)的強(qiáng)冷間，培養(yǎng)基在強(qiáng)冷間冷卻到常溫，再經(jīng)傳遞倉進(jìn)入1萬級(jí)凈化潔凈控制標(biāo)準(zhǔn)的無菌室接種。這樣確保了培養(yǎng)基質(zhì)在凈化標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格控制的條件下與范圍內(nèi)，實(shí)現(xiàn)熟化與滅菌的同步完成，確保蟲草菌種在培養(yǎng)基質(zhì)無菌條件下的接種。實(shí)施例1按照具體實(shí)施方式所述，對(duì)5批次裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)盒進(jìn)行本發(fā)明的熟化及滅菌，每批次20個(gè)培養(yǎng)盒。熟化和滅菌后，物料100%熟化。將這些裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)盒放置一個(gè)北冬蟲夏草的培養(yǎng)周期后，未發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基有污染。本
技術(shù)領(lǐng)域：
中的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到，以上的實(shí)施例僅是用來說明本發(fā)明，而并非用作為對(duì)本發(fā)明的限定，只要在本發(fā)明的實(shí)質(zhì)精神范圍內(nèi)，對(duì)以上所述實(shí)施例的變化、變型都將落在本發(fā)明的權(quán)利要求書范圍內(nèi)。權(quán)利要求1、一種規(guī)?；嘤倍x夏草的培養(yǎng)基的熟化及滅菌方法，其特征在于熟化步驟和滅菌步驟合并進(jìn)行，熟化和滅菌的溫度為100℃～135℃，熟化和滅菌的保溫時(shí)間為40min～50min。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的規(guī)?；嘤倍x夏草的培養(yǎng)基的熟化及滅菌方法，其特征在于所述熟化和滅菌在有前后兩門的雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器中同步進(jìn)行；所述雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器是前門進(jìn)料時(shí)后門自行鎖閉、后門出料時(shí)前門自行鎖閉的雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的規(guī)?；嘤倍x夏草的培養(yǎng)基的熟化及滅菌方法，其特征在于在熟化和滅菌后，將培養(yǎng)基送進(jìn)與所述雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的后門緊接的、具有IO萬級(jí)凈化潔凈控制標(biāo)準(zhǔn)的緩沖區(qū)。4、根據(jù)權(quán)利要求2所述的規(guī)?；嘤倍x夏草的培養(yǎng)基的熟化及滅菌方法，其特征在于，包括以下步驟a)、加水步驟——向所述雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器內(nèi)加入熟化和滅菌所需量的水；b)、預(yù)熱步驟——將歩驟a)中所加的水預(yù)熱至100°C135°C;c)、產(chǎn)品擺放步驟——將裝有需熟化和滅菌的培養(yǎng)基的培養(yǎng)盒，擺放在搬運(yùn)車上后，從前門推進(jìn)所述雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的滅菌室內(nèi)并關(guān)門密閉；d)、加熱步驟"待所述雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的套層壓力升至O.lOMpa后，使所述雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的滅菌室升溫且增壓，直至套層壓力和滅菌室壓力相當(dāng)，穩(wěn)定于0.11Mpa;e)、熟化和滅菌步驟——待所述雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的滅菌室的溫度升至10(TC135'C以后，進(jìn)入熟化和滅菌保溫狀態(tài)，進(jìn)行熟化和滅菌，熟化和滅菌的保溫時(shí)間為40min50min分鐘；f)、排氣步驟一一排除滅菌室內(nèi)的氣體，待滅菌室溫度自然降低到90。C以下、壓力降為零后，在環(huán)境凈化控制在IO萬級(jí)的緩沖間內(nèi)開啟所述雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的后門，從所述雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器的后門送出搬運(yùn)車。全文摘要本發(fā)明涉及一種培養(yǎng)基的熟化及滅菌方法，特別涉及一種規(guī)模化培育北冬蟲夏草的培養(yǎng)基的熟化及滅菌方法。規(guī)模化培育北冬蟲夏草的培養(yǎng)基的熟化及滅菌方法，其特征在于熟化步驟和滅菌步驟合并進(jìn)行，熟化和滅菌的溫度為100℃～135℃，熟化和滅菌的時(shí)間為40min～50min。所述熟化和滅菌在有前后兩門的雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器中同步進(jìn)行；所述雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器是前門進(jìn)料時(shí)后門自行鎖閉、后門出料時(shí)前門自行鎖閉的雙開門隧道式壓力蒸汽滅菌器。本發(fā)明解決了現(xiàn)在的熟化和滅菌工藝技術(shù)無法大容量處理培養(yǎng)基的問題，以及處理培養(yǎng)基質(zhì)的過程中容易染菌，造成大批量的霉變的問題。文檔編號(hào)A61L2/07GK101648029SQ20081004169公開日2010年2月17日申請(qǐng)日期2008年8月14日優(yōu)先權(quán)日2008年8月14日發(fā)明者亮唐,唐永范申請(qǐng)人:上海國寶企業(yè)發(fā)展中心;上海國寶生物工程研究所