專利名稱：：一種治療病毒性心肌炎的中藥組合物及其制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及中藥組合物，具體涉及一種治療病毒性心肌炎的中藥組合物及其制備工藝。
背景技術(shù)：
：隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展病毒性心肌炎的診斷水平有了較大的進(jìn)步，近年來該病報(bào)道的發(fā)病率上升，但目前在治療上仍無大的進(jìn)展。根據(jù)有關(guān)醫(yī)學(xué)專書載稱(于向東編著《心肌炎》。中國中醫(yī)藥出版社，2005年，P.3。)"心肌炎，是指心肌細(xì)胞及其組織間隙局限性或彌漫性炎癥，可以原發(fā)于心肌，也可由全身性疾病累及心肌所致。"基于病因不同，心肌炎可分為病毒細(xì)菌等感染性心肌炎，過敏、變態(tài)反應(yīng)或風(fēng)濕性疾病過程中引起的心肌炎，理化因素(如化學(xué)毒物、對(duì)心臟有毒的藥物以及放射性物質(zhì)或放射性對(duì)心臟直接損害等)引起的心肌炎等。其中尤以"病毒性心肌炎的發(fā)病率有逐年增高趨勢(shì)……1986年病例數(shù)為1979年的6倍。""患者的臨床表現(xiàn)輕重懸殊，輕者可無明顯的自覺癥狀，……或有輕微不適癥狀，……極重者則可在發(fā)病數(shù)小時(shí)至12天內(nèi)出現(xiàn)心力衰竭、心源性休克等，如不能及時(shí)正確地?fù)尵葮O易死亡。"除重型患者外，病人一般可分為急性期、恢復(fù)期、遷延期、慢性期和后遺癥等"四期一癥"，其中"急性期，是新發(fā)病，臨床表現(xiàn)明顯且變化多樣；恢復(fù)期，是臨床癥狀和心電圖改變等逐漸好轉(zhuǎn)，但尚未痊愈；遷延期，是臨床癥狀、體征及心電圖改變常在感冒后或疲勞后重新出現(xiàn)，或超聲心動(dòng)圖、x線檢査心臟長(zhǎng)期不回縮至正常大小，或心肌酶等實(shí)驗(yàn)室檢查有病情活動(dòng)的表現(xiàn)，但臨床心功能尚好；慢性期，可由急性病毒性心肌炎經(jīng)多次病情反復(fù)而轉(zhuǎn)成，也可起病隱漸，發(fā)現(xiàn)時(shí)己呈慢性期，臨床有進(jìn)行性心臟擴(kuò)大或反復(fù)心力衰竭，其表現(xiàn)類似擴(kuò)張型心肌病；后遺癥，是指病毒性心肌炎經(jīng)治療后臨床已無明顯癥狀，心臟大小、結(jié)構(gòu)及心功能己恢復(fù)正常，但遺留較穩(wěn)定的心電圖異常，如房室或束支傳導(dǎo)阻滯、過早搏動(dòng)及交界性心律等。"由此可見病毒性心肌炎患者在急性期固然需要認(rèn)真治療，即使在恢復(fù)期、遷延期、慢性期以及后遺癥期，因?yàn)椴“Y尚未徹底痊愈，所以都仍需要繼續(xù)調(diào)治，以使患者達(dá)到完全恢復(fù)健康、能夠正常工作或?qū)W習(xí)。對(duì)于病毒性心肌炎的治療，現(xiàn)代臨床中醫(yī)都己能采用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的各種檢驗(yàn)手段，對(duì)患者作出正確的診斷，同時(shí)還可以根據(jù)中醫(yī)學(xué)傳統(tǒng)的辯證施治原則，綜合患者的素體與癥狀表現(xiàn)，對(duì)患者區(qū)分為不同病型，進(jìn)而再依據(jù)病情立法、遣藥，使之藥證相符，取得更為顯著的療效。對(duì)于病毒性心肌炎的治療也不例外，如《實(shí)用中醫(yī)大全》(沈慶法主編《實(shí)用中醫(yī)大全》。上海古籍出版社，1992年，P.1165)所載"心肌炎"專篇即將此病分為氣陰兩虛、心脈瘀阻、心陽不振、肺腎兩虛、心陽暴脫等五型，其中氣陰兩虛型的具體癥狀是"心悸氣短、胸悶、自汗、口干舌燥、脈細(xì)數(shù)或結(jié)代。"'對(duì)于此型的治療，《心肌炎》并未專題闡述，只在"常用藥"篇中對(duì)清心蓮子飲、人參芍藥湯、玉竹葛根寧心湯三方的功效說明是"益氣養(yǎng)陰"，在牡蠣百合清心湯下注明"益氣陰"；在"中成藥"篇中的生脈口服液、玉丹榮心丸二藥下也注有"益氣養(yǎng)陰"功能。以上所說的"益氣養(yǎng)陰"或"益氣陰"功能，無疑都是用來治療屬于氣陰兩虛型患者的，由此可見心肌炎屬于氣陰兩虛者甚為多見，受到醫(yī)家的重視，并創(chuàng)制了眾多方劑和中成藥，但是考慮到這些方劑和中成藥還存在某些不足如有的方中缺乏對(duì)改善胸痛的考慮，有的方中缺乏對(duì)調(diào)治心律失常的照顧，有的方中用有與本病不相關(guān)聯(lián)的藥物。臨床上常使用的激素藥，在病毒感染的早期使用可能因抑制人體自身的免疫功能而導(dǎo)致病毒擴(kuò)散，有可能加重病情或?qū)е虏∏榉刺?；其它的抗心律失常、?qiáng)心、保護(hù)心肌細(xì)胞、非特異抗病毒、GIK治療等只不過是非特異的支持或?qū)ΠY治療，難以從清除病毒的根本上解決問題。近年來，一些上市的中藥復(fù)方制劑，如玉榮養(yǎng)心丹等，但其確切療效尚待臨床進(jìn)一步評(píng)價(jià)；現(xiàn)在臨床上使用的黃芪注射液據(jù)報(bào)道也有一定的療效，但其對(duì)病毒并沒有直接的殺滅作用，最終效果還需評(píng)價(jià)。因此，研究毒付作用小，治療效果好的用以治療病毒性心肌炎的中藥組合物受到關(guān)注。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于研究設(shè)計(jì)對(duì)病毒性心肌炎有治療作用的中藥組合物。本發(fā)明提供了一種治療病毒性心肌炎的中藥組合物(三參寧心復(fù)脈顆粒)，其中制成活性成分的中藥原料組成為下列重量份配比生曬參0-10份，丹參1-15份，苦參1-14份，黃芪l-20份，麥門冬1-18份，優(yōu)選為生曬參6份，丹參12份，苦參9份，黃芪15份，麥門冬12份。本發(fā)明中藥組合物是專為調(diào)治病毒性心肌炎恢復(fù)期、遷延期、慢性期以及后遺癥屬于氣陰兩虛、癥見疲乏無力、口干舌燥、心悸怔忡、脈象結(jié)代以及胸前痹痛等癥研制而成的中成藥。(功效與主治)補(bǔ)益氣陰、寧心復(fù)脈、開痹止痛。主治病毒性心肌炎(恢復(fù)期、遷延期、慢性期以及后遺癥)屬于氣陰兩虛、癥見疲乏無力、口干舌燥、心悸怔忡、脈象結(jié)代以及胸前痹痛者。(服法)每次6克，口月艮3次，溫開水送服。7生曬參又名生曬人參，即通稱"人參"的一個(gè)品種。藥用五加科植物人參的根，經(jīng)洗凈曬干者。性味甘、微苦，性平，歸肺、心、腎經(jīng)。功能大補(bǔ)元?dú)?、補(bǔ)肺益脾、生津止渴，主治氣虛欲脫、脈微欲絕，脾虛倦怠乏力，……氣虛津傷口渴等癥。黃芪藥用豆科植物蒙古黃芪和膜莢黃芪的根。性味甘、微溫，歸肺、脾經(jīng)。"功能益氣，主治內(nèi)傷勞倦等癥。"本品補(bǔ)氣力佳"凡脾肺氣虛，……倦怠乏力或氣不攝血，……中氣下陷……等均可選用黃疾，單用或入復(fù)方。若氣虛甚者可配人參、白術(shù)以增強(qiáng)補(bǔ)氣效力。"明代醫(yī)家蔣儀所輯的《藥鏡》中甚至還認(rèn)為"人參養(yǎng)氣，無黃芪而力弱。".本品參芪同用補(bǔ)氣作用更強(qiáng)，對(duì)改善氣虛疲乏奏效愈捷，可視為方中主要部分。麥門冬藥用百合科植物麥冬或沿階草的塊根。性味甘、微苦、微寒，歸肺、胃、心經(jīng)。"功能滋陰潤(rùn)肺、益胃生津，主治津少口渴等癥。"本方是用治心肌炎屬于氣陰兩虛者，雖然生曬參具有生津止渴作用，但不具養(yǎng)陰功能，方中加用麥門冬，則滋陰生津作用隨之有所增加。丹參藥用唇形科植物丹參和甘西鼠尾草的根。性味苦、微寒，歸心、心包、肝經(jīng)。"功能活血祛瘀，……止痛，主治瘀滯心腹疼痛。"現(xiàn)代臨床用以治療胸痹(即冠心病、心絞痛)具有顯效?？鄥⑺幱枚箍浦参锟鄥⒌母Ｐ晕犊嗪?，歸心、肺、胃、大腸經(jīng)。中醫(yī)傳統(tǒng)認(rèn)為"本品功能清熱燥濕，主治濕熱瀉痢、黃疸、帶下、陰癢、疥癬等濕毒之癥。"但本方則主要依據(jù)現(xiàn)代藥理研究報(bào)道稱其具有抗心律失常作用而采納，據(jù)《中華本草》所載苦參的藥理項(xiàng)下載稱苦參所含苦參堿、養(yǎng)化苦參堿、以及槐根堿、槐胺堿、苦參總堿、苦參總黃酮等成分對(duì)多種因素誘發(fā)的心律失常均有顯著的對(duì)抗作用。苦參。本發(fā)明的中藥組合物為顆粒劑、膠囊、口服液、片劑、注射液等。本發(fā)明的另一目的是提供了上述治療病毒性心肌炎的中藥組合物的制備工藝，該工藝包括下列步驟(1)生曬參、丹參、苦參、黃疾、麥門冬藥材各自粉碎；(2)取黃芪，用70-99%乙醇回流提取兩次，第一次加6-20倍量提取1-10小時(shí)，第二次加5-25倍量提取1-10小時(shí)，過濾，黃芪乙醇提取液另置；G)黃芪經(jīng)乙醇提取后的藥渣與生曬參、丹參和麥門冬加入水煎煮三次，每次l-20倍量，每次煎煮l-8小時(shí)，過濾；(4)濾液合并，濃縮至密度為1.10~250°C，加95%乙醇1—3倍量進(jìn)行醇沉，至含醇量為65%，冷藏放置1-24小時(shí)，濾過，濾液與黃芪乙醇提取液合并，0.1-.04mpa，5(TC，減壓濃縮蒸干，粉碎制成干浸膏粉末；(5)將甘露醇，阿斯巴甜與浸膏粉末混勻，加10Q/()PVP90。/。乙醇溶液1一20倍量，制粒，40-100'C烘干，或?qū)⒔喾叟c藥用輔料制成片劑、口服液，膠囊或注射液。本發(fā)明的又一目的是提供了中藥組合物在制備治療病毒性心肌炎藥物中的應(yīng)用。該中藥組合物由下列重量份配比的中藥與藥用輔料組成生曬參0-10份，丹參1-15份，苦參1-14份，黃芪l-20份，麥門冬1-18份，優(yōu)選為生曬參6份，丹參12份，苦參9份，黃芪15份，麥門冬12份。本發(fā)明的中藥組合物(滲寧心復(fù)脈浸膏)進(jìn)行了藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果如下本試驗(yàn)根據(jù)《藥品注冊(cè)管理辦法》中藥注冊(cè)分類第五類的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行藥效學(xué)試驗(yàn)，根據(jù)《中藥新藥藥理學(xué)研究指南》選擇動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ秃陀^察指標(biāo)。一、三參寧心復(fù)脈浸膏對(duì)SD大鼠阿霉素中毒性心肌炎的保護(hù)作用l.實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠^察三參寧心復(fù)脈浸膏對(duì)SD大鼠阿霉素中毒性心肌炎的保護(hù)作用。2.實(shí)驗(yàn)材料2.1.受試藥物及給藥劑量三參寧心復(fù)脈浸膏由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院中藥室提供，生產(chǎn)批號(hào)20080114，外觀呈黃褐色，受試藥物臨用前用生理鹽水配制成相應(yīng)濃度等體積溶液。劑量設(shè)置三參寧心復(fù)脈浸膏人用量12g，1/日，人按60kg體重計(jì)算，0.2g/kg,折算大鼠等效劑量約為1.3g/kg，按三倍劑量差設(shè)計(jì)分三個(gè)劑量組，低劑量0.4g/kg;中劑量1.3g/kg;高劑量4g/kg。陽性對(duì)照藥選用玉丹榮心丸，由上海玉丹藥業(yè)生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號(hào)國藥準(zhǔn)字Z10970095，生產(chǎn)批號(hào)20070801，劑型為蜜丸，人用量9g/次，一R三次，折算大鼠劑量為3g/kg，使用前用生理鹽水溶解灌胃。2.2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品系SD大鼠75只。級(jí)別清潔級(jí)。性別雄性。動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(滬)2003—0003體重200±20克來源第二軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。購回后適應(yīng)3天。普通鼠料喂養(yǎng)，室溫20"，12h明暗交替。給藥途徑、給藥時(shí)間及給藥容積灌胃給藥，符合臨床擬用口服給藥途徑。造模后每天給藥一次，連續(xù)7天。給藥容積為5ml/kg。3.實(shí)驗(yàn)方法3.1模型制作0.2%阿霉素1.5mg/kg腹腔注射，隔R—次，連續(xù)10天，然后分組。分組分五組，模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組，受試藥物低中高三個(gè)劑量組，每組動(dòng)物15只。3.2觀察指標(biāo)3.2.1血清酶學(xué)最后一次給藥后麻醉動(dòng)物，開腹，從下腔靜脈取血，離心留血清，測(cè)定MDA、SOD、NO、LDH、SGOT、CK、CK—MB;3.2.2心肌病理取心臟，稱重后10%福爾馬林液固定72h，脫水，石蠟包埋，切片，蘇木素、伊紅(HE)染色光鏡下觀察。心臟壞死的范圍和細(xì)胞浸潤(rùn)范圍用對(duì)照雙盲法評(píng)分，心臟病理評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)0分:無心肌損害;1級(jí)(mild):1至2個(gè)小病灶，2級(jí)(slight):數(shù)個(gè)小病灶;3級(jí)(middle):多個(gè)大病灶或嚴(yán)重的大病灶心肌損害;4級(jí)(severe):多個(gè)大病灶，彌漫性浸潤(rùn)或壞死。4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1.三參寧心復(fù)脈浸膏對(duì)SD大鼠阿霉素中毒性心肌炎血清酶學(xué)的影響與模型對(duì)照組比較，陽性對(duì)照藥玉丹榮心丸和三參寧心復(fù)脈浸膏低中高三個(gè)劑量組可降低SD大鼠因中毒性心肌炎引起的CK、CK一M、SG0T和MDA升高，同時(shí)有升高S0D和N0的作用，其中以高劑量效果最好。見表4.1表4.1三參寧心復(fù)脈浸膏對(duì)SD大鼠阿霉素中毒性心肌炎血清酶學(xué)的影響組別血清酶'模型對(duì)照組陽性對(duì)照組三參寧心復(fù)脈三參寧心復(fù)脈三參寧心復(fù)脈低劑量組中劑量組高劑量組MDA(nmol/L)126±10746.2±22.6*136±65.998.3±31.663.6±28.0SOD(mol/L)10.0±3.2623.7±13.0*18.4±7.75*13.8±6.8333.2±17.8林NO(umol/L)7.18±3.9214.8±3.69***15.4±4.74承^t"K12.9±3.06***13.4±2.57*林CK(u/L)6465±8665432±15444037±1843***4464±1358***4326±1116林*CK-M(u/L)4145±6323789±14993578±11393231±12461802±1497***SGOT(u/L)212±37.2201±33.3177±49.1164±19.4**154±34.8****P<0.05，**P<0.01，***P<0.001FS模型對(duì)照組4.2.三參寧心復(fù)脈浸膏對(duì)SD大鼠阿霉素中毒性心肌炎心肌病理評(píng)分根據(jù)上述評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，標(biāo)本送長(zhǎng)海醫(yī)院病理科進(jìn)行檢査和評(píng)分，結(jié)果如下1.模型對(duì)照組對(duì)照組心肌細(xì)胞片狀多灶性壞死，心肌間質(zhì)血管輕度擴(kuò)張充血，淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、漿細(xì)胞浸潤(rùn)及肉芽組織形成，可見到明顯的心肌間質(zhì)纖維化。2.陽性藥對(duì)照組心肌大部分纖維排列紊亂，可見散在壞死病灶，間質(zhì)血管充血水腫并有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。3.低劑量組心肌細(xì)胞輕度空泡變性，小片狀或灶性壞死，心肌間質(zhì)血管擴(kuò)張充血明顯，心肌間隙增寬、水腫，較多單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，部分呈灶性分布。4.中劑量組心肌細(xì)胞輕度水腫，心肌間質(zhì)血管擴(kuò)張充血明顯、輕度水腫，較多單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，部分區(qū)域呈灶性分布。5.高劑量組心肌細(xì)胞輕度水腫，心肌間質(zhì)血管擴(kuò)張充血，少量單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，部分區(qū)域呈灶性分布。見表4.2和照片(照片每組均選3—5號(hào)心臟標(biāo)本)。4.2三參寧心復(fù)脈方三種制劑對(duì)SD大鼠阿霉素中毒性心肌炎心肌病理評(píng)分n=10組別病理評(píng)分<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>結(jié)論三參寧心復(fù)脈浸膏灌胃給藥對(duì)阿霉素引起的SD大鼠中毒性心肌炎有較好的治療作用，病理評(píng)分顯示低中高三個(gè)劑量組之間有一定的量一效關(guān)系。二、三參寧心復(fù)脈浸膏對(duì)BULB/C小鼠病毒性心肌炎的治療作用1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠^察三參寧心復(fù)脈浸膏對(duì)SD大鼠柯薩奇病毒性心肌炎的保護(hù)作用。2.實(shí)驗(yàn)材料2.l.受試藥物及給藥劑量三參寧心復(fù)脈浸膏由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院中藥室提供，生產(chǎn)批號(hào)20080114，外觀呈黃褐色，受試藥物臨用前用生理鹽水配制成相應(yīng)濃度等體積溶液。劑量設(shè)置三參寧心復(fù)脈浸膏人用量12g，1/日，人按60kg體重計(jì)算，0.2g/kg,12折算小鼠等效劑量約為，1.8g/kg，按三倍劑量差設(shè)計(jì)分三個(gè)劑量組，低劑量0.6g/kg;中劑量1.8g/kg;高劑量5.5g/kg。陽性對(duì)照藥選用玉丹榮心丸，由上海玉丹藥業(yè)生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號(hào)國藥準(zhǔn)字Z10970095，生產(chǎn)批號(hào)20070801，劑型為蜜丸，人用量9g/次，一R三次，折算小鼠劑量為使用前用生理鹽水溶解灌胃，劑量為4g/kg。2.2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品系BALB/C小鼠。級(jí)別清潔級(jí)。性別雄性。動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(滬)2003—0003體重20±2克來源第二軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。購回后適應(yīng)3天。普通鼠料喂養(yǎng)，室溫20°C,12h明暗交替。給藥途徑、給藥時(shí)間及給藥容積灌胃給藥，符合臨床擬用口服給藥途徑。造模后每天給藥一次，連續(xù)7天。給藥容積為O.2ml/kg。3.實(shí)驗(yàn)方法3.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物4周齡雄性BALB/C小鼠120只，買回后適應(yīng)3天后分組。3.2實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分6組，每組動(dòng)物20只；除正常對(duì)照組外，其他小鼠腹腔注射柯薩奇病毒B3型親心肌M株(CVB3M)，劑量位0.1ml/1(T5，隔R—次，連續(xù)10天，10天后接受病毒注射小鼠存活65只，將其分為5組，即模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組、模型+受試藥物低中高三個(gè)劑量組，每組13只。第11天治療組小鼠開始灌胃給藥(兩個(gè)對(duì)照組給等容積生理鹽水)，每天一次，連續(xù)7天，然后觀察各組存活率。4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)連續(xù)給藥治療一周后，正常小鼠全部存活，存活率為100%;模型組于給藥次日死亡ll只，第三天全部死亡；三參寧心復(fù)脈浸膏小劑量組治療第四天全部死亡；中劑量組到實(shí)驗(yàn)結(jié)束仍有8只存活，存活率61.5%;但高劑量組到治療第七天僅有2只存活，存活率僅為15.4%。見表l。表1三參寧心復(fù)脈浸膏對(duì)BALB/C小鼠病毒性心肌炎存活率的影響組別第一天第二天第三天第四天第五天第六天第七天正常對(duì)照組n=15存活率模型對(duì)照組n=13存活率陽性對(duì)照組n=13存活率小劑量組n=13存活率中劑量組n=13存活率大劑量組n=13存活率2013202020202020100%100%100%100%100%100%100%13100%15.4%013100%53.9%46.2%46.2%46.2%46.2%46.2%13100%23.1%7.69%013100%61.5%61.5%61.5%61.5%61.5%61.5%11100%84,6%46.2%30.8%30.8%30.8%15.4%5.實(shí)驗(yàn)結(jié)論根據(jù)各組生存時(shí)間和死亡數(shù)，小劑量組效果不明顯，中劑量組效果最好，大劑量組效果不如中劑量，原因不明，可能與劑量過大產(chǎn)生毒副作用有關(guān)。三、三參寧心復(fù)脈浸膏對(duì)阿霉素所致心肌細(xì)胞毒性的保護(hù)作用l.實(shí)驗(yàn)?zāi)康捏w外制備阿霉素所致中毒性心肌細(xì)胞損傷模型，檢測(cè)三參寧心復(fù)脈浸膏對(duì)該模型心肌細(xì)胞的影響。2.陽性對(duì)照藥物玉丹榮心丸(上海玉丹藥業(yè)，批號(hào)20070801):實(shí)驗(yàn)前用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基配置并過濾滅菌。3.受試藥物三參寧心復(fù)脈浸膏實(shí)驗(yàn)前用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基配置并過濾滅菌。4.試劑注射用鹽酸阿霉素(深圳萬樂藥業(yè)有限公司)，批號(hào)0703El。用于制備心肌細(xì)胞損失模型的終濃度為lmg/L;CellCountingKit-8，用于檢測(cè)細(xì)胞活力。隨EM培養(yǎng)基，胎牛血清(Hyclone公司)，用于培養(yǎng)大鼠新生鼠心肌細(xì)胞。5.實(shí)驗(yàn)器材酶標(biāo)儀。6.實(shí)驗(yàn)方法采用出生1-4日SD大鼠新生鼠，進(jìn)行體外心肌細(xì)胞培養(yǎng)。分別接種于96孔板(3X107孔)及12孔板(5X107孔)，培養(yǎng)48h后，將培養(yǎng)后穩(wěn)定搏動(dòng)的心肌細(xì)胞隨機(jī)分為7組正常對(duì)照組；阿霉素模型對(duì)照組；阿霉素+陽性對(duì)照藥物(0.27mg/ml);阿霉素+受試藥物(0.01mg/ml);阿霉素+受試藥物(0.03mg/ml);阿霉素+受試藥物(0.09mg/ml);阿霉素+受試藥物(0.27mg/ml)，繼續(xù)孵育24h，采用CCK-8試劑檢測(cè)細(xì)胞活力，酶標(biāo)儀檢測(cè)。以上實(shí)驗(yàn)重復(fù)4次，求平均值。觀察指標(biāo)-1.細(xì)胞活力測(cè)定應(yīng)用酶標(biāo)儀，在490nm處檢測(cè)光吸收值，光吸收值越高代表細(xì)胞活力越高。2.酶學(xué)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)對(duì)照正常對(duì)照組不被阿霉素和藥物影響的心肌細(xì)胞模型對(duì)照組用阿霉素處理的心肌細(xì)胞(阿霉素終濃度為lmg/L)陽性對(duì)照組用阿霉素處理的心肌細(xì)胞(阿霉素終濃度為lmg/L)加玉丹榮心丸(0.27mg/ml)7.統(tǒng)計(jì)分析該實(shí)驗(yàn)分為7組，為單因素多樣本均數(shù)比較，擬采用方差分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以j土s表示，代0.05為具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。8.實(shí)驗(yàn)結(jié)果用CCK-8試劑檢測(cè)細(xì)胞活力發(fā)現(xiàn)，單加入阿霉素后測(cè)量細(xì)胞光吸收值遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于正常對(duì)照組，說明模型成功。在培養(yǎng)生長(zhǎng)良好的SD大鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng)板中加入阿霉素和不同濃度的受試藥物后測(cè)量心肌細(xì)胞活力與模型組比較發(fā)現(xiàn)，三參寧心復(fù)脈浸膏濃度在0.09和0.27mg/ml時(shí)能提高阿霉素所致心肌細(xì)胞損傷的細(xì)胞活力(見表l)。在對(duì)加阿霉素和受試藥物上清液做乳酸脫氫酶(LDH)和肌酸激酶(CK)發(fā)現(xiàn)，三參寧心復(fù)脈浸膏對(duì)CK無明顯影響，但可降低LDH，效果仍然是0.09和0.27mg/ml兩個(gè)劑量組，從細(xì)胞活力測(cè)定和培養(yǎng)液酶學(xué)測(cè)定結(jié)果說明，三參寧心復(fù)脈浸膏對(duì)阿霉素所致培養(yǎng)大鼠心肌細(xì)胞的損傷有較好的保護(hù)作用(P<0.01)表1三參寧心復(fù)脈浸膏對(duì)阿霉素所致心肌損傷的細(xì)胞活力的影響(]f±s,n=4)分組光吸收值(4卯nm)正常對(duì)照組0.701±0.009阿霉素模型組0.343±0.019阿霉素+陽性對(duì)照藥物(0.27mg/ml)0.360±0.015阿霉素+受試藥物(0.01mg/ml)0.344±0.009阿霉素+受試藥物(0.03mg/ml)0.366±0.012阿霉素+受試藥物(0.09mg/ml)0.404±0.012**阿霉素+受試藥物(0.27mg/ml)0.488±0.008****/7<0.01w阿霉素模型組三參寧心復(fù)脈浸膏對(duì)阿霉素所致心肌損傷的細(xì)胞酶學(xué)的影響(7±s乳酸脫氫酶肌酸激酶(LDH)U/L(CK)U/L正常對(duì)照組58.3±2.63*2.75±2.22**阿霉素模型組102±15.910.8±3.50阿霉素+陽性對(duì)照藥物(0.27mg/ml)71.0±10.1*6.00±2.45*阿霉素+受試藥物(0.01mg/ml)64.3±13.9林*8.25±1.71阿霉素+受試藥物(0.03mg/ml)79.5±16.811.0±1.63阿霉素+受試藥物(0.09mg/ml)60.0±17.2**13.0±3.46阿霉素+受試藥物(0.27mg/ml)65.8±20.5*9.25±5.74*P<0.05**p<0.01***P<0.001vs阿霉素模型組9.實(shí)驗(yàn)結(jié)論三參寧心復(fù)脈浸膏能改善阿霉素引起的體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞損傷，提高細(xì)胞活力，減少酶的溢出，對(duì)體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞具有較好的保護(hù)作用。四、三參寧心復(fù)脈浸膏對(duì)麻醉犬血流動(dòng)力學(xué)的影響1實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠^察三參寧心復(fù)脈浸膏除了對(duì)病毒性心肌炎有治療作用以外是否會(huì)影響血流動(dòng)力學(xué)。2實(shí)驗(yàn)材料2.1受試藥物和劑量設(shè)置三參寧心復(fù)脈浸膏由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院中藥室提供，生產(chǎn)批號(hào)20080114，外觀呈黃褐色，受試藥物臨用前用生理鹽水配制成相應(yīng)濃度等體積溶液。劑量設(shè)置三參寧心復(fù)脈浸膏人用量12g，1/日，人按60kg體重計(jì)算，0.2g/kg，折算成犬等效劑量約為O.382g/kg,按三倍劑量差向上設(shè)二個(gè)劑量組，分別為中劑量(L15g/kg)和高劑量(3.45g/kg)。給藥方法及給藥容積用生理鹽水溶解后灌胃給藥，給藥容積5ml/kg，給藥次數(shù)為一次。2.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和分組種屬健康Beagle犬18只。來源由第二軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。性別雄雌各半。體重89kg。實(shí)驗(yàn)前實(shí)驗(yàn)動(dòng)物禁食一晚，不禁水。分組分設(shè)3個(gè)組，即溶劑對(duì)照組(生理鹽水5/kg)、三參寧心復(fù)脈浸膏1.15g/kg(中劑量)組和3.45g/kg(高劑量)組。2.3儀器MODEL—SC-3型電動(dòng)呼吸機(jī)(上海醫(yī)療設(shè)備廠)MPA2000生物信號(hào)分析系統(tǒng)(上海奧爾科特科技有限公司)3實(shí)驗(yàn)方法犬以3X戊巴比妥30mg/kg靜脈注射麻醉，仰臥，手術(shù)區(qū)剃毛，分離一側(cè)股動(dòng)脈和右頸總動(dòng)脈，插入動(dòng)脈導(dǎo)管，連接壓力換能器，信號(hào)輸入MPA2000生物信號(hào)分析系統(tǒng)(上海奧爾科特科技有限公司)連接計(jì)算機(jī)顯示血壓波形，緩慢推進(jìn)導(dǎo)管進(jìn)入左心室并固定導(dǎo)管，穩(wěn)定30分鐘后采樣為給藥前基礎(chǔ)值，灌胃給藥后30min、60min、90min、120min和150min測(cè)定心率(HR)、收縮壓(SBP)、左心室收縮壓(LVSP)、左心室舒張末壓(LVEDP)和左心室收縮壓最大變化速率(+Dp/dt隨)。4.觀察指標(biāo)及時(shí)間觀察指標(biāo)心率(HR)、收縮壓(SBP)、左心室收縮壓(LVSP)、左心室舒張末壓(LVEDP)和左心室收縮壓最大變化速率(+Dp/dtmax)。觀察時(shí)間給藥前基礎(chǔ)值及給藥后60min、卯min、120min和150min。5.統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)i標(biāo)準(zhǔn)差Ofis)表示，采用配對(duì)t檢驗(yàn)作給藥前后統(tǒng)計(jì)分析，PO.05判斷為具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。6實(shí)驗(yàn)結(jié)果6.1三參寧心復(fù)脈浸膏對(duì)麻醉犬心率和血壓的影響與生理鹽水溶劑對(duì)照組比較，三參寧心復(fù)脈浸膏按l.15和3.45g/kg給藥，對(duì)麻醉Beagle犬心率和血壓無明顯影響。(見表6—2和表6—3)表6—2三參寧心復(fù)脈浸膏對(duì)麻醉犬心率(HRbeat/min)的影響(3f±5)n-6組別劑量g/kg)給藥前3060給藥后時(shí)間(min)90120150溶劑對(duì)照組5ml/kg170±30.5182±28.0177±25.4175±28.3174±25.6172±31.2二參寧心復(fù)1.15165±24.5170±12.4161±17.1157±14.1154±16.5154±13.4脈浸膏3.45172±29.1175±28.1172±21.1167±23.8171±21.5167±20.4表6—3:三參寧心復(fù)脈浸膏對(duì)麻醉犬血壓(SBP,mmHg)的影響0f土^)n=6組別劑量(g/kg)給藥前3060給藥后時(shí)間(min)90120150溶劑對(duì)照組5ml/kg131土17.1134±13.0132±20.2140±25.7143±26.3144±29.2三參'j'心復(fù)1.15146±39.2148±30.9■155±22.1143±18.7150±27.8151±24.7脈浸膏3.45139±26.1146±18.5146±18.6147±25.1139±25.6147±22.56.5.2三參寧心復(fù)脈浸膏對(duì)麻醉犬左心室功能(LVSP、LVEDP和+Dp/dt隨)的影響與生理鹽水溶劑對(duì)照組比較，三參寧心復(fù)脈浸膏l(xiāng).3和4mg/kg兩個(gè)劑量組對(duì)LVSP、LVEDP禾口+Dp/d加ax無明顯影響。見表6—4，6—5，6—6。表6-4三參寧心復(fù)脈浸膏對(duì)麻醉犬LVSP(mmHg)的影響(3f士^)『6劑量給藥后時(shí)間(min)組別給藥前(g/kg)306090120150溶劑對(duì)照組5ml/kg117±10.9127±15.4130±11.9134±8.78132±12.9130±20.9三參寧心復(fù)1.15126±30.0143±25.5145±15.7138±31.7135±32.5135±25.4脈浸膏3.45117±19.4128±14.1138±3.06149±25.9142±28.7146±17.4表6—5三參寧心復(fù)脈浸膏對(duì)麻醉犬LVEDP(mmHg)的影響(3f±s)n=6組別劑量Cg/kg)給藥前3060給藥后時(shí)間(min)90120150溶劑對(duì)照組5ml/kg16.4±14.919.0±21.824.7±13.518.1±10.219.0±13.721.5±12.8三參寧心復(fù)1.1523.6±8.8119.4±7.7735.1±29.823.3±10.927.4±13.525.1±16.5脈浸膏3.4524.0±17.124.5±12219.1±12.118.0±8.4719.9±8.9025.1±10.9表6—6三:參寧心復(fù)脈浸膏對(duì)麻醉犬+Dp/dtm"mmHg.s")的影響(X士s)n=6組別劑量(g/kg)給藥前3060給藥后時(shí)間(min)卯120150溶齊(J對(duì)照組5ml/kg4782±14525425±16545576±9815948±95857.4±12375558±1543三參寧4l、復(fù)1.155381±17366588±16926229±17556007±11925857±19835458±1793脈浸膏3.454455±15585359±12835633±9435861±4225466±2945879±8116.6實(shí)驗(yàn)結(jié)論三參寧心復(fù)脈浸膏按高于人用量的3倍量和9倍劑量灌胃給藥，對(duì)麻醉Beagle犬血壓和左心室功能無明顯影響。本發(fā)明的中藥組合物三參寧心復(fù)脈顆粒是通過直接清除柯薩奇病毒而發(fā)揮作用的，同時(shí)還有抗心律失常、抑制心肌炎癥反應(yīng)、提高染毒小鼠NK細(xì)胞數(shù)量和干擾素水平的作用，其綜合療效最佳，且有良好的安全性。是目前綜合療效相當(dāng)優(yōu)越，且安全性很高的產(chǎn)，有相當(dāng)廣闊的市場(chǎng)前景。具體實(shí)施方式實(shí)例l黃芪6.0kg，生曬參2.4kg,苦參3.6kg，丹參4.8kg，麥冬4.8kg，以上藥材共21.6kg。藥材各自粉碎后取黃芪藥材，用70%乙醇回流提取兩次，第一次加216kg提取1.5小時(shí)，第二次加172.8kg提取1.0小時(shí)，過濾，黃芪乙醇提取液另置。黃芪經(jīng)乙醇提取后的藥材，與其它4味藥材，加入水煎煮三次，每次加259.2kg，煎煮1.0小時(shí)，過濾；濾液合并，濃縮至密度為1.10-1.15(5(TC)，加95%乙醇至含醇量為65%，冷藏(約4'C)放置12小時(shí)，濾過，濾液與黃芪乙醇提取液合并，減壓濃縮0.2mpa，50°C，濃縮液經(jīng)真空烘箱5(TC干燥，粉碎制成干浸膏粉末，即得。干浸膏粉重4.8kg，得率為22.2%，該浸膏可與藥用輔料按常規(guī)方法制成片劑、口服液、膠囊、顆粒劑或注射液。實(shí)例2:中試制備情況按實(shí)例1方法的浸膏制備6g/袋規(guī)格的顆粒，生產(chǎn)和檢驗(yàn)情況如下。浸膏用量150g，甘露醇75g，阿斯巴甜1.5g混勻，10。/。PVP9(P/。乙醇溶液適量，制粒、烘干制成顆粒劑，裝量6g/袋，產(chǎn)量35包，成品率94.6%。實(shí)例3:片劑生曬參6克，丹參12克，苦參9克，生黃芪15克，麥門冬12克。上述各中藥按實(shí)例1方法制成浸膏后與藥用輔料，按片劑常規(guī)方法制成片劑。服用時(shí)，每次6克(每片2克)，口服3次，溫丌水送服。權(quán)利要求1、一種治療病毒性心肌炎的中藥組合物，其特征在于其中制成活性成分的中藥原料組成為下列重量份配比生曬參0-10份，丹參1-15份，苦參1-14份，黃芪1-20份，麥門冬1-18份。2、一種如權(quán)利要求1所述的治療病毒性心肌炎的中藥組合物的制備方法，其特征在于該方法包括下列步驟配方生曬參0-10份，丹參1-15份，苦參1-14份，黃芪l-20份，麥門冬1-18份；方法(1)生曬參、丹參、苦參、黃芪、麥門冬藥材各自粉碎；(2)取黃芪，用70-99%乙醇回流提取兩次，第一次加6-20倍量提取1-10小時(shí)，第二次加5-25倍量提取1-10小時(shí)，過濾，黃芪乙醇提取液另置；(3)黃芪經(jīng)乙醇提取后的藥渣與生曬參、丹參和麥門冬加入水煎煮三次，每次l-20倍量，每次煎煮l-8小時(shí)，過濾；(4)濾液合并，濃縮至密度為1.10-25(TC，加95%乙醇1一3倍量進(jìn)行醇沉，至含醇量為65%，冷藏放置l-24小時(shí)，濾過，濾液與黃芪乙醇提取液合并，0.1-0.4mpa，5(TC減壓濃縮蒸千，粉碎制成干浸膏粉末；(5)將甘露醇，阿斯巴甜與浸膏粉末混勻，加10。/。PVP90。/。乙醇溶液l一20倍量，制粒，40-10(TC烘干，或?qū)⒔喾叟c藥用輔料制成片劑、口服液，膠囊或注射液。3、一種治療病毒性心肌炎的中藥組合物，其特征在于其中制成活性成分的中藥原料組成為下列重量份配比生曬參6份，丹參12份，苦參9份，黃芪15份，麥門冬12份。4、根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的治療病毒性心肌炎的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物為顆粒劑、膠囊、片劑、口服液或注射液。5、一種如權(quán)利要求3所述的治療病毒性心肌炎的中藥組合物的制備方法，其特征在于該方法包括下列步驟-配方生曬參6份，丹參12份，苦參9份，黃芪15份，麥門冬12份；方法-(1)生曬參、丹參、苦參、黃芪、麥門冬藥材各自粉碎；(2)取黃芪，用70-99%乙醇回流提取兩次，第一次加6-20倍量提取1-10小時(shí)，第二次加5-25倍量提取1-10小時(shí)，過濾，黃芪乙醇提取液另置；(3)黃芪經(jīng)乙醇提取后的藥渣與生曬參、丹參和麥門冬加入水煎煮三次，每次l-20倍量，每次煎煮l-8小時(shí)，過濾；(4)濾液合并，濃縮至密度為1.10-250°C，加95%乙醇1—3倍量進(jìn)行醇沉，至含醇量為65%，冷藏放置l-24小時(shí)，濾過，濾液與黃芪乙醇提取液合并，0.1-0.4mpa，5(TC，減壓濃縮蒸干，粉碎制成干浸膏粉末；(5)將甘露醇，阿斯巴甜與浸膏粉末混勻，加10。/。PVP90。/()乙醇溶液l一20倍量，制粒，40-10(TC烘千，或?qū)⒔喾叟c藥用輔料制成片劑、口服液、膠囊或注射液。6、一種中藥組合物在制備治療病毒性心肌炎藥物中的應(yīng)用，其特征在于其中制成活性成分的中藥原料組成為下列重量份配比生曬參0-10份，丹參1-15份，苦參1-14份，黃芪l-20份，麥門冬1-18份。7、一種中藥組合物在制備治療病毒性心肌炎藥物中的應(yīng)用，其特征在于其中制成活性成分的中藥原料組成為下列重量份配比生曬參6份，丹參12份，苦參9份，黃芪15份，麥門冬12份。全文摘要本發(fā)明公開了一種治療病毒性心肌炎的中藥組合物，它是由下列重量份配比的中藥原料制成的生曬參0-10份，丹參1-15份，苦參1-14份，黃芪1-20份，麥門冬1-18份。經(jīng)動(dòng)物試驗(yàn)表明本發(fā)明對(duì)SD大鼠柯薩奇病毒性心肌炎的保護(hù)作用、以及對(duì)阿霉素所致培養(yǎng)大鼠心肌細(xì)胞的損傷有較好的保護(hù)作用等，可用于治療病毒性心肌炎，有較大的臨床應(yīng)用價(jià)值。文檔編號(hào)A61K36/8968GK101637563SQ20081004127公開日2010年2月3日申請(qǐng)日期2008年8月1日優(yōu)先權(quán)日2008年8月1日發(fā)明者堅(jiān)張,昕張,張鼎樑,蔡素琴,謝利寧申請(qǐng)人:上海慈濟(jì)藥業(yè)有限公司