專利名稱：：佐劑組合物及其使用方法佐劑組合物及其使用方法本申請是申請?zhí)枮?9807591.4、申請日為1999年5月7日、發(fā)明名稱為"佐劑組合物及其使用方法"的中國專利申請的分案申請。疫苗包括抗原或混合抗原，當將其給予溫血動物時可以防止、改善或治療疾病。傳染病的疫苗原來包括整個的減弱的或殺死的微生物。然而很快發(fā)現(xiàn)，微生物或細胞中只有少量的蛋白質或蛋白質片段刺激保護的免疫反應，事實上，整個細胞外來物質的包含會阻礙免疫反應。因此，疫苗的開發(fā)集中于找出會導出保護性免疫反應的具體的蛋白質、蛋白質片段和編碼該抗原決定部位的DNA片段。但是，隨著抗原鑒定越來越精確，疫苗的效率下降。鑒定出的抗原常是不能由抗原處理細胞識別的小分子。因此需要將這些抗原與能增強該抗原的抗原性以及給予卓越的免疫反應的物質結合起來。這些物質就是佐劑。佐劑的作用有幾種方法。某些幫助將抗原表給予抗原處理細胞(APC)。水包油乳液、油包水乳液、微脂粒和微玻璃細珠都幫助將抗原給予APC。小的抗原或半抗原常連接到更大的致免疫的蛋白質或多糖以促進由APC識別。某些佐劑具有將抗原就地固定直到身體有機會實現(xiàn)免疫反應的儲存效果。其它的佐劑刺激免疫系統(tǒng)一般是增大實現(xiàn)抗原上的特異反應。減弱的脂質A衍生物(ALD)單磷?；|A(MLA)和3-脫酰的單磷?；|A(3D-MLA)是用于傳染病的預防性疫苗和治療惡性腫瘤和慢性感染的治療疫苗的有效的免疫的佐劑。MLA和3D-MLA是細菌內毒素脂多糖(LPS)的改性形式，是眾所周知的，并分別在美國專利4，436，727和4，912，094中討論過。MLA和3D-MLA既能誘發(fā)服用具有抗原的該化合物的患者體液的抗體反應也誘發(fā)細胞-媒介的免疫反應。有效的疫苗給予溫血動物以抗原，使得動物能實現(xiàn)對這些抗原的保護的免疫反應。為實現(xiàn)這種作用，疫苗常需要包括佐劑，這些佐劑既刺激體液的和細胞的免疫反應并且是安全和無毒的，還會小、增進任何疫苗的效果。本發(fā)明是新佐劑組合物。這種佐劑是包括有新陳代謝的油、表面活性劑、抗氧化劑和使該乳液等滲的成分的穩(wěn)定的水包油乳液(SE)。這種穩(wěn)定的乳液的粒徑是不到130毫微米-3微米。70-200毫微米的乳液可以通過過濾殺菌。這種穩(wěn)定乳液的親水-親脂平衡值約為7.5-10.5，優(yōu)選約為8.0。在優(yōu)選的實施方案中，將佐劑組合物同減弱的脂質A衍生物(ALD)混合。ALD的加入增加了該組合物的輔佐性?？捎糜诒景l(fā)明的ALD包括單磷?；|A和3-脫酰的單磷?；|A。ALD可以濃度為約1微克-12，000微克/毫升包括在配方中。新的穩(wěn)定的乳液的疫苗組合物也屬于權利要求中。本發(fā)明是穩(wěn)定的水包油乳液的佐劑組合物，其中包括新陳代謝的油、表面活性劑、抗氧化劑以及使乳液等滲的成分。所得到的乳液經緩沖，具有粒徑不到3微米，這種穩(wěn)定乳液的親水-親脂平衡值約為7.5-10.5，優(yōu)選為約8.0。在優(yōu)選的實施方案中，這種穩(wěn)定的乳液包括約2%-15%，優(yōu)選約為10%體積/體積的新陳代謝的油角鯊烯。在穩(wěn)定乳液中約有2%表面活性劑。在本發(fā)明的穩(wěn)定乳液中可以加入約50微克的抗氧化劑和約1.75%的使乳液等滲的試劑。本發(fā)明可以使用的新陳代謝的油包括角鯊烯、豆油、芝麻油和MIGLYCOL810油。角鯊烯是優(yōu)選的。本發(fā)明可以使用的表面活性劑是Tween80、CAMPULPEO-0低PV表面活性劑(ABITECCorp.,Janesville，WI)、S0LIT0LHS15表面活性劑(BASFCorp.，Chicago,IL)以及PLURONICF68嵌段共聚物(BASFCorp.，Chicago,IL)、膽酸鈉、甘油脫氧膽酸鹽、磷脂酰膽堿，其中PLURONICF68嵌段共聚物是優(yōu)選的。已經發(fā)現(xiàn)，將Tween80和CAMPULPEO-0低PV表面活性劑靜脈內給狗時產生組胺型反應。其它適宜的表面活性劑包括神經鞘脂如神經磷脂、神經鞘氨醇，以及磷脂如蛋磷脂酰膽堿、1，2-二肉豆寇酰-順-丙三氧基-3-.磷酸乙醇胺、L-a-磷脂酰乙醇胺以及l(fā),2-二棕櫚酰-順-丙三氧基-3-磷酸膽堿(DPPC)或它們的混合物。DPPC可以用于人類。本發(fā)明的穩(wěn)定的乳液中所用的抗氧化劑包括a-生育酚和抗壞血酸，其中a-生育酚是優(yōu)選的?？梢约拥奖景l(fā)明的乳液中使佐劑等滲的試劑包括葡萄糖、甘油、甘露醇、山梨醇、PEG300、PEG400以及聚乙二醇。其中，甘油是優(yōu)選的。在特別優(yōu)選的實施方案中，將減弱的脂質A衍生物(ALD)加到本發(fā)明的組合物中。ALD是象脂質A—樣的分子，并已經改變或建造成使該分子顯示較少的或不同的脂質A的不利的效應。這些不利的效應包括致熱原性、局部Shwarzman反應性和毒性，如在雞胚胎50%致死劑量試驗(CELD5。)中評價的。在本發(fā)明中所用的ALD包括單磷酰基脂質A(MLA)和3-脫酰的單磷?；|A(3D-MLA)。MLA和3D-MLA是眾所周知的，在此不需要詳細討論.例如可參看美國專利1984年3月13曰發(fā)布并轉讓給Ribii畫noChemResearch,Inc.的美國專利4，436,727,這篇專利公開了單磷酰基脂質A及其制造。同樣轉讓給RibiimmunoChemResearch,Inc.的Myers等人的美國專利4,912，094以及再審查證書B14,912，094中包括了3-脫酰的單磷酰基脂質A以及其制法。這些有關MLA和3D-MLA的專利內容在此引為參考。不用討論這些參考專利文獻的細節(jié)，這里所用的單磷?；|A(MLA)衍生自脂質A，這是腸桿菌脂多糖(LPS)的成分，是有效的但高毒性的免疫系統(tǒng)調制器。EdgarRibi和它們的同事實現(xiàn)了原稱為精制的脫毒內毒素(RDE)的單磷?；|A(MLA)的生產。MLA是通過在中度強度(0.1當量的HC1)的無機酸溶液中將由革蘭陰性細菌的無庚糖突變體得到的內毒素浸出物(LPS或脂質A)回流約30分鐘而得到。這種處理造成還原的末端葡(萄)糖胺1位的磷酸鹽部分的失去。同時，在處理中從非還原的葡(萄)糖胺的6位上除去芯碳水化合物。得到的產物(MLA)顯示出通常與內毒素原料有關的內毒素活性(如致熱源性、局部Shwarzman反應性以及如在雞胚胎50%致死劑量試驗(CELDs。)評價的毒性)的大幅度的減弱。但是，未預料地保持了作為免疫調制劑的脂質A和LPSD功能。用在本發(fā)明實際的另一種脫毒的內毒素稱為3-脫酰的單磷?；|A(3D-MLA)。3D-MLA在美國專利4，912,094、再審查證書Bl4，912,094中提到，它不同于MLA之處是，從MLA分子上選擇地除去的B-羥基肉豆蔻酰殘基是在對其它基團不產生不利影響的條件下連接到還原的末端葡(萄)糖胺3位的酯。3-脫酰的單磷酰脂質A可以從RibiImmunoChemResearch,Inc.,HamiltonMontana59840得到。MLA和3D-MLA分子是許多脂肪酸取代基方式(即庚?；?、己酰基、戊酰基等具有不同的脂肪鏈長度)的復合和混合物。因此，本發(fā)明包括各種形式的MLA和3D-MLA，包括他們的混合物。在美國專利一094中舉例的的脂質A主鏈相當于由S.minnesotaR595的庚酰基脂質A經3-脫酰得到的產物。這篇專利包括其它脂肪酸取代方式，主要特征為材料是3-脫酰的。用在本發(fā)明中的改性的3D-MLA的制備是將MLA在只有脂質A的主鏈的3位失去單一的脂肪酸的條件下進行堿水解。P-鞋基肉豆蔻酸的3位在堿性介質中非常不穩(wěn)定。只需很溫和的堿處理就使脂質A完全3-脫酰，在發(fā)生水解前，需要稍強的條件使脂質A中的其它的酯鍵才能選擇性地3位脫酰而不會明顯響應該分子的其他部分。酯連接的P-羥基肉豆蔻酸3位在堿介質中的不尋常的敏感性的原因現(xiàn)在還不清楚。盡管堿性水解的方法是熟知的，但是重要的是，選擇除了在3位的酯鍵生成成P-幾基肉豆蔻酸外而不引起進一步水解的條件。一般說來，水解可以在水或有機介質中進行。在后者情況下，溶劑包括甲醇(醇類)、二甲基亞砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)、氯仿、二氯甲烷等以及他們的混合物。也可以使用水同一種或多種上述的有機溶劑的混合物。堿可以選自各種氳氧化物、碳酸鹽、磷酸鹽以及胺。舉例的堿包括無機堿如氬氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀等以及有機堿如烷基胺，包括但不限于二甲胺、三乙胺等。在含水介質中，pH—般約介于10和14之間，而12-13.5是優(yōu)選的。水解反應的溫度一般約為20-80t:,優(yōu)選約為50-60C反應時間約為10-30分鐘。例如，水解可以在室溫(22-25X:)下在3%的三乙胺水溶液中進行48小時。唯一的對水解溫度和時間選擇的要求是脫酰發(fā)生時只在3位除去P-羥基肉豆蔻酰。在實際上已經發(fā)現(xiàn)，特別希望的水解方法包括將脂質A或單磷?；|A溶解在用由0.5摩爾Na2C03組成的pH10.5的緩沖水溶液飽和的氯仿甲醇2:1中，然后在吸氣器(約100毫米汞柱)中真空下在40-50X:將溶劑閃蒸。將得到的材料在3位選擇脫酰。這種方法也能用上述的任何無機堿進行。在某些情況下，在用緩沖水溶液飽和前，可以在有機溶液中加入相轉移催化劑，如四丁基溴化銨。除了上述生產的MLA和3D-MLA外，也可以使用由合成或半合成制造的ALD。本發(fā)明的組合物是佐劑。當給予有蛋白質抗原的患者以有效量的該組合物時，增強了患者對這種抗原的免疫反應。所謂的有效量的佐劑組合物是能刺激或增進免疫反應的量。熟悉該領域的人員知道需要刺激對這種抗原免疫反應的抗原的量。例如，2.5微克的乙肝表面抗原(HBsAg)服用本發(fā)明的優(yōu)選的實施方案可誘導出鼠的體液反應。已經意外地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的穩(wěn)定的乳液同ALD混合時，可以明顯降低ALD的致熱原性。致熱原性是由化合物產生的發(fā)燒態(tài)。ALD、3D-MLA當同在40%聚乙二醇和10%乙醇中配制與由本發(fā)明的穩(wěn)定的乳液配制相比，產生更高的發(fā)燒反應。組合物的致熱原性可以以標準的三支兔USP熱原試驗評價。簡言之，將化合物以不同的劑量給予三支兔。在4小時中，檢測每支動物的體溫。任何溫度的下降記錄作0。個別的溫度升高不超過0.5下被認為非熱原的。如果該組合物引起溫度的升高為0.5或更高，則用五支不同的兔再次對該組合物重新試驗。如果總數(shù)八支兔中有不多于3支顯示溫度升高0.5或更高，以及如果八支兔中的每支的溫度升高的總和不超過3.3T,則該組合物被認為是非熱原的。下面的實施例說明實現(xiàn)本發(fā)明的方法。除非指出，則所有的百分數(shù)是指重量，所有的溶劑混合比例是指體積。實施例1-3D-MLA/SE的制備在特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的穩(wěn)定的乳液包括下列物質材料量3D-MLA1.200-0.005%重量/體積角畫烯10.000%體積/體積PLUR0NIC-F68嵌段共聚物0.091%重量/體積蛋磷脂酰膽堿1.909%重量/體積甘油1.800%體積/體積a-生育酚0.050%重量/體積注射用水78.200%體積/體積磷酸銨緩沖液10.000%體積/體積對熟悉該領域的人員顯然知道如何制備上述溶液。但是我們發(fā)現(xiàn)，制備上述溶液最容易的是調制三種原料溶液MLA/蛋磷脂酰膽堿原料、油原料溶液和原料水溶液。為制備MLA/蛋磷脂酰膽堿原料，將3-脫酰的單磷酰基脂質A(3D—MLA)(RibiI腿unoChemResearch,Inc.Hamilton,MT)和蛋褲月旨酰膽堿(eggPC)都溶解于4:1氯仿甲醇(C:M)中。然后將兩種溶液混合，使C:M蒸發(fā)。通過將此混合物放在冷凍干燥器中，在減壓下放置約1-2小時，以除去剩余的溶劑C:M。通過將a-生育酚同角鯊烯混合并在熱水浴中旋轉直到溶解以制備油相原料溶液。將PLURONICF-68NF嵌段共聚物和甘油稱重到螺帽瓶中，以制備水相原料溶液，在加溫瓶中加入注射用水，并輕輕混合直到各成分溶解。將0.25摩爾的pH約5.1±0.005的磷酸胺緩沖液加到PLURONICF-68NF嵌段共聚物/甘油/水中。再加入水使達到所要求的體積。為制備穩(wěn)定的乳液，將原料油相和MLA/蛋磷脂酰膽堿混合物混合。將該混合物經聲波處理直到MLA溶解。然后將油相加熱到75"C,同時將水相加熱到75°C。用Silverson乳化器將油相MLA/eggPC混合物乳化，同時緩慢加入水相。得到的SE乳液的HLB為8.0,在冰浴中冷至室溫。在閥門壓力22，000-25，000磅/平方英寸下用AvestinC-50均化器將乳液進一步均化到粒徑達到S0.2微米。最后的產物佐劑用0.2微米的親水隔膜濾器過濾。進一步均化和最后的濾器消毒步驟不會影響組合物中的3D-MLA的量以及制備的輔佐性。實施例2-用3D-MLA/SE產生抗體反應在0天用實施例1中制備的佐劑配制的2.5微克乙軒表面抗原(HBsAg)使鼠初次免疫(初次免疫)，經靜脈內注射(每次注射200微升)。在第21天使鼠得到第二次免疫(二次免疫)(每次注射200微升)。初次免疫后的第19天(第一次免疫后19天)和在二次免疫后第27天(第二次免疫后第27天)將鼠抽血。收集血清，用標準ELISA檢測抗HBsAg抗體。表1表明，本發(fā)明的組合物在給予動物該抗原時在動物中誘導產生抗HBsAg抗體。<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>*K=10實施例3-細胞毒素的T-淋巴細胞反應的刺激A)在服用本發(fā)明佐劑組合物和蛋白質抗原后用細胞毒素試驗檢測細胞毒素T-淋巴細胞(CTL)反應的誘導。C57/BL/6鼠各組用在本發(fā)明的穩(wěn)定的乳液媒介(SE)和3D-MLA/SE中配制的l.O微克乙肝表面抗原給予靜脈內初步免疫(腹股溝)。如在實施例1中制備MLA/SE佐劑。為試驗本發(fā)明乳液的穩(wěn)定性，在將其同抗原混合之前七天或在免疫之日將乳液稀釋1/10。注射的體積為200微升。十四天后，殺死每試驗組的三支鼠，并除去脾，作為單一細胞懸浮液集中并計數(shù)。在每組剩下的鼠中用在SE媒介和3D-MLA/SE佐劑中配制的1.0微克HbsAg給予靜脈內二次免疫(腹股溝)。十四天后，將每試驗組中所有的鼠殺死，除去脾，作為單一細胞的懸浮液集中并計數(shù)。將試驗各組的脾細胞(在3-4毫升介質中75Xl(f細胞)放在25平方厘米的T燒瓶中。接著，將1.0毫升的經輻照過(20，000拉德)的E.G7(OVA)以5X107毫升加到燒瓶中。使體積達到10亳升。通過將T-燒瓶直立放在37C和5%(:02的恒溫箱中培育4天。在第4天，從燒瓶中回收存活的細胞，洗l次，重新懸浮在5.0毫升中并計數(shù)。將回收的效應細胞調節(jié)成5Xl(f活細胞/毫升，用100微升/井的介質作為稀釋劑在96孔的圓底盤(Corning25850)將100微升體積依序稀釋三倍。接著，在IOO微升體積的"Cr-標記的(見下面)靶[E.G7(OVA)-卵清蛋白基因感染的EL-4細胞系]以1乂105細胞/毫升加入到井中。自發(fā)釋放(SR)井含IOO微升的靶和IOO微升的介質。最大釋放(MR)井含100微升的耙和100微升的洗滌劑(2%Tween20)。效應器/把(E/T)比為50:1、25:1、12.5:1、6.25:1。將盤在400倍重力加速度下離心，并在37X:、5%0)2下培育4小時.培育后，用Skatron上清液收集系統(tǒng)收集井上清液。,(Exp.釋放-SR)百分特異溶菌=(MR-SR)耙細胞E.G7(OVA)用51Cr(鉻酸鈉)進行如下的標記。在總體積1.0毫升中，在15毫升的圓錐形管中將5X1()6靼細胞和250微居里的"Cr混合。將細胞懸浮液在37X:水浴中培育90分鐘，每15分鐘輕輕混合一次。培育后，標記的細胞通過離心和傾析用15毫升的介質體積洗3次。在第三次離心后，將細胞重新懸浮在IO毫升新鮮介質中，并在室溫放置30分鐘，然后離心。最后將細胞重新懸浮在介質中達1Xl(f細胞/毫升。細胞毒素試驗的結果表示在表2和3中。表2初次免疫后14天細胞毒性反應佐劑MLA%細胞毒性微克E/T50:125:112.5:16.25:1預稀釋第7天3D-MLA/SE5044301873D-MLA/SE2536171163D-MLA/SE52913943D-MLA/SE1271373SE(介質)0251374PBS075203D-MLA/SE502112533D-MLA/SE25483624133D-MLA/SE52214943D-MLA/SE1251473SE(媒介)0241163PBS08310正常6320表3<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>B)服用3D-MLA/SE和蛋白質抗原在處理的鼠中誘導出細胞毒素T-淋巴細胞反應和抗原產生。在0天(初次免疫)和21天(二次免疫)用2.0微克的HbsAg+2.5微克3D-MLA/SE使BALB/c鼠皮下免疫。如下面一樣進行CTL試驗。3D-MLA/SE佐劑如實施例1一樣的制備。表4說明誘發(fā)細胞毒素T-淋巴細胞反應表4細胞毒素反應%細胞毒素的反應E/T佐劑天50:125:112.5:16.25:13D-MLA/SE初次免疫后17天55271410媒介SE3216963D-MLA/SE二次免疫后16天81624724媒介SE3823148對HbsAg的抗體滴定度的結果示于表5。在二次免疫后28天取的血液的血清在涂以HbsAg或涂以28個氨基酸的多肽(p72)的ELISA盤進行滴定，該多肽在S區(qū)含HbsAg的B-細胞抗原決定部位的110-137的殘基。表5在經處理的鼠中抗-肝炎抗體的滴定度_抗-HBsAg滴定度一1_HBsAgp72-多肽佐劑IgG2aIgGiIgG2a3D-MLA/SE1024K2048K64K256K媒介SE1024K64K64K4K正常鼠的血清<0.5K<0.5K〈0.5K<0.5K用3D-MLA/SE處理過的鼠對乙肝表面抗原既顯示出體液的也顯示出細胞毒素T-淋巴細胞的反應。實施例4-3D-MLA/SE致熱原性評價3D-MLA/SE佐劑在標準的三兔USP熱原試趙NAMSA，Northwood0H)中進行了評價。本發(fā)明的3D-MLA/SE佐劑同在40%丙二醇(PG)和10%乙醇(EtOH)中配制的3D-MLA(經過兩次試驗在劑量5、8、11、14、15、17、20、25、30、35微克/公斤下進行了評價)進行了對比。3D-MLA/SE配方經過兩次試驗用同樣的兔熱原試驗中在劑量75、100、125、150、200、250、300、350微克/公斤下進行了評價。熱原劑量和邊界熱原劑量由建立的USP說明中定義。邊界熱原劑量是三支兔中至少一支經三小時的施加劑量后具有峰值溫度超過上述邊界值^0.5的劑量。表6A在40%PG/10%EtOH中的3D-MLA的致熱原性最大的溫度升高劑量兔兔兔總計微克/公斤二351.10.60.92.6351.10.92.44.3300.90.60.72.2250.71.10.92.7200.50.60.61.7170.40.30.31.0150.40.30.41.1140.40.30.31.0110.10.20.10.480.00.10.10.250.10.00.00.1表6B3D-MLA的致熱原性最大溫度升高<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>進一步評價了3D-MLA的熱原性并同在10%Et0H中配制的3D-MLA進行了對比。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>是邊界熱原劑量的20微克/公斤劑量的在40%PG/10%EtOH中的3D-MLA和定義為閥熱原劑量的劑量的200微克/公斤的3D-MLA/SE具有十倍的差別。3D-MLA/SE佐劑比其它配制的該化合物的熱原性低的多(表6和7)。同樣，本發(fā)明的佐劑組合物是安全的，在注射位置產生的與藥物有關的傷害很低甚至沒有，淋巴節(jié)將注射部位和脾臟引流。應該理解，這里討論的實施例和實施方案只是為了說明，對熟悉該領域的人可以提出各種改進和變化，這些改進和變化將包括在本申請的精神實質和范圍以及所附的權利要求范圍內。權利要求1.一種佐劑組合物，該組合物包括新陳代謝油、一種或多種表面活性劑、抗氧化劑以及使所說的組合物等滲的成分。2.權利要求1的組合物，其中所說的新陳代謝油選自角望烯、豆油、芝麻油和MIGLYOL810油。3.權利要求l的組合物，其中所說的新陳代謝油是角望烯。4.權利要求l的組合物，其中所說的一種或多種表面活性劑選自TVeen80、CAMPULP0E-0低PV表面活性劑、S0LIT0LHS15表面活性劑、PLURONICF68嵌段共聚物、膽酸鈉、甘油脫氧膽酸鹽、神經磷脂、神經鞘氨醇、1，2-二肉豆寇酰-順-丙三氧基-3-.磷酸乙醇胺、L-a-磷脂酰乙醇、1，2-二棕櫚酰-順-丙三氧基-3-磷酸膽堿以及蛋磷脂酰膽堿或它們的混合物。5.權利要求l的組合物，其中所說的一種或多種表面活性劑是蛋磷脂酰膽堿和PLUR0NICF68嵌段共聚物的混合物。6.權利要求1的組合物，其中所說的抗氧化劑選自cc-生育酚和抗壞血酸。7.權利要求l的組合物，其中所說的抗氧化劑是a-生育酚。8.權利要求l的組合物，其中所說的使所說的乳液等滲的成分選自葡萄糖、甘油、甘露醇、山梨醇、PEG300、PEG400以及聚乙二醇。9.權利要求l的組合物，其中所說的使所說的乳液等滲的成分是甘油。10.權利要求l的組合物，其中所說的組合物是水包油乳液。11.權利要求1的組合物，其中所說的乳液的親水親脂平衡值約為7,0-13.0。12.權利要求1的組合物，其中所說的乳液的親水親脂平衡值約為8.0。13.權利要求1的組合物，其中所說的穩(wěn)定乳液包括約10%體積/體積的角鯊烯、0.09。/i重量/體積的PLUR0NICF-68嵌段共聚物、1.9%重量/體積的蛋磷脂酰膽堿、1.75%體積/體積的甘油以及0.05/。重量/體積的oc-生育酚。14.權利要求1的組合物還包括減弱的脂質A衍生物。15.權利要求14的組合物，其中所說的減弱的脂質A衍生物選自單磷?；|A和3-脫酰的單磷?；|A。16.權利要求14的組合物，其中所說的減弱的脂質A衍生物是單磷?；|A。17.權利要求14的組合物，其中所說的減弱的脂質A衍生物是3D-單磷?；|A。18.權利要求14的組合物，其中所說的減弱的脂質A衍生物是約1.200%-0.005%重量/體積的所說的穩(wěn)定的乳液。19.一種疫苗組合物，其中包括抗原和佐劑組合物，該佐劑組合物包括新陳代謝油、一種或多種表面活性劑、抗氧化劑以及使所說的乳液等滲的成分。20.權利要求19的疫苗組合物，其中所說的穩(wěn)定乳液包括約10%體積/體積的角鯊烯、0.09%重量/體積的PLURONICF68嵌段共聚物、1.9%重量/體積的蛋磷脂酰膽堿、1.75%體積/體積的甘油以及0.05%重量/體積的oc-生育酚。21.權利要求19的疫苗組合物，其中所說的穩(wěn)定乳液還包括選自單磷?；|A和3-脫酰的單磷?；|A。22.—種溫血動物刺激免疫反應的方法，此法包括給該動物以抗原和有效量的穩(wěn)定的水包油乳液，此乳液包括新陳代謝油、一種或多種表面活性劑、抗氧化劑以及使所說的乳液等滲的成分。23.權利要求22的方法，其中所說的穩(wěn)定乳液包括約10%體積/體積的角鯊烯、0.09%重量/體積的PLURONIC嵌段共聚物、1.9%重量/體積的蛋磷脂酰膽堿、1.75%體積/體積的甘油以及0.05%重量/體積的ot-生育酚。24.權利要求22的方法，其中所說的穩(wěn)定乳液還包括選自單磷酰基脂質A和3-脫酰的單磷?；|A的減弱的脂質A衍生物。全文摘要本文討論了并要求保護一種穩(wěn)定的水包油乳液的佐劑組合物，其中包括新陳代謝油、一種或多種表面活性劑、抗抗氧化劑以及使該乳液等滲的成分。該穩(wěn)定的乳液的親水-親脂平衡值(HLB)為約7.5-10.5，粒徑不到3微米。在優(yōu)選的實施方案中，該穩(wěn)定乳液包括10％體積/體積的角鯊烯、0.09％重量/體積的PLURONICF68嵌段共聚物、1.9％重量/體積的蛋磷脂酰膽堿、1.75％體積/體積的甘油以及0.05％重量/體積的α-生育酚。優(yōu)選的乳液的HLB為8.0，粒徑約為0.2微米。在特別優(yōu)選的實施方案中，該穩(wěn)定的乳液同減弱的脂質A衍生物如單磷酰基脂質A或3-脫酰的單磷?；|A結合，可以增強該組合物的輔佐性。文檔編號A61K9/66GK101219217SQ200810008718公開日2008年7月16日申請日期1999年5月7日優(yōu)先權日1998年5月7日發(fā)明者G·D·李斯曼申請人:科里克薩有限公司