專利名稱：聚氨基酸在連續(xù)脂相中的分散體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于延長(zhǎng)釋放一種或多種活性成分(尤其是蛋白質(zhì)和肽活 性成分)的基于水性膠體懸浮液或水性分散體的新型藥物制劑。本發(fā)明進(jìn) 一步涉及這些藥物制劑的應(yīng)用，尤其是治療學(xué)上的應(yīng)用。這些活性藥物制 劑既用于治療人體又用于治療獸類。
背景技術(shù)：
在藥物活性成分，特別是治療用蛋白質(zhì)的延長(zhǎng)釋放領(lǐng)域中，許多情況 下需要盡量確保病人的治療用蛋白質(zhì)或治療用肽的血漿濃度與健康受試者 的值接近。
這個(gè)目標(biāo)因?yàn)榈鞍踪|(zhì)在血漿中的壽命短而難以實(shí)現(xiàn)，因此需要重復(fù)注 射治療用蛋白。因而，治療用蛋白的血漿濃度呈現(xiàn)"鋸齒"分布，表現(xiàn)為
多個(gè)高濃度的峰和極低濃度的谷。由于治療用蛋白(例如白細(xì)胞介素IL2) 的高毒性，峰濃度大大高于健康受試者體內(nèi)的基礎(chǔ)濃度，可能導(dǎo)致明顯的 有害效果。此外，谷濃度遠(yuǎn)低于療效所需的濃度，因此，病人得到的治療 不足，卻要經(jīng)受長(zhǎng)期的副作用影響。
此外，為了保證病人的治療用蛋白血漿濃度接近治療的最佳值，這里 討論的藥物制劑必須允許延長(zhǎng)釋放治療用蛋白，從而限制血漿濃度隨著時(shí) 間而變化。
進(jìn)一步，該活性制劑應(yīng)優(yōu)選地滿足以下為本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的條件 1 )延長(zhǎng)釋放活性的和非變性的治療用蛋白，例如，人體蛋白或合成蛋 白，以使治療用蛋白的血漿濃度保持在治療水平；
2) 注射粘度足夠低以便于注射；
3) 生物相容性以及生物可降解的形式，不呈現(xiàn)毒性或?qū)е旅庖叻磻?yīng)， 具有良好的局部免疫耐受性。為了達(dá)到這些目的，現(xiàn)有技術(shù)中其中一個(gè)最優(yōu)的方式是開發(fā)用于延長(zhǎng) 釋放治療用蛋白的劑型，其由加載治療用蛋白質(zhì)的納米顆粒的低粘度液體 懸浮液組成。這些懸浮液促進(jìn)天然治療用蛋白的給藥。
因此，F(xiàn)lamelTechnologies提出了一種方法，其中，治療用蛋白與含有 疏水基團(tuán)和親水基團(tuán)的共聚氨基酸的納米顆粒結(jié)合。
專利US-B-5904936記載了兩性分子聚氨基酸共聚物的平均粒徑為 0.01-0.5 ia m的亞微米顆粒(NPV),以及平均粒徑為0.5-20 n m的微米顆粒 (MPV)。該兩性分子聚氨基酸共聚物含有至少兩種類型的氨基酸，其一 為中性及疏水的，另一種為可電離的。蛋白，例如胰島素，在水性溶液中 自發(fā)被吸附到這些顆粒之上。例如，該聚氨基酸共聚物為聚(L-亮氨酸-嵌 段-L-谷氨酸鈉)的嵌段共聚物。所述專利記載了通過向聚亮氨S^/谷氨酸的 膠體懸浮液中加入單價(jià)陽(yáng)離子鹽(硫酸銨)或多價(jià)陽(yáng)離子鹽(Fe2+、 Fe3+、 Zn2+、 Ca2+、 Al2+、八13+或0!2+)、酸(HC1)或陽(yáng)離子聚合物(聚賴氨酸) 使NPV聚合為MPV。
專利申請(qǐng)WO-A-2005/033181公開了線性的、兩性分子的陰離子均聚氨 基酸，其含有天冬氨酸殘基谷氨酸殘基，其末端帶有包含8-30個(gè)碳原子的疏 水基團(tuán)。例如，特別的，該疏水改性的遠(yuǎn)螯均聚氨基酸為具有PheOC18/C18 末端的聚谷氨酸鈉或具有PheOC18/oc-維生素E末端的聚谷氨酸鈉。在水中， 這些疏水改性的遠(yuǎn)螯均聚氨基酸自發(fā)形成納米顆粒的膠體懸浮液，該納米 顆粒能夠在水性懸浮液中pH為7.4的條件下易于和至少一種活性蛋白(胰島 素)結(jié)合。
有益地，根據(jù)專利US-B-5904936和WO-A-2005/033181的懸浮液矢量分 析的活性蛋白(如胰島素)在體內(nèi)的釋放時(shí)間能夠增加。
在PCT申請(qǐng)WO-A-05/051416中記載的藥劑形式部分實(shí)現(xiàn)了釋放時(shí)間的 增加。在所述專利申請(qǐng)中，聚(L-谷氨酸鈉)的納米顆粒(0.001-0.5 Mm) 疏水改性膠體懸浮液在一定濃度下注射，使得在皮下注射后，其和內(nèi)源性 的血清白蛋白接觸，在病人的注射部位形成凝膠體。然后蛋白緩慢的被釋 放，通常為一周左右。
若需要蛋白的釋放時(shí)間超過上述專利申請(qǐng)中所述的一周，則有以下幾 種可能性。第 一種辦法是增加聚合物的濃度，從而減緩體內(nèi)注射后的蛋白釋放。 然而，這種方法的危害是溶液粘度的急劇上升，令該體系無法被注射。
第二種方法是使蛋白分散在與水不混溶的可注射的脂相中，從而降低 蛋白在皮下介質(zhì)中的擴(kuò)散。然而，這種方法的危害是與脂相接觸的蛋白的
潛在變性。
進(jìn)一步，專利US6235282 Bl記載了一種可注射的油包水乳液，作為制 備疫苗的免疫原助劑。從免疫學(xué)角度看，該乳液的水相中包含了一種活性 物質(zhì)或疫苗抗原。因此，導(dǎo)致在水相中活性物質(zhì)的不穩(wěn)定性，以及在水-油界面上活性物質(zhì)的變性風(fēng)險(xiǎn)。所述專利未涉及活性成分的延長(zhǎng)釋放。
專利申請(qǐng)US2004/0071716 Al涉及一種用于疫苗制劑的助劑。該助劑包 括油包水乳液。乳化劑為高分子乳化劑，或者更確切的，是具有通式 A-COO-B-OOC-A的順序共聚物，其中B為可溶于水的聚乙二醇的二價(jià)殘基， A為可溶于脂的單羧酸化合物殘基。根據(jù)實(shí)施例，該病毒抗原存在于水相中， 因此同樣伴隨著病毒抗原穩(wěn)定性和變性風(fēng)險(xiǎn)的問題。所述專利申請(qǐng)未涉及 活性成分的延長(zhǎng)釋放。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的發(fā)明人提供了 一種低粘度脂形式，其用于延長(zhǎng)與聚合物結(jié)合 的治療用蛋白的釋放時(shí)間，且不會(huì)降低蛋白的穩(wěn)定性，從注射能力角度看， 也不會(huì)使治療形式的粘度高于可接受限度。
本發(fā)明首先涉及一種藥物組合物，用于延長(zhǎng)釋放至少 一種活性成分。 該組合物含有至少 一種在水相中的活性成分，該水相含有至少 一種兩性聚 合物。該水相為在連續(xù)脂相中的分散體形式。更確切的，該組合物為油包 水的乳液形式，含有
藥學(xué)上可接受的連續(xù)脂相，
水性分散相，含有至少 一種兩性聚合物和至少 一種與所述兩性聚氨 基酸非共價(jià)結(jié)合的活性成分，以及
至少一種藥學(xué)上可接受的表面活性劑。 在本發(fā)明的一種變形中，所述兩性聚合物帶有至少一個(gè)疏水基團(tuán)。在本發(fā)明的一種變形中，所述兩性聚合物為兩性聚氨基酸，可選地帶 有至少一個(gè)疏水基團(tuán)。因此，在本發(fā)明的一種變形中，所述藥物組合物為
油包水乳液形式，含有下列組分 藥學(xué)上可接受的連續(xù)脂相，
水性分散相，含有至少一種帶有至少一個(gè)疏水基團(tuán)的兩性聚氨基酸， 和至少一種與所述兩性聚氨基酸非共價(jià)結(jié)合的活性成分，以及 至少一種藥學(xué)上可接受的表面活性劑。 在本發(fā)明另 一 種變形中，該兩性聚合物為帶有至少 一 個(gè)疏水基團(tuán)的多糖。
這類藥物組合物可以通過慣用途徑給藥，特別的，通過至少以下一種 途徑口、鼻、眼、皮膚、陰道、直腸或胃腸外。胃腸外給藥值得一提的 是皮下注射、肌肉注射、腹膜注射、皮內(nèi)注射、靜脈注射、動(dòng)脈注射、脊 柱內(nèi)注射、關(guān)節(jié)內(nèi)注射以及胸膜內(nèi)注射。
根據(jù)另一特征，本發(fā)明還涉及如下所述不同兩性聚合物(特別是多糖 和聚氨基酸)在制備藥物組合物中的應(yīng)用，該藥物組合物為油包水乳液形 式，其水性分散相含有至少一種所述兩性聚合物。本發(fā)明的一種變形包括 使用 一種或多種帶有至少 一個(gè)疏水基團(tuán)的兩性聚氨基酸制備這類藥物組合 物。
定義
"水性介質(zhì)中的物理凝膠體"是指溶解或分散在水相中的分子、大分
以由粘彈性測(cè)量定義。在上下文中，物理凝膠體為一種在一定頻率范圍內(nèi) 楊氏模量G，大大高于損耗模量G"的體系，因此，定義為兩個(gè)模量交點(diǎn)的倒 數(shù)的特征馳豫時(shí)間大于或等于0.1s，特別優(yōu)選的為大于或等于10s。
基于本發(fā)明的目的以及貫穿于整個(gè)公開內(nèi)容，術(shù)語"聚氨基酸"包括 含有超過10個(gè)氨基酸殘基的天然聚氨基酸以及合成聚氨基酸。通常在本發(fā) 明中，"該"聚氨基酸應(yīng)理解為是指用在藥物組合物中的不同聚氨基酸的 混合物。基于本發(fā)明的目的，措辭"帶有"表示所討論的帶有的基團(tuán)、接枝或 自由基為垂掛基團(tuán)。換句話說，所述基團(tuán)相對(duì)于兩性聚合物主鏈為側(cè)鏈基 團(tuán)。對(duì)于含有谷氨酸和/或天冬氨酸殘基串聯(lián)的聚氨基酸而言，該基團(tuán)為天
冬氨酸殘基5位羰基的取代基或谷氨酸殘基s位羰基的取代基。對(duì)于其他
氨基酸殘基，垂掛基團(tuán)為所述氨基酸殘基特定側(cè)鏈的取代基。 兩性多聚糖
在本發(fā)明的一種變形中，兩性聚合物可以是改性多糖，例如Kuroda等 人(2002 )在Langmuir第18期3780-3786頁(yè)發(fā)表的文章"Hierarchical self-assembly of hydrophobically modified pullulan in water: gelation by networks of nanoparticles"中記載的疏水改性的普魯蘭多糖(膽固醇普魯糖、 十六碳烷基普魯糖)。
在本發(fā)明的另 一 個(gè)變形中，使用的兩性多糖選自透明質(zhì)酸 (hyaluronan)、藻酸鹽、殼聚糖、半乳糖醛酸(galacturonan)、疏酸軟骨 素、右旋糖苷、纖維素和/或它們的官能衍生物。這類多糖在^^開號(hào)為WO 2007/034320的國(guó)際專利申請(qǐng)有記載。特別的，這些多糖為透明質(zhì)酸、藻酸 鹽、殼聚糖、右旋糖苷和/或它們被至少一個(gè)咪唑基(imidazolyl)或至少一 個(gè)疏水基團(tuán)官能化的衍生物。這類多糖以及它們的合成形態(tài)，特別是右旋 糖苷的衍生物，在公開號(hào)為WO 2007/116143的國(guó)際專利申請(qǐng)中有記載。
兩性聚氨基酸
在本發(fā)明的另一個(gè)變形中，使用的兩性聚合物為兩性聚氨基酸。在一 個(gè)優(yōu)選的變形中，其為帶有至少一個(gè)疏水基團(tuán)的兩性聚氨基酸。
在本發(fā)明的一個(gè)變形中，使用的聚氨基酸為含有重復(fù)谷氨酸或天冬氨 酸殘基的均聚物或者含有這兩種殘基的混合物的共聚物。這些殘基是谷氨 酸或天冬氨酸殘基時(shí)可以是鹽的形式。以這種方式形成的鹽必須是藥學(xué)上 可接受的。本發(fā)明的余下部分描述了通常為藥學(xué)上可接受的補(bǔ)償離子的不 同的例子。谷氨酸或天冬氨酸殘基以及它們的鹽可以具有D或L型?？梢韵?象到，聚氨基酸可以同時(shí)含有D型殘基以及L型殘基。若是谷氨酸根或谷氨酸殘基，重復(fù)的殘基通過它們的OC或Y位互相結(jié)合，若是天冬氨酸或天冬
氨酸根殘基，重復(fù)的殘基通過它們的cc或(3位互相結(jié)合。
在本發(fā)明的一個(gè)變形中，聚氨基酸的主鏈實(shí)質(zhì)上含有具備L型的氨基酸 殘基，它們通過a型聯(lián)接(通過它們的oc位)互相結(jié)合。
在本發(fā)明的另一個(gè)變形中，兩性聚氨基酸通過衍生于天冬氨酸(天冬 氨酸殘基)和/或谷氨酸(谷氨酸殘基)的單體形成，至少部分所述殘基帶 有含有至少一個(gè)疏水基團(tuán)[GH]的接枝。特別的，這些氨基酸為PCT申請(qǐng) WO-A-00/30618中記載的類型。
在本發(fā)明的一個(gè)變形中，除了含有至少一個(gè)疏水基團(tuán)[GH]的接枝外， 兩性聚氨基酸可以帶有衍生于組氨酸殘基的取代基。這種情況下，所述組 氨酸殘基可以通過酰胺鍵與谷氨酸或天冬氨酸殘基相結(jié)合。
下面將描述帶有疏水基團(tuán)的不同類型的兩性聚氨基酸。為簡(jiǎn)便起見， 通式將以方括號(hào)標(biāo)識(shí)。然而，這些通式對(duì)應(yīng)的兩性聚氨基酸尤其可以為序 列聚合物/共聚物、嵌段聚合物/共聚物或無規(guī)聚合物/共聚物?？梢韵胂螅@ 些不同變形可以組合，例如，選擇下述合適的兩性聚氨基酸混合物或者在 一個(gè)或相同兩性聚氨基酸中組合不同類型的接枝。
優(yōu)選的，聚氨基酸的主鏈選自 cc -L-谷氨酸才艮或oc -L-谷氨酸均聚物； a -L-天冬氨酸根或a -L-天冬氨酸均聚物；以及 a -L-天冬氨酸根/ a -L-谷氨酸根或oc -L-天冬氨酸/ oc -L-谷氨酸共 聚物。
兩性聚氨基酸的主鏈上天冬氨酸和/或谷氨酸單元的分布使得得到的聚 氨基酸或?yàn)闊o規(guī)型或?yàn)榍抖涡突驗(yàn)槎嗲抖涡?。同樣的，兩性聚氨基酸主?上的疏水基團(tuán)的分布使得得到的聚氨基酸或?yàn)闊o規(guī)型或?yàn)榍抖涡突驗(yàn)槎嗲?段型。因此，下述的通式(I) 、 (II) 、 (III) 、 (IV) 、 (V)應(yīng)理解為 不僅代表序列(或嵌段)共聚物，而且也代表無規(guī)共聚物或多嵌段共聚物。
根據(jù)另 一定義，根據(jù)本發(fā)明所述組合物中使用的兩性聚氨基酸的分子 量在2000至100000g/mol之間，優(yōu)選為5000至40000g/mol之間。
在第一個(gè)變形中，所述藥物組合物中使用的兩性聚氨基酸具有如下通 式(I)，及其藥學(xué)上可接受的鹽<formula>formula see original document page 17</formula>其中
R'為氫原子、C2-C10的直鏈酰基、C3-C10的支鏈?；⒔构劝彼岣?或-R4-[GHl]基團(tuán)；
R"為-NHRS基團(tuán)或通過氮結(jié)合的末端氨基酸殘基，其酸性基團(tuán)可選地 通過-NHRS胺基或-OP^醇基改性；
114各自獨(dú)立地為直接鍵或含有l(wèi)-4個(gè)氨基酸殘基的間隔基團(tuán)(spacer group );
Rs為氫原子、Cl-C10的直鏈烷基、C3-C10的支鏈烷基或芐基； W為氫原子、Cl-C10的直鏈烷基、C3-C10的支鏈烷基、芐基或 -114-
基團(tuán)；
A和B各自獨(dú)立地為-CH2-(天冬氨酸殘基)基團(tuán)或-0^2-(:112-(谷氨 酸殘基)基團(tuán)；為疏水基團(tuán)；
疏水基團(tuán)[GHl]的摩爾接枝率n/(n+m)相對(duì)于兩性聚氨基酸足夠低， 從而在25 。C 、 pH為7的水溶液中形成聚氨基酸亞微米顆粒的膠體懸浮液。 n/(n+m)優(yōu)選為l至25moiyo之間；以及
聚合度(n+m)為10-1000，優(yōu)選為50-300。關(guān)于制備及合成如通式(I)所述聚氨基酸的具體內(nèi)容，可以參見公開
號(hào)為FR2840614以及FR2855521的專利申請(qǐng)。
根據(jù)第二種可能性，所述兩性聚氨基酸具有下述通式(II) 、 (III)、 (IV)中的一種，及其藥學(xué)上可接受的鹽
,COOH
(n)
其中
Ra為C2-C6的直鏈烯基；
Rb為C2-C6的烯基、C2-C6的二烷氧基或C2-C6的二胺基；
R7各自獨(dú)立的為直接鍵、含有1 -4個(gè)氨基酸殘基的間隔基團(tuán)或者
-C(0)-CH2-CH2-基團(tuán)；
R8為-NHI^基團(tuán)或通過氮結(jié)合的末端氨基酸殘基，其酸性基團(tuán)可選地
分別通過-NHW胺基或-OR"醇基改性；
W為氫原子、Cl-C10的直鏈烷基、C3-C10的支鏈烷基或千基； R^為氫原子、Cl-C10的直鏈烷基、C3-C10的支鏈烷基、芐基或
R1 '各自獨(dú)立的為直接鍵或含有1 -4個(gè)氨基酸殘基的間隔基團(tuán)； 八和8各自獨(dú)立的為-092-(天冬氨酸殘基)基團(tuán)或-0^2-0^2-(谷氨
酸殘基)基團(tuán)；[GH2]和[GH3]各自獨(dú)立的為疏水基團(tuán)；以及 聚合度(ml+m2)和m3為10-1000,優(yōu)選為50-300。 關(guān)于制備及合成如通式(II) 、 (III) 、 (IV)所述聚氨基酸的具體內(nèi) 容，可以參見公開號(hào)為FR2860516的專利申請(qǐng)。
根據(jù)第三種可能性，所述兩性聚氨基酸具有下述通式(V)，以及其藥 學(xué)上可接受的鹽
<formula>formula see original document page 19</formula>(V)
其中
Re為-NHR's基團(tuán)或通過氮結(jié)合的末端氨基酸殘基，其酸性基團(tuán)可選 地分別通過-NHRS胺基或-OR"醇基改性；
Rd為氫原子、C2-C10的直鏈?；?、C3-C10的支鏈酰基或焦谷氨酸根
基團(tuán)；
R"各自獨(dú)立的為二價(jià)、三價(jià)或四價(jià)的連接基團(tuán)，優(yōu)選自-O-、 -NH-、 Cl-C5的-N-烷基、氨基酸殘基、C2-C6的二醇、C3-C6的三醇、C2-C6的二 胺、C3-C6的三胺、C2-C6的氨基醇或C2-C6的羥基酸；1113各自獨(dú)立的為-OH基團(tuán)或通過胺片段結(jié)合的乙醇胺基團(tuán)； R"為烷基酯基團(tuán)、-012011基團(tuán)(組氨醇)、氫原子(組胺)、-C(0)NH2 基團(tuán)(組酰胺)、-C(0)NHCH3基團(tuán)或-C(0)N(CH3)2基團(tuán)；
R"和R"各自獨(dú)立的為氬原子、Cl-C10的直鏈烷基、C3-C10支鏈烷 基或芐基；各自獨(dú)立的為疏水基團(tuán)，選自 。直鏈或支鏈的C8-C30的烷基，可選地含有至少一個(gè)不飽和單位 和/或至少一個(gè)雜原子，
。C8-C30的烷基芳基或芳基烷基基團(tuán)，可選地含有至少一個(gè)不飽和 單位和/或至少一個(gè)雜原子，以及
。C8-C30的(聚)環(huán)基，可選地含有至少一個(gè)不飽和單位和/或至少一 個(gè)雜原子；
p、 q和r為正整數(shù)；
在每個(gè)共聚物鏈平均含有至少3個(gè)疏水接枝的條件下，疏水基團(tuán)[GH] 的摩爾接枝率(p)/(p+q+r)為l-50mol%;
衍生于組氨酸殘基的基團(tuán)的摩爾接枝率(q)/(p+q+r)為l-99mol%;
(r)/(p+q+r)為0-98mol。/o;以及
(p+q+r)為10-1000，優(yōu)選為30-500。 通常，疏水基團(tuán)[GH4]中的雜原子為氧原子、氮原子或硫原子。 可用于官能化谷氨酸根單元的組氨酸殘基的衍生物各自相同或不同， 可以是，例如，組氨酸酯(如曱酯和乙酯)、組胺醇以及組胺。這些衍生 物也可以為，例如，組酰胺(histidinamide)、組酰胺的N-單曱基衍生物以 及組酰胺的N,N' -二曱基^f汙生物。
在本發(fā)明的一個(gè)變形中，至少一個(gè)疏水基團(tuán)[GH4]包含在含有至少一個(gè) 間隔基團(tuán)1112的疏水接枝中，從而將疏水基團(tuán)[GH4]與聚谷氨酸鏈(例如聚 谷氨酸根主鏈或骨架)結(jié)合。該間隔基團(tuán)可以包括，例如，至少一個(gè)直接 共價(jià)鍵和/或至少一個(gè)酰胺鍵和/或至少一個(gè)酯鍵。例如，該間隔基團(tuán)特別可 以屬于以下幾種類型聚谷氨酸根的組成單體單元中的不同氨基酸殘基、 氨基醇衍生物、聚胺(如二胺)衍生物、聚醇(如二醇)衍生物以及羥基 酸書t生物。形成具有疏水基團(tuán)[GH4]的疏水接枝的間隔基團(tuán)R"可以為二價(jià)、三價(jià) 或四價(jià)的(甚至五價(jià)或更高)。對(duì)于二價(jià)間隔基團(tuán)R12,疏水接枝含有單基 團(tuán)[GH4],然而，三價(jià)間隔基團(tuán)R"使疏水接枝具有分叉特征，即，該疏水 接枝具有兩個(gè)疏水基團(tuán)[GH4]?？梢耘e出的三價(jià)間隔基團(tuán)R12的例子有氨基 酸殘基，例如谷氨酸，或者聚醇?xì)埢?，例如丙三醇。含有疏水基團(tuán)[GH4] 的疏水接枝的兩個(gè)優(yōu)選(但非限制性)的例子為二烷基丙三醇和二烷基谷 氨酸鹽。
關(guān)于制備及合成如通式(V)所述聚氨基酸的具體內(nèi)容，可以參見公開 號(hào)為FR2892725的專利申請(qǐng)。
在本發(fā)明的一個(gè)變形中，具有通式(I) 、 (II) 、 (III) 、 (IV)的 兩性聚氨基酸的疏水基團(tuán)[GHl]、 [GH2]以及[GH3]選自辛氧基、十二氧基、 十四氧基、十六氧基、十八氧基、油氧基(oleyloxy)、生育酚氧基 (tocopheryloxy)以及膽甾醇氧基(cholesteryloxy)。進(jìn)一步，具有通式(V ) 的兩性聚氨基酸的疏水基團(tuán)[GH4]選自辛基、十二烷基、十四烷基、十六烷 基、十八烷基、油基(oleyl )、生育酚基(tocopheryl )和膽甾醇基(cholesteryl )。 優(yōu)選的，本發(fā)明的該變形中，R4 (通式I) 、 R7 (通式n和iv) 、 R11 (通式 m和iv)為直接鍵，R12 (通式V)為-O-基團(tuán)。
在本發(fā)明的另一個(gè)變形中，可選地與前述變形結(jié)合，兩性聚氨基酸(I)、 (II) 、 (III) 、 (IV)或(V)中的疏水基團(tuán)[GHl]、 [GH2]、 [GH3]以及 [GH4]各自獨(dú)立的為具有下述通式(VI)的單價(jià)基團(tuán)<formula>formula see original document page 21</formula>
其中
R"各自獨(dú)立的為曱基、異丙基、異丁基、仲丁基或芐基； R18各自獨(dú)立的為含有6-30個(gè)碳原子的疏水基團(tuán)；以及 tl為0-6。
在本發(fā)明的一個(gè)變形中，全部或部分疏水基團(tuán)R"各自獨(dú)立的選自直鏈或支鏈的烷氧基團(tuán)，含有6-30個(gè)碳原子，可選的含有至少一個(gè)不飽 和單元和/或至少一個(gè)雜原子，
含有6-30個(gè)碳原子的烷氧基團(tuán)，含有一個(gè)或多個(gè)稠碳環(huán)(fUsed carboncycles )，可選地含有至少一個(gè)不飽和單元和/或至少一個(gè)雜原子，
含有7-30個(gè)碳原子的烷氧芳基或含有7-30個(gè)碳原子的芳氧烷基，可選地 含有至少一個(gè)不飽和單元和/或至少一個(gè)雜原子。
通常，雜原子可以為氧、氮或硫原子。實(shí)際上但不限于，在具有通式 (1)、 (11)、 (III) 、 (IV)或(V)的兩性聚氨基酸中，具有通式(VI) 的疏水基團(tuán)R"選自辛氧基、十二氧基、十四氧基、十六氧基、十八氧基、 油氧基(oleyloxy)、生育酚氧基(tocopheryloxy)以及膽甾醇氧基 (cholesteryloxy)。
在本發(fā)明的一個(gè)變形中，疏水基團(tuán)[GHl]、 [GH2]、 [GH3]以及[GH4]的 摩爾接枝率為lmol。/。-25mo10/。。優(yōu)選的，摩爾接枝率為5moP/o-20mo1。/。。疏 水基團(tuán)的摩爾接枝率定義為帶有至少一個(gè)疏水基團(tuán)的主鏈中氨基酸殘基數(shù) 目比上兩性聚氨基酸主鏈中氨基酸殘基的總數(shù)(聚合度)。
在本發(fā)明的一個(gè)變形中，所述兩性聚氨基酸還帶有至少一個(gè)與谷氨酸 根和/或天冬氨酸根殘基結(jié)合的聚烯基乙二醇型接枝。優(yōu)選的，該接枝具有 如下所示的通式(VII):<formula>formula see original document page 22</formula>
其中
R"各自獨(dú)立的為直接鍵或含有l(wèi)-4個(gè)氨基酸殘基的間隔基團(tuán)； X為雜原子，選自氧、氮和硫；
R"和R"各自獨(dú)立的為氬原子或C 1 -C4的直鏈烷基；以及 t2為10-1000，優(yōu)選為50-300。 實(shí)際上，聚烯基乙二醇為，例如，聚乙烯乙二醇。理想的聚烯基乙二 醇的摩爾接枝率為l-30mol%。實(shí)際上，根據(jù)本發(fā)明使用的兩性聚合物，特別是具有通式(I) 、 (II)、 (III ) 、(IV )或(V )的兩性聚氨基酸的藥學(xué)上可接受的鹽，是羧酸基團(tuán)
在水性溶液中為離子形式的那些鹽。通常與金屬或有機(jī)陽(yáng)離子實(shí)現(xiàn)成鹽 例如下列金屬陽(yáng)離子鈉、鉀、釣或^:離子；
例如下列有機(jī)陽(yáng)離子基于胺的陽(yáng)離子、基于低聚胺的陽(yáng)離子以及 基于聚胺(特別是聚乙亞胺)的陽(yáng)離子?；诎被岬年?yáng)離子中一個(gè)優(yōu)選 的變形為選自基于賴氨酸或精氨酸(例如多聚賴氨酸或低聚賴氨酸)的陽(yáng)離子。
上述兩性聚氨基酸很寶貴，因?yàn)樗鼈兙哂锌烧{(diào)的接枝率，在pH 7.4時(shí) (如，在磷酸鹽緩沖下)在水中分散形成膠體懸浮液。
進(jìn)一步，活性成分，例如蛋白、肽或小分子，其實(shí)例如上所述，能夠 自發(fā)與這些聚氨基酸結(jié)合。這樣的結(jié)合是多種非共價(jià)物化相互作用的結(jié)果。 它們可以是，例如，氫鍵、離子鍵、疏水相互作用、范德華力或這些非共 價(jià)鍵的共同作用。嚴(yán)格的說，在一些情況下，活性成分和聚氨基酸間可能 沒有結(jié)合，而只是在聚氨基酸的物理膠體中的空間排列將活性成分包圍。
能夠用于本發(fā)明制劑的兩性聚氨基酸通過例如現(xiàn)有技術(shù)中熟知的方法 得到。無規(guī)聚氨基酸可以通過傳統(tǒng)的偶聯(lián)反應(yīng)將預(yù)先被"間隔基團(tuán)"官能 化的疏水基團(tuán)[GH]直接接枝在聚合物上得到。嵌段或多嵌段聚氨基酸可以 通過序列聚合相應(yīng)的氨基酸N-酸酐(NCA)得到。
例如，均聚谷氨酸根或均聚天冬氨酸根聚氨基酸或嵌段、多嵌段或無 規(guī)谷氨酸根/天冬氨酸根共聚物通過傳統(tǒng)方法制備。
要得到cc型聚氨基酸，最常用的技術(shù)是基于氨基酸N-酸酐(NCA)聚 合，在Fuller, W.D., Verlander， M.S.和Goodman, M. 1976年發(fā)表在 《Biopolymers》上15期1869頁(yè)的文章《A procedure for the facile synthesis of amino acid N-carboxy anhydrides》以及H.R. Kricheldorf撰寫的《Alpha-amino acid N-carboxy anhydride and related heterocycles》Springer Verlag ( 1987 )中 有記載。NCA衍生物優(yōu)選為NCA-O-Me、 NCA-O-Et或NCA-O-Bz衍生物(Me =曱基，Et-乙基，Bz-千基)。得到的聚合物接著在合適的條件下水解 得到其酸形式的聚合物。這些方法是基于本申請(qǐng)發(fā)明人的專利 FR-A-2801226中的記載。本發(fā)明可以使用的許多聚合物，例如，具有不同分子量的聚(oc-L-天冬氨酸)型、聚(cc-L-谷氨酸)型、聚(cc-D-谷氨 酸)型以及聚(y-L-谷氨酸)型的聚合物是商業(yè)上可獲得的。ot-P型的聚 天冬氨酸通過縮聚天冬氨酸(以得到聚琥珀酰亞胺)，并堿性水解得到 (Tomida等人在Polymerl997年38期4733-36頁(yè)發(fā)表)。
疏水接枝[GH]與聚合物的酸基團(tuán)的偶聯(lián)，簡(jiǎn)便的通過在碳二亞胺偶聯(lián) 劑和可選的催化劑的存在下反應(yīng)聚氨基酸實(shí)現(xiàn)，所述催化劑例如為在適合 溶劑中的4-二曱基氨基吡啶，所述適合的溶劑例如二曱基曱酰胺(DMF)、 N-曱基吡咯啉(NMP)或二曱基亞石風(fēng)(DMSO)。所述碳二亞胺例如為， 二環(huán)己基碳二亞胺或二異丙基碳二亞胺。接枝率通過成分和反應(yīng)物的化學(xué) 計(jì)量比或通過反應(yīng)時(shí)間化學(xué)控制。通過"間隔基團(tuán)"官能化的疏水接枝[GH] 通過傳統(tǒng)的肽偶聯(lián)或在酸催化下直接縮聚得到。這些技術(shù)是現(xiàn)有技術(shù)中熟 知的。
先通過疏水接枝合成NCA衍生物，再用NCA衍生物合成嵌段或多嵌段 共聚物。例如，疏水NCA衍生物與NCA-O-千基共聚，之后選擇性地通過水 解除去千基。 連續(xù)脂相
為本發(fā)明的目的，脂相或油相含有疏水有機(jī)化合物(其在2(TC-40。C為 液體)或其混合物。優(yōu)選的，脂相含有至少一種選自可代謝油的油。進(jìn)一 步，所選的油或其混合物25。C時(shí)的動(dòng)力學(xué)粘度小于或等于400mPa.s。可以 設(shè)想的是，由于脂相動(dòng)力學(xué)粘度的降低，藥物組合物的可注射性改善了。 因此，優(yōu)選使用具有25。C時(shí)的動(dòng)力學(xué)粘度小于或等于150mPa.s的脂相，更 優(yōu)選的，按照優(yōu)先級(jí)遞增的順序，分別為小于或等于80mPa,s、 40 mPa.s或 30 mPa.s。
可用的可代謝油中，值得一提的是選自動(dòng)物、植物或合成的中鏈脂肪 酸的甘油三酯，動(dòng)物或植物來源的脂肪酸，它們的酯和鹽，以及其混合物。 例i口 ，三辛酉臾甘油商旨/發(fā)酸甘油酉旨(glycerol tricaprylate/capmte )(例^口 ， Miglyol 812， Sasol )作為中鏈脂肪酸甘油三酯油使用。另一個(gè)例子是， 脂相可以含有選自橄欖油、甜杏仁油(sweet-almond oil)、向日葵油、豆 油、落花生油、玉米油、椰子油、棉籽油、蓖麻油及其混合物的至少一種 油。表面活性劑
選擇表面活性劑或其混合物以獲得低于6的HLB。
親水-親油平衡系數(shù)(HLB)是分子親水性或親油性程度的經(jīng)驗(yàn)衡量 值。記載有不同的測(cè)量HLB的方法，特別是Griffm在1949年發(fā)表在《Journal of the Society of Cosmetic Chemists》 1巻311頁(yè)的Classification of Surface-Active Agents by "HLB"， 1954年發(fā)表在《Journal of the Society of Cosmetic Chemists》5巻259頁(yè)的Calculation of HLB Values of Non-Ionic Surfactants, 以及Davies在1957年發(fā)表的《Proceedings of the International Congress of Surface Activity》中426-438頁(yè)中Gas/Liquid and Liquid/Liquid Interface的A quantitative kinetic theory of emulsion type, I. Physical chemistry of the emulsifying agent。
例如，表面活性劑選自聚甘油酯、荒麻酸酯(ricinoleic acid esters )、 山梨聚糖油酸鹽、卵磷脂、C6-C20的脂肪酸和/或不飽和脂肪酸的單或二甘 油酯、聚蓖麻酸酯，及其混合物。
優(yōu)選的，表面活性劑含有聚甘油酯，特別是那些天然脂肪酸酯，例如 油酸、硬脂酸、蓖麻酸、亞油酸以及亞麻酸的酯。聚甘油蓖麻醇酸酯或者 聚甘油聚蓖麻醇酸酯(PGPR)為優(yōu)選的表面活性劑。 藥物組合物的制備
第一步，制備水相，其含有至少一種兩性聚合物，其濃度為每g水相 5-100mg，以及至少一種活性成分。例如，在活性成分為干擾素ct-2b時(shí)， 可以制備每g水相l(xiāng)mg的濃度。水相在25。C下攪拌足夠長(zhǎng)的時(shí)間，例如，24 小時(shí)，以使兩性聚合物和活性成分結(jié)合。然后通過將HLB低于6的表面活性 劑或其混合物溶解于可代謝油或其混合物中來制備脂相，所述可代謝油或 其混合物25。C下的粘度小于或等于400mPa,s。優(yōu)選的，所述可代謝油或其 混合物25 。C下的粘度小于lOOmPa.s。
水相和脂相接觸約l小時(shí)，同時(shí)適當(dāng)攪拌，以保證水相與脂相的質(zhì)量比 小于或等于50/50，優(yōu)選為小于或等于30/70。通過轉(zhuǎn)子-定子高速攪拌器或 高壓高速攪拌器使水相分散在脂相中。
優(yōu)選的，基于引起乳液在25。C下轉(zhuǎn)向(inversion)所需的脂相量，所述 藥物組合物含有至少過量10%質(zhì)量的脂相。測(cè)量乳液轉(zhuǎn)向點(diǎn)方法的一個(gè)例子在Puisieux F.， Seiller M.1983年發(fā)表在Paris: Technique et Documentation-Lavoisier第 一巻中的Galenica 5: Les Systdmes Dispers6s — Agents de Surface et Emulsions (Disperse Systems — Surface-active Agents and Emulsions)中有記載。在特定溫度的分散水相、連續(xù)脂相和表面活性劑中， 當(dāng)乳液轉(zhuǎn)向時(shí)，也就是，乳液從油包水型變?yōu)樗托蜁r(shí)，分散水相和連 續(xù)脂相具有特定的質(zhì)量比。該比例稱為乳液的轉(zhuǎn)向點(diǎn)。
基于低于該量油包水乳液將轉(zhuǎn)向的脂相量，過量的脂相能夠防止在儲(chǔ) 存條件下的轉(zhuǎn)向。這種過量也能夠限制油包水乳液的粘度。
因此，基于25。C下引起乳液轉(zhuǎn)向所需的脂相量，特別優(yōu)選的，使用過 量15%質(zhì)量百分比的脂相；更優(yōu)選的，按照優(yōu)先級(jí)升高的順序，過量至少 20 %甚至30 %質(zhì)量百分比的脂相。
在此條件下，藥物組合物中，水性分散相與連續(xù)脂相的質(zhì)量比小于或 等于50:50，優(yōu)選為小于或等于40:60,特別優(yōu)選的，小于或等于30.'70。實(shí)際 上，連續(xù)脂相的部分越高，該油包水乳液的粘度越依賴于連續(xù)脂相的粘度。
優(yōu)選的，所述藥物組合物25。C下的動(dòng)力學(xué)粘度小于或等于200mPa.s。 更優(yōu)選的，按照優(yōu)先級(jí)升高的順序，該藥物組合物25。C下的動(dòng)力學(xué)粘度為 小于或等于150mPa.8，或小于或等于lOOmPa.s。
所述水相含有至少一種兩性聚合物以及至少一種活性成分。分散于連 續(xù)脂相之前，該水相25。C下的動(dòng)力學(xué)粘度可以大于或等于20mPa,s。該水相 也可以以物理膠體形式分散在連續(xù)脂相中。
所述藥物組合物能夠以腸道外方式注射?？勺⑸湫詼y(cè)試記栽在實(shí)施例中。
活性成分
通常，活性成分選自蛋白、醣蛋白、與一個(gè)或多個(gè)聚(亞烷基)二醇鏈(如 PEG化蛋白，即與一個(gè)或多個(gè)聚乙二醇鏈結(jié)合的蛋白)結(jié)合的蛋白、肽、聚 糖、脂糖(liposaccharide)、類固醇、低聚核苷酸、多聚核苷酸以及它們的
混合物。
在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的變形中，至少一種活性成分是親水的。 更確切的，活性成分AP選自促紅細(xì)胞生成素、催產(chǎn)素、后葉加壓素、 促腎上腺皮質(zhì)荷爾蒙、表皮生長(zhǎng)因子、血小板源生長(zhǎng)因子(PDGF)、造血激勵(lì)因子(hemopoiesis stimulating factor) 、 VIII因子及XI因子、血色素、 細(xì)胞色素、清蛋白、泌乳刺激素、促黃體激素或促性腺激素釋放激素
(LHRH) 、 LHRH拮抗劑、人、豬或牛生長(zhǎng)激素(GH)、生長(zhǎng)激素釋力文 因子、胰島素、生長(zhǎng)激素抑制素、胰高血糖素、白細(xì)胞介素(IL)(如IL-2、 IL-ll、 IL-12及其混合物)、oc-或P-或Y-干擾素(IFN)以及它們的混合 物、胃泌激素、四肽胃泌素、五肽胃泌素、尿抑胃素、分泌素、降血鈣素、 腦啡肽、內(nèi)嗎啡肽(endomorphine)、血管緊縮素、促曱狀腺素釋放激素
(TRH)、胂瘤壞死因子(TNF)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)、粒細(xì)胞集落刺 激因子(G-CSF)、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬細(xì)胞 集落刺激因子(M-CSF )、肝素酶、骨成形素蛋白(BMP )、人心鈉素(hANP )、 類高血糖素樣肽(GLP-1)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、重組乙肝表面 抗原(rHBsAg)、腎素、細(xì)胞因子、血管舒緩激肽、桿菌肽、多粘菌素、 黏菌素、短桿菌酪肽、短桿菌肽(gramicidine)、環(huán)孢霉素，以及酶、細(xì)胞 因子和抗體的合成的類似體、藥學(xué)活性的改性物和片段，以及它們的混合物。
在一個(gè)變形中，活性成分為小的疏水、親水或兩性有機(jī)分子，屬于蒽 環(huán)類、紫杉醇類(taxoid)或喜樹堿類，或者屬于肽，例如亮丙瑞林或環(huán)孢 霉素(cyclosporin)，以及它們的混合物?；诒景l(fā)明的目的，小分子特別 是指小的非蛋白分子，例如，不含氨基酸的小分子。
在一個(gè)變形中，活性成分選自至少一種下列類型的活性物質(zhì)治療濫 用酒精的藥劑、治療阿爾茨海默癥的藥劑、麻醉劑、治療肢端肥大癥的藥 劑、止痛劑、平喘藥、治療過敏的藥劑、抗癌劑、抗炎劑、抗凝血?jiǎng)┮约?抗血栓形成劑、抗痙攣劑、抗癲癇劑、抗糖尿藥物、止吐劑、抗青光眼藥 物、抗組胺劑、抗感染劑、抗生素、抗真菌劑、抗病毒劑、抗帕金森藥物、 抗膽堿藥、止咳藥、碳酸酐酶抑制劑、心血管藥物、降血脂藥、抗心律失 常藥、血管擴(kuò)張藥、抗心絞痛藥、抗高血壓藥、血管保護(hù)劑、膽堿酯酶抑 制劑、治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)失調(diào)的藥物、中樞神經(jīng)系統(tǒng)刺激劑、避孕藥、生 殖促進(jìn)藥、分娩促進(jìn)藥和抑制劑、治療粘液粘稠病的藥物、多巴胺受體激 動(dòng)劑、治療子宮內(nèi)膜異位的藥物、治療勃起障礙的藥物、治療生育的藥物、 治療胃腸道疾病的藥物、免疫調(diào)節(jié)劑和免疫抑制劑、治療記憶疾病的藥物、抗偏頭痛藥、肌松藥、核苷類似物、治療骨質(zhì)疏松的藥物、擬副交感神經(jīng) 藥、前列腺素、心理治療藥、鎮(zhèn)靜藥、催眠和鎮(zhèn)定藥、安定藥、抗焦慮藥、 精神振奮藥、抗抑郁藥、治療皮膚病的藥物、甾體和激素、安非他明、減 肥藥、非鎮(zhèn)痛型止痛藥、抗癲癇藥、巴比妥類、苯并二氮雜卓類、催眠藥、 放松藥、精神藥品以及這些產(chǎn)品的聯(lián)合使用。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及一種治療方法，其實(shí)質(zhì)上在于經(jīng)口、鼻、眼、皮膚、 陰道、直腸、腸胃外路徑施用本發(fā)明如上所述的組合物。腸胃外路徑中值 得一提的是皮下注射、肌肉注射、腹膜注射、皮內(nèi)注射、靜脈注射、動(dòng)脈 注射、脊柱內(nèi)注射、關(guān)節(jié)內(nèi)注射以及胸膜內(nèi)注射。
圖l:實(shí)施例3的兩性聚氨基酸溶液(黑色三角)以及油中兩性聚氨基 酸懸浮液(黑色方塊)的粘度。
圖2:實(shí)施例3的25G針頭(黑色方塊)及27G針頭(黑色三角)測(cè)試兩 性聚氨基酸懸浮液的可注射性。
圖3:實(shí)施例4的無兩性聚氨基酸的懸浮液(黑色三角)及含有兩性聚 氨基酸的懸浮液(黑色方塊)體內(nèi)釋放亞曱藍(lán)。
圖4: 10s"時(shí)懸浮液相對(duì)于時(shí)間的粘度變化(實(shí)施例6)。
圖5:水性液滴相對(duì)于時(shí)間的直徑變化(d50% )(實(shí)施例6)。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例l:制備懸浮液
如下制備一種兩性聚氨基酸cx-L-聚谷氨酸根聚合物，相對(duì)于聚氧乙 烯標(biāo)準(zhǔn)的分子量約為10000，通過聚合NCAGluOMe并水解得到，如專利申 請(qǐng)F(tuán)R2801226記載。5.5g所述oc-L-聚谷氨酸根聚合物溶于92ml二曱基曱酰胺 (DMF)，在40。C下加熱2小時(shí)。 一旦聚合物溶解，溫度可降至25。C，順序 加入預(yù)先溶于6ml DMF的1.49g天然來源的D-cc-維生素E (98.5%, ADM France提供)、預(yù)先溶于6ml DMF的0.09g 4-二曱基氨基吡啶、預(yù)先溶于6ml DMF的0.57g二異丙基碳二亞胺。在25。C下攪拌8小時(shí)后，反應(yīng)中間體倒入 800ml含有15。/。氯化鈉及鹽酸(pH為2)的水中。過濾回收沉淀的聚合物，并以0.1N鹽酸和水沖洗。所述聚合物之后再溶于75mlDMF中，如前所述， 在含有鹽和酸的pH為2的水中再次沉淀。經(jīng)水洗兩次，聚合物以異丙醚沖洗 數(shù)次。在40。C的真空爐中干燥得到大約85 %的收率。
通過質(zhì)子NMR推測(cè)的接枝率約為5.2。/。， HPLC分析顯示，殘留維生素E 含量低于0.3% 。 NMP作為洗提液通過GPC測(cè)量得到的平均分子量Mw為 17500g/mol (以聚曱基丙烯酸曱酯當(dāng)量表示)。
分別制備15ml如上所述合成的兩性聚氨基酸水性溶液，濃度為22mg/g， 以及35ml三辛酸/癸酸甘油酯溶液(Mygilyo1812, Sasol),含有5%質(zhì)量的 聚荒麻醇酸聚甘油酯(Grindsted PGPR 90, Danisco )。然后，使這兩相 接觸并通過Ultra-TurraxT8轉(zhuǎn)子-定子高速攪拌器(Ika-Werke)和S8N-5G 探頭以20000minM的速率乳化l分鐘，或者通過高壓高速攪拌器(Emulsiflex C3, Avestin)在1000bar下3次循環(huán)，得到在連續(xù)相三辛S^/癸酸甘油酯中的兩 性聚氨基酸水滴懸浮液，水相和脂相的質(zhì)量比為30/70。
實(shí)施例2:聚氨基酸存在下活性成分的穩(wěn)定性提高
根據(jù)實(shí)施例l所述方法得到懸浮液。 一種蛋白，即干擾素oc-2b (IFNa 2b)以lmg/g濃度加入所述水相。
懸浮液中的IFN a 2b通過夾心ELISA (IM3193 kit ， Beckman Coulter) 量化。含有IFNa2b和兩性聚氨基酸的懸浮液在37'C下保存一周。與在5'C 下保存一周的同樣乳液相比，萃取后，ELISA得到回收率為85。/。的IFNa2b。 在相同儲(chǔ)存條件，但不含有兩性聚氨基酸的情況下，回收率僅為6%。
實(shí)施例3:粘度/可注射性變化
如實(shí)施例l所述步驟，將濃度為50mg/ml的兩性聚氨基酸水相(在該濃 度下為物理膠體)分散于脂相，得到水凝膠的懸浮液。粘度值通過比較該 懸浮液和最初的膠體測(cè)量。該測(cè)量使用安裝有圓錐-平板幾何(2cm或4cm， 1°角)的控壓流變儀(Gemini, Bholin )，通過表征25。C下作為切力梯度 (10-lOOOs-1)函數(shù)的粘度變化進(jìn)行。比較顯示，在較低切力梯度下(10 s—1)， 懸浮液表征為粘度約為O.lPa.s,這比最初的膠體的粘度低約250倍(見圖1 )。該懸浮液的可注射性質(zhì)通過可注射性測(cè)試IT評(píng)估。該測(cè)試在于測(cè)量為 在注射器口得到特定流速而需在注射器塞處施加的力?？勺⑸渲苿├斫鉃?br>
在該可注射性測(cè)試IT評(píng)估后，得到流速為3.5ml/min所需的力低于25N的制劑。
如實(shí)施例3所述的懸浮液引入lml注射器(Inject-F， Braun)中，其設(shè)有 25G或27G的針頭。該注射器置于牽引裝置(DY34, Adamel Lhomargy)中。 進(jìn)行可注射性測(cè)試。
如圖2結(jié)果所示，根據(jù)該測(cè)試，分散在連續(xù)脂相中的兩性聚氨基酸懸浮 液可用25G和27G針頭注射，而最初的水凝膠則不可。
實(shí)施例4:延長(zhǎng)釋放特性
目的是確定由本發(fā)明得到的懸浮液在體內(nèi)釋放入生理介質(zhì)的活性成分 的比例，該比例是時(shí)間的函數(shù)。并且將其與無兩性聚氨基酸的情況相比較。
根據(jù)實(shí)施例l所述方法制備第一懸浮液，將O.Ol %質(zhì)量濃度的水溶性的 亞曱基藍(lán)(Sigma)加入到水相中。
該染料模擬活性成分在體內(nèi)的測(cè)試。制備無兩性聚氨基酸的第二懸浮 液，再次加入O.Or/。質(zhì)量濃度的亞曱基藍(lán)。將50Ml兩種懸浮液分別注射入 4ml O.IM磷酸鹽緩沖溶液(PBS:磷酸鹽緩沖生理溶液，Sigma),所述磷 酸鹽緩沖溶液模擬生理介質(zhì)。每種制品在37。C下攪拌。在不同時(shí)間提取60 H l連續(xù)相并以60 n 1 O.IMPBS替代。在這些不同部分中的亞曱基藍(lán)濃度通過 可見-紫夕卜光語(Lambda 35 UV/Vis Sepctrometer, Perkin-Elmer Instrument) 在550nm下測(cè)定。因此可以確定釋放到連續(xù)相中的染料的比例相對(duì)于時(shí)間的 函數(shù)。在這樣的條件下，觀察到的現(xiàn)象顯示，染料的釋放被延長(zhǎng)了在不 含有兩性聚氨基酸的懸浮液中，70%的亞曱基藍(lán)在14天中被釋放，而水滴 中兩性聚氨基酸的存在能夠降低釋放速率，因?yàn)橄嗤闆r下14天后釋放的 染料比例僅為約200/0 。
結(jié)果顯示于圖3中。
實(shí)施例5根據(jù)實(shí)施例l的方法制備懸浮液，在將其分散于脂相之前，在水相中加
入一種濃度為5mg/g的治療用蛋白，即人生長(zhǎng)激素(hGH: human growth Hormone, Prospec )。將50 n l產(chǎn)品注射入4ml O.IM磷酸鹽緩沖溶液(PBS: 磷酸鹽緩沖生理溶液，Sigma)。在不同時(shí)間提取60 jul連續(xù)相并用60iul O.IMPBS替代。全部制品在37。C下攪拌。
外部水相中的hGH的濃度通過液相色譜(HPLC,C18柱)測(cè)定。 得到的結(jié)果顯示，37。C下5天后，釋放到外部水相的蛋白比例低于2%。
實(shí)施例6:物理穩(wěn)定性
根據(jù)實(shí)施例1所述步驟，將濃度為20mg/ml的兩性聚氨基酸的水相分散 在得到的脂相中。得到的懸浮液保存在5 。C下，并測(cè)試水滴的粘度和粒徑相 對(duì)于時(shí)間的函數(shù)。
使用安裝有圓錐-平板幾何(cone-and-plate geometry ) ( 2cm或4cm， 1°角)的控壓流變儀(Gemini， Bholin)，通過確定25。C下10s"切力梯度對(duì) 應(yīng)的粘度值來測(cè)量粘度。
以庚烷(SDS)為分散介質(zhì)，粒徑用顆粒測(cè)量?jī)x(Mastersizer 200, Malvern)通過激光漫射測(cè)量。
結(jié)果(圖4和圖5)顯示了這些懸浮液的穩(wěn)定性，因?yàn)樵? 'C下3個(gè)月后， 水滴的粘度或粒徑?jīng)]有明顯變化。
權(quán)利要求
1、用于延長(zhǎng)釋放至少一種活性成分的藥物組合物，其含有至少一種在水相中的活性成分，所述水相含有至少一種兩性聚合物，且所述水相為在連續(xù)脂相中的分散體形式，所述組合物為油包水的乳液形式，含有藥學(xué)可接受的連續(xù)脂相，水性分散相，其含有至少一種兩性聚合物和至少一種與所述兩性聚合物非共價(jià)結(jié)合的活性成分，以及至少一種藥學(xué)上可接受的表面活性劑。
2、 如權(quán)利要求l所述的藥物組合物，其中，所述兩性聚合物為帶有至 少 一個(gè)疏水基團(tuán)的兩性聚合物。
3、 如權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，其中，所述兩性聚合物為兩性 聚氨基酸。
4、 如權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其中，所述兩性聚氨基酸帶有至 少一個(gè)疏水基團(tuán)。
5、 如權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，其中，所述兩性聚合物為帶有 至少 一個(gè)疏水基團(tuán)的聚糖。
6、 如前任一權(quán)利要求所述的藥物組合物，其特征在于，其可以下列方 式給藥經(jīng)口、鼻、眼、皮膚、陰道、直腸和腸胃外路徑。
7、 如前任一權(quán)利要求所述的藥物組合物，其中，至少一種活性成分選 自蛋白、醣蛋白、與一個(gè)或多個(gè)聚(亞烷基)二醇鏈結(jié)合的蛋白、肽、聚糖、脂糖、類固醇、低聚核苷酸、多聚核苷酸及其混合物。
8、 如權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其中，至少一種活性成分為親水的。
9、 如權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其中，至少一種活性成分選自促 紅細(xì)胞生成素、催產(chǎn)素、后葉加壓素、促腎上腺皮質(zhì)荷爾蒙、表皮生長(zhǎng)因子、血小板源生長(zhǎng)因子(PDGF)、造血激勵(lì)因子、vm因子及xi因子、血色素、細(xì)胞色素、清蛋白、泌乳刺激素、促黃體激素或促性腺激素釋放激 素(LHRH) 、 LHRH拮抗劑、LHRH激動(dòng)劑、人生長(zhǎng)激素(GH)、豬生 長(zhǎng)激素或牛生長(zhǎng)激素、生長(zhǎng)激素釋放因子、胰島素、生長(zhǎng)激素抑制素、胰高血糖素、白細(xì)胞介素(IL-2、 IL-ll、 IL-12) 、 a-或P-或y-干擾素、胃泌激 素、四肽胃泌素、五肽胃泌素、尿抑胃素、分泌素、降血鈣素、腦啡肽、 內(nèi)嗎啡肽、血管緊縮素、曱狀腺素釋放激素(TRH)、腫瘤壞死因子(TNF)、 神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)、粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)、粒細(xì)胞-巨噬細(xì) 胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)、肝素酶、 骨成形素蛋白(BMP)、人心鈉素(hANP)、類高血糖素樣肽(GLP-1)、 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、腎素、細(xì)胞因子、血管舒緩激肽、桿菌肽、 多粘菌素、都菌素、短桿菌酪肽、短桿菌肽、環(huán)孢霉素，以及酶、細(xì)胞因 子和抗體的合成的類似體、藥學(xué)活性改性物和片段，以及它們的混合物。
10、 如權(quán)利要求3或4所述的藥物組合物，其中，所述兩性聚氨基酸為 聚合物、順序或無規(guī)共聚物、或上述聚合物和/或共聚物的混合物。
11、 如權(quán)利要求10所述的藥物組合物，其中，所述兩性聚氨基酸的主 鏈含有衍生于谷氨酸和/或天冬氨酸的單體，至少部分所述單體帶有至少一 個(gè)垂掛的疏水基團(tuán)。
12、 如權(quán)利要求10或11所述的藥物組合物，其中，所述兩性聚氨基酸 的主鏈含有衍生于谷氨酸和/或天冬氨酸的單體，至少部分所述單體帶有衍 生于組氨酸殘基的垂掛基團(tuán)。
13、 如權(quán)利要求12所述的藥物組合物，其中，至少一個(gè)所述衍生于組 氨酸殘基的垂掛基團(tuán)通過酰胺鍵與谷氨酸殘基結(jié)合。
14、 如權(quán)利要求12或13所述的藥物組合物，其中，所述衍生于組氨酸 殘基的垂掛基團(tuán)各自相同或不同，選自組氨酸、組氨酸酯、組胺醇、組胺、 組酰胺、N-曱基組酰胺以及N,N，-二曱基組酰胺。
15、 如權(quán)利要求10或11所述的藥物組合物，其中，所述兩性聚氨基酸 (PAA)具有如下式(I)所示的通式，以及它的藥學(xué)上可接受的鹽<formula>formula see original document page 4</formula>(I)其中W為氫原子、C2-C10的直鏈?；?、C3-C10的支鏈酰基、焦谷氨酸根或-R4-[GHl]基團(tuán)；R2為-NHRS基團(tuán)或通過氮結(jié)合的末端氨基酸殘基，其酸性基團(tuán)可選地通過-NHRS胺基或-OI^醇基改性；尺4各自獨(dú)立地為直接鍵或含有l(wèi)-4個(gè)氨基酸殘基的間隔基團(tuán)； Rs為氫原子、Cl-C10的直鏈烷基、C3-C10的支鏈烷基或千基； Rs為氫原子、Cl-C10的直鏈烷基、C3-C10的支鏈烷基、千基或-R4-[GH1]基團(tuán)；八和8各自獨(dú)立地為-012-(天冬氨酸殘基)基團(tuán)或-0^2-012-(谷氨 酸殘基)基團(tuán)；[GH1]為疏水基團(tuán)；疏水基團(tuán)[GHl]的摩爾接枝率n/(n+m)相對(duì)于兩性聚氨基酸足夠低， 從而在25 。C 、 pH為7的水溶液中形成聚氨基酸亞微米顆粒的膠體懸浮液， n/(n+m)為1至25mol。/。之間；以及 聚合度(n+m)為10-1000。
16、如權(quán)利要求10或11所述的藥物組合物，其中，所述兩性聚氨基酸 (PAA)具有如下通式(II) 、 (m) 、 (IV)之一，以及它們藥學(xué)上可接受的鹽<formula>formula see original document page 5</formula>其中Ra為C2-C6的直鏈烯基；Rb為C2-C6的烯基、C2-C6的二烷氧基或C2-C6的二胺基；R"各自獨(dú)立的為直接鍵、含有l(wèi)-4個(gè)氨基酸殘基的間隔基團(tuán)或者-C(0)-CH2-CH2隱基團(tuán)；RS為-NHI^基團(tuán)或通過氮結(jié)合的末端氨基酸殘基，其酸性基團(tuán)可選地分別通過-Nffi^胺基或-OR^醇基改性；W為氫原子、Cl-C10的直鏈烷基、C3-C10的支鏈烷基或芐基； R"為氫原子、Cl-C10的直鏈烷基、C3-C10的支鏈烷基、千基或-R'-[GH3]-基團(tuán)；R"各自獨(dú)立的為直接鍵或含有l(wèi)-4個(gè)氨基酸殘基的間隔基團(tuán)； 八和8各自獨(dú)立的為-012-(天冬氨酸殘基)基團(tuán)或-(^2-(:112-(谷氨酸殘基)基團(tuán)；[GH2]和[GH3]各自獨(dú)立的為疏水基團(tuán)；以及 聚合度(ml+m2)和m3為10-1000。
17、如權(quán)利要求10-14任一所述的藥物組合物，其中，所述兩性聚氨基酸(PAA)具有如下通式(V)，以及它的藥學(xué)上可接受的鹽<formula>formula see original document page 6</formula>(V)其中W為-NHR"基團(tuán)或通過氮結(jié)合的末端氨基酸殘基，其酸性基團(tuán)可選 地分別通過-NHRS胺基或-OR"醇基改性；Rd為氫原子、C2-C10的直鏈?；?、C3-C10的支鏈?；蚪构劝彼岣鶊F(tuán)；R"各自獨(dú)立的為二價(jià)、三價(jià)或四價(jià)的連接基團(tuán)，優(yōu)選自-O-、 -NH-、 Cl-C5的-N-烷基、氨基酸殘基、C2-C6的二醇、C3-C6的三醇、C2-C6的二 胺、C3-C6的三胺、C2-C6的氨基醇或C2-C6的羥基酸；R13各自獨(dú)立的為-OH基團(tuán)或通過胺基片段結(jié)合的乙醇胺基團(tuán)；R"為烷基酯基團(tuán)、-(3!12011基團(tuán)(組氨醇)、氫原子(組胺)、-C(0)NH2 基團(tuán)(組酰胺)、-C(0)NHCH3基團(tuán)或-C(0)N(CH3)2基團(tuán)；R"和R"各自獨(dú)立的為氫原子、Cl-C10的直鏈烷基、C3-C10支鏈烷 基或芐基；[GH4]各自獨(dú)立的為疏水基團(tuán)，選自。 直鏈或支鏈的C8-C30的烷基，可選地含有至少一個(gè)不飽和單位和/ 或至少一個(gè)雜原子，。C8-C30的烷基芳基或芳基烷基基團(tuán)，可選地含有至少一個(gè)不飽和單 位和/或至少一個(gè)雜原子，以及。C8-C30的(聚)環(huán)基，可選地含有至少一個(gè)不飽和單位和/或至少 一個(gè)雜原子；p、 q和r為正整數(shù)；在每個(gè)共聚物鏈平均含有至少3個(gè)疏水接枝的條件下，疏水基團(tuán)[GH] 的摩爾接枝率(p)/(p+q+r)為l-50mol%;衍生于組氨酸殘基的基團(tuán)的摩爾接枝率(q)/(p+q+r)為1 -99mol%; (r)/(p+q+r)為0-98mol。/。；以及 (p+q+r)為10-1000。
18、 如權(quán)利要求15、 16或17所述的藥物組合物，其中，所述疏水基團(tuán) [GHl]、 [GH2]、 [GH3]選自辛氧基、十二氧基、十四氧基、十六氧基、十八 氧基、油氧基、生育酚氧基以及膽甾醇氧基，所述疏水基團(tuán)[GH4]選自辛基、 十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、油基、生育酚基和膽甾醇基， 所述R4、 R7、 RU為直接鍵，所述1112為-0-基團(tuán)。
19、 如權(quán)利要求15、 16或17所述的藥物組合物，其中，所述疏水基 團(tuán)[GHl]、 [GH2]、 [GH3]和[GIW]各自獨(dú)立的為具有下述通式(VI)的單價(jià) 基團(tuán)其中R卩各自獨(dú)立的為曱基、異丙基、異丁基、仲丁基或芐基； R"各自獨(dú)立的為含有6-30個(gè)碳原子的疏水基團(tuán)；以及 tl為0-6。
20、如權(quán)利要求19所述的藥物組合物，其中，所述疏水基團(tuán)R"各自獨(dú)立的選自直鏈或支鏈的烷氧基團(tuán)，含有6-30個(gè)碳原子，可選的含有至少一個(gè)不 飽和單元和/或至少一個(gè)雜原子，含有6-30個(gè)碳原子的烷氧基團(tuán)，含有一個(gè)或多個(gè)稠碳環(huán)，可選地含有 至少一個(gè)不飽和單元和/或至少一個(gè)雜原子，含有7-30個(gè)碳原子的烷氧芳基或含有7-30個(gè)碳原子的芳氧烷基，可選 地含有至少 一個(gè)不飽和單元和/或至少 一個(gè)雜原子。
21、 如權(quán)利要求19或20所述的藥物組合物，其中，所述疏水基團(tuán)R"選 自辛氧基、十二氧基、十四氧基、十六氧基、十八氧基、油氧基、生育酚 氧基以及膽甾醇氧基。
22、 如權(quán)利要求10-21任一所述的藥物組合物，其中，所述兩性聚氨基 酸主鏈含有衍生于谷氨酸和/或天冬氨酸的單體，所述聚氨基酸帶有至少一 個(gè)聚亞烷基二醇類接枝。
23、 如權(quán)利要求22任一所述的藥物組合物，其中，所述聚亞烷基二醇 類接枝具有如下通式(VII):<formula>formula see original document page 8</formula>其中R"各自獨(dú)立的為直接鍵或含有l(wèi)-4個(gè)氨基酸殘基的間隔基團(tuán)； X為雜原子，選自氧、氮和硫；R加和R"各自獨(dú)立的為氫原子或C1-C4的直鏈烷基；以及 t2為10-1000。
24、 如權(quán)利要求22或23所述的藥物組合物，其中，所述聚亞烷基二醇 為聚乙二醇。
25、 如權(quán)利要求22、 23或24所述的藥物組合物，其中，所述兩性聚氨 基酸的聚亞烷基二醇的摩爾接枝率為l-30mol%。
26、 如權(quán)利要求10-17任一所述的藥物組合物，其中，所述兩性聚氨基 酸(PAA)的主鏈為a-L-谷氨酸根或a-L-谷氨酸均聚物。
27、 如權(quán)利要求10-16任一所述的藥物組合物，其中，所述兩性聚氨基酸(PAA)的主鏈為a-L-天冬氨酸根或a-L-天冬氨酸均聚物。
28、 如權(quán)利要求10-16任一所述的藥物組合物，其中，所述兩性聚氨基 酸(PAA )的主鏈為a-L-天冬氨酸根/a-L-谷氨酸根或a-L-天冬氨酸/a-L-谷氨酸共聚物。
29、 如權(quán)利要求15或17所述的藥物組合物，其中，所述疏水基團(tuán)的摩 爾接枝率為lmol%-25mol%。
30、 如權(quán)利要求10-29任一所述的藥物組合物，其中，所述兩性聚氨基 酸(PAA)的分子量為2000-100000g/mol之間。
31、 如前任一權(quán)利要求所述的藥物組合物，其中，所述表面活性劑或 表面活性劑混合物的HLB低于6。
32、 如權(quán)利要求31所述的藥物組合物，其中，所述表面活性劑選自下 組聚甘油酯、蓖麻酸酯、山梨聚糖油酸鹽、卵磷脂、C6-C20的脂肪酸和/ 或不飽和脂肪酸的單或二甘油酯、聚蓖麻酸酯、聚甘油聚蓖麻醇酸酯及其 混合物。
33、 如前任一權(quán)利要求所述的藥物組合物，其中，所述脂相含有至少 一種選自可代謝油的油，所述油或其混合物25。C時(shí)的動(dòng)力學(xué)粘度小于或等 于400mPa.s。
34、 如權(quán)利要求33所述的藥物組合物，其中，所述脂相含有選自動(dòng)物、 植物或合成來源的中鏈脂肪酸的甘油三酯，動(dòng)物或植物來源的脂肪酸，它 們的酯和鹽，以及其混合物中的至少一種油。
35、 如權(quán)利要求33或34所述的藥物組合物，其中，所述脂相含有選自 橄欖油、甜杏仁油、向日葵油、豆油、落花生油、玉米油、椰子油、棉籽 油、蓖麻油及其混合物中的至少 一種油。
36、 如前任一權(quán)利要求所述的藥物組合物，其中，基于引起所述乳液 在25。C時(shí)轉(zhuǎn)向所需的脂相量，通過電導(dǎo)滴定法測(cè)量，所述藥物組合物含有 過量至少10%質(zhì)量的脂相。
37、 如前任一權(quán)利要求所述的藥物組合物，其中，水性分散相相對(duì)于 連續(xù)脂相的質(zhì)量比小于或等于50:50。
38、 如前任一權(quán)利要求所述的藥物組合物，其中，所述藥物組合物在 25。C時(shí)的動(dòng)力學(xué)粘度小于或等于200mPa,s，水相為物理膠體形式，或者在25。C時(shí)的動(dòng)力學(xué)粘度大于或等于20mPa,s。
39、如前任一權(quán)利要求所述的藥物組合物，其中，所述藥物組合物中 每lg水相含有5-100mg兩性聚氨基酸。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于延長(zhǎng)至少一種活性成分釋放的可注射的藥物組合物，其含有至少一種在兩性聚合物的水相中的活性成分，所述水相為在連續(xù)脂相中的分散體形式。所述組合物為油包水的乳液形式，含有藥學(xué)上可接受的連續(xù)脂相，水性分散相，含有至少一種兩性聚合物和至少一種與所述兩性聚合物非共價(jià)結(jié)合的活性成分，以及至少一種藥學(xué)上可接受的表面活性劑。
文檔編號(hào)A61K9/10GK101563066SQ200780046648
公開日2009年10月21日 申請(qǐng)日期2007年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月20日
發(fā)明者戈捷·普利康 申請(qǐng)人:弗拉梅技術(shù)公司