專利名稱：：治療和預防傳染性疾病的膽固醇胺的制作方法治療和預防傳染性疾病的膽固醇胺本發(fā)明涉及膽固醇胺(cholesterylamines)在制備藥物組合物中的用途。這些藥物組合物用于傳染性疾病尤其是病毒或細菌所引起的疾病的醫(yī)學干子貞(medicalintervention)。形成細胞膜的脂雙層(lipidbilayer)是兩維流體，其組織結構已是生物化學家和生物物理學家深入研究數(shù)十年的課題。雖然大部分的脂雙層被認為是均質(zhì)流體，但是有人曾不斷地試圖將橫向異質(zhì)性(lateralheterogeneities)、脂微域(lipidmicrodomain)1入我們的雙層脂質(zhì)結構和動力學才莫型中(Glaser,Curr.Opin.Struct.Biol.3(1993)，475-481;Jacobson,CommentsMol.CellBiophys.8(1992),1-144;Jain，Adv.LipidRes.15(1977),1-60;Winchil,Curr.Opin.Struct.Biol.3(1993),482-488)。上皮細胞將其細胞表面極化成頂端和基底外側(cè)結構域，這些結構域的每一個都具有不同的蛋白和脂質(zhì)成分，這一認識引發(fā)了導致"脂筏(lipidraft)"概念的新發(fā)展(Simons,Biochemistry27(1988),6197-6202;Simons,Nature387(1997),569-572)。鞘脂和膽固醇的裝配體(assemblies)幸免于去污劑的萃取這一觀察結果，促進了這些裝備體發(fā)揮膜蛋白平臺功能的概念，且所述裝配體一爾為去污劑4元'f生月莫(detergentresistantmembrane,DRM)(Brown,Cell68(1992),533-544)。這是可操作的突破，其中將筏結合體(raft-association)換算成對4'C下Triton-X100萃取的抗性。第二個依據(jù)即用曱基-/3-環(huán)式糊精來損耗膽固醇(Ilangumaran，Biochem.J.335(1998)，433-440;Scheiffele,EMBOJ.16(1997),5501-5508)導致去污劑抗性喪失的加入，促使本領域的幾個研究小組探究脂微域在廣譜生物反應中的作用。目前脂質(zhì)裝配體在調(diào)節(jié)包括細胞極性、蛋白質(zhì)運輸和加工以及信號轉(zhuǎn)導在內(nèi)的大量細胞過程中起作用的證據(jù)，日益增加。脂筏是一種特殊化學成分的脂質(zhì)平臺(在細胞膜的外層(outerleaflet)中富含鞘磷脂和膽固醇)，其功能是隔離細胞膜中的膜組分。筏被認為是相對較小的(直徑為30到50nm,其大小的估值變化，在相當程度上取決于所用的探針和所分析的細胞類型)，但是在某些條件下可使它們聚結。它們與脂質(zhì)成分有關的特異性，令人聯(lián)想到其在異質(zhì)模型膜系統(tǒng)中的相分離行為。為了感染宿主細胞，幾組病原體、細菌、朊病毒、病毒和寄生蟲控制了脂我(VanderGoot，Semin.Immunol.13(2001),89-97)。例如由流感病毒、HIV-1、麻滲病毒(measlesvirus)、呼吸道合月包病毒(respiratorysyncytialvirus)、-渚如埃:f專4立病毒(Ebolavirus)和馬爾堡病毒(Marburgvirus)的絲^l夫病毒科(Filoviridae)、乳頭瘤病毒科(Papillomaviridae)和多瘤病毒科(polyomaviridae)、愛潑斯坦-巴爾病毒(Epstein-Barrvirus)、丙型肝炎病毒、?？刹《緇(Echovirusl)引起的病毒感染，代表了筏和/我蛋白是靶標的疾病。jt匕夕卜，由大腸詳干菌(五5"cAen'c/^aco/z〕、結才亥分才支4干菌(AfycoZ^cten-i/附,wZercM/057.51)禾口牛分才支斥干菌(A(yco6ac/en'M附6ov&)、空腸彎曲一干菌(Cam/7_y/o6ac/e^7々Ym/)、霍舌U瓜菌(FZn.0c/zo/erare)、？艮只,才炎菌(C7oWnV/z'wmi/i^d/e)、石皮i"另風才發(fā)菌(C7ostnV/zYw2^taw')、鏈J求菌(Streptococcispecies)、沙門氏菌屬(&z/mo恥〃a)、志賀氏桿菌屬(幼/ge〃a)引起的細菌性感染涉及與我相關的病理學過程(Simons,J.Clin.Invest.110(2002)，597-603)。第一個被表征的實例是流感病毒(Scheiffele，J.Biol.Chem.274(1999):2038-2044;Scheiffele,EMBOJ.16(1997),5501-5508)。這種病毒包含兩種完整的糖蛋白，即血凝素和神經(jīng)氨酸酶，根據(jù)膽固醇依賴性去污劑抗性判斷，兩者都是與筏相關的(Zhang,J.Virol.74(2000),4634-4644)。膽固醇和筱的完整性是將神經(jīng)氨酸酶轉(zhuǎn)運到質(zhì)膜所必須的(Keller,J.CellBiol.140(1998),1357-1367)。流感病毒從上皮細胞的頂端膜出芽，所述頂端在脂筏中富集。流感病毒的包膜是在出芽期間由聚結的筏形成的，在出芽過程中，M蛋白的裝配在初生病毒包膜的胞液^f敖區(qū)(cytosolicleaflet)處形成了驅(qū)使筏群集的層(Zhang,J.Virol.74(2000),4634-4644)。根據(jù)最近的模型，病毒性M2蛋白，其是外周筏蛋白，促進了成熟流感病毒顆粒的夾斷(pinching-off)(Schroeder,Eur.Biophys.J.34(2005),52-66)。同樣將宿主的筏脂質(zhì)和筏蛋白整合到其包膜中的HIV-1，在其生命周期中的至少四個重要事件中，使用了我(Schroeder,Eur.Bi叩hys.J.34(2005),52-66):形成通過新宿主粘膜的通道、病毒進入免疫細胞、發(fā)出宿8主細胞功能改變以及病毒從細胞離開的信號，以及通過宿主的血管系統(tǒng)來散布。病毒、細菌和寄生蟲可以通過改變細胞的信號狀態(tài)進入宿主細胞或與宿主細胞發(fā)生作用。在HIV感染期間情況也是如此。Nef是早期的HIV基因產(chǎn)物，其經(jīng)由脂拔促進病毒的感染性(Zheng,Curr.Biol.11(2001)，875-879)，且感染缺少Nef的HIV-1病毒體不會發(fā)展成AIDS(Kirchhoff，N.Engl.J.Med.332(1995),228-232)。通過使攜帶相關宿主細胞表面蛋白的脂我群集，Nef的寡聚化可以有助于組建T-細胞信號復合體和HIV出芽位點(Zheng,Curr.Biol.11(2001),875-879;Wang，Proc.Natl.Acad.Sci.USA97(2000),394-399)。HIV從細胞離開是另一個筏依賴性步驟，嚴重依賴于病毒Gag蛋白(Ono，Proc.Natl.Acad.Sci.USA98(2001)，13925-13930;Lindwasser,J.Virol.75(2001)，7913-7924):Gag蛋白綁定到與含有HIV刺突蛋白(spikeprotein)的我特異性地結合，這使筏群集在一起，從而促進病毒裝配。HIV-1蛋白和脂我之間的相互作用可引起包膜裝配所需的Gag的構象變化(Campbell,J.Clin.Virol.22(2001)，217-227)。筏群集的另一個實例是成孔毒素(pore-formingtoxins)的致病機制，所述成孔毒素，除其他細菌外，還由梭菌屬(aa^W"m)、鏈球菌屬(&re;tococaw)和氣單月包菌屬(/^ramow^)的種類分泌(Lesieur,Mol.Membr.Biol.14(1997),45-64)。這些毒素可以誘發(fā)從輕度脂肪團(mildcellulites)到氣性壞疽(gaseousgangrene)和偽膜性腸炎(pseudomembranouscolitis)的疾病。最佳的研究對象是來自海洋細菌嗜水氣單胞菌04^wwomwAj^ra//z7a)的毒素，即氣單胞菌溶素。氣單胞菌溶素被分泌并與宿主細胞表面的GPI錨定的我蛋白(GPI-anchoredraftprotein)結合。該毒素在蛋白質(zhì)水解后被整合進入膜中，然后其以筏依賴性方式進行七聚化，從而形成了與筏相關的通道，小分子和離子流過該通道，從而觸發(fā)致病性變化。氣單胞菌溶素的寡聚化可以在溶液中觸發(fā)，但在比活細胞表面的濃度低105多倍的濃度下發(fā)生。這種效率的巨大提高歸因于通過筏結合和通過濃縮形成筏群集體而導致的激活，所述激活受到毒素寡聚化的驅(qū)動。再者，小變化可通過提群集的放大產(chǎn)生巨大作用(Lesieur,Mol.Membr.Biol.14(1997),45-64;Abrami，J.CellBiol.147(1999)，175-184)。細菌的膜異質(zhì)性在現(xiàn)有技術中已有描述，參見Fishov,Mol.Microbiol.32(1999)，1166-1172;Mileykovskaya，J.Bacteriol.182(2000),1172-1175。細菌膜中的不同蛋白顯示出了對脂流動性的不同敏感性，這說明物理結構上隔離的、不同流動性和成分的脂質(zhì)結構域是共存的(Linden,Proc.Natl.Acad.Sci.USA70(1973)，2271-2275;Morrisett,J.Biol.Chem.250(1975),6969-6976)，并且也有細菌質(zhì)膜組織成功能結構域的證據(jù)(Myers,Curr.Microbiol.19(1989),45-51),在所述結構域中，發(fā)現(xiàn)質(zhì)膜組分受到異化定位，以及，而且，膜磷脂被分隔成在組成、蛋白-脂質(zhì)相互作用、有序度方面都明顯不同的結構域(Vanounou,Mol.Microbiol.49(2003),1067-1079)。在這方面，細菌的細胞膜結構域，在功能上且在部分結構上類似于哺乳動物的脂我。最近，據(jù)才艮道，抗菌肽(antimicrobialpeptides)對膜中帶有高含量磷酸乙醇胺的細菌的毒性是有差異的，這強調(diào)了細胞表面的脂質(zhì)成分在測定抗菌劑(antimicrobialagents)的選才奪毒性中的潛在重要性(Epand,BiochimBiophysActa.1758(2006),1343-1350)。Wang(Biochemistry43(2004),1010-1018)研究了固醇/類固醇的結構和參與脂我之間的關系。由于固醇可以用于將依賴于細胞中膽固醇的生物學過程從那些可得到任何我環(huán)境支持的過程區(qū)分出來，這些作者才考慮了此所討論的問題。有意思的是，Wang和同事們發(fā)現(xiàn)了促進有序結構域在生物膜中形成的類固醇。WO01/22957中描述了神經(jīng)節(jié)苷脂在調(diào)節(jié)鞘脂/膽固醇微結構域中的用途。成為本發(fā)明基礎的問題是，為傳染性疾病/病癥，特別是那些與脂筏所調(diào)節(jié)的生物學/生物化學過程相關聯(lián)和/或有關的傳染性疾病/病癥，提供臨床和/或藥物干預的手段和方法。該技術問題的解決方案通過提供下文以及權利要求書所表征的實施方案來實現(xiàn)。在本發(fā)明的環(huán)境中，據(jù)發(fā)現(xiàn)，在傳染性疾病特別是由病毒媒介和細菌所引起的病癥或疾病的醫(yī)學管理中，膽固醇胺出乎意料地優(yōu)于其他膽固醇衍生物，尤其要優(yōu)于膽固醇硫酸酯。在本發(fā)明的環(huán)境，術語"月旦固醇胺"的意思也涵蓋有時稱為"氨基膽固醇衍生物"的化合物以及有時稱為"氨基膽甾烷和氨基膽甾烯衍生物"的化合物。此外，在本發(fā)明的環(huán)境，術語"膽固醇胺"的意思也涵蓋膽固醇的衍生物，其中A環(huán)被下文式2所示的含氮雜環(huán)取代。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明提供了下述式1的化合物或者其藥學上可接受的鹽、衍生物、溶劑化物或前藥在制備用于治療、預防和/或改善傳染性疾病/病癥的藥物組合物中的用途。所述的疾病或病癥可以是由病毒或細菌引起的。<image>imageseeoriginaldocumentpage11</image>此外，規(guī)定本發(fā)明文中給出的通式涵蓋所示化合物的所有可能的立體異構體和非對應異構體。在式1中，R1、R2、R3、W和R5中之一是選自X(CH2)nNH2、X(CH2)nNH(d—4烷基)、X(CH2)nN(CM烷基)2、X(CH2)nN(CM烷基)3+的含胺基團。優(yōu)選地，RS是含胺基團。X是化學鍵(directbond)或是選自OP(0)(Od-4烷基)0、OP(0)(0-)CH20或OP(0)(OC，—4烷基)CH20的含磷基團。在一個優(yōu)選的實施方案中，X是化學鍵。在一個實施方案中，X是OP(0)(OQ—4烷基)0。仍然在另一個實施方案中，X是OP(0)(OC,-4烷基)CH20。當X是化學鍵時，n是從0到2的整數(shù)。在一個實施方案中，n是0。在另一個實施方案中，n是l。仍然在另一個實施方式中，n是2。在一組優(yōu)選的化合物，n是0或l。在另一組優(yōu)選的化合物，n是l或2。當X是含磷基團時，n是從2到6的整數(shù)，優(yōu)選2。當X是OP(0)(0-)CH20時，式1的化合物可以以鹽的形式存在。下文列出了合適的平衡離子，作為"藥學上可接受的鹽"。相應的游離堿，即其中X是OP(0)(OH)CH20，也落入本發(fā)明的范圍內(nèi)。在實施方案中，其中RS是含胺基團，-"^-是單鍵或雙^t，優(yōu)選單鍵。當^是雙鍵時，沒有r4。r1、r2、R3和R4獨立地是h或oh。r6是h。當X是直接結合且n是l或2時，W也可以是OH。優(yōu)選地，W是H。在實施方案中，其中R/是含胺基團，f和I^獨立地是H或OH。R3、R4和R5是H。^是單鍵。在實施方案中，其中f是含胺基團，113和W獨立地是H或OH。R1、R4和R5是H。^是單鍵。在實施方案中，其中RS是含胺基團，仗2和W獨立地是H或OH。R1、R4和R5是H。=是單鍵。當X是化學鍵時，在優(yōu)選的實施方案中，式1的化合物包含1到4個羥基。該羥基提高了膽固醇胺在兩親性或極性介質(zhì)中的可溶性，這有利于醫(yī)學應用。在一個實施方案中，式1的化合物包含0或1個羥基。在另一個實施方案中，式1的化合物不包含任何羥基。式la到11的下述化合物是式1化合物的優(yōu)選實例。12化合物le和ll表示陽離子，其可以與諸如卣化物、磷酸鹽、硫酸鹽和醋酸鹽的任何藥學上可接受的陰離子組合使用。在化合物la到ll中，化合物la、lg、li、lj和lk是優(yōu)選的。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了下述式2的化合物或其藥學上可接受的鹽、衍生物、溶劑化物或前藥在制備用于治療、預防和/或改善傳染性疾病/病癥的藥物組合物中的用途。所述的病癥或疾病可以是由病毒或細菌引起的。、在式2中，Y是NH、N(Cw烷基)或N(C,—4烷基)2+,優(yōu)選NH。p是從0到2的整數(shù)，且q是l或2的整數(shù)，如果p為2，那么q是1。優(yōu)選地，p是0且q是2。=是單鍵或雙鍵，優(yōu)選單鍵。式2a和2b的下述化合物是式2化合物的優(yōu)選實例。2a2b根據(jù)本發(fā)明所用的化合物可以采用本領域已知的標準方法制備。通式1的化合物，其中X是化學鍵且在3位上具有伯胺官能團，可以利用合成順序醇-曱磺酸-疊氮化物-胺，從商購的5-膽甾烯-3/5-醇或5ce-膽甾烷-3^-醇制備。最終胺的立體化學取決于起始醇的立體化學3|3-醇會提供3ce-胺，反之亦然。5-膽甾烯-3a-醇或5ce-膽甾烷-3Q!-醇可以通過文獻的實驗方案(Boonyarattanakalin,J.Am.Chem.Soc.126(2004),16379-16386)獲得?？蛇x地，這些胺可以通過還原胺化策略制備例如，通過采用烷基胺或二烷基胺作為反應物取代胺，或者通過采用羥胺作為反應物并隨后用拉尼鎳(Raney-Nickel)處理伯胺。胺可以以游離堿的形式獲得，或以相應氫氯化物的形式獲得，該氬氯化物是通過用溶解在二乙醚中的HC1來沉淀的。采用環(huán)氧化作用并隨后通過用氫化物來開環(huán)(ring-opening)或通過鋨介導的雙輕基化策略，可以從可商購獲得的4-膽甾烯-3-酮或1,4-二烯膽甾-3-酮制備相應的羥基修飾的衍生物。如Oldenziel,J.Org.Chem.42(1977)，3114-3118中所述，通過用曱苯磺酰曱基異腈(tosylmethylisocyanide,TosMIC)處理酮，獲得氨甲基衍生物。根據(jù)各種文獻實驗方案記載的描述(Drefahl，Chem.Ber.97(1964)，2011-2013;Kargiozov,Synth.Commun.34(2004),871-888;Shen,Bioorg.Med.Chem.Lett.15(2005),4564-4569),采用以氰曱基膦酸酯作為反應物的Homer-Wadsworth-Emmons(HWE)方法，從相應的酮開始，可以制備氨乙基修飾的膽固醇衍生物。隨后進行所形成雙鍵的氫化作用，之后再進行腈的氳化物介導的還原反應，從而得到氨乙基取代的膽固醇衍生物。如果將含胺基團連接到膽甾烷支架的C2位，則可以用相應的酮作為合成前體，所述的相應的酮可以通過各種可選的文獻已知的步驟制備(Barillier,Tetrahedron50(1994),5413-5424;Penz,MonatsheftefuerChemie112(1981),1045-1054;Lightner，Steroids35(1980)，189-207;Nakai，TetrahedronLett.(1979)，531-534)。隨后引入含胺基團可以通過上述3膽甾烷酮的通用策略實現(xiàn)。同樣的原則可以用于作為底物的4-膽甾烷酮(可從文獻Nakai,TetrahedronLett.(1979),531-534;Sondheimer,J.Org.Chem.26(1961),630-631;Shoppee,J.Chem.Soc.(1959)，630-636中的描述獲得)，或者應用到l-膽甾烷酮(可從文獻Shoppee,J.Chem.Soc.C(1968),245-249中的描述獲得)，以便分別提供具有連接到膽固醇支架的C4或CI的含胺官能團的相應衍生物。通式1的化合物，其中X是化學鍵且在1、2或4位上具有伯胺官能團，可以從相應的烯丙基胺制備。可選地，雙鍵的環(huán)氧化作用和隨后的開環(huán)或雙羥基化作用能產(chǎn)生所述的羥基修飾的化合物。所述的烯丙基胺可以從2o;3ce-環(huán)氧-5o!-膽甾烷，通過用節(jié)基胺來對環(huán)氧部分進行開環(huán)，之后進行脫千基作用制備，或者通過用曱磺酰氯處理，之后用疊氮化物處理且隨后進行氫化鋁鋰還原反應制備。2a;3ce-環(huán)氧-5o;-膽甾烷，例如，可以通過對5a-膽甾烷-2-烯進行間氯過苯曱酸(meta-chloroperbenzoicacid)介導的環(huán)氧化作用獲得，所述5ce-膽甾烷-2-烯可以根據(jù)文獻所述制備(CruzSilva,Tetrahedron61(2005),3065-3073)。通式l的化合物，其中X是O-烷基磷酸酯，可以采用文獻已知的亞磷酰胺方法(Beaucage，S.L.;CAem.2007,72(3),805-815;Noyori,R.;/■C/e附.&c.2001，723(34),8165-8176;Hayakawa,Y,;5w〃.CAe附.5bc2001,74(9),1547-1565;Noyori,R.;r"raAWraw丄欲.1986，27(35),4191-4194;Reviews:BannwarthW.;//e/v.C/nw.爿cto1987,70,175-186以及Beaucage,S.L.;r咖W醒1993，49(10),1925-1963),由相應的膽固醇或二氫膽固醇(根據(jù)上述方法可以獲得)制備。與使用磷酰氯的傳統(tǒng)策略相比，亞磷酰胺方法更有效并且提供更可靠的結果。通式l的化合物，其中X是磷酸酯或(9-烷基磷酸酯，可以，采用文獻(Rejman,D,;iVwc/eosz'^feM/c/eWdes17Vwc/e/cy4c油200/,20,1497-1522和Holy,A.;丄Merf.C7^附.2001,44，4462-4467)中所述的策略，從相應的膽固醇或二氫膽固醇(根據(jù)上述的方法可以獲得)制備?？梢圆捎肅M烷基卣化物，根據(jù)本領域技術人員已知的標準實驗方案，使所得的磷酸酯O-烷基化。通式2的化合物可以才艮據(jù)文獻的概述制備。例如，Shoppee等描述了制備3-和4-氮雜-八-膽固醇書亍生物(3-and4-aza-A-cholesterylderivative)的合成方法，該方法是采用貝克曼重排(Beckmannrearrangements)進4亍伴隨氮原子摻入的環(huán)擴展(Shoppee,CW.;/C&挑.1962,105)?？蛇x地，展示擴展的、含氮A環(huán)的膽固醇衍生物可以采用施密特型重排(Schmidt-typerearrangements)產(chǎn)生(Doorenbos,N.J.;/Org.1961,26，2548-2549)。制備4-氮雜-膽固醇衍生物而不擴展甾族A環(huán)的合成方法，利用氧4匕'l"生AJ不開5不氧4匕(oxidativeA-ringopening,Boikza-Tomaszewski，Z.;r&ra/zWra"1986，27，3767-3770)獲得相應的閉聯(lián)-膽固醇衍生物(seco-cholesterylderivatives)并且隨后在氮源存在的環(huán)境中進行閉環(huán)反應(Doorenbos,N.J.;/Og.CAem.1961,26,2546-2548)的雙重策略，之后將所得的內(nèi)酰胺衍生物還原為相應的胺(Shoppee,C.W.;CAe肌Soc.1962,2275-2285和Kim,J.C.;Sw〃.i:。re朋C/zem.<Soc.1993,14(2),176)。例如，可以通過相應4-氮雜-類固醇的法沃斯基型環(huán)縮作用(Favorski-typeringcontraction)(Edwards,O.E.;Caw./CAew.1997,75(6),857-872)，或者通過利用上文所述閉聯(lián)-膽固醇衍生物作為底物的胺化-環(huán)纟宿合成$不力頃序(amination-cyclocondensationsequence)(Chupina,L.N.;X/nVw汰o-i^環(huán)她eWcAesfZAwma/1982,16(5),563-567和Rulin,V.A.;Z/mwfl/Ogam'c/zesA:oz'1975,11(8),1763-1766)，獲得A-正-氮雜類固醇。本文提供的化合物可以用于治療(以及預防和/或改善)象病毒性疾病或細菌感染之類的傳染性疾病或病癥。已經(jīng)在相應的基于細胞的疾病或病癥模型中評估了本文提供的化合物。根據(jù)本發(fā)明待治療的病毒性疾病包括由病毒誘發(fā)的疾病，所述病毒選自流感病毒、HIV、肝炎病毒(甲、乙、丙、丁)、輪狀病毒、呼吸道合月包病毒、皰滲病毒一牛(Herpetoviridae,例嗩口，單纟屯皰滲病毒(Herpessimplexvirus)、愛潑斯坦-巴爾病毒)、埃可病毒l、麻瘆病毒、小核糖核酸病毒科(Picornavirida，例如，腸道病毒(Enterovirus)、柯薩奇病毒(Coxsackievirus))、絲狀病毒科(例如，埃博拉病毒、馬爾堡病毒)、乳頭瘤病毒科、多瘤病毒科。在優(yōu)選的實施方案中，所述病毒為流感病毒。根據(jù)本發(fā)明待治療的細菌感染包括，尤其由革蘭氏陽性桿菌、革蘭氏陽性球菌、革蘭氏陰性桿菌和革蘭氏陰性球菌誘發(fā)的感染。革蘭氏陽性桿菌為，例如，梭菌屬的種類(C/o^nV^mspp.)、炭疽芽孢桿菌(8ac/〃M朋Arac/力、豬丹毒桿菌C￡>;^》e/c^n'xr/m^opW/n'fle)、單核細胞增生李斯凈爭菌(Z/5ten'"附o"oc少togewes)、i若卡氏菌屬的種類(7Vocan/z'"spp.)、白4矣4干菌(Co^ywe6acfen'wmd^/^/^n'ae)禾口掩皰丙酸#干菌(/Vo/H.om'6acfen'wmacwas)。革蘭氏陽性球菌為，例如，金黃色葡萄球菌(&op/^/ococci^和鏈球菌屬的種類(&"/7tococc^spp.)。革蘭氏陰性桿菌為，例如，大腸桿菌、幽門螺桿菌(i/e/ZoZ>acter;3;/on')、布魯氏菌屬的種類(Brace〃aspp.)、嗜水氣單胞菌、志賀氏桿菌屬的種類(幼^e/tospp.)、弧菌屬的種類(raWospp.)、鼠疫耶爾森氏菌(&ra/w'a、沙門氏菌屬的種類0Sa/wo"e〃flspp.)、月巿炎克雷伯菌(7i7eZw7'e〃ap"ewmom》e)、洋蔥伯克霍德菌(5wr狄ozV/m'a，ada)、腸桿菌屬的種類(五"/eraZ)flc&rspp.)、綠膿桿菌aen/g/"oy")、空腸彎曲沖干菌和嗜月申軍團斥干菌(Zeg/owe〃apwei/wo//7a)。革蘭氏陰性球菌為，例如，淋病奈瑟氏球菌(Ak^enVzgowofr/ioeae)和卡他莫拉菌(Moraxe〃acc^arr/iafc)。根據(jù)本發(fā)明待治療的細菌感染，還包括由不適用革蘭氏染色的臨床細菌誘發(fā)的感染。這些細菌為，例如，疏螺旋體屬的種類(5wre/z'aspp.)、五日熱巴爾通體C8wtowe//(3gm'w/a"a)、月申炎衣原體(CW^wj^/Zfl;wewmom'fle)、結核分枝桿菌、牛分牙支桿菌、麻風分才支^干菌(AfycoZac/enY/m/印rae)、潰瘍分枝桿菌(MycoZa"en'M附w/cerara)、堪薩斯分枝桿菌(^fycoZwcten'ww7A:awawas77)、鳥分斗支才干菌(Afyco^acten'wwav/w附)、副結沖亥分才支一干菌(Afyco6acten'wm/Mra/wZ)erci//as^)、、淋巴結沖亥分斗支斗干菌(A^ycoZ)acten'w附scro/M/ace"附)、立克;欠氏體屬^I種類C^.cA:&to/flspp.)禾口密螺3走體屬的種類(rm/owemaspp.)。在本發(fā)明的環(huán)境中，"分枝桿菌誘發(fā)的疾病"可以包含由感染來闡明的和/或與感染相關的病癥/疾病，特別是結核分枝桿菌、牛分枝桿菌、鳥分枝桿菌、非洲分枝桿菌(Af.a/n'ca,m)、堪薩斯分枝桿菌、胞內(nèi)分枝桿菌(Af./wZrace〃w/fl。、潰瘍分枝桿菌、副結核分枝桿菌、猿分枝桿菌(M.w7m'ae)、淋巴結核分枝桿菌、楚爾蓋分枝桿菌(M.szw/gaO、蟾蜍分枝桿菌(M!xewc^)、偶然分枝桿菌^M/oWm/ww)、龜分枝桿菌(M.cAe/owe0、麻風分枝桿菌以及海分枝桿菌(Mwflhm/m)導致的感染。附加的實例特別提供了本文公開的化合物在治療和/或預防肺結核即結核分枝桿菌導致的感染中發(fā)明用途的數(shù)據(jù)。在"待治療和/或預防的感染"環(huán)境中所提到的，本發(fā)明并不限于病原體媒介本身(pathogenagent)(例如，細菌)所引起的病癥的治療/預防，而且還包括所述病原體產(chǎn)生的如同例如毒素的產(chǎn)物所引起的病癥的醫(yī)學改善。根據(jù)本發(fā)明待來治療的分枝桿菌誘發(fā)的疾病包括，特別是肺結核、麻風病(leprosy)、熱帶皮膚潰瘍(tropicalskinulcer)、潰瘍(ulceration)、膿腫(abscess)、肺病(pulmonarydisease)、肉芽瘤(皮膚)疾病(granulomatous(skin)disease),非結核分枝桿菌引起的才幾會性感染(opportunisticinfection)以及由諸如鳥分枝桿菌的非典型分枝桿菌引起的疾病，該疾病包括肺病、淋巴腺炎(lymphadenitis)、諸如免疫低下患者所患有的皮膚和散播型疾病。用途并不限于人的分枝桿菌誘發(fā)的疾病，而是還包括本發(fā)明在如牛結核病之類的動物疾病中的用途。在優(yōu)選的實施方案中，分枝桿菌誘發(fā)的疾病為肺結核，在附加的實例也為其提供了文件資料。在不受理論限制的情況下，本所述化合物特別有利于治療、預防和/或改善由發(fā)生于脂我之上、之中或之內(nèi)的生物化學/生物物理學病理過程所導致的傳染性疾病/病癥。本文給出了這類疾病/病癥以及這類生物化學/生物物理學病理過程的相應實例。因此，術語發(fā)生于脂我之上、之中或之內(nèi)的生物化學/生物物理學病理過程意指，例如，當病毒或細菌感染時，病原體i秀發(fā)的異常f《群集(pathogen-inducedabnormalraftclustering);當病原體感染時，細菌(毒素)在脂我中形成低聚結構；或者病毒或細菌導致信號分子在脂筏中的活性增強。并且，才艮據(jù)本發(fā)明，認為比脂我/脂我組分的正常包裝更緊密的過程是"生物化學/生物物理學的病理過程"。所附加的實例證明，當使用本文中定義的和描述的膽固醇胺類物質(zhì)18時，調(diào)節(jié)脂筏裝配可影響與傳染性疾病和病癥有關的生物學和/或生物化學。不受理論的限制，認為本文公開的具體膽固醇胺類能夠干擾脂我內(nèi)調(diào)節(jié)分子的分配。因此，可修飾脂筏的蛋白復合體的形成和/或脂筏的群集可能被改變，并且干擾或甚至是防止疾病的狀態(tài)。本文提供了特定分子，即上文定義的膽固醇胺，其被認為能夠干擾生物學過程，特別是發(fā)生于細胞優(yōu)選患病的細胞的脂提之中、之上或之內(nèi)的病理學過程?？梢哉J為這些分子是"筏調(diào)節(jié)子"。除了將膽固醇胺的抑制疾病的活性用于本發(fā)明環(huán)境中外，還在毒性檢測中對所述化合物進行了評估。毒性檢測在本領域內(nèi)是熟知的，特別包括乳酸脫氫酶(dehydrogenase，LDH)或者腺苦酸激酶(adenylatekinase,AK)^r測或細胞凋亡才企測。然而，如本領域^支術人員所知的，這些(細月包)毒性檢測并非限于這些檢測，這一點是本領域技術人員熟知的。依照本文提供的數(shù)據(jù)和信息，本發(fā)明特別提供了化學式la-ll以及2a和2b所示化合物在用于治療由病毒或細菌感染所導致的病癥和疾病方面的醫(yī)學環(huán)境(medicalsetting)中的用途。然而，在本文環(huán)境中，尤其關注的是流感病毒感染和肺結核。下文給出了有關疾病和病癥的更詳細信息。這些疾病和病癥可以通過使用本文提供的膽固醇胺預防、改善或治療。特別是，本文提供的實驗數(shù)據(jù)證明，化合物la、lb、lf、lg、lh、li、lj、lk、2a和2b在不同醫(yī)學干預或預防中是特別優(yōu)選的化合物。本發(fā)明所述的膽固醇胺可用于l)調(diào)節(jié)我的形成并干擾血凝素和神經(jīng)氨酸酶向細胞表面的轉(zhuǎn)運，2)防止M蛋白所誘發(fā)的含有刺突糖蛋白的我的群集，并且因此干擾病毒裝配，或者3)通過增加脂我的大小/體積，或者4)防出芽孔的分裂(夾斷)，其發(fā)生于筏(病毒的膜)和非-筏(質(zhì)膜)的相界處。在這一點上，優(yōu)選的化合物為化合物la、lb、lg、lh、li、lj、lk、2a和2b,化合物la、li、lk和2b代表了本發(fā)明環(huán)境中甚至更優(yōu)選的實施方案。附加實例中提供了相應的實驗數(shù)據(jù)。在病毒感染中，我的群集與病毒裝配過程有關。化合物la-ll以及2a和2b在病毒復制檢測中起作用。在不受理論的限制的情況下，作為該作用基礎的結構特征被認為是由甾族A環(huán)內(nèi)的胺取代和膽固醇型B、C、D環(huán)包括膽固醇型側(cè)鏈存在的組合所代表。采用A環(huán)中的3-氨曱基或3-氨乙基取代導致化合物li或lk的功效增加，從而說明3-氨曱基或3-氨乙基取代模式為更優(yōu)選的實施方案。在A環(huán)內(nèi)具羥基官能團的其他修飾可以提供可溶性增加的化合物，因而增加了生物利用率。如在實驗部分的病毒復制試驗中獲得的結果所證明的，這些化合物可以用于藥物干預。相反，反式-2-氨曱基-l-環(huán)己醇、膽固醇硫酸酯和膽固醇在流感感染的模型檢測中沒有表現(xiàn)出顯著的活性。由于HIV-1的病毒釋放機制與流感病毒的類似，關于我的參與，上述化合物也可用于治療HIV-1感染和HIV-1相關疾病特別是AIDS的醫(yī)學管理?？捎蒙鲜龌衔锘蚱溲苌锾幚淼钠渌《拘约膊?作為非限制性實例)為皰滲、埃博拉病毒、腸道病毒、柯薩奇病毒、丙型肝炎、輪狀病毒和呼吸道合胞病毒。因此，在特定(病毒)檢測或檢驗系統(tǒng)環(huán)境下，本文提供的特別優(yōu)選的化合物以及優(yōu)選的化合物，也被認為能夠用于其他傳染性疾病尤其是病毒感染的醫(yī)學干預和/或預防。正如上文所指出的，本文中所述的化合物也可應用于治療細菌性感染或分泌的細菌毒素所誘發(fā)的中毒。細菌毒素，如霍亂、氣單胞菌溶素、炭疽以及螺桿菌屬(ifWcoZ)acter)毒素，在筏中形成寡聚結構，這對其功能非常關鍵。通過與我脂質(zhì)如霍亂的神經(jīng)節(jié)苷脂結合，靶向我。在不受理論限制的情況下，在本發(fā)明環(huán)境中，防止寡聚化等同于防止我群集，因此，與用于病毒感染相同或相似的化合物應該能抑制劑細菌毒素的活性。本領域技術人員，特別是主治醫(yī)師，在治療細菌感染本身和/或在改善由相應毒素導致的病癥和疾病過程中，能夠易于釆用使用本文定義的膽固醇胺的治療方案。在細菌感染如肺結核、志賀氏菌病和由衣原體和尿道致病菌(uropathogenicbacteria)導致的感染中，有機體在經(jīng)常與細胞膜穴樣內(nèi)陷(caveolae)有關的筏依賴性內(nèi)在化過程中被攝取進入細胞中。防止細菌受體在筏中的定位或阻斷內(nèi)在化，可預防感染。在細胞膜穴樣內(nèi)陷的情況下，其取決于膽固醇結合蛋白即小窩蛋白(caveolin),用類固醇衍生物將膽固醇從我中排除，可以預防致病菌的攝取。肺結核是與我有關的細菌傳染性疾病的實例。首先，3型補體受體(Complementreceptortype3,CR3)是能使酵母聚糖和C3bi包被的顆粒(C3bi-coatedparticles)內(nèi)在化的受體，并在人嗜中性粒細胞中負責堪薩斯分4支診干菌(A(yco6a"en'wmA:a朋(X^/)的非調(diào)理素吞口笪"f乍用(nonopsonicphagocytosis)。在這些細胞中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)CR3與位于質(zhì)膜脂我內(nèi)的幾個GPI錨定蛋白有關，膽固醇損耗明顯地抑制堪薩斯分枝桿菌的吞噬作用，而不影響酵母聚糖或血清調(diào)理的堪薩斯分枝桿菌的吞噬作用。當與GPI蛋白結合時，CR3在使堪薩斯分枝桿菌內(nèi)在化的富集膽固醇的結構域中重新定位。當CR3不與GPI蛋白結合時，其存在于這些結構域外，并介導酵母聚糖和經(jīng)調(diào)理素處理的顆粒的吞噬作用，但不介導堪薩斯分枝桿菌的異戊烯焦磷酸(isopentenylpyrophosphate,IPP)的吞噬作用，所述IPP是特異性刺激V79VS2T細胞的分枝桿菌抗原。因此，本發(fā)明也提供了本文公開的化合物在治療和/或改善分枝桿菌(Myco^cten'wm)特別是結核分枝桿菌感染中的用途。本文所述的化合物在用作藥效團或藥物組合物時可以以化合物本身施用，或者配制成藥物。包含式l或2特別是上文定義的式la-ll中之一以及2a和2b的化合物作為活性成分的藥物組合物，位于本發(fā)明的范圍內(nèi)。藥物組合物可以任選地包含藥學上可接受的賦形劑，如載體、稀釋劑、填充劑、崩解劑、潤滑劑、粘合劑、著色劑、染料、穩(wěn)定劑、防腐劑或抗氧化劑。藥物組合物可采用本領域技術人員已知的技術配制，如Remington'sPharmaceuticalSciences(雷明頓藥物學)第20版中公布的技術。藥物組合物可配置成口服施用、胃腸道外施用的劑型，所述胃腸道外施用如肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、動脈內(nèi)、直腸、鼻、表面、氣霧劑或陰道施用。口服施用的劑型包括，包被或未包被的片劑、軟膠嚢(softgelatincapsules)、石更月交嚢(hardgelatincapsules)、4定劑(lozenges)、藥片(troches)、溶液、乳劑、懸浮液、糖漿、酏劑(elixirs)、用于重新組成的^f分劑和顆粒、可分散的粉劑或顆粒、藥物口香糖(medicatedgums)、咀嚼片(chewingtablets)和泡騰片(effervescenttablets)。用于胃腸道外施用的劑型包括溶液、乳劑、懸浮液、分散劑和用于重新組成的粉劑和顆粒。乳劑是胃腸道外施用的優(yōu)選劑型。直腸和陰道施用的劑型包括栓劑(suppositories)和栓(ovula)。鼻內(nèi)施用的劑型，可例如通過配量吸入器(meteredinhaler)經(jīng)吸入和噴射施用。表面施用的劑型包括，乳劑、凝膠劑、軟膏劑(ointments)、藥膏(salves)、貼劑(patches)和跨皮遞送系統(tǒng)?？捎糜诒景l(fā)明的化合物的藥學上可接受的鹽，可由各種有機和無機酸和堿形成。示例性的堿加成鹽包含例如諸如鈉鹽或鉀鹽的堿性金屬鹽；堿土金屬鹽，如鈣鹽或鎂鹽；銨鹽；脂肪胺鹽，如三曱胺、三乙胺、二環(huán)己胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、普魯卡因鹽、氟尼辛葡曱胺鹽、二乙醇胺鹽或乙二胺鹽；芳烷基胺鹽(aralkylaminesalts)，如N，N-二千基乙二胺鹽；雜環(huán)芳香胺鹽，如吡啶鹽、曱基吡鹽、喹啉鹽或異喹啉鹽；四銨鹽，如四甲基銨鹽、四乙基銨鹽、苯基三曱基銨鹽、苯基三乙基銨鹽、苯基三丁基銨鹽、曱基三辛基銨鹽或四丁基銨鹽；以及堿性氨基酸鹽，如精氨酸或賴氨酸鹽。示例性的酸加成鹽包含醋酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、抗壞血酸鹽、安息香酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、溴化物、丁酸鹽、氯化物、檸檬酸鹽、碳酸鹽、樟腦酸鹽(camphorate)、樟腦磺酸鹽、環(huán)戊烷丙S吏鹽(cyclopentanepropionate)、二葡萄糖酸鹽(digluconate)、十二烷基硫酸鹽、乙烷石黃酸鹽、延胡索酸鹽、葡糖庚酸鹽(glucoheptanoate)、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽(hemisulfate)、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽(hydroiodide)、2-羥基乙二石黃酸鹽(2-hydroxyethanesulfonate)、乳酸鹽、馬來酸鹽、曱烷磺酸鹽(methanesulfonate)、2-萘石黃酸鈉鹽(2-naphthalenesulfonate)、煙酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、果膠酸鹽(pectinate)、高硫酸鹽、3-苯磺酸鹽、磷酸鹽、磷酸氫鹽、磷酸二氫鹽、苦味酸鹽、三曱基乙酸鹽、丙酸鹽、水楊酸鹽、硫酸鹽、磺酸鹽(sulfonate)、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、諸如對曱苯磺酸(tosylate)的曱苯磺酸鹽、十一酸鹽等，以及氨基酸鹽。可以用于本發(fā)明的化合物的藥學上可接受的溶劑合物可以以水的溶劑合物例如水合物的形式存在，或以有機溶劑如甲醇、乙醇或乙腈的溶劑合物的形式存在，即分別作為曱醇鹽(methanolate)、乙醇鹽(ethanolate)或乙腈鹽(acetonitrilate)存在。22可用于本發(fā)明的化合物的藥學上可接受的前藥是這樣的衍生物，即該衍生物具有化學上或代謝上可切割的基團且通過溶劑分解或在生理條件下變?yōu)轶w內(nèi)具有藥學活性的本發(fā)明的化合物?？捎糜诒景l(fā)明的化合物的前藥，可以用化合物的功能基團如用氨基或羥基作為氨基曱酸鹽或酯、以常規(guī)的方式形成。前藥衍生物的形式，在哺乳動物有機體中，經(jīng)常提供溶解度、組織相容性或延緩釋放的優(yōu)勢(參閱Bundgaard，H.,DesignofProdrugs,pp.7-9,21-24,Elsevier,Amsterdam1985)。本文所述藥物組合物可以以適宜的劑量施用于個體。劑量方案由主治醫(yī)師和臨床因素確定。如在醫(yī)學領域中所公知的，用于任一患者的劑量，取決于許多因素，包括患者的大小、體表面積、年齡、待施用的具體化合物、性別、施用的時間和途徑、一般健康狀況以及同時施用的其他藥物。通常，作為藥物組合物常規(guī)施用的治療方案，應該是每天O.llLlg至15000mg單位。如果治療方案是連續(xù)輸注，則其可以分別是每分鐘、每kg體重0.1ng至10嗎?？赏ㄟ^定期評估來監(jiān)測進展。本文所述的用途，即膽固醇胺治療、改善和/或預防傳染性疾病的用途，是有醫(yī)學和藥用益處的。因此，本發(fā)明也涉及治療需要此類醫(yī)學治療的個體的方法，所述方法包括，以足以闡明藥物作用即足以改善或治愈所述個體患有的醫(yī)學疾病狀態(tài)特別是對抗傳染性疾病的量，施用本文限定的膽固醇胺。在優(yōu)選的實施方案中，待治療的個體是人。由于本文中所述的膽固醇胺的醫(yī)學重要性，本發(fā)明也提供了制備藥物組合物的方法，所述藥物組合物包含本文所限定的化合物與一種或多種藥學上可接受的賦形劑的混合物。相應的賦形劑上文已提到，包括但不限于，用于脂質(zhì)體形成的脂質(zhì)衍生物。如上文所指出的，本發(fā)明的藥物組合物如果通過注射或輸注施用，該藥物組合物優(yōu)選是乳劑。例如，乳劑可通過在37。C下攪拌60分鐘或直至勻質(zhì)，由67w-%類脂S100(類月旨(Lipoid)目錄號790)、乙醇(25\￥-%)和甘油(8.33w-。/o)制成。將受試化合物(testcompound),如14.1mg化合物li，通過在熱混合儀(thermomixer,Eppendorf)中的Agilent玻璃試管(Agilentglasstubes,體積1.7mL)內(nèi)于37°C下攪拌90分鐘，溶解到185.9mg的制劑中。這種脂質(zhì)乳劑代表受試化合物的前體脂質(zhì)體濃縮物(pro-liposomalconcentrate)。其后，將200mg脂質(zhì)乳劑在1.04g0.536%NaCl溶液中稀釋，產(chǎn)生等滲液，并渦旋20秒。將這種脂質(zhì)體懸浮液(11.35mg/mL的受試化合物)在0.9%NaCl溶液中進一步稀釋，獲得期望的濃度。以下實施例闡明本發(fā)明。所有下述化學反應都是在無水溶劑中、在惰性氣體(氬氣或氮氣)條件下進行。利用溶劑純化體系(MBraun-SPS)干燥THF和二乙醚。所使用的化學藥品和溶劑從商業(yè)來源購得。TLC:MerckTLC4呂箔硅膠60F254?？焖賹游鯩erck石圭月交(0.040-0.063匪)。質(zhì)譜BrukerHP-EsquireLC。NMR譜BrukerDRX500或DRX300;S的單位是ppm，《/的單位是Hz。實施例l、2和3:3/3-iJ^5a-膽甾烷la、3a-^J^-5a-膽甾烷lb和3/3-絲膽甾-5-烯lf的制備由二氫表膽固醇(dihydroepicholesterol)起始合成化合物la,采用Boonyarattanakalin,J.Am.Chem.Soc.126(2004),16379-16386描述的L-selectride實驗方案從商購的3-膽甾烷酮制備二氫表膽固醇。然后將二氫表膽固醇轉(zhuǎn)化成相應的曱磺酸，之后用疊氮化物取代(Davis,TetrahedronLett.38(1997),4305-4308)，并且隨后通過用氬化鋁鋰處理將疊氮化物還原成胺。從商購的二氫膽固醇起始合成化合物lb,將所述二氫膽固醇轉(zhuǎn)化成相應的曱磺酸，之后用疊氮化物取代(Davis，TetrahedronLett.38(1997)，4305-4308)，并且隨后通過用氫化鋁鋰處理將疊氮化物還原成胺。從表膽固醇(epicholesterol)起始合成化合物lf，根據(jù)文獻實驗步驟(Boonyarattanakalin,J.Am.Chem.Soc.126(2004),16379-16386)從商購的膽固醇采用兩步合成表膽固醇。將表膽固醇轉(zhuǎn)化成相應的曱磺酸，之后用疊氮化物取代(Davis,TetrahedronLett.38(1997)，4305-4308),并且隨后通過用氫化鋁鋰處理來將疊氮化物還原成胺。下面描述了用于合成化合物la、lb和lf的典型步驟。由醇制備曱磺酸的典型步驟膽甾-5-烯-3/3-醇曱烷基-磺酸鹽(Cholest-5-en-3j3-olmethane畫sulfonate)將表膽固醇(1.32g,3.42mmol)和4-二曱氨基吡啶(4-dimethylaminopyridine)(42mg,0.34mmol)在氬氣下溶解在無水二氯曱烷(25mL)中。向其中邊攪拌邊添加二異丙基乙胺(Diisopropylethylamine)(486mg,3.76mmol)和曱烷碌酰氯(methanesulfonylchloride)(431mg,3.76mmol)。100分鐘后，在石油醚/二氯曱烷(l:l)+1%乙醇中進行的TLC分析顯示，已經(jīng)完全轉(zhuǎn)化。將混合物在二氯曱烷和水(每個100mL)之間分配。將有機層相繼用稀釋的NaHS04、水、飽和的NaHC03、水和鹽水洗滌，經(jīng)過Na2S04干燥，過濾，蒸發(fā)干燥，并在真空中干燥過夜。產(chǎn)出1.54g(96%)的膽甾-5-烯-3/3-醇曱烷基-磺酸鹽，一種灰白色的固體。該物質(zhì)可以用于下一步驟中，不需要進一步純化。通過用石油醚/乙酸乙酯(4:1)進行快速層析，完成進一步純化。MS(ESI):482.3(M+NH4)+。iH-NMR(300MHz,CDC13):S=0.67(s，3H),0.81隱2.07(m,38H),2.36(d,/=15.6,1H),2.56(d,/=15.6,1H),2.98(s,3H),4.55(m,1H)，5.35(d,/=5.1，1H)。由曱磺酸來制備疊氮化物的典型步驟3&疊氮基-5a-膽甾烷將膽甾-5-烯-3)S-醇曱烷基-磺酸鹽(17.2g,37.0mmol)和粉末狀的無水疊氮化鈉(12.03g，185mmol)置于氬氣下，且懸浮于無水N.N'-二曱基丙烯脲(240mL)中。將混合物加熱至46。C，同時有效攪拌24小時。將粗產(chǎn)物在水(lL)和二乙醚/石油醚1:1的混合物(500mL)之間分配。將含水層用同樣的混合物再次洗滌。將合并的有機層用水(4xlL)洗滌、經(jīng)Na2S04干燥、過濾、蒸發(fā)干燥并真空干燥。在硅石上進行快速層析(用含有0、5、10、15、20%二氯曱烷的石油醚進行分步洗脫)產(chǎn)生14.9g(97。/。)3/3-疊氮基-5a-膽甾烷，其為無色的固體。MS(ESI):414.5(M+H)+。iH畫匪R(500MHz,CDC13):3=0.64(s+m,4H),0.79(s,3H),0.81-1.61(m,34H),1.62-1,70(m，1H),1.72陽1.86(m,3H),1.96(dm,/=12.6,1H),3.24(m,1H)。由疊氮化物制備胺的典型步驟3&M-5a-膽甾烷la在惰性氣體氬氣下，將氫化鋁鋰的(5.0g,131.6mmol)的無水二乙醚(250mL)懸浮液加熱至回流，同時攪拌。以使反應保持溫和回流的速度，逐滴添加3/5-疊氮基-5a-膽甾烷(14.9g,36.04mmol)的無水二乙醚(110mL)溶液。完成添加后，將混合物回流1小時，之后在石油醚/二氯曱烷(85:15)中進行的TLC分析顯示起始物質(zhì)已經(jīng)完全消耗。將混合物水浴冷卻，并逐滴加入40mL曱醇，之后再逐滴加入200mL2M的NaOH。得到的混合物用水(約500mL)稀釋，分離有機層并用二氯曱烷和二乙醚多次萃取混濁的水相。將合并的有機層用水和鹽水洗滌，經(jīng)過Na2S04干燥、過濾、蒸發(fā)干燥并真空干燥過夜。產(chǎn)出12.1g(87。/。)的3/5-氨基-5o:-膽甾烷la，其為白色固體。MS(ESI):388.3(M+H)+。iH國匪R(300MHz,CDC13):^0.63(s+m,4H),0.76(s，3H),0.70-1.87(m,40H)，1.94(dm,/=12.2,1H),2.62(m,1H)。3a-^J^-5a-膽甾烷lb的制備根據(jù)上文所述以及典型步驟中的概述，制備化合物lb。MS(ESI):388.3(M+H)+。力-NMR(300MHz,CDC13):S=0.64(s,3H),0.66-1.90(m,44H),1.95(dm,h12.1,1H),3.16(m，1H)。3&4JjS甾-5-烯lf的制備根據(jù)上述的以及列出的典型步驟來制備化合物lf。MS(ESI):386.4(M+H)+。力-匪R(300MHz,CDC13):S=0.66(s,3H),0.77-2.21(m,42H),2.59(m，1H),5.31(d,J=5.2，1H)。實施例4和5:3j3-曱^J^-5a-膽甾烷lc和3j3-二曱^J-5a-膽甾烷Id的制備根據(jù)下述常規(guī)實驗方案，通過采用曱胺或二曱胺(2M)的THF溶液的還原胺化策略，由商購的5a-膽甾烷-3-酮一步法制備化合物lc和ld。為方便，獲得相應鹽酸鹽形式的純胺。用三乙酰氧基硼氫化鈉(sodiumtriacetoxyborohydride)(1.4eq)和水醋酸(l.Oeq)處理5a-膽甾烷-3-酮(1.0eq)和胺(l.Oeq，用作可商購的2M的THF溶液)的無水1,2-二氯乙烷溶液。將得到的混合物在室溫下、氬氣中攪拌18小時，直到如TLC分析所測定的，反應物耗盡。通過向反應混合物中加水終止反應，并用二乙醚萃取產(chǎn)物。將有機層用鹽水洗滌，并經(jīng)MgS04干燥。將溶劑蒸發(fā)，從而得到粗產(chǎn)物(即游離胺)。通過向胺的二乙醚溶液中添加1MHC1的二乙醚溶液，制備鹽酸鹽，并隨后用二乙醚洗滌。該實驗方案獲得了化合物lc和ld的鹽酸鹽白色晶體，產(chǎn)率分別為60%到70%。3/3-曱絲-5a-膽甾烷lc:MS(ESI):m/z=402.5(M+)。^畫匪R(300MHz,CDC13):S=0.62(s，3H)!0.79(s,3H)，0.84-0.88(m,12H)，0.96-1.32(m,18H),1.45-1.80(m,12H)，1.90(brd，《/=10.4Hz,1H),1.97(brd,J=15.5Hz,1H)，2.64(brs，3H)，3.20(brs，1H),9.30(brs,1H)。3/3-二曱^J^-5a-膽甾烷ldMS(ESI):m/z=416.4(M+)。力國NMR(300MHz,CDCI3):S=0.61(d,5.5Hz,3H)，0.81(m,10H),0.97-1.31(m,18H)，1.42-2.02(m，15H),2.73(brs,3H),2.82(brs，3H),3.03(brm，1H),11,33(brs,1H)。實施例6:3i3-三曱基銨-5a-膽甾烷基氯化物le的制備將3/3-曱氨基-5Q!-膽甾烷lc(1.0eq)和氫化鈉(8.0eq,其含量為60%的礦物油懸液)的無水二氯曱烷懸浮液加熱，回流30分鐘。向其中添加未攙水的曱基硪(20eq),并將反應混合物加熱至45。C保持2天。然后將反應混合物冷卻并用二氯曱烷(50mL)稀釋，再用鹽水反復洗幾次，并用二氯曱烷來萃取(3x100mL)。將合并的有機層經(jīng)過硫酸鈉干燥，并在真空中濃縮。用二乙醚洗滌粗產(chǎn)物獲得了相應氯化物形式的3/5-三曱基銨-5a-膽甾烷基氯le，其為白色晶體。MS(ESI):m/z=430.5(M+)。力-匪R(300MHz,CDC13):S=0.67(m,3H),0.88(m，12H),1.13-2.01(m,31H),3.17(brs,6H)!3.36(brs,1H),3.72(brs,1H),4.48(brs,2H)。實施例7:2/3-iJ^3a-羥基-5a-膽甾烷lg27從2a3a-環(huán)氧膽甾烷制備化合物lg，所述2"3ce-環(huán)氧膽甾烷可以通過已知步驟獲得，該已知步驟包括使二氫膽固醇進行脫水反應生成2-膽甾烯，隨后再進行環(huán)氧化作用(CruzSilva,Tetrahedron61(2005),3065-3073)。如下文所概述的，用千胺進行環(huán)氧化物開環(huán)反應，并用氬和鈀石友進行脫節(jié)基作用獲得氨基醇lg。2A(7V-節(jié)胺)-3a-羥基-5a-膽甾烷的制備在氬氣下，將2a3ce-環(huán)氧膽甾烷(217mg,0.56mmol)懸浮于千胺(3ml)中。將混合物在120。C下攪拌3天。然后，在石油醚/乙酸乙酯(10:l)中進行的TLC分析表明，起始物質(zhì)消耗了大約90%。在真空下，除去大部分節(jié)胺。將剩余物溶解于THF/異丙醇(2:1)中，用三氟乙酸(TFA)酸化，并用制備HPLC(preparativeHPLC)(色譜柱Vydac208TP1050(RP-C8),檢測器UV(215nm)，流動速率50mL/分鐘，洗脫液A:水/乙腈(85:15)+0.1%TFA,洗脫液B:THF+0.1%TFA，用濃度從38%到59%的洗脫液B梯度洗脫21分鐘，RT-19.3分鐘)純化。收集含有產(chǎn)物的部分。減壓環(huán)境下除去大部分THF。用飽和的含水Na2C03堿化剩余的溶液，并用二氯曱烷萃取。將有機層用Na2S04干燥、過濾、蒸發(fā)干燥并在真空中干燥。通過在Alox-N(活性4，activity4)上用石油醚/乙酸乙酯(4:1)+2%乙醇進行層析，進一步純化產(chǎn)物。產(chǎn)出27mg(10。/o)的2^(iV-千胺)-3a-羥基-5a-膽甾烷，其為無色油狀。MS(ESI):494.4(M+H)+。1H-NMR(500MHz，CDC13):^0.63(s,1H)，0.65-0.75(m,1H),0.80畫1.40(m，32H)1.45-1.70(m,8H),1.71-1.91(m，3H),1.95(dm，《/=12.6，1H),2.84(dm,/=4.6,1H),3.75(d,/=13.2，1H),3.83(dm，/=4.2,1H)，3.87((!，/=13.4,1H),7.25(m,1H),7.32(m,4H)。鹽酸鹽形式的2&M-3a-羥基-5a-膽甾烷lg的制備將2^(AA-千胺)-3a-羥基-5a-膽甾烷(25mg,50.6/miol)溶解于二氯曱烷(3mL)中，并在20mg的鈀碳(10%)存在的情況下，常壓(atmosphericpressure)下進行氫化反應，過夜。粗混合物的質(zhì)譜分析顯示沒有發(fā)生轉(zhuǎn)化。添加另一部分的50mg催化劑和3mL二氯曱烷/甲醇(4:l)，再進行24小時的氫化反應。然后，利用石油醚/乙酸乙酯(4:1)+10%二氯曱烷+3%曱醇進行的TLC分析顯示，已完全轉(zhuǎn)化。通過賽力特硅藻土(celite577)短襯墊(shortpad)過濾，除去催化劑。使用二氯曱烷/曱醇(70:30)(300mL)洗滌，以確保材料完全復原。在減壓環(huán)境下去除溶劑，并在真空中進行干燥后得到18.4mg(90。/。)無色固體，將該無色固體溶解于二乙醚(4.5mL)和幾滴異丙醇中。加入1M的HC1的二乙醚溶液(60/xL)、用二乙醚稀釋(4mL)，并冷卻，導致鹽酸鹽沉淀，用膜過濾收集該鹽酸鹽沉淀物，用二乙醚洗并在真空中干燥。產(chǎn)出17mg(77%)的2/3-氨基-3ce-羥基-5a!-膽甾烷的鹽酸鹽，其為白色固體。MS(ESI):404.4(M+H)+。iH國NMR(500MHz,DMSO-d6):^0.62(s,3H)，0.62-0.69(m,1H),0.76-1.80(m,39H)，1.92(dm,/=12.3,1H),3.14(m,1H，H畫2),3.72(m,1H,H-3)，5.17(d,/=3.7，1H,OH),8.04(brs，3H！NH3+)。力國匪R(500MHz,CDC13/CD3OD8:2):^0.53(s,3H),0.64(m,1H),0.69-1.60(m,40H),1.65-1.78(m,3H),1.85(dm,12.6,1H),3.15(dm，《/=6.1,1H),3.84(brs,OH,NH2,H-3)。實施例8和9:3/3-氨曱基-5a-膽甾烷lh和3a-氨曱基-5a-膽綹烷li才艮才居在先文獻(literatureprecedence)(Oldenziel,J.Org.Chem.42(1977),3114-3118),通過用商購的甲恭璜酰甲基異腈(TosMIC)處理，將商購的5a-膽甾烷-3-酮轉(zhuǎn)化成立體異構的腈混合物即3a-和3iS-氰基膽甾烷(3a-and3/3-cyanocholestane),制備化合物lh和li。隨后過對立體異構體進行層析分離，并對分離的腈進行氫化鋁鋰還原反應，得到化合物lh和li。通過利用石油醚/乙酸乙酯(10:l)或石油醚/二氯曱烷(2:l)作為洗脫液在硅石上進行快速層析，或者通過利用水作為洗脫液A、用THF作為洗脫液B以及40%-70%B的梯度在反相C8柱上進行超過40分鐘的制備HPLC,實現(xiàn)3a-和3/3-氰基膽甾烷的分離。3a-氨甲基-5a-膽甾烷li的制備在惰性氣體下，將氫化鋁鋰(1.68g,44.3mmol)懸浮于無水THF(200mL)中，并將混合物邊攪拌邊加熱至回流。在15分鐘內(nèi)，逐滴逐加入3a-氰基-5o!-膽甾烷(7.28g,18.3mmol)的無水THF(200mL)溶液。將混合物在回流狀態(tài)下再攪拌90分鐘，之后在石油醚/二氯曱烷(l:l)中進行的TLC分析顯示，起始物質(zhì)已經(jīng)完全消耗。逐滴加入水終止反應。將混合物在水和二乙醚之間分配，并且將含水層用二乙醚和乙酸乙酯萃取多次。將合并的有機相經(jīng)過Na2S04干燥，過濾和蒸發(fā)千燥。將殘余物溶解于二氯曱烷/曱醇(9:l)中，通過賽力特>法藻土577短塞(shortplug)過濾，除去無機物。將溶劑除去并在真空下干燥，得到6.60g(90。/。)化合物li,其為無色固體。MS(ESI):402.5(M+H)+。iH-NMR(500MHZlCDC13/CD3OD8:2):^=0.67(s,3H),0.70-0.73(m,1H),0.80-1.72(m,41H),1.75-1.87(m,2H)，1.99(dm，J^12.5,1H)，2,08(m，1H),3.00(m,2H)。鹽酸鹽形式的3^氨甲基-5a-膽齒烷lh的制備采用與制備上述化合物li相同的方法，制備化合物lh。將粗產(chǎn)物溶解于二乙醚(10mL)中，并且通加入1M的HC1的二乙醚溶液(35mL)沉淀lh的相應鹽酸鹽。濾出所形成的固體，用二乙醚洗滌，并在高真空下干燥，以獲得鹽酸鹽形式的lh(0.36g，68%),其為無色固體。MS(ESI):402,4(M+H)+。'H-NMR(500MHz，CDC13/CD3OD8:2):0.67(s，3H),0.70(m,1H),0.79(s，3H)，0.86-1.38(m，31H)，1.49隱1.58(m,3H),1.67(m,3H),1.77-1.85(m,2H),1.99(dm，J二12.6,1H),2.77(d,/=5.2,1H)。沒有明顯觀察到NH3+。實施例10:鹽酸鹽形式的3a-氨曱基-3/3-羥基-5a-膽甾烷lj的制備通過相應的O-三曱硅烷基-保護的氰化醇衍生物(Evans，J.Org.Chem.39(1974),914-917),并隨后用氫化鋁鋰處理，之后再用HC1沉淀，由商購的5ce-膽甾烷-3-酮制備化合物lj的鹽酸鹽。不純化氰化醇中間體，而將其作為原料進行氫化還原反應。如以前對化合物li所做描述，通過用過氫化鋁鋰還原氰化醇的衍生物，制備化合物lj，并如對化合物lh所做描述，形成相應的鹽酸鹽。MS(ESI):418.4(M+H)+。30'H-匪R(300MHz，CDC13):S=0.48(s,3H),0.59-1.52(m,42H)，1.58陽1.71(m,1H),1.76-1.84(m,1H)，2.84(brs,2H).;殳有明顯》見察到NH3+。實施例11:鹽酸鹽形式的3/3-氨乙基-5a-膽甾烷lk的制備利用文獻(Karagiozov，S.K.;Synth.Commun.2004，34(5),871-888)中描述的Horner-Wadsworth-Emmons實驗方案，從商購的3-膽甾烷酮和二乙基氰曱基磷酸酉旨(diethylcyanomethylphosphonate)開始，制備化合物lk。通過用釔碳作為催化劑的標準氫化作用，將得到的"/5-不飽和腈轉(zhuǎn)化成相應的腈。隨后，用二乙醚中的氫化鋁鋰，將腈還原成相應的胺。最后，利用商購的鹽酸的二乙醚溶液，通過沉淀，獲得非常純的鹽酸鹽形式的化合物lk。MS(ESI):416.4(M+H)+。JH國NMR(300MHz,CDC13):S=0.67(s,3H),0.71隱1.69(m,44H),1.78-1.85(m，1H),2.61(m,2H).沒有明顯觀察到NH3+。實施例12:三氟醋酸鹽形式的(5a-膽甾烷基-3/3-醇)曱基[2-(三曱基胺)-乙基磷酸酯ll的制備從商購的二氫膽固醇，利用上文常規(guī)合成討論中所述的亞磷酰胺方法，-使用商購的試劑曱基N，N,N，,N，-四異丙基亞磷酰二胺(methylN,N,N，,N，-tetraisopropylphosphorodiamidite)、四峻、膽石威對甲苯石黃酸鹽(cholinetosylate)、N畫苯基咪峻三氟曱石黃酸鹽(N-phenylimidazoliumtrifluoromethanesulfonate)和叔丁基過氧化物(terf-butylperoxide),—鍋法(one-potprocedure)制備化合物11。然后，通過制備HPLC將粗產(chǎn)物純化，從而分離相應的三氟醋酸鹽。MS(ESI):568.4M+。iH-NMR(300MHz,CDC13):S=0.63(s,3H),0.63(m,1H)，0.70-2.00(m,42H)，3.22(s,9H),3.71(d,/=11.3，3H),3.76(m，2H),4.23(m,1H),4.39(m,2H)。實施例13:鹽酸鹽形式的3-氮雜-A-類-5a-膽甾烷(3國Aza-A-homo-5a-cholestane)2a的制備通過相應的將發(fā)生Doorenbos等人(Doorenbos,N.J.;,Og.CAe附.1961,26,2548-2549)所述的貝克曼型重排反應(Beckmann-typerearrangementreaction),由商業(yè)上可購得的膽甾烷基-3-酮，制備化合物2a。所得物質(zhì)的熔點和'H-NMR譜(^H-NMRspectrum)與已公布的數(shù)據(jù)(Takahashi,T.T.;乂CAe附./1980，1916-1919)—致。實施例14:鹽酸鹽形式的4-氮雜-5a-膽甾烷2b的制備通過以下順序4，5-雙羥基化，將3-酮還原成3-幾基，利用溶解于曱醇中的四乙酸鉛或高氯酸鉛來對3,4，5-三元醇進行氧化斷裂，將得到的曱酯進行皂化，通過壓力下用氨水處理濃縮4-氮雜膽甾-4,5-烯-3-酮，利用氫化鋁鋰對5，6-雙4建進4亍加氫化作用并將得到的內(nèi)酰胺還原成2b(Boiicza-Tomaszewski,Z.;re/ra/^raw丄成1986,27，3767-3770;Doorenbos,N.J.;/.Og.CAew.1961,26,2546-2548;Shoppee,C.W.;/CAem.Soc.1962，2275-2285),由膽甾-4，5-烯-3-酮制備化合物2b。另一種制備4匕合物2b的方法，由McKenna和Tulley(McKenna,J.;乂CAe附.1960,945)做了描述。所得物的熔點和iH-NMR譜與公布的數(shù)據(jù)(Pradhan,S.K.;//dmxqyc/es1989,28(2),813-839)—致。實施例15:病毒繁殖和感染性檢測(轉(zhuǎn)化灶減少檢測(FocusReductionAssay))在下文中，評價了上文確認的化合物抑制病毒繁殖和/或降低病毒感染性的功效。使用流感作為相應的病毒媒介。通過病毒滴定評估抗病毒作用，所述病毒滴定等同于與傳統(tǒng)的空斑減少;險測(plaquereductionassay)。本檢測在樣t滴定板(microtiterplate)中進行，并與細胞ELISA—樣進行顯影。將細胞(狗腎臟上皮細胞，Madin-Darbycaninekidneycells,MDCK)與受試化合物的連續(xù)稀釋液一起預孵育5分鐘，然后用連續(xù)稀釋的病毒進行感染。病毒繁殖和感染檢測的功效(特征為ICso和IC9。值，即50%或90%的病毒繁殖被抑制時的濃度)按下文所述進行評價，并與也用于測定功效的細胞模型中的毒性進行比較。以未觀察到毒性的濃度范圍，檢測化合物對病毒繁殖和感染性的抑制。通過計算50%或90%的病毒復制被抑制時的濃度，進行定量。相應的值分別用"IC50"或"IC9()"表示。在此環(huán)境下，"無抑制"(例如，零)是指僅由溶劑載體即沒有加入受試化合物的溶劑產(chǎn)生的抑制。"完全抑制性"或100%抑制性是指無轉(zhuǎn)化灶。轉(zhuǎn)化灶減少檢測使用下列材料低保留管(lowretentiontube)和玻璃稀釋平板(glassdilutionplate)(在70。/o的乙醇中浸泡后，加罩干燥)；兩個恒溫混勻器(thermomixer)、1.5mL的Eppendorf管和96孔深孔板(96-we11block);制備受試化合物稀釋液96孔玻璃板(96-we11glassplate)或者玻璃-覆膜的孔板(glass-coatedplate)(Zinsser或者LabHut);裝有1-2天齡的MDCK細胞的Costar96孔板(黑色)或者玻璃覆膜的LabHut孔板；已知效價病毒等分試樣；添加了牛血清白蛋白(BSA)的感染培養(yǎng)基(infectionmedium,IM)(從Celliance購得，目錄號為82-046-4);以等分試樣儲藏在-80°。的2mg/mL的胰島素母液；0.05%的戊二醛(在水中含量為25%的，Sigma目錄號為G5882，保存于-20。C)的PBS(磷酸鹽緩沖液，稀釋比例1:500)溶液，該溶液是以每板250mL的量新鮮配制的；用于細胞Rlisa顯影的抗體；PierceSuperSignal(WestDura)底物。從美國典型培養(yǎng)物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection,Rockville,MD,USA)獲得MDCK細胞和人曱型流感病毒(毒林A/PR8/34(HINI))。用以下工作路線進行轉(zhuǎn)化灶減少檢測步驟l:受試化合物溶液的制備將作為DMSO中10mM、5mM或3mM的母液保存于-2(TC的受試化合物在37。C下解凍，并且如果有需要，進行超聲波處理，以獲得澄清的溶液。在恒溫混勻器中，將IM在低保留管中37。C下預熱，并且按以下方式，加入受試化合物的母液(以10mM受試化合物母液為例來計算)對于100/AM的受試化合物母液1078的IM+22juL的受試化合物母液；對于50/AM的受試化合物母液1089的IM+11的受試化合物母液；對于25/iM的受試化合物母液1094的IM+5.5/>iL的受試化合物母液；對于10/xM的受試化合物母液1098/^L的IM+2.2jiiL的受試化合物母液。將得到的受試化合物溶液振蕩30-60分鐘，并轉(zhuǎn)到96孔玻璃板中，該96孔玻璃板已在恒溫混勻器微孔板區(qū)(thermomixermicroplateblock)37。C下預熱。一個玻璃板用于兩個滴定板，玻璃板的左半部分接受滴定板l的受試培養(yǎng)基(testmedia),右半部分則接受滴定板2的受試培養(yǎng)基。每孔接受250/xL的受試化合物溶液或?qū)φ张囵B(yǎng)基(參見下面的模板)。最后，用多通道加樣槍(multichannelpipette)將受試化合物的稀釋液(每種100/iL)從玻璃稀釋平板轉(zhuǎn)移到MDCK細胞培養(yǎng)板。步驟2:感染具有MDCK細胞單細胞層的96孔板邊緣列用受試化合物溶液處理，并進4亍偽感染(mock-infected);它們作為密度計量評估(densitometricevaluation)的背景對照(孔a)(參閱下文"檢測結果的定量")。向其他3種孔b、c和d填充病毒稀釋液，如2x10—6的轉(zhuǎn)化灶形成單位(fociformingunits)、1xlo一的轉(zhuǎn)化灶形成單位或5x10_7的轉(zhuǎn)化灶形成單位，以便2x10_6的轉(zhuǎn)化灶形成單位稀釋液產(chǎn)生50-100個轉(zhuǎn)化灶。適宜的稀釋液通過病毒滴定測定。在IM中制備所有的病毒稀釋液。將病毒在IM中以1:64預稀釋(即630|iLIM+10|iL病毒溶液)。將1:64的病毒稀釋液稀釋成冷IM1:2000(=1),隨后再進行2次2倍稀釋。對于1個96孔板，制備3mL、1.5mL、和1.5mL的這類溶液，對于2個96孔板，制備6mL、3mL和3mL的這類溶液，并將這些溶液保存于4°C。制備20iug/mL的胰蛋白酶溶液，并使其流經(jīng)0.2pm的無菌針頭式過濾器(syringefilter),隨后在IM中稀釋為4|ug/mL。在感染前10分鐘，將等體積如3mL或6mL的胰蛋白酶稀釋液(4jig/mL)力。入病毒修飾液或IM(用于偽感染)，并保存于4°C，直到感染。用2x200IM，洗滌單層細胞。用多通道加樣沖倉加入IM中的100受試化合物或?qū)φ杖軇?，以便每?2-ll)含有單一的受試化合物稀釋液。如果邊緣效應最小，則第l列和第12列接受IM并作為無溶劑對照。用多通道加樣槍將100|iLIM和2|ig胰蛋白酶/mL加入A行和H行(rowsAandH)(偽感染)。向其他行加入病毒稀釋液，由此，每次都換移液管的吸頭(pipettetip)。每次加入后，用移液管來回吸取孔的內(nèi)容物。將平板在37。C孵育16小時。通過顯微鏡評估偽感染的孔中的毒性/細胞形態(tài)/沉淀。通過用250mL0.050/。的戊二醛PBS溶液室溫下固定、浸泡/填充整個平板，終止感染。步驟3:檢測除去戊二醛〉容液，用PBS漂洗平+反，并用50(iL0.1。/。的TritonX-100在PBS中滲透30分鐘，并再次用PBS漂洗。用每孔200pL的PBS+10%熱失活胎牛血清的混合物(封閉液)，將孔置于振動器上于室溫下封閉1小時或4°C下過夜，隨后用每孔50|iL的病毒核蛋白的抗體(MAb庫(pool)5,USBiological17650-04A)處理1小時，所述抗體在封閉液中按1:1000進行了稀釋。通過用TBS(Tris緩沖鹽)+0.1%Tween進行三次5分鐘洗滌，除去抗體。隨后每孔用50pL與辣根過氧化物酶偶聯(lián)的抗小鼠二抗孵育l小時，所述二抗在封閉液中按1:2000進行了稀釋。在室溫下，將平板置于振動器中，用TBS/0.1%Tween洗滌三次，并用TBS洗滌一次。步驟4:成^f象除去最后一次洗滌液后，向樣"滴定孔填充50|iiL底物溶液(SuperSignalWestDura,Pierce34076),所述溶液僅在使用前通過混合等體積的兩種組分制備。隨后將平板置于CCD相機LAS3000(Fuji/Raytest)的菲涅耳鏡頭架中(Fresnellenserack),并以高分辨率曝光10分鐘。步驟5:檢測結果的定量以密度計量的方式評估圖像。首先，減去背景(孔a,參閱上文)。如下計算密度計量強度I=/1.75其中i定義為測量的相關孔b、c或d的每一面積的強度的10000倍。這種計算對應于經(jīng)典的空斑檢測。因數(shù)表示單個值的加權。結果表示為如下定義的％抑制。%抑制=100-%對照其中％對照通過受試化合物的給定I乘以100再除以適當對照溶劑的I進行計算。如果I是對照或?qū)φ杖軇?，則將其值設置為100%。對一系列不同濃度的受試化合物進行這種定量檢測結果的評估，如100pM、50pM、25pM、10^M、2.5pM、0.25]uM、0.1^M,由此確保在這種系列中所用的最高濃度是無毒的，如在ICso/IC90評估前，利用MDCKII細胞在毒性檢測中所評估的。每個濃度的值是三次重復實驗的平均值。基于提供ICso和IC9o值的4種參數(shù)邏輯函數(shù)，利用Sigmaplot9.0(SystatSoftwareInc.)軟件，處理獲得的劑量應答結果。結果各種膽固醇胺在PR8(H1N1)病毒復制檢測(作為流感感染的細胞模型)中表現(xiàn)出強烈的抑制作用。特別是，化合物la-ll、2a和2b產(chǎn)生了良好的結果(表l)。在不受限于理論的情況下，看起來膽固醇支架與附著于甾族A環(huán)(膽固醇胺和其衍生物)或是甾族A環(huán)一部分(氮雜膽甾烷(azacholestanes)、氮雜類膽齒烷(azahomocholestanes)或其書f生物)的氨基官能團的組合是導致病毒復制抑制的結構基元。相反，當以10、20和50pM的濃度檢測時，膽固醇硫酸酯沒有抑制病毒的復制，而50iiM或更高濃度時，觀察到毒性。在檢測條件下表現(xiàn)負電荷功能的3j8-乙醇酸，以及顯示附著于膽固醇核心結構的A環(huán)的氮原子的3-肟基膽甾垸，在本文所述的檢測環(huán)境中，都沒有抑制作用。此外，3-酮-4c0ce-膽甾烷二醇(IC5016.0luM)和3)8，4c0O!-膽甾烷三醇(IC5()16.1^iM)在用作流感感染疾病^t型的病毒復制檢測中提供了微弱的功效。看起來位于甾族A環(huán)處的強極性不足以提供抗病毒活性。而且，氨基官能團的存在看起來是獲得化合物的特定高活性所必須的。然而，反式-2-氨曱基-l-環(huán)己醇未表現(xiàn)出任何抑制作用。這證明，附著于環(huán)式碳水化合物基元的氨基部分或氨基醇部分不是抗流感活性的唯一原因。表1:病毒復制結果(本文提供的實例的ICso和ICo。值)化合物ic50[,IC90[,la1.79.0lb1.916.2lc3.317.5ld3.715.1le3.517,0lf8.611.4lg4.762.0lh4.011.6li3.79.8lj3.125.1lk2.113.4115.310.12a3.39.72b5.930,1如本文呈現(xiàn)的數(shù)據(jù)所證明的，化合物la-ll是在流感感染中用于藥物干預的優(yōu)選化合物。這些化合物中的8種化合物，即la、lb、lg、lh、li、lj、lk和2a，在流感病毒復制檢測中都提供了特別好的結果。此外這些化合物在溶解度測試和治療指數(shù)中都表現(xiàn)出良好結果。膽固醇胺在極性介質(zhì)中的溶解度隨著附著于甾族A環(huán)的氫原子被羥基功能團取代的增加而增加，以致溶解度的增加彌補了功效的輕度降低，這可導致生物利用率的增加。就此而論，化合物lg和li是用于治療病毒感染特別是流感感染的優(yōu)選的分子實體。實施例16:抗菌活性檢測本檢測的目的是鑒定具有抗結核活性的化合物，如利用結核分枝桿菌H37Rv林作為肺結核的疾病模型所評估的。如下文所述，評估抗菌檢測中的功效(MIC9。)，并將其與哺乳動物Vrero細胞的毒性進行比較。用作有氧復制檢測的微孔板AlamarBlue檢測(MicroplateAlamarBlueAssay,MABA)如文獻(Collins,Antimicrob.AgentsChemother.41(1997)1004—1009;Franzblau,J.Clin.Microbiol.36(1998),362-366;Pauli,LifeSci.78(2005),485)所述，進行受試化合物對結核分枝桿菌H37Rv生長抑制的測定。抑制百分比定義為l-(受試孔熒光單位/僅含細菌的三個重復孔的平均熒光單位)xl00。認為實現(xiàn)30%抑制的最低藥物濃度是MIC,本文顯示的值是三次重復實驗的平均值。用作非復制持久性4企測(non-replicatingpersistenceassay)的J氐氧恢復檢測(LowOxygenRecoveryAssay,LORA)非復制持久性(non-replicatingpersistence,NRP)的生理狀態(tài)在許多細菌感染中導致了抗菌耐性。在肺結核中，為了縮短6個月的治療方案，必須輩巴向這種NRP亞群。如文獻(Cho，S.H.;Antimicrob.AgentsChemother.2007,51(4),1380-1385)所述，用高通量、基于熒光的低氧恢復檢測(lowoxygen-recoveryassay,LORA)篩選抗NRP或穩(wěn)定期的結核分枝桿菌的受試化合物。結核分枝桿菌H37RV，其含有攜帶驅(qū)動細菌熒光素酶基因的乙酰胺酶啟動子的質(zhì)粒，通過在發(fā)酵罐中延長培養(yǎng)，適應低氧條件，并測定在無氧條件下維持10天的孩i孔板培養(yǎng)物的MIC9Q。如對NMBA所測定的一樣，測定抑制百分比。細胞毒活性測定利用Vero細胞評估受試化合物的細胞毒活性，如以前所述(Cantrell,JNat.Prod.59(1996),1131-1136)，利用CellTiter96水性非放射性細胞增歹直才企測(CellTiter96aqueousnon-radioactivecellproliferationassay,PromegaCorp.,Madison，WI)進行。在化合物顯示活性的濃度范圍內(nèi)，未觀察到毒性。結果當利用上文討論的MABA作為結核分枝桿菌感染模型評估各種膽甾烷和膽甾烯的抑制作用時，發(fā)現(xiàn)，用于本發(fā)明的膽固醇胺衍生物也抑制細菌的生長。例如，化合物la,If,lh,li，2a和2b提供了令人滿意的結果(表2)。膽甾烷支架與附著于甾族A環(huán)的氨基官能團的組合是抑制分枝桿菌生長特別是結核分枝桿菌生長的優(yōu)選結構基元。相反，當在至高100的濃度測試時，膽固醇硫酸酯或反式-2-氨曱基-環(huán)己醇未對分枝桿菌提供相應的作用。也發(fā)現(xiàn)，將氨基部分并入甾族A環(huán)產(chǎn)生了氮雜膽固醇衍生物，如MABA檢測例證的(表2),其有效抑制細菌生長。因此，膽甾烷支架與并入膽甾A環(huán)或并入具有擴張的或收縮的A環(huán)的類似衍生物的氮的組合，是用于抑制分枝桿菌生長特別是結核分枝桿菌生長的優(yōu)選的結構基元，這點已由化合物2a和2b進行了例證。表2本文提供的實例對結核分枝桿菌(菌株H37Rv)復制的抑制化合物MIC90MABAMIC90[jiMLORAIf1.33.01li2.62.73lh1.52.63la2.51.332.821.512b3.015.03化合物la、lf、lh、li,2a和2b是分枝桿菌疾病特別是肺結核藥物干預的優(yōu)選化合物。這些化合物中的2種化合物，即化合物lf和lh在分枝桿菌檢測中提供了特別令人滿意的結果，這已由非常低的MIC90值所證明。因此，化合物lf和lh代表了用于治療如同肺結核的分枝桿菌疾病的藥物組合物中的甚至更優(yōu)選的化合物。當評估受試化合物靶向持久的細菌亞群的功效時，發(fā)現(xiàn)化合物la和2a在L0RA模型中提供了特別令人滿意的結果。因此，化合物la和2a代表了用于治療持久性結核分枝桿菌表型的藥物組合物中的特別優(yōu)選的化合物。權利要求1.下式1的化合物或者其藥學上可接受的鹽、衍生物、溶劑化物或前藥在制備用于治療、預防和/或改善傳染性疾病/病癥的藥物組合物中的用途，其中R1、R2、R3、R4和R5中之一是選自X(CH2)nNH2、X(CH2)nNH(C1-4烷基)、X(CH2)nN(C1-4烷基)2、X(CH2)nN(C1-4烷基)3+的含胺基團；X是化學鍵或選自OP(O)(OC1-4烷基)O、OP(O)(O-)CH2O或OP(O)(OC1-4烷基)CH2O的含磷基團；當X是化學鍵時，n是從0到2的整數(shù)；當X是含磷基團時，n是從2到6的整數(shù)；當R5是含胺基團時，則R1、R2、R3和R4獨立地是H或OH；且R6是H，或者，當X是化學鍵且n是1或2時，R6也可以是OH；id="icf0002"file="A2007800453220002C2.tif"wi="6"he="1"top="195"left="43"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>是單鍵或雙鍵，其中當id="icf0003"file="A2007800453220002C3.tif"wi="6"he="1"top="195"left="100"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>是雙鍵時，沒有R4；當R1是含胺基團時，則R2和R6獨立地是H或OH；R3、R4和R5是H；且id="icf0004"file="A2007800453220002C4.tif"wi="6"he="1"top="228"left="43"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>是單鍵；當R2是含胺基團時，則R3和R6獨立地是H或OH；R1、R4和R5是H，且id="icf0005"file="A2007800453220003C1.tif"wi="6"he="1"top="34"left="39"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>是單鍵；當R3是含胺基團時，則R2和R6獨立地是H或OH；R1、R4和R5是H，且id="icf0006"file="A2007800453220003C2.tif"wi="6"he="1"top="67"left="39"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>是單鍵。2.如權利要求l所述的用途，其中，^是單鍵。3.如權利要求1或2所述的用途，其中，115是含胺基團；X是化學鍵；R1、R2、R3和R4獨立地是H或OH;且R6是H。4.如權利要求1或2所述的用途，其中，Rs是所述含胺基團；X是所述含磷基團；R1、R2、W和I^獨立地是H或OH;且RS是H。5.如權利要求1所述的用途，其中，所述式1的化合物為下述式la到ll中之一的化合物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>6.下述式2的化合物或者其藥學上可接受的鹽、衍生物、溶劑化物或前藥在制備用于治療、預防和/或改善傳染性疾病/病癥的藥物組合物中的用途，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中Y是NH、N(d—4烷基)或N(d-4烷基)2+;p是從0到2的整數(shù)；q是l或2的整凄t;以及—_=是單鍵或雙鍵。7.如權利要求6所述的用途，其中，Y是NH。8.如權利要求6或7所述的用途，其中，p是0且q是2。9.如權利要求6所述的用途，其中，所述式2的化合物為下述式2a和2b中之一的化合物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>10.如權利要求1-9中任一項所述的用途，其中，所述的傳染性疾病/病癥是由病毒或細菌引起的。11.如權利要求10所述的用途，其中，所述的病毒選自流感病毒、HIV、肝炎病毒(曱、乙、丙、丁)、輪狀病毒、呼吸道合胞病毒、皰疹病毒科(Herpetoviridae，例如，單純皰滲病毒、愛潑斯坦-巴爾病毒)、埃可病毒l、麻滲病毒、小核4唐核酉交病毒^KPicomaviridae，例:^，腸道病毒、柯薩奇病毒)、絲狀病毒科(Filoviridae，例如，埃博拉病毒、馬爾堡病毒)、乳頭瘤病毒科(Papillomaviridae)和多瘤病毒科(Polyomaviridae)。12.如權利要求10所述的用途，其中，所述的細菌選自革蘭氏陽性桿菌、革蘭氏陽性球菌、革蘭氏陰性桿菌和革蘭氏陰性球菌。13.如權利要求12所述的用途，其中，所述的革蘭氏陽性桿菌選自梭菌屬的種類(C7ostnW謂spp.)、炭疽芽孑包桿菌(5鎖7/w51朋Ara"'51)、豬丹毒桿菌(五o^》e/c^n'xr/mw'opW/z/ae)、單核細胞增生李斯特菌mowo(qytogewes)、i若卡氏菌屬的種類(7Voca/^aspp.)、白喉桿菌(Co^yweZ)aCen.imz^^/^Aen'ae)和癡皰丙酸4干菌(/Vc77z'owz'6ac化nY/macwes)。14.如權利要求12所述的用途，其中，所述的革蘭氏陽性球菌選自金黃色葡萄王求菌(iStop/^/ococcws(3wrews)和《連王求菌屬的種類(5^e;tococcw51s卯.)。15.如權利要求12所述的用途，其中，所述的革蘭氏陰性桿菌選自大腸桿菌(五化Aehc/n'aco/Z)、幽門螺桿菌(//e/z'o^c&r/7_y/on〕、布魯氏菌屬的種類C8rwce〃flspp.)、嗜水氣單月包菌(Jera附o"aw/>^/rap/7a)、志賀氏桿菌屬的種類(幼/^//"spp.)、弧菌屬的種類(^jn'ospp.)、鼠疫耶爾森氏菌(!^raz'm-a/7^to)、沙門氏菌屬的種類(Sa/mowe〃as;p.)、月申炎克雷伯菌(A7eZm'e〃a/wewmom'ae)、；羊蔥W白克霍《急菌(5i/rA:AozV/er/ace/ada)、腸4干菌屬的種類C&2fera^"erspp.)、綠膿桿菌spp.)、空腸彎曲桿菌(Campy/oZ)acfer乂e乂wm〕和口耆月申軍團沖干菌(丄eg7'owe〃apwewmo/7/n7fl)。16.如權利要求12所述的用途，其中，所述的革蘭氏陰性球菌選自淋病奈瑟氏球菌(jVe/驚r/fl禾口卡他莫拉菌(Moraxe〃a17.如權利要求10所述的用途，其中，所述的細菌選自疏螺旋體屬的種類(5o^re/z'aspp.)、五日熱巴爾通體(5wtowe〃a^w力towa)、肺炎衣原體(C7/a柳j^/zVz/wewmowZae)、纟吉斗亥分才支沖干菌(A(ycoZaCen'Mm^/Zercw/as7^)、牛分^支坤干菌(Afyco6acten,w附Z)ov&)、麻風分沖支一干菌(^fycoZacten.t/附fe/rae)、潰癡分沖支^干菌(AfycoZ)flCen'w附w/cera"力、堪薩斯分沖支斥干菌(Afyco6a"e〃.w附A:a"asflw/Z)、鳥分斗支斥干菌(聊co6flcten'M附"v/wm)、Sll纟吉才亥分4支#干菌(Afyco6acten.謹/ara,MZjercw/c^)、淋巴結核分枝軒菌(AfycoZ)"c^7't/附scra/w/(2ceam)、立克次氏體屬的種類(i/cA^加'aspp.)和密螺J走體菌屬的種類(r邵o"柳aspp.)。18.如權利要求11所述的用途，其中，所述的化合物具有式la、lb、lg、lh、li、lk、lj或2a,且所述的藥物組合物用于治療、預防和/或改善流感感染。19.如權利要求17所述的用途，其中，所述的化合物具有式la、lf、lh、li、2a或2b,且所述的藥物組合物用于治療、預防和/或改善分枝桿菌誘發(fā)的疾病。20.如權利要求19所述的用途，其中，所述的分枝桿菌誘發(fā)的疾病選自肺結核、麻風病、熱帶皮膚潰瘍、膿肺、肺病或皮膚和散播型疾病。全文摘要本發(fā)明涉及膽固醇胺在制備藥物組合物中的用途。這些藥物組合物用于傳染性疾病尤其是病毒或細菌所引起的疾病的醫(yī)學干預。文檔編號A61K31/575GK101600429SQ200780045322公開日2009年12月9日申請日期2007年12月7日優(yōu)先權日2006年12月8日發(fā)明者喬治·斯拉查丁珍,托比亞斯·布拉克斯梅,漢斯-約阿基姆·諾爾克,科爾內(nèi)利亞·施羅德,薩米爾·阿加瓦爾申請人:哈多技術有限公司;德累斯頓科技大學