專利名稱：：具有抗菌活性的對(duì)映體化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及抑制細(xì)菌甲硫氨酰-tRNA合成酶(MetRS)的雙環(huán)雜芳族化合物的新對(duì)映體并涉及用于制備它們的方法及它們作為抗菌藥在治療中的用途。此夕卜，本發(fā)明涉及這些對(duì)映體化合物在治療基于艱難梭菌(C/o欲W"m^^/fe)的感染和疾病中的用途。
背景技術(shù)：
：隨著"病菌"造成人類疾病的認(rèn)識(shí)，對(duì)抗菌藥物的探究始于19世紀(jì)晚期。在過去一個(gè)世紀(jì)中，科學(xué)家們己經(jīng)開發(fā)了用于靶向和抑制眾多菌株的多種藥物。尤其，開發(fā)了稱作抗生素的抗菌藥，并且它們?cè)诠I(yè)化世界各處中廣泛應(yīng)用以治療大多數(shù)已知的細(xì)菌感染。最初，抗生素如青霉素通過阻斷肽基轉(zhuǎn)移酶(一種負(fù)責(zé)構(gòu)筑細(xì)菌細(xì)胞壁的酶)的作用而抑制細(xì)菌復(fù)制。然而，由于濫用及多種菌株的耐藥性適應(yīng)，多種抗生素已經(jīng)部分或全部地喪失其在治療感染中的效力。靶向分子生長(zhǎng)新機(jī)制的一系列抗菌藥物將用于避免進(jìn)一步增強(qiáng)抗生素耐藥性。此類靶標(biāo)之一是tRNA合成酶。tRNA合成酶參與蛋白質(zhì)的生物合成，從而預(yù)期對(duì)其抑制可以導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)停止。因此，例如，化合物莫匹羅星已經(jīng)證實(shí)是異亮氨酰tRNA合成酶的抑制劑。莫匹羅星由生物熒光假單胞菌(/^e"必mo"m^MowsceZ附)產(chǎn)生，并且是在GlaxoSmithKline銷售的產(chǎn)品Baetroban⑧中作為活性成份使用的抗菌藥。每一種tRNA合成酶代表用于發(fā)現(xiàn)藥物的獨(dú)立耙。如此的tRNA合成酶抑制劑因有用作抗菌藥的潛能而具有重大治療價(jià)值，其中所述的tRNA合成酶抑制劑對(duì)細(xì)菌細(xì)胞的選擇性勝于對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的選擇性。革蘭氏陽性生物-金黃色葡萄球菌(5:aMre"s)中的tRNA合成酶基因的序列最近已經(jīng)測(cè)定(例如見SmithKlineBeecham關(guān)于金黃色葡萄球菌MetRS的歐洲專利申請(qǐng)?zhí)?7300317.1)，因而有助于鑒別抑制劑的方法。此外，其它致病菌(例如革蘭氏陰性生物-流感嗜血桿菌(i/./^7wewz^))中的tRNA合成酶基因的序列也已經(jīng)發(fā)表(R.D.Fleischmann等，Science,269，496-512,1995)。最近已經(jīng)有人披露了幾種化合物對(duì)于MetRS的抑制活性及作為抗菌藥的潛能。具體而言，Jarvest等描述了顯示某種程度MetRS抑制作用的多種雙環(huán)雜芳族化合物，包括一種特殊化合物，該化合物是具有左旋四氫喹啉化合物的R構(gòu)型的對(duì)映體((Bioorg.&Med.Chem.Lett.14(2004)3937-3941)。一種特別令人感興趣的細(xì)菌靶標(biāo)是生物艱難梭菌(C7oWn^"md驕a7e，C.d驕"7e)。艱難梭菌正變成更普遍的傳染源，其中三分之一的健康個(gè)體是該種生物的攜帶者(Bartlett和Peri，N.Eng.JMed.，353，2503-2505，2005;Clabots等，JInfect，Dis.,166，561-567，1992;McFarland等，N.EnglJMed.，320，204-210，1989)。感染和患病風(fēng)險(xiǎn)在免疫缺陷者、老人尤其護(hù)理環(huán)境(例如養(yǎng)老院、醫(yī)院、醫(yī)生診所)中的老人中變得日益普遍。傳統(tǒng)抗菌藥物幾乎不在治療艱難梭菌表現(xiàn)出前景，實(shí)際上僅萬古霉素經(jīng)FDA批準(zhǔn)用于治療艱難梭菌相關(guān)性腹瀉(CDAD)。因此，本領(lǐng)域中需要獲得治療基于艱難梭菌的感染的額外方法，尤其是避免常規(guī)抗生素治療并且因而避免抗生素耐藥性的療法。在這種背景下發(fā)現(xiàn)了本發(fā)明。發(fā)明詳述本發(fā)明提供用作細(xì)菌甲硫氨酰-tRNA合成酶(MetRS)的強(qiáng)效抑制劑的新化合物。證實(shí)本發(fā)明的化合物作為針對(duì)多種革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的抗菌藥具有廣泛的適用性。MetRS抑制劑針對(duì)革蘭氏陽性生物具有最佳活性，而針對(duì)革蘭陰性生物的活性則弱得多。尤其，證實(shí)本發(fā)明的化合物具有針對(duì)艱難梭菌的出乎意料強(qiáng)效的抗菌活性。本發(fā)明的化合物是新的雙環(huán)雜芳類對(duì)映體，所述對(duì)映體對(duì)細(xì)菌MetRS顯示出乎意料且強(qiáng)效的抑制作用。這些化合物很少或不顯示對(duì)哺乳動(dòng)物MetRS的抑制作用。本發(fā)明的化合物作為抗菌藥用于治療。尤其，本發(fā)明的化合物顯示針對(duì)革蘭氏陽性菌并且尤其針對(duì)艱難梭菌的出乎意料的強(qiáng)效。本發(fā)明提供式(I)的化合物:其中Ar是右手側(cè)(RHS)取代基并且具有取代或未取代的芳基或雜芳基；X選自由NH、O、S、SO、S02或CH2組成的組；n是1、2或3;*表示不對(duì)稱碳原子，其中當(dāng)n是2或3時(shí)，貝^是R構(gòu)型；其中當(dāng)n是1且X是CH2時(shí)，貝^是R構(gòu)型；并且其中當(dāng)n是1且X選自由NH、O、S、SO或S02組成的組時(shí)，貝ip是s構(gòu)型。m是0、1、2、3或4;并且R1獨(dú)立地選自鹵素、氰基、羥基、(C,-6)烷基(任選地由鹵素、羥基、氨基、羧基或(CL6)烷氧羰基取代)、((:3.7)環(huán)烷基、(d，6)烷氧基、氨基、單-或雙-(C,-6)烷基氨基、?；被?、羧基、(Q-6)垸氧羰基、羧基(CL6)烷氧基、(C"6)烷硫基、(d,6)烷基亞磺?；?、(cl6)烷基磺?；?、氨磺酰、単-和雙-(Cl6)烷基氨磺酰、氨基甲?；?、單-和雙-(cl6)烷基氨基甲?；碗s環(huán)。本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案是式(IIa)和(IIb)的化合物X選自由NH、O、S、SO、S02或CH2組成的組；n是1、2或3;*表示不對(duì)稱碳原子，其中當(dāng)n是2或3時(shí)，貝lp是R構(gòu)型；其中當(dāng)n逢,其中:是l且X是CH2時(shí)，則t是R構(gòu)型；并且其中當(dāng)n是l時(shí)且X選自由NH、O、S、SO或S02組成的組時(shí)，貝I戶是S構(gòu)型；R1獨(dú)立地選自卣素、氰基、羥基、(C,-6)烷基(任選地由卣素、羥基、氨基、羧基或(Q-6)烷氧羰基取代)、(Cw)環(huán)烷基、(Cw)垸氧基、氨基、單-或雙-(CL6)烷基氨基、?；被?、羧基、(CL6)烷氧羰基、羧基(CL6)垸氧基、(CK6)垸硫基、(d.6)烷基亞磺酰基基、(d.6)垸基磺酰基、氨磺酰、單-和雙-(C,-6)垸基氨磺酰、氨基甲?；?和雙-(CL6)垸基氨基甲?；碗s環(huán)；m是0、1、2、3或4;p是0、1、2或3;W獨(dú)立地選自鹵素、氰基、羥基、(Cw)垸基(任選地由鹵素、羥基、氨基、羧基或(CL6)烷氧羰基取代)、(Cw)環(huán)烷基、(d-6)垸氧基、氨基、單-或雙-(C^)垸基氨基、?；被?、羧基、(Cw)烷氧羰基、羧基(C,-6)垸氧基、(d-6)烷硫基、(C^6)烷基亞磺?；?、(CL6)烷基磺?；被酋！g-和雙-(Cl6)焼基氨磺酰、氨基甲酰基、單-和雙-(Q》垸基氨基甲酰基和雜環(huán)；并且當(dāng)Z,是S時(shí)，Z2和Z3是CH;當(dāng)Z2是S時(shí)，Z,和Zs是CH;并且當(dāng)Z3是S時(shí)，Zt和Z2是CH。式(IIa)和式(IIb)的化合物是手性非外消旋的，并且可分離為高對(duì)映體過量的其R或S構(gòu)型。在一些實(shí)施方案中，式(II)的化合物含有至少有60%對(duì)映體過量的R對(duì)映體或S對(duì)映體，并且可以是對(duì)映體純的，其中所述化合物基本上100%是單一對(duì)映體(如由旋光度、手性HPLC所測(cè)量，或基于重量/重量所測(cè)量)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的對(duì)映體化合物具有R構(gòu)型或S構(gòu)型。一組優(yōu)選的式(IIa)和式(IIb)化合物是這樣的化合物，其中所述式的左手側(cè)(LHS)如同式(III)和式(IV)中所顯示那樣，而所述式的右手側(cè)(RHS)(或Ar)是噻吩并吡啶酮基團(tuán)(式III)或喹諾酮基團(tuán)(式IV):其中-X如式(IIa)和(IIb)中所定義。R1如式(IIa)和(IIb)中所定義。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，(R')m可以進(jìn)一步定義為在所述環(huán)上的第6、8位取代，其中它們可以是相同或不同的取代基，并且優(yōu)選是溴、氯、碘或硫烷；m如式(na)和(IIb沖所定義；rz如式(IIa)和(IIb)中所定義；和P如式(IIa)和(IIb)中所定義。如上所述，式(III)和(IV)的特征是以星號(hào)(*)標(biāo)注的不對(duì)稱碳原子。包圍該碳原子的鍵產(chǎn)生式(ni)或(iv)的化合物中的r構(gòu)型。式(m)或(iv)的化合物通常是手性非外消旋的，并且可以分離為高對(duì)映體過量的R對(duì)映體。在一些實(shí)施方案中，式(III)或(IV)的化合物含有至少60%的R對(duì)映體，并且可以是對(duì)映體純的，其中所述化合物基本上10(P/。是R構(gòu)型(如由旋光度、手性HPLC或重量所測(cè)量)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，具有式(m)或(iv)的化合物均處于R構(gòu)型。另一組優(yōu)選的式(IIa)和式(IIb)化合物是這樣的化合物，其中所述式的LHS是二氫苯并呋喃基團(tuán)，并且所述式的RHS是噻吩并吡啶酮基團(tuán)(式IV):其中R1如式(IIa)和(IIb)中所定義。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，(R')m可以進(jìn)一步定義為在所述環(huán)上的第5、7位取代，其中它們可以是相同或不同的取代基，并且優(yōu)選是溴、氯、碘或硫烷；m如式(IIa)和(IIb)中所定義；W如式(IIa)和(IIb)中所定義；并且如上所述，式(V)的特征是以星號(hào)("標(biāo)注的不對(duì)稱碳原子。包圍該碳原子的鍵產(chǎn)生S構(gòu)型。式(V)的化合物通常是手性非外消旋的，并且可以分離為高對(duì)映體過量的S對(duì)映體。在一些實(shí)施方案中，式V)的化合物含有至少60%的S對(duì)映體，并且可以是對(duì)映體純的，其中所述化合物基本上100%是S構(gòu)型(如由旋光度或重量所測(cè)量)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，具有式(V)的化合物均處于S構(gòu)型。幾種優(yōu)選的本發(fā)明化合物包括實(shí)施例1-12的化合物。尤其，本發(fā)明的優(yōu)選化合物包括式VI-XI的化合物(下文所示并且參見表1):5-[3-((R)(-)-5,7-二溴-1，2，3,4-四氫-萘-1-基氨基)-丙氨基]-4H-噻吩并[3,2-6]吡啶-7-酮(式VI);5畫[3-((R)(+)-8-溴-6-氯-苯并二氫吡喃-4-基氨基)-丙氨基]-4H-噻吩并[3,2-6]吡啶-7-酮(式VII);5-[3-((R)(+)-M-二溴-l，2，3，4-四氫-喹啉-4-基氨基)-丙氨基]-4H-噻吩并[3，2-6]吡啶-7-酮(式VIII);5-[3-((R)(+)-6，8-二溴-苯并二氫吡喃-4-基氨基)-丙氨基]-4H-噻吩并[3，2-6]吡啶-7-酮(式IX);2-[3-((R)(+)-6，8-二溴-苯并二氫吡喃-4-基氨基)-丙氨基]-lH-喹啉-4-酮(式X);5-[3-((S)-5，7-二溴-苯并呋喃-3-基氨基)-丙氨基]-4H-噻吩并[3,2-6]吡啶-7-酮(式XI)。表1提供本文中所述化合物的總結(jié)，顯示了LHS(左手側(cè))和RHS(右手側(cè))官能團(tuán)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>鹽可以通過無機(jī)酸和有機(jī)酸形成。從中可以形成式(I-XI)化合物的可藥用鹽的適合無機(jī)酸和有機(jī)酸的代表性實(shí)例包括順丁烯二酸、反丁烯二酸、苯甲酸、抗壞血酸、雙羥萘酸、琥珀酸、雙亞甲基水楊酸、甲磺酸、乙二磺酸、乙酸、丙酸、酒石酸、水楊酸、檸檬酸、葡萄糖酸、天門冬氨酸、硬脂酸、棕櫚酸、衣康酸、乙醇酸、對(duì)氨基苯甲酸、谷氨酸、苯磺酸、鹽酸、氫溴酸、硫酸、環(huán)己氨磺酸、磷酸和硝酸。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語"烷基"以及相似術(shù)語(如"烷氧基")包括全部的直鏈和支鏈異構(gòu)體。烷基的代表性實(shí)例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、正戊基和正己基。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語"烯基"以及術(shù)語"炔基"包括全部的直鏈和支鏈異構(gòu)體。其代表性實(shí)例包括乙烯基、乙炔基和l-丙炔基。用于烷基和烯基的優(yōu)選取代基包括，例如并且除非另有定義，鹵素、氰基、疊氮基、硝基、羧基、(d-6)烷氧羰基、氨基甲?；?或雙-(C,-6)垸基氨基甲?；?、磺基、氨磺酰、單-或雙-(CL6)垸基氨磺酰、氨基、單-或雙-(CL6)烷氨基、酰基氨基、脲基、(d-6)垸氧羰基氨基、2，2,2-三氯乙氧基羰基氨基、芳基、雜環(huán)基、羥基、(Cw)垸氧基、酰氧基、橋氧基、?；?、2-噻吩酰基(thienoyl)、(C一垸硫基、(CL6)烷基亞磺?；?、((^.6)烷基磺?；?、肟基、(CL6)垸氧亞氨基、聯(lián)氨基、亞聯(lián)氨基、苯甲醛肟基(benzohydroximoyl)、胍基、脒基和亞氨基烷基氨基。當(dāng)在本文中使用時(shí)，除非另外定義，術(shù)語"芳基"包括任選地由至多到5個(gè)、優(yōu)選至多到3個(gè)取代基取代的苯基或萘基。在被取代時(shí)，芳基可具有至多到4個(gè)取代基。用于芳基的優(yōu)選取代基包括，例如并且除非另外定義:鹵素、氰基、(Cu6)烷基、單氟至全氟的(d.3)垸基、(Cw)環(huán)垸基、(<^.6)烯基，(d-6)烷氧基、(02_6)鏈烯氧基、芳基(C,.6)烷氧基、鹵素(CL6)垸基、羥基、氨基、單-或雙-(Cw)烷氨基、?；被?、硝基、羧基、(C,-6)垸氧羰基、(d-6)鏈烯氧基羰基、(d-6)垸氧羰基(d-6)烷基、羧基(CL6)烷基、(CL6)垸基碳酰氧基、羧基(CL6)烷氧基、(CL6)垸氧羰基(CK6)垸氧基、(C,-6)垸硫基、(d-6)烷基亞磺酰基、(Cw)烷基磺?；?、氨磺酰、單-和雙-(CL6)-烷基氨磺酰、氨基甲酰基、單-和雙(CL6)垸基氨基甲?；半s環(huán)基。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語"雜芳基"包括在環(huán)中含有選自氧、氮和硫的至多到4個(gè)雜原子的單環(huán)或稠環(huán)。優(yōu)選地，所述雜芳環(huán)包含4-7個(gè)、優(yōu)選地5-6個(gè)環(huán)原子。稠雜芳環(huán)系可以包括碳環(huán)，并且僅需要包括l個(gè)雜環(huán)。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語"雜環(huán)"包括在環(huán)中含有選自氧、氮和硫的至多到4個(gè)雜原子的芳族和非芳族單環(huán)或稠環(huán)。適宜地，所述雜環(huán)包含4-7個(gè)、優(yōu)選地5-6個(gè)環(huán)原子。稠雜環(huán)系可以包括碳環(huán)，并且僅需要包括1個(gè)雜環(huán)。在被取代時(shí)，雜芳基或雜環(huán)基可以具有至多到3個(gè)取代基。優(yōu)選的取代基包括先前對(duì)芳基以及橋氧基提到的那些取代基。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語"鹵素"和"鹵代"分別包括氟、氯、溴和碘，以及氟代、氯代、溴代和碘代。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語"對(duì)映體"指這樣兩種化合物之一，其中所述的兩種化合物在手性上不同并且稱為具有對(duì)映體關(guān)系。為了將一種對(duì)映體轉(zhuǎn)換成另一種對(duì)映體，需要使鍵斷裂并重新形成鍵或使分子經(jīng)過平面幾何扭曲。當(dāng)某對(duì)映體的一種構(gòu)型超過另一種對(duì)映體構(gòu)型存在時(shí)，則稱該對(duì)映體處于對(duì)映體過量。對(duì)映體過量可以基于重量/重量或通過混合物的凈旋光度進(jìn)行測(cè)定。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語"(R)"或"R"以及"(S)"或"S"基于本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的命名慣例，例如，R-構(gòu)型基于化合物的實(shí)際幾何形狀，一般使用Cahn-Ingold-Prelog優(yōu)先規(guī)則對(duì)構(gòu)型分類(SmithM.B.,March,J，March'sAdvancedOrganicChemistry,第五版Wiley-Interscience，NY，2001,第139-141頁(yè))。如本文以上所述，本發(fā)明的化合物以具有R構(gòu)型或S構(gòu)型為特征。.本發(fā)明的化合物適宜地以基本上純的形式，例如，至少50%純的、適宜地至少60%純的、有利地至少75°/。純的、優(yōu)選地至少85%純的、更優(yōu)選地至少95%純的、尤其至少98%純的形式提供，其中全部百分比作為重量/重量計(jì)算。例如，本發(fā)明化合物的不純形式或純度較低形式均可以在制備更純形式的相同化合物或適于藥物用途的相關(guān)化合物(例如相應(yīng)衍生物)中使用。式(I)-(XI)的化合物可以通過本文描述的方法或者通過下文以引用方式并入的現(xiàn)有技術(shù)所述方法制備。在一個(gè)實(shí)施方案中，富含對(duì)映體的本發(fā)明化合物可以通過如方法I描述的手性分離法制備。手性穩(wěn)定期分離。iN^/、NA氨基甲酸酯去除HN^N>所需化合物根據(jù)2007年9月11日提交的名為"SubstitutedThienopyridoneCompoundswithAntibacterialActivity"的美國(guó)專禾伸請(qǐng)系列號(hào)11/853,314中所述方法制備為外消旋混合物。所述外消旋物然后通過手性固相色譜法分離。所述外消旋物轉(zhuǎn)變成氨基甲酸酯官能性如叔丁氧羰基(Boc)，作為促進(jìn)手性分離的方法?；衔锏耐庀旌衔镌诩褐獥l件下用THF中的氫化鈉和Boc-酐進(jìn)行Boc保護(hù)(方法I中的氨基甲酸酯形成)。這種Boc-保護(hù)的外消旋混合物然后通過制備型手性色譜法(prep-HPLC)分離成單一對(duì)映體，隨后分離出對(duì)映體(見方法I中的手性分離法)。隨后將分離的對(duì)映體脫保護(hù)(見方法I中的氨基甲酸酯去除)，以產(chǎn)生嵩度富含對(duì)映體形式的最終化合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，富含對(duì)映體的本發(fā)明化合物可以通過如方法II中描述的催化性不對(duì)稱合成法制備。方法II<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>H乂H還原性胺化H義H所需的化合物通過使酮經(jīng)催化性不對(duì)稱轉(zhuǎn)移氫化成醇，隨后經(jīng)中間疊氮化合物轉(zhuǎn)變成胺而制備為富含對(duì)映體的形式。還原性胺化和除去保護(hù)基方法I<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>團(tuán)可產(chǎn)生最終化合物。本發(fā)明的化合物具有針對(duì)一系列重要致病菌的活性，其中所述的重要致病菌包括革蘭氏陽性生物，如葡萄球菌屬CSto//9;foax^)例如金黃色葡萄球菌OxfordOS.fl^e^Oxford)和凝固酶陰性葡萄球菌菌株如表皮葡萄球菌(5".e/!'afe/7mW";鏈球菌屬(5^e/tococc/)如化膿鏈球菌(5".;yoge"as)ATCC19615和肺炎鏈球菌R60S./"ewmo"z'aeR6);梭菌屬(C7o^Ww/w)如艱難梭菌孢子，以及腸球菌屬(五"teracocc/)如糞腸球菌10&/^^/&1)和屎腸球菌(五./^d腦)。優(yōu)選地，本發(fā)明的化合物也具有針對(duì)革蘭氏陰性生物的活性，其中所述的革蘭氏陰性生物例如是嗜血桿菌屬(Z/flemo;M""如流感嗜血桿菌Ql(//./"ywe"加eQl);莫拉菌屬(Moraxe/to)如卡他莫拉菌1502(Mcata^r/wto1502);螺桿菌屬(7/e//co6acfer)如幽門螺桿菌(//./^/on〕ATCC700824;和埃希氏菌屬CEsc/2er/cM7)如大腸桿菌DC0(￡.Co//DC0)。本發(fā)明最優(yōu)選的化合物具有針對(duì)以下生物的活性艱難梭菌、金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、糞腸球菌、屎腸球菌、流感嗜血桿菌、幽門螺桿菌和卡他莫拉菌。此外，本發(fā)明的化合物具有針對(duì)葡萄球菌屬生物(如金黃色葡萄球菌和凝固酶陰性葡萄球菌菌株(如表皮葡萄球菌))的活性，其中所述細(xì)菌對(duì)其它抗菌藥(如p-內(nèi)酰胺抗生素例如甲氧西林、大環(huán)內(nèi)酯類、氨基糖甙類、噁唑垸酮類(oxazolidinone)和林可酰胺類)有耐藥性(包括多重耐藥性)。本發(fā)明的化合物也具有針對(duì)糞腸球菌(包括萬古霉素耐藥菌株)的活性，并且因此可用于治療與VRE生物相關(guān)的感染。另外，本發(fā)明的化合物用于治療耐受莫匹羅星的葡萄球菌屬生物。本發(fā)明的化合物尤其有力地對(duì)抗包括艱難梭菌在內(nèi)的梭菌屬(即對(duì)其有活性)。因此，本發(fā)明的化合物可以用于治療與艱難梭菌相關(guān)的感染，例如，偽膜性腸炎、中毒性巨結(jié)腸和其它抗生素相關(guān)性腹瀉(AAD)。然而，本發(fā)明的化合物對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞無活性。這導(dǎo)致對(duì)致病菌高活性與對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞低活性或無活性的最佳組合，從而允許這些化合物用于哺乳動(dòng)物治療?？梢约右灾委煹募?xì)菌感染包括在人中的胃腸道感染、呼吸道感染、中耳炎、腦膜炎、心內(nèi)膜炎、皮膚及軟組織感染；在牛中的乳腺炎；和在家畜如豬和牛中的呼吸道感染。因此，在另一方面，本發(fā)明提供治療人或非人動(dòng)物中細(xì)菌感染的方法，所述方法包括給需要如此治療的人或非人動(dòng)物施用治療有效量的如上文定義的式(I)-(XI)化合物。本發(fā)明的化合物可以與其它已知的抗菌藥聯(lián)合施用或可以組合在一起，例如，具有式(vm)和(ix)化合物組合的療法。應(yīng)當(dāng)理解，具有廣譜抗菌活性(包括對(duì)革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的活性)的本發(fā)明化合物將廣泛在社區(qū)中用于社區(qū)獲得性感染的經(jīng)驗(yàn)療法。相比而言，具有更明確抗菌譜例如抗革蘭氏陽性菌活性的本發(fā)明化合物更有可能用于其中已鑒定到病因性致病生物的環(huán)境。本發(fā)明提供了包含式(i)-(xi)化合物與可藥用載體或賦形劑的藥用組合物。本發(fā)明還提供藥用組合物，所述組合物包含式(i)-(xi)的化合物與可藥用載體或賦形劑的組合。例如，本發(fā)明的藥用組合物可以包括式(vii)化合物和式(ix)化合物與所述載體或賦形劑的組合。本發(fā)明還提供治療哺乳動(dòng)物中、特別是人類和家畜中細(xì)菌感染的方法，所述方法包括給有需要的患者施用式(I)-(XI)的化合物或本發(fā)明的組合物。在一些實(shí)施方案中，所述細(xì)菌感染是基于梭菌屬的感染，并且常常是艱難梭菌感染。本發(fā)明另外還提供式(I)-(XI)的化合物在制備用于治療細(xì)菌感染的藥物組合物中的用途。與其它抗生素類似，可以將本發(fā)明的化合物和組合物配制成用于以任何便利的方式施用，以用于人或獸醫(yī)藥物。本發(fā)明的化合物和組合物可以配制用于任意途徑(例如口服、局部用、胃腸外或經(jīng)直腸)施用。所述組合物可以例如以片劑、膠囊、.散劑、顆粒劑、錠劑、霜?jiǎng)?、栓劑、軟膏劑、凝膠劑、洗劑、糖漿劑或液體制劑(例如溶液劑或混懸劑)的形式配制，所述組合物可以配制用于口服使用或處于無菌形式用于通過注射或輸注的胃腸外施用。用于口服施用的片劑和膠囊劑可以是單位劑型，并且可以含有常規(guī)賦形劑，所述的賦形劑包括，例如，結(jié)合劑，如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨糖醇、西黃蓍膠或聚乙烯吡咯垸酮；填充劑，如乳糖、蔗糖、玉米淀粉、磷酸鈣、山梨糖醇或甘氨酸；制片潤(rùn)滑劑，如硬脂酸鎂、滑石、聚乙二醇或二氧化硅；崩解劑，如馬鈴薯淀粉；可藥用濕潤(rùn)劑，例如十二烷基硫酸鈉。所述片劑可以根據(jù)常規(guī)制藥慣例中已熟知的方法包衣。口服液體制劑可以是以下形式，例如水質(zhì)或油質(zhì)混懸劑、溶液劑、乳劑、糖漿劑或酏劑，或可以作為使用前以水或其它適合載體重新恢復(fù)的干燥產(chǎn)品存在。該類液體制劑可以含有常規(guī)添加劑，所述的添加劑包括，例如，混懸劑，例如山梨糖醇，甲基纖維素、葡萄糖漿、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠或氫化食用脂肪；乳化劑，例如卵磷脂、失水山梨糖醇單油酸酯或阿拉伯膠；非水性載體(可以包括食用油)，例如，杏仁油、油狀酯(例如甘油)、丙二醇或乙醇；防腐劑，例如，對(duì)羥基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯或山梨酸；并且根據(jù)需要，常用增香劑和著色劑。意圖用于局部施用的本發(fā)明組合物例如可以是以下形式軟膏劑、霜?jiǎng)?、洗劑、眼膏劑、滴眼劑、滴耳劑、浸漬敷料和氣溶膠劑，并且可以含有適宜的常規(guī)添加劑，包括，例如，防腐劑、輔助藥物滲透的溶劑以及在軟膏劑、凝膠劑和霜?jiǎng)┲械能浕瘎Ｋ鼍植坑弥苿┮部梢院屑嫒菪猿Ｓ幂d體例如霜?jiǎng)┗蜍浉鄤┗|(zhì)，以及用于洗劑的乙醇或油醇。此類載體可以構(gòu)成所述制劑重量的約1%-約98%，更常見地，它們將構(gòu)成所述制劑重量的達(dá)約80%。本發(fā)明的組合物可以配制為栓劑，所述栓劑其可以含有常用栓劑基質(zhì)例如可可豆脂或其它甘油酯。意圖用于胃腸外施用的本發(fā)明組合物可以便利地采取流體單位劑型，其中所述的流體單位劑型可以使用所述化合物和無菌載體(優(yōu)選水)加以制備。根據(jù)載體和所使用的濃度，所述化合物可以懸浮在或溶解于所述載體中。在制備溶液劑時(shí)，所述化合物可以溶解在注射用水中并且進(jìn)行無菌過濾，隨后灌入適宜小瓶或安瓿，然后加以密封。有利地，可以在載體中溶解常用添加劑，所述添加劑包括例如局部麻醉藥、防腐劑和緩沖劑。為增強(qiáng)溶液的穩(wěn)定性，溶液可以在灌入小瓶之后冷凍，并且在真空下除去水；所得凍干粉末然后可以密封在小瓶中，并且可以提供附帶一小瓶注射用水以便在使用前重新恢復(fù)所述液體。胃腸外混懸劑可以按照基本上相同的方式制備，不同之處在于所述化合物混懸而非溶解在載體中并且滅菌不能由200780043263.9以通過在懸浮于無菌載體之前暴露于環(huán)氧乙烷進(jìn)行滅菌。有利地，在此類混懸液中包含表面活性劑或濕潤(rùn)劑以促進(jìn)所述化合物的均勻分布。本發(fā)明的化合物或組合物可以以抗菌有效量適宜地施用至患者。在一些情況下，本發(fā)明的化合物和組合物以抗菌有效量施用以便治療患有梭菌感染、且尤其是患有艱難梭菌感染的患者。本發(fā)明的組合物可以根據(jù)施用方法，適宜地含有0.1%-60%重量、優(yōu)選地含有10-60%重量的本發(fā)明化合物(基于所述組合物的總重量)。本發(fā)明的化合物可以按日劑量1.0-100mg/kg體重適宜地施用至患者。對(duì)于成年人(體重大約70kg)而言，可以每日施用50-3000mg、如約1500mg的本發(fā)明化合物。適宜地，成年人用劑量是每日5-40mg/kg。不過，根據(jù)正常臨床實(shí)踐，可以使用更高或更低的劑量。當(dāng)本發(fā)明的組合物作為單位劑型施用時(shí)，每個(gè)單位劑量可以適宜地包含25-1000mg、優(yōu)選為50-500mg的本發(fā)明化合物。實(shí)施例僅提供以下實(shí)施例用于說明目的，而不意于限定本發(fā)明的范圍。實(shí)施例l:合成方法(手性分離和不對(duì)稱催化合成)以下實(shí)施例和實(shí)驗(yàn)描述制備和使用本發(fā)明的方式及方法，并且是說明性而非限制性的。本發(fā)明的化合物、其鹽及其中間體，可以按照本文中所述方法或通過本化學(xué)領(lǐng)域中的多種已知方法制備或者生產(chǎn)。19方法I:通過手性分離的合成法方法I<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>方法B或Co乂n^^n力方法D或EHN^^(sTAr3(i)灘丄.(6，8-二溴-苯并二氫吡喃-4-基H3-(7-氧代-4，7-二氫-噻吩并3，2-W吡啶-5-基氨基)-丙萄-氨基甲酸叔丁酯的制備5-[3-(6,8-二溴-苯并二氫吡喃-4-基氨基)-丙氨基]-4H-噻吩并[3,2-6]吡啶-7-酮根據(jù)2007年9月11日提交的名為"SubstitutedThienopyridoneCompoundsw池AntibacterialActivity"的美國(guó)專利申請(qǐng)系列號(hào)11/853,314中所述方法制備為外消旋混合物，并且與四氫呋喃(0.02M)和1.5當(dāng)量氫化鈉(作為礦物油中60%的混懸液)混合。使反應(yīng)在室溫下攪拌30分鐘并且分批添加1.04當(dāng)量Boc-酐。在添加完成后，使反應(yīng)攪拌過夜。除去溶劑并且這種原材料通過硅膠柱層析法純化，用乙酸乙酯和己烷0-100%梯度洗脫以產(chǎn)生作為黃色油的標(biāo)題化合物。灘5:上述的外消旋混合物通過制備型手性色譜法(prep-HPLC)分離成單一對(duì)映體。對(duì)于(6,8-二溴-苯并二氫吡喃-4-基)-[3-(7-氧代-4，7-二氫-噻吩并[3，2-6]吡啶-5-基氨基)-丙基]-氨基甲酸叔丁酯，分離到300mg批量第一(R-(+)-對(duì)映體(式IX)洗脫對(duì)映體和300mg批量第二(S-(-)-對(duì)映體)洗脫對(duì)映體，二者e.e均〉990/0。制備型HPLC條件柱ChiralpakAD;250x20mm;DiacelChemicalIndustriesLTD洗脫液庚烷/EtOH(卯/10)流速6.0ml/分鐘UV:256nm樣品50mg/ml注入體積500^1停留時(shí)間R-(+)-對(duì)映體，約37分鐘S-(-)-對(duì)映體，約47分鐘分析型HPLC條件柱ChiralcelOD-H;150x4,6mm;DiacelChemicalIndustriesLTD洗脫液庚垸/IPA(90/10)流速0.5ml/分鐘UV:256，328nm樣品約lmg/ml注入體積20^1停留時(shí)間R-(+)-對(duì)映體，約41分鐘S-(-)-對(duì)映體，約46分鐘將類似于方法A制備的叔丁基6,8-二溴-1,2,3，4-四氫喹啉-4-基(3-(7-氧代-4，7-二氫噻吩并[3,2-6]吡啶-5-基氨基)丙基)氨基甲酸酯的外消旋混合物通過制備型HPLC(pre-HPLC)分離單一對(duì)映體。分離到113mg批量第一洗脫對(duì)映體(式VIII，R-(+)-對(duì)映體，e.e》99。/。)和70mg批量第二洗脫對(duì)映體(S-(-)-對(duì)映體，e.e.85%)。通過又一次制備型HPLC進(jìn)一步純化所述第二洗脫對(duì)映體獲得5.5mg這種對(duì)映體，e.e.>99%。制備型HPLC條件柱ChiralcelOD-H;250x20mm;DiacelChemicalIndustriesLTD洗脫液庚烷/EtOH/Et2NH(95/5/0.2%)流速10ml/分鐘UV:256，238nm樣品85mg/ml注入體80pil積分析型HPLC條件柱ChiralcelOD-H;150x4.6mm;DiacelChemicalIndustriesLTD洗脫液庚^/IPA(90/10)流速0.5ml/分鐘UV:256,328nm樣品約lmg/ml注入體積20^1停留時(shí)間R-(+)-對(duì)映體，約41分鐘S-(-)-對(duì)映體，約46分鐘方組'所述的((R)(+)-6，8-二溴-苯并二氫吡喃-4-基)-[3-(7-氧代-4,7-二氫-噻吩并[3，2-6]吡啶-5-基氨基)-丙基]-氨基甲酸叔丁酯溶解在二噁烷中的4.0MHC1中，并且使其攪拌過夜，在此期間產(chǎn)物從溶液中油析出來(oilout)。將約一半的二噁垸經(jīng)蒸發(fā)除去，并且將剩余物質(zhì)攪拌幾小時(shí)。產(chǎn)物從溶液中作為灰白色固體析出(該固體通過真空抽濾法分離并在真空下干燥以產(chǎn)生作為灰白色固體的標(biāo)題化合物)。方組'用HC1處理((R)(+)-6,8-二溴-l,2，3，4-四氫-喹啉-4-基)-[3-(7-氧代-4，7-二氫-噻吩并[3，2-6]吡啶-5-基氨基)-丙基]-氨基甲酸叔丁酯(以THF中的濃HC1制備的4.0M溶液)。將該溶液攪拌過夜。通過蒸發(fā)除去溶劑，用醚攪拌所得白色固體。該固體通過真空抽濾法分離。將固體分離并在真空下干燥，以產(chǎn)生作為白色固體的標(biāo)題化合物(該固體通過真空抽濾法分離并在真空下干燥以產(chǎn)生作為灰白色固體的標(biāo)題化合物)。方法II:通過不對(duì)稱還原的合成法方法II,(CH>4^H2HCI不對(duì)稱還原方法F5QHNH2HCI、;W雄，W(，l)還原性胺化方法I^^'、f"(R、"^H2)保護(hù)基去除方法J(R1)m^^&(，+。^Vr67式I5-(3-氧代丙氨基)噻吩并3，2-6吡啶-7-基苯甲酸酯HCI鹽(化合物7的實(shí)例)的制備中間體2，2-二甲基-5-(甲基磺酰基噻吩-3-基氨基-亞甲萄-1，3二噁垸-4，6-二酮的制備3-噻吩異硫氰酸酯(472.5g，3.34mol)與二甲基亞砜(1.9L)中的2,2-二甲基-l，3-二噁烷-4,6-二酮(433.2g，3.006moi)混合。三乙胺(516mL，3.67mol)經(jīng)130分鐘逐滴添加，同時(shí)維持反應(yīng)溫度低于20。C。在添加后，將所得混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。經(jīng)70分鐘緩慢添加碘甲垸(426.7g，3.006mol)，同時(shí)維持反應(yīng)溫度低于20。C。在添加結(jié)束后，該混合物在室溫下攪拌l小時(shí)。緩慢地添加稀鹽酸水溶液(含有46mL37%HC1的4.8L水)以析出產(chǎn)物，同時(shí)溫度保持低于30。C。攪拌該混合物2小時(shí)。將固體濾出并且用水淋洗。所得的潮濕固體懸浮在EtOH(6L)中，并且隨后在減壓下除去此溶劑。所得淤漿溶解于沸騰的甲醇(4.0L)中，用脫色炭(Noritbrand牌，130g)處理，在回流下維持40分鐘。所述的熱溶液經(jīng)Cdite543墊過濾，并且濾餅用沸騰的甲醇(1L)淋洗。使濾液在室溫下靜置24小時(shí)。將固體濾出并干燥以產(chǎn)生408.4g(45Q/。)的中間體2，2-二甲基-5-(甲基磺酰-噻吩-3-基氨基-亞甲基)-[1，3]二噁垸-4,6-二酮的淡棕色晶體。^NMR(400MHz，CDC13)51.76(s，6H)，2.38(s,3H)，7.09(d，IHJ=5Hz)，7.25(d,1H,J=3.2Hz)，7.38(dd,1H,J=3.2，5Hz)，12.7(brs，1H)。中間體5-((3，3-二乙氧基丙氨基)(噻吩-3-基氨基)亞甲基)-2，2-二甲基-1，3-二噁烷-4，6-二酮的制備3,3-二乙氧基丙胺(210.7g，1.43mol)按部分經(jīng)60分鐘添加至2,2-二甲基-5-(甲基磺酰-噻吩-3-基氨基-亞甲基)-[1，3]二噁垸-4,6-二酮(407.38，L36mo1)在二氯甲烷(1.7L)和甲醇(0.36L)中的溶液，同時(shí)反應(yīng)溫度用水浴保持低于25°C。在室溫下攪拌1.5小時(shí)后，反應(yīng)混合物用二氯甲垸(0.8L)稀釋。將有機(jī)層分離并用氯化銨水溶液(400mL，由200mL飽和NH4Cl溶液和200mL水制成)、鹽水(300mL)洗滌，并且在硫酸鎂上干燥。在減壓下濃縮該反應(yīng)混合物產(chǎn)生了深色油。添加二甲苯(500ml)并且將混合物在減壓下濃縮以產(chǎn)生中間體5-((3，3-二乙氧基丙氨基)(噻吩-3-基氨基)亞甲基)-2，2-二甲基-1，3-二噁烷-4，6-二酮。所得的深色油在下一個(gè)步驟中直接使用，無需進(jìn)一步純化。！HNMR(400MHz，CDC13)51.65(m，6H)，1.73(s，6H)，1.78(m,2H)，2.98(q,2H，J=6.4Hz)，3,45(m,2H),3.60(m，2H),4.50(t,1H，J=5.2Hz)，6.98(dd,1H,J=1.6，5.2Hz),7.05(dd，1H,J=1.2，3.2Hz)，7.33(dd，1H，J=3.2，5.2Hz)，10.2(s,1H)，11.3(s，1H)。中間體5-(3，3-二乙氧基丙氨基)-7-氧代-4，7-二氫噻吩并3，2-6吡啶-6-羧酸的制備將5-((3，3-二乙氧基丙氨基)(噻吩-3-基氨基)亞甲基)-2，2-二甲基-l,3-二噁烷-4,6-二酮(1.62mol)懸浮于二甲苯(2.4L)中的六甲基二硅氮烷溶液(1.08L，5.18moI)內(nèi)，并且回流加熱24小時(shí)。冷卻至室溫后，將混合物在減壓下濃縮以產(chǎn)生深色油。將這種深色油小心地用甲醇(0.5L)處理以形成棕色固體，隨后添加乙醚(1.6L)。將所得固體過濾并且用MeOH/乙醚(1:3)(0.SL)洗滌。此固體在真空下干燥以產(chǎn)生432.2g(78%)作為米黃色固體的所需中間體5-(3，3-二乙氧基丙氨基)-7-氧代-4，7-二氫噻吩并[3，2-6]吡啶-6-羧酸。)HNMR(400MHz,DMSOd6)S1.09(m,6H)，1.91(m，2H)，3.40(m,2H)，3.58(m,2H),4.06(s，1H)，4.60(t，1H，J=5.2Hz)，7.28(d，1H，J=4.8Hz)，8.05(d，lH,J=4.8Hz),9.94(m，1H),11.8(s，1H)。中間體5-(3，3-二乙氧基丙氨基)噻吩并3，2-6吡淀-7-醇鈉的制備5-(3，3-二乙氧基丙氨基)-7-氧代-4,7-二氫噻吩并[3,2-6]吡啶-6-羧酸(432g，1.27mol)與甲氧化鈉(95Q/。純度，75.8g，1.33mol)混合并且懸浮于二甲苯(2L)中。所得混合物回流加熱2小時(shí)。反應(yīng)混合物以攪拌逐漸冷卻至室溫以產(chǎn)生淡棕色固體。將該固體通過過濾收集并用甲苯洗滌，并且在真空下于50-60°C干燥48小時(shí)以產(chǎn)生所需中間體5-(3,3-二乙氧基丙氨基)噻吩并[3，2-6]吡啶-7-醇鈉(固體)。這種粗產(chǎn)物在下個(gè)步驟中使用，無需進(jìn)一步純化。'HNMR(400MHz，DMSOdg)51.08(m，6H),1.72(q，2H,J=6.8Hz)，3.15(m,2H),4.55(t，1H,J=6Hz),6.22(s，1H)，6.98(d,1H,J=5.2Hz)，7.53(d，1H,J=5.2Hz)。中間體5-(3，3-二乙氧基丙氨基)噻吩并3，2-W吡啶-7-基苯甲酸酯的制備將5-(3,3-二乙氧基丙氨基)噻吩并[3，2-6]吡啶-7-醇鈉(445.7g，L40mo1)懸浮在DMSO(2.8L)中。在室溫按部分添加苯甲酸酐(332.9g，1.47mol)。在添加后，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。該混合物用乙酸乙酯(6L)稀釋。所得有機(jī)溶液用水(6L)洗滌。分離的水層用乙酸乙酯(2L)萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥并過濾。在減壓下除去溶劑并在真空下干燥，產(chǎn)生作為深色油的所需中間體5-(3,3-二乙氧基丙氨基)噻吩射3，2-6]吡啶-7-基苯甲酸酯。這種產(chǎn)物在下個(gè)步驟中使用，無需進(jìn)一步純化。'HNMR(400MHz，CDC13)51.09(m，6H),1.99(m，2H)，3.50(m,4H)，3.70(m，2H),4.60(t,1H，J=5.6Hz),7.30(d，1H，J=4.8Hz)，7.55(m，3H)，7.67(d,1H,J=4.8Hz),8.24(m，2H)。標(biāo)題化合物5-(3-氧代丙氨萄噻吩并[3，2-6]吡啶-7-基苯甲酸酯HC1鹽(化合物7的實(shí)例)的制備來自上文的粗制5-(3,3-二乙氧基丙氨基)噻吩并[3，2-6]吡啶-7-基苯甲酸酯(677.3g，1.68mol)溶解于3.0LTHF中。然后，逐滴添加12NHC1(1.68mol，0.14L)，同時(shí)用冰水浴維持反應(yīng)溫度低于20。C。攪拌5分鐘后，固體析出。所得混合物在室溫下攪拌l小時(shí)，隨后添加乙酸乙酯(2.0L)。該混合物攪拌30分鐘。將固體濾出，用乙酸乙酯(250mlx2)淋洗，隨后在減壓下于55。C干燥以產(chǎn)生作為淡棕色固體的標(biāo)題化合物5-(3-氧代丙氨基)噻吩射3，2-6]吡啶-7-基苯甲酸酯HC1鹽。'HNMR(400MHz,DMSOd6)52.20(m，2H)，3.56(m，2H),6.31(t,1H,J=3.6NHz),7.83-7.87(m，2H)，7.96(d，1H，J=6,0Hz)，8.16-8.20(m，2H)，8.35(d，1H，J=5.6Hz),10.20(s,1H)。6，8-二溴-苯并二氫吡哺-4(S)-醇的制備向含有乙腈(0.3M)中的6,8-二溴苯并二氫吡喃-4-酮和5/2甲酸/三乙胺(按體積占30。/。)的混合物添加(lS,2S)-(+)-N-對(duì)甲苯磺酰-l，2-二苯基亞乙基二胺(lmolo/。)和二氯(對(duì)異丙基苯甲烷)釕(II)二聚體(0.5mol%)。攪拌24小時(shí)后，將該反應(yīng)用乙酸乙酯稀釋并且用鹽水/碳酸氫鈉(l")洗滌。將有機(jī)相在減壓下濃縮以產(chǎn)生作為棕褐色固體的該標(biāo)題化合物?！紿NMR(400MHz,CDC13)S7.59(d，lH),7.41(d，1H),4.78(ABq,1H)，4.38(m,2H),2.08(m,2H),1.91(d,1H)。灘。4(R)-疊氮基-6，8-二溴-苯并二氫吡喃的制備將含有四氫呋喃中的6，8-二溴-苯并二氫吡喃-4(S)醇(0.17M)和1.2當(dāng)量二苯基磷?；B氮化物的溶液在室溫下攪拌15分鐘。將此溶液冷卻至10°C并且添加2.5當(dāng)量l,8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯。將該混合物攪拌，同時(shí)逐漸加溫至室溫并維持48小時(shí)。該混合物用乙酸乙酯稀釋并且用鹽水、隨后用水洗滌。濃縮有機(jī)相被以產(chǎn)生作為棕褐色油的該標(biāo)題化合物。NMR(400MHz，CDC13)57.65(d,1H),7.32(d,1H)，4.57(t,1H)，4,43(m，1H):4.31(m，1H)，2.18(m，1H)，2.08(m，1H)。鹽酸6，8-二溴-苯并二氫吡喃-4(R)-基胺的制備向四氫呋喃中的4(R)-疊氮基-6,8-二溴-苯并二氫吡喃的冰冷溶液(0.16M)添加1.2當(dāng)量三甲基膦。將混合物加溫至室溫并維持16小時(shí)。濃縮該混合物產(chǎn)生粗制胺。將粗制胺溶解于乙腈(0.20M)，添加2當(dāng)量的鹽酸。將混合物攪拌16小時(shí)，將固體濾出、用乙腈洗滌并干燥以產(chǎn)生作為灰白色固體的標(biāo)題化合物。'H畫R(400固z，CD3OD)57.75(d，1H)，7.60(dd,1H),4.62(t，1H),4.40(m，2H)，2.40(m,1H),2.20(m，1H)。灘/.'5-3-(6，8-二溴-苯并二氫吡喃-4-基胺)丙氨基-噻吩并3，2-A吡啶-7-基苯甲酸酯的制備將5-(3-氧代丙胺)噻吩并[3，2-6]吡啶-7-基苯甲酸酯鹽酸鹽與1當(dāng)量四氫呋喃中的鹽酸6,8-二溴-苯并二氫吡喃-4(R)-基胺(0，35M)混合，隨后添加3當(dāng)量三乙胺。攪拌1小時(shí)后，添加1.3當(dāng)量三乙酰氧基硼氫化鈉，將混合物攪拌2小時(shí)。將此反應(yīng)用乙酸乙酯稀釋并且用碳酸氫鈉水溶液洗滌。有機(jī)相經(jīng)硫酸鎂干燥。將粗產(chǎn)物過濾、除去溶劑并通過用二氯甲烷中的0-10%甲醇洗脫的柱層析法純化，產(chǎn)生作為棕色油的該標(biāo)題化合物。JHNMR(400MHz,CDC13)S8.24(m,2H)，7.70(m,1H)，7.56(m,3H),7.50(d,1H),7,40(d，1H)，7.24(d，1H),6.58(m，1H)，4.34(m,2H)，3.77(t，1H):3.56(m，2H)，2.85(m，2H),2.0(m，2H)。灘/.、'二鹽酸5-3-(6，8-二溴-苯并二氫吡喃-4-基胺)丙氨基-4H-噻吩并3，2-A吡啶-7-酮的制備向含有乙酸乙酯(2.5M)和四氫呋喃(1,2M)中的5-[3-(6，8-二溴-苯并二氫吡喃-4-基胺)丙氨基]-噻吩并[3,2-6]吡啶-7-基苯甲酸酯的溶液添加2.5當(dāng)量在甲醇中的2M氨。攪拌24小時(shí)后，將混合物用乙酸乙酯稀釋，并且將固體濾出、用乙酸乙酯淋洗并干燥。粗制材料通過用二氯甲烷中的0-10°/0氨/甲醇洗脫的柱層析法純化，產(chǎn)生作為游離堿的此標(biāo)題化合物。將這種化合物溶解于無水乙醇(0.4M)并添加3當(dāng)量的4N鹽酸。將混合物加熱至75°C并且用脫色炭處理。所得混合物經(jīng)Cdite墊進(jìn)行過濾，并且將濾墊用溫的乙醇/4N鹽酸淋洗。將濾液在室溫下攪拌16小時(shí)直至形成無色固體。將此固體濾出、用乙醇/2N鹽酸淋洗并且在真空下于95-10(TC干燥以產(chǎn)生作為灰白色固體的目的化合物。'HNMR(400MHz,CD3OD):58.04(d，1H)，7.77(s，1H)，7.71(s,1H),7.45(d,1H),6.26(s，1H)，4.62(br，s,1H)，4.52-4.38(m,2H),3.59(t,2H),3.41(m，1H),3.28(m，1H),2.41(m，2H)，2.18(m,2H)。實(shí)施例2:二鹽酸5-3-((R)(+)6，8-二溴-苯并二氫吡喃-4-基氨基)-丙氨基]-4H-噻吩并3，2-A吡啶-7-酮(式IX，本發(fā)明化合物)的合成使用如方法I(方法A、B和D)中描述的合成反應(yīng)，制備該標(biāo)題化合物并且將其分離為第一洗脫對(duì)映體?？蛇x地，該標(biāo)題化合物根據(jù)方法n(方法F-J)制備。該標(biāo)題化合物在這兩種情況下均作為灰白色固體分離。'HNMR(400MHz,CD3OD):S8.04(d,1H),7.77(s，1H),7.71(s，1H)，7.45(d，1H)，6,26(s,1H)，4.62(br,s，1H)，4.52-4.38(m，2H)，3.59(t，2H),3.41(m,1H),3.28(m，1H),2.41(m，2H)，2.18(m，2H)。MS(ES+):魔514(M+l)。旋光度\^011中，20。C下c=0.503mM)。將二鹽酸5-[3-((R)(+)6，8-二溴-苯并二氫吡喃-4-基氨基)-丙氨基]-4H-噻吩并[3，2-6]吡啶-7-酮(式IX)和艱難梭菌MetRS的共晶體生長(zhǎng)出來。對(duì)此共晶體的X-射線衍射產(chǎn)生了分辨率1.72A模式。IX化合物的三維結(jié)構(gòu)明確地被賦予R絕對(duì)構(gòu)型。實(shí)施例3:二鹽酸5-3-((S)(-)-6，8-二溴-苯并二氫吡喃-4-基氨基)-丙氨基-4H-噻吩并3，2-6吡啶-7-酮(參比化合物)的合成使用如方法I(方法A、B和D)中描述的合成反應(yīng)，制備此標(biāo)題化合物并且將其分離為第二洗脫對(duì)映體?？蛇x地，此標(biāo)題化合物根據(jù)方法n制備，其中在方法F中使用(lR,2R)-(-)-N-對(duì)甲苯磺酰-l,2-二苯基亞乙基二胺(1mol。/。)和二氯(對(duì)異丙基苯甲垸)釕(II)二聚體，隨后按照方法G-J進(jìn)行。所述標(biāo)題化合物在這兩種情況下均作為灰白色固體分離。'HNMR(400MHz，CD3OD):58.04(d,1H)，7.77(s,1H)，7.71(s，1H)，7.45(d,1H)，6.26(s，1H),4.62(br,t，4.52-4,38(m2H),3.59(t，2H),3.41(m,1H),3.27(m,1H),2.41(m，2H)，2.17(m，2H)。MS(ES+):M/Z514(M+l)。旋光度[a]589=-21.70(在MeOH中，20。C下c=0.507mM)。實(shí)施例4:二鹽酸5-[3-((R)(+)-8-溴-6-氯-苯并二氫吡喃-4-基氨基)-丙氨基l-4H-噻吩并[3，2-6吡啶-7-酮(式VII，本發(fā)明化合物)的合成使用如實(shí)施例1(方法A、B和D)中描述的合成反應(yīng)，制備所述標(biāo)題化合物并且將其分離為第一洗脫對(duì)映體'HNMR(400MHz,CD3OD):58.05(d,1H)，7.66(s,1H)，7.56(s,1H)，7.43(d,1H),6.25(s，1H),4.62(t,1H)，4.52-4.38(m,2H)，3.58(t，2H)，3.39(m,1H)，3.29(m，1H)，2.41(m，2H),2.17(m，2H)。MS(ES+):M/Z470(M+l)。旋光度問589=+36.86(在]^6011中，20。C下c-0,510mM)。實(shí)施例5:二鹽酸5-3-((S)(-)-8-溴-6-氯-苯并二氫吡喃-4-基氨基)-丙氨萄-4H-噻吩并3，2-6吡啶-7-酮(參比化合物)的合成使用如方法I(方法A、B和D)中描述的合成反應(yīng)，制備所述標(biāo)題化合物并且將其分離為第二洗脫對(duì)映體'HNMR(400MHz，CD3OD):S8.05(d，1H)，7.66(s，1H),7.59(s,1H)，7.45(d，1H),6.26(s，1H),4.63(t，1H),4.52-4.38(m,2H)，3.57(t，2H)，3.41(m，1H),3.30(m，1H),2.42(m2H)，2.18(m2H)。MS(ES+):M/Z470(M+l)。旋光度[a]589:-35.24(在MeOH中，20°C下c=0.500mM)。實(shí)施例6:二鹽酸2-3-((R)(+)-6，8-二溴-苯并二氫吡喃-4-基氨基)-丙氨基卜lH-喹啉-4-酮(式X，本發(fā)明化合物)的合成。使用如實(shí)施例1(方法A、B和D)中描述的合成反應(yīng)，制備以下化合物并且將其分離為第一洗脫對(duì)映體'HNMR(400MHz,CD3OD):58.10(d，1H)，7.卯(br，1H),7.78-7.75(m，3H)，7.48(t,1H),6,38(s，1H),4.65(t,1H)，4.48(m,2H),3.70(m,2H)，3.44(m1H),3.31(m,1H)，2.48(m,1H),2.40(m，1H)，2.23(m，2H)。MS(ES+):M/Z508(M+l)。旋光度589=+23.22(在1\46011中，20°C下c=0.500mM)。實(shí)施例7:二鹽酸2-[3-((S)(-)-6，8-二溴-苯并二氫吡喃-4-基氨基)-丙氨基]-lH-喹啉-4-酮(參比化合物)的合成使用如實(shí)施例1(方法A、B和D)中描述的合成反應(yīng)，制備以下化合物并且將其分離為第二洗脫對(duì)映體'HNMR(400固z，CD3OD):S8.10(d,1H)，7,90(br，1H)，7.78-7.75(m，3H)，7.48(t,1H)，6.38(s，1H)，4.65(t，1H),4.48(m,2H),3.70(m，2H)，3.44(m:1H)，3.31(m，1H),2.48(m,1H)，2.40(m，1H)，2.23(m,2H)。MS(ES+):匿508(M+l)。旋光度[a]589^-24.51(在MeOH中，20。C下c=0.506mM)。實(shí)施例8:三鹽酸5-[3-((R)(+)-6，8-二溴-l，2，3，4-四氫-喹啉-4-基氨基)-丙氨基-4H-噻吩并[3，2-A吡啶-7-酮(式VIII,本發(fā)明化合物)的合成使用如實(shí)施例1(方法A、C和E)中描述的合成反應(yīng)，制備以下化合物并且將其分離為第一洗脫對(duì)映體?？蛇x地，該標(biāo)題化合物根據(jù)方法n(方法F-J)制備。所述標(biāo)題化合物在這兩種情況下均作為灰白色固體分離。NMR(400MHz,CD3OD):58.05(d，1H)，7.58(s，1H)，7.44(d，1H)，7.42(s,1H),6.25(s，1H)，4.48(br，s,1H)，3.63-3.53(m，4印，3.38(m,1H)，3.21(m，1H)，2.43(m,1H),2.14(m,2H)，2.07(m，1H)。MS(ES+):魔513(M+l)。旋光度[a]589-十72.26(在MeOH中，20°C下c=0.507mM)。實(shí)施例9:三鹽酸5-[3-((S)(-)-6，8-二溴-l，2^，4-四氫-喹啉-4-基氨基)-丙氨基-4H-噻吩并3，2-6吡啶-7-酮(參比化合物)的合成使用如實(shí)施例1(方法A、C和E)中描述的合成反應(yīng)，制備以下化合物并且將其分離為第二洗脫對(duì)映體?？蛇x地，該標(biāo)題化合物根據(jù)方法n制備，其中在方法F中使用(lR，2R)-(-)-N-對(duì)甲苯磺酰-l,2-二苯基亞乙基二胺(1聚體，隨后按照方法G-J進(jìn)行。所述標(biāo)題化合物在這兩種情況下均作為灰白色固體分離。力NMR(400畫z，CD3OD):58.04(d，1H)，7.58(s，1H),7.43(d，1H),7.42(s,1H)，6.23(s,1H),4.48(br，s,1H)，3.63-3.52(m，4H),3.37(m,1H)，3.22(m,1H)，2.42(m，1H),2.20-2.00(m，3H)。MS(ES+):M/Z513(M+l)。實(shí)施例10:5-3-((R)-5，7-二溴-l，2，3，4-四氫-萘-l-基氨基)丙氨基-4H-噻吩并3，2-6吡啶-7-酮(式VI，本發(fā)明化合物)此標(biāo)題化合物根據(jù)方法II(方法F-J)制備。此標(biāo)題化合物作為灰白色固'HNMR(400MHz,CD3OD):S7.68(d，1H)，7.59(d，2H)，7.00(d，lH)，5.57(s，1H)，3.80(t，1H),3.32(t,2H)，2,76(m,3H)，2.61(m,1H),1.97(m,1H):1.86(m,4H)，1.72(m,1H)。MS(ES+):鹿512(M+l》。旋光度[a]589=-22.30(在MeOH中，20°C下c=0.870mM)。實(shí)施例11:5-3-((S)-5，7-二溴-2，3-二氫-苯并呋喃-3-基氨基)-丙氨基l-4H-噻吩并[3，2-司吡啶-7-酮(本發(fā)明化合物，式XI)此標(biāo)題化合物根據(jù)方法n(方法F-j)制備。該標(biāo)題化合物作為灰白色固體分離。體分離。'HNMR(400MHz,CD3OD):57.69(d,1H),7.46(d,2H),7.06(d,IH)，5.54(s，IH)，4.60(m，2H)，4.47(m，IH)，3.30(m,2H)，2.73(m，IH)，2.61(m,1H),L80(m，2H)。MS(ES+):M/Z500(M+l))。旋光度[a]589=-1.93(在MeOH中，20。C下c=0.725m)。實(shí)施例12:5-[3-((R)-5，7-二溴-2，3-二氫-苯并呋喃-3-基氨基)-丙氨基-4H-噻吩并[3，2-6吡啶-7-酮(參比化合物)此標(biāo)題化合物根據(jù)方法II制備，其中在方法F中使用(l民2R)-(-)-N-對(duì)甲苯磺酰-1，2-二苯基亞乙基二胺(1mol。/(0和二氯(對(duì)異丙基苯甲垸)釕(ll)二聚體，隨后按照方法G-J進(jìn)行。所述標(biāo)題化合物作為灰白色固體分離。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage33</formula>'HNMR(400MHz,CD3OD):57.70(d，1H),7.48(d，2H)，7.06(d,1H)，5.56(s，1H)，4.63(m，2H)，4.50(dd，1H)，3.30(m,2H)，2,75(m，1H),2.63(m，1H)，1.81(m,2H)。MS(ES+):M/Z500(M+l)。實(shí)施例13:MetRS的表達(dá)和純化以下實(shí)施例描述了表達(dá)和純化用于實(shí)施例14和15中0f示功能測(cè)定中的艱難梭菌MetRS。過量產(chǎn)生載體的克隆擴(kuò)增添加氨基端6xHis標(biāo)簽的艱難梭菌MetRS并且將其克隆至pETcoco-2。使用以下引物從基因組DNA中擴(kuò)增DNA:5'-CTGCAGAGCTAGCAAACCGAGTTTTTATGTAAC-3'(正向)(SEQIDNO:l)，5'-CTTTCTAAGCTTCTACTAACGAACCTCGGATCC-3'(反向)(SEQIDNO:2)。擴(kuò)增的DNA用Sph1和HindIII限制性核酸內(nèi)切酶處理，這兩種酶在消化后被熱滅活。將片段經(jīng)乙醇沉淀并且與已經(jīng)用相同核酸內(nèi)切酶及蝦堿性磷酸酶處理的pETcoco-2載體(Novagen)混合。連接這些片段并且將連接混合物轉(zhuǎn)化至感受態(tài)大腸桿菌DH10內(nèi)。將轉(zhuǎn)化體涂布在含5(^g/ml氨芐青霉素的加葡萄糖的F培養(yǎng)基上。在葡萄糖中的生長(zhǎng)維持了驅(qū)動(dòng)復(fù)制因子TrfA表達(dá)的pBAD啟動(dòng)子的阻遏狀態(tài)，因此維持低拷貝數(shù)。所得表達(dá)克隆，即pETcoco-Cdiff-MRS，通過從兩個(gè)方向上對(duì)插入物測(cè)序加以驗(yàn)證。艱難梭菌MetRS的純化。表達(dá)載體pETcoco-Cdiff-MRS轉(zhuǎn)化至RosettaDE3表達(dá)菌株并且用來接種4升補(bǔ)充有10ng/mL氯霉素、50pg/mL氨芐青霉素、0.2。/。葡萄糖的F培養(yǎng)基。此培養(yǎng)物用lmMIPTG在OD0.66上誘導(dǎo)。在誘導(dǎo)作用4小時(shí)后收獲細(xì)胞(產(chǎn)率=38g細(xì)胞沉淀)。通過^l每冷凍細(xì)胞(39g細(xì)胞)在Tris-蔗糖緩沖液中的78g1:1混懸液添加至已經(jīng)預(yù)溫到45'C的107.25mlTris-蔗糖緩沖液(2.75ml/g細(xì)胞)中裂解沉淀的細(xì)胞，其中所述的冷凍細(xì)胞貯存在-20^。向攪拌的混合物添加1.95ml的0.5M1,4-二硫蘇糖醇(DTT)(0.05ml/g細(xì)胞)和9.75ml裂解緩沖液(調(diào)節(jié)至pH7.5的Tris-蔗糖緩沖液中的2MNaCl，0.3M亞精胺)(0.25ml/g細(xì)胞)。所述淤槳的pH值以pH試紙進(jìn)行檢測(cè)，并且通過添加50ml2MTris堿調(diào)節(jié)至pH8.0。添加溶菌酶(117mg)至20mlTris-蔗糖緩沖液(3mg溶菌酶/g細(xì)胞)。將所述淤漿分配至離心瓶中并在4°C溫育1小時(shí)，隨后在37"C溫育4分鐘。不溶性細(xì)胞成分通過離心法(23,000xg，60分鐘，4。C)除去?；厥盏纳锨逡?192ml)構(gòu)成級(jí)分I。將級(jí)分I上樣至15mLNi-NTA柱，其中所述的Ni-NTA柱用上樣緩沖液(50mMTris-HCl，pH7.5，10%甘油，40mMKCl，10mM咪唑，pH6.8和7mM(3-巰基乙醇)平衡。該柱用10倍柱體積的洗滌緩沖液(50mMTris-HCl，pH7.5，10%甘袖，800mMKCl，20mM咪唑，pH6.8和7mM|3-巰基乙醇)洗滌。將所述蛋白質(zhì)在10倍柱體積的從洗滌緩沖液至洗脫緩沖液(50mMTris-HCl，pH7.5，10%甘油，40mMKC1，250mM咪唑，pH6.8和7mM卩-巰基乙醇)的梯度中以0.5mL/分鐘洗脫，收集3mL級(jí)分。收集級(jí)分并且對(duì)其通過SDS-PAGE分析蛋白質(zhì)。在艱難梭菌MetRStRNA載荷測(cè)定(chargingassay)中分析級(jí)分。將具有峰活性的級(jí)分匯集以形成級(jí)分II(60mg，1.3mg/ml)。級(jí)分II具有每毫克3.2xl05單位的比活性?；谟每捡R斯藍(lán)染色的SDS-PAGE凝膠的光密度測(cè)定值，估計(jì)純度大于97%。實(shí)施例14:對(duì)映體化合物是艱難梭菌MetRS的有力抑制劑分析本發(fā)明的化合物旨在確定它們抑制MetRS的能力。測(cè)定法如下進(jìn)行反應(yīng)混合物(每lml)<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>每個(gè)反應(yīng)通過添加適當(dāng)稀釋的(與抑制劑預(yù)溫育的)純酶至25^反應(yīng)混合物內(nèi)在室溫持續(xù)10分鐘而啟動(dòng)。通過添加含磷酸二酯酶(PDE)SPA珠(0.833mg/ml)的150^1的167mM，pH2.15檸檬酸鈉終止所述反應(yīng)。放射標(biāo)記產(chǎn)物與SPA珠的結(jié)合使得所述同位素充分接近，從而使得來自氖的輻射激發(fā)SPA珠內(nèi)的閃爍體。任何未結(jié)合的放射標(biāo)記物沒有充分靠近該閃爍體，從而不能促使這種能量轉(zhuǎn)移，故無信號(hào)生成。反應(yīng)終止后，將平板在Mistral3000E平板離心機(jī)內(nèi)以2500轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘(或可選地使之靜置1小時(shí))。所述測(cè)定法在96-孔Optiplates(Packard公司)平板中進(jìn)行。平板在TopCount(Packard公司，96孔式計(jì)數(shù)儀)上計(jì)數(shù)。試劑混合的大腸桿菌MRE-600tRNA和ATP從Boehringer-Mannheim購(gòu)買，L型[甲基」H]甲硫氨酸和磷酸二酯酶閃爍迫近(SPA)珠來自AmershamPharmaciaBiotech,而其它試齊廿從來自Sigma。結(jié)果本發(fā)明的純對(duì)映體(實(shí)施例2、4、6、8、10)、全部R對(duì)映體以及(實(shí)施例ll)S對(duì)映體構(gòu)型具有在范圍(Ki=15-25pM)內(nèi)對(duì)艱難梭菌MetRS的極強(qiáng)抑制作用。所述全部對(duì)映體相對(duì)于哺乳動(dòng)物酶具有高度選擇性(不抑制大鼠MetRS)。這些實(shí)施例的外消旋混合物具有比純對(duì)映體低大約50%的活性。相比之下，相反構(gòu)型的異構(gòu)體(實(shí)施例3、5、7、9)、全部S對(duì)映體以及(實(shí)施例12)R對(duì)映體具有在范圍(Kj-24，000-80，000pM)內(nèi)對(duì)艱難梭菌MetRS的極弱抑制作用。這是具有相反構(gòu)型的異構(gòu)體之間在活性上出乎意料的巨大差異。此外，該數(shù)據(jù)表明本發(fā)明的化合物對(duì)抑制艱難梭菌MetRS顯示強(qiáng)選擇性，但對(duì)哺乳動(dòng)物MetRS具有很小抑制活性或無抑制活性。MetRS抑制劑是甲硫氨酸的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑并且是ATP的非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑。實(shí)施例15:對(duì)映體化合物具有針對(duì)艱難梭菌的強(qiáng)抗菌活性。還測(cè)定了本發(fā)明(式(VI)-(XI》化合物抑制艱難梭菌生長(zhǎng)的能力。根據(jù)CLSL，使用基于瓊脂的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定法確定MIC9o(抑制90%艱難梭菌生長(zhǎng)所需要的最低抑制濃度)。生物測(cè)試全部化合物針對(duì)一組非重復(fù)性艱難梭菌臨床分離株的抗菌活性。所述的生物在補(bǔ)充20%甘油的布氏肉湯內(nèi)冷凍貯存。所述生物從冷凍裝置中取出并且在CDC瓊脂上傳代培養(yǎng)2次以確保純度和生長(zhǎng)。將平板在厭氧條件下溫育至少24小時(shí)。檢測(cè)細(xì)菌菌落的形態(tài)黃顏色，磨砂玻璃狀質(zhì)地和特征性氣味。檢測(cè)的對(duì)照生物是脆弱擬桿菌(5a"m^M/rag/fe)ATCC25285?？刮⑸镆赘行詸z驗(yàn)抗微生物易感性檢驗(yàn)通過瓊脂稀釋法在補(bǔ)充有維生素K,、氯化血紅素和5%已溶綿羊血的布氏瓊脂上根據(jù)CLSI指南(CLSI，Mll-A2)實(shí)施。將試驗(yàn)化合物連續(xù)稀釋并添加至熔化的補(bǔ)充布氏瓊脂。在每個(gè)抗菌平板系列接種之前和之后接種不含藥物的平板并且將它們用作生長(zhǎng)對(duì)照。在兩組藥物平板后，厭氧/好氧生長(zhǎng)對(duì)照在不含藥物的平板上實(shí)施。將細(xì)菌菌落在布氏肉湯中懸浮至與0.5McFarland標(biāo)準(zhǔn)物的濁度相等的濁度，并且以遞送1(^CFU/點(diǎn)的Steersreplicator施加在平板上。該平板在厭氧條件下于35。C溫育24小時(shí)，隨后讀取結(jié)果。最小抑制濃度(MIC)是完全抑制生長(zhǎng)或與不含藥物的生長(zhǎng)對(duì)照相比，引起生長(zhǎng)外觀顯著減少的濃度。結(jié)果本發(fā)明的純對(duì)映體(實(shí)施例2、4、6、8、10)、全部R對(duì)映體和(實(shí)施例11的)S對(duì)映體針對(duì)艱難梭菌具有極強(qiáng)抗菌活性(MIC9(^0.25pg/ml至4.0pg/ml)。這些實(shí)施例的外消旋混合物具有比純對(duì)映體低大約50%的活性(MIC90=0.50jig/ml至8.0jig/ml)。相比之下，相反構(gòu)型的異構(gòu)體(實(shí)施例3、5、7、9)、全部S對(duì)映體和(實(shí)施例12)R對(duì)映體針對(duì)艱難梭菌MetRS具有極弱抗菌活性(MIC9()28.0(ig/ml至〉32.0昭/ml)。這些結(jié)果表明本發(fā)明的純對(duì)映體化合物針對(duì)艱難梭菌的強(qiáng)烈活性一般約0.25-1.0pg/ml。此外，ICso數(shù)據(jù)表明本發(fā)明的化合物對(duì)艱難梭菌MetRS具有特異性，針對(duì)抗哺乳動(dòng)物MetRS顯示很小活性或無活性。MetRS抑制劑化合物針對(duì)艱難梭菌和革蘭氏陽性菌顯示強(qiáng)活性，同時(shí)不影響正常腸道菌群。這些實(shí)施例中的數(shù)據(jù)顯示了純R對(duì)映體(實(shí)施例2、4、6、8、IO)和S對(duì)映體(實(shí)施例ll)與其相反構(gòu)型異構(gòu)體(實(shí)施例3、5、7、9、12)的極弱活性相比的強(qiáng)而出乎意料的抗菌效力。實(shí)施例16:本發(fā)明的化合物針對(duì)其它細(xì)菌具有強(qiáng)抗菌活性測(cè)試了本發(fā)明化合物(實(shí)施例2、4、6、8、10和11)針對(duì)一組革蘭氏陽性菌的抗菌活性。使用CLST參考肉湯微量稀釋法，針對(duì)革蘭氏陽性好氧菌測(cè)試化合物。針對(duì)金黃色葡萄球菌、糞腸球菌、屎腸球菌、化膿鏈球菌、表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌(5:/we/wo/;^c"力獲得數(shù)據(jù)。測(cè)試的化合物針對(duì)全部分離株顯示強(qiáng)抗菌活性，MIC<0.008-8tig/ml，所述的分離株包括金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和化膿鏈球菌的抗性株。使用標(biāo)準(zhǔn)CLST指南瓊脂稀釋法，還針對(duì)幽門螺桿菌獲得數(shù)據(jù)，并且結(jié)果顯示本發(fā)明的化合物對(duì)幽門螺桿菌具有抗菌活性。所述數(shù)據(jù)說明了使用本發(fā)明化合物作為抗菌藥對(duì)抗其它革蘭氏陽性菌例如金黃色葡萄球菌、糞腸球菌、屎腸球菌、化膿鏈球菌、表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌以及對(duì)抗革蘭氏陰性細(xì)菌幽門螺桿菌的效用。實(shí)施例17:本發(fā)明的化合物在體內(nèi)試驗(yàn)中顯示強(qiáng)的治療效用開展動(dòng)物試驗(yàn)以確定MetRS抑制劑用于治療艱難梭菌感染的效力。測(cè)試的MetRS抑制劑是5-[3-((R)-6,8-二溴-苯并二氫吡喃-4-基氨基)-丙氨基]-4H-噻吩并[3,2-6]吡啶-7-酮(外消旋混合物和R對(duì)映體)和5-[3-((R)-8-溴-6-氯-苯并二氫吡喃-4-基氨基)-丙氨基]-41^噻吩并[3,2-6]吡啶-7-酮。還測(cè)試了2-(3-a5-二溴-2-[2-(4-甲基-噻唑-5-基)-乙氧基]-芐氨基卜丙氨基)-lH-喹啉-4-酮。結(jié)果與使用常規(guī)抗生素萬古霉素治療的艱難梭菌感染倉(cāng)鼠進(jìn)行比較。感染倉(cāng)鼠用MetRS抑制劑在5-50mg/kg上或萬古霉素在2.5、5或25mg/kg上的溶液劑或混懸劑治療。每個(gè)組存在8只倉(cāng)鼠在實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)時(shí)仍存活。檢査逾期倉(cāng)鼠的GI狀況。該研究的數(shù)據(jù)表明(以艱難梭菌感染但未接受任何治療的)對(duì)照倉(cāng)鼠在3-4日內(nèi)死亡。用MetRS抑制劑治療的倉(cāng)鼠顯示存活顯著增加，往往存活至研究結(jié)束，一般28日或更長(zhǎng)日數(shù)。這些結(jié)果類似于或優(yōu)于使用萬古霉素治療所獲得的結(jié)果。5-[3-((R)-6,8-二溴-苯并二氫吡喃-4-基氨基)-丙氨基]-4H-噻吩并[3，2-6]吡啶-7-酮展示出最佳效力。5-[3-((R)-6，8-二溴-苯并二氫吡喃-4-基氨基)-丙氨基]-4H-噻吩并[3，2-6]吡啶-7-酮呈現(xiàn)出優(yōu)于萬古霉素的效力，在于與使用萬古霉素的0-10%存活相比，在第28日(5mg/kgBID)觀察到>60%的存活。存活的動(dòng)物具有健康的GI外觀及組織病理學(xué)。對(duì)倉(cāng)鼠口服施用MetRS抑制劑后，在其中觀察到低全身暴露量和低生物利用度。本實(shí)施例中的數(shù)據(jù)表明本發(fā)明的化合物在治療艱難梭菌感染動(dòng)物的能力方面是可比的，或優(yōu)于萬古霉素。實(shí)施例18:本發(fā)明的化合物影響艱難梭菌中毒素產(chǎn)生艱難梭菌的病原性與其產(chǎn)生胞外毒素A和B的能力相關(guān)。超高產(chǎn)毒素菌株導(dǎo)致最近伴有高死亡率的暴發(fā)。與此相反，不產(chǎn)生毒素的分離株無致病性。由于毒素生產(chǎn)需要活躍的蛋白質(zhì)合成，故對(duì)蛋白質(zhì)合成方法的抑制預(yù)計(jì)可抑制毒素的從頭產(chǎn)生。因此，體外評(píng)估MetRS抑制劑對(duì)艱難梭菌產(chǎn)生毒素的影響。方法艱難梭菌ATCC43255以厭氧方式在CDC厭氧菌瓊脂(Remel，Lenexa，KS)上培育和維持。為測(cè)試抗菌藥對(duì)生長(zhǎng)的影響，將細(xì)胞在35°C于96-孔腦心浸液(Bffl)肉湯培養(yǎng)基中以厭氧方式培育40小時(shí)，初始接種量106CFU/mL。為測(cè)試抗菌藥在高艱難梭菌細(xì)胞密度下對(duì)毒素產(chǎn)生的影響，細(xì)胞在35°C于96-孔腦心浸液(BHI)肉湯培養(yǎng)基中以厭氧方式培育24小時(shí)。耗盡的培養(yǎng)基隨后替換為含有濃度0.015-16pg/mL的MetRS押制劑和對(duì)照藥物的新鮮肉湯。4日后，生長(zhǎng)和細(xì)胞活力分別通過595nm處的光密度量值和通過在CDC厭氧菌瓊脂上培養(yǎng)而加以監(jiān)測(cè)。收集培養(yǎng)上清液，并且使用抗毒素A單克隆抗體(Novi;sBiologicals，Centennial,CO)，通過ELIFA(酶聯(lián)免疫流式測(cè)定法)檢測(cè)毒素A。結(jié)果MetRS抑制劑5-[3-(6,8-二溴-苯并二氫吡喃-4-基氨基)-丙氨基]-4H-噻吩并[3，2-6]吡啶-7-酮和5-(3-{3,5-二溴-2-[2-(4-甲基-噻唑-5-基)-乙氧基]-芐氨基卜丙氨基)-4H-噻吩并[3，2-6]吡啶-7-酮在濃度^).25i^g/mL抑制肉湯中的艱難梭菌生長(zhǎng)。在高細(xì)胞密度、4日齡穩(wěn)定期培養(yǎng)物中，毒素產(chǎn)生受濃度低至0.25jag/mL的以下4種不同MetRS抑制劑抑制(5-[3-(6,8-二溴-苯并二氫吡喃-4-基氨基)-丙氨基]-4H-噻吩并[3,2-6]吡啶-7-酮、5-(3-{3，5-二溴-2-[2-(4-甲基-噻唑-5-基)-乙氧基]-芐氨基}-丙氨基)-4&噻吩并[3，2-6]吡啶-7-酮、二鹽酸R-(+)-5-[3-(6,8—二溴-苯并二氫吡喃-4-基氨基)-丙氨基]-4H-噻吩并[3,2-6]吡啶-7畫酮、三鹽酸5-[3-(6,8-二溴-l,2,3，4-四氫-喹啉-4-基氨基)國(guó)丙氨基]-4H-噻吩并[3，2-6]吡啶-7-酮)。相反，需要濃度高得多(4》16pg/mL)的參比藥(甲硝唑、萬古霉素、左氧氟沙星)來抑制毒素產(chǎn)生。結(jié)論MetRS抑制劑對(duì)肉湯培養(yǎng)中的艱難梭菌生長(zhǎng)及毒素產(chǎn)生顯示抑制作用。此外，穩(wěn)定期培養(yǎng)中的毒素產(chǎn)生受到有效阻斷。作為抑菌性MetRS抑制劑抑制毒素產(chǎn)生的結(jié)果，艱難梭菌變得基本上不產(chǎn)生毒素，并且因此變得無致病性。該種效果是蛋白質(zhì)合成抑制劑如MetRS抑制劑獨(dú)有的，其中蛋白質(zhì)合成抑制劑的作用模式不要求細(xì)菌正活躍地生長(zhǎng)。實(shí)施例19:本發(fā)明的化合物影響艱難梭菌中的芽孢產(chǎn)生-艱難梭菌是因能夠形成耐熱、干燥和多種清潔劑如消毒劑的芽胞而聞名的一種生物。環(huán)境中存在的芽孢可以充當(dāng)致病生物的源頭。艱難梭菌感染常常由攝入在胃腸道內(nèi)萌發(fā)并引起CDAD的芽孢引發(fā)。還認(rèn)為芽孢在CDAD治療后滯留于消化道內(nèi)是疾病復(fù)發(fā)的一個(gè)主要原因。降低艱難梭菌產(chǎn)生芽孢或降低芽孢萌發(fā)的能力可能代表這種疾病治療中的重要突破。芽孢外被主要由蛋白質(zhì)組成，芽孢外被的產(chǎn)生需要蛋白質(zhì)合成，預(yù)期抑制活躍蛋白質(zhì)合成將影響這種生物中的芽孢產(chǎn)生。因而，體外評(píng)估了MetRS抑制劑對(duì)艱難梭菌芽孢產(chǎn)生的影響。方法評(píng)估了MetRS抑制劑對(duì)艱難梭菌4個(gè)臨床分離株的芽胞形成的影響，其中所述的臨床分離株包括屬于BIVNAP1基因型的2個(gè)最近暴發(fā)的分離株。艱難梭菌菌株在補(bǔ)充布氏血上培育24-48小時(shí)，并且將菌落懸浮在鹽水中以獲得與0.5McFarland標(biāo)準(zhǔn)物等效的濁度。將艱難梭菌的混懸液(10mL)涂布在補(bǔ)充有5%已溶綿羊血的新鮮布氏瓊脂平板的表面上，所述的新鮮布氏瓊脂平板含有濃度0.06-2pg/mL的MetRS抑制劑，并且在35°C以厭氧方式溫育96小時(shí)。還涂布用來接種含MetRS的平板的等分的相同細(xì)胞混懸液用于活力計(jì)數(shù)，并且額外的250pL等份試樣用250mL無水乙醇在室溫下處理1小時(shí)以消除營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞并允許計(jì)數(shù)芽孢。在化合物存在下溫育96小時(shí)后再次對(duì)全部4種菌株測(cè)定芽孢/總細(xì)胞比，并且并將其用于比較MetRS抑制劑與不含藥物的對(duì)照對(duì)芽孢形成率的影響。結(jié)果.-4種艱難梭菌菌株中有3種菌株產(chǎn)生可測(cè)量數(shù)目的芽孢并且如上所述進(jìn)行評(píng)估。在全部菌株中，用5-[3-((R)-6，8-二溴-苯并二氫吡喃-4-基氨基)-丙氨基]-4H-噻吩射3，2-6]吡啶-7-酮(式DC,實(shí)施例2)對(duì)全部菌株的處理顯示在0.25xMIC(〈2。/。芽孢)和0.5xMIC(〈。/。芽孢)上減少芽胞產(chǎn)生。這與用甲硝唑治療后獲得的結(jié)果形成鮮明對(duì)比，在甲硝唑治療中測(cè)試的全部菌株在暴露于亞MIC濃度的甲硝唑后表現(xiàn)芽胞產(chǎn)生顯著增加(至多到100%芽孢)。萬古霉素處理在2種菌株中誘導(dǎo)了相似的芽胞產(chǎn)生增加，但在1種菌株中沒有誘導(dǎo)相似的芽胞產(chǎn)生增加，其中芽胞計(jì)數(shù)仍然是低的。結(jié)論在亞MIC(0.25x和0.5xMIC)上的5-[3-((R)-6，8-二溴-苯并二氫吡喃-4-基氨基)-丙氨基]-4H-噻吩并[3，2-6]吡啶-7-酮有效地阻止艱難梭菌的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞形成芽孢。這些數(shù)據(jù)表明5-[3-((R)-6,8-二溴-苯并二氫吡喃-4-基氨基)-丙氨基]—4H-噻吩射3，2-6]吡啶-7-酮也可能在防止暴發(fā)和降低復(fù)發(fā)率中發(fā)揮有用功能，其中復(fù)發(fā)率與環(huán)境中艱難梭菌芽孢的廣泛流行相關(guān)。雖然本發(fā)明已經(jīng)參考眾多實(shí)施方案具體地進(jìn)行顯示和描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)理解，可以對(duì)本文中披露的多種實(shí)施方案作出形式和細(xì)節(jié)方面的改變而不脫離本發(fā)明精神和范圍，并且本文披露的多種實(shí)施方案不意圖起到限制權(quán)利要求范圍的作用。權(quán)利要求1.式(IIa)或(IIb)的旋光化合物其中X選自由NH、O、S、SO、SO2或CH2組成的組；n是1、2或3；*代表不對(duì)稱碳原子，其中當(dāng)n是2或3時(shí)，則*是R構(gòu)型；其中當(dāng)n是1且X是CH2時(shí)，則*是R構(gòu)型；并且其中當(dāng)n是1且X選自由NH、O、S、SO或SO2組成的組時(shí)，則*是S構(gòu)型；R1獨(dú)立地選自鹵素、氰基、羥基、(C1-6)烷基(任選地由鹵素、羥基、氨基、羧基或(C1-6)烷氧羰基取代)、(C3-7)環(huán)烷基、(C1-6)烷氧基、氨基、單-或雙-(C1-6)烷基氨基、?；被?、羧基、(C1-6)烷氧羰基、羧基(C1-6)烷氧基、(C1-6)烷硫基、(C1-6)烷基亞磺酰基、(C1-6)烷基磺?；?、氨磺酰、單-和雙-(C1-6)烷基氨磺酰、氨基甲?；?、單-和雙-(C1-6)烷基氨基甲?；碗s環(huán)；m是0、1、2、3或4；p是0、1、2或3；R2獨(dú)立地選自鹵素、氰基、羥基、(C1-6)烷基(任選地由鹵素、羥基、氨基、羧基或(C1-6)烷氧羰基取代)、(C3-7)環(huán)烷基、(C1-6)烷氧基、氨基、單-或雙-(C1-6)烷基氨基、酰基氨基、羧基、(C1-6)烷氧羰基、羧基(C1-6)烷氧基、(C1-6)烷硫基、(C1-6)烷基亞磺?；?、(C1-6)烷基磺酰基、氨磺酰、單-和雙-(C1-6)烷基氨磺酰、氨基甲酰基、單-和雙-(C1-6)烷基氨基甲?；碗s環(huán)；并且當(dāng)Z1是S時(shí)，Z2和Z3是CH；當(dāng)Z2是S時(shí)，Z1和Z3是CH；并且當(dāng)Z3是S時(shí)，Z1和Z2是CH。2.權(quán)利要求1的旋光化合物，具有式(III):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>3.權(quán)利要求2的旋光化合物，其中(R"m是第6、8位取代并且可以是相同或不同的取代基，其中所述的取代基選自由溴、氯、碘和硫垸組成的組。4.權(quán)利要求1的旋光化合物，具有式(IV):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>5.權(quán)利要求4的旋光化合物，其中(R^是第6、8位取代并且可以是相同或不同的取代基，其中所述的取代基選自由溴、氯、碘和硫烷組成的組。6.權(quán)利要求1的旋光化合物，具有式OO:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>7.權(quán)利要求6的旋光化合物，其中(R')m是第5、7位取代并且可以是相同或不同的取代基，其中所述的取代基選自由溴、氯、碘和硫烷組成的組。8.權(quán)利要求1的旋光化合物，其選自于以下化合物組成的組5-[3-((R)(-)-5,7-二溴-l,2，3,4-四氫-萘-l-基氨基)-丙氨基]-4H-噻吩并[3，2-6]吡啶-7-酮；5-[3-((R)(+)-8-溴-6-氯-苯并二氫吡喃-4-基氨基)-丙氨基]-4H-噻吩并[3,2-6]吡啶-7-酮；5-[3-((R)(+)-6，8-二溴-l,2,3，4-四氫-喹啉-4-基氨基)-丙氨基]-4H-噻吩并[3,2-6]吡啶-7-酮；5-[3-((R)(+)-6,8-二溴-苯并二氫吡喃-4-基氨基)-丙氨基]-4H-噻吩并[3,2-6]吡啶-7-酮；2-[3-((R)(+)-6，8-二溴-苯并二氫吡喃-4-基氨基)-丙氨基]-lH-喹啉-4-酮；和5-[3-((S)-5,7-二溴-苯并呋喃-3-基氨基)-丙氨基]-4H-噻吩射3，2-6]吡啶-7-酮。9.權(quán)利要求1的化合物的鹽。10.權(quán)利要求9的鹽，其中所述鹽是可藥用鹽。11.權(quán)利要求l的化合物，其用于治療細(xì)菌感染。12.用于治療人的細(xì)菌感染的方法，包括給所述人施用治療感染有效量的權(quán)利要求1的化合物。13.用于治療人的細(xì)菌感染的藥用組合物，其包含有效量的權(quán)利要求1的化合物，從而減少所述細(xì)菌的生長(zhǎng)，該制劑還包含可藥用載體或賦形劑。全文摘要本發(fā)明披露了作為細(xì)菌甲硫氨酰合成酶((MetRS)抑制劑的處于對(duì)映體過量的新化合物。還披露了所述化合物的制備方法和它們作為抗菌藥在治療中的用途、尤其是它們?cè)谥委熎D難梭菌感染中的用途。文檔編號(hào)A61K31/4743GK101652140SQ200780043263公開日2010年2月17日申請(qǐng)日期2007年9月11日優(yōu)先權(quán)日2006年9月26日發(fā)明者A·C·哲爾克什,J·吉萊絲,N·亞尼奇,S·斯特朗,孫喜成申請(qǐng)人:克萊斯通公司