專利名稱：：藥物和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及方法和化合物，例如雄甾-5-烯-3p,4(3,16ot，17p-四醇，用于調(diào)節(jié)炎癥、代謝性病癥和本文中所述的其它病況。使用化合物調(diào)節(jié)炎癥可用于以下病況的治療、改善、預(yù)防或延緩其進展，例如2型糖尿病、高血糖癥、肺炎癥狀態(tài)(例如，囊性纖維化)、急性或慢性哮喘/急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)或慢性阻塞性肺病(COPD)以及自身免疫病癥例如多發(fā)性硬化、關(guān)節(jié)炎或紅斑狼瘡。
背景技術(shù)：
：有許多因素有助于許多慢性自身免疫病癥和炎癥的形成和維持。通常，這種病癥的病因?qū)W沒有得到充分了解。腫瘤壞死因子-a(TNFoc)是首先由單核吞噬細胞應(yīng)答多種免疫刺激劑而釋放的細胞因子。在對動物或人給予時，其引起炎癥、發(fā)燒、心血管作用、出血、血凝固和與急性感染和休克狀態(tài)過程中所看到的那些相似的急性期應(yīng)答。因此，過量的或不受調(diào)節(jié)的TNFa生成牽涉許多疾病狀態(tài)。這其中包括內(nèi)毒素血癥和/或中毒性休克綜合征，例如，Tracey等人，Nature330:662-664(1987)和Hinshaw等人，Circ.Shock30:279-292(1990);惡病質(zhì)，例如，Dezube等人，Lancet,335(8690):662(1990);禾口ARDS，其中已經(jīng)在ARDS患者的肺抽出物中發(fā)現(xiàn)了高的TNFcx濃度。例如，Millar等人，Lancet2(8665):712-714(1989)。TNFa還似乎牽涉骨吸收疾病，包括關(guān)節(jié)炎。在被活化時，白細胞可以產(chǎn)生骨-再吸收，TNFa可以對這一活性有所貢獻，例如，Bertolini等人，Nature319:516-518(1986)和Johnson等人，Endocrinology124(3):1424-1427(1989)。TNFa還已經(jīng)表現(xiàn)出在體外和體內(nèi)通過刺激破骨細胞形成和活化以及抑制成骨細胞功能而刺激骨吸收和抑制骨形成。已經(jīng)證明用單克隆的抗-TNFa抗體阻斷TNFa在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Elliot等人，Int.J.Pharmac.17(2):141-1451995)和克隆病(vonDullemen等人，Gastroenterology,109(1):129-1352005)中是有利的。核因子-KB(NF-KB)分子在許多臨床病況中是炎癥的遞質(zhì)。用于治療炎癥的一些治療劑例如地塞米松、潑尼松或氫化可的松是糖皮質(zhì)激素受體(GR)激動劑，它們通過增加GR的活性而間接地抑制NF-kB，例如，H,Harkonarson等人，Am.J.Respir.CellMol.Biol.25:761-771,2001。然而，天然的GR激動劑的升高水平和合成的GR激動劑的藥理學(xué)水平通常產(chǎn)生不需要的毒性，包括顯著的免疫抑制和骨質(zhì)量損失或骨質(zhì)減少，例如，T丄.Popper等人，Antiinflammatoryagents:Anti-inflammatorysteroids,RA.Scherer&M.W.Whitehouse編輯,AcademicPress,NewYork,第9章，第1巻，第245-294頁，1974。與糖皮質(zhì)激素有關(guān)的許多不需要的毒性都是由GR的活化引起的。因此，鑒定可以抑制NF-kB活性而不通過活化GR引起這些毒性的化合物代表了一類可用于治療炎癥和相關(guān)癥狀例如疼痛、發(fā)燒或疲勞的藥物。不需要的或損壞性的炎癥發(fā)生在許多慢性或急性病況中，例如，ARDS、COPD和膿毒病中?；罨膯魏思毎褪戎行粤＜毎诮閷?dǎo)炎癥相關(guān)的病理學(xué)中起作用。特別重要的是活化的嗜中性粒細胞，其表現(xiàn)出細胞核中的NFk-B轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的積累增加和促炎細胞因子的產(chǎn)生增加。嗜中性粒細胞也是毒性氧物質(zhì)的來源，毒性氧物質(zhì)的產(chǎn)生至少部分地通過活化巨噬細胞來介導(dǎo)腫瘤壞死因子-a(TNF-a)分泌，這可能是在膿毒病中所見的器官損傷和衰竭所必需的。與炎癥有關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)可以通過不同的途徑發(fā)生，并且這可以提高受影響的細胞中的NF-kB活性。NF-kB被腫瘤壞死因子-a(TNF-a)活化從TNF-a結(jié)合于細胞膜上的TNF-ot受體開始，隨后是一系列信號轉(zhuǎn)導(dǎo)物(包括MAP激酶)的活化。NF-kB在細胞質(zhì)中的活化引起其易位到細胞核中并且引起在啟動子中包含NF-kB應(yīng)胞質(zhì)的NF-kB被細菌脂多糖(LPS)活化從LPS結(jié)合于細胞表面上的Toll樣受體4開始，并且隨后發(fā)生胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)物的活化，包括磷脂酰肌醇-3-激酶的活化。已知TNF-a和LPS都在體內(nèi)和在體外在細胞中誘導(dǎo)強烈的炎癥性應(yīng)答。應(yīng)答這種促炎性信號的細胞包括巨噬細胞、單核細胞和其它類型的免疫細胞。有多種T細胞亞群似乎在某些疾病狀態(tài)的發(fā)展過程中起作用。已經(jīng)提出了包括調(diào)節(jié)性和/或抑制性T細胞在內(nèi)的獨特的T細胞群在介導(dǎo)免疫力的各個方面中的重要作用，例如，E.Suri-Payer等人，J.Immunol.,160(3):1212-1218,1998;J.Shimizu等人，J.Immunol.,163(10):5211-5218,1999;M.Itoh等人，J.Immunol.,162(9):5317-5326,1999;A.M.Miller等人，J.Immunol.,177:7398-7405,2006。CD4+CD25+T細胞可以在抑制一些免疫應(yīng)答中起作用。已經(jīng)描述了在動物模型中對這些T細胞亞群中的一些進行的研究，例如在美國專利6,593,511中。例如，在scid/scidCD4+CD45Rbhi模型中考查了對于研究人自身免疫病況的作用。這個動物模型已經(jīng)用于研究失調(diào)的免疫應(yīng)答，例如炎癥狀況和用于評價實驗藥物和治療規(guī)程，例如，K.Hong等人，J.Immunol.,162:7480-7491,1999;Powrie等人，J.Exp.Med.,183(6):2669-2674,1996。由胸腺上皮誘導(dǎo)的Foxpro3基因可以在誘導(dǎo)T細胞形成CD4+CD25+或CD4+CD25high(TregT細胞或調(diào)節(jié)性T細胞)表現(xiàn)型中起作用。CD25表面抗原是IL-2受體a-鏈。在一些自身免疫疾病的動物模型中，F(xiàn)oxpro3基因缺乏與自身免疫疾病的發(fā)生有關(guān)，例如，美國專利申請2006/0111316。這種基因的恢復(fù)似乎是減少自身免疫異常。已經(jīng)描述了用于CD4+CD25+細胞的各種試劑或試驗規(guī)程，例如，H.Yagietal.,InternationalImmunol.,16(11):1643-1656,2004;W.R.Godfrey等人，Blood,105(2)750-758，2005。8早已經(jīng)認識到了不耐受葡萄糖的受試者的胰島素耐受。Reaven等人(AmericanJournalofMedicine,60(l):80-88,1976)使用連續(xù)輸注的葡萄糖和胰島素(胰島素/葡萄糖鉗夾技術(shù))和口服葡萄糖耐量試驗來證明在不同的非肥胖、非酮癥受試者組中存在胰島素耐受。這些受試者從臨界葡萄糖耐受到明顯的空腹高血糖癥而不同。這些研究中的糖尿病組包括胰島素依賴型的(IDDM)和非胰島素依賴型(NIDDM)的受試者。與持續(xù)的胰島素耐受一致的是更容易確定的高胰島素血癥，其可以通過精確測定受試者血漿中的循環(huán)血漿胰島素濃度來測量。高胰島素血癥可以作為胰島素耐受的結(jié)果出現(xiàn)，例如在肥胖和/或糖尿病(NIDDM)受試者中和/或葡萄糖不耐受受試者中，或者在IDDM受試者中，是作為與內(nèi)分泌腺胰腺正常生理學(xué)釋放的胰島素相比過量注射胰島素的結(jié)果出現(xiàn)的。已經(jīng)通過實驗性的臨床和流行病學(xué)研究描述了高胰島素血癥與肥胖癥和與大血管缺血性疾病(例如，動脈粥樣硬化)的關(guān)聯(lián)(Stout，Metabolism,34:7，1985;Pyorala等人，Diabetes/MetabolismReviews,3:463，1987)。在口服葡萄糖負荷之后的1和2小時出現(xiàn)的統(tǒng)計學(xué)顯著性的血漿胰島素上升與增加的冠心病危險有關(guān)。人糖尿病的一種模型是db/db小鼠。對db/db小鼠模型已經(jīng)有所描述，例如，D.Koya等人，TheFASEBJournal,14:439-447,2000;K.Kobayashi等人，Metabolism,49(1):22-31，2000;J.Berger等人，J.Biol.Chem.,274(10):6718-6725，1999。db/db小鼠在編碼瘦素受體的基因上具有突變，隨著其功能性胰腺p-細胞團塊隨時間惡化，賦予了以食欲過盛、肥胖癥、胰島素耐受和糖尿病為特征的表型，特別是對于C57BL/Ks遺傳背景的動物而言。db/db小鼠典型地在約3到4周齡時變得明顯肥胖并且在10到14天血漿胰島素開始上升?？梢栽?到8周齡觀察到血糖升高，具有失控的血糖增加，胰島的生產(chǎn)胰島素的卩-細胞嚴重耗竭，并且在約10月齡時死亡。這個模型已經(jīng)被用于表征藥物候選物影響與糖尿病的形成和維持有關(guān)的參數(shù)(例如，高血糖癥和體重增加)的進展開始或其速率的能力。用PPAR-y激動劑治療糖尿病已經(jīng)涉及心臟肥大，或者心臟重量增加。用馬來酸羅格列酮(一種PPAR-y激動劑)治療顯示，患者可能經(jīng)歷積液和液體容積相關(guān)事件，例如浮腫和充血性心力衰竭。與PPAR-y激動劑治療有關(guān)的心臟肥大典型地通過中止治療來處理。氫化可的松的生理作用在于其對胰島素的拮抗作用。肝臟中高的氫化可的松濃度可以降低該器官中的胰島素敏感性，其傾向于增加糖原異生和增加血糖水平(M.F.Dallman等人，F(xiàn)rontNeuroendocrine.,14:303-347,1993)。這種作用加重了葡萄糖耐量低減或糖尿病。在由過多的氫化可的松的循環(huán)濃度引起的庫氏綜合征中，在易感個體中的對胰島素的拮抗作用可以引起糖尿病(E丄Ross等人，Lancet,2:646-649,1982)。氫化可的松可以在體內(nèi)通過11(5-羥類固醇脫氫酶的11(5-脫氫酶活性轉(zhuǎn)化為可的松。其逆反應(yīng)，即無活性的可的松轉(zhuǎn)化為活性的氫化可的松，是在某些器官中由這些酶的llp-還原酶活性實現(xiàn)的。這種活性又稱為皮質(zhì)類固醇lip-還原酶活性。11(3-羥類固醇脫氫酶有至少兩種獨特的同功酶。在多種細胞系中11P-HSD1型的表達產(chǎn)生雙向的酶或占優(yōu)勢的11(5-還原酶，其可以從否則為無活性的11-酮類固醇母體再生ll卩-羥類固醇。線粒體磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(又稱為PEPCK-線粒體，PEPCK-M，PCK2和mtPEPCK)在各種人組織中表達，主要在肝臟、腎臟、胰臟、腸和成纖維細胞中表達(Modaressi等人，Biochem.J.,333:359-366,1998)。盡管沒有充分記載，但是PEPCK-線粒體缺乏已經(jīng)涉及發(fā)育停滯、低血糖和肝臟異常。與胞漿形式(PEPCK-C)不同，線粒體形式(PEPCK-線粒體)是組成型表達的，并且不受激素刺激調(diào)節(jié)(Hanson和Patel，Adv.Enzymol.Relat.AreasMol.Biol"69:203-281，1994)。兩種形式都位于單獨的染色體上，定位在染色體14qll，而PEPCK-C存在于染色體20qll上(Stoffel等人，Hum.Mol.Genet,2:1-4，1993)。多發(fā)性硬化(MS)是作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性疾病的一種自身免疫疾病(Bar-Or,A.,J.Neuroimmunol.100:252-259，1999)。盡管最近該疾病的自然過程通過用免疫調(diào)節(jié)性-免疫抑制性化合物例如干擾素(IFN)-卩、共聚物、環(huán)磷酰胺和米托蒽醌進行治療而得到改善(Hafler,D.A.和Weiner，H丄.，ImmunologicalReviews144:75,1995;Goodkin,D.E.,Lancet352:1486,1998)，但是這些藥物中沒有一個可以阻斷疾病的進展，并且他們中有一些具有限制其長期應(yīng)用的嚴重副作用。另外，顯著數(shù)量的患者表現(xiàn)出差的對IFN-(3的應(yīng)答，包括復(fù)發(fā)緩解型患者和繼發(fā)進展型MS患者。因此，需要新的化合物，用于在單獨治療或在聯(lián)合治療中通過例如延緩MS的進展來改善其進程。目前需要有成本有效的藥物或治療方法來更有效地治療上述的病況。本發(fā)明提供用于治療這些病況中的一種或多種的治療劑和治療方法。因此，所述藥物和方法可用于減少與本文中所述病況有關(guān)的一種或多種癥狀。另外，本發(fā)明的藥物和方法的應(yīng)用可以與用于這些病癥的一種或多種常規(guī)療法聯(lián)合。發(fā)明詳述實施方案簡述本發(fā)明提供用于治療、預(yù)防、延緩有此需要的哺乳動物中的不期望的炎癥狀況、自身免疫性疾病或代謝病癥或其癥狀的進展或改善所述不期望的炎癥狀況、自身免疫性疾病或代謝病癥或其癥狀的化合物或組合物，任選地，其中所述哺乳動物是人或非人類的靈長類動物，其中組合物包括式1化合物("F1C")，11其中一個Ri是-H或任選被取代的垸基，另一個W是-H、-OH、酯或醚，或者兩個R^—起為0或肟例如-NOH或-NOCH3;酯或醚；一個ie為-H或任選被取代的烷基，另一個W為-H、-OH、酯或醚，或者兩個R2—起為=0或月虧例如zNOH或-NOCH3;—個R3為-H或任選被取代的烷基，另一個W為-H、-OH、酯或醚或任選被取代的垸基，或者兩個RS—起為K)或肟例如NOH或-NOCH3;—個W為-H或任選被取代的烷基，另一個W為-OH、酯或醚，或者兩個^一起為=0或肟例如二NOH或-NOCH3;R5為任選被取代的垸基，任選地選g-CH3、-C2H5和-CH20H;RS為-H或任選被取代的垸基，任選地選自-CH3、-C2H5和-CH20H;—個R"為-H或任選被取代的烷基，另一個F7為-H、-OH、酯或醚，或者在4位不存在雙鍵時，兩個R7—起為0或肟例如NOH或二NOCH3;R9為-0-或-C(R12)(1112^，其中一個R'2為-H、-F、-Br或任選被取代的垸基，另一個R^為-H、-OH、酯或醚或任選被取代的烷基，或兩個R^—起為二0或肟例如二NOH或二NOCH3;R"為-H或鹵素例如-F或-Cl;和一個R"為-H或任選被取代的垸基，另一個R"為-H、-OH、酯或醚或任選被取代的烷基，或者兩個R"—起為K)或肟例如=NOH或二NOCH3。這些化合物的實施方案包括如下的化合物，其中(i)R2、R7、R"和1112中的一個、兩個或三個獨立地為-OH、C2.8酯、d-8醚或=0，(ii)R1、R7、R"和R^2中的一個或兩個是-OH、C2-8酯或C!-8醚和(iii)R1、R2、R7、R"和R12中的一個或兩個為=0或二NOH，并且其余的一個、兩個或三個獨立地為-OH、C2.8酯或d-8醚。5位的氫原子在存在時可以處于a或p構(gòu)型。在4位存在雙鍵時，有一個FJ基團是不存在的。本發(fā)明還提供鑒定或表征具有用于治療或改善哺乳動物的代謝病癥的潛力的化合物的生物活性的方法，包括選擇以下的化合物(i)與體外適當?shù)年幮詫φ杖嘶虿溉閯游锛毎啾?，在體外不使人或哺乳動物細胞中的PPAR-a、PPAR-y和PPAR-S中的一種、兩種或三種活化超過約30%;(ii)與體外適當?shù)年幮詫φ杖嘶虿溉閯游锛毎啾龋隗w外使人或哺乳動物細胞中的NF-kB的轉(zhuǎn)錄活性或水平抑制或減少約20-80%;(iii)與適當?shù)年幮詫φ栈蛘φ障啾?，減輕高血糖癥，延緩高血糖癥的進展或延遲其發(fā)病，增加胰島素敏感性，降低葡萄糖不耐性，延緩胰腺(3-小島細胞數(shù)量或它們分泌胰島素的能力喪失的進展和速率，增加胰腺p-小島細胞數(shù)量或它們分泌胰島素的能力，延緩db/db小鼠或患有膳食誘導(dǎo)的或膳食相關(guān)的肥胖癥的受試者的體重增加速率，降低升高的甘油三酯水平，較低升高的總的血液或血清膽固醇水平，降低血液或血清中正?；蛏叩腖DL、VLDL、apoB-100或apoB-48水平，或增加血液或血清中正?；蜉^低的HDL或apoAl水平或降低血液或血清中升高的纖維蛋白原水平；和(iv)任選地，與體外適當?shù)年幮詫φ杖嘶虿溉閯游锛毎啾龋隗w外不使人或哺乳動物細胞中的以下的一種或多種活化超過約30%:糖皮質(zhì)激素受體、鹽皮質(zhì)激素受體、孕激素受體、雄激素受體、雌激素受體-a、雌激素受體-(5或這些生物分子中的任一種的生物學(xué)活性變體。所述方法允許鑒定或表征具有用于治療或改善人或另外的哺乳動物中的代謝病癥的潛力的化合物。實施方案還包括包含式1化合物的組合物，用于預(yù)防或治療自身免疫病況、不期望的炎癥狀況或代謝病癥或任何這些病況的癥狀。其它實施方案如說明書中其它地方的描述，包括在此處所述的實施方案。定義。如本文中使用的和除非上下文另有說明或暗示，本文中使用的術(shù)語具有此處定義的含義。所描述的對實施方案和實施例的說明用于舉例說明本發(fā)明，它們不打算以任何方式構(gòu)成限制。除非另有限13制或暗示，例如，通過包括相互排斥的元素或選項，在這些定義中以及在本說明書中，術(shù)語"一"和"一個"是指一個或多個，術(shù)語"或"是指和/或。"制劑"和類似的術(shù)語是指可以對受試者(例如，人或動物)給予的組合物。所述制劑適合于人或獸醫(yī)應(yīng)用并且典型地具有對于所述制劑而言所期望的特征，例如，用于人的非腸道制劑通常是無菌的溶液劑或懸浮劑。"賦形劑"、"載體""藥學(xué)可接受的載體"或類似術(shù)語是指在與本發(fā)明的組合物或制劑的其它成分相容并且不會對給予所述制劑的患者、動物、組織或細胞產(chǎn)生過分傷害的意義上是可接受的一種或多種組分或成分。"受試者"是指人或動物。通常，動物為哺乳動物，或者例如非人類的靈長類動物、嚙齒動物、兔類動物、家畜或狩獵動物。靈長類動物包括黑猩猩、食蟹猴、蜘蛛猿和獼猴，例如，恒河猴或黑猩猩屬。嚙齒類和兔類動物包括小鼠、大鼠、旱獺、雪貂、兔和倉鼠。本文中使用的"垸基"是指連接的正鏈碳、仲碳、叔碳或環(huán)狀碳原子，即，直鏈、支鏈、環(huán)狀或其任何組合。如本文中使用的烷基可以是飽和的或不飽和的，即，所述基團可以包括一個、兩個或更多個獨立選擇的雙鍵或三鍵。不飽和的烷基包括如下對于烯基和炔基所述的基團。除非另作說明，垸基中的碳原子數(shù)目為1到約50，例如，約1-30或約1-20，例如，Cm院基是指包含1、2、3、4、5、6、7或8個碳原子的烷基。在詳細說明烷基時，所述基團可以包括甲基、乙基、1-丙基(正丙基)、2-丙基(異丙基、-CH(CH3)2)、l-丁基(正丁基)、2-甲基-l-丙基(異丁基、-CH2CH(CH3)2)、2-丁基(仲丁基、-CH(CH3)CH2CH3)、2-甲基-2-丙基(叔丁基、-C(CH3)3)、l-戊基(正戊基)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-l-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-l-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、l-己基、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-(:(013)2(:112012(:113)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(陽C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3)、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、-(CH2)n-(CHCH3)m-(CH2)o-CH3和-(CH2)n-(CHC2H5)m-(CH2)o-CH3，其中n、m和o獨立地為0、1、2、3、4、5、6、7或8。本文使用的"烯基"是指包括連接的正鏈碳、仲碳、叔碳或環(huán)狀碳原子的基團，g卩，直鏈、支鏈、環(huán)狀或其任何組合，其包括一個或多個雙鍵(例如，-CH=CH-)，例如，1、2、3、4、5、6或更多個雙鍵，典型地為1或2個雙鍵。除非另作說明，烯基中的碳原子數(shù)目為2到約50個，例如，約2-30個或約2-20個，例如，C2.8烯基或C2-8烯基是指包含2、3、4、5、6、7或8個碳原子的烯基。在詳細說明烯基時，該物質(zhì)可以包括乙烯基、烯丙基、-(CH2)n-(CH=CH)-(CH2)m-CH3、-(CH2)n-(CCH3=CH)-(CH2)m-CH3、-(CH2)n-(CH=CCH3)-(CH2)m-CH3和-(CH^n-CCI^CHVrCCHdm-CHzCHK:!^,其中n和m獨立地為0、1、2、3、4、5、6、7或8。本文使用的"炔基"是指包括連接的正鏈碳、仲碳、叔碳或環(huán)狀碳原子的基團，S卩，直鏈、支鏈、環(huán)狀或其任何組合，其包括一個或多個三鍵(-OC-)，例如，1、2、3、4、5、6個或更多個三鍵，典型地為1或2三鍵，任選地包括1、2、3、4、5、6更多個雙鍵，其余的鍵為單鍵。除非另作說明，否則炔基中的碳原子數(shù)目為2到約50，例如，約2-30或約2-20，例如，<:2.8炔基或。2-8炔基是指包含2、3、4、5、6、7或8個碳原子的炔基。在詳細說明炔基時，所述基團可以包括-CCH、15-CCCH3、-CCCH2CH3、-CCC3H7、-CCCH2C3H7、-(CH2)n-(OC)-(CH2)m-CH3和-(CH2)n-(OC)o.廣(CH2)m-CH20CH，其中n和m獨立地為0、1、2、3、4、5、6、7或8。"取代的垸基"、"取代的烯基"、"取代的炔基"和類似的術(shù)語是指本文中定義的烷基、烯基、炔基或其它基團，其具有取代基、或者包括代替氫原子并且結(jié)合于碳原子的取代基、或中斷碳原子鏈的取代基。取代基包括l、2、3、4、5、6或更多個獨立選擇的-F、-Cl、-Br、-1、陽0H、-ORPR、-SH、-SCH3、-O-、-S-、-NH-、-C(O)-、-C(0)ORpr、-CHO、-CH2SH、-C=N-、-C(0)ORPR、-C(0)CH3，其中RPR獨立地為氫、保護基或兩個RPK都是氫或都是保護基。"鹵素"是指氟、氯、溴或碘。"酯"是指包括-C(O)-O-結(jié)構(gòu)的基團。典型地，本文中使用的酯包括含約i_50個碳原子(例如，約2-20個碳原子)和0到約10個獨立選擇的雜原子(例如，O、S、N、P、Si)的有機基團，其中有機基團在例如Ri或ie處通過-C(0)-0-結(jié)構(gòu)結(jié)合于式1的類固醇核，例如，有機基團-C(O)-O-類固醇或有機基團-O-C(O)-類固醇。有機基團通常包括上述任何有機基中的一種或多種，例如，Cl20院基、C2.20烯基、C2.2。炔基、芳基、C2.9雜環(huán)或這些中任一種的被取代的衍生物，例如，包括l、2、3、4或更多個取代基，其中每個取代基是獨立選擇的。酯包括丁二酸、二羧酸和氨基酸的酯，例如-0-C(0)-(CH2)n-C(0)-ORPR、-0-C(0)-(CH2)n-NHRPR、，t]-NH-(CH2)n-C(0)-ORPR，其中n為1、2、3、4、5、6、7或8和RPK為-H或保護基，例如d.4垸基。酯還包括結(jié)構(gòu)例如-0-C(0)-0-(CH2)n-H和-0-C(0)-NH-(CH2)n-H。這些有機基的氫或碳原子的示例性取代如上述對于取代的烷基所述的，并且包括l、2、3、4、5、6或更多個，通常l、2或3個-0-、-S-、-NRPR-CS^S-NH-)、-C(O)畫、-CHO、-CHS、-C=NH、-C(S)、=0、16=S、-N(RPR)2(包括-NH2)、-C(0)0RPR(包括-C(0)0H)、-0。(0)1^11(包括-o-c(o)-h)、-orpR(包括-oh)、.srpR(包括-sh)、-no2、-cn、-scn、-c6h5、-ch2c6h5、-nhc(o)-、-c(o)nh-、-oc(o)-、-c(o)o-、-0-a8、-s-a8、-c(0)-a8、-oc(0)-a8、-c(0)0-a8、=n-、-n=、=n-oh、-OP03(RPR)2、-OS03H2或卣素基團或原子，其中每個RPR為-H、獨立選擇的保護基或兩個RPK都包括保護基，并且a8為d-8烷基、C2-8烯基、C2.8炔基、CM烷基-芳基(例如，芐基)、芳基(例如，苯基)或C(M垸基-<:2.9雜環(huán)。取代是獨立選擇的。有機基團包括通過R"變量定義的化合物。所述有機基團排除明顯不穩(wěn)定的基團，例如，-O-O-，除非這種不穩(wěn)定的基團是用于制備具有足夠化學(xué)穩(wěn)定性的用于本文所述的一種或多種應(yīng)用的化合物的過渡物質(zhì)，包括用于合成式1化合物或其它化合物。上述列舉的取代典型地是可用于代替一個或多個碳原子的取代基，例如，-O-或-C(O)-，或用于代替一個或多個氫原子的取代基，例如，卣素、-NH2或-OH。示例性的酯包括一個或多個獨立選擇的乙酸酯、庚酸酯、丙酸酯、異丙酸酯、環(huán)丙酸酯、異丁酸酯、正丁酸酯、戊酸酯、已酸酯、異已酸酯、己酸酯、庚酸酯、辛酸酯、壬酸酯、癸酸酯、十一烷酸酯、苯乙酸酯或苯甲酸酯，其典型地是羥基酯。酯還包括氨基酸酯、碳酸酯和氨基甲酸酯，包括-0-C(0)-CH2-NHRPR、-0-C(0)-CH2CH2-NHRPR、-0-C(0)-CH(CH3)-NHRPR、-0-C(0)-CH2CH(CH3)-NHRPR、-0-C(0)-CH(NHRPR)-CH(ORPR)-CH3、-0-C(0)-0-(CH2)m-H和-0-C(0)-NH-(CH2)m-H,其中RPR為-H或保護劑例如CL4烷基(-CH3、-C2H5、-C3H7等)或-C(0)-CH3或-CH2CH2-0-CH3，和m為0、1、2、3、4、5或6。酯還包括-0-C(0)-(CF2)n-CF3、-0-C(0)-(CH2)n-CH3、-0-C(0)-CH(CH3)-(CH2)n-CH3和-0-C(0)-C(CH3)2-(CH2)n-CH3，其中n為0、1、2、3、4、5或6。"醚"是指包括1、2、3、4或更多個(通常1或2個)-O-基團的如對于酯所述的有機基團。在一些實施方案中，-O-基團在不同的基團(例如R1、R2、R3、W或RU)處連接于類固醇核，例如，有機基團-O-類固醇。所述有機基團如上述對于酯所述的。醚包括-0-(CH2)n-CH3、-0-CH2(CH2)n-0-CH3、-0-CH2(CH2)n-S-CH3和-0-CH(CH3)-(CH2)n-CH3，其中n為0、1、2、3、4、5或6。式1化合物。在一些實施方案中，式l化合物具有3、4或5個羥基，任選地，其中的一個、兩個或更多個被相同或不同的酯基酯化。在這些實施方案中的一些中，羥基或酯處于3-、4-、16-、和17-位，其中處于3-、4-和16-位的羥基或酯分別處于p，p,oc、(5,(5,(5、ot，卩，a、a,(5,p、卩,a,a、p，a，(3、a，a，a或a，a，(3構(gòu)型。17-位的羥基或酯典型地處于(3構(gòu)型，但是可以為a構(gòu)型。這些化合物中的R"典型地為-H或鹵素，例如-F，RS任選地為-CH3或-C2H5，和RM壬選地為-H或-CHs。對于這些化合物中的一些，可以在7-位或11-位存在有(5構(gòu)型或a構(gòu)型的另外的羥基或酯。對于式l化合物，取代的Cl8院基包括-CH2F、-CF3、-012011和-C2F5。任選被取代的C2.8炔基包括-CCH、-CCCH3、-CCCH20H、-CCCH2C1禾口-CCCH2Br。示例性的式1化合物包括雄甾-5-烯-3p,鄰,7p,16a，17P-五醇和這個化合物的其中一個或兩個羥基差向異構(gòu)化的差向異構(gòu)體，例如，雄甾-5-烯-3a,4(5，7(5，16a,17p-五醇、雄甾-5-烯-3卩,401,701,1601,17(5-五醇和雄甾-5-烯-3(3,4(5，7a,16(3,17p-五醇。其它的式1化合物包括其中存在有5個獨立選擇的-OH、酯或醚基團的那些，例如，雄甾-5-烯-3卩，4(3,11卩,1600，17(3-五醇以及這個化合物的其中一個或兩個羥基差向異構(gòu)化的差向異構(gòu)體，例如，雄甾-5-烯-3a,4(3,llp,16a，17p-五醇、雄甾-5-烯-3(5,4(5,11(3，1601,1706-五醇、雄甾-5-烯-3(3,4卩,1106，1601，17(5-五醇和雄甾-5-烯-3p，4a，ll(5,16卩，17p-五醇。對于這種化合物，5個羥基中的一個、兩個或更多個可以被衍生化，例如，衍生為酯或醚，例如甲氧基、乙氧基、乙酰氧基、丙酰氧基、-0-C(0)-(CH2)rH、-0-C(0)-(CH2)4-H或-0-C(0)-(CH2)5-H衍生物。其它酯包括-0-C(0)-CH2-C(0)0H、-0-C(0)-(CH2)2-C(0)OH、-0-C(0)-(CH2)3-C(0)OH、-0-C(0)-(CH2)4-C(0)OH、-0-C(0)-(CH2)5-C(0)OH和-0-C(0)-(CH2)6-C(0)OH。在這些實施方案中的一些中，在式1化合物的2-、3-、4-、7-、ll-、16-和17-位中的四個位置存在有四個獨立選擇的羥基、酯或醚。這種取代基可以結(jié)合于例如，2-、3-、16-和17-位；2-、3-、7-和17-位；2-、3-、11-和17-位；3-、4-、7-和17-位；3-、4-、11-和17-位；3-、7陽、16-和17-位;3-、4-、16-和17-位或3-、ll-、16-和17-位。在4-沒有雙鍵時，所述羥基、酯或醚可以分別地為2-和/或3-p,(3，(3，(3-17;2-和/或3-卩,(3,p，a-17;2-和/或3-p,卩,a,卩-17;2-和/或3-(5,a，(3,卩-17;2-和/或3隱a,(3，卩，(5-17;2-和/或3-(5,(3，a,a-17;2-和/或3-p，a,p,a-17構(gòu)型，或者為2-和/或3-a，p,p,a-17構(gòu)型。術(shù)語"2-和/或3-|3,(3,(3,(3-17"是指2-位任選被羥基、酯或醚取代和3-位和17-位被羥基、酯或醚取代。在4-沒有雙鍵時，所述羥基、酯或醚可以分別地為2-和/或3-p,a，a,(5-17;2-和/或3國a，卩，a，卩-17;2-和/或3-a,a，(3，卩-17;2-和/或3-卩,a，a,a-17;2-和/或3-a，p,a,a-17;2-和/或3-a,a，(5，a-17;2-和/或3-a,a,a,(3陽17;2-和/或3-(3,a,a,a-17構(gòu)型。這些化合物中的R1Q典型地為-H或-F，115任選地為隱CH3或-C2Hs，和R6任選地為-H、-CH3、-CH2OH、-CCH或-CCCH3。對于這些化合物，2-、3-、4-、7-、ll-、16-和17-位中的一個、兩個或更多個位置被-H或任選被取代的垸基例如-CH3、-C2H5、-CH2=CH2、-CCH、《？3或-<:25取代。在式1化合物的一些實施方案中，可以存在有五個獨立選擇的羥基、酯和/或醚基團。對于這些化合物，羥基、酯和/或醚基團通常處于3-位和17-位和處于3個其它位置。這些取代基可以處于2-、3-、7-、11-和17-位，2-、3-、7-、16-和17-位或2-、3-、ll-、16-和17-位。獨立選擇的羥基、酯和/或醚基團可以處于3-、4-、7-11-和17-位；3-、4-、ll-、16-和17-位；3-、4-、7-、16-和17-位或3-、7-、ll-、16-、17-位。對于這些化合物，在4-位不存在雙鍵時，每個基團可以處于a構(gòu)型或(3構(gòu)型。因此，這些化合物中的取代基可以分別地處于2-和/或193-(3,p，p,(3,卩-17、2-和/或3-卩,(3,卩,p,a-17、2-和/或3-卩,卩,p,a,(3-17、2-和/或3-(5,卩,a,卩,卩隱17、2誦和/或3-(3,a，(5，(3，卩-17、2-和/或3隱a,(3，(5,(3，p國17、2隱和/或3-p,p，p,a,a-17、2-和/或3-{i,[i，a，|3，a-17、2-和/或3-(3,a，(5，(3,a隱17、2-和/或3-a,(3,(5，p,a-17、2-5和/或3-P，(3，a,a，p-17、2-和/或3-(3,a,p,a,卩-17、2-和/或3-a,(5,(3,a,(5-17、2-和/或3-卩,a，a，卩,l3-17、2-和/或3-a,p,a，p,p-17，2-和/或3-a,a，(5,(3,P-17構(gòu)型或分別處于2-和/或3-|3,P，a,a，a-17構(gòu)型。這些化合物中的取代基也可以分別處于2-和/或3-P,a，(5,oc，a-17、2-和/或3-卩，a，a,卩,a-17、2-和/或3-(3,a，a,a,p-17、2-和/或3國a，p,p,a，a-17、2國和/或3-a,p，a，p，a-17、2-和/或3-a,(3,a,a,(5-17、2-和/或3-a，a,(5,(5，a-17、2-和/或3-a,a,卩,a,p-17、2-和/或3-a,a,a，(5，p-17、2-和/或3-(3,a，a,a,a-17、2國和/或3-a,卩,a,a，a-17、2-和/或3-a,a，卩,a,a-17、2-和/或3-a,a,a,p,a-17、2-和/或3-a，a，a,a，(3-17構(gòu)型或處于2-和/或3-a,a,a,a，a-17構(gòu)型。對于本文中所述的式l化合物，16-位可以是未被取代的，目卩，一個或者兩個K為-H，并且在17-位沒有雙鍵時，第二個W可以以ot構(gòu)型或(3構(gòu)型存在于17-位。這種第二個W基團包括任選被取代的Q.8垸基，例如陽CH3、-C2H5、-CF3、-C2F5、-C=CH2、-CCH、-CCCH3或-CCCH2OH。對于這些化合物中的任一個，2-位可以是未被取代的，即，W為-CH2-。在一些實施方案中，W是被取代的，例如，-O-、-CH(OH)-、-CH(酯)-或-CH(醚)-，其中羥基、酯或醚基團處于a或p構(gòu)型。示例性的R9基團為-CH(a-OH)-、墨CH(卩-OH)-、-C(p-CH3)(a-OH)-、-C(a-CH3)(p-OH)-、-CH(a-OCH3)-、-CH(p-OCH3)-、-CH(a-OC(0)CH3)-和-CH((5-OC(0)CH3)-。其它R9基團為-CH(a-OC(0)CH2CH3)-、-CH(P-OC(0)CH2CH3)-、-CH(a-OCH2CH3)-、-CH(P-OCH2CH3)-、-C(p-CH3)(a-OC(0)CH3)4。-C(a-CH3)((3-OC(0)CH3)-。生物動力學(xué)化合物。鑒定或表征生物動力學(xué)化合物的方法可以如上所述進行。所述方法任選地另外包括執(zhí)行一種規(guī)程來測定試驗化合物是否在體外試驗中使急性生物學(xué)應(yīng)答的遞質(zhì)的活性或水平受到約20%或約25%到約70%或約75%的調(diào)節(jié)，任選地，與糖皮質(zhì)激素受體的適當?shù)膮⒖蓟罨瘎┗蜣卓箘├绲厝姿苫驓浠傻乃上啾?，其中試驗化合物不使糖皮質(zhì)激素受體受到超過約10%、約20%或約30%的活化或拮抗。在這些實施方案中，急性刺激或生物學(xué)損害可以是使受試者暴露于充分量的電離輻射或促炎性信號、化合物或組合物，任選地，其中促炎性信號、化合物或組合物為細菌LPS或TNFa、和/或任選地其中急性生物學(xué)應(yīng)答的遞質(zhì)為NF-kB或IkB。急性刺激或生物學(xué)損害可以是對充分數(shù)量的用藥物治療的小鼠和充分數(shù)量的用媒介物對照小鼠給予充足的細菌LPS并且測量試驗化合物對急性生物學(xué)應(yīng)答的遞質(zhì)的影響，所述測量在以下時間進行(i)所述急性應(yīng)答為最大或接近最大，任選地在通過腹膜內(nèi)注射給予細菌LPS之后的約1.5小時，例如，約70-110分鐘或75-105分鐘和(ii)在給予充足的細菌LPS之前和/或之后的一個或兩個其它時間點，任選地在給予充足的細菌LPS之前的一個時間點和在急性應(yīng)答為最大或接近最大之后的一個較晚的時間，任選地在通過腹膜內(nèi)注射給予細菌LPS之后的約2.0或2.5小時，并且任選地其中急性生物學(xué)應(yīng)答的遞質(zhì)為NF-kB或IkB。給予充足的細菌LPS可以任選地實質(zhì)上根據(jù)本文中所述的方法或其適當?shù)淖凅w進行，并且任選地，其中化合物部分地調(diào)節(jié)急性生物學(xué)應(yīng)答的遞質(zhì)的水平或活性的能力實質(zhì)上根據(jù)本文中所述的方法或其適當?shù)淖凅w進行?？梢苑治龅钠渌碳せ蛏飳W(xué)損害包括缺血和一種或多種缺血組織的再灌注；相對低、中或高強度的熱或化學(xué)灼傷；或暴露于其它毒素或毒物下。生物學(xué)損害的影響可以在多種組織或器官中進行評價，例如，脾、血液、骨髓、肺、腦、肝臟、腸、結(jié)腸或心臟?？梢栽u價的變量典型地包括受試者對于所給予的生物學(xué)損害產(chǎn)生最大應(yīng)答的時間或時間段。通常，急性生物學(xué)損害在受試者接受損害的前30分鐘到48小時內(nèi)產(chǎn)生最大的生物學(xué)應(yīng)答。給定的生物分子對急性生物學(xué)損害的最大應(yīng)答通常持續(xù)約15分鐘到約2小時，盡管一些應(yīng)答在給定的時間段開始，并且隨后在數(shù)天或更長時間內(nèi)累積。最大生物學(xué)應(yīng)答的時間段對于評價藥物候選物的效力或作用機理來說是方便的時間段。17a-乙炔基雄甾-5-烯-3p,7(3，17(3-三醇發(fā)揮短暫的、但是非常有效的作用(所述作用消退并且恢復(fù)正常功能)的能力在本文中被稱為生物動力學(xué)應(yīng)答(參見實施例9)。由'生物動力學(xué)試劑'例如17a-乙炔基雄甾-5-烯-3p，7P，17(3-三醇引起的生物動力學(xué)應(yīng)答與化合物例如地塞米松引起的其效應(yīng)物生物分子例如糖皮質(zhì)激素受體或NF-KB的'生物靜力學(xué)應(yīng)答'完全不同，所述生物靜力學(xué)應(yīng)答是通過糖皮質(zhì)激素受體的活化進行的間接抑制。生物靜力學(xué)應(yīng)答實質(zhì)上是"在所有的時間下都應(yīng)答"，S卩，'生物靜力學(xué)藥物'例如地塞米松的生物學(xué)效力在靶細胞或組織中在給定的濃度下有相對小的變化。因此，生物靜力學(xué)藥物的藥效作用主要隨其濃度或藥代動力學(xué)性質(zhì)改變。相反，生物動力學(xué)試劑例如17^乙炔基雄甾-5-烯-3(5,7&17(3-三醇的特征在于藥效作用受到靶細胞或組織的濃度以及作為基礎(chǔ)的生物學(xué)刺激的性質(zhì)和強度的組合的影響。因此，生物學(xué)刺激是通過例如暴露于可能致死量的電離輻射例如？射線或X-射線或接觸細菌LPS、TNFa、或可以活化或抑制炎癥遞質(zhì)的其它試劑例如NF-kB、IKB、IL-6、C反應(yīng)蛋白所引起的。在這方面，生物動力學(xué)藥物可以在藥代動力學(xué)和藥效學(xué)作用之間表現(xiàn)出比生物靜力學(xué)藥物通常觀察到的更不確定的統(tǒng)計學(xué)相關(guān)性。生物動力學(xué)藥物的一個方面在于其降低與可以至少部分地通過調(diào)節(jié)相同或類似的靶生物分子的生物靜力學(xué)藥物相關(guān)的系統(tǒng)毒性的潛在能力。生物靜力學(xué)藥物例如地塞米松可以在臨床上用于治療各種各樣的炎癥狀況，但是'在所有的時間下都應(yīng)答'的生物活性可以引起毒性。在抑制NF-KB的情況中，其活性在大多數(shù)或所有組織中長時間(例如，超過l、2或4小時到約1、2、3天或更久)的恒定且相對完全的抑制(例如，被抑制約75%、80%、85%、90%、95%或?qū)嵸|(zhì)上100%)可以導(dǎo)致可觀察到的不需要的副作用，因為NF-kB活性的某些基礎(chǔ)水平是大多數(shù)組織的正常生物學(xué)功能所需要的。與使用糖皮質(zhì)激素例如地塞米松有關(guān)的已知的毒性可能在受影響的生物分子例如NF-kB被相對完全地關(guān)閉時至少部分地出現(xiàn)。相比之下，生物動力學(xué)藥物可以發(fā)揮更短暫的應(yīng)答，可以改善或減少可觀察到的毒性副作用。生物動力學(xué)藥物的另一個方面在于它們可能以組織特異性的方式發(fā)揮治療作用的能力。因此，動物對攻擊例如暴露于生物學(xué)損害(例如可能致死量的細菌LPS或在短暫缺血之后再灌注受影響的組織)的應(yīng)答可能在不同組織中表現(xiàn)為不同程度的NF-icB活化。生物動力學(xué)藥物可以在其中動物的應(yīng)答相對較大的組織中起作用，例如，小鼠的脾或心臟組織，而其它組織例如腦中的NF-kB功能相對未受影響，而對于至少部分介導(dǎo)對生物學(xué)損害的應(yīng)答的目標生物分子來說，對生物學(xué)損害的應(yīng)答相對較低。生物動力學(xué)藥物可以部分地由于它們部分地抑制目標生物分子的能力起作用。如實施例7中所述的，1701-乙炔基雄甾-5-烯-3(5,7，,17^三醇和本文中描述的一些其它化合物在體外部分地抑制細胞中的NF-kB活化，但是在任何濃度下都沒有觀察到完全的抑制。這與生物靜力學(xué)藥物地塞米松的活性形成對比，生物靜力學(xué)藥物地塞米松在足夠高的濃度完全地抑制NF-kB活性。體外的NF-kB的這種部分抑制似乎部分地通過該實施例中所述的其活性得以反映。因此，在至少一些情況中，生物動力學(xué)藥物的特征在于在例如實施例7中所述的體外試驗的系統(tǒng)中部分抑制或活化目標生物分子的能力。NF-kB的抑制似乎是間接的，因為目前不認為17a-乙炔基雄甾-5-烯-3(3,7p,17l3-三醇和本文中描述的其它化合物直接結(jié)合于細胞質(zhì)或細胞核中的NF-kb。在這個實施例中描述的規(guī)程或其適合的變體，可用于表征其它化合物通過在體內(nèi)調(diào)節(jié)(可檢測地活化或可檢測地拮抗或抑制)分子例如NF-KB而作為生物動力學(xué)或生物靜力學(xué)試劑起作用的能力?；衔镞€可以在體外試驗中進行分析，例如在實施例7中所述的試驗中，以便進一步表征它們的作用機理。這個實施例中描述的體內(nèi)規(guī)程的適合的變體包括使用不同劑量的試驗化合物和不同的給藥途徑，例如約0.1mg/kg到約350mg/kg的劑量范圍，將其以經(jīng)口、經(jīng)頰、舌下或非腸道(例如皮內(nèi)、皮下、靜脈內(nèi)或肌肉內(nèi)注射)給予、或通過鼻內(nèi)給予或吸入到鼻部通道、梨鼻器或肺泡或通向肺泡的氣道(例如，支氣管或細支氣管)中。適合的試驗劑量典型地為約1-150mg/kg。可以在體內(nèi)測量的生物分子例如IkB、激酶如src激酶、map激酶或本文中描述的其它信號遞質(zhì)。這種表征方法可以在多種受試者中的一種或多種中進行，例如嚙齒類例如大鼠、狗、非人類的靈長類動物例如恒河猴或食蟹猴?？梢詫γ拷M包括約3-12只動物，例如每組4-8只動物的動物組應(yīng)用適合的媒介物或安慰劑對照、可能是生物動力學(xué)藥物的試驗化合物、陽性的生物動力學(xué)藥物對照例如17ct-乙炔基雄甾-5-烯-3(5，7p,17p-三醇、陽性的生物靜力學(xué)藥物對照例如地塞米松，并且將在不同細胞群或組織中試驗化合物的應(yīng)答的組與一個或多個對照組進行比較，例如，媒介物對照組、陽性或陰性生物動力學(xué)藥物對照或陽性或陰性生物靜力學(xué)藥物對照。在將這種分析應(yīng)用于人類時，實驗選項的范圍與其它動物相比自然地減少。人的組織或樣品例如血液、骨髓或肺灌洗液比需要通過侵入性技術(shù)獲得的其它組織類型例如脾或肝臟更容易得到用于分析。因此，通常，在使用人類進行應(yīng)答評價之前或同時進行動物研究。炎癥治療。式1化合物的活性的一個方面在于它們可以通過影響炎癥的遞質(zhì)例如NF-kB、IL-6或TNFa而減少炎癥。NF-kB分子通常是重要的炎癥遞質(zhì)。增加的NF-kB活化涉及多種炎癥性疾病和自身免疫病況。式1化合物可用于治療或改善與以下病況有關(guān)的癥狀炎癥，例如疼痛、發(fā)燒或疲勞、子宮內(nèi)膜異位癥；發(fā)燒；纖維肌痛；腎小球腎炎；移植物抗宿主疾病；器官或組織移植排斥，例如，腎、肺、骨髓或肝臟移植；失血性休克；纖維肌痛；痛覺過敏；炎性腸病；胃炎；腸易激綜合征；潰瘍性結(jié)腸炎；消化性潰瘍；應(yīng)激性潰瘍；出血性潰瘍；胃酸過多；消化不良；胃輕癱；胃食管返流疾病；關(guān)節(jié)的炎癥性病況，包括骨關(guān)節(jié)炎、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；炎癥性眼病，如可能與例如角膜的移植有關(guān)的；缺血，包括腦缺血(例如，外傷、癲癇癥、出血或卒中引起的腦損傷，其每一種都可以引起神經(jīng)變性)；川崎病；學(xué)習(xí)損傷；肺病(例如，ARDS);多發(fā)性硬化；肌病(例如，肌肉蛋白代謝，特別是膿毒病)；神經(jīng)毒性(例如，由HIV誘導(dǎo)的)；骨質(zhì)疏松癥；疼痛，包括癌癥相關(guān)的疼痛；帕金森??；阿爾茨海默??；牙周??；早產(chǎn)；牛皮癬；再灌注損傷；膿毒性休克；放射治療的副作用；暫時性下頜關(guān)節(jié)病；酒精誘導(dǎo)的肝損傷，包括酒精性肝硬化；風(fēng)濕熱；肉狀瘤??；硬皮病；慢性疲勞綜合征；冠狀動脈的病況和跡象，包括充血性心力衰竭、冠狀動脈再狹窄、心肌梗塞、心肌功能異常(例如，與膿毒病有關(guān)的)、和冠狀動脈旁路移植術(shù)；睡眠紊亂；葡萄膜炎；血清陰性的多發(fā)性關(guān)節(jié)炎；強直性脊椎炎；瑞特氏綜合征和反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎；斯提耳??；牛皮癬性關(guān)節(jié)炎；腸病性關(guān)節(jié)炎；多肌炎；皮膚肌炎；硬皮?。幌到y(tǒng)性硬化；血管炎(例如，川崎病)；由于例如，張力、扭傷或軟骨損壞引起的炎癥；創(chuàng)傷愈合；皮膚薄或皮膚脆弱；瘀點或瘀癍；紅斑；和外傷。外傷包括創(chuàng)傷、化學(xué)灼傷、熱灼傷、輻射燒傷和與外科手術(shù)例如矯形外科或腹部外科手術(shù)有關(guān)的組織或器官損傷。炎癥狀況可以包括與再灌注損傷有關(guān)的炎癥、血管成形術(shù)之后的再狹窄、心肌梗塞或腦梗塞。不期望的炎癥狀況或癥狀包括肺的炎癥狀況，例如，囊性纖維化、急性哮喘、慢性哮喘、類固醇抵抗性哮喘、急性支氣管炎、慢性支氣管炎、氣腫、牛皮癬、濕疹、成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)或慢性阻塞性肺病(COPD)。自身免疫病況。式1化合物(F1C)和本文中所述的組合物可用于治療、預(yù)防或延緩自身免疫病況的進展，例如1型糖尿病、克隆病、關(guān)節(jié)炎、接觸性皮炎、狼瘡和多發(fā)性硬化(MS)病況。MS病況包括復(fù)發(fā)-緩解型MS和繼發(fā)進展型MS。狼瘡病況包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡、紅斑狼瘡相關(guān)的關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡相關(guān)的皮膚改變、紅斑狼瘡相關(guān)的血液學(xué)異常、紅斑狼瘡相關(guān)的腎損傷、紅斑狼瘡相關(guān)的心臟或肺疾病、紅斑狼瘡相關(guān)的神經(jīng)精神病學(xué)改變、紅斑狼瘡相關(guān)的組織炎癥、盤狀紅斑狼瘡、亞急性皮膚性紅斑狼瘡和藥物誘導(dǎo)的紅斑狼瘡。關(guān)節(jié)炎和相關(guān)病況包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、纖維肌痛、原發(fā)性骨關(guān)節(jié)炎、繼發(fā)性骨關(guān)節(jié)炎、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡相關(guān)的關(guān)節(jié)炎、與急性或慢性炎性腸病或結(jié)腸炎相關(guān)的關(guān)節(jié)炎、與強直性脊椎炎有關(guān)的關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)炎相關(guān)的組織炎癥、關(guān)節(jié)疼痛、連接硬化、關(guān)節(jié)運動損害、關(guān)節(jié)腫脹、連接炎癥和滑膜炎癥。F1C或包含F(xiàn)1C和一種或多種賦形劑的組合物可用于治療、預(yù)防、延遲以下病況的發(fā)作或延緩其進展，例如強直性脊椎炎、牛皮癬、濕疹、結(jié)腸炎、克隆病、急性或慢性炎性腸病、自身免疫性腎損傷和肝損傷。F1C可用于治療肺和氣道病況，包括哮喘病況，例如類固醇非相關(guān)性哮喘、重癥哮喘、特異性哮喘、急性哮喘或慢性哮喘、變應(yīng)性鼻炎、慢性支氣管炎、急性支氣管炎、囊性纖維化、氣腫、肺部纖維化、肺氣道高反應(yīng)性、慢性阻塞性肺病、肺水腫和急性呼吸窘迫綜合征。實驗性自身免疫腦脊髓炎(EAE)是在動物中進行的試驗條件，其具有與人MS相似的臨床、組織病理學(xué)和免疫學(xué)特征，并且與MS—樣，表現(xiàn)為滲透到CNS的T細胞和單核細胞中?？梢酝ㄟ^用在適當助劑中的蛋白脂質(zhì)脂蛋白(PLP)免疫在易感小鼠中誘導(dǎo)EAE。EAE動物模型是用于研究MS的發(fā)病機理和用于表征新的用于治療MS的藥物的人MS體內(nèi)模型。代謝性病癥的治療。式1化合物可用于治療、預(yù)防或延緩代謝性病癥的進展，例如l型糖尿病、2型糖尿病、X綜合征、高膽固醇血癥、高血糖癥、胰島素耐受(例如，與肥胖癥有關(guān)的)、葡萄糖不耐性、高甘油三酯血癥、高脂蛋白血癥、脂肪營養(yǎng)不良病況、X綜合征、動脈硬化、動脈粥樣硬化和肥胖癥。X綜合征(包括代謝綜合征)定義為兩種或多種異常的集合，包括高胰島素血癥；肥胖癥；甘油三酯、尿酸、纖維蛋白原、低密度LDL粒子和血纖蛋白溶酶原活化物抑制劑l(PAI-l)水平升高；和HDL-c水平降低。許多具有胰島素耐受但尚未形成2型糖尿病的患者也處于形成代謝綜合征的危險中，也稱為X綜合征、胰島素耐受綜合征或多型代謝綜合征(plurimetabolicsyndrome)。X綜合征典型地發(fā)生在具有高脂血癥、高胰島素血癥、肥胖癥、胰島素耐受、引起2型糖尿病的胰島素耐受及其糖尿病并發(fā)癥(g卩，其中胰島素耐受是病理生理學(xué)的一部分的疾病)中的兩種或更多種的患者中?？梢杂肍1C治療已經(jīng)涉及與代謝病癥有關(guān)的心血管疾病的獨立的危險因素。這些危險因素包括高血壓、纖維蛋白原水平增加、高甘油三酯水平、LDL膽固醇升高、總膽固醇升高和低的HDL膽固醇水平。所述治療可以導(dǎo)致刺激胰腺(3-細胞分泌更多的胰島素和/或延緩可能在糖尿病患者或肥胖患者中隨時間發(fā)生的胰腺p-細胞損失的速率。用式1化合物治療代謝病癥可以與其它治療方法結(jié)合。可以用式1化合物和多種治療劑中的一種或多種來治療糖尿病，所述多種治療劑包括胰島素敏化劑，例如PPAR-Y激動劑例如格列酮類；雙胍類；蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶-lB抑制劑；二肽基肽酶IV抑制劑；胰島素；胰島素模擬物；磺酰脲類；氯茴苯酸類；a-糖苷水解酶抑制劑；和cc-淀粉酶抑制劑。二甲雙胍、苯乙雙胍、阿卡波糖和羅格列酮是已經(jīng)用于治療一些類型糖尿病的藥物。如上所述，包含F(xiàn)1C的組合物可用于治療、預(yù)防或延緩胰島素耐受或其癥狀的進展。胰島素耐受是胰島素在廣泛范圍的濃度內(nèi)發(fā)揮其生物學(xué)作用的能力減弱，產(chǎn)生小于所期望的生物學(xué)作用。胰島素耐受的人適當代謝葡萄糖的能力減弱，并且對胰島素療法的應(yīng)答差，即使有一些應(yīng)答。胰島素耐受的癥狀包括肌肉中葡萄糖攝入、氧化和儲存的不充分的胰島素活化以及脂肪組織中脂解和細胞中葡萄糖產(chǎn)生和分泌的不充分的胰島素抑制。胰島素耐受可以引起或者有助于多囊性卵巢過度刺激綜合征、葡萄糖耐量低減、妊娠期的糖尿病、高血壓、肥胖癥和動脈粥樣硬化。F1C組合物可用于降低胰島素耐受患者的甘油三酯水平。如上所述，本發(fā)明的實施方案包括鑒定具有用于治療、延緩其進展、延緩其發(fā)作或緩解人或其它哺乳動物的代謝病癥或其癥狀的潛力的化合物(或"試驗化合物")的方法。通過所述方法鑒定的化合物通常被描述為具有一種或多種所述活性的體外的PPAR的非活化劑和體外的NF-kB不完全抑制劑，所述活性典型地得自體內(nèi)觀察結(jié)果，例如，高血糖癥的發(fā)病延遲或現(xiàn)有糖尿病病況的進展延緩。具有這些特征的化合物是可以作為用于治療這些病癥的藥物進行評價的一類新的化合物。在這些實施方案中，所述方法包括選擇以下的試驗化合物，(i)與在體外適當?shù)年幮詫φ杖嘶虿溉閯游锛毎啾龋隗w外不使人或哺乳動物細胞中的PPAR-a、PPAR-k和PPAR-S中的一種、兩種或三種活化超過約10%、約20%、約30%或約40%;(ii)與在體外適當?shù)年幮詫φ杖嘶虿溉閯游锛毎啾?，在體外使人或哺乳動物細胞中的NF-kB的轉(zhuǎn)錄活性或水平抑制或減少約20-80%或約25-75%或約30-70%或約35-65%;(iii)與適當?shù)年幮詫φ栈蛘φ障啾?，減輕高血糖癥、延緩高血糖癥的進展或延遲其發(fā)病，增加胰島素敏感性，減少葡萄糖不耐性、延緩胰腺(3-小島細胞數(shù)量或其分泌胰島素的能力喪失的進展或速率，增加胰腺p-小島細胞數(shù)量或其分泌胰島素的能力，延緩db/db小鼠或患有膳食誘導(dǎo)的肥胖癥的小鼠的體重增加速率，降低升高的甘油三酯水平，降低升高的總的血液或血清膽固醇水平，降低血液或血清中正?；蛏叩腖DL、VLDL、apoB-100或apoB-48的水平，或增加血液或血清中正?；蛏叩腍DL或apoAl水平或降低血液或血清中升高的纖維蛋白原水平；和(iv)任選地，與在體外適當?shù)年幮詫φ杖嘶虿溉閯游锛毎啾?，在體外不使人或哺乳動物細胞中的糖皮質(zhì)激素受體、雄激素受體、雌激素受體-oc、雌激素受體-卩、鹽皮質(zhì)激素受體、孕激素受體或這些生物分子中任一種的生物學(xué)活性的變體或同工型活化超過約5%、約10%、約20%或約30%。這使得允許鑒定或至少部分地表征具有用于治療或改善哺乳動物的代謝病癥的潛力的化合物。在一些實施方案中，可以將試驗化合物的活性與適當?shù)膮⒖蓟衔锢缡?化合物相比較。式1化合物可在所述方法中用作符合所述方法提供的特征的陽性對照或陽性參考標準。這種化合物包括17a-乙炔基雄甾-5-烯-3(5，7p,17P-三醇和雄甾-5-烯-3p，7p,16a,17(3-四醇。其它式1化合物可以用作可能表現(xiàn)出三種所需特征中的0種、1種或2種的陰性對照或參考標準。這種化合物包括16a-溴表雄酮、160^溴-3(3,17卩-二羥雄甾-5-烯和16a-羥基表雄酮。本發(fā)明的實施方案包括測定試驗化合物對與代謝病癥或疾病有關(guān)的一種或多種病況或癥狀的作用。典型地，將這種測定與適當?shù)年幮詫φ栈蛘φ障啾容^，或與適當?shù)年栃詫φ障啾容^，并且所述測定在人或動物體內(nèi)進行，盡管所述測定有時可以在全細胞或細胞溶胞產(chǎn)物中在體外進行。高血糖癥的減輕可以在血液或血清葡萄糖水平降低到正?？崭狗秶鷥?nèi)時被觀察到，對于至少2歲的人來說，所述范圍為約70mg/dL到105mg/dL或115mg/dL，而高血糖癥的空腹葡萄糖水平為約135mg/dL或約140mg/dL至U200mg/dL、300mg/dL或350mg/dL。超過約40029mg/dL的葡萄糖水平是危及生命的。血液或血清中的飯后葡萄糖在攝入碳水化合物之后的2小時測量，對于人來說最低為75g，隨后抽取血液測量葡萄糖。人的140mg/dLto200mg/dL的飯后血液或血清葡萄糖水平表示高血糖癥病況，而超過200mg/dL的葡萄糖水平則確定人患有糖尿病。對于人來說，典型地對于70-115mg/dL的正常空腹葡萄糖水平的患者來說，可以進行使用血液的口服葡萄糖耐量試驗(OGTT)。在人的OGTT中，如果峰葡萄糖水平(典型地在進食之后的30分鐘或1小時)和2小時后的碳水化合物值在兩種或更多種情況中超過200mg/dL，則表示該患者患有糖尿病。作為人的血糖的替代物，使用糖基化的血紅素或HbAlc的測量值用于例如監(jiān)控糖尿病治療。測量HbAlc允許在試驗之前的100到120天內(nèi)評價血糖或糖水平，并且其對例如剛剛進餐或空腹狀態(tài)的短期變化不敏感。2.2-48%的HbAlc水平對于成年人來說是正常的，而2.5-5.9%的水平表示糖尿病得到好的控制，6-8%的水平表示中等的糖尿病控制，超過8。/。的HbAlc水平表示對糖尿病病況的差的控制。對于進行和解釋這些和相關(guān)規(guī)程的方法已經(jīng)描述在例如，K.D.Pagana和T丄Pagana,Mosby'sDiagnosticandLaboratoryTestReference,第5版，2001,Mosbylnc.，第441-448、451-458、507-509頁中。用式1化合物進行治療用于降低HbAlc，其與改善的糖尿病控制或治療相關(guān)。使用本文中所述的方法可以使葡萄糖、葡萄糖替代物或其它值例如相反應(yīng)性蛋白(phasereactiveproteins)或脂質(zhì)組分例如總膽固醇的水平正常化，例如，使其回到正常限度或范圍，或靠近正常限度或范圍。葡萄糖或替代物值的正常化典型地作為升高的葡萄糖或替代物水平下降到正常葡萄糖水平的約1%、約2%、約3%或約5%范圍內(nèi)或正常葡萄糖替代物值的約5%或約8%范圍內(nèi)觀察到。其它物類的葡萄糖值已經(jīng)有所描述，并且可以將類似的測量或試驗用于對于那些物類進行的本發(fā)明的方法中。其它值的正?；湫偷刈鳛楫惓８呋虻偷乃椒祷氐綄τ谑茉囌呶镱悂碚f的所述值的正常范圍的上端或下端值的約2%或30約4%到約6%、約10%或約12%范圍內(nèi)。通過本發(fā)明方法鑒定的化合物可用于延緩高血糖癥的進展或延遲其發(fā)病，或者用于增加其中已有或者有理由預(yù)期形成胰島素耐受的患者的胰島素敏感性?；衔锏钠渌饔冒ń档推咸烟遣荒托?、延緩胰腺(5-小島細胞數(shù)量或它們分泌胰島素能力損失的進展或速率、或增加胰腺p-小島細胞數(shù)量或其分泌胰島素的能力。在一些實施方案中，可以在肥胖受試者中進行所述方法。如本文中使用的人的肥胖癥或"超重"泛指(l)體重指數(shù)為約26kg/m2，27kg/m2，28kg/m2，29kg/m2，30kg/m2，31kg/m2，32kg/m2或更大的成年男性，和體重指數(shù)至少為約26kg/m2，27kg/m2，28kg/m2，29kg/m2，30kg/m2，31kg/m2，32kg/m2或更大的成年女性，或(2)由衛(wèi)生保健人員例如醫(yī)生或護士評價為肥胖或過重的狀況。對于例如人來說，肥胖癥的確定可能要考慮到身體脂肪含量和分布，因為一些具有高體重指數(shù)的人可能由于高的肌肉組織量代替脂肪或脂質(zhì)組織、或者由于在不同于腹部的身體區(qū)域例如臀部或骨盆中顯著量的身體脂肪或脂質(zhì)而在學(xué)術(shù)上不認為是肥胖。肥胖癥和體重指數(shù)已經(jīng)有所描述，例如，G.A.Colditz,Med.Sci.SportsExerc,31(11)，Suppl.,第S663-S667頁，1999;F.J.Nieto-Garcia等人,Epidemiology,1(2):146-152,1990，R.H.Eckel,Circulation,96:3248-3250,1999。在一些實施方案中，典型地如體外試驗測定的，與適當?shù)年幮詫φ杖嘶虿溉閯游锛毎啾?，通過本發(fā)明方法鑒定的化合物在體外不使人或哺乳動物細胞中的以下的一種或多種顯著地活化超過約10%、約20%或約30%:鹽皮質(zhì)激素受體、孕激素受體、糖皮質(zhì)激素受體、雄激素受體、雌激素受體-a、雌激素受體-(3或任何這些生物分子的生物學(xué)活性變體。測量這些活性的方法已經(jīng)描述在例如美國專利5,298,429中。在一個示例性的方法中，評價試驗是否是激素受體蛋白質(zhì)的功能性配體或其功能性工程化或修飾形式的測定法包括(a)培養(yǎng)細胞，所述細胞包含表達激素受體蛋白質(zhì)、或其功能性工程化或修飾形式的非內(nèi)原性DNA，和編碼與報道基因有關(guān)的動作性激素反應(yīng)元件的DNA，其中培養(yǎng)在至少一種試驗化合物的存在下迸行，所述化合物即要設(shè)法測定其作為激素受體蛋白質(zhì)的配體或調(diào)節(jié)劑、或其功能性工程化或修飾形式的能力的化合物，和(b)測定所述細胞中所述報道基因轉(zhuǎn)錄的證據(jù)。這種測定法典型地使用哺乳動物細胞進行，例如，CV-1或COS細胞。報道基因可以包含在報道基因質(zhì)粒中，而表達激素受體蛋白質(zhì)或其功能性修飾形式的非內(nèi)原性DNA包含在表達質(zhì)粒中，其中所述報道基因和表達質(zhì)粒還包含SV-40的復(fù)制起點。此外，報道基因可以包含在報道基因質(zhì)粒中，其中表達激素受體蛋白質(zhì)或其功能性修飾形式的非內(nèi)原性DNA包含在表達質(zhì)粒中，其中報道基因和表達質(zhì)粒還包含選擇性標記。相關(guān)測定法可以使用具有可檢測的報道基因的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞，例如，對于雌激素受體-卩(基于ERP-UAS-blaGripTite細胞的測定法，目錄編號K1091，InvitrogenCorp.)、雌激素受體-a(基于ERa-UAS-blaGripTite293細胞的測定法，目錄編號K1090,InvitrogenCorp.)、雄激素受體(基于AR-UAS-blaGripTite293MSR細胞的測定法，目錄編號K1082,InvitrogenCorp.)或孕激素受體(孕酮受體-UAS-blaHEK293T試驗，目錄編號Kl103,InvitrogenCorp.)所述的。本發(fā)明的實施方案包括確定或表征具有用于治療或改善哺乳動物的代謝病癥的潛力的化合物的方法，所述方法包括選擇如下的化合物(i)與體外的適當?shù)年幮詫φ杖嘶虿溉閯游锛毎啾龋隗w外不使PPAR-a、PPAR-y和PPAR-5中的一種、兩種或三種活化超過約30%;(ii)與體外適當?shù)年幮詫φ杖嘶虿溉閯游锛毎啾?，在體外使人或哺乳動物細胞中NF-kB的轉(zhuǎn)錄活性或水平抑制或減少約20-80%;(iii)與適當?shù)年幮詫φ栈蛘φ障啾?，減少高血糖癥、延緩高血糖癥的進展或延遲其發(fā)病，增加胰島素敏感性，降低葡萄糖不耐性，延緩胰腺卩-小島細胞數(shù)量或它們分泌胰島素能力損失的進展或速率，增加胰腺P-小島細胞數(shù)量或它們分泌胰島素能力，延緩db/db小鼠或患有膳食誘導(dǎo)的或膳食相關(guān)的肥胖癥的受試者的體重增加速率，降低升高的甘油三酯水平，降低升高的總血液或血清膽固醇水平，降低正?；蛏叩难夯蜓錖DL、VLDL、apoB-100或apoB-48水平，或增加正?；虻偷难夯蜓錒DL或apoAl水平，或降低升高的血液或血清纖維蛋白原水平；(iv)任選地，與體外適當?shù)年幮詫φ杖嘶虿溉閯游锛毎啾?，在體外不使糖皮質(zhì)激素受體、鹽皮質(zhì)激素受體、孕激素受體、雄激素受體、雌激素受體-a、雌激素受體-(3或任何這些生物分子的生物學(xué)活性變體中的一種或多種活化超過約30%;和(v)任選地在體外在肝細胞或肝臟衍生的細胞中或在體內(nèi)在肝細胞或得自肝細胞或肝組織的肝細胞或組織中抑制磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)或llp-羥類固醇脫氫酶(11(5-HSD)、任選的lip-HSD1型或1lp-HSD2型的水平或活性；所述方法允許鑒定或表征具有用于治療或改善人或另外的哺乳動物中的代謝病癥的潛力的化合物。PEPCK酶可以是細胞溶質(zhì)或線粒體來源的。骨損失病況。包含F(xiàn)1C和一種或多種賦形劑的組合物可用于本文中所述的骨損失或骨質(zhì)減少病癥的治療、預(yù)防、延遲其發(fā)病或延緩其進展，例如，骨質(zhì)疏松癥病況，例如原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥、絕經(jīng)后或1型骨質(zhì)疏松癥、更年期或2型骨質(zhì)疏松癥、自發(fā)性骨質(zhì)疏松癥、繼發(fā)性骨質(zhì)疏松癥例如糖皮質(zhì)激素相關(guān)的骨損失病況和與外傷例如第一、第二或第三級的熱、化學(xué)或輻射灼傷有關(guān)的骨損失。用F1C治療可以改善骨質(zhì)量、骨密度和/或骨強度。藥物產(chǎn)品。在一些實施方案中，本發(fā)明提供用于治療炎癥狀況的藥物產(chǎn)品。所述藥物產(chǎn)品典型地包括(a)適合于例如口服或非腸道給予的劑型例如固體或液體劑型的藥物。藥物的包裝和/或包裝說明書或標簽具有關(guān)于藥物效力、作用機理、預(yù)定患者人群、劑量、劑量給藥方案、給藥途徑、生物學(xué)損害的毒性或所述藥物可用于治療的損害的嚴重程度的信息，如果這些是已知的。在生物學(xué)損害是射線照射時，包裝說明書或標簽可以包含關(guān)于可以應(yīng)用或被批準應(yīng)用所述藥物產(chǎn)品的輻射劑量或劑量范圍的信息。藥物產(chǎn)品可以任選地包含日志或使用指令，以便患者記錄何時或如何使用藥物，或在使用藥物過程中或之后使用者經(jīng)歷了什么癥狀或藥物作用。這可以幫助藥物效力或副作用的IV期或銷售后分析。藥物產(chǎn)品的其它實施方案如本文這描述的其它實施方案中所述。如本文中使用的的藥物產(chǎn)品是指己經(jīng)由有權(quán)檢査或批準銷售或醫(yī)療應(yīng)用的申請的管理機構(gòu)或組織檢査并且批準用于上市或銷售的產(chǎn)品，所述管理機構(gòu)或組織例如，美國食品和藥品管理局(U.S.FoodandDrugAdministration)或歐洲藥品局(EuropeanMedicinesAgency)或歐洲藥品評價局(EuropeanMedicinesEvaluationAgency)。藥品產(chǎn)品的應(yīng)用包括其上市或銷售和銷售要約或購買考慮(buyitforconsideration)。這些活動典型地遵守可以影響或管理上市、銷售、購買或產(chǎn)品處理的規(guī)章批準的限定。藥品產(chǎn)品中的藥物可以新藥物、普通藥品、生物制品、醫(yī)療器材或用于這些中任一項應(yīng)用的規(guī)程。藥物產(chǎn)品通常獲得了美國食品和藥品管理局或歐洲藥品評價局的美國或非美國新藥申請、簡化的新藥申請、生物制品許可證申請或銷售醫(yī)療器材申請的銷售批準。藥物產(chǎn)品的應(yīng)用包括將其賣給政府或私人的買主，例如美國國防部、美國能源部、美國健康和公共事業(yè)部或私人藥物買主或經(jīng)銷商組織。其它應(yīng)用包括使用所述藥物治療指出或批準的醫(yī)療病況和醫(yī)生批準的應(yīng)用或未適應(yīng)癥外用途(offlabeluse)。批準前的藥物產(chǎn)品是本發(fā)明的其它方面，其可能實質(zhì)上與本文中所述的藥物產(chǎn)品相同，但是其可用于在上市批準之前制備用于銷售或用于管理部門審査的藥物。藥物產(chǎn)品確定的預(yù)定患者人群也可以指定被排除的人群，如果有的話，排除將其應(yīng)用于例如小兒科患者或老年患者。關(guān)于劑量的信息典型地具體說明藥物的每天劑量，而劑量給藥方案描述給予或服用藥物的頻率和持續(xù)時間。給藥途徑確定適合于藥物應(yīng)用的一種或多種路徑，盡管給定的制劑典型地被批準只用于一種給藥途徑。包裝或標簽可以確定的劑量、劑量給藥方案和給藥途徑如本文中其它地方所述。在一個實施方案中，藥物產(chǎn)品用于治療、預(yù)防或改善炎癥狀況或34本文中描述的另一種病況，并且其包括或包含制劑和包裝說明書或標簽，所述制劑包含與1、2、3、4或更多種用于口服或非腸道(例如，肌肉、皮下或真皮下注射)給予的賦形劑配制的化合物例如式1化合物，所述包裝說明書或標簽描述在疾病或包括確診或以其它方式觀察到之后開始給予式1化合物的日劑量(例如，0.5mg、1mg、4mg、5mg、10mg、20mg、25mg、50mg、100mg、150mg、175mg、200mg、225mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg或500mg)，持續(xù)1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個連續(xù)日。包裝說明書或標簽的信息可以包含關(guān)于對藥物或治療方案的生物學(xué)應(yīng)答的信息。所述信息可以包括對以下的一種或多種情況的說明(a)與人或哺乳動物例如非人類靈長類動物中使用所述藥物有關(guān)的一種或多種副作用或毒性，(b)其對炎癥或其它病況的作用，(c)將另外的治療劑例如地塞米松或其它糖皮質(zhì)激素與所述藥物一起應(yīng)用的規(guī)程或指導(dǎo)和(d)為了獲得最佳或已知的治療利益開始關(guān)于所述藥物的時間或時間段。在一些方面中，本發(fā)明提供鑒定可能用于可檢測地調(diào)節(jié)哺乳動物中的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞、CD4+CD25+CD103+調(diào)節(jié)性T細胞、CD4+CD25highCD103+調(diào)節(jié)性T細胞、或CD4+CD25high調(diào)節(jié)性T細胞的數(shù)量或活性的化合物的方法，其包括選擇如下的化合物(i)與體外的適當?shù)膶φ杖嘶虿溉閯游锛毎啾?，在體外不使人或哺乳動物細胞中的糖皮質(zhì)激素受體、雄激素受體、雌激素受體-a、雌激素受體-P或任何這些生物分子的生物學(xué)活性變體中的一種或多種活化或抑制超過約30%;(ii)分子量為約100-1000道爾頓，任選地，分子量為約250-850道爾頓；(m)與適當?shù)年幮詫φ栈蛘φ障啾?，在適當?shù)臏y定法中使CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞、CD4+CD25+CD103+調(diào)節(jié)性T細胞、CD4+CD25highCD103+調(diào)節(jié)性T細胞、或CD4+CD25high調(diào)節(jié)性T細胞的數(shù)量或活性增加或減少超過20%;禾P(iv)與體外適當?shù)年幮詫φ杖嘶虿溉閯游锛毎啾?，在體外任選地使人或哺乳動物細胞中的NF-kB轉(zhuǎn)錄活性或水平抑制或降低約20-80%。式1化合物和其它化合物可用于實質(zhì)上如以下實施例20或21中所述的這些實施方案中。在體外或體內(nèi)增加或減少某些T細胞亞群例如CD4+CD25+T細胞和CD4+CD25highT細胞的活性或數(shù)量的化合物是用于治療或延緩自身免疫病況、癌癥、神經(jīng)病學(xué)外傷或病癥(例如外傷如缺血之后的神經(jīng)元損失)和代謝疾病如I型糖尿病、動脈粥樣硬化、自體移植中的細胞、器官或組織排斥、以及在存在或可能發(fā)生這些狀況的位置的移植物抗宿主疾病的發(fā)病或進展的候選物。所述治療可用于改善創(chuàng)傷愈合、治療再灌注損傷、狹窄、血管成形術(shù)之后的再狹窄、心肌梗塞或腦梗塞。實施方案包括分子量小于約2,000道爾頓、小于約1,000道爾頓、或小于約500道爾頓的化合物。一組化合物的分子量為約285或290到約500或650道爾頓。Treg細胞應(yīng)答可以作為與適當?shù)年幮詫φ障啾仍谟没衔镏委煹氖茉囌呋蛟谟没衔锾幚淼捏w外試驗中使Treg細胞增加或減少約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約60%、約70%、約80%、約100%、約200%、約400%、約600%、約1000%、約2000%、約5000%、約10000%或更多而觀察到，Treg細胞典型地為CD4+CD25+T細胞或CD4+CD25highT細胞。這些改變可以作為Treg細胞數(shù)量或體外或體內(nèi)的它們在循環(huán)血液或在細胞中中的活性的增加或降低而觀察到。分析亞群細胞模式例如T細胞模式的方法可以通過多種方法中的任一種得到，包括流式細胞光度術(shù)(FACS)，例如，Levy等人，Clin.Immunol.Immunopathol.35:328,1985。在FACS分析中，各種亞群細胞的單克隆抗體結(jié)合于并且鑒定存在于細胞上的表型表面抗原。存在有市售的可以檢測這些指示物存在的抗體，使得通常不需要制備抗體。預(yù)期鑒定相同或緊密相關(guān)的抗原指示物的抗體給出相似的診斷結(jié)果。因此，在說明書或權(quán)利要求書中引證與其結(jié)合的具體的單克隆抗體(例如，CD4或CD25)指定指示物抗原時，這種指定包括該指示物，即使在鑒定中使用了不同的單克隆抗體。所關(guān)心的表型指示物包括用于多種亞群細胞型的一般指示物，包括用于總T細胞的CD3、用于輔助/誘導(dǎo)性T細胞的CD4、用于抑制性T細胞/細胞毒性T細胞的CD8、和用于NK細胞的CD16/56;表達CD8的子集指示物，例如用于抑制性T細胞的CDllb、用于活化的抑制性T細胞/細胞毒性T細胞的cd38、用于活化的抑制性T細胞/細胞毒性T細胞的HLA-DR、和CD57;以及表達CD4的指示物，例如CD25和用于活化的輔助/誘導(dǎo)性T細胞的HLA-DR，包括Treg細胞。劑量給藥規(guī)程或方法。在治療本文中公開的任何病況或癥狀時，可以對患有所述病況或癥狀或?qū)Σr或癥狀敏感的受試者連續(xù)地(每天)或周期性地給予式1化合物。在用式1化合物治療病況例如炎癥狀況或本文中公開的另一種病況時，間歇的劑量給藥可以避免或改善通常與非連續(xù)劑量給藥有關(guān)的一些不期望的方面。這種不期望的方面包括患者或受試者沒能遵守每天的劑量給藥方案或降低其它治療劑例如糖皮質(zhì)激素的劑量和/或與它們相關(guān)的不期望的副作用或毒性，例如骨損失或再吸收。在一些實施方案中，只要疾病或癥狀是明顯的，則繼續(xù)每天的劑量給藥，典型地對于慢性病況來說如此。在其它實施方案中，每天的劑量給藥持續(xù)l、2、3、4、5、6、7、8、9或10個連續(xù)日，然后隨后是一段時間的無劑量給藥，直到或如果再次需要劑量給藥。這些實施方案典型地涉及治療可能不時地復(fù)發(fā)或不復(fù)發(fā)的急性病況。慢性病況的治療典型地涉及長時間的連續(xù)的每天劑量給藥。在任何連續(xù)(每天)或間歇的劑量給藥方案中，或在治療本文中所述的任何疾病、病況或癥狀時，式1化合物可以通過一種或多種適當?shù)穆窂浇o予，例如，口服、經(jīng)頰、舌下、局部、肌肉內(nèi)、皮下、真皮下、靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、或通過氣霧劑給予。日劑量通常為約0.05mg/kg/天到約200mg/kg/天。典型的劑量范圍為約0.1到約100mg/kg/天，包括約0.2mg/kg/天，0.5mg/kg/天、約1mg/kg/天、約2mg/kg/天、約4mg/kg/天、約5mg/kg/天、約6mg/kg/天、約8mg/kg/天、約10mg/kg/天、約20mg/kg/天、約40mg/kg/天或約100mg/kg/天。也可以在獸醫(yī)應(yīng)用的情況中采用更高的劑量，例如，約250mg/kg/天、約300mg/kg/天或約350mg/kg/天?？梢詫⑹?化合物以約2到約50mg/kg/天或約2-40mg/kg/天口服或通過非腸道給予。這種劑量給藥典型地產(chǎn)生約4ng/mL或約8ng/mL到約125ng/mL或約250ng/mL的式1化合物的血清水平，例如，約15ng/mL到約120ng/mL或約20ng/mL到約100ng/mL。這種血清水平可以是短暫的，例如，持續(xù)約30分鐘或約60分鐘到約2小時或約8小時，我可以出現(xiàn)在給予化合物的當天，或者對于儲庫制劑在較遲的時間出現(xiàn)。連續(xù)的每天劑量給藥通常用于治療本文中所述的慢性病況。日劑量通常作為單獨的劑量給予，但是可以將日劑量再分成2或3個亞劑量。間歇的劑量給藥規(guī)程包括每隔1天或每隔兩天給予式1化合物，持續(xù)適當?shù)臅r間段。在治療血細胞缺乏時，劑量給藥通常從受試者經(jīng)歷短期清髓事件(short-livedmyeloablativeevent)例如射線照射的當天開始。對于持續(xù)較久的情況，例如，癌癥的化學(xué)療法，劑量給藥式1化合物可以在已經(jīng)對受試者給予化療劑之后的約12小時、約1天、約2天或約3天開始。每天的劑量給藥可以持續(xù)確定的時間段，隨后是固定或可變的沒有劑量給藥的時間段。在這些實施方案中，疾病活動例如多發(fā)性硬化、關(guān)節(jié)炎、哮喘、結(jié)腸炎或克隆病活動的治療可以為持續(xù)3_14個連續(xù)日或5-10個連續(xù)日的每天劑量給藥，之后在另一個疾病活動發(fā)生或開始之前不再給予治療。臨床病況和癥狀。本文中所述的化合物和方法可用于使本文中所述的病況和/或它們的一種或多種癥狀得到治療、改善、預(yù)防或延緩其進展。這種應(yīng)用包括抑制骨吸收，減少與化學(xué)療法(例如，抗炎劑糖皮質(zhì)激素)有關(guān)或由其引起的不期望的副作用，治療、預(yù)防或延緩骨質(zhì)疏松癥和骨折，抑制血管再狹窄，和治療糖尿病性視網(wǎng)膜病、黃斑變性、炎癥。**1**，不期望的炎癥狀況或癥狀，例如肺的炎癥狀況，例如，囊性纖維化、急性或慢性哮喘、支氣管哮喘、特異性哮喘、ARDS或COPD，或自身免疫病癥例如骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、胰腺炎例如自身免疫胰腺炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡、紅斑狼瘡相關(guān)的組織炎癥、紅斑狼瘡相關(guān)的關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡相關(guān)的皮膚改變、紅斑狼瘡相關(guān)的血液學(xué)異常、紅斑狼瘡相關(guān)的腎臟損傷、紅斑狼瘡相關(guān)的心臟或肺疾病、和不期望的紅斑狼瘡相關(guān)的神經(jīng)精神病學(xué)或神經(jīng)病學(xué)改變?？梢灾委煹牟r的癥狀包括發(fā)燒、關(guān)節(jié)疼痛(關(guān)節(jié)痛)、關(guān)節(jié)炎和槳膜炎(胸膜炎或心包炎)。也可以給予其它藥物用于本發(fā)明的治療中。因此，疼痛可以使用非甾體抗炎藥例如阿司匹林、水楊酸酯、布洛芬、萘普生、舒林酸、奧沙普秦和托美丁來治療。系統(tǒng)性紅斑狼瘡的皮膚特征可以用抗瘧藥治療，例如羥氯喹、氯喹和米帕林。維A酸類例如異維甲酸(istretinoin)和阿維A酯也可與本文中所述的化合物組合用于治療皮膚癥狀。器官損壞可以用通?？诜蜢o脈內(nèi)給予的皮質(zhì)類固醇治療。可使用的皮質(zhì)類固醇包括氫化可的松(Cortisol)、皮質(zhì)酮、醛甾酮、ACTH、曲安西龍和衍生物例如雙乙酸曲安西龍、己曲安奈德、和曲安奈德，倍他米松和衍生物例如二丙酸倍他米松、苯甲酸倍他米松、倍他米松磷酸鈉、乙酸倍他米松、和戊酸倍他米松，氟尼縮松、潑尼松及其衍生物、膚輕松和衍生物例如氟輕松、二氟拉松和衍生物例如雙醋酸二氟拉松、哈西奈德，地塞米松和衍生物例如二丙酸地塞米松和戊酸地塞米松，去羥米松(去羥基倍他米松)，二氟可龍和衍生物例如戊酸二氟可龍)，氟氯奈德，醋酸氟輕松，氟可龍，氟潑尼定，氟氫縮松，氯倍他索，氯倍他松和衍生物例如丁酸氯倍他松阿氯米松，二氟美松，和氟可龍。在皮質(zhì)類固醇的口服給藥不能勝任時，靜脈注射甲基氫化潑尼松脈沖療法(高劑量)可用于治療狼瘡腎炎和其它嚴重的非腎表現(xiàn)，例如溶血性貧血、中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥(大腦炎)、低血小板計數(shù)和嚴重的胸膜心包炎。式1化合物可用于使骨質(zhì)疏松癥或骨折得到治療、預(yù)防或延緩其進展。受試者的治療可以引起骨增強和/或骨質(zhì)量或礦物質(zhì)損失減少，引起對骨折的抵抗力增加。如本文中使用的，"治療"本文中所述的那些病況是指所述治療可以引起所述病況得到改善、預(yù)防或延緩其進展，和/或這種病況的一種或多種癥狀得到改善、預(yù)防或延緩其進展。式I化合物可用于代謝疾病的治療、預(yù)防、延緩其進展或延遲其發(fā)病，例如I型糖尿病、II型糖尿病、高血糖癥、胰島素耐受、葡萄糖不耐性、高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥、高脂蛋白血癥、脂肪營養(yǎng)不良、X綜合征和動脈粥樣硬化。制劑和用于制備制劑的組合物。本發(fā)明的實施方案包括本文中和在本公開的其它地方描述的制劑。盡管式1化合物有可能單獨給予，但是通常將其作為制劑提供。所述制劑，對于獸醫(yī)學(xué)和人類應(yīng)用，包括至少一種式1化合物以及一種或多種賦形劑和任選的一種或多種另外的治療成分。制劑包括含l、2、3、4或更多種藥學(xué)可接受的賦形劑或載體的組合物。組合物用于制備適合于人或動物應(yīng)用的制劑。適合的制劑給藥途徑包括口服、直腸、經(jīng)鼻、局部(包括經(jīng)頰和舌下)、陰道、直腸和非腸道(包括皮下、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、真皮內(nèi)、鞘內(nèi)、眼內(nèi)和硬膜外)。通常，含水和非水液體或霜劑制劑通過非腸道、口服、或局部途徑遞送。在其它實施方案中，例如在本發(fā)明的間歇劑量給藥方法中，式1化合物可以作為適合于通過本文中公開的任何途徑給藥的含水或非水液體制劑或固體制劑存在，例如，口服、局部、經(jīng)頰、舌下、非腸道、吸入氣霧劑或儲庫例如皮下倉庫或腹膜內(nèi)或肌肉內(nèi)儲庫。應(yīng)該理解，優(yōu)選的途徑可以隨例如受試者的病理學(xué)狀況或體重、或受試者對所使用的式1化合物或其它治療方法進行治療的應(yīng)答的不同而異，或者對于所述情況來說是適當?shù)?。制劑包括適合于上述給藥途徑的那些。制劑可以方便地作為單位40劑型存在，并且可以通過制藥領(lǐng)域中已知的任何方法制備。所述技術(shù)、賦形劑和制劑通常在例如，Remington'sPharmaceuticalSciences,MackPublishingCo.,Easton,PA1985,第17版；Nema等人，PDAJ.Pharm.Sci.Tech.199751:166-171;G.Cole等人編輯的PharmaceuticalCoatingTechnology,1995,Taylor&Francis,ISBN0136628915;H.A.Lieberman等人編輯的PharmaceuticalDosageForms,1992第二次修訂版，第1和2巻，MarcelDekker,ISBN0824793870;J.T.Carstensen.PharmaceuticalPreformulation，1998，第1-306頁，TechnomicPublishingCo.ISBN1566766907中發(fā)現(xiàn)。用于制劑的示例性賦形劑包括乳化蠟、沒食子酸丙酯、檸檬酸、乳酸、聚山梨酯80、氯化鈉、棕櫚酸異丙酯、甘油、白礦脂和本文公開的其它賦形劑。適合于通過本文中公開的途徑給予的制劑、或本文中公開的用于生產(chǎn)制劑的組合物任選地包括約0.01到約500微米、約0.1到約100微米或約0.5到約75微米的平均粒徑。平均粒徑包括以0.05微米或0.1微米或其它增量介于0.01到500微米的范圍內(nèi)(例如，約0.05、0.1、0.5、1、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、50、60、75、85、100、120等微米數(shù))的平均粒徑。在式1化合物或包括式1化合物的組合物被用作中間體來生產(chǎn)制劑時，它們可以包括這些平均粒徑或粒度范圍中的一種、兩種、三種或更多種。在制備本文中公開的并且包括式1化合物(和任選的一種或多種賦形劑)的任何組合物或制劑時，可以任選地將化合物或組合物研磨、過篩或以另外方式造粒，以得到期望的粒徑。在一些實施方案中，可使用的式1化合物的特征在于沒有可以感知的男化性會g(androgenicity)。在這些實施方案中，式1化合物的特征在于具有雄激素例如睪酮、丙酸睪酮、二氫睪酮或丙酸二氫睪酮的約30%或更低、約20%或更低、約10%或更低、約5%或更低的男化性能，如使用適合的陽性和/或陰性對照進行的適合的測定法所測量的。用于各種化合物的男化性能的適合的測定法已經(jīng)描述在例如，J.R.Brooks,等人，Prostate1991，18:215-227;M.Gerrity等人，Int.J.Androl.19814:494-504;S.S.Rao等人，IndianJ.Exp.Biol.19697:20隱22;O.Sunami等人，J.Toxicol.Sci.200025:403-415;G.H.Deckers等人，J.SteroidBiochem.Mol.Biol.200074:83-92中。式1化合物的男化性能任選地如這些測定法或任何其它測定法中的一種或多種所述或者實質(zhì)上如這些測定法或任何其它測定法中的一種或多種所述進行測定。因此，這種實施方案之一包括治療本文中所述病況的方法，包括對有此需要的受試者給予有效量的式1化合物，或為受試者的組織遞送有效量的式l化合物，其中在適合的測定法(例如，上述引證文獻中所述的)中測量時，式1化合物具有雄激素例如睪酮、丙酸睪酮、二氫睪酮或丙酸二氫睪酮的約30%或更低、約20%或更低、約10%或更低、約5%或更低的男化性能。在進行這種方法時，任選地對受試者或哺乳動物，例如，嚙齒類動物、人或靈長類動物，監(jiān)控例如，疾病、病況或癥狀是否得到改善、預(yù)防、或降低其嚴重程度。這種監(jiān)控可以任選地包括在適當?shù)臅r間下測量循環(huán)中的以下的一種或多種細胞因子((例如，TNFa、IL-13、IL-lp)、WBC、血小板、粒細胞、嗜中性粒細胞、RBC、NK細胞、巨噬細胞或其它免疫細胞類型，例如，在本文中或在引用的參考文獻中描述的，例如，在開始治療之前的基線和在用式1化合物治療后的不同時間，例如在用式1化合物治療結(jié)束后的約2-45天。如上所述，在一些實施方案中，將用式1化合物進行治療與皮質(zhì)類固醇或糖皮質(zhì)激素聯(lián)合使用。皮質(zhì)類固醇在許多臨床情況中使用，用于例如，在例如急性或慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、急性或慢性骨關(guān)節(jié)炎、結(jié)腸炎病況例如潰瘍性結(jié)腸炎、急性或慢性哮喘、支氣管哮喘、牛皮癬、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、肝炎、肺纖維化、I型糖尿病、II型糖尿病或惡病質(zhì)等條件下降低炎癥或自身免疫反應(yīng)的發(fā)生或急性發(fā)作的強度或頻率。然而，許多皮質(zhì)類固醇具有顯著的副作用或毒性，這限制了它們的應(yīng)用和功效。式1化合物可用于抵消這種副作用或毒性，而不會對抗皮質(zhì)類固醇的全部的所期望的治療能力。這使得允許繼續(xù)應(yīng)用皮質(zhì)類固醇或修改其劑量，例如，以增加的劑量使用，而不會增強副作用或毒性或降低皮質(zhì)類固醇劑量?？梢灾委?、預(yù)防、改善或減少的副作用或毒性包括以下的一種或多種骨損失、骨生長減少、骨吸收增強、骨質(zhì)疏松癥、免疫抑制、對感染的敏感性增加、情緒或個性改變、抑郁癥、頭痛、眩暈、高血壓或過度緊張、肌肉虛弱、疲勞、惡心、不適、消化性潰瘍、胰腺炎、皮膚薄或皮膚脆弱、兒童或成年期前受試者的生長抑制、血栓栓塞、白內(nèi)障和浮腫。式1化合物的劑量、給藥途徑和劑量給藥方案實質(zhì)上如本文中所述。在給予皮質(zhì)類固醇的過程中和任選地在皮質(zhì)類固醇的劑量給藥結(jié)束后的約1周到約6個月或更長時間的時間段內(nèi)給予約0.5到約20mg/kg/天的示例性劑量的式1化合物。皮質(zhì)類固醇實質(zhì)上使用已知的劑量、給藥途徑和劑量給藥方案給予，參見例如，PhysiciansDeskReference，第54版，2000,第323-2781頁，ISBN1-563632,MedicalEconomicsCo.,Inc.,Montvale,NJ。然而，任選地可以控制皮質(zhì)類固醇的劑量，例如，超過正常劑量增加約10%到約300%，而與皮質(zhì)類固醇相關(guān)的全部的副作用或毒性沒有相應(yīng)增加。這種增加是在充分長的時間段并且根據(jù)受試者的臨床狀況逐漸地進行的，例如，在約2周到約l年的時間內(nèi)，皮質(zhì)類固醇的日劑量增加約10%到約20%到約300%的最大值。治療方法可用于治療、預(yù)防或改善急性外傷，例如心肌梗塞、出血例如腦出血或卒中或骨折、骨質(zhì)疏松癥或過量的或不期望的骨吸收或損失。治療可用于促進對如下?lián)p壞或損傷的修復(fù)，所述損傷或傷害是對皮膚、粘膜、軟骨、肝臟、心臟組織、骨或CNS、或其中具有損傷的位置的神經(jīng)組織的損傷或傷害，例如，化學(xué)或熱灼傷、骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肝硬化、骨質(zhì)疏松癥、骨折、心肌梗塞、卒中或頭外傷。所述還可以用于減少由于治療(例如，在狼瘡病況中或在患有炎性腸病、克隆病、急性或慢性結(jié)腸炎或腎病癥例如急性或慢性腎衰竭或自身免疫性腎損傷的患者中用糖皮質(zhì)激素治療)引起的骨損失。以下實施方案描述本發(fā)明的一個或多個方面。1.鑒定或表征生物動力學(xué)化合物的方法，包括在受試者暴露于引發(fā)可檢測的對急性刺激或生物學(xué)損害的應(yīng)答的急性刺激或生物學(xué)損害之后測量試驗化合物在受試者中的體內(nèi)生物學(xué)應(yīng)答，其中所述試驗化合物在以下時間或時間段對刺激或生物學(xué)損害的急性生物學(xué)應(yīng)答的遞質(zhì)引起有利的治療應(yīng)答(i)急性應(yīng)答為最大的或接近最大的，或(ii)急性應(yīng)答在長的急性生物學(xué)應(yīng)答時間段增加，并且其中在時間(i)或(ii)的有利的治療應(yīng)答不同于其在一個、兩個、三個、或更多個較早或較晚的時間或時間段的對急性生物學(xué)應(yīng)答的遞質(zhì)的作用，并且在較早或較晚的時間或時間段的這種作用，與在相同或?qū)嵸|(zhì)上相同的較早或較晚的時間或時間段的適當?shù)拿浇槲锘虬参縿φ障啾?，急性生物學(xué)應(yīng)答的遞質(zhì)的水平或活性增加或降低小于約50%，從而鑒定對急性生物學(xué)應(yīng)答的遞質(zhì)產(chǎn)生有利的治療應(yīng)答以及在時間(i)或(ii)產(chǎn)生不同于其在一個、兩個、三個、或更多個較早或較晚的時間或時間段的對急性生物學(xué)應(yīng)答的遞質(zhì)的作用的有利的治療應(yīng)答的化合物為生物動力學(xué)化合物。2.實施方案1的方法，其另外包括執(zhí)行一種規(guī)程來測定試驗化合物是否在體外試驗中使急性生物學(xué)應(yīng)答的遞質(zhì)的活性或水平受到約25%到約75%的調(diào)節(jié)，任選地，其中與糖皮質(zhì)激素受體的適當?shù)膮⒖蓟罨瘎┗蜣卓箘┫啾?，試驗化合物不使糖皮質(zhì)激素受體受到超過約20%的活化或拮抗。3.實施方案1或2的方法，其中所述急性刺激或生物學(xué)損害是使受試者暴露于充分量的電離輻射或促炎性信號、化合物或組合物，任選地其中促炎性信號、化合物或組合物為細菌LPS或TNFa，和/或任選地其中急性生物學(xué)應(yīng)答的遞質(zhì)為NF-kB或IkB。4.實施方案1、2或3的方法，其中所述急性刺激或生物學(xué)損害是對充分數(shù)量的用藥物治療小鼠和充分數(shù)量的用媒介物對照小鼠給予足夠的細菌LPS，并且在以下時間測量試驗化合物對急性生物學(xué)應(yīng)答的遞質(zhì)的作用(i)所述急性應(yīng)答為最大或接近最大時，任選地在通過腹膜內(nèi)注射給予細菌LPS之后的約1.5小時，禾n(ii)在給予足夠的細菌LPS之前和/或之后的一個或兩個其它時間點，任選地在給予足夠的細菌LPS之前的一個時間點和在急性應(yīng)答最大或接近最大的之后的一個較晚的時間點，任選地在通過腹膜內(nèi)注射給予細菌LPS之后的約2.0或2.5小時，和任選地其中急性生物學(xué)應(yīng)答的遞質(zhì)是NF-kB或IkB。5.實施方案4的方法，其中給予足夠的細菌LPS是實質(zhì)上根據(jù)實施例9中所述的方法或其適合的變體進行的，并且任選地，其中化合物部分地調(diào)節(jié)急性生物學(xué)應(yīng)答的遞質(zhì)的水平或活性的能力是實質(zhì)上根據(jù)實施例7中所述的方法或其適合的變體進行的。6.實施方案1、2、3、4或5的方法，包括使用陽性生物動力學(xué)藥物對照(任選地為17a-乙炔基雄甾-5-烯-3(3，7(5,17(5-三醇)來評價試驗化合物的相對功效或效力，并且使用生物靜力學(xué)藥物對照來評價試驗化合物的相對功效或效力。7.藥物產(chǎn)品或批準前的藥物產(chǎn)品，包括處于藥物的劑型和包裝中的藥物以及包裝說明書或標簽，所述包裝說明書或標簽包括關(guān)于藥物的效力、作用機理、或臨床應(yīng)用的信息，其中效力、作用機理或臨床應(yīng)用信息至少部分地得自包括實施方案1、2、3、4或5的方法在內(nèi)的表征方法。8.藥物產(chǎn)品或批準前的藥物產(chǎn)品，包括處于藥物的劑型和包裝中的藥物以及包裝說明書或標簽，所述包裝說明書或標簽包括關(guān)于藥物的效力、作用機理、或臨床應(yīng)用的信息，其中效力、作用機理或臨床應(yīng)用信息至少部分地得自以下的表征方法，所述表征方法包括(a)使細胞在體外與足夠量的NF-kB活性的活化劑接觸足夠的時間，其中所述45細胞可以通過可檢測到的細胞中NF-KB水平或活性增加來應(yīng)答NF-KB活化劑。(b)使細胞在體外與足夠量的藥物接觸足夠的時間，其中與適合的對照相比，所述藥物可檢測到地抑制NF-KB活性的活化；禾B(c)任選地將藥物抑制NF-kB活化的能力與參考化合物進行對比，其中參考化合物為本文中所述的式1化合物，其具有在表征方法中使NF-kB活化受到約25%到約75%的抑制的能力，其中在表征方法中，所述藥物使NF-kB活化抑制約25%到約75%并且任選地其中參考化合物或藥物不會可檢測到地或顯著地直接結(jié)合于糖皮質(zhì)激素受體，或者任選地其中參考化合物或藥物不會可檢測到地或顯著地激動糖皮質(zhì)激素受體，任選地，與適合的激動劑對照相比，所述藥物不使糖皮質(zhì)激素受體有超過約20%的激動。9.實施方案7或8的藥物產(chǎn)品，其中劑型包括口服、非腸道、局部或吸入制劑。10.實施方案8或9的藥物產(chǎn)品，其中在表征方法中參考化合物或藥物使NF-kB活化受到約35%到約70%或約40%到約65%的抑制。11.實施方案8、9或10的藥物產(chǎn)品，其中細胞中的NF-kB被TNF-a、TNF-(3、TGF-(kIL-1、表皮生長因子、細菌LPS、細菌肽聚糖、酵母聚糖、細菌脂蛋白、細菌或病毒的抗原或基因產(chǎn)物、紫外線照射、熱或溫度升高、淋巴因子或氧化自由基、或11202中的一種、兩種、三種或更多種活化。12.實施方案8、9、10或11的藥物產(chǎn)品，其中參考化合物或藥物在適合的結(jié)合試驗中以》Opm的kd直接結(jié)合于糖皮質(zhì)激素受體，或者其中參考化合物或藥物在適合于檢測糖皮質(zhì)激素受體介導(dǎo)的基因表達的活化或增加的試驗中在等于或大于約10|iM的濃度不會可檢測到地激動糖皮質(zhì)激素受體。13.實施方案8、9、10、11或12的藥物產(chǎn)品，其中體外細胞是哺乳動物、嚙齒動物或人的細胞，任選地選自人THP-1細胞、大鼠RAW細胞、巨噬細胞、單核細胞、T-淋巴細胞、B-淋巴細胞、樹狀細胞、膠質(zhì)細胞、枯否細胞、肝細胞、嗜中性粒細胞、白細胞、和得自全血的細胞。14.實施方案7或8的藥物產(chǎn)品，其中包括關(guān)于藥物的效力、作用機理或臨床應(yīng)用的信息以符合管理機構(gòu)或檢査組織檢査或批準所述藥物產(chǎn)品的商業(yè)用途或上市的規(guī)范。15.治療哺乳動物中的炎癥狀況或自身免疫性疾病的方法，包括對受試者給予、或為受試者的組織遞送有效量的通過實施方案1、2、3、4、5或6的方法鑒定的生物動力學(xué)化合物，其中使用陽性生物動力學(xué)化合物作為參考標準，或者其中生物動力學(xué)化合物在適合的體外試驗中部分地抑制急性生物學(xué)應(yīng)答的遞質(zhì)，其中適合的體外試驗任選地實質(zhì)上是實施例7的方法或其適合的變體。16.具有以下結(jié)構(gòu)的純的化合物其中，一個Ri為-H或任選被取代的CL8垸基，另一個W為-OH、C2.8酯或d.8醚；一個W為-H或任選被取代的Cl8院基，另一個R2為-H、-OH、C2.8酯或C!.8醚；一個RS為-H或任選被取代的d.8垸基，另一個RS為-OH、C2.8酯、CL8醚或任選被取代的d.s垸基；一個R4為-H或任選被取代的Cl8院基，另一個W為-OH、(32.8酯或d.8醚；R5為-CH3、-C2H5或-CH20H;R6為-H、-CH3、-C2H5或-CH20H;—個R"為-H或任選被取代的d.8烷基，另一個W為-H、-OH、C2.8酯或d.847醚；R"為-H或鹵素；和一個RH為-H或任選被取代的CL8垸基，另一個R"為-H、-OH、C2.8酯、Q.8醚或任選被取代的d.8烷基。17.實施方案16的純化的化合物，其中R2、W或R11中的一個、兩個或三個為-OH、C2.8酯、Cw醚、K)或二NOH。18.實施方案17的純化的化合物，其選自17ot-乙炔基雄甾-5-烯-3卩,7卩,17卩-三醇、雄甾-5-烯-3(3，7(U6a，17(5-四醇、17a-乙炔基雄甾-5-烯-3p，7卩,16a,17P-四醇、雄甾-5-烯-3(3，7ot，16a,17P-四醇、雄甾-5-烯-3p,4p,16a,17(3-四醇、雄甾-5-烯-3a，4(3,16ot,17p-四醇、雄甾-5-烯-3p,lip,16a,17(5-四醇、雄甾-5-烯-3a,lip,16a,17p-四醇、3p，ll卩，16(U7卩-四醇、雄甾-5-烯-3a，ll(3,16p,17(3-四醇或任何這些化合物的(:2.4單酯或(32.4二酯類似物，任選地，其中(1)(^2.4單酯為3-位或17-位上的乙酸酯或丙酸酯或(2)(:2.4二酯為3-位和17-位上的乙酸酯或丙酸酯。19.實施方案17或18的純化的化合物，其中化合物為(a)最低為80%純、最低為95%純或最大為98%純的粉末或顆粒或(1)最低為80%純、最低為95%純或最大為98%純的溶液或懸浮液。這些化合物包括17a-乙炔基雄甾-5-烯-3(5，7(3,17(5-三醇、雄甾-5-烯-3卩，4(3，1600,17|3-四醇、雄甾-5-烯-3p,ll(5，16oc,17(3-四醇、雄甾-5-烯-3卩,7(3,16a,17p-四醇和其中一個或兩個羥基的構(gòu)型從a變?yōu)榈?3或從(3變?yōu)閍的這些化合物的差向異構(gòu)體，例如，17(3-乙炔基雄甾-5-烯-3p,7(3,17oc-三醇、雄甾-5-烯-3，,4(3,1606,1701-四醇、1701-乙炔基雄甾-5-烯-301,7卩,17卩-三醇或雄甾-5-烯-3a,4卩，16a，17l3-四醇。20.實施方案17、18或19的純化的化合物，其中所述化合物為約80%、約85%、約90%、約95%、約97%或約98%到約99.5%或約99.9%純，任選地，其中所述化合物為粉末或顆粒的形式，任選地，其中通過適當?shù)臏y定法例如光散射法測量的粉末的平均粒徑為約50nm或約100nm到約5fim、約lOpm或約25pm。21.鑒定化合物的方法，所述化合物具有可檢測到地調(diào)節(jié)哺乳動物中的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞、CD4+CD25+CD103+調(diào)節(jié)性T細胞、CD4+CD25highCD103+調(diào)節(jié)性T細胞或CD4+CD25^h調(diào)節(jié)性T細胞的數(shù)量或活性的潛力，所述方法包括選擇以下的化合物(i)與在體外的適合的對照人或哺乳動物細胞相比，在體外使人或哺乳動物細胞中的糖皮質(zhì)激素受體、雄激素受體、雌激素受體-a、雌激素受體-卩或任何這些生物分子的生物學(xué)活性變體中的一種或多種受到超過約30%的活化或抑制；(ii)分子量為約100-1000道爾頓，任選地分子量為約250-850道爾頓；(iii)與適合的陰性對照或正常對照相比，在適合的試驗中使CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞、CD4+CD25+CD103+調(diào)節(jié)性T細胞、CD4+CD25h妙CD103+調(diào)節(jié)性T細胞、或CD4+CD25high調(diào)節(jié)性T細胞的數(shù)量或活性有超過20%的增加或降低；和(iv)與體外適當?shù)年幮詫φ杖嘶虿溉閯游锛毎啾?，在體外任選地使人或哺乳動物細胞中NF-kB的轉(zhuǎn)錄活性或水平抑制或減少約20-80%;從而鑒定化合物。22.實施方案21的方法，其中哺乳動物為嚙齒動物或人。23.實施方案21或22的方法，其中通過一種規(guī)程測定CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞、CD4+CD25+CD103+調(diào)節(jié)性T細胞、CD4+CD25highCD103+調(diào)節(jié)性T細胞、或CD4+CD25high調(diào)節(jié)性T細胞的數(shù)量或活性，所述規(guī)程包括以下的一種、兩種或三種(a)實施例20的方法或其適合的變體；(b)實施例21的方法或其適合的變體；或(c)在本文中引用的參考文獻中的方法或其適合的變體，其中所述方法或其適合的變體允許評價CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞、CD4+CD25+CD103+調(diào)節(jié)性T細胞、CD4+CD25highCD103+調(diào)節(jié)性T細胞、或CD4+CD25high調(diào)節(jié)性T細胞的數(shù)量或活性。24.實施方案21、22或23的方法，其中所述化合物用于以下疾病的治療或預(yù)防自身免疫性疾病或不期望的炎癥狀況，其任選地為關(guān)節(jié)炎病況例如骨關(guān)節(jié)炎(原發(fā)性或繼發(fā)性骨關(guān)節(jié)炎)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、與脊椎炎有關(guān)的關(guān)節(jié)炎例如強直性脊椎炎、多發(fā)性硬化、阿爾茨海默病、腱鞘炎、狼瘡病況例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡或盤狀紅斑狼瘡、腱炎、粘液囊炎、肺炎癥狀況例如哮喘、氣腫、慢性阻塞性肺病、肺纖維化、囊性纖維化、急性或成人呼吸窘迫綜合征、慢性支氣管炎、急性支氣管炎、細支氣管炎、閉塞性纖維性細支氣管炎、伴有機化性肺炎的閉塞性細支氣管炎。所述化合物可以是本文中所述的式1化合物。這些實施方案以及本公開的其它部分的變體和改進對于閱讀了本公開的本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的。這種變體和改進都在本發(fā)明范圍內(nèi)。本文中引用的所有引證文獻或參考文獻都被在這個位置或在這段后面的另外的段落中全文并入本文作為參考。實施例。以下實施例進一步舉例說明本發(fā)明，并且它們不意在以任何方式對其進行限制。實施例1。肺炎癥的治療。實質(zhì)上如(D.Auci等人，Ann.NewYorkAcad.Sci.1051:730-7422005，新引用的)中所述，使用三個化合物，3p，16a-二羥基-17-氧代雄甾烷、3a,16p,17(5-三羥基雄甾烷和3a,16a,17ot-三羥基雄甾烷治療小鼠的炎癥。在研究中使用5到8周齡的CD1雄性小鼠(CharlesRiver,Calco，Italy)。將動物圈養(yǎng)在受控環(huán)境中并且為其提供標準的嚙齒動物食物和水。動物護理遵循可適用的關(guān)于保護動物的規(guī)章。將小鼠分配到以下組之一中(1)用在鹽水中的2%角叉菜膠-人處理的小鼠(角叉菜膠-人治療對照組)，(2)在給予角叉菜膠-X之前的24小時和1小時通過皮下注射(s.c.)O.lmg、0.01mg或0.001mg的3p,16a-二羥基-17-氧代雄甾烷處理的小鼠，(3)在角叉菜膠之前24和1小時通過s.c.注射0.1mg、0.01mg或0.001mg的3a，16a,17a-三羥基雄甾烷處理的小鼠；(4)在給予角叉菜膠A之前的24小時和1小時通過s.c.注射用0.1mg、0.01mg或0.001mg的3a,16p,17p-三羥基雄甾烷處理的小鼠；(5)在給予角叉菜膠-人之前的24小時和1小時通過S.C.注射用媒介物(0.1%的羧甲基纖維素、0.9%鹽水、2%吐溫80、0.05%苯酚)處理的小鼠；(6)在給予角叉菜膠-X之前的24小時和1小時通過將兔抗小鼠多克隆抗-TNF-ot抗體(200ng)作為腹膜內(nèi)濃集注射處理的小鼠(陽性對照組)；和(7)沒有用角叉菜膠-X處理的偽操作小鼠。每個組由IO只小鼠組成。所有的處理都以100pL的最終容積給予。如下誘導(dǎo)肺(胸膜腔)炎癥。將小鼠用異氟烷麻醉并且在左側(cè)第六肋間隙的水平面皮膚切口制造皮膚切口。將下面的肌肉剖開并且將0.1mL鹽水(對照)或含2%入-角叉菜膠的0.1mL鹽水注射到胸膜腔中。角叉菜膠-X為炎癥的有效誘導(dǎo)物，其在這個規(guī)程中表現(xiàn)為胸膜腔中的積液和嗜中性粒細胞積聚。通過縫合關(guān)閉切口并且使動物復(fù)蘇。在注射角叉菜膠-人之后的4小時，通過暴露于C02將動物無痛處死。小心地將胸部打開并將胸膜腔用包含肝素(5U/mL)和吲哚美辛(10嗎/mL)的1mL鹽水溶液漂洗。通過抽出將滲出物和洗滌液除去并且測量總體積。將被血液污染的任何滲出物拋棄。通過回收的總的胸膜腔容積減去注射的lmL體積計算滲出物的量。將滲出物中的嗜中性粒細胞懸浮在磷酸鹽緩沖鹽水中并且在錐蟲藍染色之后在Burker室中借助光學(xué)顯微鏡計數(shù)。結(jié)果通過單因素ANOVA進行分析，隨后進行用于多重比較的Bonferronipost-hoc檢驗。認為小于0.05的p-值是顯著的。對于統(tǒng)計分析，將每個組與用角叉菜膠-入和未接受其它治療的小鼠的對照組進行比較。用角叉菜膠A攻擊的和未經(jīng)處理的所有小鼠都發(fā)展為急性胸膜炎，產(chǎn)生混濁的滲出物并且胸膜的嗜中性粒細胞數(shù)量增加。在用媒介物處理的小鼠的胸膜中，觀察到滲出物體積和白細胞數(shù)量的增加與用角叉菜膠-X攻擊和沒有接受治療的對照小鼠相似。相對于這兩個對照小鼠組，用3p，16a-二羥基-17-氧代雄甾垸處理的動物在0.1mg和0.01mg劑量下表現(xiàn)出胸膜中嗜中性粒細胞的數(shù)目、胸膜滲出物體積的明顯減少，而更低的0.001mg劑量下沒有活性。用O.lmg劑量的3(3,16a-51二羥基-17-氧代雄甾烷處理的胸膜滲出物體積顯著降低，但是在更低的0.01mg禾口0.001mg劑量下沒有出現(xiàn)這種情況。用3a,16a,17ot-三羥基雄甾垸處理的動物在O.lmg和0.01mg劑量下表現(xiàn)出胸膜中的嗜中性粒細胞數(shù)量的明顯減少。用3a，16(5，17(3-三羥基雄甾烷處理還在0.1mg和0.01mg劑量表現(xiàn)出胸膜中嗜中性粒細胞數(shù)量的明顯減少。3a，16a,17a-三羥基雄甾烷和3a，16(3,17a-三羥基雄甾烷的效力與使用多克隆的抗-TNF-a抗體對照的觀察結(jié)果相似，而30,1601-二羥基-17-氧代雄甾垸效力相對較差。下表描述了接受處理的動物組相對于暴露于角叉菜膠-入但是未用任何其他物質(zhì)處理的未經(jīng)處理的對照動物(陰性對照組)的嗜中性粒細胞數(shù)量。將陰性對照組的嗜中性粒細胞數(shù)量設(shè)置為100%，并且將其它組與之相比較。用抗-TNF-a抗體治療的動物組(陽性對照組)的嗜中性粒細胞數(shù)量為陰性對照組的嗜中性粒細胞數(shù)量的29%，表明該抗體具有針對角叉菜膠-人暴露的抗炎作用。媒介物對照組沒有表現(xiàn)出相對于陰性對照組的嗜中性粒細胞數(shù)量的顯著減少(91%)，表明單獨的媒介物沒有顯著的抗炎作用。3卩,16a-二羥基-17-氧代雄甾烷3a，16a,17a-三羥基雄甾烷3ct，16p,17(3-三羥基雄甾烷0.001mg97%0.001mg103%0.001mg95%0.01mg73%0.01mg45%0.01mg50%0.1mg73%0.1mg30%0.1mg42%在這個模型中具有統(tǒng)計顯著的抗炎癥活性的其它化合物是17a-乙炔基雄甾-5-烯-3卩,7p,17(5-三醇(通過口服強詞法給予1mg和0.1mg)和17p-氨基雄甾-5-烯-3p-醇(通過口服強詞法給予40mg/kg，約0.5mg/小鼠)。與用作媒介物對照的小鼠組相比，這些化合物是有活性的?？梢詫⒈疚闹忻枋龅钠渌?化合物以這種方式使用，以表征它們治療或改善炎癥的相對能力。這些化合物包括3(3,16(3，17(3-三羥基雄甾烷、3(3,16a,17a-三羥基雄甾烷、3(5，16(3,17a-三羥基雄甾烷、3卩,16p-二羥基雄甾-5-烯-17-肟、3(3，16a-二羥基雄甾-5-烯-17-月虧、3a,16a-二羥基雄甾-5-烯-17-月虧、3p,16a-二羥基雄甾烷-17-肟和這些化合物的如下的類似物(l)在7-位包含a構(gòu)型或(5構(gòu)型的羥基和/或(2)在5-位或4-位包含雙鍵，和/或(3)這些中任一種的酯、醚、氨基酸、氨基甲酸酯或月虧(:NOH)衍生物、結(jié)合物、或類似物。實施例2。免疫應(yīng)答的分析。發(fā)現(xiàn)化合物3a，16a,17cx-三羥基雄甾烷具有使得所述化合物作為優(yōu)異的用于治療炎癥狀況例如哮喘的藥物的生物學(xué)特性。具體地，所述化合物的應(yīng)用沒有伴隨有IL-13的反彈，IL-13的反彈是抗炎糖皮質(zhì)激素化合物例如地塞米松的已知副作用。在應(yīng)用糖皮質(zhì)激素之后的IL-13反彈使得哮喘患者更傾向于發(fā)生隨后的急性發(fā)病，因此，沒有這種副作用的抗炎藥是有利的。不發(fā)生IL-13反彈是出乎意料的。在卵清蛋白(OVA)敏化的哮喘小鼠模型中觀察到了3a，16a，17a-三羥基雄甾烷限制嗜曙紅細胞載荷和減少關(guān)鍵炎癥遞質(zhì)(IL-5、IL-13、半胱氨?；准毎?的能力。通過在第l和第12天腹膜內(nèi)注射OVA(在明礬輔助劑中)使BALB/c小鼠敏化。通過在第28和第30天向肺遞送OVA用OVA攻擊氣道，或者向肺遞送鹽水。在第31天，將用鹽水處理的6只小鼠和用OVA攻擊的6只小鼠處死并且分析肺組織。其余的動物被分成6組(每組6只小鼠)。如下對小鼠的組通過每天一次皮下注射進行治療。第1組媒介物對照(0.1%羧甲基纖維素，0.9%鹽水，2%吐溫80，0.05%苯酚)。第2組地塞米松(5mg/kg)。第3組3oc,16a，17a-三羥基雄甾垸(lmg/小鼠)。在第35天在最后一次治療之后的1小時將第1-3組中的三只動物處死，將第1-3組中的剩余三只動物在第38天處死。如下表所示，3a，16a,17a-三羥基雄甾烷沒有產(chǎn)生在用地塞米松治療的動物中觀察到的IL-13增加。<table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table>在攻擊之后第38天，除了IL-13反彈減少之外，與地塞米松治療組(145pg/mL)相比，用3a,16a,17a-三羥基雄甾垸治療的動物肺組織中的IL-5水平降低(90pg/mL)。在第38天，媒介物對照組中的IL-5水平為75pg/mL。將本文所述的其它式1化合物以這種方式使用，以鑒定它們治療或改善炎癥而沒有IL-13和/或IL-5反彈效應(yīng)的能力，包括3p,16卩，17卩-三羥基雄留烷、3(5，16a，17a-三羥基雄甾烷、3(3，1613，17a-三羥基雄甾烷、雄甾-5-烯-2a，3(5,16a,17卩-四醇、雄甾-5-烯-3[3,7卩,1606,17(3-四醇和17a-乙炔基雄甾-5-烯-3p,7p,17(5-三醇。這些結(jié)果表明，F(xiàn)1C可用于在體內(nèi)治療肺炎癥或哮喘。在另一種規(guī)程中，如下從鼠科動物骨髓培養(yǎng)肥大細胞群。簡而言之，使用PBS和27g針頭從股骨沖洗(flush)得自Balb/C小鼠的骨髓。將細胞在含19%FBS和分泌IL-3的細胞的2/3RPMI-1640中培養(yǎng)。在用于實驗之前使骨髓細胞在包含IL-3的混合物中分化18-25天。如此培養(yǎng)的骨髓細胞具有與粘膜肥大細胞類似的表現(xiàn)型并且被稱為骨髓來源的肥大細胞(BMMC)。通過常規(guī)的流細胞計數(shù)技術(shù)核對體外繁殖的肥大細胞的均質(zhì)性并且用細胞類型特異性標示物染色。在繁殖的第14和21天，收獲成熟的肥大細胞并且準備用于試驗培養(yǎng)。目的是要評價化合物例如脫氫異雄甾酮對肥大細胞刺激結(jié)合的脫粒的影響。將制備的肥大細胞以1X107細胞/mL的密度分配在試驗培養(yǎng)孔中。在對照培養(yǎng)中，在IgE受體與IgE抗原-抗體復(fù)合物交聯(lián)之后誘導(dǎo)肥大細胞脫粒。在平行的培養(yǎng)組中，將肥大細胞與不同劑量的脫氫異雄甾酮預(yù)孵育，隨后使用抗-IgE抗體活化。如通過從細胞的細胞溶質(zhì)貯藏粒釋放P-葡糖苷酸酶所測量的，在沒有刺激的存在下，肥大細胞沒有可檢測到的脫粒。向培養(yǎng)物引入抗-IgE受體抗體引起(5-葡糖苷酸酶的顯著釋放。在肥大細胞暴露于單獨的脫氫異雄甾酮時，沒有可測量的脫粒。然而，在用抗-IgE抗原-抗體復(fù)合物活化之前，預(yù)先暴露于lOOpM劑量的脫氫異雄甾酮5到10分鐘的肥大細胞表現(xiàn)出大約70%的脫粒抑制。較低水平的脫氫異雄甾酮表現(xiàn)出抑制脫粒的能力成比例地變小。在類似的規(guī)程中，F(xiàn)1C例如17ot-乙炔基雄甾-5-烯-3(3，7(5,17P-三醇、雄甾-5-烯-3(5,7p，16a,17p-四醇或雄甾-5-烯-30^^，1600,173-四醇比脫氫異雄甾酮的效力大10-1000倍。實施例3。致命性炎癥/休克的治療。在致命性休克規(guī)程中使用兩種化合物，16a-溴表雄酮(3p-羥基-16a-溴雄甾烷-17-酮)和3(3，16a-二羥基-17-氧代雄甾垸。在一個規(guī)程中，將3mg的16a-溴表雄酮通過口服強飼法給予一組動物，而另一組通過皮下注射接受3mg的16ot-溴表雄酮。一組對照動物接受安慰劑對照。在這個規(guī)程中，在給予致死量的細菌脂多糖(LPS)之前的24小時和之后的1小時對小鼠給予16a-溴表雄酮。在觀察期(在給予LPS之后的72小時)結(jié)束時，媒介物治療的安慰劑對照動物中沒有一只存活，而接受通過口服給予16a-溴表雄酮的動物有65%的存活。通過皮下注射接受16a溴表雄酮的動物有50%的存活。存活72小時的動物都從LPS接觸恢復(fù)健康。在第二個試驗中，在給予致死量的LPS之前的24小時和之后的1小時通過口服強飼法對小鼠給予16a-溴表雄酮或3p,16a-二羥基-17-氧代雄甾烷。將媒介物治療組的動物用作安慰劑對照。在72小時，安慰劑對照小鼠有25%的存活，用3p,16oc-二羥基-17-氧代雄甾烷治療的小鼠有50%的存活，用1601-溴表雄酮治療的小鼠有80%的存活。在另一個試驗中，顯示了16a-溴表雄酮和3(3，16a-二羥基-17-氧代雄甾垸防止通過使小鼠暴露于亞致死量的LPS而誘導(dǎo)的肺損傷的能力。在這個試驗中，在淺度麻醉情況下對動物的氣管和肺給予100嗎的LPS之前的24小時和之后的1小時通過口服強飼法對5只小鼠的組給予化合物、無菌鹽水(陰性對照)或媒介物(媒介物對照)。在48小時，將動物處死并且通過肺泡灌洗(BAL)從動物的肺取得樣品。將BAL液體中的細胞計數(shù)，細胞數(shù)多表示肺的炎癥和損傷。在這個試驗中，介導(dǎo)炎癥和肺損傷的細胞應(yīng)答于LPS的存在而透過到肺中。在陰性對照和媒介物對照組中，BAL液體包含約6X10"細胞/mL。用16a-溴表雄酮(pi.02)或3(5，16oc-二羥基-17-氧代雄甾垸(pi.04)治療的動物組的細胞數(shù)具有顯著減少的BAL流體中的細胞計數(shù)(約4.4Xl(^細胞/mL)。這個結(jié)果顯示，化合物在其中肺損傷或損害與不受控制的或過量的炎癥有關(guān)的例如哮喘或COPD的臨床病況中有活性?？梢园搭愃品绞奖碚髌渌衔?，例如，17ot-乙炔基雄甾-5-烯-3(3,7(5,17卩-三醇或17卩-氨基雄甾_5_烯_3(3_醇。實施例4。從肺組織清除細菌。使用預(yù)先公開的規(guī)程來證明16a-溴表雄酮從肺組織清除銅綠假單胞菌(P^wcfomomwaerwg/"osa)感染的能力，A.vanHeeckeren等人，J.Clin.Invest"100(11):2810-28151977;A.vanHeeckeren等人，Am.J.Respir.Crit.CareMed.,161:271-2792000。所述規(guī)程在CFTR小鼠中進行，其被用作人囊性纖維化的動物模型，S.D.Freedman等人，Pro"Natl.Acad.Sci.USA,96(24):13995-140001999;W.Zeng等人，Am.J.Physiol.Cell.Physiol.273:C442-C4551997。使用包含細菌的瓊脂糖小珠(50pL，包含約6.1X104CFU/動物)建立慢性銅綠假單胞菌感染在先前有所公布，J.R.Starke等人，Pediatr.Res.,22:698-7021987。將兩組小鼠(每組11=9)用40mg/kg的16a-溴表雄酮或媒介物(對照)處理并且在將瓊脂糖小珠引56入到肺中之后的10天測定動物肺中的細菌載荷。在第10天，媒介物對照動物的肺中的細菌載荷為約6Xl(^CFU/動物，而用16a-溴表雄酮處理的動物具有降低的細菌載荷(p-0.04)。這個結(jié)果表明，16a-溴表雄酮不僅抗炎，而且其還可用于治療或減少肺感染，這對于用于治療其中炎癥和感染可能共存的例如囊性纖維化的病況的藥物來說是所希望的性質(zhì)。實施例5。在人細胞中的體外抗炎活性。使用暴露于LPS的人全血證明16a-溴表雄酮和3(3,16a-二羥基-17-氧代雄甾垸在體外減少人細胞中的炎癥的能力。與暴露于單獨的LPS(陽性對照)或不含化合物的媒介物(二甲基亞砜)(媒介物對照)的細胞相比，在16a-溴表雄酮(100ng/mL)和3f5,16a-二羥基-17-氧代雄甾烷的存在下觀察到細胞產(chǎn)生的y-干擾素減少。在已經(jīng)將細胞在LPS的存在下培養(yǎng)24小時時，測量生長培養(yǎng)基中的Y-干擾素的量。實施例6。自身免疫神經(jīng)變性的治療。對三種化合物，17(5-氨基雄甾-5-烯-3p-醇、17p-二甲基氨基雄甾-5-烯-3p-醇和17|3-甲基氨基雄甾-5-烯-3p-醇，表征其改善小鼠的實驗性變應(yīng)性腦脊髓炎(EAE)的能力。這種脫髓鞘病況被廣泛用作人多發(fā)性硬化模型和用于試驗治療多發(fā)性硬化的治療方法的模型，例如，B.F.BeboJr.等人，J.Neurosci.Res,52:420-4261998;R.R.Voskuhl等人，Neuroscientist,7:258-2702001;H.Offner等人，J.Neuroimmunol.,130:128-1392002。在這些模型中的活性表示試驗化合物預(yù)防與EAE疾病進展有關(guān)的神經(jīng)元死亡或延緩神經(jīng)元死亡速率的能力。在這種規(guī)程中，在疾病癥狀發(fā)作時通過口服強飼法對雌性SJL/J小鼠給予化合物。使用抗原來引發(fā)小鼠中的EAE病況。用于主動免疫法的抗原是小鼠蛋白脂質(zhì)蛋白(PLP)139-151(HCLGKWLGHPDKF)。使用這種肽抗原進行免疫引發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的自身免疫Thl介導(dǎo)的脫髓鞘疾病。所述抗原通過固相合成制備并且通過高效液相色譜法純化。57通過用包含200|ig結(jié)核分枝桿菌(Myco6a"er/wm^6ercw/a^)的完全弗氏佐劑中的150pg的PLP139-151肽進行免疫在雌性SJL/J小鼠中引發(fā)EAE病況。免疫規(guī)程是在第0天在后肋的四個位置上皮下注射。在免疫之后，每天使用以下的標準評價小鼠的EAE臨床跡象0=沒有臨床跡象或癥狀；1=尾部無力；2=輕度的后肢虛弱和尾部無力；3=中度的后肢虛弱和尾部無力或輕度的共濟失調(diào)；4=嚴重的后肢虛弱和輕度的前肢虛弱，伴隨中度的共濟失調(diào)；5=截癱伴有不超過中度的前肢虛弱；6=截癱伴有不超過重度的前肢虛弱或嚴重的共濟失調(diào)或瀕死狀態(tài)。媒介物對照組的小鼠在用PLP抗原免疫之后的約10-11天表現(xiàn)出可觀察到的EAE癥狀，這對于EAE疾病模型來說是典型的。從第1天開始，通過口服強飼法對動物每天給予17(5-氨基雄甾-5-烯-3P-醇、17(5-二甲基氨基雄甾-5-烯-3(3-醇或17p-甲基氨基雄甾-5-烯-3p-醇，所述第一天是指免疫之后的第一天。在觀察期結(jié)束時，所有三種化合物在5mg/kg的劑量下都具有活性，并且它們降低在第26天前觀察到的癥狀的臨床嚴重程度。在小鼠中，在約10ng/mL的血液水平觀察到化合物的治療活性。這些結(jié)果表明，化合物對于治療這種慢性自身免疫神經(jīng)變性疾病是具有生物學(xué)活性的。實施例7。NF-icB的體外抑制。有許多化合物可用于在體外抑制人細胞中NF-kB被TNF-a或LPS活化。NF-kB的活化增加介導(dǎo)炎癥的許多基因的表達。這個規(guī)程使用人THP-1細胞，其是具有單核細胞表現(xiàn)型的人單核血細胞。被稱為NF-KB-blaTHP-1的細胞系包含在NF-kB應(yīng)答元件的控制之下的P-內(nèi)酰胺酶報道基因(Invitrogen,CellSensor,產(chǎn)品編號K1176)。在這個細胞系中，p-內(nèi)酰胺酶報道基因被穩(wěn)定地整合到THP-1細胞中。這個細胞系用于檢測NF-kB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通道的激動劑或拮抗劑。這些NF-KB-blaTHP-1細胞應(yīng)答于腫瘤壞死因子a(TNFot)或細菌脂多糖(LPS)的存在而增加(5-內(nèi)酰胺酶報道基因的表達。(5-內(nèi)酰胺酶酶活性的水平通過熒光共振能量傳遞比率檢測來測量。TNFa禾BLPS都是活化THP1細胞中的NF-kB的有效的炎癥誘導(dǎo)58試劑。在這個試驗中，在TNFa或LPS的存在下降低NF-icB活性、并且從而減少(3-內(nèi)酰胺酶的化合物具有抗炎活性。通過傳代或根據(jù)需要喂養(yǎng)來維持NF-KB-blaTHP-1細胞。將在懸浮液中生長的細胞保持在2Xl()s個細胞/mL到2Xl(^個細胞/mL的密度。將細胞以20,000個細胞/孔在384孔黑色壁、透明底的試驗板(Costar#3712-TC低熒光背景板)中鋪板，之后約24小時加入10ng/mL的TNFa或0.2ng/mL的LPS，以活化NF-kB。在活化NF-kB的陽性對照試驗中，在(3-內(nèi)酰胺酶底物培育1小時之后，TNFa的ECso濃度為0.20ng/mL。LPS的ECso劑量為0.15ng/mL。在這個試驗中的TNF-a或LPS的EC5。濃度是指引起NF-kB最大活化的TNF-a或LPS的濃度的50%。合成的糖皮質(zhì)激素地塞米松(一種強力的抗炎藥)在這個試驗中以0.47nM(5次試驗的平均值)的EC5。降低TNFa的影響。已經(jīng)在其它體外細胞試驗中報告了相似的地塞米松生物學(xué)活性，在約1nM的ICso下觀察到對NF-kB活化的完全抑制(M.K.A.Bauer等人，Eur.J.Biochem.243:726-731,1977)。使用這個試驗，在LPS刺激之后在NF-kb-blaTHP-1細胞中抑制NF-kB活化的化合物的ICso顯示如下。用于這個試驗中的化合物的IC50濃度是指引起化合物能夠誘導(dǎo)的對NF-kB活化的50%最大抑制的化合物的濃度。所述試驗通常對于每種化合物進行2-4次，如下所示的值是每種化合物的平均值。以下表1中的數(shù)據(jù)表明，這些化合物中有許多都可以在極低的水平抑制這些人巨噬細胞細胞中的NF-KB。表1ic50*化合物0.47nM士O.lI地塞米松(陽性抗炎對照)>10岸雌二醇(陰性抗炎對照)8.2fM±7.43卩，7p，16a,17卩-四羥基雄甾-5-烯84.5fM±653a，7(3,16a，17(5-四羥基雄甾-5-烯>10|iM3p,7a，16a,17(3-四羥基雄甾-5-烯>10岸16a-乙酰氧基-3p，7p,17p-三羥基雄甾-5-烯0.4fM3卩,4(3,16a，17P-四羥基雄甾-5-烯0.01fM4(5-乙酰氧基-3p,16a,17l3-三羥基雄甾-5-烯2.0fM3p-乙酰氧基-7p，ll(3，17P-三羥基雄甾-5-烯>10|iM3(3,7(3,1lp,17P-四羥基雄甾-5-烯10fM3(3，7(5,17P-三羥基-ll-氧代雄甾-5-烯0.1pM17a-甲基-3p，lla，17P-三羥基雄甾-5-烯>10(iM3p,lla-二羥基-17-氧代雄甾-5-烯2.0fM2a，3(3,17(5-三羥基雄甾烷14pM±123p,17(3-二羥基雄甾-5-烯1.2fM±0.283(3,7(5，17p-三羥基雄甾-5-烯>10|iM3卩,7a,17卩-三羥基雄甾-5-烯19fM士ll3(3,7(3,17(3-三羥基-17a-乙炔基雄甾-5-烯>10一3(3,7(3,17(5-三羥基-17a-三氟甲基雄甾-5-烯6.8fM±5.63(3,7a,17P-三羥基-17a-乙炔基雄甾-5-烯12fM±9.83p,7p,17P-三羥基-17a-乙炔基雄甾-5-烯50.3fM±13.93p,7(5，17p-三羥基-17a-甲基雄甾-5-烯64fM±363(3,7a，17p-三羥基-17a-甲基雄甾-5-烯30pM±2916a-氟雄甾-5-烯-17-酮1.9nM±0.816a-碘表雄酮8.8pM±1.316a-溴表雄酮0.6nM±0.216卩-溴表雄酮>10|iM16a-羥基表雄酮7.2fM±4.73(3,17(3-二羥基-17a-甲基雄甾-5-烯11.5fM±3.53(3,17p-二羥基-7-氧代-17a-乙炔基雄甾-5-烯>10|iM3卩,17p-二羥基-7-氧代-17a-甲基雄甾-5-烯*|iM=l(TbM;nM=l(TyM;pM=10-"M;fM=10"3M在這個規(guī)程中表現(xiàn)出抗炎活性的其它化合物是3a-五氟乙基雄甾-4-烯-3卩,17卩-二醇(1<:5()3.1nM)、3a-五氟乙基雄甾-5-烯-3卩,17卩-二醇(IC5()17nM;最大的NF-kB抑制為50%)、3a/(5,17a-乙炔基雄甾烷-3a/卩，17(3-二醇(IC5Q200pM)、17a-三氟甲基雄甾烷-3a，17(3-二醇(IC5()l卯nM)、17(5-甘氨?；坨捋?3(5-醇(IC500.42pM)、3(5-甘氨?；坨捋?7卩-醇(IC501nM)、雄甾焼-3(3,16卩-二醇-17-肟(1(:501.9AVI)17cx-乙炔基雄甾-4-烯-3-酮-17(5-醇(IC502.9fM;最大的NF-kB抑制為80%)、16a-氟雄甾-5-烯-17-酮(IC5030pM)、16P-氟雄甾-5-烯-7卩-醇-17-酮(IC501.5nM)、雄甾烷-3a，16a,17(3-三醇(IC506.9fM)、雄甾垸-3a，16l3，17卩-三醇(IC5o19fM)、雄甾-5-烯-3P-醇-17(5-琥珀?；?IC500.2nM)、3(5-乙酰氧基-7(5,17卩-二羥基-ll-氧代雄甾-5-烯(IC501fM;最大的NF-kB抑制為65%)。這些化合物的NF-kb最大抑制為約25y。到80。/。，與合成的糖皮質(zhì)激素地塞米松在這個規(guī)程中的對NF-KB活化的100%抑制有區(qū)別。在這個規(guī)程中有兩個化合物增加NF-kB活性，為雄甾-5-烯-3卩,701，1601-三醇-17-酮(1(:5()1.3nM;相對于對照細胞為140%的NF-kB活性)和3p,17a-二甲基雄甾垸-3a,17p-二醇(IC5040nM)。在這個規(guī)程中表沒有表現(xiàn)出抗炎活性的化合物是3a,17a-甲基雄甾垸-3卩,17(3-二醇、3(3-乙酰氧基雄甾-5-烯-3p，17P-二醇、17a-甲基雄甾-5-烯-3(3,17卩-二醇-7-酮、16a-氟雄甾-5-烯-7p-醇-17-酮、16a-氟雄甾-5-烯-7a-醇-17-酮、17a-甲基雄甾垸-3(3,7a，17(3-三醇、雄甾-5-烯-3(3,11(3,17(3-三醇、16a-氟雄甾垸-17-酮、雄甾-5-烯-3a,17P-二醇、雄甾烷-2p，3a,16a,17卩-四醇和雄甾垸-3a,16a,17a-三醇，都具大于10pM的IC50?；衔镌诘偷乃较陆档蚇F-kB活性的能力表明它們可用于治療炎癥，特別是在其中NF-kB的過量水平或由NF-kB介導(dǎo)的細胞核轉(zhuǎn)錄活性在所述疾病或病況的病理學(xué)中起到主要作用的情況中。在上述測定法中，由地塞米松、16a-溴表雄酮和16p-溴表雄酮引起的NF-kB的最大抑制為100%，并且在這些化合物的濃度超過這些化合物的IC5o時沒有可檢測到的NF-KB活化。相比之下，其它化合物例如，3(3,7(3,16a，17P-四羥基雄甾-5-烯、3cc,7卩,16a,17P-四羥基雄甾-5-烯或3p,7(3,17(5-三羥基-17a-甲基雄甾-5-烯引起的NF-icB的最大抑制低于約80%，增加化合物的量到超過其IC5。水平不能提供顯著的對NK-KB活化的另外的抑制活性。對于這些化合物中的大多數(shù)，在這個測定法中的NF-kB的最大抑制程度為約25-80%，主要為約30-65%或約30-70%。這些結(jié)果表明，化合物例如3p,7(5，16a,17(3-四羥基雄甾-5-烯通過不能完全地阻止其生物活性的機制抑制NF-kB活化。表1中的幾個化合物不具有可檢測到的在體外細胞測定法中發(fā)揮抗炎活性的能力。進行了試驗并且在所述測定法中沒有活性(IC5?！?0pM)的其它化合物包括3p，17a-二羥基雄甾-5-烯、脫氫表雄酮(3P-羥基雄甾-5-烯-17-酮)、3P-羥基雄甾垸-7,17-二酮、16a-溴-3卩,17卩-二羥基雄甾-5-烯和16(5-溴-3(3-羥基雄甾-5-烯-17-酮。盡管如此，在這個體外細胞試驗中無活性的那些化合物中有一些，例如，16a-羥基表雄酮，仍然發(fā)現(xiàn)其在動物中具有體內(nèi)抗炎活性。這個結(jié)果表明，所述化合物可能通過不同的機制起作用或者它們的活性需要來自不止一個細胞系的細胞。這種化合物的體內(nèi)抗炎活性可以來自于，例如，引起前列腺素合成和在肝臟中的其它活性，從而產(chǎn)生系統(tǒng)性抗炎應(yīng)答?；蛘?，這種化合物的抗炎活性可以來自于化合物抑制由于不同于LPS的來源引起的NF-KB刺激的能力。有許多不同的物質(zhì)可以活化NF-KB活性，包括LPS、TNF-a、IL-1、某些病毒或細菌基因產(chǎn)物的存在、B細胞或T細胞的活化、或細胞暴露于紫外輻射。不是所有的細胞型都可以應(yīng)答所有這些刺激，因為不是所有的細胞表達應(yīng)答這些刺激中的每一種所需的信號機制。大多數(shù)細胞型可以應(yīng)答于這些信號中的一種或幾種，但是某種細胞型應(yīng)答于所有信號很少見。在本文使用的測定法中，NF-icB的活化來自于細菌LPS-誘導(dǎo)的刺激，因此，與其具有有限的抑制LPS信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通道能力的化合物在這個測定法中具有有限的降低NF-KB活性的能力。已經(jīng)有所描述并且可以并入本發(fā)明或用于實踐本發(fā)明的調(diào)節(jié)NF-kB的方法包括在以下公開中描述的那些。美國專利5,989,835、6,410,516、6,545,027、6,831,065和6，998，383。NF-kB活性的其它方面已經(jīng)有所描述，并且也可以并入到本發(fā)明的方法中，例如，A.S.Baldwin,AnnualRev.Immunol.14:649-6831996;M.Muller等人"Mol.Cell.Biol.22((4)1060-10722002;P.A.Baeuerle,Cell95:729-7311998。實施例8。通過與上述相似的規(guī)程考查所選擇的化合物治療小鼠中LPS誘導(dǎo)的休克/炎癥的能力。將每組三只體重約30g的ICR小鼠的五個組各自通過腹膜內(nèi)注射12(HiL媒介物(含30%磺基丁基醚-環(huán)糊精的水)、含雄甾-5-烯-3oc,7p，16oU7P-四醇的媒介物、含雄甾-5-烯-3(3，4(5，1606,17^四醇的媒介物、或含4(3-乙酰氧基雄甾-5-烯-30,16",17卩-三醇的媒介物處理。所有的藥物和媒介物制劑都是溶液而不是懸浮液?；腔』?環(huán)糊精通過購買得到(CaptisoFM,www.cydexinc.com)。有兩個媒介物對照組，一個組接受單獨的媒介物，另一個組接受媒介物和LPS。在通過腹膜內(nèi)注射對小鼠給予LPS(約LD，24劑量，艮卩，在給予LPS之后的24小時有50%致死)之前的24小時和之后的1小時給予媒介物和藥物。藥物以約40mg/kg(對于藥物的每次給予為1.2mg藥物/動物)給予。在注射LPS之后的1.5小時從動物收獲脾臟，將脾細胞溶胞并通過從脾細胞分離細胞核并且從溶胞的細胞核測量NF-kB測定活化的NF-kB。結(jié)果表明，與LPS+媒介物對照組相比，所有的三種化合物都使NF-kB活化的水平降低約50%。得自用媒介物而沒有LPS處理的動物的脾臟細胞中的活化的NF-kB水平與得自藥物處理的動物的脾臟細胞中的活化的NF-kB水平實質(zhì)上相同。這些結(jié)果表明了在動物中的有效的抗炎作用，這是通過與對照動物相比，在用藥物治療的動物中活化的NF-kB降低所現(xiàn)出來的。63在LPS攻擊之后的1.5小時分析NF-kB或TNFa的類似規(guī)程中使用的其它化合物為雄甾垸-3a,16a,17(3-三醇、雄甾烷-301,170-二醇-16-酮、17a-三氟甲基雄甾-5-烯-3卩,17l3-二醇、雄甾-5-烯-3a，17(3-二醇、雄甾-5-烯-3a,16a，17(3-三醇、3a-三氟甲基雄甾-5-烯-3p，17(5-二醇、雄甾烷-301,17(3-二醇-16-肟和雄甾-5-烯-3卩，17卩-二醇-7-酮。所有這些化合物都是作為化合物在含磺基丁基醚-環(huán)糊精的水中的溶液(而非懸浮液)給予。這些化合物在LPS攻擊之前的24小時和在LPS攻擊的同時(代替如上所述的在LPS攻擊之后的1小時)給予，隨后在PLS攻擊之后的1.5小時分析脾臟中的NF-kB或血液中的TNFa。化合物以40mg/kg的劑量給予，對于3a-三氟甲基雄甾-5-烯-3(5,17p-二醇，還將其以4mg/kg、0.1mg/kg和0.05mg/kg的劑量給予。相對于媒介物對照，對于所有這些化合物都觀察到NF-kB和TNFa抑制。對于3a-三氟甲基雄甾-5-烯-3(3，17p-二醇，在O.lmg/kg的劑量水平下經(jīng)治療的動物中觀察到NF-kB和TNFa的最大抑制。實施例9。體內(nèi)NF-KB抑制的動力學(xué)分析?？紪肆诵∈笾性谧⑸浼毦鶯PS之后的NF-icB抑制的動力學(xué)，以便進一步探索化合物例如17a-乙炔基雄甾-5-烯-3p,7(3,17(3-三醇的作用機理，如實施例7中所述，所述化合物在體外只是部分地抑制免疫細胞(巨噬細胞或單核細胞)中由LPS或TNFa誘導(dǎo)的NF-kb活化。在這項研究中，將小鼠通過腹膜內(nèi)注射如實施例8中所述的化合物在媒介物中的溶液(不是懸浮液)用17a-乙炔基雄甾-5-烯-3p,7(3,np-三醇(約40mg/kg、約1.2mg/動物)處理。在腹膜內(nèi)注射細菌LPS(約LD5o/24)之前的24小時注射藥物。所述研究使用每組12只動物的兩個組，在LPS攻擊之前的24小時給予媒介物對照或藥物。在即將進行LPS攻擊之前和在給予LPS之后的1.5、2.0和2.5小時分別從兩個組的3只動物收獲脾臟。收獲脾臟細胞并且通過實質(zhì)上如實施例8中所述測定細胞核中的NF-kB來測量活化的NF-kB的水平。在媒介物對照中在1.5小時出現(xiàn)給予LPS之后的NF-kB活化的最大值，其相對于給予LPS之前的活化的NF-kB的水平有4倍的升高。結(jié)果顯示如下。媒介物對照和藥物處理的動物的數(shù)值都是對得自脾臟細胞的細胞核中的NF-kB進行ELISA測量得到的相對光密度單位。時間(小時)媒介物對照藥物治療組018221.57222.0102.5109在1.5小時時間點的對NF-kB的深遠的抑制和在其它時間點的NF-kB活性的相對正常水平表明，化合物在LPS接觸之后的關(guān)鍵時間發(fā)揮了短暫的但是有效的對LPS誘導(dǎo)的外傷的抑制。在其它研究中的相似測定法表明，在注射LPS之后的30分鐘和60分鐘，媒介物對照小鼠中的活化的NF-icB的水平與這項研究中LPS處理前的時間點相似。這個結(jié)果表明，在這個模型中，LPS對脾臟細胞中NF-kB活化的影響在LPS攻擊之后的約1.5小時時最大。這個時間點揭示了用于體內(nèi)評價抗炎藥物候選物活性的適當時間或窗口，即，在LPS攻擊之后的約75分鐘到約105分鐘。所述窗口可以取決于生物學(xué)損害的給藥途徑而改變，例如，通過腹膜內(nèi)注射給予的LPS或TNFa與通過皮下或肌肉注射給予的LPS或TNFot相對比。同樣地，生物學(xué)損害可以是其它情況，例如，受試者暴露于約50-60cGy/分鐘的電離輻射相對于受試者暴露于約500-1000cGy/分鐘或約5-10cGy/分鐘的電離輻射。對小鼠中的LPS誘導(dǎo)的TNFa表達的分析表明，TNFa水平在LPS攻擊(通過腹膜內(nèi)注射給予500貼的LPS)之后的1.5小時達峰，在LPS攻擊之后的1-2小時觀察到TNFa的最高水平。在LPS之后的30分鐘和在2.5小時的TNFa水平較低?？梢苑治鲎鳛樯飫恿W(xué)藥物起作用的能力的其它化合物包括65雄甾-5-烯-3(3,7(3，16a，17(3-四醇、雄甾-5-烯-3a，7卩,16a，17(3-四醇、雄甾-5-烯-3卩,7a,16oc,17卩-四醇、雄甾-5-烯-3卩，4卩,160^，17卩-四醇、雄甾-5-烯-3(5,401,1601，17(5-四醇、雄甾-5-烯-3a,4(3,16a,17(3-四醇、17a-乙炔基雄甾-5-烯-3卩,7，,17(3-三醇、17a-乙炔基雄甾-5-烯-3(5,7a,17(5-三醇、17a-乙炔基雄甾-5-烯-3(3，17(3-三醇-7-酮和任何這些化合物的藥學(xué)可接受的類似物，例如，在1個、2個或更多個羥基處的羥基酯或醚衍生物的類似物。適合的酯和醚包括乙酸酯、正丙酸、異丙酸酯、琥珀酸酯、-0-C(0)-(CH2)n-CH2R、-0-C(0)-0-(CH2)n-CH2R、-0-C(0)-NH-(CH2)n-CH2R、氨基酸例如甘氨酸和丙氨酸(-0-C(0)-CHCH3-COOH)、羥基酯，和甲基、乙基、正丙基、異丙基-0-(CH2)n-CH2R、-0-(CH2)n-0-CH2R^i^B,-0-012(:112匿0-013)醚，其中n為1、2、3、4、5或6，并且R為畫H、-F、隱C1、-Br、-1、-OH、-C(O)OH(或可接受的鹽，例如，鈉鹽或鉀鹽)、-C(0)OCH3、-C(0)OC2H5。實施例10。實質(zhì)上如前所述考査式1化合物在被動膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型中影響關(guān)節(jié)炎進程的能力(E.Simelyte等人，Arthritis&Rheumatism,52(6):1876-1884,2005;Z.Han等人，Arthritis&Rheumatism46(3):818-823,2002;H.Miyahara等人Clin.Immunol.ImmunopathoL,89(l):89-76,1993)。在這個規(guī)程中，通過給予抗II型膠原抗體在DBA/1小鼠中誘導(dǎo)被動膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎，所述抗II型膠原抗體在動物中誘導(dǎo)針對關(guān)節(jié)組織的免疫應(yīng)答。在這個關(guān)節(jié)炎模型中的效力表示主要針對炎癥的效力，在得自在關(guān)節(jié)炎中起作用的細胞作用的分離物中進行評價。使用半定量的臨床評分系統(tǒng)評價關(guān)節(jié)炎的嚴重程度。將每組8只動物的組通過口服強飼法用40mg/kg/天的17a-乙炔基雄甾-5-烯-3p,7(3,17p-三醇處理14天或者用媒介物處理14天。媒介物是含30%環(huán)糊精-磺基丁基醚的水，藥物溶液是含20mg/mL藥物的媒介物。通過測量踝厚度對動物進行檢査，更高的關(guān)節(jié)炎評分(4分/爪)表示更嚴重的關(guān)節(jié)炎。實驗在約14天之后結(jié)束，并且進行組織學(xué)和基因表66達測量。對于組織學(xué)，收獲左后爪，在10%福爾馬林中固定24小時，脫鈣，并且包埋在石蠟中。將組織切片用用于番紅O-耐綠的蘇木精和曙紅染色，以測定蛋白多糖含量。使用半定量評分系統(tǒng)評價滑液炎癥、關(guān)節(jié)外炎癥、腐蝕和蛋白多糖損失。在給予抗體之后開始用化合物處理。所述規(guī)程允許觀察治療對關(guān)節(jié)炎進展的影響。結(jié)果表明，與第4組動物相比，在第7-14天，第l組中的膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎減少。與第1組動物在第7天的5.1的最大臨床評分相比，用媒介物處理的動物中在第8天的最大臨床評分為10.2。在第14天規(guī)程結(jié)束時，與對照組的4.1的評分相比，媒介物處理組的臨床評分為7.8。在接受處理的動物中在第7-14天的臨床評分之差是明顯的，這表明，與媒介物對照動物組相比，接受治療的動物中出現(xiàn)了炎癥水平的降低。用17a-乙炔基雄甾-5-烯-3p,7p，17(5-三醇進行處理的作用與用地塞米松進行處理相似，其也在這個動物模型中抑制炎癥和降低關(guān)節(jié)炎的嚴重程度。17oc-乙炔基雄甾-5-烯-3p，7(3,17(3-三醇降低關(guān)節(jié)炎嚴重程度的能力與在這種關(guān)節(jié)炎模型中幾乎沒有效力的細胞免疫抑制劑例如甲氨蝶呤或抗TNFa藥物形成對比。實施例11。研究了式1化合物影響小鼠中的LPS誘導(dǎo)肺損傷的能力。LPS誘導(dǎo)的肺損傷模型以前已經(jīng)用于評價對于急性肺損傷(ALI)、急性成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)和內(nèi)毒素休克或膿毒病的治療(Metz等人，C，Chest100(4):1110-9,1991;Windsor,A.C.等人，Ann.J.Med.Sci.306(2):111-6,1993;BrighamK丄.等人，Am.Rev.Respir.Dis.133(5):913-27,1986)。所述規(guī)程實質(zhì)上如Su,X.等人，IntenstiveCareMed.30:133-140,2004中所述進行。將得自JacksonLaboratory(BarHarbor,ME)的6-8周齡雌性C57/BL6小鼠(平均體重25g)隨機分為七個動物組并且提供標準的圈養(yǎng)和食物供給。所述各組為(1)用鹽水和LPS處理的小鼠，(2)用媒介物和LPS處理的小鼠，(3)用125嗎地塞米松處理的小鼠，(4)用40mg/Kg雄甾-5-烯-3卩,7p,16a,np-四醇和LPS處理的小鼠，(5)用40mg/Kg5a-雄甾烷-3(i,16a-二醇-17-酮和LPS處理的小鼠，(6)用40mg/Kg5a-雄甾烷-3p,17卩-二羥基-16-肟處理的小鼠，(7)用40mg/Kg雄甾-5-烯-3a,7p,16a,17p-四醇處理的小鼠。在第1天，小鼠用化合物或媒介物預(yù)處理。在第0天，小鼠用第二劑量的化合物或媒介物處理。在第0天+60分鐘，將小鼠在淺度麻醉的情況下在氣管的直接顯象情況下用100pg的大腸埃希氏桿菌LPS(Sigma)攻擊。在第2天(S卩，LPS攻擊之后的第48小時的時間點)，將小鼠處死，并且取得BAL(將細胞計數(shù)并且測量TNFa/IL6水平)。取出肺，粉碎并且用于髓過氧物酶(MPO)研究。通過在直接顯象的情況下將含50mgLPS(大腸埃希氏桿菌0111:B4,Sigma-Aldrich)的100mLPBS滴入到淺度麻醉(異氟烷)的氣管中預(yù)先形成LPS誘導(dǎo)的急性肺部炎癥。在第48小時的時間點，將小鼠處死。此后，在使下頸部的氣管暴露之后進行氣管切開。將鈍頭的20號針頭插入到暴露的氣管中，然后將其結(jié)扎并且用于進行支氣管肺泡灌洗(BAL)。為了使氣道出血和外傷最小化，使用0.5mL的無菌PBSX3進行BAL。典型地從這個過程回收總共1300mL。使用血細胞計數(shù)器測定BAL流體(BALF)中的細胞分類白細胞計數(shù)。對80-100個細胞進行分類。在得到BAL之后，將胸腔打開并通過右心室穿刺用3mL的無菌鹽水灌注心/肺。然后收獲所有的肺組織并且準備用于MPO測定。對于這個測定法，將肺分別地在磷酸鉀緩沖液(pH6.0，包含0.5%的十六垸基三甲基溴化銨)中勻化。F在離心(14,000Xg，IO分鐘，4"C)之后，將50|iL的上層清液加入到包含0.2mg/mL鄰聯(lián)茴香胺二鹽酸鹽(Sigma-Aldrich)和0.00002%過氧化氫的950pL磷酸鉀緩沖液中。在460"m測量吸光度的變化。使用市售的ELISA通過用于TNFa、IL-6的ELISA(R&DSystems)測定BALF無細胞的上層清液(200Xg，IO分鐘，4T:)中的細胞因子水平。特別驚人的是雄甾-5-烯-3(3，7(3,16a，17P-四醇的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)通過口服該化合物處理的動物的BAL中的MPO、TNFa和IL-6水平與媒介物處理的動物相比降低。對MPO(其是肺中嗜中性粒細胞載荷的度量)和促炎癥細胞因子TNF(X的影響是特別深遠的。這提示化合物阻斷促炎性細胞遷移到炎癥組織中以及減少促炎癥細胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的能力。在這個模型中，急性炎癥大概是由先天免疫成分的LPS刺激驅(qū)動的。這些相同的介質(zhì)癥有一些有所增加，并且被認為是與涉及幾種病癥的肺部炎癥有關(guān)，包括囊性纖維化、慢性阻塞性肺病、急性和慢性支氣管炎、甚至是某些傳染病如肺結(jié)核。用雄甾-5-烯-3p，7(5,16a，17p-四醇進行處理在48小時顯著降低BALF中MPO和促炎癥細胞因子水平的觀察結(jié)果與本文中關(guān)于雄甾-5-烯-3(3,7(5,16a,17P-四醇在慢性炎癥的疾病特異性模型(包括EAE)中報告的抗炎活性一致。實施例12。人混合淋巴細胞反應(yīng)(MLR)。3卩,16a-二羥基-17-氧代雄甾烷、3卩,17卩-二羥基-16-氧代雄甾烷、17oc-乙炔基雄甾-5-烯-3(5，7&17(5-三醇和17P-氨基雄甾-5-烯-3p-醇影響其中人T淋巴細胞應(yīng)答于特異性異源抗原(主要組織相容性復(fù)合體)的抗原特異性刺激的能力。MLR用作遲發(fā)型超敏反應(yīng)應(yīng)答的體外模型并且表示化合物可以在體內(nèi)對人抗原特異性T細胞應(yīng)答的影響?；衔镆种芃LR表示化合物對淋巴細胞的免疫抑制作用。不抑制MLR的化合物對于應(yīng)答性淋巴細胞的抗原特異性活化來說不是免疫抑制性的。從23-31歲的3名(2名男性，1名女性)禁食健康人類志愿者獲得血樣。受試者在研究之前的三個月中沒有使用過免疫調(diào)節(jié)劑、抗過敏藥或抗生素。受試者在上午9點和IO點之間取血，以限制可能對淋巴細胞體外應(yīng)答有影響的循環(huán)中激素或細胞因子水平的可能波動。通過在Ficoll-Hypaque(密度1.077，BiochromAG,Berlin,Germany)梯度進行離心分離外周血單核細胞(PBMC)，并且將其再懸浮在培養(yǎng)基((RPMI1640，補充有2mML-谷氨酰胺、青霉素(100U/mL)和鏈霉素(100mg/mL)(Invitrogens.rl.,Milan,Italy)中。使用10%的自體(效應(yīng)器)失活的血漿。將五十萬效應(yīng)器PBMC(PBMCr)和500,000異源輻射(30Gy)的刺激物PBMC(PBMCs)以1:1的比例混合在200|iL培養(yǎng)基中并且以4種化合物的每一種為300nM或30nM的濃度在平底96孔板(Nunc，69Roskilde，Denmark)中培養(yǎng)6天。將化合物溶解于乙醇種，然后用培養(yǎng)基稀釋到所需濃度，產(chǎn)生包含0.01%乙醇的最終溶液。將這種媒介物用作對照。對照還包括分別培養(yǎng)的PBMCr和PBMCs。在培養(yǎng)期的最后8小時過程中，將PBMC用11iCi/孔的卩H]胸腺嘧啶核苷(Amersham,Milan，Italy)脈沖處理。然后收獲細胞并且使用P-細胞計數(shù)器測量放射性活度結(jié)合。計算一式四份的孔的平均cpm。T細胞的增殖表示為刺激指數(shù)Sl=cpm(PMBCsXPBMCr)/cpm(PBMCr)+cpm(PBMCs)。使用學(xué)生t檢驗進行統(tǒng)計分析。將得自每種試驗化合物的一式四份的cpm數(shù)與在媒介物存在下培養(yǎng)的對照PBMCr和PBMCs中得到的增殖應(yīng)答相比較。在pO.05時認為差異是顯著的。結(jié)果表明，除了300nM的17(3-氨基雄甾-5-烯-3(3-醇之外，4種化合物中沒有一種表現(xiàn)出MLR抑制。這表明，3p，16a-二羥基-17-氧代雄甾垸、3p,17P-二羥基-16-氧代雄甾垸和17a-乙炔基雄甾-5-烯-3卩,7(5，17(5-三醇在這個測定中在300nM或30nM下沒有可測量的免疫抑制性(p〉0.05)，而300nM的17卩-氨基雄甾-5-烯-3卩-醇與對照反應(yīng)相比具有適當?shù)拿庖咭种菩?p0.05)。這些結(jié)果表明，3(3,1601-二羥基-17-氧代雄甾烷、3(3，17p-二羥基-16-氧代雄甾烷和17a-乙炔基雄甾-5-烯-3卩,70，17^三醇在體內(nèi)對人淋巴細胞不具有免疫抑制性。這些結(jié)果與化合物是沒有免疫抑制性的抗炎藥的能力(參見例如，實施例7)相一致。實施例13。免疫抑制的分析。糖皮質(zhì)激素甾體例如地塞米松或氫化可的松典型地具有免疫抑制性并且具有顯著的與其使用相關(guān)的毒性。實質(zhì)上如前所述在小鼠中的報道基因抗原胭淋巴結(jié)測定法中考査免疫抑制(C.Goebel等人，Inflamm.Res"45(Suppl.2):S85-S90,1996;R.Pieters等人，EnvironmentalHealthPerspectives107(Suppl.5):673-6771999)。這個規(guī)程用于分析17oc-乙炔基雄甾-5-烯-3(5,7p，17(3-三醇在胭淋巴結(jié)(PLN)測定法中的活性，以表明該化合物在體內(nèi)沒有明顯的免疫抑制活性。在這個規(guī)程中，媒介物是0.1%的羧甲基纖維素、0.9%鹽水、2%吐溫80和0.05%苯酚，在用藥物治療的動物中使用包含17a-乙炔基雄甾-5-烯-3p，7P,17(3-三醇的懸浮液。活性的評價包括(l)在胭淋巴結(jié)細胞中測量對淋巴細胞總數(shù)、抗原特異性IgM、IgGl和IgG2a抗體分泌細胞(ASC)(ELISPOT測定法)的抑制；(2)通過對懸浮液中的活細胞進行流細胞計數(shù)法分析細胞表面標示物(CD4、CD8、CD19、F480、CD80、CD86)表達；禾口(3)體外測量(ELISA)淋巴細胞的IL-4、TNFa和IFNy產(chǎn)生。使用無特異病原的BALB/C小鼠的組(每組n=5只)。陽性對照組用媒介物(口服強飼法)處理并且通過皮下注射5ng/天的地塞米松以誘導(dǎo)免疫抑制。媒介物對照動物(陰性對照)用單獨的媒介物(口服強詞法)處理。一個動物組通過口服強飼法用0.1mg/天的1701-乙炔基雄甾-5-烯-3(3，7f5，17P-三醇處理。另一個動物組用通過口服強飼法對動物給予1mg/天的17a-乙炔基雄甾-5-烯-3p，7p,17(3-三醇處理。通過等方差的雙尾學(xué)生t檢驗分析結(jié)果。為動物的右后腳掌注射50pL的致敏量的新制備的TNP-OVA。每天在用TNP-OVA敏化之后立即通過皮下注射將地塞米松(磷酸地卡特隆注射劑；地塞米松磷酸鈉)給予到頸部中。之后立即通過強飼法給予17a-乙炔基雄甾-5-烯-3(5,7(3,17p-三醇。在注射TNP-OVA之后的五天，通過眼眶穿刺抽取血液，并且通過頸部脫位將小鼠無痛處死，取出淋巴結(jié)并且除去附著的脂肪組織。制備單細胞懸浮液，再懸浮在1mL的PBS-BSA(l。/o)中并且計算。測量細胞數(shù)IL-4、IL-5和IFNy。得自媒介物對照組的PLN中的淋巴細胞平均數(shù)是每個淋巴結(jié)7.8乂106個，與用地塞米松治療的動物組中每個淋巴結(jié)為2.9乂106個相比。淋巴細胞計算的這種減少明顯地表現(xiàn)出使用地塞米松或其它糖皮質(zhì)激素化合物時典型地看見的顯著的免疫抑制。相反，用1mg/天的17a-乙炔基雄甾-5-烯-3(3,7p,17(3-三醇處理的組的每個淋巴結(jié)具有8.2X106個淋巴細胞，用0.1mg/天的17oc-乙炔基雄甾-5-烯-3(5,7p,17卩-三醇處理的組的每個淋巴結(jié)具有11.1X1()S個淋巴細胞。結(jié)果表明，17ot-乙炔基雄甾-5-烯-3卩,7P,17(3-三醇不具有免疫抑制性，而是具有免疫增強性能。與媒介物對照組相比，用1.0mg/天和0.1mg/天的1706-乙炔基雄甾-5-烯-3p，7p,17P-三醇處理使IFNY、IL-4和IL-5水平增加，也表明了免疫增強性能。O.lmg/天的17a-乙炔基雄甾-5-烯-3(3,7p,17p-三醇對IFNy、IL-4和IL-5水平的影響大于用l.Omg/天處理的組。相反，與媒介物對照組或與藥物處理組相比，用地塞米松處理的組的IFNy、IL-4和IL-5水平降低。實施例14。免疫抑制的分析。表征了幾種化合物影響免疫應(yīng)答的能力。這個規(guī)程考査化合物在標準免疫測定法中的免疫作用。卵清蛋白(OVA)特異性免疫應(yīng)答試驗是用于測量既往(細胞介導(dǎo)的和抗體介導(dǎo)的)免疫應(yīng)答的穩(wěn)定的系統(tǒng)。在第0和7天通過腹膜內(nèi)注射(總體積200pL)在鹽水中包含的在明礬(25mg/mL)中沉淀的lOOpgOVA使BALB/c小鼠免疫。將小鼠(每組n=5只)每天用化合物處理(口服強詞法，40mg/kg，約1mg/動物)，進行20天。在第20天，抽取許也并且在ELISA中測定對OVA的抗體滴度。試驗的化合物為3(5，160^-二羥基-17-氧代雄甾垸、16ot-溴表雄酮、17a-乙炔基雄甾-5-烯-3p,7p,17(3-三醇、3(3,16ot-二羥基雄甾烷-17-肟、17(3-氨基雄甾-5-烯-3p-醇和3a,16a，17(3-三羥基雄甾烷。這些化合物中沒有一個被發(fā)現(xiàn)具有深遠的免疫抑制性，OVA抗體滴度與媒介物對照組中的結(jié)果相似。實施例15。降低葡萄糖和改善胰島素耐受。在人糖尿病和胰島素耐受的糖尿病性db/db小鼠模型中評價降低葡萄糖作用和改善胰島素耐受。在這些研究中，將約8到10周齡的db/dbC57BL/Ks小鼠分為每組10只的組，然后通過口服強飼法用媒介物對照(沒有藥物)或17a-乙炔基雄甾-5-烯-3(5,7p，17(3-三醇處理。將化合物以20mg/kg/天(每天兩次，以10mg/kg給予)、40mg/kg/天(每天兩次，以20mg/kg給予)、80mg/kg/天(每天兩次，以40mg/kg給予)每天給予兩次，直到28天。使用少量血液(尾部切口取血)，在劑量給藥過程中每周兩次監(jiān)控血糖水平，以便通過糖度計試紙測量葡萄糖濃度。在劑量給藥過程中的特定時間(第14天和第28天)，還通過給予1g/kg葡萄糖(對于40mg的小72鼠為約40mg)的標準口服劑量并且然后在葡萄糖劑量給予之后的15、30、60和120分鐘后迅速地監(jiān)控血糖水平的波動來進行口服葡萄糖耐量試驗(OGTT)。在藥物處理組中，在db/db小鼠中觀察到高血糖的血糖水平有約40%的降低。在媒介物對照組中，血糖接近380mg/dL，而在藥物處理組中在劑量給藥的至少10天之后血糖為〈230mg/dL。以80mg/kgb丄d.的藥物處理28天使在媒介物處理組中所見的口服葡萄糖劑量給藥30分鐘后的約400mg/dL的峰值高血糖偏離降低到藥物處理組中的<200mg/dL。實施例16。膳食誘導(dǎo)的肥胖癥(DIO)小鼠的高血糖癥治療?？梢栽谄渲型ㄟ^為動物喂食高脂肪膳食(總熱量攝入的60%)至少6周獲得的胰島素耐受狀態(tài)的小鼠模型中研究藥物增強外周的對胰島素的敏感性的作用。這個模型已經(jīng)描述在例如，J.N.Thupari等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，99(14):9498-9502,2002,H.Xu等人，J.Clin.Invest,112:1821-1830,2003，H.Takahashi等人，J.Biol.Chem.,278(47):46654-46660,2003中。在這些膳食條件下，小鼠表現(xiàn)出體重增加(+35g)和葡萄糖不耐性的狀態(tài)，表現(xiàn)為在標準OGTT(口服葡萄糖耐量試驗)過程中口服給予的葡萄糖的清除時間有顯著的延遲。對于這些研究，將約4周齡的動物分為每組IO只動物的組，然后通過口服強飼法用媒介物對照(沒有藥物)或17a-乙炔基雄甾-5-烯-3(5,70，17(3-三醇處理。17a-乙炔基雄甾-5-烯-3(5,7卩,17(3-三醇以20mg/kg、40mg/kg或80mg/kg給予，每天兩次，直到28天。在劑量給藥過程中的第14天和第28天，進行OGTT。在這個胰島素耐受的DIO模型中，如OGTT血糖偏差的顯著改善所示，與媒介物對照動物相比，17oc-乙炔基雄甾-5-烯-3p,7(3，17(3-三醇顯著降低葡萄糖不耐性。這些發(fā)現(xiàn)表明，用17a-乙炔基雄甾-5-烯-3p,7(3,17(3-三醇處理增強了外周的胰島素敏感性或攝入，其改善這些動物中的葡萄糖不耐性。實施例17。使用比實施例15中所述動物更年輕的db/db小鼠進行73與實施例15中所述相似的治療規(guī)程。將動物(每組n=8到10只)通過口服強飼法每天兩次用40mg/kg/天(20mg/kg劑量，每天給予兩次)和80mg/kg/天(40mg/kg劑量，每天給予兩次)的17a-乙炔基雄甾-5-烯-3&，7(3，17(5-三醇或媒介物處理。在劑量給藥開始時，在葡萄糖水平升高或高血糖癥發(fā)病之前，動物為6周齡。媒介物或藥物劑量給藥維持32天，以測定治療對動物的高血糖癥的發(fā)病和進展速率的影響。在對照組中，在劑量給藥25天之后觀察到高血糖癥發(fā)病，并且其持續(xù)惡化，即，在32天劑量給藥時間結(jié)束時，血糖水平從正常水平上升到明顯的高血糖癥。相反，兩個藥物治療組的葡萄糖水平都沒有在32天劑量給藥時間結(jié)束時升高到超過正常水平，表明在所述規(guī)程的過程中，藥物治療延遲了高血糖癥的發(fā)病。對8周齡的雄性糖尿病db/db小鼠給予17a-乙炔基雄甾-5-烯-3(3,7卩,17卩-三醇顯著地抑制基礎(chǔ)血糖的高血糖水平，這個作用在劑量給藥IO天之后變得顯而易見，并且在連續(xù)的、每天兩次處理的40mg/kg劑量組中持續(xù)另外的18天。在較年輕的6周齡雄性db/db小鼠中，用40mg/kg的17a-乙炔基雄甾-5-烯-3卩，7卩,17P-三醇處理在劑量給藥25天之后完全阻斷了在媒介物處理組中觀察到的動物發(fā)展為高血糖狀態(tài)的進展。經(jīng)過治療的動物保持與瘦型化/+同窩小鼠相當?shù)难撬?。此外，在?jīng)過治療的動物模型中進行的OGTT的結(jié)果顯示，與媒介物對照動物相比葡萄糖不耐性有顯著的改善。實施例18。在8周齡db/db糖尿病小鼠中葡萄糖降低。進行高胰島素-正糖鉗夾規(guī)程，以便測量體內(nèi)的胰島素敏感性。在這個操作中，給予胰島素以便使胰島素濃度上升，同時輸注葡萄糖以保持血糖正?；蚬潭ǖ恼Ｑ撬?約180mg/dL)。維持血糖正常所需的葡萄糖輸注速率(GIR)顯示了這些動物中的胰島素作用。這個規(guī)程的目的是要調(diào)查或表征17a-乙炔基雄甾-5-烯-3P,7(5，17P-三醇和雄甾-5-烯-3(3,7^1601，17^四醇在高胰島素-正糖鉗夾模型中改善系統(tǒng)性胰島素耐受和改善整體葡萄糖消除的能力。還評價了骨骼肌和肝臟的胰島素敏74感性和組織特異性的葡萄糖攝取的程度。在第14天通過口服強飼法對每天劑量給藥。在處理的第10天，在頸動脈和頸靜脈中植入導(dǎo)管。在鉗夾的當天(第14天)，在上午7:30給予化合物。在處理的第O、7和14天評價體重和葡萄糖濃度。在第14天進行高胰島素正糖鉗夾處理。在7:30取走食物并在10:30持續(xù)輸注[3-3司-葡萄糖(0.05^C/分鐘)進行加強。在12:50(-10分鐘)取得基線血樣，并且在l:OO(O分鐘)通過給予10mU/kg/分鐘的胰島素引發(fā)高胰島素正糖鉗夾處理。以不同的速率輸注葡萄糖，以使葡萄糖濃度固定在180mg/dl。在研究結(jié)束時給予["C]2-脫氧葡萄糖的濃集注射以評價組織特異性的葡萄糖攝取。在122、125、130、135、145分鐘評價血漿的14C2-脫氧葡萄糖。然后用靜脈內(nèi)輸注的戊巴比妥鈉將動物麻醉并且取得選定的組織，立即在液氮中冷凍并且在分析之前存儲在-7(TC。如下進行分析。將血漿樣品用Ba(OH)2(0.3N)和ZnSO4(0.3N)脫去蛋白，干燥，并且在閃爍計數(shù)器(PackardTRICARB2900TR,Meriden,CT)上評價放射性活度。將冷凍的組織樣品在0.5%高氯酸中勻化，離心并且中和。直接對一個上層清液進行計數(shù)，以測定來自["C]DG和["C]DGP二者的放射性活度。將第二個等分試樣用Ba(0H)2和ZnS04處理以除去14CDGP和結(jié)合到糖原中的任何示蹤劑，然后測定來自游離["C]DG(2)的放射性活度。[["C]DGP計算為兩個等分試樣之間的差值。將["C]DGP的累積相對于組織重量和示蹤劑濃集注射歸一化。如前所述計算組織特異性葡萄糖攝取指數(shù)Rg(E.W.Kraegen等人，Am.J.Physiol.,248:E353-E362,1985)。整體葡萄糖周轉(zhuǎn)計算為3H葡萄糖液輸注速率(dpm/kg/分鐘)和動脈血漿葡萄糖比放射性(dpm/mg)之間的比值。將內(nèi)原性葡萄糖產(chǎn)生計算為整體葡萄糖周轉(zhuǎn)和異源葡萄糖液輸注速率之間的差值(R.N.Bergman等人，Endocr.Rev.，6:45-86，1985)。處理組概述在以下所示的表中。75組別處理劑量給藥體積和劑量給藥溶液濃度NA-媒介物對照*媒介物8mL/kg,po,bid，維持13天,在第14天qd8mL/kg10B-化合物1*40mg/kg,po，bid,維持13天，在第14天qd4mL/kg，在媒介物中的10mg/mL原液10C-化合物1**80mg/kg，po,bid,維持13天，在第14天qd8ml/kg，在媒介物中的10mg/ml原液10D-化合物2**40mg/kg，po，bid,維持13天，在第14天qd4mL/kg,在媒介物中的10mg/ml原液10E-陽性對照***25mg/kg,po,bid,維持13天，在第14天qd5mL/kg，在水中的5mg/mL+1%CMC10*媒介物在水中的30n/。磺基丁基醚(對于B-D組，在溶液中含20mg/mL的藥物)**化合物h17a-乙炔基雄甾-5-烯-3(5，7(3,17(3-三醇化合物2:雄甾-5-烯-3p,7(5，16ct,17P-四醇承"馬來酸羅格列酮(31493r,AApinChemicalsLimited(UK)，CMC-羧甲基纖維素(中級，C4888,Sigma)胰島素劑量為10mU/kg/分鐘。在正常動物中，這個胰島素劑量需要輸注卯mg/kg/分鐘的葡萄糖以保持葡萄糖水平固定在150mg/dl。所有處理組中的平均葡萄糖要求為正常值的50%。結(jié)果表明，與媒介物對照相比，17cc-乙炔基雄甾-5-烯-3(3，7(5，17P-三醇和雄甾-5-烯-3(3，7^1601,17(3-四醇二者都增加葡萄糖液輸注速率，這意味著在B、C、D和E組中的胰島素作用得到改善。使用3JH葡萄糖示蹤劑，在基礎(chǔ)時期過程中計算肝葡萄糖產(chǎn)生的速率和在鉗夾過程中胰島素抑制肝葡萄糖產(chǎn)生的能力。在嚴重的胰島素耐受動物中，在所使用的胰島素劑量，內(nèi)源的葡萄糖產(chǎn)生減少約50%。76在C、D和E組中，胰島素完全地抑制內(nèi)源性葡萄糖產(chǎn)生(p〈0.05)，這表示肝臟胰島素作用的改善。為了評價外周的胰島素作用，使用"C-2-脫氧葡萄糖評價高胰島素正糖鉗夾過程中的組織特異性葡萄糖攝取。在120分鐘給予14C-2-脫氧葡萄糖的濃集注射。在25分鐘后收集組織。分析組織的"C-2-脫氧葡萄糖磷酸酯的總累積量。在這個規(guī)程中，腦葡萄糖攝取不受大多數(shù)治療方案的影響，所以將其用作內(nèi)部對照。結(jié)果表明，所有組之間的腦的葡萄糖攝取都具有可比性。在處理組中，在心臟和隔膜中的葡萄糖攝取比媒介物對照組更高。雄甾-5-烯-3p,7(3,16oc，17p-四醇和羅格列酮二者都更有效地增加腓腸肌肌肉中的肌肉葡萄糖攝取(p〈0.05)。在作為非氧化性肌群的白色股肌肌肉中，除雄甾-5-烯-3(V7p,16oc,17(3-四醇和羅格列酮之間的差別以外，沒有檢測到差別。實施例19。使大鼠自由接觸包含0.45%重量/重量的雄甾-5-烯-3(5,7(3，17卩-三醇的標準實驗室食物6天，隨后在第6天對肝臟組織進行分析，分析肝臟的磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶("PEPCK")和lip-羥基類固醇脫氫酶("llp-HSD")的水平。對照動物飼喂正常食物，并且在第6天通過RT-PCR測量信使RNA(mRNA)來考査PEPCK和11(3-HSD水平。對照和處理的動物都自由取得水。發(fā)現(xiàn)在食物中給予化合物6天降低肝臟組織中l(wèi)lp-HSD1型("11(3HSD1")和PEPCK的水平，如下所示。這些動物中的PPARamRNA水平?jīng)]有受到飼喂雄甾-5-烯-3(3,70,173-三醇的影響。ll卩國HSDlPEPCKPPARa_mRNAmRNAmRNA對照(沒有化合物)100%100%100%雄甾-5-烯-3(5,7(3，17(3-三醇45%_30%105%在另一項研究中，發(fā)現(xiàn)對小鼠給予化合物17a-乙炔基雄甾-5-烯-3(5,7(3,17|3-三醇使成骨細胞中的lip-HSDl減少約50%，這與化合物在用體內(nèi)誘導(dǎo)骨損失的糖皮質(zhì)激素地塞米松處理的小鼠中具有骨保留的作用(bone-sparingeffects)的觀察結(jié)果一致。在另一項研究中，從用20mg/kg的17a-乙炔基雄甾-5-烯-3(3,7(3,17(3-三醇處理的痩型化/+或糖尿病db/db小鼠的性腺周圍的脂肪組織分離總的RNA并且處理用于定量RT/PCR，所述定量RT/PCR使用iCycleriQ多色實時檢測系統(tǒng)(Bio-Rad)，用對于單核細胞趨化蛋白-l(MCP-l)為特異性的引物進行。使RNA表達水平相對于媒介物對照歸一化。發(fā)現(xiàn)化合物使單核細胞趨化蛋白-l(MCP-l)的水平降低約50y。。對于這項研究，還對與痩型的雜合子他/+小鼠同齡的對照組(11=7)給予媒介物。以類似的方式考査了其它化合物例如17cx-乙炔基雄甾-5-烯-3(3,7P,17P-三醇、雄甾-5-烯-3(3,7(3,16a,17(3-四醇、雄甾-5-烯-3(3，701，1601,17(3-四醇、雄甾-5-烯-3a,7p,16a，17p-四醇、雄甾-5-烯-3，,4(3，1600,17(3-四醇、雄甾-5-烯-3a，4p，16a，17P-四醇或這些化合物的單酯或二酯，例如，在3或17位包含一個或兩個乙酸酯或丙酸酯的化合物，考査它們降低肝細胞或肝臟來源的細胞中或其它組織或細胞(例如腎臟、肌肉、骨組織或細胞、脂肪組織或細胞、或CNS組織或細胞例如神經(jīng)元或神經(jīng)膠質(zhì))中的PEPCK或11(5-HSD(例如ll(i-HSD1型或11p-HSD2型)的水平或活性的能力。實施例20。在體內(nèi)抑制CD4+CD25+T調(diào)節(jié)性細胞的產(chǎn)生或它們的活性。將得自每組同類系B6.SJL小鼠(CD45.1)的純化的CD4+CD25—T細胞(5乂106個細胞)繼承性轉(zhuǎn)移到五只B6小鼠(CD45.2)的每一只中。通過對供體細胞進行熒光活化的細胞分選(FACS)至少兩次得到純化的CD4+CD25—T細胞。在從CD45.1供體動物轉(zhuǎn)移細胞之前皮下注射媒介物(0.1%羧甲基纖維素、0.9%鹽水、2%吐溫80、0.05%苯酚)或含16a-溴表雄酮的媒介物(lmg/動物/天，在IOOpL媒介物中)，并且每天注射持續(xù)14天。在第15天從動物收集胸腺、淋巴結(jié)和脾臟。從個體得到胸腺、淋巴結(jié)和脾臟的樣品，并且將細胞用結(jié)合于CD4、CD25、CD103或Foxp3的熒光抗體標記。然后通過流細胞計數(shù)法分析細胞，以便計數(shù)不同細胞型的數(shù)目。將得自每個處理組的淋巴結(jié)和脾臟的其余細胞匯集，預(yù)先富集CD4+CD25+細胞，然后分析由宿主(內(nèi)源CD45.2細胞)和供體細胞(在體內(nèi)停留15天之后從CD4+CD25'供體表現(xiàn)型轉(zhuǎn)化為CD4+CD25+表現(xiàn)型的CD45.1細胞)產(chǎn)生的CD4+CD25+。通過細胞分類器分析細胞。對于調(diào)節(jié)功能的試驗，將不同數(shù)量的純化的轉(zhuǎn)換CD45.1CD4+CD25+細胞或內(nèi)源CD45.2CD4+CD25+細胞與2000個CD4+CD25-效應(yīng)器細胞、作為抗原遞呈細胞的1X105個輻射的脾臟細胞、和0.5mg/ml的抗CD3抗體共培養(yǎng)。使用新鮮的CD4+CD25+細胞作為對照。通過測量在培養(yǎng)開始之后4天攝取的311-胸腺嘧啶核苷來測定增殖。結(jié)果表明，與得自媒介物對照動物的脾臟的CD45.1CD4+CD25+Treg細胞數(shù)目相比，得自藥物治療組動物的脾臟的供體CD45.1CD4+CD25+Treg細胞數(shù)目更低。媒介物對照CD45.1CD4+CD25+的平均細胞數(shù)為1.97X1()S個細胞，而得自藥物治療組動物的CD45.1CD4+CD25+細胞平均數(shù)為0.62X1()5個細胞。與得自媒介物對照動物的脾臟的CD45.1CD4+CD25+Treg細胞數(shù)目相比，得自藥物治療組動物的脾臟的內(nèi)源CD45.2CD4+CD25+Treg細胞的數(shù)目也更低。媒介物對照CD45.2CD4+CD25+的平均細胞數(shù)為9.54X1()6個細胞，而藥物治療組動物的平均數(shù)為5.49X1()6個CD45.2CD4+CD25+細胞。媒介物對照動物的胸腺中的內(nèi)源CD45.2CD4+CD25+細胞的平均數(shù)為3.10X105，而藥物治療組動物為1.59X105。與媒介物對照動物的脾臟中的CD45.1CD4+CD25+CD103+Treg細胞數(shù)目占總的供體CD4+CD25+細胞的百分比相比，藥物治療組動物的脾臟中的供體CD45.1CD4+CD25+CD103+細胞占總的供體CD4+CD25+細胞的百分比更低。得自媒介物對照動物的脾臟中的內(nèi)源CD45.2CD4+CD25+CD103+Treg細胞的比例(13.85%)與藥物治療組動物(13.40%)相比大約相同。媒介物對照的供體CD45.1CD4+CD25+CD103+細胞平均數(shù)是29.06%，而藥物治療組動物的平均數(shù)為9.63%。CD103表面抗原由活化的Treg細胞表達。這表明，在藥物治療組動物中的活化的CD45.1CD4+CD25+細胞的相對比例比媒介物對照中更低，這與體內(nèi)抑制供體細胞的Treg細胞活性一致。這個規(guī)程的適合的變體包括(l)對每只動物使用更大數(shù)量的供體CD4+CD25'T細胞，例如，1Xl()6個/動物、1.5X106個/動物或2X106個/動物，(2)藥物的不同日劑量，(3)藥物的不同給藥途徑，(4)不同的化合物作為藥物，禾P(5)包含另外的動物組，例如，接受另一種治療劑例如抗炎藥或免疫抑制性糖皮質(zhì)激素例如地塞米松或氫化可的松的組。這些變體中有一些可以應(yīng)用于實施例3或一些所引用的參考文獻的規(guī)程。實施例21。增加CD4+CD25+T調(diào)節(jié)性細胞或它們的體內(nèi)活性。實質(zhì)上如先前描述的膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎動物模型中所述對小鼠給予化合物17ot-乙炔基雄甾-5-烯-3，,7(3,17(3-三醇。H.Offner等人.，Clin.Immunol.,110:181-190,2006。這項研究使用DBA/lLac/J小鼠。小鼠得自JacksonLaboratories(BarHarbor,Harbor,MA)并且根據(jù)適用的制度原則圈養(yǎng)。通過使用以1:1的比例用包含200嗎結(jié)核分枝桿菌(100Difco,Detroit,MI)的CFA乳化的200)ig的bCII使8周齡小鼠免疫，使用牛II型膠原(bCII)誘導(dǎo)膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(CIA)。將抗原真皮內(nèi)注射到尾巴根部。監(jiān)控動物4-7周，以便觀察免疫后疾病的發(fā)病和進展。根據(jù)以下標準用分級系統(tǒng)對每個爪評價關(guān)節(jié)炎的嚴重程度0=沒有發(fā)紅或腫脹；1=輕微的踝腫脹或腳發(fā)紅；2=發(fā)展的腫脹和炎癥并且從踝到腳中部的發(fā)紅；3=整個腳出現(xiàn)腫脹和炎癥；4=整個腳(包括腳趾)出現(xiàn)腫脹和炎癥。在免疫之后，在可觀察到的臨床疾病出現(xiàn)時開始(從免疫之后的約26-27天開始)通過口服強飼法用包含在媒介物周的40mg/kg/天的藥物治療小鼠。用于這個規(guī)程的媒介物是含30%環(huán)糊精-磺基丁基醚的水。環(huán)糊精-磺基丁基醚是商購得到的(CaptisolTM，得自cydexinc.com)。藥物制劑是20mg藥物/mL媒介物。得自藥物治療組動物的結(jié)果表明，給予17a-乙炔基雄甾-5-烯-3(5,7|3，17P-三醇增加全脾細胞中表達Foxp3+和CD4+FoXp3+的細胞的頻率，如下所示。媒介物(n-3)藥物(11=3)p值總的Foxp3十1.6%±0.162.39%±0.160.00001CD4+Foxp3+1.1%±0.091.34%士0.05<0.00001細胞分類分析表明，藥物治療組動物值的Foxp3+CD4+細胞(1.4y。)相對于對照動物(1.0%)有所增加。Foxp3蛋白涉及CD4+CD25'分化或轉(zhuǎn)化為CD4+CD25+Treg細胞，并且表達Foxp3的細胞數(shù)目增加表明從Treg細胞的前體細胞發(fā)育為Treg細胞有所增加。在免疫之后，在可觀察到的臨床疾病出現(xiàn)時開始(從免疫之后的約26-27天開始)通過口服強飼法用包含在媒介物周的40mg/kg/天的藥物治療小鼠得自藥物治療組動物的結(jié)果表明，給予17oc-乙炔基雄甾-5-烯-3(3,7(3,17(5-三醇增加全脾細胞中表達Foxp3+和CD4+Foxp3+的細胞的頻率，如下所示。與這個結(jié)果一致的是，與媒介物對照相比，在免疫之后的44-49天，藥物治療組動物的臨床評分有統(tǒng)計上的改善。在第34天到第49天，媒介物對照動物的平均臨床評分為約6.8-8，而藥物治療組動物在第34天的最大平均臨床評分為約5，并且緩慢減小到第49天的平均評分為約3。這些結(jié)果表明，與媒介物對照動物相比，化合物延緩關(guān)節(jié)炎的進展并且降低其最大嚴重程度。81實施例22?；衔锏暮铣扇缦滤?。雄甾-5-烯-3p,7(3,16ot,17p-四醇(7)5-雄甾烯-3(3，16a-二醇-17-酮二乙酸酯(3)。如下制備16a-溴脫氫表雄酮2:使DHEA(l)在甲醇中與溴化銅(II)回流。向含15.0g的2(40.8mmol)的吡啶(129mL)和水(309mL)中加入120mL的1N氫氧化鈉水溶液并將混合物在空氣中攪拌15分鐘。將反應(yīng)混合物傾倒在用氯化鈉飽和的并且包含過量鹽酸的冰/水中。將粗產(chǎn)物過濾，用水洗滌直到中性，并且在55-6(TC在無水氯化鈣下真空干燥。從甲醇重結(jié)晶得到8.21g的16a-羥基-DHEA(Mp194.4-195.1°C)。然后通過用吡啶中的過量乙酸處理將產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為而乙酸酯，并且通過快速色譜法純化。5-雄甾烯-3p，16a-二醇-7，17-二酮(5)。向在包含硅藻土(60g)和重鉻酸吡啶鹽(75g)的苯中的3(20.1g,51.7mmol)的溶液加入22mL的70%叔丁基過氧化氫。在室溫下攪拌2天之后，加入乙醚(600mL)，并且將沉淀過濾和用乙醚洗滌(2X100mL)。殘余物通過快速色譜法純化(含60%乙酸乙酯的己烷)并且重結(jié)晶，得到16.0g(39.8mmol,77。/。)的5，為棱晶。Mp205.6-206.2。C。5-雄甾烯-3p，7卩，16a,17p-四醇(7)。在0。C向5(10.0g，24.8mmol)在二氯甲烷(75mL)和甲醇(255mL)中的溶液加入1.5g的氫化硼鈉并將混合物在0。C攪拌1小時。在用乙酸(3.5mL)猝滅之后，將反應(yīng)混合物在二氯甲垸和水之間分配。將有機物層濃縮為7a和7p二乙酸酯四醇的混合物。將這個通過快速色譜法和HPLC純化，得到2.90g的7(3-差向異構(gòu)體(9.5mmol,38%)。Mp216.8-220.8°C。在室溫下在甲醇(IOOmL)中用1N氫氧化鈉(60mL)皂化2天并且通過HPLC純化，得到7(1.41g，4.4mmol,46%)從乙腈水溶液得到，為細針狀結(jié)晶。Mp202.1-206.4。C;[a]D+1.35(甲醇,c=l)。選擇的HNMRil#(CD3OD):d0.77(s，3H),l.Ol(s，3H),3.39(d，1H)，3.46(m,1H)，3.74(t,1H),4.04(m,1H)，5.55(dd,1H)。3a,7a,17(3-三乙酰氧基雄甾-5-烯-16a-醇(8)，雄甾-5-烯-301,7",1601,17(5-四醇(9)8916a-溴-5-雄甾烯-3a-醇-17-酮(2)。在攪拌下使5-脫氫雄甾酮(1)(17.8g,61.7mmol)的甲醇(1.35L)溶液與溴化銅(11)(36.4g,163mmol)回流19小時。向冷卻的反應(yīng)混合物加入水(1.35L)和二氯甲烷(1.5L)。將有機層過濾通過無水硫酸鈉并且產(chǎn)物作為細針狀結(jié)晶從甲醇結(jié)晶(16.7g，45.5mmol，74%)。Mp195國207。C。3a,16a-二乙酰氧基-5-雄甾-17-酮(4)。在空氣下向2(12.0g，32.783mmol)在吡啶(1.032L)和水(0.247L)中的溶液加入1N氫氧化鈉水溶液(90mL)并將混合物在室溫攪拌15分鐘。將反應(yīng)混合物加入到包含1.2L的1N鹽酸的冰/水混合物中。在將溶液用氯化鈉飽和之后，將其用乙酸乙酯提取(2X1L)。合并的有機層用鹽水(250mL)洗滌，過濾通過無水硫酸鈉并且濃縮。粗的5-雄甾烯-3a,16oc-二醇-17-酮(3)在室溫下用含過量乙酸酐的吡啶處理過夜并且過柱純化，得到4(7.46g，19.2mmol,59%)為得自甲醇的棱晶。Mp172.7-173.7。C。5-雄甾烯-3a,16oc，17(3-三醇3,16-二乙酸酯(5)。在0°C向烯二酮(enediolone)二乙酸酯4(7.46g,19.2mmol)在二氯甲垸(45mL)和甲醇(120mL)中的溶液加入硼氫化鈉(950mg)。將溶液在0"C攪拌1小時。在加入過量乙酸之后，將反應(yīng)混合物在二氯甲垸和水之間分配。將有機層過濾通過無水硫酸鈉并且濃縮，得到17a(次要)和17卩(主要)差向異構(gòu)體的混合物。將這個混合物通過快速色譜法(含25%乙酸乙酯的己烷)純化，得至U6.1g(15.6mmol，81%)的17(3差向異構(gòu)體5。Mp126.9-128.6°C。通過在室溫下用含過量乙酸酐的吡啶處理過夜并且通過過柱純化，從5制備三乙酸酯6，得到6.0g(13.9mmo1,89%)。5-雄甾烯-3a,16oc,17p-三醇-7-酮三乙酸酯(7)。將三乙酸酯6(6.0g，13.9mmol)的苯(255mL)溶液用硅藻土(25.5g)、重絡(luò)酸吡啶鹽(31.5g)和70%叔丁基過氧化氫(9.0mL)處理并且在室溫下攪拌19小時。加入無水乙醚(255mL)并將反應(yīng)混合物在冰浴中冷卻1小時。將產(chǎn)生的固體濾掉并且用乙醚洗滌(2X50mL)。將合并的有機部分濃縮并且通過快速色譜法純化(含29%乙酸乙酯的己垸)，得到3.45g的7(7.7mmol,55%)。5-雄甾烯-3a,7a，16a,17(3-四醇(9)。在0。C向7(3.45g,7.7mmol)在二氯甲垸(15mL)和甲醇(30mL)中的溶液加入硼氫化鈉(1.0g)并將溶液在0。C攪拌2小時。在加入過量的乙酸(1.5mL)之后，將反應(yīng)混合物在二氯甲烷和水之間分配。將有機層過濾通過無水硫酸鈉并且濃縮，得到7a(次要)和7(3(主要)差向異構(gòu)體的混合物。將這個混合物在甲醇(100mL)中在室溫下用1N氫氧化鈉(60mL)皂化過夜。通過將皂化混合物在乙酸乙酯和鹽水之間分配回收粗的四醇。通過HPLC分離差向異構(gòu)體，得到220mg的9(0.68mmol,9%)。Mp243-248.3°C。。選擇的&NMR峰(CD3。D):S0.77(s，3H),1.02(s,3H),2.1l(m，1H),2.57(m,1H),3.34(s,1H),3.44(d,1H),3.70(brt,1H),4.04(m,2H),5.55(dd,1H)。通過HPLC分離8的差向異構(gòu)體，得到純化的8及其7p-乙酸酯差向異構(gòu)體。雄甾-5-烯-3p，7p，ll(3,17P-四醇-3(5-乙酸酯(8)、雄甾-5-烯-3卩，7卩，11|5，17(3-四醇(9)、雄甾-5-烯-3(5,7(3,1限17(3-四醇-3(3-乙酸酯-11-肟(10)。I:向1(4g)在150mlAc20中的溶液加入p-TsOH2.8g,在室溫下，過夜，后處理為加入700mL冰水、攪拌1小時，直到形成固體，將固體濾出，得到固體產(chǎn)物2，4.55g。II:在0°C向1.5gNaBH4在35mlEtOH和5mlMeOH中的溶液緩慢加入2(1.2g)在30mlEtOH和10ml氯仿中的溶液。將溶液繼續(xù)在0°C攪拌2小時，然后在室溫下攪拌2小時。在這個時間之后，加入4ml乙酸以猝滅NaBH4，然后加入50ml水。通過用EtoAc提取50mlX3分離產(chǎn)物，在真空中溶劑除去，得到粗產(chǎn)物。通過柱色譜法純化，得到3，250mg。III:向3(200mg)在8mlMeOH中的溶液加入0.36g115106在2ml水中的溶液，在室溫下攪拌1小時，真空除去溶劑，加入水并用二氯甲垸提取。柱色譜法純化，得到產(chǎn)物4，60mg。IV:在(TC向4(0.4g)的5ml吡啶溶液中緩慢加入0.5ml乙酰氯，繼續(xù)在0'C攪拌15分鐘，然后室溫攪拌30分鐘。通過加入20ml水將反應(yīng)猝滅，用EtoAc提取15mlX3，用1NHC1、飽和NaHC03、鹽水洗滌，然后用Na2S04干燥。真空濃縮得到5，520mg。V:向5(0.5g)和0.13gCul在15ml乙腈中的溶液緩慢加入3ml的70%t-BuOOH，攪拌1小時，然后在5(TC攪拌2小時。加入12ml10%Na2S205溶液，用EtOAc提取，用Na2S04干燥，除去溶劑，過柱，得至lj6，80mg。VI:向6(50mg)在1.5mlTHF和3mlMeOH中的溶液加入260mgCeCl3'7H20，然后在0。C緩慢加入75mgNaBH4，攪拌30分鐘，加入0.5mLlNHCl和5ml水，用EtoAc提取5mlX3,用Na2S04干燥，除去溶劑，得到7，49mg。VII:向300mgNaBH4在4mlEtOH和1mlMeOH中的溶液加入7(40mg)在0.5mlEtOH和0.5ml氯仿中的溶液，在O'C攪拌8小時然后在冷凍器中過夜。加入乙酸以猝滅反應(yīng)，加入水并且用EtoAc提取，得到8，30mg。mp〉250。C;&NMR(CD3OD)S0.86(s,3H),1.35(s,3H)，L95(s，3H)，3.55(t，IH,J=7.5Hz),3.71(dd，1H，J=7Hz,J=2.5Hz)，4.32(d，1H，J=2.7Hz),4.55(m，IH),5.21(s,IH)。VIII:向8(30mg)在1mLMeOH中的溶液加入含50mgNaOH的0.25mL水溶液。在5(TC攪拌15分鐘，然后加入INHC11mL、水5mL，用EtoAc提取5mLX3，除去溶劑，得到9,20mg。mpl70-172"C;&NMR(CD3OD)S0.95(s,3H),1.32(s,3H),3.41(m,1H),3.51(t,1H，J=8.0Hz),3.78(dd,1H,J=7.1Hz，J=2.5Hz),4.3l(d，IH,J=2.5Hz),5.15(s,IH)。IX:向29mgNH2OHHC1和17mgNaOH在熱的1mLEtOH中的溶液加入9(50mg)在熱的1mLEtOH中的溶液，在100。C回流2小時，將鹽濾出，在EtOH/H20中重結(jié)晶，得到10，40mg。mp〉25(TC;力NMR(CD3OD)S0.72(s，3H)，1.02(s，3H),2.03(s,3H),3.86(t,1H，J=8.5Hz),4.08(dd,1H,J=8.0Hz,J=2.6Hz),4.60(m，1H,),5.19(s,IH)。17a-甲基雄甾-5-烯-3卩,17卩-二醇-3卩-乙酸酯-7,ll-二酮(7)、17a-甲基雄甾-5-烯-3p,7P，17卩-三醇-3P-乙酸酯-ll-酮(8)、甲基雄甾-5-烯-3|3，7卩,17卩-三醇-11-酮(9)。3III4IVVIII9I:向1(4g)在150mlAc20中的溶液加入p-TsOH2.8g，室溫過夜，后處理為加入700mL冰水、攪拌1小時，將固體濾出，得到白色產(chǎn)物2，4.55g。II:在(TC緩慢向1.5gNaBH4在35mLEtOH禾口5mLMeOH中的溶液加入2(1.2g)在30mLEtOH和10mL氯仿中的溶液，繼續(xù)在(TC攪拌2小時，并且室溫攪拌2小時，加入4mL乙酸以猝滅NaBH4，加入50mL水，用EtoAc提取50M1X3，然后除去溶劑，得到粗的產(chǎn)物。過柱得到3，250mg。III:向3(200mg)在8mlMeOH中的溶液加入0.36gH5I06在2ml水中的溶液，在室溫攪拌1小時，除去溶劑，加入水并且用DCM提取，然后過柱，得到產(chǎn)物4，60mg。IV:在-78。C在&下向4(250mg)在1.5mLTHF和3.5mL乙醚中的溶液緩慢加入lmL含22WMeMgCl的THF，在-78。C攪拌1.5小時，然后室溫攪拌1小時，然后在75i:回流1小時。在0。C加入4mLINHC1和10mL水。用EtoAc提取，除去溶劑，得到粗品249mg。過柱，得到5，46mg。V:在0。C向5(1.0g)在15mL吡啶中的溶液緩慢加入1.1mL乙酰氯，在0。C攪拌15分鐘，然后室溫攪拌30分鐘。加入50mL水，用EtoAc提取50mLX3，用1NHC1、飽和NaHC03、鹽水洗滌并且用Na2S04干燥。除去溶劑，得到6，1.02g。VI:向6(1.0g)和0.3gCul在40mL乙腈中的溶液緩慢加入6mL70%t-BuOOH，在室溫攪拌1小時，然后在5(TC攪拌2小時。加入24mL10%Na2S2O5溶液，用EtoAc提取，用Na2S04干燥，除去溶劑，過柱，得到7，285mg。mp〉250。C;!HNMR(CD3C1)S0.82(s,3H)，1.29(s,3H),2.05(s,3H),4.70(m,1H,)，5.75(s,1H)。VII:向7(45mg)在1.5mLTHF和3mLMeOH中的溶液加入150mgCeCl37H20，然后在(TC緩慢加入30mgNaBH4，攪拌10分鐘，加入0.5mLINHCl禾卩5mL水，用EtoAc提取5mLX3，用Na2S04干燥，除去溶劑，得到8，41mg。mpl08-110°C;&NMR(CD3OD)S0.725(s，3H)，L25(s,3H),2.01(s，3H)，4.02(dd,1H,J=8.2Hz，J=2.4Hz)，4.53(m,lH,)，5.29(s，IH)。89VIII:向8(22mg)在1mLMeOH中的溶液加入23mgNaOH在0.1mL水中的溶液。在5(TC攪拌10分鐘，然后加入1NHC11mL、水5mL，用EtoAc提取5mLX3。除去溶劑，得到9，10mg。mp〉250。C;^NMR(CD3OD)S0.75(s，3H),1.24(s,3H),3.41(m,1H),3.99(dd,1H,J=8.2Hz,J=2.5Hz)，5.23(s,1H)。17ot-乙炔基雄甾-5-烯-3(3,7(3,16a,17(3-四醇(8)、17卩-乙炔基雄甾-5-烯陽3(5,7(3,16ot，l7a-四醇(9)I:向l(l.Og)和0.56g咪唑在15mlDMF中的溶液加入TBDMS-C11.24g，室溫過夜，后處理包括加入50ml水，有固體形成，過濾得到白色固體產(chǎn)物2，1.75g。II:向冷卻到-78。C的2(1.64g)在50mlTHF中的溶液加入2.3mlLDA，在30分鐘之后,緩慢加入0.62mlTMSC1，在-78。C攪拌30分鐘，然后回溫到室溫攪拌1小時，TLC顯示RXN完成，用乙醚提取150mlx2，用水和鹽水洗滌,用Na2S04干燥得到黃色產(chǎn)物3，1.87g。III和IV:向冷卻到-2(TC的3(10g)在250mlTHF中的溶液加入m-CPBA4.2g，攪拌3小時以形成4，然后緩慢加入250mlMeOH，在-2(TC攪拌30分鐘，然后在-2(TC緩慢加入200mlNa2SO3溶液，攪拌1小時?；販氐绞覝?，用乙醚提取150mLX3，用飽和NaHC03、鹽水洗滌，用Na2S04干燥，得到粗的11g，為了除去產(chǎn)物中的一些額外的m-CPBA，過短柱，用100%Hex50mlx5洗脫，然后用50%Hex/EtoAc100mlX5洗脫，收集粗產(chǎn)物5，8.5g。V:通過注射器泵向10g90%乙炔鋰乙二胺絡(luò)合物在250ml無水THF中的溶液加入5(5g)在50mL無水THF中的溶液，這個過程花費約8小時。使其室溫攪拌過夜。在0匸加入500mL水，用EtOAc提取150mLX3，用200mL0.1NHC1、150mL飽和NaHC03、100mL鹽水洗滌，用Na2S04干燥，除去溶劑，得到粗品5.5g，過柱，得到兩個異構(gòu)體，17-P-OH,6(1.5g)和17-a-OH，7(1.2g)。VI:向6(265mg)在4mLMeOH和3mLTHF中的溶液加入4mLINHC1,在室溫1.5小時。加入10mL飽和的NaHC03，室溫除去有機溶劑，加入10mL水，儲存在冷凍器中過夜以除去水，向固體加入THF，過濾，除去THF，得到白色固體產(chǎn)物8，130mg。mp214-216°C;&NMR(CD3OD)50.92(s，3H),1.06(s,3H),2.99(s，1H),3.42(m,1H),3.72(dt，1H,J=7.2Hz,J=2.5Hz)，4.17(dd,1H,J=8.2Hz,J=2.7Hz)，5.24(d1H,J=1.0Hz)。VII:向7(500mg)在8mLMeOH和6mLTHF中的溶液加入8mL1NHC1，在室溫1.5小時。加入飽和的NaHC03以中和溶液到pH=8。加入50ml水，得到的白色固體，過濾，用水洗滌，真空干燥，得到白色固體產(chǎn)物9，225mg。mp〉250。C;&NMR(CD3OD)S0.90(s,3H),1.06(s,3H)，2.75(s,1H)，3.42(m,1H)，3.72(dt,1H,J=7.0Hz,J=2.0Hz),.4.37(dd,1H,J=8.1Hz，J=2.6Hz),5.24(t,1H，J=2.0,J=1.0Hz)。4卩-乙?；坨?5-烯-3p，16a,17(3-三醇(7)、雄甾-5-烯-3(3,4卩,1601,17卩-四醇(化合物8)。8步驟1:將化合物1(24.0g，0.0832mol)和溴化銅(56.0g,0.20mol)在無水甲醇(800mL)中的混合物回流16小時。真空下除去大部分溶劑并且加入水(500mL)。通過過濾收集產(chǎn)生的沉淀，并且用水洗滌。使固體在甲醇中重結(jié)晶兩次，得到化合物2，為淺黃色固體(19.7g)步驟2:向攪拌的化合物2(22.0g，0.060mol)在200mLN，N-二甲基甲酰胺中的溶液加入1N氫氧化鈉水溶液(66mL,0,066mol)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌1小時。加入lN鹽酸(8mL)和400mL水。通過過濾收集產(chǎn)生的沉淀并用水洗。粗產(chǎn)物通過從甲醇重結(jié)晶進行純化，得到化合物3，為白色固體(11.8g)。步驟3:在0°C向化合物3(11.8g,0.0387mol)在吡啶(50mL)中的溶液加入乙酰氯(11.8g,0.128mol)。將反應(yīng)混合物在0。C攪拌1小時。使得到的混合物回溫到室溫并且攪拌另外的1小時。加入水。通過過濾收集沉淀，并用水洗滌。將固體真空干燥，得到化合物4(12.6g)，其不經(jīng)純化用于隨后反應(yīng)。步驟4:在氮氣下向冷卻(0。C)的化合物2(3.10g，0.00916mol)在80mL無水乙醚中的溶液加入氫化鋁鋰(1.13g,0.030mol)。除去冰浴并將得到的混合物在室溫攪拌0.5小時，然后回流l小時。通過加入6N鹽酸將反應(yīng)猝滅。減壓下除去乙醚。將產(chǎn)生的固體過濾并用水洗。粗產(chǎn)物5在甲醇中重結(jié)晶，得到化合物5(1.lg)，為白色固體。步驟5:向5(914mg,2.98mmol)在20mL氯仿中的溶液加入溴(303mg,3.16mmo1)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌20分鐘。減壓除去溶劑，得到化合物6，其不經(jīng)進一步純化用于隨后反應(yīng)。步驟6:4(3-乙?；坨?5-烯-3(5，16a,17l3-三醇(7)的制備。將化合物6溶解于30mL的無水乙醚和10mL無水吡啶中。加入乙酸銀(1.03g,1(914mg，2.98mmol)在5mL無水吡啶中的溶液。將反應(yīng)混合物在暗處攪拌0.5小時。有大量的淺綠色沉淀產(chǎn)生。加入乙醚(50mL)并將沉淀濾掉。將濾液在真空下干燥。殘余物通過硅膠上快速色譜法純化，用50:50乙酸乙酯:己烷洗脫，得到標題化合物7(124mg)，為白色固體。選擇的'HNMR數(shù)據(jù):(CD30D,300MHz):S5.78(d,1H,J=2.2Hz)，5.34(br,1H)，4.02(t,1H,J=4.5Hz),3,52(dt,1H,J=7.7Hz，3.0Hz)，3.37(d,1H,J=4.9Hz),2.03(s,3H)，(1.12(s,3H),0.75(s,3H)。熔點:152-153。C。93步驟7:雄甾-5-烯-3(3,4(5，16a,17(3-四醇(8)的制備。將化合物7(50mg,0.137mmol)溶解于1N氫氧化鈉水溶液(lmL)的甲醇(5mL)中并將得到的溶液回流1小時。在真空下除去甲醇并將殘余物用乙酸乙酯提取(3X30mL)。將合并的提取物用硫酸鎂干燥，過濾并且真空濃縮，得到固體。粗產(chǎn)物通過從甲醇重結(jié)晶進行純化，得到標題化合物8(23mg)，為白色固體。選擇的NMR數(shù)據(jù):(CD30D,300MHz):S5.62(d，1H，J=3.2Hz)，4.05(d,1H，J=2.4Hz),4.02(m，1H)，3.43(dt,br，1H，J=11.7Hz,3.6Hz),3.36(d,1H，J=4.2Hz),1.197(s，3H)，0.76(s，3H)。熔點238-241°C。雄甾-5-烯-3卩,4卩，7(3，17卩-四醇(12)(方法2)、雄甾-5-烯-3卩，7卩,17(5-三乙酰氧基-4(3-醇(11)。步驟l:在0°C向化合物9(5.0g，0.0138mol)的吡啶(20mL)溶液中加入乙酰氯(11.8g,0.128mol)。將反應(yīng)混合物在O'C攪拌5小時，然后在真空下除去大部分溶劑。將殘余的漿狀物在乙酸乙酯(80ml)和水(20ml)之間分配。有機層用1N鹽酸、飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，然后用硫酸鎂干燥，過濾并且蒸發(fā)為固體。粗產(chǎn)物從乙酸乙酯和己垸重結(jié)晶，得到化合物10(4.8g)，為白色固體。步驟2:向化合物10(720mg，1.66mmol)在二氧雜環(huán)己烷(15mL)和乙酸(IOmL)中的溶液加入在水(1.5mL)和二氧雜環(huán)己垸(5mL)中的二氧化硒(185mg,1.66mmol)。將反應(yīng)混合物在95。C加熱36小時?；旌衔锢鋮s到室溫，用乙酸乙酯稀釋，并且順序地用水、飽和碳酸氫鈉、和鹽水洗滌，然后用硫酸鎂干燥，過濾并且真空濃縮到干燥。粗產(chǎn)物通過硅膠上的快速色譜法純化，用3:2的己烷:乙酸乙酯洗脫，得到化合物11(174mg)，為白色固體。步驟3:將化合物11(148mg，0.33mmol)溶解于1N氫氧化鈉水溶液(3ml)和甲醇(10ml)中并將得到的溶液回流1小時。在真空下除去大部分甲醇。加入水并將混合物聲處理和過濾。將收集的固體真空干燥，得到12(82mg)，為白色固體。選擇的^NMR數(shù)據(jù):(CD30D,500MHz)S5.48(d，1H,J=2.8Hz),4.04(d，1H,J=2.7Hz)，3.74(dd,J=8.3Hz,J=2.5Hz),3.56(t，lH，J=8.5Hz)，3.43(dt，1H,J=7.6Hz，J=4.2Hz),L25(s,3H),0.75(s,3H)。熔點144-147°C。(VI)、16a-溴雄甾-5-烯-3(3-醇-ll卩-乙酰氧基-17-酮(VII)、(Vin)、雄甾-5-烯-3p,ll卩,16a-三乙酰氧基-17-酮(IX)、雄甾-5-烯-3卩,ll(5，16a-三乙酰氧基-17(5-醇(X)、雄甾-5-烯-3(Ul(U6a,17P-四醇(XI)。95IXXXIII.將化合物I(4.0g,11.4mmol)溶解于100ml無水1,4-二氧雜環(huán)己烷。加入甲醇鈉(3.0g,55.2mmol)并將混合物w在無水條件下回流3小時，通過HPLC監(jiān)控。除去溶劑到1/3體積并將混合物用2NHC1酸化到pH-56?；旌衔镉?X50mlDCM提取。將有機層合并并且用50ml飽和碳酸氫鈉和50ml鹽水洗滌。在用硫酸鈉干燥并且蒸發(fā)溶劑之后，分離得到3.56g的95%純的產(chǎn)物。III.將化合物n(13.5g)和對甲苯磺酸(2.45g)在175ml無水乙酸酐中攪拌18小時。然后將混合物傾倒在800g冰中并且攪拌1小時。過濾通過短的硅膠短柱，得到3.14g的化合物IH。IV.將化合物111(100mg)溶解于1.55ml乙二醇中，隨后加入原甲酸三乙酯(3.77ml)和對甲苯磺酸(50mg)。然后將混合物回流1.5小時，并且傾倒在6ml甲醇和0.08ml吡啶的熱的混合物中。將混合物冷96卻并且加入15ml水?；旌衔镉?X30ml乙酸乙酯提取并且用飽和碳酸氫鈉(20ml)和鹽水(20ml)洗滌。用硫酸鈉干燥并且蒸發(fā)溶劑，得到50mg的97%純的V。V.在室溫向50mgIV的2mlDMF溶液中加入溶解于0.5ml水中的27mg硼氫化鈉。在劇烈攪拌下將溶液加熱到IO(TC，維持15分鐘，隨后冷卻到室溫。將反應(yīng)傾倒在18ml水中，隨后加入0.2ml乙酸?；旌衔镉靡宜嵋阴?2X10ml)提取并且用飽和碳酸氫鈉(10ml)和鹽水(10ml)洗滌。用硫酸鈉干燥并且蒸發(fā)溶劑，得到39mg的化合物V。VI.將化合物V(50mg)和對甲苯磺酸(2mg)懸浮于2ml丙酮和0.21ml水的混合物中，回流1.5小時。在蒸發(fā)丙酮之后，加入10ml水，產(chǎn)物從溶液沉淀析出。過濾，得到42mg的95"/。純的所需產(chǎn)物。VII.將化合物VI(315mg)和CuBr2(611mg)加入到7ml無水甲醇并且回流24小時。然后將反應(yīng)混合物瀝冷卻并且傾倒在15ml熱水中并將粗產(chǎn)物濾出。然后將粗產(chǎn)物溶解于25ml甲醇/THF(l:l)中，加入200mg活性炭。將溶液煮沸IO分鐘并將活性炭濾掉。粗產(chǎn)物從甲醇重結(jié)晶，得到426mg的75。/。純度的產(chǎn)物。VIII.將化合物VII(420mg)溶解于18mlDMF和7ml水的混合物中。在攪拌下加入氫氧化鈉水溶液(1N,1.31ml)。在10分鐘之后，將溶液傾倒在包含1.5ml1MHCl的冰/水混合物中。敬愛那個溶液用NaCl飽和并且用2X5ml乙酸乙酯提取。在用硫酸鈉干燥并且蒸發(fā)溶劑之后，粗產(chǎn)物通過柱色譜法純化，得到300mg的95。/。純的VIII。IX.將化合物VIII(300mg)溶解于6ml吡啶中，隨后加入0.34ml乙酰氯。將反應(yīng)攪拌18小時，然后傾倒在30ml冰水中。將粗產(chǎn)物濾出，然后過柱純化，得到180mg的純產(chǎn)物。X.將化合物IX(120mg)溶解于5ml甲醇并且在冰浴中冷卻。在5分鐘內(nèi)加入硼氫化鈉(11.5mg)并且除去冰浴。在1小時之后，反應(yīng)用0.2ml乙酸猝滅并且加入15ml水?；旌衔镉?X20ml乙酸乙酯提取并且用飽和碳酸氫鈉(20ml)和鹽水(20ml)洗滌。用硫酸鈉干燥，隨后進行柱色譜純化，得到86mg的所需產(chǎn)物。XI.將化合物X(180mg)溶解于5ml無水乙醚中并且冷卻到-78。C。滴加甲基溴化鎂(1.2ml,1M，在乙醚中)。使反應(yīng)回溫到室溫，回流3小時。然后將反應(yīng)冷卻并用1MHC1中和。將沉淀的產(chǎn)物濾出并且從甲醇/水重結(jié)晶3次，得到36mg的純的XI。熔點=220.3-221.6匸。選擇的NMR位移:&NMR(CD3OD):5.20ppm(bs,1H),4.26ppm(dd,J=3Hz,5Hz,1H),3.88ppm(m,1H),3.32ppm(m，1H),3.19ppm(d,J=8Hz,1H),1.24ppm(s,3H),0.92ppm(s,3H)。雄甾-5-烯-3p,16a-二乙酰氧基-7，17-二酮(4)，雄甾-5-烯-3(5,16oc-二乙酰氧基-7(3，17p-二醇(HE3467)。4HE34672的合成。向冷卻至IJ-78。C的1(3.44g,10mmol)和TMS-Cl(2.15ml，16.5mmol)的THF(100ml)溶液中滴加2.0MLDA(7.5ml，15mmo1)。將溶液攪拌30分鐘并且回溫到室溫。將反應(yīng)混合物在100ml1:1己垸/乙醚和100ml水之間分配。有機層用鹽水(3X30mL)洗滌并且用Na2S04干燥。在除去溶劑之后得到黃色油狀物。粗品通過硅膠色譜法純化，用5-20%EtOAc/己烷洗脫，回收1.9g的1和2(600mg,1.54mmol)，為白色固體，收率31%。3的合成。向冷卻到0'C的2(100mg，0.26mmol)的THF(3ml)溶液中加入mCPBA(77%，62.2mg,0.27mmol)并且回溫到室溫。加入0.5NHCl(3ml)并且攪拌20分鐘，用乙醚提取。提取液用飽和碳酸氫鈉、鹽水洗滌，用Na2S04干燥。在除去溶劑之后得到產(chǎn)物3(90mg，0.26mmol)，100%收率。4的合成。向冷卻到(TC的3(721mg，2.0mmol)的吡啶(10mL)溶液中滴加乙酰氯并且在0X:攪拌2小時。反應(yīng)用水(300mL)猝滅并且攪拌15分鐘。有固體形成，通過過濾將其收集。固體用水、1NHC1和水洗滌，并且真空干燥，得到灰白色固體4(737mg)，收率90%。HE3467的合成。在15分鐘內(nèi)向冷卻到-15'C的4(300mg,0.75mmo1)在1:1MeOH/THF(15ml)中的溶液加入NaBH4(42.5mg,1.12mmol)。加入冷卻到-15X:的氯化鈰(300mg,0.81mmol)的甲醇溶液并且攪拌2分鐘。反應(yīng)用1NHC1猝滅，然后傾倒在90mL水中。有固體形成，通過過濾將其收集。固體用1NHC1和水洗滌，真空干燥，得到HE3467(183mg,0.45mmo1)，收率60%。1HNMR(CD30D):55.29(s,1H),4.89(m,1H),4.55(m,1H),3.74(d,1H,J=6.52),3.60(d,1H,J=4.76),2.36(d,2H,J=1.27)2.15-2,18(m,2H),2.05(s,3H),2.01(s,3H)，1.9-1.l(m，11H),l.ll(s,3H),0.82(s,3H)。5a-雄甾垸-2(3,3a,16a，17(3-四醇(22)。步驟l:在(TC向13(50.0g，0.172mol)的吡啶(150mL)溶液中加入對甲苯磺酰氯(47.0g，0.24mol)。將反應(yīng)混合物在0°。攪拌2小時，然后室溫攪拌過夜。加入水。通過過濾收集得到的沉淀并用水洗滌。粗產(chǎn)物通過從甲醇重結(jié)晶進行純化，得到14(75.2g)，為白色固體。步驟2:將化合物14(75g，0.169mol)在2，4,6-三甲基吡啶(200mL)中的混合物回流5小時。在冷卻之后，加入水(500mL)，將得到的沉淀通過過濾收集并用水洗滌。固體在甲醇中重結(jié)晶，得到粗產(chǎn)物(42.5g)。將粗產(chǎn)物(20.0g)溶解于氯仿(113mL)和乙酸酐中(37mL)。在0。C向這個溶液中加入濃硫酸(3mL)的氯仿(37mL)溶液和13mL乙酸酐。將反應(yīng)混合物在O"C攪拌0.5小時，然后加入700mL水并且室溫攪拌6小時。將得到的沉淀通過過濾收集并且用水洗滌，真空干燥，得到15(17.2g)，為白色固體。步驟3:將15(8.17g，0.030mol)和溴化銅(510.8g，0.046mol)在無水甲醇(220mL)中的混合物回流18小時。在冷卻之后，在真空下除去大部分溶劑并且加入水(150mL)。通過過濾收集產(chǎn)生的沉淀，并且用水洗滌。使固體在甲醇中重結(jié)晶，得到16，為白色固體(6.76g)。步驟4:向攪拌的16(6.69g，0.019mol)的N,N-二甲基甲酰胺(180mL)溶液加入1N氫氧化鈉水溶液(22mL,0.022mol)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌0.5小時。加入lN鹽酸(3ml)和100ml水。得到的溶液用乙酸乙酯提取(3X250mL)。將合并的提取物用硫酸鎂干燥，過濾和真空濃縮，得到17(4.37g)，為蠟狀固體。步驟5:在0°C向17(3.74g,0.013mol)的吡啶(20mL)溶液中加入乙酰氯(2.18,0.028mol)。將反應(yīng)混合物在O'C攪拌1小時。使得到的混合物回溫到室溫并且攪拌另外的1小時。加入水。通過過濾收集沉淀，并用水洗滌。將固體真空干燥，得到18(4.25g)，為白色固體。步驟6:在0°C向18(2.4g，0.0072mol)的甲醇(80mL)溶液中加入硼氫化鈉(1.2g,0.031mol)。將反應(yīng)混合物在Oi:攪拌1小時。通過加入乙酸(6mL)和水(15mL)將反應(yīng)猝滅。在減壓下除去大部分甲醇。殘余的漿狀物在乙酸乙酯(80mL)和水(20mL)之間分配。有機層用1N鹽酸洗滌，用飽和碳酸氫鈉水溶液中和，然后用硫酸鎂干燥，過濾并且蒸發(fā)，得到粗產(chǎn)物19(1.92g)，為白色固體。步驟7:在0°C向19(1,9g,0.0057mol)的吡啶(20mL)溶液中加入乙酰氯(lmL,0.014mol)。將反應(yīng)混合物在0。C攪拌1小時。將得到的混合物回溫到室溫并且攪拌另外的1小時，然后在真空下除去大部分溶劑。將殘余的漿狀物在乙酸乙酯(80mL)和水(20mL)之間分配。有機層用1N鹽酸、飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，然后用硫酸鎂干燥，過濾并且蒸發(fā)，得到粗產(chǎn)物。粗產(chǎn)物通過硅膠上的快速色譜法純化，并用1:10乙酸乙酯:己垸洗脫，得到20(1.4g)，為白色固體。步驟8:向20(980mg,2.61mmol)的氯仿(25mL)溶液中加入間氯過氧苯甲酸(3.6mmo1)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌2小時。有機層用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，用水洗滌，然后用硫酸鎂干燥，過濾并且蒸發(fā)，得到粗產(chǎn)物。粗產(chǎn)物通過硅膠上的快速色譜法純化，用1:10乙酸乙酯:己垸洗脫，得到21(780mg)，為白色蠟狀固體。步驟9:將21(625mg，1.61mmol)的乙酸(8mL)溶液回流5小時。在冷卻之后，在真空下除去溶劑，得到油狀物，將其進一步在真空干燥過夜。將得到的蠟狀固體溶解于2N氫氧化鈉水溶液(8mL)和甲醇(15mL)中并將反應(yīng)回流1小時。在真空下除去甲醇并且加入水。通過過濾收集產(chǎn)生的沉淀，并且用水和熱的丙酮洗滌。將收集的固體真空干燥，得到雄甾烷-2卩，3a,16a,17(3-四醇或22(295mg)，為白色固體。選擇的&NMR數(shù)據(jù):(CD30D,500MHz)S3.98(d,1H,J=4.8Hz),3.79(br,1H),3.74(br，1H),3.35(d,lH，3.6Hz),0.99(s,3H)，0.77(s,3H)。mp:260-263。C。顯而易見，上述化合物可用于制備其它的式1化合物，例如，這些化合物的其它酯或醚。用于制備標題化合物的中間體也可以用于本文所述的方法中。實施例23。實質(zhì)上如上述實施例6中所述在實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)中評價式1化合物治療多發(fā)性硬化(MS)的能力。實施EAE動物模型的規(guī)程描述在(D.Auci等人，Ann.NY.Acad.Sci.USA,1051:730-42,2005)中。將得自Charles-River的雌性SJL小鼠(6-8周齡，平均體重25g)保持在標準實驗室條件下(不含非特異性病原體細菌)，自由接觸食物和水，并且在開始研究之前允許適應(yīng)環(huán)境一周。將動物隨機分為每組七只動物的六個組，并且如下處理(l)小鼠用媒介物處理，(2)小鼠用SU5416(Z-3-[(2,4-二甲基吡咯-5-基)亞甲基]-2-吲哚酮)處理，102(3)小鼠用17卩-乙炔基雄甾-5-烯-3p,7(5，17ot-三醇處理，(4)小鼠用雄甾-5-烯-3a,7p,16a，17卩-四醇處理，(5)小鼠用雄甾-5-烯-3卩,7(3,16a,17P-四醇處理，(6)小鼠用3a-三氟甲基雄甾-5-烯-3p,17P-二醇處理，(7)小鼠用17oc-三氟甲基-雄甾-5-烯-3M7(3-二醇處理和(8)小鼠用501-雄甾垸-3(5，17(5-二醇-16-肟處理。用200|iL的1:1乳劑(75(ig蛋白脂質(zhì)蛋白(PLP)和在完全弗氏佐劑(CFA)中的6mg/mL結(jié)核分枝桿菌H37RA)誘導(dǎo)EAA。將200pL注射劑在引流到副淋巴結(jié)和腹股溝淋巴結(jié)中的四個位置之間分配。將百日咳毒素用作輔佐劑并且在第零天和免疫后的第二天以200ng/小鼠i.p.給予。在疾病的臨床發(fā)病時開始將各個組用含O.lmg化合物的lOOiuL媒介物處理，或者用單獨的媒介物處理，q.d.po(口服強飼法)，并且繼續(xù)直到免疫后的30天。臨床發(fā)病定義為在25%小鼠中疾病的臨床癥狀達到2-3級的時間。臨床分級通過沒意識到治療的觀察者進行0=沒有疾病，1=尾巴軟垂，2=中度的下肢輕癱，3=重度的下肢輕癱，4=垂死狀態(tài)，5=死亡。通過對不成對數(shù)據(jù)的ANOVA和非參數(shù)的Mann-Whitney檢驗進行對臨床評分的顯著差異的統(tǒng)計分析。<0.05的P值被認為是統(tǒng)計顯著。對于統(tǒng)計分析，死于EAE的小鼠只在死亡當天賦值為5，然后從實驗組中刪除。不出所料，在免疫后的第19天內(nèi)，媒介物處理組的小鼠中8/8(100。/。)都發(fā)展出標準的EAE征兆。發(fā)病的平均天數(shù)為15.5土3.9(SD)。在這個動物組中，疾病的持續(xù)時間是12.3±4.3天。從第1天到第30天的平均累積評分為24.8±7.8,從(處理后)第31天到第54天的平均累積評分為22.7±15.8。在用SU5416、雄甾-5-烯-3a,7l3，16a，17p-四醇和5a-雄甾烷-3p,17p-二醇-16-肟處理的動物中觀察到與在媒介物處理組的小鼠中觀察到的非常相似的EAE進程，如此處理的小鼠表現(xiàn)出可與對照相比的累積發(fā)病率、疾病持續(xù)時間和平均累積發(fā)病。相比之下，用雄甾-5-烯-3(5，7(3，160^17卩-四醇、3a-三氟甲基雄甾-5-烯-3卩,17卩-二醇或17a-三氟甲基雄甾-5-烯-3(3,17p-二醇處理的小鼠表現(xiàn)出與媒介物處理組小鼠相比得到顯著改善的EAE進程，引起平均累積評分和持續(xù)時間中的一種或多種都顯著降低。并且在進一步對比中這些化合物中沒有103一種顯著影響EAE的累積發(fā)生率或致死率。最后盡管17(5-乙炔基雄甾-5-烯-30,7^17^三醇只表現(xiàn)出相對于媒介物處理組小鼠的累積￡八￡發(fā)作和持續(xù)時間降低的傾向，但是這種作用似乎是生物學(xué)重要的(14.9士17.6和7±7.9對24.8±7.8和12.3±4.3)。這個化合物沒有統(tǒng)計顯著性可能是由于在整個觀察期大量小鼠被賦予0的評分，因此引起高的標準偏差。在第30天處理結(jié)束時，監(jiān)控小鼠直到另外的24天。有可能觀察到媒介物處理組小鼠中疾病變?yōu)槁圆?，其累積評分可與處理過程中的累積評分相比較。與處理時間相比，在SU5416組中觀察到在跟進時間過程中累積評分的顯著增長，從25.5±8.9的平均累積評分增加到35.5±13.2，而17p-乙炔基雄甾-5-烯-3(3,7p,17a-三醇的增長則更小，為從14.9士17.6增長到18.4士20.6。在用17卩-乙炔基雄甾-5-烯-3(3，7|3,1701-三醇處理的小鼠中，還有可能觀察到EAE發(fā)病率從處理時間結(jié)束時的57.1%增加到跟進時間結(jié)束時的85.7%。另一方面，其它化合物似乎是在跟進時間中保持了與處理時間中相似的累積評分。這對于3a-三氟甲基雄甾-5-烯-3|3,17(3-二醇來說是特別顯著的，其在處理時間過程中11.2±4.8的平均累積評分增加到跟進時間結(jié)束時的10.8±10.3。這些結(jié)果表明，17p-乙炔基雄甾-5-烯-3(3，7p，17(x-三醇、雄甾-5-烯-3(5，7卩,1600,17(3-四醇、3a-三氟甲基雄甾-5-烯-3p,17卩-二醇和17a-三氟甲基-雄甾-5-烯-3p,17p-二醇在SJL小鼠中的PLP誘導(dǎo)的EAE模型中發(fā)揮了強大的抗炎性能。對于將這些發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化為臨床情況特別相關(guān)的是如下的觀察結(jié)果，S卩，即使在免疫后的第12天開始的規(guī)程中在24%的小鼠已經(jīng)發(fā)展出EAE臨床征兆時給予，化合物在這種EAE模型中仍是有活性的。特別指出的是，發(fā)現(xiàn)SU5416在這種情況中是無效的。先前已經(jīng)有報道說SU5416在EAE中是有效的(L.Bouerat等人，J.Med.Chem.48:5412-5414,2005)。然而，為了得到這樣的結(jié)果，SU5416化合物是在動物接受免疫的同時給予的。相比之下，在這個規(guī)程中，直到級別癥狀明顯之后才對動物給予化合物例如np-乙炔基雄甾-5-烯-3卩,7^,1701-三醇，這表明化合物可用于有效地治療已有的疾病和用于預(yù)防或延遲疾病發(fā)病。實施例25。電離輻射暴露的治療。將選擇的F1C對經(jīng)過致死性輻射的雌性B6D2F1小鼠的作用與用單獨的媒介物處理的對照動物相比較。使用^Cs來源以2.5Gy/分鐘劑量使動物暴露于10Gy的全身照射。使用每組12只動物的總共5組。對于第l、2、3和5組，試驗物品作為100pL體積通過皮下注射給予，進行三個連續(xù)日，第一劑量在暴露于輻射之后的2到4小時給予。對于第4組，試驗物品作為50pL體積通過肌肉注射給予三個連續(xù)日。制劑是包含0.1。/。w/v羧甲基-纖維素、0.9e/。w/v氯化鈉和0.05%v/v苯酚的懸浮液。在注射之前攪拌制劑以使F1C均勻地再懸浮，并且在抽入注射器之后的幾分鐘內(nèi)注射到動物中，以防止在注射器中沉降。對動物組進行如下處理。第1組只接受媒介物，每天皮下注射，持續(xù)3個連續(xù)日。第2組通過每天皮下注射接受在10(HiL懸浮液中的0.6mg的3卩,17(3-二羥基雄甾-5-烯，持續(xù)3個連續(xù)日。第3組通過每天皮下注射接受在100[iL懸浮液中的3.0mg的3p，17(i-二羥基雄甾-5-烯，持續(xù)3個連續(xù)日。第4組通過每天皮下注射接受在50(iL懸浮液中的0.6mg的3p，17p-二羥基雄甾-5-烯，持續(xù)3個連續(xù)日。第5組通過每天皮下注射接受在100iaL懸浮液中的0.6mg的3(3-羥基-17^氨基雄甾-5-烯，持續(xù)3個連續(xù)日。在照射之后對動物進行存活監(jiān)控，進行21天，得到以下結(jié)果。顯示了第6、7、12和21天的存活動物數(shù)。天組別6712211媒介物對照12114120.6mgs.c.121110733.0mgs.c.12129740.6mgi.m.121211950.6mqs.c.12121211實施例25。胃腸炎癥的治療。使用炎性腸病的動物模型證明式1化合物限制或抑制炎癥或炎癥癥狀的能力。每組使用3只雄性Wistar大鼠(180士20克)，在禁食24小時之后用2,4-二硝基苯磺酸(DNBS)或鹽水攻擊。通過結(jié)腸內(nèi)滴注0.5mL的DNBS乙醇溶液(在0.5mL的含30%乙醇的鹽水溶液中的30mg)誘導(dǎo)遠端的結(jié)腸炎，之后通過套管注入2mL空氣以保證溶液保留在結(jié)腸中。使用的體積是每次注射液體制劑形式的0.1mL的2和20mg/mL的化合物，例如，雄甾-5-烯-3|3,7卩,17(3-三醇，將其每天皮下注射給予，持續(xù)6天(0.2mg/動物/天或2.0mg/動物/天)。制劑為在無水懸浮液(例如，2。/。的芐醇w/v，0.1%Brij96w/v和等體積的PEG300和丙二醇)中包含100mg/mL的化合物。通過用不含化合物的媒介物稀釋20mg/mL制劑得到2mg/mL和20mg/mL的濃度。第一劑量在DNBS攻擊之后的30分鐘給予。每天一次口服(PO)給予柳氮磺吡啶(30mg/mL，在含2。/。土溫80的蒸餾水中)(10mL/kg/天)，持續(xù)7天，前兩個劑量在DNBS攻擊之前的24小時和2小時開始。通過檢査肛門區(qū)域每天記錄腹瀉的出現(xiàn)。將動物禁食24小時，然后處死。在第7天或第8天將動物處死，并且取出它們的結(jié)腸和稱重。在取出結(jié)腸之前，記錄結(jié)腸和其它器官之間的粘連跡象。此外，在將每個結(jié)腸稱重之后記錄潰瘍的存在。將結(jié)腸對體重(BW)比例的"凈"改變相對于鹽水攻擊的基線組歸一化。"凈"的結(jié)腸對體重比例的25-30%減106小被認為是顯著的。結(jié)果表明，雄甾-5-烯-3(3,7p,17P-三醇對于疾病的進程有有限的影響(凈的結(jié)腸對體重比例有約15-20%的降低)，而用17a-乙炔基雄甾-5-烯-3(3，7p,17卩-三醇或雄甾-5-烯-3p,7卩，16ot,17(3-四醇進行處理是有效的(凈的結(jié)腸對體重比例有約25-35%的降低)。這個規(guī)程的變體包括使用上述的劑量水平和/或0.05mg/動物/天、0.1mg/動物/天、0.5mg/動物/天和1.0mg/動物/天中的一個或多個的劑量水平給予在含30%磺基丁基醚-環(huán)糊精的水中的化合物。實施例26。與外傷有關(guān)的神經(jīng)元損失和骨質(zhì)疏松癥或骨損失狀況的治療。免疫能力是一種復(fù)雜的功能，其可以在外傷誘導(dǎo)的內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素(GC)水平升高之后受到劇烈的削弱。使用化合物5-雄甾烯-3卩,7卩,17卩-三醇通過發(fā)揮營養(yǎng)或同化代謝活性來保持這些免疫功能。在沙鼠的兩側(cè)頸動脈閉塞之后發(fā)生的急性腦缺血卒中的動物模型中，與單獨的的卒中相比用5-雄甾烯-3(3,7p，17(3-三醇治療顯著地改善認識能力^=0.03)。因此，對于空白組，測量的每組中的覓食潛伏期為6.9±0.9秒(sec)，單獨的卒中組為46.9±13.6sec，用5-雄甾烯-3卩,7(3,17(5-三醇治療的卒中組為14.8±4.8sec。附隨地，卒中誘導(dǎo)的CA1海馬神經(jīng)元計數(shù)損失顯著地被5-雄甾烯-3p，7p,17p-三醇中止(abrogated)(空白=362,247±6，839;卒中=152,354±11,575;和卒中+5-雄甾烯-3卩,7(3,17卩-三醇=207,854±47,334)。在骨損失狀況中，5-雄甾烯-3(5，7p,17P-三醇影響主要的骨結(jié)構(gòu)，即，致密層和海綿層和生長面。在用5-雄甾烯-3p,7p，17P-三醇處理的熱傷害的小鼠(20%的總體表面積)中，致密骨(股骨)和海綿骨/網(wǎng)狀骨質(zhì)(脛節(jié))骨質(zhì)量的損失，以及近側(cè)的脛骨松果體生長面中的軟骨細胞增殖的抑制都通過5-雄甾烯-3(3，7(5,17(5-三醇處理得到顯著的預(yù)防(p0.01)。股骨皮層骨的組織形態(tài)測定術(shù)顯示骨形成速率有所增加。我們觀察到了對骨礦物含量損失的部分預(yù)防作用，如通過雙重X射線吸收光度法測量的。股骨灰重量顯著地大于(pO.01)媒介物處理的灼傷小鼠，表明5-雄甾烯-3f3，7p，17(3-三醇保持了骨的礦物含量。腦中長期的高GC水平的促炎癥性作用提示升高的GC水平使神經(jīng)病學(xué)損害的后果惡化。已經(jīng)證明作為5-雄甾烯-3(V7p，17p-三醇的上游代謝前體的腎上腺類固醇DHEA(5-雄甾烯-3P-羥基-17-酮)預(yù)防地塞米松誘導(dǎo)的小鼠的胸腺退化(K丄.Blauer等人.，Endocrinology,129:3174,1991)。合起來看，這些發(fā)現(xiàn)表明，5-雄甾烯-3p,7p,17(5-三醇抑制了GC誘導(dǎo)的功能性神經(jīng)組織損失并且在熱損傷之后保存骨結(jié)構(gòu)。在人MG-63骨肉瘤細胞系中證明包括5-雄甾烯-3p，7(3,17P-三醇、17a-乙炔基-5-雄甾烯-3(5,7(3,17(3-三醇和4-己雌酚-3a,17(5-二醇的化合物反轉(zhuǎn)糖皮質(zhì)激素在骨生長中的副作用的能力。MG-63細胞是成骨細胞，是介導(dǎo)骨生長的細胞。這些細胞系已經(jīng)廣泛地用于研究骨生物學(xué)和用于表征化合物治療骨損失狀況的生物活性(例如，B.D.Boyan等人，J.Biol.Chem.，264(20):11879-11886,1989;L.C.Hofbauer等人，Endocrinology,140(10):4382-4389,1999)。與糖皮質(zhì)激素水平升高有關(guān)的不利的毒性包括包括MG-63細胞系在內(nèi)的成骨細胞產(chǎn)生的IL-6和IL-8減少和11(3-羥基類固醇脫氫酶1型酶(11P-HSD)的表達增加。11(3-羥基類固醇脫氫酶1型酶增加通過使內(nèi)源的可的松轉(zhuǎn)化為抑制骨生長的活性的氫化可的松而導(dǎo)致內(nèi)源糖皮質(zhì)激素活性的水平增加。11P-HSD酶在肝臟、脂肪組織、腦和骨組織中表達。11(3-HSD-l產(chǎn)生的氫化可的松有助于骨質(zhì)疏松癥、胰島素耐受、2型糖尿病、異常脂血癥、肥胖癥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)異常例如卒中、神經(jīng)元死亡、抑郁癥和帕金森病。IL-6、IL-8和骨保護素的減少涉及由成骨細胞引起的骨生長減少。初步研究表明，地塞米松抑制MG-63細胞產(chǎn)生IL-6的IC5o是10nM，地塞米松抑制MG-63細胞生長的ICso為15.3nM。在這個規(guī)程中，使MG-63細胞在有或者沒有30nM濃度的合成糖皮質(zhì)激素地塞米松的存在下和在有或沒有10nM的式1化合物的存在下生長。下表中的化合物1是5-雄甾烯-3(3,7p，17P-三醇，化合物2是17a-乙炔基-5-雄甾烯-3(5，7M7l3-三醇，和化合物3是4-己雌酚-30^17(3-二醇。這些化合物的結(jié)果顯示如下。MG-63生長條件IL-6pq/mLIL-8單位11(3-HSDmRNA單位骨保護素pmol/L媒介物對照6.20.900.25445地塞米松1.30.121.0280化合物14.00.530.73—化合物22.80.500.54—化合物2(1nM)———455化合物34.10.550.75—這些結(jié)果表明，10nM的化合物部分地反轉(zhuǎn)30nM的地塞米松的副作用，這表明，化合物可以反轉(zhuǎn)與成骨細胞中糖皮質(zhì)激素水平升高有關(guān)的多重毒性，所述成骨細胞是介導(dǎo)骨生長的細胞。在相關(guān)的規(guī)程中，1nM的化合物17a-乙炔基-5-雄甾烯-3(3,7p,17p-三醇還在細胞在30nM地塞米松的存在下生長7小時之后使MG-63細胞的骨保護素合成減少得到完全反轉(zhuǎn)。骨保護素是與骨生長相關(guān)的因子，骨保護素合成減少與骨損失有關(guān)。使在30nM地塞米松的存在下減少MG-63細胞的骨保護素合成得到完全或部分反轉(zhuǎn)的其它化合物是170^三氟甲基-5-雄甾烯-3(3,7p，17(3-三醇(在lnM化合物的存在下的正?；蚧€骨保護素水平，與不含化合物或地塞米松的媒介物對照相比)、5-雄甾烯-3(3,70，1601,17(3-三醇(在l|uM為正常骨保護素水平)、3(3,7a，16a，17卩-四羥基雄甾-5-烯(在lOnM為接近正常骨保護素水平)、3a，7(3，16a，17P-四羥基雄甾-5-烯(在10nM為正常骨保護素水平)、17a-甲基雄甾-5-烯-3&17(3-二醇-7-酮(在100nM增加骨保護素水平)、17a-甲基雄甾-5-烯-3(5,7(3,17(5-二醇(在10nM為正常骨保護素水平)。使在30nM地塞米松的存在下的骨保護素減少得到部分反轉(zhuǎn)的其它化合物包括雄甾-5-烯-3(5,17(3-二醇-7-肟。在相似的規(guī)程中，化合物3a,17(3-二羥基雄甾-4-烯表現(xiàn)出對地塞米松-誘導(dǎo)的對由MG-63細胞產(chǎn)生IL-8和IL-6的抑制和地塞米松誘導(dǎo)109的llp-HSDmRNA減少的統(tǒng)計上顯著的反轉(zhuǎn)。為了證明可以在體內(nèi)得到相應(yīng)的效果，將化合物170^乙炔基-5-雄甾烯-3(3，7p，17(5-三醇給予持續(xù)23天每天用地塞米松處理以降低動物中骨保護素水平的小鼠。用媒介物和10pg地塞米松處理的小鼠(陽性對照組)中的骨保護素水平為3.3pmol/L骨保護素，而用媒介物、地塞米松和4mg/kg/天的17a-乙炔基-5-雄甾烯-3(3,7(3，17P-三醇處理的動物具有6.4pmol/L骨保護素(p〈0.05)?？疾榱伺c雌激素缺乏有關(guān)的鼠科動物脊椎骨中成骨細胞和骨細胞的細胞程序死亡程度。將SwissWebster小鼠(四個月大)切除卵巢。二十八天之后，將動物處死，分離椎骨，固定并且包埋，然后在異丁烯酸鹽中進行非脫鈣處理(undecalcified)。通過采用CuS04增強的TUNEL方法測定成骨細胞和骨細胞細胞程序死亡的發(fā)病率，發(fā)現(xiàn)在沒有雌激素之后有所增加。發(fā)現(xiàn)用參考化合物例如17卩-雌二醇和用F1C例如4-己雌酚-3a,17(3-二醇和或17a-乙炔基-5-雄甾烯-3(5,7(3,17p-三醇處理減少細胞程序死亡，這與骨損失減少一致。總起來說，在這個實施例中描述的結(jié)果證明，化合物例如17a-乙炔基-5-雄甾烯-3p，7卩,17卩-三醇通過增加骨生長和抑制骨損失二者來影響骨組織。化合物例如17a-乙炔基-5-雄甾烯-3(3,7(3,17l3-三醇和5-雄甾烯-3(3,7p,16a,17(3-四醇不與雄激素受體、雌激素受體-ot、或雌激素受體-卩相互作用，這與它們治療骨損失狀況而不發(fā)揮不期望的性激素活性的能力是一致的。實施例27。使用小鼠耳組織的熱損傷模型表征化合物治療與熱外傷有關(guān)的炎癥的能力。所述狀況是最小的灼傷損傷，其在暴露的未經(jīng)處理的小鼠耳中在灼傷后24-72小時進展為組織壞死。對多組約九周齡的Balb/c小鼠賦予識別標記，然后分為對照小組和治療小組。記錄要被浸入熱水中的耳的厚度，然后麻醉小鼠的整個耳在52C水中浸蘸24110秒。在注射丙二醇媒介物(對照)或含100mg化合物的丙二醇之后，將每只小鼠送回籠中。在灼傷之前和在熱損傷之后的多個時間對每只小鼠監(jiān)控耳腫脹改變。在損傷之前和在熱損傷之后的1、3、6、9、12、18、24和48小時對每只小鼠監(jiān)控耳腫脹改變。將動物用溶解于丙二醇中的100mg脫氫表雄酮(DHEA)處理。在對照和DHEA處理的小鼠中對水腫形成和消退的分析顯示，在DHEA處理的和未經(jīng)處理的灼傷小鼠中在損傷之后的六小時發(fā)生作為水腫度量的最大耳腫脹。在未經(jīng)處理的對照組中，腫脹的程度在12小時內(nèi)開始下降，并且在隨后的12小時時間內(nèi)繼續(xù)迅速下降。在灼傷后的24和48小時，耳組織表現(xiàn)出淤滯的原發(fā)區(qū)域的微管閉塞?；衔镄坨?5-烯-3(5,17(3-二醇和16oc-溴脫氫表雄酮保護接受治療的動物免于發(fā)生耳的熱損傷所致的許多缺血性后果?；衔?6oc-羥基脫氫表雄酮的保護性較差即，其降低了進行性缺血的程度，但是沒有完全地預(yù)防進行性缺血，而16ct-氯脫氫表雄酮只是對進行性缺血有些微的保護性。在另一個規(guī)程中考査了化合物對失血性休克和缺血的影響。使用甲氧基氟垸將6-8月齡的CF-l小鼠麻醉，并且準備腹部外科手術(shù)。對每只小鼠測量呼吸的水平、眨眼應(yīng)答和對皮夾痛的應(yīng)答，以便確保麻醉的水平適合于外科手術(shù)。腹部外科手術(shù)的持續(xù)時間是大約兩個小時，這期間，在30分鐘時間段內(nèi)除去35-40%的動物血液體積。以受控的方式除去血液模擬了失血性休克的效果。將移除的血液和2X體積的復(fù)蘇流體(乳酸鹽林格氏溶液)緩慢靜脈內(nèi)輸注到中央靜脈中。復(fù)蘇流體補充有2mg的脫氫表雄酮-3(3-硫酸酯或作為安慰劑的賦形劑。分別將腹膜和上層的皮膚縫合。將動物保持在38'C-39"C，直到完全復(fù)蘇。在這些條件下，安慰劑處理組的動物中的大多數(shù)在24-48小時內(nèi)死亡。在外科手術(shù)之后的四小時，進行細菌的菌落形成單位(CFU)試驗并且使用常規(guī)計數(shù)測定肝臟中的丙二醛。將腸系膜淋巴結(jié)(MLN)取出并且在血液瓊脂板上培養(yǎng)，在培養(yǎng)之后將CFU數(shù)計數(shù)。將肝臟取出并且測量丙二醛的量。用脫氫表雄酮-3(3-硫酸酯處理引起15/15小鼠存活，而媒介物對照動物有1/15的存活。在出血性外傷的大鼠模型中考査了治療效果。使二十四只大鼠發(fā)生40%血液總量損失，包括導(dǎo)管插入和剖腹手術(shù)(軟組織損傷)來模擬外傷和出血。在出血開始一小時之后，用結(jié)晶狀流體和濃集的紅細胞(PRBC)使動物復(fù)蘇。十二只動物在開始出血之后的一小時，但是在流體復(fù)蘇之前以100pL/kg體重接受一個濃度為40mg/kg體重的含雄甾-5-烯-33，70,17(3-三醇的甲基纖維素懸浮液的皮下注射。十二只動物接受100pL/kg體重的皮下甲基纖維素對照注射。在誘導(dǎo)出血三天之后，接受雄甾-5-烯-3(3,7(5，17|3-三醇的十二只動物的存活率為100%;而未經(jīng)處理的組中死亡率為25%(P<0.04，使用兩個二項式比例之差的優(yōu)效性Barnard非條件檢驗)。還實施了血壓降低的出血性外傷規(guī)程作為第二個出血性外傷的模型。在這個規(guī)程中，如上所述使15只大鼠出血到約35-40mmHg的平均動脈壓，并且在出血開始一個小時時用晶質(zhì)和PRBC復(fù)蘇。七只動物在開始出血之后的一小時，但是在流體復(fù)蘇之前以100laL/kg體重接受一個濃度為40mg/kg體重的含雄甾-5-烯-3(5,7p，17P-三醇的甲基纖維素懸浮液的皮下注射。八只動物接受100nL/kg體重的皮下甲基纖維素對照注射。在誘導(dǎo)出血之后的兩天，未經(jīng)處理的組(11=8)中的死亡率是75%。雄甾-5-烯-3(3，7(3，17(5-三醇-處理的動物的死亡率是43%，證明該化合物在血壓降低的出血性外傷的情況中具有保護性。實施例28。代謝穩(wěn)定性。根據(jù)以下規(guī)程使用得自肝臟組織的微粒體體外考査所選擇的化合物的代謝穩(wěn)定性。這個規(guī)程中的微粒體能夠進行羥基化反應(yīng)和使類固醇分子上的羥基和酮互變的氧化還原反應(yīng)。微粒體不介導(dǎo)結(jié)合反應(yīng)，例如，3(3-羥基的硫酸酯化或3a-羥基的葡糖醛酸化。所述規(guī)程如下進行。(1)制備含0.5mM化合物的乙腈/水35:65。對于雄甾-5-烯-3(3，17(3-二醇，制備0.145mg/mL或29.0|iL的1mg/mL原液加上171nL溶劑。對于標準曲線，使用0.5mM原液的稀釋物獲得10pM、5pM、lpM的雄甾-5-烯-3P,17p-二酚的最終濃度。(2)如下建立樣品。每個測定包括雄甾-5-烯-3(3,17p-二醇對照和1-8個未知化合物。對于每個化合物的管如下1-0'2-0'3-0'4-0'*5-0'*6-5(iM7-l岸8-30'9-30'10-30'，其中*表示變性的微粒體陰性對照反應(yīng)管。對于另外的化合物，編號從11、21、31等開始。(3)向每個管加入315^LPBS(pH7.3-7.5)。向每個管加入10|iL的適合的測試物溶液。(4)內(nèi)標準/乙腈溶液。(5)NADPH再生系統(tǒng)(NRS)為每個管125pL。向PBS加入1.7mg/mlNADP、7.8mg/ml的6-磷酸葡萄糖、6單位/mL的6-磷酸葡萄糖脫氫酶。用于每個實驗的新鮮的NRS在使用之前保持在冰上。(6)每個反應(yīng)在每個管中使用125pL的NRS。(7)從-8(TC冷凍器中取出肝微體制備物，并且在室溫水浴中解凍。微粒體制備物的濃度為20mg/ml。每個反應(yīng)使用0.25mg/管，并且在PBS中稀釋到5mg/ml的濃度(即，4倍稀釋)并且保持在冰上。(8)對于零時間和變性的微粒體控制管，在-2(TC加入500jiL乙腈。零時間管轉(zhuǎn)移到冰上并且變性的微粒體對照在37'C預(yù)先孵育5分鐘。(9)包含微粒體制備物的試驗管也在37'C預(yù)先孵育5分鐘。(10)對于每個孵育管，通過加入50pL的微粒體制備物并且渦流混合來啟動反應(yīng)。(11)通過在-2(TC加入500|iL乙腈并且渦流來結(jié)束每個反應(yīng)。(12)在反應(yīng)結(jié)束之后，將得自每個反應(yīng)管的100pL轉(zhuǎn)移到新鮮的管中并且向每個管加入200nL水和140(HiL的甲基-叔丁基醚。使管渦流并且在microfuge上在13,000rpm離心10分鐘。然后將管置于干冰-甲醇浴上，直到水層變?yōu)槔鋬龅墓腆w。(13)將每個管中的甲基-叔丁基醚轉(zhuǎn)移到新鮮的管中并且在氮氣下蒸發(fā)溶劑，然后將沉淀物再懸浮在lOO)iL乙腈/水35:65中并且通過LCMS分析。結(jié)果表示在以下表中，孵育時間如下所示?；衔锬阁w剩余母體剩余人微粒體小鼠微粒體雄甾-5-烯-3(3,17卩-二醇39%(10分鐘)25%(10分鐘)雄甾-5-烯-3卩，17(3-二醇30%(90分鐘)—雄甾-5-烯-3P，7(3，17P-三醇86%(卯分鐘)89%(10分鐘)17a-乙炔基雄甾-5-烯-3(5,7卩,l7卩-三醇86%*(30分鐘)—雄甾-5-烯-3p,7p,i6a，np-四醇100%(10分鐘)100%(10分鐘)雄甾-5-烯-30t,7(3，16a,17卩-四醇100%(10分鐘)100%(10分鐘)雄甾-5-烯-3a，7a，16a,l7卩-四醇100%(10分鐘)100%(10分鐘)雄甾-5-烯-3卩，7a,160C，17卩-四醇100%(10分鐘)100%(10分鐘)*大鼠微粒體代替小鼠制備物結(jié)果表明，四醇化合物對氧化還原反應(yīng)有耐受性，這和與雄甾-5-烯-3(5,17(3-二醇參考化合物相比代謝程度大大降低是一致的。這個觀察結(jié)果是相當出乎意料的，因為四個羥基中的每一個都有可能轉(zhuǎn)化為酮，但是實際上沒有一個受到影響?？疾榈钠渌衔锇ㄐ坨?5-烯-3(5,1601，17(5-三醇、雄甾烷-3p,16a-二醇-17-酮和雄甾烷-3a,16a,17a-三醇，其全部都以與雄甾-5-烯-3p,17(3-二醇參考化合物相似的速率由微粒體代謝。實施例29。測量CaCo-2細胞的藥物吸收。這個規(guī)程用于度量化合物通過CaCo-2細胞單層的流入。CaCo-2細胞是表現(xiàn)出腸內(nèi)吸收細胞表現(xiàn)型的、極化的、高度分化的細胞系的人類細胞(J.Hunter等人，J.Biol.Chem.,268(20):14991-14997,1993)。這個細胞系用于研究各種化合物通過細胞單層的速率。典型地，使用Caco-2細胞的匯合的單層來模仿腸內(nèi)上皮和用于得到試驗化合物穩(wěn)態(tài)通量的滲透系數(shù)。這可以提供關(guān)于化合物口服生物可利用的可能性的信息。在這個規(guī)程中，將細胞保持在37t:的培養(yǎng)基中，使用在50ml的無菌管中的每孔lOO^L的溫?zé)崤囵B(yǎng)基。使細胞與每孔600pL的分化培養(yǎng)基在24孔無菌板上生長。每個孔包含跨孔插入物(transwdlinsert)以允許孔有兩個隔室。將lOOpL的分化培養(yǎng)基小心地加入到每個孔中，使移液管端部接觸孔側(cè)壁。將細胞在37"C、5%C02、飽和濕度培養(yǎng)48小時，以形成單層。對于每個板，將管編號為第l-24號管，底側(cè)緩沖液作為底側(cè)零時間點(TO)。26到49號管為包含試驗物的上側(cè)緩沖液，作為上側(cè)TO。51-74號管是T2o時間點(20分鐘)，76-99號管是T4。時間點，76-99號管是T4o時間點，101-124號管是T犯時間點，126-149號管是T，時間點和151-174號管是用于物質(zhì)平衡測定的T!2o上側(cè)樣品。175-179號管是化合物1的5點標準曲線，180-184號管是化合物2的5點標準曲線，依此類推，230-234號管是化合物12的5點標準曲線。將1-49號管置于擱物架1中的4行，號管置于擱物架2中，101-149號管置于擱物架3中，151-174號管置于擱物架4中，和175-234號管置于擱物架5和6中。如下制備緩沖液從新鮮的1000mL瓶中取出150mL的轉(zhuǎn)移緩沖液(用1NHCl調(diào)節(jié)到pH7.4)。這個緩沖液就是'底側(cè)緩沖液'。剩余的850mL用1NHC1調(diào)節(jié)到6.5，作為'上側(cè)緩沖液，。將150mL的上側(cè)緩沖液置于單獨的容器中，并將剩余的700mL用于漂洗。將緩沖液儲存在4'C，但是對于所述規(guī)程是在室溫下使用。在分化培養(yǎng)基達到室溫之后，將約20mL傾倒在小的燒杯中。使探針在這個培養(yǎng)基中平衡15分鐘。將24孔板從保溫箱取出并且使其回到室溫。如下用探針對每個孔進行測量將探針插入到孔中而不接觸細胞單層；在探針接近培養(yǎng)基表面時按下TEST按鈕并且在探針接觸表面時讀數(shù)從OOOO變?yōu)橐粋€數(shù)字；〉1000Q的讀數(shù)是可以接受的。然后將上側(cè)緩沖液從跨孔插入物傾析掉并且將整個板在包含漂洗緩沖液1000mL燒杯中漂洗，以除去全部分化緩沖液。然后將跨孔插入物置于T20板中。通過向10mL的上側(cè)緩沖液加入O.lpmol(例如，29pl的1mg/ml雄甾-5-烯-3(3,17(3-二醇參考溶液)將10|aM的試驗化合物和對照(卡馬西平MW236;氫氯噻嗪MW351)加入到上側(cè)緩沖液中。然后向所有的孔加入0.6mL的底側(cè)緩沖液。通過將150的化合物(lmg/mL，在乙醇中)加入到10mL乙腈/水(25:75)中制備作為內(nèi)標準的50嗎/ml3a，7(3，16a,17p-四羥基雄甾-5-烯溶液。在底側(cè)緩沖液中形成每種化合物的標準曲線。由于10pM的上側(cè)緩沖液在加入底側(cè)隔室時被稀釋六倍，因此在更低六倍的濃度下形成標準曲線。<table>tableseeoriginaldocumentpage116</column></row><table>對于TO對照，將600jil的底側(cè)緩沖液置于1-24號管中。將100^1的上側(cè)緩沖液加上試驗物加上500^1的上側(cè)緩沖液(使得濃度在標準曲線范圍內(nèi))加入到26-49號管中作為上側(cè)To。將100的上側(cè)緩沖液加上化合物置于上側(cè)。將跨孔插入物置于板中的時間作為時間零點(To)。在T=20，將跨孔插入物轉(zhuǎn)移到T40板中并且將T20板的600(iL樣品加入到適合的管中。在丁=40，將跨孔插入物轉(zhuǎn)移到T80板中并且從T40板取得600W的樣品到適合的管中。在丁=80，將跨孔插入物轉(zhuǎn)移到T120板中。從將600|al樣品從T80板移液到適合的管中，對于剩余的時間點依此類推。將100pi的上側(cè)緩沖液加入到適合的管中用于物質(zhì)平衡。立即對樣品進行提取，并且立即置于冷凍器中。除了151-174號管(其只含100nL)之外，將300pL的每種樣品從試驗管中轉(zhuǎn)移到標記的2ml管中；將這些樣品的50pL轉(zhuǎn)移并且加入到250^L的底側(cè)緩沖液(產(chǎn)生6倍的稀釋物)中。將20nL的3a,7p,16a,17(5-四羥基雄甾-5-烯內(nèi)標準加入每個管中并將向每個管中加入1500的甲基叔丁基醚。使管渦流，在microfuge中離心10分鐘，并且置于甲醇/干冰浴中，直到冷凍。將新鮮的管標記并且將甲基叔丁基醚從每個冷凍管傾析掉新鮮的管中。然后在氮氣下將甲基叔丁基醚蒸發(fā)并且在120(iL乙腈/水(35:65)中重構(gòu)并且通過LCMS分析。在以下表中，化合物1為3p，7(3,16ot,17(3-四羥基雄甾-5-烯、化合物2為17oc-乙炔基雄甾-5-3(3,7(3,170-三醇、化合物3為3a,17(3-二羥基-17a-乙炔基雄甾垸、化合物4為3a,7卩,16a，17fi-四羥基雄甾-5-烯、化合物5為2p,3a,16a，17(i-四羥基雄甾烷、化合物6為3(3，1606-二乙酰氧基-7|5,17(5-二羥基雄甾隱5-烯、化合物7為3P-乙酰氧基-17a-乙炔基雄甾-5-7(3，17p-二醇、化合物8為3P-乙酰氧基雄甾-5-7(3,16a,17P-三醇和化合物9為17ot-乙炔基雄留陽5-3a,7卩，17p-三醇。<table>tableseeoriginaldocumentpage117</column></row><table>使用CaCo-2細胞系的研究表明，四醇化合物例如雄甾-5-烯-3卩，7(3,1600,173-四醇不具有高的滲透性，因此估計是口服不能被生物利用。盡管如此，如上所述在糖尿病治療模型中將化合物雄甾-5-烯-3卩，70,1606，17^-四醇口服給予小鼠時仍具有活性。其它規(guī)程表明，四醇化合物例如3(3,7p,16a,np-四羥基雄甾-5-烯和3a，7(3,16a,17(5-四羥基雄甾-5-烯的硫酸酯化程度和葡糖醛酸化程度比二醇類化合物低。這種活性至少部分地來自于四醇化合物在體內(nèi)的低的代謝。權(quán)利要求1.用于預(yù)防或治療2型糖尿病、高血糖癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化或骨損失狀況的組合物，其中所述組合物包括一種或多種賦形劑和具有以下結(jié)構(gòu)的化合物其中一個R1為-H或任選被取代的C1-8烷基，另一個R1為-OH、C2-8酯或C1-8醚；一個R2為-H或任選被取代的C1-8烷基，另一個R2為-H、-OH、C2-8酯或C1-8醚，或者兩個R2合起來為＝NOH；一個R3為-H或任選被取代的C1-8烷基，另一個R3為-H、-OH、C2-8酯、C1-8醚或任選被取代的C1-8烷基，或者兩個R3合起來為＝NOH；一個R4為-H或任選被取代的C1-8烷基，另一個R4為-OH、C2-8酯或C1-8醚；R5為-CH3、-C2H5或-CH2OH；R6為-H、-CH3、-C2H5或-CH2OH；一個R7為-H或任選被取代的C1-8烷基，另一個R7為-H、-OH、C2-8酯或C1-8醚；R9為-O-或-C(R12)(R12)-，其中一個R12為-H、-F、-Br或任選被取代的C1-8烷基，另一個R12為-H、-OH、C2-20酯或C1-20醚或任選被取代的C1-8烷基，或者兩個R12合起來為＝O、＝NOH或＝NOCH3；R10為-H或-F；和一個R11為-H或任選被取代的C1-8烷基，另一個R11為-H、-OH、C2-8酯、C1-8醚或任選被取代的C1-8烷基，其中(1)至少一個R2為-OH、C2-8酯或C1-8醚并且R7、R11和R12中的至少一個獨立地為-OH、C2-8酯或C1-8醚，(2)一個R4為被取代的C1-8烷基或任選被取代的C2-8炔基并且R2、R3、R7、R11和R12中的至少一個獨立地為-OH、C2-8酯或C1-8醚，或(3)R2、R3、R7、R11和R12中的至少兩個獨立地為-OH、C2-8酯或C1-8醚。2.權(quán)利要求l的組合物，其中所述化合物具有以下結(jié)構(gòu):其中一個R1為-H或任選被取代的CM垸基，另一個R1為-OH、-oc(o)ch3、-0(3(0)<:112<:113或-0(:113;—個R2為-H或任選被取代的CM烷基，另一個R2為-OH、-OC(0)CH3、-OC(0)CH2CH3或-OCH3;一個R3為-H或任選被取代的Cm院基，另一個R3為-OH、-oc(o)ch3、-0<3(0)(^2(:113或-0(:113;禾口一個R4為-H或任選被取代的CM垸基，另一個R4為-OH、-OC(0)CH3或-OC(0)CH2CH3。3.權(quán)利要求l的組合物，用于預(yù)防或治療2型糖尿病。4.權(quán)利要求3的組合物，其中所述化合物為1706-乙炔基雄甾-5-烯-3卩,7，,17(3-三醇、雄甾-5-烯-3卩,7(3，16a，17卩-四醇、17a-乙炔基雄甾陽5-烯-3卩，7(5，16a，17(i-四醇、雄甾-5-烯-3(3，701，1606,17卩-四醇、雄甾-5-烯-3p，4(3,16ot,17p-四醇、雄甾-5-烯-306,4卩,1601,17(5-四醇、雄甾-5-烯-3(3,lip,16a,17p-四醇、雄甾-5-烯-3a,lip，16a,17(5-四醇、3(3,1lp,16(3,np-四醇、雄甾-5-烯-3a,llp，16(3,17p-四醇、雄甾-5-烯-2(3，301,1600,17(5-四醇或任何這些化合物的(:2.4單酯或(:2.4二酯類似物，任選地其中單酯為在3-位或17-位的乙酸酯，或二酯為在3-位和17-位的乙酸酯。5.權(quán)利要求1的組合物，用于預(yù)防或治療多發(fā)性硬化。6.權(quán)利要求5的組合物，其中所述化合物為170^乙炔基雄甾-5-烯-3卩，7(3,17p-三醇、雄甾-5-烯-3(5,7(5,16a，np-四醇、1701-乙炔基雄甾-5-烯-3(3,7(3,16oc,17(5-四醇、雄甾-5-烯-3卩,701,160^,17卩-四醇、雄甾-5-烯-3卩,4卩,160^17(5-四醇、雄甾-5-烯-3oc，4卩，16a，17卩-四醇、雄甾-5-烯-3(5，llp,16a,17p-四醇、雄甾-5-烯-3a，l1(3,16a,17f5-四醇、3(3，1lp，16p,17卩-四醇、雄甾-5-烯-3a,ll卩，16p，17(3-四醇、雄甾-5-烯-2^300,1601,17(3-四醇或任何這些化合物的(32.4單酯或<32.4二酯類似物，任選地其中單酯為在3-位或17-位的乙酸酯，或二酯為在3-位和17-位的乙酸酯。7.權(quán)利要求l的組合物，用于預(yù)防或治療高血糖癥。8.權(quán)利要求7的組合物，其中所述化合物為170^乙炔基雄甾-5-烯-3(5,7卩,17p-三醇、雄甾-5-烯-3(3，7p,16oc,17P-四醇、1701-乙炔基雄甾-5-烯-3卩,7(5,16a,17(3-四醇、雄甾-5-烯-3(3,701，1601,17卩-四醇、雄甾-5-烯-3(3，4|3,1601,17，-四醇、雄甾-5-烯-3ot,鄰,16a,17卩-四醇、雄甾-5-烯-3(3,lip,16a,17，-四醇、雄甾-5-烯-3a,l1(3,16a,17(5-四醇、3(3,11(3,16卩,17卩-四醇、雄甾-5-烯-3a,ll(3，16(3,17卩-四醇、雄甾-5-烯-2(3，3(^1606,17^四醇或任何這些化合物的(:2.4單酯或(32.4二酯類似物，任選地其中單酯為在3-位或17-位的乙酸酯，或二酯為在3-位和17-位的乙酸酯。9.權(quán)利要求l的組合物，用于預(yù)防或治療骨關(guān)節(jié)炎。10.權(quán)利要求l的組合物，用于預(yù)防或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。11.權(quán)利要求10的組合物，其中所述化合物為1701-乙炔基雄甾-5-烯-3(3，7(3，17卩-三醇、雄甾-5-烯-3p,7p，16a，17p-四醇、1701-乙炔基雄甾-5-烯-3(5,7(5，16a，17P-四醇、雄甾-5-烯-3(5，701，1601,17卩-四醇、雄甾-5-烯-3(3,4(3,1601,17(3-四醇、雄甾-5-烯-3a,4p，16oc,17(5-四醇、雄甾-5-烯-2，，301，1606，17^四醇或任何這些化合物的<:2.4單酯或C24二酯類似物，任選地其中(a)單酯為在3-位或17-位的乙酸酯，或(b)二酯為在3-位和17-位的乙酸酯。12.權(quán)利要求l的組合物，用于預(yù)防或治療骨損失狀況。13.權(quán)利要求12的組合物，其中所述骨損失狀況為骨質(zhì)疏松癥，骨折，熱灼傷、輻射灼傷或化學(xué)灼傷或存在有天然糖皮質(zhì)激素水平升高或存在有合成糖皮質(zhì)激素，任選地為地塞米松。14.權(quán)利要求13的組合物，其中骨損失狀況為骨質(zhì)疏松癥，并且所述化合物為17a-乙炔基雄甾-5-烯-3p,7p，17p-三醇、雄甾-5-烯-3卩，7卩,160^,17卩-四醇、17a-乙炔基雄甾-5-烯-3(5,7(3,16a，17P-四醇、雄甾-5-烯-3(5，706,1601，17(3-四醇、雄甾-5-烯-3(3,4卩,16a,17p-四醇、雄甾-5-烯-301,4(3,1601,17(5-四醇、雄甾-5-烯-2(3，3a，16a，17(3-四醇或任何這些化合物的(:2.4單酯或(32.4二酯類似物，任選地其中(&)(32.4單酯為在3-位或17-位的乙酸酯，或(1))(:2.4二酯為在3-位和17-位的乙酸酯。全文摘要本發(fā)明涉及治療特定臨床病癥例如高血糖癥、2型糖尿病、關(guān)節(jié)炎和多發(fā)性硬化的方法。本發(fā)明還提供鑒定和表征藥物的方法，所述藥物部分地通過在一個時間引發(fā)對生物分子不同生物學(xué)治療作用和在另一個時間點使所述生物分子的相對正常化來表征的。所述化合物包括17α-乙炔基雄甾-5-烯-3β，7β，17β-三醇或雄甾-5-烯-3β，4β，16α，17β-四醇，其都可以用作參考標準來促進這種候選藥物的評價和表征。文檔編號A61K31/33GK101472579SQ200780022449公開日2009年7月1日申請日期2007年4月23日優(yōu)先權(quán)日2006年4月22日發(fā)明者克里斯托弗·L·雷丁,詹姆斯·M·弗林克申請人:霍利斯-伊登醫(yī)藥公司