專利名稱：治療糖尿病的中藥顆粒劑及其制法和質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥制劑，特別是一種用于治療糖尿病的中藥顆粒劑及其制法和質(zhì)量 控制方法。
背景技術(shù)：
經(jīng)濟的發(fā)展和人民生活水平的提高，近年來糖尿病的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)迅速增加， 已經(jīng)成為繼心血管、腫瘤之后的第三大疾病。糖尿病一旦發(fā)病即為需要終身服藥的慢性病， 病癥如果控制不當則會出現(xiàn)很多不良并發(fā)癥，極大地影響患者的生命健康和生存質(zhì)量。由 于需要長期服藥，中藥在治療糖尿病方面越來越引起關(guān)注，許多有著良好療效的中醫(yī)藥相 繼出現(xiàn)。
本申請人曾于2004年向中國專利局提交了一份名稱為"一種用于治療糖尿病的中成 藥及其制備方法"申請?zhí)枮?00410055530.2的專利申請，該申請公開了治療糖尿病中成 藥的處方及各種劑型的簡單制備方法，本發(fā)明就是在申請?zhí)枮?00410055530.2申請的基 礎(chǔ)上，對其工藝條件進行了細化，并將其質(zhì)量控制方法公開，使該發(fā)明得以完善。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種治療糖尿病中藥膠囊劑及其制法和質(zhì)量控制方法。 本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的
一、 處方
黃芪1000g、西洋參267g、山茱萸333g、天花粉667g、葛根1000g、水蛭33g、酒炙 大黃167g、川芎333g。
二、 制法
水蛭研成細粉，過篩；黃芪、西洋參、山茱萸、葛根、大黃加4倍量80%乙醇，加熱 回流二次，每次2小時，合并乙醇液，回收乙醇，靜置過夜，濾過，濾液減壓濃縮成60 'C相對密度為1.20 1.25的清膏，備用，藥渣與其余天花粉等二味，加6倍量的水浸泡3 小時后，煎煮1小時，濾過，藥渣再加4倍量水，煎煮二次，每次1小時，濾過，合并濾 液，以6000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速，離心30分鐘，上清液用超濾膜濾過，濾液減壓濃縮成6(TC 相對密度為1.20 1.25的清膏；上述兩種清膏混勻后，加入水蛭細粉及糊精100g、可溶
性淀粉400g、甜菊苷15g，混勻，制成顆粒，干燥，制成1000g，即得。
三、 性狀
本發(fā)明為棕褐色的顆粒，水溶后有輕微渾濁；氣微，味甜、微苦。
四、 鑒別
(1) 取本發(fā)明約3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，塞緊，稱定 重量，冷浸30分鐘后，超聲處理l小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量， 搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液25ml，蒸干，殘渣加乙醚浸泡二次，每次30ml， 約浸泡20分鐘，傾去乙醚液殘渣揮盡乙醚，加水10ml微熱使溶解，放冷，置D101型內(nèi) 徑1. 5cm，高12cm大孔吸附樹脂柱上，依次以0. 5°/。氫氧化鈉溶液40ml、水和30%乙醇各 30ml洗脫，棄去洗脫液，再用70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇 使溶解并轉(zhuǎn)移至2ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取黃芪對照 藥材3g，同法制成對照藥材溶液。再取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液， 作為對照品溶液；照《中國藥典》薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各6ul，分別點于 同一硅膠G薄層板上，以氯仿一甲醇一水=13: 6: 2且于l(TC以下放置過夜的下層溶液 為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105'C烘至斑點顯色清晰；分 別置日光下及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的 位置上，顯相同顏色的斑點或熒光斑點。
(2) 取本發(fā)明3g，加甲醇50ml，超聲處理40分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml 使溶解，移置分液漏斗中，加乙醚提取2次，每次20ml，棄去乙醚液，水層用水飽和的正 丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的0.5%氫氧化鈉溶液30ml洗 滌一次，棄去氫氧化鈉液，再用水洗滌2次，每次20ml，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲 醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取西洋參對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；再取 人身皂甙Rbl對照品，加甲醇制成每lml含lrag的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》 薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿一乙 腈一甲醇一水=15: 40: 20: 10且于5 10'C放置12小時的下層溶液為展開劑，展開， 取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105。C烘至斑點顯色清晰；分別置日光下及365nm 紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色 的斑點或熒光斑點
(3) 取本發(fā)明12g，置索氏提取器中，加乙醚80ml，加熱回流4小時，乙醚液揮干， 殘渣加沸點30 6(TC的石油醚浸泡2次，每次20ml，約浸泡2分鐘，傾去石油醚，殘渣
加無水乙醇_氯仿=3: 2混合液2ml微熱使溶解，作為供試品溶液；另取山茱萸對照藥材 lg，同法制成對照藥材溶液；再取熊果酸對照品，加無水乙醇制成每lml含lmg的溶液， 作為對照品溶液；照《中國藥典》薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各4ul，分別點于 同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己垸一氯仿_醋酸乙酯=8: 2: 3.2為展開劑，展開，取出， 晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在ll(TC烘至斑點顯色清晰；分別置日光下及365nm紫外 光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑 點或熒光斑。
(4) 取本發(fā)明2g，加甲醇30ml，超聲處理40分鐘，濾過，濾液濃縮至約5ml，加 30 60目的聚酰胺2g拌勻，置水浴上蒸發(fā)除去溶劑，加于已處理好的條件為30 60目、 lg 、內(nèi)徑10 15ml的聚酰胺柱上，加水30ml洗脫，棄去水液，再加乙醇60ml洗脫，收 集乙醇洗脫液，蒸干，殘渣加乙醇lml使溶解，作為供試品溶液；另取葛根對照藥材lg， 同法制成對照藥材溶液；再取葛根素對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照 品溶液；照《中國藥典》薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各6ul，分別點于同一硅膠 GF254薄層板上，以氯仿一乙腈_甲醇一水=7: 2: 1.5: 0. l為展開劑，展開，取出，晾 干，置254nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上， 顯相同顏色的熒光斑點。
(5) 取本發(fā)明2g，加甲醇30ml，超聲處理40分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加3. 6 。/o鹽酸溶液20ml，加熱回流30分鐘，冷卻，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液， 揮干，殘渣加氯仿2ml使溶解，作為供試品溶液；另取大黃對照藥材0.2g，同法制成對照 藥材溶液；再取大黃素對照品，加氯仿制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；照《中 國藥典》薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各4ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以 沸點為60 9(TC的石油醚一醋酸乙酯一甲酸二15: 5: 1的上層溶液為展開劑，展開，取 出，晾干；分別置日光下及365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材和對照 品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點或熒光斑點；置氨氣中熏后，日光下檢視，斑點 變?yōu)榧t色。
(6) 取本發(fā)明10g，加甲醇80ml，超聲處理40分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水 20ml使溶解，濾過，濾液加濃氨溶液調(diào)節(jié)pH至lO，加醋酸乙酯提取2次，每次20ml，合 并醋酸乙酯液，蒸干，殘渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作為供試品溶液；另取川芎對照藥材 3g，同法制成對照藥材溶液；再取鹽酸川芎嗪對照品，加醋酸乙酯制成每lml含lmg的溶 液，作為對照品溶液；照《中國藥典》薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各8ul，分別
點于同一硅膠G薄層板上，以沸點為60 90°。石油醚一氯仿=4: 1為展開劑，另槽加等 體積的氨試液，預(yù)平衡15分鐘后，展開，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀試液；供試品色譜 中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
五、 檢查
按《中國藥典》要求，應(yīng)符合顆粒劑項下有關(guān)的各項規(guī)定。
六、 含量測定
取本發(fā)明約3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，塞緊，稱定重量， 冷浸30分鐘后，超聲處理1小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻， 濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液25ml，蒸干，殘渣加乙醚浸泡二次，每次30ml，約 浸泡20分鐘，傾去乙醚液殘渣揮盡乙醚，加水10ml微熱使溶解，放冷，置D101型大內(nèi) 徑1. 5cm，高12cm孔吸附樹脂柱上，依次以0. 5%氫氧化鈉溶液40ml、水和30%乙醇各30ml 洗脫，棄去洗脫液，再用70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇使溶 解并轉(zhuǎn)移至2ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取黃疾甲苷對照 品，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》薄層色譜法試 驗，精密吸取供試品溶液4ul，對照品溶液2 ul與4ul，分別交叉點于同一硅膠G薄層板 上，以氯仿一甲醇一水=13: 6: 2且于l(TC以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開， 取出，晾干，，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105。C加熱至斑點顯色清晰，取出，在薄層板 上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，照《中國藥典》薄層掃描法進行掃描，波長 、=500nm，入R=700nm，測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度積分值，計算，本發(fā)明 每袋含黃芪以黃芪甲苷、分子式為C4AA計，不得少于1.7mg。
七、 功能與主治益氣養(yǎng)陰，活血化瘀，通絡(luò)止痛。用于氣陰兩虛，脈絡(luò)瘀阻之消渴
病。癥見煩渴多飲，小便頻數(shù)，多食易饑，形體消瘦，或兼見胸悶刺痛，頭痛頭暈甚則
半身不遂，視物不清，四肢麻木刺痛，舌質(zhì)暗淡，或有痰點瘀斑，苔白少津，脈細澀，以 及糖尿病及其慢性并發(fā)癥上述證候者。 -
八、 用法與用量溫開水沖服，每袋6g， 一次1袋， 一日3次。
主要藥效學試驗總結(jié)為了進一步說明本發(fā)明的優(yōu)越性，將本發(fā)明產(chǎn)品進行了 一系列的藥效學試驗，將試驗結(jié)果總結(jié)如下
1.本發(fā)明顆粒對高血糖大鼠神經(jīng)組織生化指標的影響 大鼠形成高血糖2周后，神經(jīng)傳導(dǎo)開始下降；8周后測量MNCV下降20X
左右，高血糖大鼠神經(jīng)組織的生化測定與對照組比較，有明顯改變(P〈0.01)，
本發(fā)明的低、高劑量組及陽性對照(格列齊特)組均可提高運動神經(jīng)傳導(dǎo)， 并顯著降低神經(jīng)組織中山梨醇、果糖的含量，明顯提高肌醇和谷光甘肽的含 量，劑量依賴性明顯。
.2.本發(fā)明對糖尿病大鼠視神經(jīng)纖維的影響
2. 1正常大鼠與糖尿病大鼠視神經(jīng)組織結(jié)構(gòu)形態(tài)的對比觀察 正常大鼠視神經(jīng)結(jié)構(gòu)橫切面，HE染色可見視神經(jīng)被內(nèi)、中、外三層鞘 膜所包繞；神經(jīng)纖維銀染顯示，神經(jīng)纖維呈現(xiàn)纖細一致、略為波浪形的棕黑 色纖維狀態(tài)，神經(jīng)纖維束之間有神經(jīng)膠質(zhì)細胞和細胞外基質(zhì)支撐，束中分布 有斜、橫交錯的神經(jīng)纖維；神經(jīng)纖維髓鞘染色顯示，神經(jīng)纖維髓鞘為藍色、 纖細、略呈波浪形的形態(tài)，神經(jīng)纖維被間隔系統(tǒng)明顯地分隔呈現(xiàn)束狀。
糖尿病大鼠視神經(jīng)形態(tài)改變造模8周后，模型組糖尿病大鼠視神經(jīng)組 織HE染色未見明顯的病理改變；神經(jīng)纖維銀染見視神經(jīng)染色不勻，呈彎曲或 結(jié)節(jié)狀，在神經(jīng)纖維束之間，神經(jīng)膠質(zhì)細胞核明顯增多，神經(jīng)纖維束間隔增 寬較明顯；神經(jīng)髓鞘染色見髓鞘有節(jié)段性脫失，大部分髓鞘呈現(xiàn)淡藍色。說 明Alloxan性糖尿病大鼠在高血糖狀態(tài)持續(xù)8周后，其視神經(jīng)組織已發(fā)生了 形態(tài)學方面的病理改變。
2. 2本發(fā)明對糖尿病大鼠視神經(jīng)纖維退變的影響
將神經(jīng)纖維退變程度分為三級+，神經(jīng)纖維染色稍顯不勻，束間隔增 寬不明顯，+ + ，神經(jīng)纖維染色不勻，可見呈結(jié)節(jié)狀，束間隔寬較明顯，+ + + ,神經(jīng)纖維染色明顯不勻，神經(jīng)纖維呈現(xiàn)結(jié)節(jié)狀較明顯，束間隔增寬明 顯。造模8周后，本發(fā)明給藥組視神經(jīng)纖維的退變程度較模型組和陽性對照
(格列齊特)組輕，經(jīng)卡方檢驗差異均有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
2. 3.本發(fā)明顆粒對糖尿病大鼠視神經(jīng)纖維髓鞘脫失的影響
將神經(jīng)纖維髓鞘脫失程度分為三級+，神經(jīng)纖維髓鞘染色較正常稍淡，
神經(jīng)纖維束中空隔不明顯，++，神經(jīng)纖維髓鞘染色比正常變淡較明顯，神 經(jīng)纖維束中空隔較大，+++，神經(jīng)纖維髓鞘染色較正常明顯變淡，神經(jīng)纖
維束中空隔明顯加大。造模8周后，本發(fā)明給藥組視神經(jīng)纖維髓鞘脫失的程 度明顯輕于模型組和陽性對照(格列齊特)組，經(jīng)卡方檢驗差異均有顯著統(tǒng) 計學意義(P〈0.01)。
3. 本發(fā)明對高血糖大鼠癥狀體征及血液生化指標的影響 3. 1 —般觀察
3. 1. 1模型觀察
大鼠在注射四氧嘧啶后的第三、四天相繼出現(xiàn)飲水量、尿量明顯增多， 食量增加，形體消痩，倦縮懶動，體毛少澤等典型的"三多一少"癥狀和體 征。模型組的糖尿病大鼠其飲水量和尿量明顯增多并持續(xù)存在，形體消瘦明 顯；病程1 2月時，其多食癥狀有所減輕，體毛由少澤逐漸轉(zhuǎn)為枯黃無華， 尾部皮膚潰爛、尿道口紅腫及呼吸氣促肺部感染體征亦相繼出現(xiàn)；病程至2 月后，糖尿病大鼠的球結(jié)膜微血管迂曲擴張或行徑似蛇狀，或相繼呈現(xiàn)出囊 狀、棒狀、葉狀或竇點狀的微血管瘤，同時，晶狀體相繼出現(xiàn)肉眼可見的混 濁，耳廓干枯，倦縮懶動，唇色淡無華或紫暗，四肢欠溫，大便秘溏，舌色 多為紫暗或淡紫。
3. 1. 2本發(fā)明顆粒對糖尿病大鼠癥狀體征和體重的影響 給藥組的糖尿病大鼠在給藥兩周左右、飲水量、尿量及食量開始減少，1
月后其飲水量和尿量明顯減少，雖尚多于正常對照組，但明顯少于模型組，
尾部皮膚潰爛等感染體征的出現(xiàn)明顯少于模型組；2月后其食量基本接近于正 常對照組，體毛逐漸轉(zhuǎn)為白凈有澤，形體逐漸由消痩為豐滿，球結(jié)膜微血管 瘤和晶狀體混濁的發(fā)生率明顯低于模型組和陽性對照(格列齊特)組，其出 現(xiàn)的時間亦較對照組遲，耳廓及唇瓜紅潤有華，大便多正常，舌質(zhì)多為淡紅。 對病程6個月各組大鼠的體重進行了測量，經(jīng)本發(fā)明顆粒治療的糖尿病大鼠 體重與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P〉0.05)，與模型組和陽性對照組 比較差異均有統(tǒng)計意義(P〈0.01， P<0.05)，量效關(guān)系明顯。對病程6個月各 組大鼠左眼球結(jié)膜進行肉眼大體觀察，計數(shù)出現(xiàn)球結(jié)膜血管瘤的眼數(shù)，各組 間比較采用卡方檢驗，得出模型組球結(jié)膜微血管的發(fā)生率明顯高于正常對照 組(P〈0.01);本發(fā)明低、中、高劑量組球結(jié)膜微血管瘤的發(fā)生率明顯低于模 型組(P<0.01)。對病程6個月大鼠左眼進行大體觀察，計數(shù)出現(xiàn)肉眼可見的 晶體混濁眼數(shù)，模型組糖尿病大鼠絕大多數(shù)出現(xiàn)了肉眼可見的晶體混濁，本 發(fā)明各劑量組的晶體混濁發(fā)生率明顯低于模型組(P<0.01)，說明本發(fā)明對 Alloxan性糖尿病大鼠晶體混濁形成有良好的抑制作用。
3.2本發(fā)明顆粒對糖尿病大鼠血糖(BG)水平的影響
對治療前、治療1月及治療6個月時的各組大鼠血糖進行測定，觀察到 Alloxan性糖尿病大鼠的血糖水平顯著高于正常組(P〈0.01);治療前，糖尿 病大鼠各組血糖比較差異無統(tǒng)計意義(P〉0. 05);治療1個月及6個月后，本 發(fā)明低、中、高劑量組糖尿病大鼠血糖水平顯著降低，與治療前自身對照比 較差別均有顯著統(tǒng)計意義(KO.Ol)。
3. 3本發(fā)明顆粒對糖尿病大鼠血液流變學指標的影響
治療前及治療1個月后，測定各組大鼠部分血液流變學指標，以觀察
Alloxan性糖尿病大鼠的血液流變性特點和變化情況，由結(jié)果可見，Alloxan 性糖尿病大鼠高、低切變率全血比粘度及還原粘度、血漿比粘度、紅細胞剛 性指數(shù)和聚集指數(shù)均明顯增高，與正常對照組比較皆具有顯著性差異 (P〈0.01)，說明糖尿病大鼠的血液呈高度凝、粘、聚的異常狀態(tài)；Alloxan 性糖尿病大鼠的全血粘度比值明顯高于正常對照組(P<0.05)，表明其全血粘 度的增高在低切變速率情況下尤為明顯；治療1個月后，本發(fā)明各劑量組糖 尿病大鼠的高、低切變?nèi)日扯燃斑€原粘度、血漿比粘度、全血粘度比值、 紅細胞剛性指數(shù)和聚集指數(shù)明顯降低，與治療前自身及治療后模型組比較， 有顯著差異(P〈0.05 0.01)，說明本發(fā)明顆粒能明顯改善Alloxan性糖尿病 大鼠血液的流變性，量效關(guān)系明顯。
由以上實驗結(jié)果表明，本發(fā)明顆?？商岣哌\動神經(jīng)傳導(dǎo)和感覺神經(jīng)傳導(dǎo)， 顯著降低神經(jīng)組織中山梨醇、果糖的含量，明顯提高肌醇和谷光甘肽的含量; 阻止視神經(jīng)纖維的退變和視神經(jīng)纖維髓鞘的脫失；明顯改善輕糖尿病神經(jīng)病 變相關(guān)的系列癥狀，降低血糖含量和血液粘度，促進血液循環(huán)。由此說明本 發(fā)明顆粒對糖尿病性神經(jīng)病變有良好的治療作用。
權(quán)利要求
1、一種用于治療糖尿病的中藥顆粒劑，其特征在于它是由以下方法制備而成黃芪1000g、西洋參267g、山茱萸333g、天花粉667g、葛根1000g、水蛭33g、酒炙大黃167g、川芎333g；水蛭研成細粉，過篩；黃芪、西洋參、山茱萸、葛根、大黃加4倍量80％乙醇，加熱回流二次，每次2小時，合并乙醇液，回收乙醇，靜置過夜，濾過，濾液減壓濃縮成60℃相對密度為1.20～1.25的清膏，備用，藥渣與天花粉、川芎二味，加6倍量的水浸泡3小時后，煎煮1小時，濾過，藥渣再加4倍量水，煎煮二次，每次1小時，濾過，合并濾液，以6000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速，離心30分鐘，上清液用超濾膜濾過，濾液減壓濃縮成60℃相對密度為1.20～1.25的清膏；上述兩種清膏混勻后，加入水蛭細粉及糊精100g、可溶性淀粉400g、甜菊苷15g，混勻，制成顆粒，干燥，制成1000g，即得。
2、 如權(quán)利要求l所述的治療糖尿病的中藥顆粒劑的制法，其特征在于黃芪1000g、 西洋參267g、山茱萸333g、天花粉667g、葛根1000g、水蛭33g、酒炙大黃167g、川芎 333g;水蛭研成細粉，過篩；黃芪、西洋參、山茱萸、葛根、大黃加4倍量80%乙醇，加 熱回流二次，每次2小時，合并乙醇液，回收乙醇，靜置過夜，濾過，濾液減壓濃縮成60℃相對密度為1.20 1.25的清膏，備用，藥渣與天花粉、川芎二味，加6倍量的水浸泡3 小時后，煎煮1小時，濾過，藥渣再加4倍量水，煎煮二次，每次1小時，濾過，合并濾 液，以6000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速，離心30分鐘，上清液用超濾膜濾過，濾液減壓濃縮成60℃相對密度為1.20 1.25的清膏；上述兩種清膏混勻后，加入水蛭細粉及糊精100g、可溶 性淀粉400g、甜菊苷15g，混勻，制成顆粒，干燥，制成1000g，即得。
3、 如權(quán)利要求1所述的治療糖尿病的中藥顆粒劑的鑒別方法，其特征在于它是由以 下方法的一種或幾種的組合(1)黃芪的薄層鑒別取本發(fā)明顆粒劑約3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加 入甲醇50ml，塞緊，稱定重量，冷浸30分鐘后，超聲處理l小時，放冷，再稱定重量， 用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液25ml，蒸干，殘渣加 乙醚浸泡二次，每次30ml，約浸泡20分鐘，傾去乙醚液殘渣揮盡乙醚，加水10ml微熱使 溶解，放冷，置DIOI型內(nèi)徑1.5cm，高12cm大孔吸附樹脂柱上，依次以0. 5%氫氧化鈉溶 液40ral、水和30%乙醇各30ml洗脫，棄去洗脫液，再用70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗 脫液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解并轉(zhuǎn)移至2ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供 試品溶液；另取黃芪對照藥材3g，同法制成對照藥材溶液；再取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》薄層色譜法試驗，吸取上述 三種溶液各6ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿_甲醇一水=13: 6: 2且于10 。C以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在 105。C烘至斑點顯色清晰；分別置日光下及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與 對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點或熒光斑點；(2) 西洋參的薄層鑒別取本發(fā)明顆粒劑3g,加甲醇50ml，超聲處理40分鐘，濾 過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，移置分液漏斗中，加乙醚提取2次，每次20ml， 棄去乙醚液，水層用水飽和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和 的0. 5%氫氧化鈉溶液30ml洗滌一次，棄去氫氧化鈉液，再用水洗滌2次，每次20ml， 分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取西洋參對照藥材lg， 同法制成對照藥材溶液；再取人身皂甙Rbl對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作 為對照品溶液；照《中國藥典》薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各5ul，分別點于同 一硅膠G薄層板上，以氯仿_乙腈一甲醇一水=15: 40: 20: 10且于5 1(TC放置12小 時的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105'C烘至斑點 顯色清晰；分別置日光下及365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材和對照 品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點或熒光斑點； '(3) 山茱萸的薄層鑒別取本發(fā)明顆粒劑12g,置索氏提取器中，加乙醚80ml，加 熱回流4小時，乙醚液揮干，殘渣加沸點30 60。C的石油醚浸泡2次，每次20ml，約浸 泡2分鐘，傾去石油醚，殘渣加無水乙醇一氯仿=3: 2混合液2ml微熱使溶解，作為供試 品溶液；另取山茱萸對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；再取熊果酸對照品，加無水乙 醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》薄層色譜法試驗，吸取上 述三種溶液各4ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷一氯仿一醋酸乙酯二8: 2: 3.2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在ll(TC烘至斑點顯色清晰； 分別置日光下及365皿紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng) 的位置上，顯相同顏色的斑點或熒光斑點；(4) 葛根的薄層鑒別取本發(fā)明顆粒劑2g，加甲醇30ml，超聲處理40分鐘，濾過， 濾液濃縮至約5ml，加30 60目的聚酰胺2g拌勻，置水浴上蒸發(fā)除去溶劑，加于已處理 好的條件為30 60目、lg 、內(nèi)徑10 15ml的聚酰胺柱上，加水30ml洗脫，棄去水液， 再加乙醇60ml洗脫，收集乙醇洗脫液，蒸干，殘渣加乙醇lml使溶解，作為供試品溶液； 另取葛根對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；再取葛根素對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各6lil， 分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿一乙腈一甲醇一水=7: 2: 1.5: 0. 1為展開劑，展開，取出，晾干，置254nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色 譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(5) 大黃的薄層鑒別取本發(fā)明顆粒劑2g，加甲醇30ml，超聲處理40分鐘，濾過， 濾液蒸干，殘渣加3.6%鹽酸溶液20ml，加熱回流30分鐘，冷卻，用乙醚提取2次，每 次20ml，合并乙醚液，揮干，殘渣加氯仿2ml使溶解，作為供試品溶液；另取大黃對照藥 材0.2g，同法制成對照藥材溶液；再取大黃素對照品，加氯仿制成每lml含lmg的溶液， 作為對照品溶液；照《中國藥典》薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各4ul，分別點于 同一硅膠G薄層板上，以沸點為60 9(TC的石油醚一醋酸乙酯一甲酸=15: 5: 1的上層 溶液為展開劑，展開，取出，晾干；分別置日光下及365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜 中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點或熒光斑點；置氨氣中 熏后，日光下檢視，斑點變?yōu)榧t色；(6) 川芎的薄層鑒別取本發(fā)明顆粒劑10g，加甲醇80ml，超聲處理40分鐘，濾過， 濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，濾過，濾液加濃氨溶液調(diào)節(jié)pH至lO，加醋酸乙酯提取 2次，每次20ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，殘渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作為供試品溶液； 另取川芎對照藥材3g，同法制成對照藥材溶液；再取鹽酸川芎嗪對照品，加醋酸乙酯制成 每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》薄層色譜法試驗，吸取上述三種 溶液各8ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以沸點為60 90°0石油醚一氯仿=4: 1為展 開劑，另槽加等體積的氨試液，預(yù)平衡15分鐘后，展開，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀試 液；供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
4、如權(quán)利要求1所述的治療糖尿病的中藥顆粒劑的含量測定方法，其特征在于取 黃芪的薄層鑒別(1)項下的供試品溶液作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇 制成每lml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》薄層色譜法試驗，精密吸 取供試品溶液4ul，對照品溶液2 ul與4ul，分別交叉點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿 _甲醇一水=13: 6: 2且于l0℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干， 噴以10%硫酸乙醇溶液，在105。C加熱至斑點顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小 的玻璃板，周圍用膠布固定，照《中國藥典》薄層掃描法進行掃描，波長Xs=500nm，入 R=700nm，測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度積分值，計算，本發(fā)明顆粒劑每袋含黃 芪以黃芪甲苷、分子式為(:44^04計，不得少于1.7mg。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于治療糖尿病的中藥顆粒劑及其制法和質(zhì)量控制方法；該中藥顆粒劑由黃芪、西洋參、山茱萸、天花粉、葛根、水蛭、酒炙大黃、川芎制成；該中藥顆粒劑的質(zhì)量控制方法包括黃芪、西洋參、山茱萸、葛根、大黃、川芎的薄層鑒別，黃芪的含量測定。
文檔編號A61K36/708GK101199605SQ200710199258
公開日2008年6月18日 申請日期2007年12月18日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月18日
發(fā)明者濤 趙 申請人:咸陽步長醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司