專利名稱：：見(jiàn)血封喉中的強(qiáng)心苷類化合物的抗腫瘤新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體是一類強(qiáng)心苷化合物在制備腫瘤治療藥物中的新用途。
背景技術(shù)：
：見(jiàn)血封喉[j"riar紅toc/caWa(Pers.)Lesch.]為?？埔?jiàn)血封喉屬04油'ar/力植物。別名加布、剪刀樹(shù)、箭毒木。見(jiàn)血封喉屬植物全世界約有4個(gè)種3個(gè)變種，分布于東南亞。我國(guó)僅產(chǎn)l種，即見(jiàn)血封喉，分布于海南、云南、廣東和廣西等地。據(jù)說(shuō)是世界上木本植物中最毒的樹(shù)種之一，生長(zhǎng)于海拔300-1000m的山地常綠闊葉雨林和季雨林中。見(jiàn)血封喉鮮樹(shù)汁乳白色，有劇毒，入藥用于泄瀉，催吐，強(qiáng)心，還可用作麻醉劑；種子也有毒，入藥解熱止瀉，用于痢疾。見(jiàn)血封喉乳汁和種子的主要成分為強(qiáng)心苷類化合物。強(qiáng)心苷類化合物是治療心力衰竭不可缺少的重要藥物，臨床上用以治療心力衰竭及節(jié)律障礙等心臟疾病。對(duì)見(jiàn)血封喉中分離得到的強(qiáng)心苷的強(qiáng)心作用已有報(bào)道，但未見(jiàn)有抑制腫瘤細(xì)胞活性方面的報(bào)道。發(fā)明人對(duì)見(jiàn)血封喉中的強(qiáng)心苷類化合物進(jìn)行了分離和抗腫瘤活性測(cè)試，發(fā)現(xiàn)了見(jiàn)血封喉中具有通式(I)的強(qiáng)心苷類化合物在抗腫瘤方面的新用途。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于公開(kāi)一類具有通式(I)的強(qiáng)心苷類化合物在制備腫瘤治療藥物中的新用途。具有通式(I)的強(qiáng)心苷類化合物可以利用包括吸附樹(shù)脂柱層析、硅膠柱層析、反相硅膠柱層析，減壓柱層析等多種常規(guī)分離手段從見(jiàn)血封喉中獲得，或者通過(guò)合成以及半合成手段獲得。采用以單體化合物或者選擇其中任意兩個(gè)或者多個(gè)單體以任意比例進(jìn)行組合的復(fù)方形式，使之與適宜的賦形劑相結(jié)合，按照常規(guī)方法制成各種劑型。用于制備治療包括肺癌、腎癌、胃癌、鼻咽癌、膀胱癌、大腸癌、骨腫瘤、乳腺癌、子宮癌、口腔癌、膽癌、膽道癌、膽管癌、胰腺癌、卵巢癌、急性白血病、惡性淋巴瘤、腦瘤等多種癌癥疾病的藥物。其中通式(I)中的強(qiáng)心苷類化合物的結(jié)構(gòu)如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(1)R-2-0-甲基-P-D-海藻糖(2-0-methyl-P-D-fUcose):毒見(jiàn)血封喉苷A(toxicariosideA)(2)R-6-去氧-p-D-古洛糖(6-deoxy-P-D-gulose):a-見(jiàn)血封喉苷(cc-antiarin)(3)R-6-去氧-2-0-甲基-(3-D-阿洛糖(6-deoxy-2-0-methyl-(3-D-allose(javose)):見(jiàn)血封喉爪哇糖苷(antiarojavoside)本發(fā)明對(duì)通式(I)中的化合物進(jìn)行了抗腫瘤活性測(cè)試，結(jié)果表明該類化合物對(duì)多種腫瘤細(xì)胞株具有較強(qiáng)的抑制作用。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但不限制本發(fā)明。實(shí)施例l:強(qiáng)心苷類化合物毒見(jiàn)血封喉苷A(toxicariosideA)，a-見(jiàn)血封喉苷(a-antiarin)，見(jiàn)血封喉爪哇糖苷(antiarojavoside)的提取分離見(jiàn)血封喉乳汁(4L)用95W的乙醇室溫浸提3次，減壓回收乙醇至無(wú)醇味。將乙醇提取物分散于水中成懸濁液，經(jīng)石油醚萃取得到石油醚部分(6.87g),然后用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯部分(8.69g),剩下的水液經(jīng)過(guò)濾后上大孔吸附樹(shù)脂(D-101)柱層析，先后用水和甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，經(jīng)濃縮得到甲醇部分(228.4g)。得到的乙酸乙酯部分和甲醇部分分別過(guò)減壓柱分成若干餾分，再經(jīng)硅膠柱、反相硅膠柱和葡聚糖凝膠柱反復(fù)柱層析得到化合物毒見(jiàn)血封喉苷A(14.2g)，a-見(jiàn)血封喉苷(7.96g)和見(jiàn)血封喉爪哇糖苷(8.46g)。實(shí)施例2:強(qiáng)心苷類化合物毒見(jiàn)血封喉苷A(toxicariosideA)，a-見(jiàn)血封喉苷(cc-antiarin),見(jiàn)血封喉爪哇糖苷(antiarojavoside)的結(jié)構(gòu)鑒定利用光譜技術(shù)，包括紫外、紅外、核磁共振及高分辨質(zhì)譜分析，鑒定了實(shí)施例1中的強(qiáng)心苷類化合物毒見(jiàn)血封喉苷，oc-見(jiàn)血封喉苷，見(jiàn)血封喉爪哇糖苷的結(jié)構(gòu)。首次運(yùn)用2D-NMR技術(shù)對(duì)某些化合物，如見(jiàn)血封喉爪哇糖苷等糖上的13C-NMR，^-NMR數(shù)據(jù)進(jìn)行了歸屬。(見(jiàn)附表1、2)實(shí)施例3:強(qiáng)心苷類化合物毒見(jiàn)血封喉苷A(toxicariosideA)，oc-見(jiàn)血封喉苷(a-antiarin)，見(jiàn)血封喉爪哇糖苷(antiarojavoside)的體外抑瘤實(shí)驗(yàn)采用MTT法測(cè)試了強(qiáng)心苷類化合物毒見(jiàn)血封喉苷A，oc-見(jiàn)血封喉苷，見(jiàn)血封喉爪哇糖苷對(duì)人體的肝癌細(xì)胞SMMC-7721、胃癌細(xì)胞SGC-7901、乳腺癌細(xì)胞MCF-7、慢性骨髓性白血病細(xì)胞K562的體外抑瘤活性(結(jié)果見(jiàn)附表3)。活性測(cè)試方法如下實(shí)驗(yàn)設(shè)陰性對(duì)照組(水)、DMSO溶劑對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組(絲裂霉素C)和8個(gè)不同濃度(0.8,1.6,3.2，6.3，12.5，25，50，100)的待測(cè)樣品，每個(gè)濃度設(shè)2個(gè)平行。收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，按每孔4500個(gè)癌細(xì)胞量接種于96孔平底細(xì)胞培養(yǎng)板中，置于5%(302、濕度卯％以上、37'C溫箱中培養(yǎng)。24h后取出加入一定量的待測(cè)樣品，繼續(xù)培養(yǎng)3d后取出置于顯微鏡下觀察每孔細(xì)胞形態(tài)，記錄細(xì)胞形態(tài)變化情況，接著每孔加入5mg/mL的MTT溶液(溶于平衡鹽溶液PBS)5037'C反應(yīng)4h后，將細(xì)胞培養(yǎng)液吸出，每孔加入100nLDMSO將Formazane充分溶解，將細(xì)胞培養(yǎng)板置于MK3酶標(biāo)儀上，用570nm波長(zhǎng)測(cè)各孔的吸光度(A)，按下列公式求生長(zhǎng)抑制率。生長(zhǎng)抑制率(％)=(1——用鄉(xiāng)TOAM陰性對(duì)照組平均A值7以樣品濃度為橫坐標(biāo)，以抑制率為縱坐標(biāo)，作圖并求出抑制率為50%時(shí)樣品的濃度(1<350)，樣品活性結(jié)果即以半數(shù)抑制濃度(ICso)表示。實(shí)施例4:強(qiáng)心苷類化合物毒見(jiàn)血封喉苷A(toxicariosideA)10g與微晶纖維素80g及硬脂酸鎂10g混合，混合物用單沖壓片機(jī)打成直徑5mm，重量200mg的片劑。本片劑中每片含毒見(jiàn)血封喉苷A20mg。結(jié)合病癥，每次l-2片，每日服用2-3次。實(shí)施例5:強(qiáng)心苷類化合物ot-見(jiàn)血封喉苷(a-antiarin)與見(jiàn)血封喉爪哇糖苷(antiarojavoside)各40g與乳糖110g及硬脂酸鎂10g混合，以每500mg填充膠囊。本膠囊劑中，每個(gè)膠囊含ct-見(jiàn)血封喉苷和見(jiàn)血封喉爪哇糖苷各100mg。結(jié)合病癥，每次l-2個(gè)，每日服用3-4次。附表l、實(shí)施例2中的毒見(jiàn)血封喉苷A,a-見(jiàn)血封喉苷，見(jiàn)血封喉爪哇糖苷的理化常數(shù)毒見(jiàn)血封喉苷A:白色針狀結(jié)晶，+0.24(c0.23，MeOH),UV(MeOH)Xmax216，296nm";IR(KBr)3401，2943,2890，1734，1638，1066cm";HRMS(CI，ammonia,140eV)m/z([M+l])+581.2953calc'dforC30H45Oii581.2949.a-見(jiàn)血封喉苷白色固體，[a]g-4.0(MeOH)，Mp238-240°，HRMS(CI,ammonia,140eV)m/z([M+l])+566.644calc'dforC30H44Ou566.273.見(jiàn)血封喉爪哇糖苷無(wú)色膠狀物質(zhì)，[a]g+5.4(c,0.9in80%MeOH.)，Mp206-212°,HRMS(CI，ammonia,140eV)m/z([M+l])+580.671calc'dforC30H44Ou580.288.附表2、實(shí)施例2中的毒見(jiàn)血封喉苷A,(x-見(jiàn)血封喉苷，見(jiàn)血封喉爪哇糖苷的"C-NMR數(shù)據(jù)Position毒見(jiàn)血封喉苷A(inCD3OD)ot-見(jiàn)血封喉苷(inCD3OD)見(jiàn)血封喉爪哇糖苷(inCD3OD)119.117.819.2225.924.626.075.372.074.7437.636.137.9575.173.375.0635.831.635.3725.424.025.4842.1楊42.1937.335.137.21057.055.255.81131.534.531.51275.272.774.21355.854.057.01485.983.986.21532.630.532,61628.326.628.31746.844.946,8189.89.210.019209.8208.6209.820178.3176.9177.32175.473.375.422118.0116.2117.923177.3173.8178.3r102.199.498.22'82.569.281.83,75.470.7175.24,73.471.9670.85'72.172.768,76'16.717.819.6OMe61.357.0附表3、實(shí)施例1-3中的毒見(jiàn)血封喉苷A,ct-見(jiàn)血封喉苷，見(jiàn)血封喉爪哇糖苷體外抑瘤結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>權(quán)利要求1、具有通式(I)的強(qiáng)心苷類化合物在制備腫瘤治療藥物中的用途。通式(I)的強(qiáng)心苷類化合物的結(jié)構(gòu)式(1)R＝2-O-甲基-β-D-海藻糖(2-O-methyl-β-D-fucose)毒見(jiàn)血封喉苷A(toxicariosideA)(2)R＝6-去氧-β-D-古洛糖(6-deoxy-β-D-gulose)α-見(jiàn)血封喉苷(α-antiarin)(3)R＝6-去氧-2-O-甲基-β-D-阿洛糖(6-deoxy-2-O-methyl-β-D-allose(javose))見(jiàn)血封喉爪哇糖苷(antiarojavoside)2、如權(quán)利要求l所述的強(qiáng)心苷類化合物在制備腫瘤治療藥物中的用途，其特征在于釆用通式(I)的強(qiáng)心苷類化合物，以單體化合物或者選擇其中任意兩個(gè)或者多個(gè)單體以任意比例進(jìn)行組合的復(fù)方形式，使之與適宜的賦形劑相結(jié)合，按照常規(guī)方法制成各種劑型在制備腫瘤治療藥物中的應(yīng)用。3、如權(quán)利要求1所述的強(qiáng)心苷類化合物在制備腫瘤治療藥物中的用途，其特征在于采用以單體化合物或者復(fù)方形式所制成的制劑，可用于制備治療包括肝癌、肺癌、腎癌、胃癌、鼻咽癌、膀胱癌、大腸癌、骨腫瘤、乳腺癌、子宮癌、口腔癌、膽癌、膽道癌、膽管癌、胰腺癌、卵巢癌、急性白血病、惡性淋巴瘤、腦瘤等多種癌癥疾病的藥物。全文摘要本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體是具有通式(I)的強(qiáng)心苷類化合物在制備腫瘤治療藥物中的新用途，其中R＝2-O-甲基-β-D-海藻糖、6-去氧-β-D-古洛糖或6-去氧-2-O-甲基-β-D-阿洛糖。上述強(qiáng)心苷類化合物可利用多種常規(guī)分離手段從見(jiàn)血封喉中分離獲得或者通過(guò)合成以及半合成手段獲得。文檔編號(hào)A61K31/7048GK101156865SQ200710181278公開(kāi)日2008年4月9日申請(qǐng)日期2007年10月26日優(yōu)先權(quán)日2007年10月26日發(fā)明者干玉娟,戴好富,梅文莉申請(qǐng)人:中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所